水稻黃素蛋白基因及應(yīng)用的制作方法

專利名稱：：水稻黃素蛋白基因及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于基因
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，本發(fā)明涉及一種^Jc稻黃素蛋白基g》應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：黃素蛋白基因朋ZJ最早在酵母中克隆發(fā)現(xiàn)，其控制酵母的細胞分裂、冑子平衡等。植物擬南芥也發(fā)現(xiàn)有黃素蛋白基因^7^Z3(a，b)，在擬南芥中過量表達B朋Z&能夠提高擬南芥對Na+和滲透脅迫的抗性，力口速擬南芥的生長，而轉(zhuǎn)反義的擬南芥株系的生長比野生型緩慢，植株矮小。對AtHAL3a和ScHAL3(酵母)氨基酸序列進行比對，發(fā)現(xiàn)它們有較保守的FMN(黃素單核苷酸)結(jié)合位點，即三聚體的結(jié)合位點，這暗示ScHal3和AtHAL3a具有相似的三聚體結(jié)構(gòu)和功能。晶體結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明HAL3的生物f舌'性^^立是三聚體。前人的研究結(jié)果表明，HAL3在酵母和擬南芥的生長和耐鹽性上具有i^白勺功能。但是，酵母和擬南芥均是與農(nóng)作物(如水稻、高粱、玉米等);^;^;(;及力,異的物種。而在農(nóng)作物中是否存在該種基因，以及該種基因在農(nóng)作物中的j力^研究還沒有相關(guān)報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種水稻黃素蛋白基因及應(yīng)用。在本發(fā)明的第一方面，提供一種分離的OsHAL3蛋白，該蛋白選自下組(a)具有SEQIDNO:2氨基酸序列的多肽；或(b)將SEQIDNO:2氨基酸序列經(jīng)過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有與SEQIDNO:2所示的氨基酸序列相同功能的由(a)衍生的多肽。在本發(fā)明的第二方面，提供一種分離的多核苷酸，該多核苷酸選自下組(i)編碼所述的OsHAL3蛋白的多核苷酸；或(ii)與(i)中的多核苷酸互補的多核苷酸。在另一優(yōu)選例中，該多核苷酸編碼含有SEQIDNO:2所示氨基酸序列的多肽。在另一優(yōu)選例中，該多核苷酸具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列；在本發(fā)明的第三方面，提供一種載體，它含有所述的多核苷酸。在本發(fā)明的第四方面，提供一種遺傳工程化的宿主細胞，它含有所述的載體或基因組中整合有所述的多核苷酸。另一方面，本發(fā)明還提供一種制備所述遺傳工程化的宿主細胞的方法，所述方法包括步驟將編碼所述0sHAL3蛋白的多核苷酸或攜帶該多核苷酸的載體轉(zhuǎn)化細胞，從而獲得含有上述載體或基因組中整合有上述的多核苷酸的宿主細胞。更佳地，所述的宿主細胞包括(但不限于)細菌細胞、低等真核細胞、高等真核細胞。例如大腸桿菌、鏈霉菌、農(nóng)桿菌、酵母或植物細胞。在本發(fā)明的第五方面，提供所述的0sHAL3蛋白或其編碼基因的用途，用于調(diào)節(jié)作物的生長，提高作物對鹽脅迫的抗性，提高作物種子的耐儲藏性，從而還可延長作物種子的壽命，提高種子的發(fā)芽率。在本發(fā)明的第六方面，提供一種提高作物對脅迫(如鹽脅迫)的抗性或提高作物種子的耐儲藏性的方法，該方法包括提高所述作物中OsHAL3基因的表達或活性。在本發(fā)明的第七方面，提供一種改良作物的方法，它包括步驟(1)提供攜帶表達載體的農(nóng)桿菌，所述的表達載體含有所述的OsHAL3蛋白的編碼序列；(2)將作物細胞或組織或器官與步驟(l)中的農(nóng)桿菌接觸，從而使所述OsHAL3蛋白的編碼序列轉(zhuǎn)入作物細胞，并且整合到作物細胞的染色體上；(3)選擇出轉(zhuǎn)入所述OsHAL3蛋白的編碼序列的作物細胞或組織；(4)將步驟(3)中的作物細胞或組織再生成植株。在本發(fā)明的第八方面，提供一種所述的0sHAL3或其編碼基因的激動劑或拮抗劑。