專利名稱：制備高純度單唾液酸四己糖神經節苷脂的方法
技術領域：
本發明屬于單唾液酸四己糖神經節苷脂制備領域，特別涉及一種制備單唾液酸四己 糖神經節苷脂的方法。
背景技術：
單唾液酸四己糖神經節苷脂(monosialoganglioside ，簡稱GM1，說明書下文和權利 要求中的"GM1"即為"單唾液酸四己糖神經節苷脂")是目前已知的唯一能穿透血腦 屏障的神經節苷脂。GM1分子量為1 547 ，主要位于髓鞘、神經元細胞膜和軸突，所以 在腦內含量豐富(每克腦組織約含730nmolGMl)，外周神經如坐骨神經、股神經中也 含有GM1。在中樞、外周神經受損后，內源性GM1不足,外源性GM1聚集到受損區域， 整合到細胞漿膜上，通過胞吞作用成為細胞的組成成分或與膜蛋白相互作用而發揮藥 效。外源性GM1在臨床上已用于治療休克、缺血、缺氧、創傷引起的中樞神經系統損 傷和帕金森病、老年癡呆等,并且取得了良好的治療效果。外源性GM1 —般從哺乳動物腦組織中提取，國內外已有相關文獻及專利報道。申 請號為02111387.4的中國專利公開了一種制備單唾液酸四己糖神經節苷脂制劑的方法， 該方法的工藝步驟為取新鮮豬腦組織制備丙酮粉；丙酮粉加氯仿甲醇水(50 :50 :3—i0， v/v/v)溶解、去沉渣，氯化鈉水溶液分提上清液，下層水溶液減壓去除有機溶劑，加蒸餾水后超濾膜超濾，脫鹽、濃縮后冷凍干燥得混合性神經節苷脂初提物；Iatrobeads層析柱層析上述初提物，得神經節苷脂GM1初純品，純度75%; DEAE Sephadex A—25柱親和層析或高效液相色譜方法純化初純品得純化神經節苷脂GM1， 純度達95%以上，得率為豬腦濕重的0J 0.5/1000;將純化神經節苷脂GM1制成凍干 粉針劑。此種方法的不足之處在于1、混合性神經節苷脂初提物制備步驟的流程較復 雜，該步驟中將超濾膜超濾所得濾液脫鹽、濃縮后進行冷凍干燥易產生爆炸，存在安全 隱患，此外，該步驟中提取液的配方有礙于增加神經節苷脂GM1的得率。2、 Iatrobeads 層析加DEAE Sephadex A—25柱親和層析或高效液相色譜方法純化，神經節苷脂GM1 的純度僅達95%以上。申請號為00133077.2的中國專利公開了一種單唾液酸四己糖神經節苷脂的高純度 制備工藝，該工藝的步驟為用有機溶劑混合物從哺乳動物腦組織中提取總神經節苷脂， 酸水解總神經節苷脂，濃縮水解產物經脫鹽后溶解于有機溶劑混合物中進行陰離子交換
柱層析，收集含GM1的洗脫峰濃縮后再進行反向柱層析。此種方法雖然可得到純度大 于98X的GM1干粉，但卻存在以下問題1、提取總神經節苷脂步驟的流程較復雜。2、 將濃縮水解產物經脫鹽后溶解于有機溶劑混合物中進行陰離子交換柱層析，其中離子交 換樹脂對GM1并無選擇性，而優先吸附極性小的物質，故雖然可以分離去除水溶性雜質， 但同樣具有親水基團和疏水基團的磷脂則難以去除，故磷脂污染大，含磷量高。發明內容本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種制備高純度單唾液酸四己糖神經 節苷脂的方法，此種方法不僅工藝流程簡單、操作安全，而且可提高單唾液酸四己糖神 經節苷脂的得率和避免其被磷脂污染。