專利名稱：一種高純度羅漢果甜甙v的制備方法
技術領域：
本發明涉及從天然植物中提取有效成分的方法，特別是一種高純度羅 漢果甜式V的制備方法。
(二) 背景技術-
羅漢果，屬葫蘆科多年生草質藤本植物的果實，是我國南方特有植物， 主要產于桂北地區，以廣西桂林地區的羅漢果品質最好。羅漢果長期作為 中藥和飲料干果而食用，其味極甜、性涼、無毒、入脾肺，具有清肺止咳、 潤腸通便、清熱解毒、祛痰補血、益肝、健脾、鎮靜、止渴、促進腸胃機 能、抑制哮喘以及降壓等功效。自從1975年首先報告羅漢果果實中含有 二萜甜味甙以來，已經從羅漢果果實中分離并鑒定出了羅漢果甙 工V(mogroside工V)、羅漢果甙V、羅漢果甙工I工、羅漢果甙I工E、羅漢 果武IIIE、羅漢果甙VI、羅漢果甙A、羅漢果新甙(nemogroside)、賽 門武工(si譜nside工)、ll-oxo-mogroside、羅漢果二醇苯甲酸酯 (mogroester)共11禾中萌戸院三砲武類(cucurbitaneglvcosides) 化合物，該類化合物是羅漢果果實中的主要活性物質，約占干果重4%， 除少數為無甜(如羅漢果甙工V)或苦味(如羅漢果新甙)物質外，大多為甜 味成分或微甜物質，其中羅漢果甙V為三萜系糖甙類S-5的強甜物質，是 羅漢果果實中含量和甜度均較高的成分，是主要的甜味成分，其甜度相當 于蔗糖的300倍。羅漢果甜甙味甜而純正，無異味，回味感強，熱穩定 性好，可作為食品、菜肴的甜味劑，是糖尿病人理想的食糖代用品。
現有普遍使用的羅漢果甜甙提取方法，但所得的提取物中，羅漢果甜 甙V的純度均較低，大多不超過80%，為此，申請號為 200510071877.0，名稱為《高純度羅漢果甜苷V的制備方法和用途》， 公開了一種高純度羅漢果甜苷的制備方法，其步驟如下先將羅漢果粉碎， 用乙醇加熱回流提取，再將提取物用D101型大孔樹脂柱分離，先去離子 水和乙醇分別洗脫至無色，再收集其洗脫液，減壓濃縮至浸膏狀，然后用 正相硅膠柱分離，加入氯仿、甲醇、水為洗脫劑，收集洗脫液，減壓濃縮， 再用反相硅膠C-18柱分離，并對所收集的每一份洗脫液利用HPLC檢測， 合并保留時間相同而且純度在90% 98%之間和98%以上的羅漢果甜苷 V組分，減壓濃縮，即可分別得到純度在90X 98X之間的羅漢果甜苷V 和純度大于98X的羅漢果甜苷V組分。又如，申請號為200710039130.6， 名稱為《從羅漢果中制備高純度羅漢果苷V的方法》，也公開了一種從羅 漢果中制備高純度羅漢果苷V的方法，該方法步驟為(l)先將羅漢果粉碎成粗粉，加入乙醇回流提取，濾過，得醇浸膏；(2)將醇浸膏懸浮于水， 用乙酸乙酯萃取l次-3次，回收乙酸乙酯母液；(3)繼用正丁醇萃取1次 -3次母液，回收正丁醇得正丁醇浸膏；(4)將正丁醇浸膏通過聚酰胺柱，水 洗液濃縮得粗皂苷；(5)粗皂苷進行硅膠柱層析，氯仿-甲醇-水洗脫，收 集得羅漢果苷v粗品；(6)取羅漢果苷v粗品進行C18反相硅膠柱層析， 水洗，乙醇洗脫，收集純度大于95X以上的羅漢果苷V。雖然上述制備方 法均可以獲得純度大于90%的羅漢果甜甙V，但均需通過正相硅膠柱和反 相硅膠柱兩次過柱層析，其工序較多，操作復雜，成本也相應較高，而且 采用水與其它有機溶劑混合的洗脫劑，會將雜質一同洗脫出來，從而影響 到成品的純度。
發明內容
本發明將公開工藝簡單、成本低廉、收率高的高純度羅漢果甜甙V的 制備方法。
本發明高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其步驟如下