在本發(fā)明的第九方面，提供一種促進作物中OsHAL3蛋白表達或活性的方法，所述的方法包括將作物置于黑暗的環(huán)境中，或降低作物照射光中藍光和/或白光的量。在本發(fā)明的第十方面，提供一種抑制作物中0sHAL3蛋白表達或活性的方法，所述的方法包括提高作物照射光中藍光和/或白光的量。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。圖l顯示了水稻^朋^基因序列(A)及其編碼的氨基酸序列(B)。圖2顯示了水稻fe朋ZJ的過量表達轉(zhuǎn)基因株系(0E-HAL3)的耐鹽性明顯比對照(空質(zhì)粒)強，并且NV離子濃度較低而K+濃度較高。其中，圖2A顯示了給予120mM的NaCl培養(yǎng)IO天(上圖)和25天(下圖)后，過量表達Os^4"的轉(zhuǎn)基因水稻和pHB空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)基因水稻的生長情況。圖2B顯示了鹽處理前(上圖)和鹽處理7天后(下圖)，過量表達fc^^3的轉(zhuǎn)基因水稻和pHB空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)基因水稻中Na+和K+的含量。圖3A顯示了過量表達0^^ZJ的轉(zhuǎn)基因株系(OE-HAL3)的種子雖然經(jīng)過1-2年的儲藏，其種子發(fā)芽率高達95%，而空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)基因水稻對照種子的發(fā)芽率僅為25%(儲藏2年的2005年種子)。圖3B顯示了0sHAL3在胚中強表達。圖4顯示了在黑暗條件下，0sHAL3蛋白形成三聚體而具有活性，但在藍光條件下，0sHAL3蛋白的三聚體被解聚而沒有活性。而陽性對照CRY1-CNT1形成多聚體不受光的調(diào)節(jié)。具體實施例方式本發(fā)明人經(jīng)過細致的研究和試驗，首次從水稻中獲得一種水稻黃素蛋白基因，本發(fā)明人將之命名為水稻朋^基因(Os朋U)。進一步的，本發(fā)明人對該基因進行了深入的功能研究，首次發(fā)現(xiàn)0sHAL3的活性和表達量受光的調(diào)控，從而控制水稻的生長；組織定位結(jié)果表明其主要在水稻幼嫩和伸長組織以及胚中表達；過量表達OsHAL3明顯加快水稻生長和增加水稻的耐鹽性，并且明顯提高水稻種子的發(fā)芽率，顯著延長水稻種子的壽命、增加種子的儲藏時間。在此基礎(chǔ)上完成本發(fā)明。如本文所用，"分離的"是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開，則為分離純化的。如本文所用，"分離的水稻黃素蛋白"、"分離的0sHAL3蛋白"或"分離的0sHAL3多肽"是指0sHAL3蛋白基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化0sHAL3蛋白?；旧霞兊亩嚯脑诜沁€原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選的是重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從原核或真核宿主(例如，細菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動物細胞)中產(chǎn)生。根據(jù)重組生產(chǎn)方案所用的宿主，本發(fā)明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本發(fā)明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。本發(fā)明還包括0sHAL3蛋白的片段、衍生物和類似物。如本文所用，術(shù)語"片段"、"衍生物"和"類似物"是指基本上保持本發(fā)明的0sHAL3蛋白相同的生物學(xué)功能或活性的多肽。本發(fā)明的多肽片段、衍生物或類似物可以是(i)有一個或多個保守或非保守性氨基酸殘基(優(yōu)選保守性氨基酸殘基)被取代的多肽，而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的，或(ii)在一個或多個氨基酸殘基中具有取代基團的多肽，或("i)成熟多肽與另一個化合物(比如延長多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導(dǎo)序列或分泌序列或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列，或融合蛋白)。