本發明所述制備高純度單唾液酸四己糖神經節苷脂的方法，工藝步驟包括(1) 用新鮮家畜腦組織制備丙酮粉將新鮮家畜腦組織清洗干凈，加入一2(TC預冷丙酮，新鮮家畜腦組織以克或公斤計量，預冷丙酮以毫升或升計量，新鮮家畜腦組織質量預冷丙酮體積=1 : 5 1 : 10，采用4000rpm 6000卬m速度勻漿，梯度離心收集沉淀，沉淀真空干燥至恒重，得腦組 織丙酮粉；(2) 制備總神經節苷脂將步驟(1)制備的丙酮粉在常壓、室溫下用提取液溶解，丙酮粉以克或公斤計量，提取液以毫升或升計量，丙酮粉的質量提取液的體積=1 : 3 1 : 5，所述提取液為氯仿、甲醇和水的混合液，氯仿體積甲醇體積水體積= 3~5: 2~5: i,將丙酮粉溶液攪拌4h 5h，然后離心分離并收集上清，再將上清用低壓色譜柱進 行純化，收集到的總神經節苷脂通過減壓濃縮至恒重，去除其中有機溶劑；低壓色譜柱層析條件如下將硅膠用四氯化碳-二氧六環按(四氯化碳體積二氧六環體積=2 : 5 1 : l)勻漿混勻后裝入柱內(lX30 50cm)，然后依次用洗脫液E、洗脫液f淋洗，直至基線恒定；洗脫液e為氯仿體積甲醇體積=4 : l i: i的氯仿-甲醇 溶液，洗脫液F為氯仿體積甲醇體積=5 : l 2 : l的氯仿-甲醇溶液。(3) 神經節苷脂GM1的MonoQ柱層析分離將步驟(2)制備的總神經節苷脂用MonoQ柱層析分離，洗脫峰分別進行薄層層析 (TLC)檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，得神經節苷脂GM1，純度 為90 95%;(4) 神經節苷脂GM1的純化
將步驟(3)所獲神經節苷脂GM1用疏水柱層析分離，洗脫峰分別進行高效液相色 譜(HPLC)檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，獲純度大于98%的神經 節苷脂GM1,得率可達新鮮家畜腦組織濕重的0.95/1000。 (5)神經節苷脂GM1干粉制備將步驟(4)制備的GM1用水溶解，GM1溶液通過5萬 10萬截留分子量的超慮 膜超慮，所得濾液經冷凍干燥制得GM1干粉，呈乳白色，得率可達新鮮家畜腦組織濕 重的0.65/1000。為了提高GM1在總神經節苷脂中的相對量，可設置總神經節苷脂的酸水解步驟， 該步驟設置在神經節苷脂GM1的MonoQ柱層析分離步驟之前，操作如下將制備的總 神經節苷脂加水溶解，總神經節苷脂的濃度控制在16g/L 20g/L，在總神經節苷脂溶液 中加入鹽酸，鹽酸的加入量以溶液的pH二3.0 4.0為限，在常壓、室溫進行酸水解，時 間為2小時 3小時。上述方法的神經節苷脂GM1的MonoQ柱層析分離步驟中，首先對MonoQ柱進行 處理，然后將4倍 5倍柱床體積的總神經節苷脂溶液或酸水解溶液以400ml/h 450ml/h 流速上樣，用5倍 10倍柱床體積的洗脫液A以800ml/h 1000ml/h流速進行淋洗，以 5倍 10倍柱床體積的洗脫液A和洗脫液B進行梯度洗脫；MonoQ柱處理為將空柱 裝填MonoQ，以10倍 20倍柱床體積的0.4M乙酸鈉-乙酸溶液淋洗并浸泡過夜，然后 用10倍 20倍柱床體積的洗脫液B淋洗，再用5倍 10倍柱床體積的洗脫液A淋洗，直至基線恒定；所述洗脫液A的配方為氯仿體積甲醇體積水體積=4~5: 6~8 : l， 洗脫液B的配方為氯仿體積甲醇體積0.4M乙酸鈉-乙酸溶液體積=4~5: 6~8 : l。上述方法中，神經節苷脂GM1的純化步驟是將神經節苷脂GM1溶液上樣疏水柱， GM1溶液體積柱體積=1 : 1 3，然后用5 10倍柱體積的洗脫液C和洗脫液D進行 梯度洗脫；所述神經節苷脂GM1溶液的溶劑為1M乙酸鈉-乙酸緩沖液，GM1的濃度 為10g/L 20g/L,所述洗脫液C為1M乙酸鈉-甲醇溶液，所述洗脫液D為0.005M乙 酸鈉-甲醇溶液。本發明具有以下有益效果1、 制備總神經節苷脂步驟不僅工藝流程簡單，操作安全，而且所選擇的提取液配 方有利于提高神經節苷脂GM1的得率。2、 采用MonoQ柱層析分離總神經節苷脂，不僅可直接得到純度為卯 95%的神經 節苷脂GM1，而且可避免磷脂對GM1的污染。3、 經疏水柱層析分離，獲得了純度大于98。/。的神經節苷脂GMl，其得率可達新鮮