1) 取羅漢果甜甙溶于甲醇中，過濾，得濾液；其中，所述的羅漢果 甜甙可選用現有任意方法制備的羅漢果甜甙；而甲醇的用量以能溶解羅漢 果甜甙為準， 一般來說，羅漢果甜甙與甲醇之間的配比，按羅漢果甜甙的 重量甲醇的體積=1: 5 10較為合適；
2) 在所得濾液中加入丙酮使其產生沉淀，過濾，得沉淀物；最好在 濾液中加入等體積量的丙酮；
3) 取沉淀物用正相硅膠柱進行吸附；所用硅膠的重量一般為上樣量 的30 100倍；
4) 吸附好的正相硅膠柱，用低碳鏈酯與乙醇的混合溶液為洗脫劑進 行洗脫，收集洗脫液； 一般來說，低碳鏈酯與乙醇的體積比=2 7: 1; 洗脫時，洗脫劑的流速一般在2 5ml/min較為適合；所述低碳鏈酯最好選 用乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯或乙酸異戊酯等；
5) 回收洗脫液中的洗脫劑，結晶，得到高純度羅漢果甜甙V;所述 結晶最好是用甲醇與丙酮的混合溶液結晶及重結晶，所述甲醇與丙酮的體 積比=1: 2 7; —般來說，先在回收洗脫液中洗脫劑后得到的粗粉中，加 入甲醇加熱使其溶解，甲醇體積與粗粉重量之比最好為10: 1，溶解后再 加入2 7倍于甲醇體積的丙酮，然后自然冷卻，放置直至結晶；再取所得 的結晶以上述方法進行重結晶。
本發明所述的制備方法與現有技術需經正相硅膠柱和昂貴的反相硅 膠柱兩次上柱吸附方法相比，只要通過一次的正相硅膠柱分離、洗脫，即 可得到品質好、純度高達98。/。以上的羅漢果甜甙V。而且本發明制備方法 與現有技術相比，工藝更簡單，縮短了生產周期，降低了生產操作難度及 生產成本，更利于工業化大規模生產。具體實施例方式
實施例1:
1 )取2千克羅漢果甜甙(羅漢果甜甙V含量為60%)溶于10升甲醇中， 過濾，得濾液；
2) 在所得濾液中加入等體積量的丙酮使其產生沉淀，過濾，得沉淀
物；
3) 取沉淀物用正相硅膠柱進行吸附；沉淀物與硅膠的重量比為1: 30;
4) 吸附好的正相柱，用乙酸乙酯與乙醇的混合溶液為洗脫劑進行洗 脫，洗脫劑流速為3ml/min，收集洗脫液；其中，乙酸乙酯與乙醇的體積 比為2. 1
5) 回'收洗脫液中洗脫劑，得到粗粉，在粗粉中加入甲醇，加熱至50
x:使其溶解，甲醇的體積與粗粉的重量之比為io: i，溶解后再加入2倍
于甲醇體積的丙酮，然后自然冷卻，放置直至結晶，再取所得的結晶以上
述方法進行重結晶，得到高純度羅漢果甜甙V，經HPLC方法檢測，羅漢 果甜甙V純度為99.9%。
實施例2:
1) 取700克羅漢果甜甙(羅漢果甜甙V含量為50%)溶于5L甲醇中， 過濾，得濾液；
2) 在所得濾液中加入等體積量的丙酮使其產生沉淀，過濾，得沉淀
物；
3) 取沉淀物用正相硅膠柱進行吸附；沉淀物與硅膠的重量比為1: 70;
4) 吸附好的正相柱，用乙酸異丙酯與乙醇的混合溶液為洗脫劑進行 洗脫，洗脫劑流速為5ml/min，收集洗脫液；其中，乙酸異丙酯與乙醇的 體積比為3: 1;
5) 回收洗脫液中洗脫劑，得到粗粉，在粗粉中加入甲醇，加熱至50 。C使其溶解，甲醇的體積與粗粉的重量之比為10: 1，溶解后再加入7倍 于甲醇體積的丙酮，然后自然冷卻，放置直至結晶，再取所得的結晶以上 述方法進行重結晶，得到高純度羅漢果甜甙V，經HPLC方法檢測，羅漢 果甜甙V純度為99 .9 %。
實施例3:
1) 取500克羅漢果甜甙(羅漢果甜甙V含量為30%)溶于5L甲醇中， 過濾，得濾液；
2) 在所得濾液中加入等體積量的丙酮使其產生沉淀，過濾，得沉淀
物；
3) 取沉淀物用正相硅膠柱進行吸附；沉淀物與硅膠的重量比為1: 50;