家畜腦組織濕重的0.95/1000;制備的神經節苷脂GM1干粉，得率可達新鮮家畜腦組織 濕重的0.65/1000。4、設置總神經節苷脂的酸水解步驟，可減少GM1類似物，提高GM1相對量，有 利于后續的分離和純化。
圖1是本發明所述方法純化后所獲GM1的高效液相色譜(HPLC)檢測圖譜。
具體實施方式
實施例l本實施例以新鮮豬腦組織為原料制備高純度神經節苷脂GM1干粉，工藝步驟依次如下(1) 制備腦組織丙酮粉將新鮮豬腦組織清洗千凈，加入一2(TC預冷丙酮，新鮮豬腦腦組織以克計量，預冷 丙酮以毫升計量，新鮮家畜腦組織質量預冷丙酮體積=1:10，采用5500rpm速度勻 漿30min，梯度離心收集沉淀，沉淀真空干燥至恒重，得腦組織丙酮粉；離心上清中的 丙酮通過減壓蒸餾回收。(2) 制備總神經節苷脂將步驟(1)制備的丙酮粉在常壓、室溫下用提取液溶解，丙酮粉以克計量，提取 液以毫升計量，丙酮粉的質量提取液的體積=1:3，所述提取液為氯仿、甲醇和水的 混合液，氯仿體積甲醇體積水體積=3 :2:1;將丙酮粉溶液攪拌4h， 5000rpm離 心30min，收集上清。上清用低壓色譜柱進行純化，低壓色譜柱層析條件將23ml硅 膠用20ml四氯化碳-二氧六環(四氯化碳體積二氧六環體積=2 : 5)勻漿混勻，用高壓 泵裝入柱內(1X30cm)，然后經輸液泵依次用100ml的洗脫劑E、洗脫劑F交替淋洗， 直至基線恒定；洗脫劑E為氯仿體積甲醇體積=4 : 1的氯仿-甲醇溶液，洗脫劑F為氯仿體積甲醇體積=5 : i的氯仿-甲醇溶液。純化操作將收集的上清加入到柱頭上，用洗脫劑E和洗脫劑F淋洗，收集到的總神經節苷脂通過濃縮設備減壓濃縮至恒重，去除其中有機溶劑。(3) 神經節苷脂GM1的MonoQ柱層析分離 對MonoQ柱進行處理選用XK50，將空柱裝填MonoQ 200ml，以10倍柱床體積的0.4M乙酸鈉-乙酸溶液淋洗并浸泡過夜，然后用20倍柱床體積的洗脫液B淋洗，再 用IO倍柱床體積的洗脫液A淋洗，直至基線恒定；將步驟(2)制備的總神經節苷脂加去離子水溶解，總神經節苷脂的終濃度為18g/L;
將4倍柱床體積的總神經節苷脂溶液以400ml/h流速上樣，用IO倍柱床體積的洗 脫液A以1000ml/h流速進行淋洗，以10倍柱床體積的洗脫液A和洗脫液B進行梯度洗脫，所述洗脫液A的配方為氯仿體積甲醇體積水體積=4:6:1，洗脫液b的配方 為氯仿體積甲醇體積0.4M乙酸鈉-乙酸溶液體積=4:6:1;將洗脫峰分別進行TLC檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，得神經 節苷脂GMl,得率約為豬腦組織濕重的2.0/1000，通過TLC檢測，GM1的純度為94%。(4) 神經節苷脂GM1的純化將步驟(4)所獲神經節苷脂GM1用1M乙酸鈉-乙酸緩沖液溶解，GM1的濃度為 10g/L;將神經節苷脂gmi溶液上樣疏水柱，gmi溶液體積柱體積=1 :i，用io倍柱體積的洗脫液C和洗脫液D進行梯度洗脫，所述洗脫液C為lM乙酸鈉-甲醇溶液，所 述洗脫液D為0.005M乙酸鈉-甲醇溶液；將洗脫峰分別進行HPLC檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，神經 節苷脂GM1的得率約為豬腦組織濕重的0.82/1000，通過HPLC檢測，GMI的純度大 于98%，其HPLC檢測圖譜見圖1。(5) 神經節苷脂GM1干粉制備將步驟(4)制備的GMI用無熱原水溶解(GMI的濃度無嚴格要求)，GMI溶液 通過5萬截留分子量的超慮膜超慮，去除菌和熱原，所得濾液經冷凍干燥制得GMI干 粉，呈乳白色，得率約為豬腦組織濕重的0.6/1000。實施例2本實施例以新鮮牦牛腦組織為原料制備高純度神經節苷脂GM1干粉，工藝步驟依次如下(1) 制備腦組織丙酮粉將新鮮牦牛腦組織清洗干凈，加入一2(TC預冷丙酮，新鮮豬腦腦組織以克計量，預 冷丙酮以毫升計量，新鮮家畜腦組織質量預冷丙酮體積=1 : 8，采用4000rpm速度勻 漿30min，梯度離心收集沉淀，沉淀真空干燥至恒重，得腦組織丙酮粉；離心上清中的 丙酮通過減壓蒸餾回收。(2) 制備總神經節苷脂將步驟(1)制備的丙酮粉在常壓、室溫下用提取液溶解，丙酮粉以克計量，提取 液以毫升計量，丙酮粉的質量提取液的體積=1 : 3，所述提取液為氯仿、甲醇和水的 混合液，氯仿體積甲醇體積水體積=5 :2:1;將丙酮粉溶液攪拌4h, 4000rpm離
心30min，收集上清。上清用低壓色譜柱進行純化，低壓色譜柱層析條件將硅膠用20ml 四氯化碳-二氧六環(四氯化碳體積二氧六環體積=2 : 5)勻漿混勻，用高壓泵裝入柱內 (lX30cm)，然后經輸液泵依次用lOOml的洗脫劑E、洗脫劑F交替淋洗，直至基線恒定；洗脫劑e為氯仿體積甲醇體積=4 : i的氯仿-甲醇溶液，洗脫劑f為氯仿體積甲醇體積=4.5 : i的氯仿-甲醇溶液。純化操作將收集的上清加入到柱頭上，用洗脫 劑E和洗脫劑F淋洗，收集到的總神經節苷脂通過濃縮設備減壓濃縮至恒重，去除其中 有機溶劑。(3) 總神經節苷脂的酸水解將步驟(2)制備的總神經節苷脂加去離子水溶解，總神經節苷脂的終濃度為18g/L， 向總神經節苷脂溶液中加入鹽酸，鹽酸的加入量以溶液的pH-3.4為限，在常壓、室溫 進行酸水解，時間為2.5h。(4) 神經節苷脂GM1的MonoQ柱層析分離對MonoQ柱進行處理選用XK50，將空柱裝填MonoQ 200ml，以20倍柱床體積 的0.4M乙酸鈉-乙酸溶液淋洗并浸泡過夜，然后用20倍柱床體積的洗脫液B淋洗，再 用IO倍柱床體積的洗脫液A淋洗，直至基線恒定；將5倍柱床體積的步驟(3)制備的總神經節苷脂酸水解溶液以450ml/h流速上樣， 用10倍柱床體積的洗脫液A以1000ml/h流速進行淋洗，以10倍柱床體積的洗脫液A 和洗脫液B進行梯度洗脫，所述洗脫液A的配方為氯仿體積甲醇體積水體積=3.5:6:i，洗脫液B的配方為氯仿體積甲醇體積0.4M乙酸鈉-乙酸溶液體積= 4 : 6 : h將洗脫峰分別進行TLC檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，得神經 節苷脂GM1，得率約為牦牛腦組織濕重的2.6/1000，通過TLC檢測，GM1的純度為92%。(5) 神經節苷脂GM1的純化將步驟(4)所獲神經節苷脂GM1用lM乙酸鈉-乙酸緩沖液溶解，GM1的濃度為 10g/L;將神經節苷脂GM1溶液上樣疏水柱，GM1溶液體積柱體積=1 : 3，用10倍柱 體積的洗脫液C和洗脫液D進行梯度洗脫，所述洗脫液C為1M乙酸鈉-甲醇溶液，所 述洗脫液D為0.005M乙酸鈉-甲醇溶液；將洗脫峰分別進行HPLC檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，神經 節苷脂GM1的得率約為牦牛腦組織濕重的0.95/1000，通過HPLC檢測，GM1的純度 大于98%。