4) 吸附好的正相柱，用乙酸正丙酯與乙醇的混合溶液為洗脫劑進行 洗脫，洗脫劑流速為2ml/min，收集洗脫液；其中，乙酸正丙酯與乙醇的體積比為5: 1;
5)回收洗脫液中洗脫劑，得到粗粉，在粗粉中加入甲醇，加熱至50 'C使其溶解，甲醇的體積與粗粉的重量之比為10: 1，溶解后再加入4倍 于甲醇體積的丙酮，然后自然冷卻，放置直至結晶，再取所得的結晶以上 述方法進行重結晶，得到高純度羅漢果甜甙V，經HPLC方法檢測，羅漢 果甜甙V純度為99 .9%。
權利要求
1、一種高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其步驟如下1)取羅漢果甜甙溶于甲醇中，過濾，得濾液；2)在所得濾液中加入丙酮使其產生沉淀，過濾，得沉淀物；3)取沉淀物用正相硅膠柱進行吸附；4)吸附好的正相硅膠柱，用低碳鏈酯與乙醇的混合溶液為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液；5)回收洗脫液中的洗脫劑，結晶，得到高純度羅漢果甜甙V。
2、 根據權利要求1所述高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其特征在 于步驟l)中，羅漢果甜甙與甲醇之間的配比，按羅漢果甜甙的重量 甲醇的體積=1: 5 10。
3、 根據權利要求l或2所述高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其特征在于步驟4)中，低碳鏈酯與乙醇的體積比=2 7: 1。
4、 根據權利要求1或2所述高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其特征在于步驟5)中，回收洗脫液中的洗脫劑后，用甲醇與丙酮的混合溶液結晶及重結晶。
5、 根據權利要求3所述高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其特征在 于步驟5)中，甲醇與丙酮的體積比=1: 2 7。
6、 根據權利要求l或2所述高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其特 征在于所述低碳鏈酯為乙酸乙酯，或乙酸正丙酯，或乙酸異丙酯，或乙酸丁酯，或乙酸異戊酯。
全文摘要
本發明將公開一種高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其步驟如下1)取羅漢果甜甙溶于甲醇中，過濾，得濾液；2)在所得濾液中加入丙酮使其產生沉淀，過濾，得沉淀物；3)取沉淀物用正相硅膠柱進行吸附；4)吸附好的正相硅膠柱，用低碳鏈酯與乙醇的混合溶液為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液；5)回收洗脫液中的洗脫劑，結晶，得到高純度羅漢果甜甙V。本發明所述的制備方法與現有技術需經正相硅膠柱和昂貴的反相硅膠柱兩次上柱吸附方法相比，只要通過一次的正相硅膠柱分離、洗脫，即可得到品質好、純度高達98％以上的羅漢果甜甙V。且本發明制備方法與現有技術相比，工藝更簡單，縮短了生產周期，降低了生產操作難度及生產成本。
文檔編號C07J17/00GK101407535SQ20071005025
公開日2009年4月15日 申請日期2007年10月10日 優先權日2007年10月10日
發明者唐江明, 孫莉莉, 李振志, 韋海洪 申請人:桂林市振達生物科技有限責任公司