(6)神經節苷脂GM1干粉制備將步驟(4)制備的GM1用無熱原水溶解(GM1的濃度無嚴格要求)，GMl溶液 通過10萬截留分子量的超慮膜超慮，去除菌和熱原，所得濾液經冷凍干燥制得GMl干 粉，呈乳白色，得率約為牦牛腦組織濕重的0.65/1000。實施例3本實施例以新鮮豬腦組織為原料制備高純度神經節苷脂GM1干粉，工藝步驟依次 如下-(1) 制備腦組織丙酮粉將新鮮豬腦組織清洗干凈，加入—2(TC預冷丙酮，新鮮豬腦腦組織以克計量，預冷 丙酮以毫升計量，新鮮家畜腦組織質量預冷丙酮體積=1:5，采用6000rpm速度勻漿 30min，梯度離心收集沉淀，沉淀真空干燥至恒重，得腦組織丙酮粉；離心上清中的丙 酮通過減壓蒸餾回收。(2) 制備總神經節苷脂將步驟(1)制備的丙酮粉在常壓、室溫下用提取液溶解，丙酮粉以克計量，提取 液以毫升計量，丙酮粉的質量提取液的體積=1 : 5，所述提取液為氯仿、甲醇和水的 混合液，氯仿體積甲醇體積水體積=5 :5:1;將丙酮粉溶液攪拌5h， 5000rpm離 心30min，收集上清。上清用低壓色譜柱進行純化，低壓色譜柱層析條件將硅膠用20ml四氯化碳-二氧六環(四氯化碳體積二氧六環體積=1: i)勻漿混勻，用高壓泵裝入柱內(lX30cm),然后經輸液泵依次用lOOml的洗脫劑E、洗脫劑F交替淋洗，直至基線恒定；洗脫劑E為氯仿體積甲醇體積=1 : i的氯仿-甲醇溶液，洗脫劑F為氯仿體積甲醇體積=2 : l的氯仿-甲醇溶液。純化操作將收集的上清加入到柱頭上，用洗脫劑 E和洗脫劑F交替淋洗，收集到的總神經節苷脂通過濃縮設備減壓濃縮至恒重，去除其中有機溶劑。(3) 總神經節苷脂的酸水解 將步驟(2)制備的總神經節苷脂加去離子水溶解，總神經節苷脂的終濃度為20g/L，向總神經節苷脂溶液中加入鹽酸，鹽酸的加入量以溶液的pH二4.0為限，在常壓、室溫 進行酸水解，時間為3h。(4) 神經節苷脂GM1的MonoQ柱層析分離 對MonoQ柱進行處理選用XK50，將空柱裝填MonoQ 200ml，以15倍柱床體積的0.4M乙酸鈉-乙酸溶液淋洗并浸泡過夜，然后用IO倍柱床體積的洗脫液B淋洗，再 用20倍柱床體積的洗脫液A淋洗，直至基線恒定；
將4倍柱床體積的總神經節苷脂溶液以400ml/h流速上樣，用5倍柱床體積的洗脫 液A以800ml/h流速進行淋洗，以5倍柱床體積的洗脫液A和洗脫液B進行梯度洗脫，所述洗脫液A的配方為氯仿體積甲醇體積水體積=5:8:1，洗脫液B的配方為氯 仿體積甲醇體積o.4M乙酸鈉-乙酸溶液體積=5:8:1;將洗脫峰分別進行TLC檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，得神經 節苷脂GM1，得率約為豬腦組織濕重的2.3/1000，通過TLC檢測，GM1的純度為92%。(5) 神經節苷脂GM1的純化將步驟(3)所獲神經節苷脂GM1用1M乙酸鈉-乙酸緩沖液溶解，GM1的濃度為 20g/L;將祌經節苷脂GM1溶液上樣疏水柱，GM1溶液體積柱體積=1 : 3，用5倍柱體 積的洗脫液C和洗脫液D進行梯度洗脫，所述洗脫液C為lM乙酸鈉-甲醇溶液，所述 洗脫液D為0.005M乙酸鈉-甲醇溶液；將洗脫峰分別進行HPLC檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，神經 節苷脂GM1的得率約為豬腦組織濕重的0.90/1000，通過HPLC檢測，GM1的純度大 于98%。(6) 神經節苷脂GM1干粉制備將步驟(4)制備的GM1用無熱原水溶解(GM1的濃度無嚴格要求)，GM1溶液 通過5萬截留分子量的超慮膜超慮，去除菌和熱原，所得濾液經冷凍干燥制得GM1干 粉，呈乳白色，得率約為豬腦組織濕重的0.65/1000。上述實施例所用的各種設備(裝置)與化學試劑均有市售商品，可直接購買。
權利要求
1、一種制備高純度單唾液酸四己糖神經節苷脂的方法，其特征在于工藝步驟包括(1)用新鮮家畜腦組織制備丙酮粉；(2)制備總神經節苷脂將步驟(1)制備的丙酮粉在常壓、室溫下用提取液溶解，丙酮粉以克或公斤計量，提取液以毫升或升計量，丙酮粉的質量∶提取液的體積＝1∶3～1∶5，所述提取液為氯仿、甲醇和水的混合液，氯仿體積∶甲醇體積∶水體積＝3～5∶2～5∶1，將丙酮粉溶液攪拌4h～5h，然后離心分離并收集上清，再將上清用低壓色譜柱進行純化，收集到的總神經節苷脂通過減壓濃縮至恒重，去除其中有機溶劑；(3)神經節苷脂GM1的MonoQ柱層析分離將步驟(2)制備的總神經節苷脂用MonoQ柱層析分離，洗脫峰分別進行薄層層析檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，得神經節苷脂GM1；(4)神經節苷脂GM1的純化將步驟(3)所獲神經節苷脂GM1用疏水柱層析分離，洗脫峰分別進行高效液相色譜檢測，收集含有GM1的洗脫液，減壓濃縮至恒重，獲高純度神經節苷脂GM1；(5)神經節苷脂GM1干粉制備將步驟(4)制備的GM1用水溶解，GM1溶液通過5萬～10萬截留分子量的超慮膜超慮，所得濾液經冷凍干燥制得GM1干粉，呈乳白色。
4、 根據權利要求1或2所述的制備高純度單唾液酸四己糖神經節苷脂的方法，其 特征在于神經節苷脂GM1的純化步驟是將神經節苷脂GM1溶液上樣疏水柱，GM1溶液體積柱體積-i : i 3，然后用5倍 10倍柱體積的洗脫液c和洗脫液d進行梯度洗脫，所述神經節苷脂GM1溶液的溶劑為1M乙酸鈉-乙酸緩沖液，GMl的濃度為10g/L 20g/L，所述洗脫液C為1M乙酸鈉-甲醇溶液，所述洗脫液D為0.005M乙酸鈉-甲醇 溶液。
5、 根據權利要求3所述的制備高純度單唾液酸四己糖神經節苷脂的方法，其特征 在于神經節苷脂GM1的純化步驟是將神經節苷脂GM1溶液上樣疏水柱，GM1溶液體 積柱體積=1 : 1 3，然后用5倍 10倍柱體積的洗脫液C和洗脫液D進行梯度洗脫，所述神經節苷脂GM1溶液的溶劑為1M乙酸鈉-乙酸緩沖液，GM1的濃度為10g/L 20g/L，所述洗脫液C為1M乙酸鈉-甲醇溶液，所述洗脫液D為0.005M乙酸鈉-甲醇 溶液。
全文摘要
一種制備高純度單唾液酸四己糖神經節苷脂的方法，工藝步驟包括(1)用新鮮家畜腦組織制備丙酮粉；(2)將步驟(1)制備的丙酮粉用提取液溶解后攪拌4h～5h，離心分離并收集上清，將上清用低壓色譜柱進行純化獲總神經節苷脂；(3)將步驟(2)制備的總神經節苷脂用MonoQ柱層析分離，得純度90～95％的神經節苷脂GM1；(4)將步驟(3)制備的GM1用疏水柱層析分離，獲純度大于98％神經節苷脂GM1；(5)將步驟(4)制備的GM1水溶液通過5萬～10萬截留分子量的超濾膜超濾，所得濾液經冷凍干燥制得GM1干粉。此種方法不僅工藝流程簡單、操作安全，而且可提高GM1的得率和避免其被磷脂污染。
文檔編號C07H1/08GK101108868SQ200710049500
公開日2008年1月23日 申請日期2007年7月12日 優先權日2007年7月12日
發明者喬代蓉, 輝 徐, 毅 曹, 白林含 申請人:四川陽光博睿生物技術有限公司