根據(jù)本文的定義這些片段、衍生物和類似物屬于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員公知的范圍。在本發(fā)明中，術(shù)語"0sHAL3蛋白"指具有0sHAL3蛋白活性的SEQIDNO:2序列的多肽。該術(shù)語還包括具有與0sHAL3蛋白相同功能的、SEQIDN0:2序列的變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)若干個(通常為l-50個，較佳地l-30個，更佳地1-20個，最佳地1-10個，還更佳如1-8個或1-5個)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一個或數(shù)個(通常為20個以內(nèi)，較佳地為10個以內(nèi)，更佳地為5個以內(nèi))氨基酸。例如，在本領(lǐng)域中，用性能相近或相似的氨基酸進行取代時，通常不會改變蛋白質(zhì)的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一個或數(shù)個氨基酸通常也不會改變蛋白質(zhì)的功能。該術(shù)語還包括0sHAL3蛋白的活性片段和活性衍生物。多肽的變異形式包括同源序列、保守性變異體、等位變異體、天然突變體、誘導(dǎo)突變體、在高或低的嚴(yán)緊度條件下能與0sHAL3蛋白DNA雜交的DNA所編碼的蛋白、以及利用抗0sHAL3蛋白的抗血清獲得的多肽或蛋白。本發(fā)明還提供了其他多肽，如包含0sHAL3蛋白或其片段的融合蛋白。除了幾乎全長的多肽外，本發(fā)明還包括了0sHAL3蛋白的可溶性片段。通常，該片段具有0sHAL3蛋白序列的至少約20個連續(xù)氨基酸，通常至少約30個連續(xù)氨基酸，較佳地至少約50個連續(xù)氨基酸，更佳地至少約80個連續(xù)氨基酸，最佳地至少約100個連續(xù)氨基酸。本發(fā)明還提供0sHAL3蛋白或多肽的類似物。這些類似物與天然OsHAL3蛋白的差別可以是氨基酸序列上的差異，也可以是不影響序列的修飾形式上的差異，或者兼而有之。這些多肽包括天然或誘導(dǎo)的遺傳變異體。誘導(dǎo)變異體可以通過各種技術(shù)得到，如通過輻射或暴露于誘變劑而產(chǎn)生隨機誘變，還可通過定點誘變法或其他已知分子生物學(xué)的技術(shù)。類似物還包括具有不同于天然L-氨基酸的殘基(如D-氨基酸)的類似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如0、Y-氨基酸)的類似物。應(yīng)理解，本發(fā)明的多肽并不限于上述例舉的代表性的多肽。修飾(通常不改變一級結(jié)構(gòu))形式包括體內(nèi)或體外的多肽的化學(xué)衍生形式如乙?；螋然?。修飾還包括糖基化。修飾形式還包括具有磷酸化氨基酸殘基(如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸，磷酸蘇氨酸)的序列。還包括被修飾從而提高了其抗蛋白水解性能或優(yōu)化了溶解性能的多肽。在本發(fā)明中，"OsHAL3蛋白保守性變異多肽"指與SEQIDNO:2的氨基酸序列相比，有至多20個，較佳地至多10個，更佳地至多5個，最佳地至多3個氨基酸被性質(zhì)相似或相近的氨基酸所替換而形成多肽。這些保守性變異多肽最好根據(jù)表1進行氨基酸替換而產(chǎn)生。表1氨<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明0sHAL3蛋白或其保守性變異多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQIDNO:2所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡并的變異體。如本文所用，"簡并的變異體"在本發(fā)明中是指編碼具有SEQIDNO:2的蛋白質(zhì)，但與SEQIDNO:2所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。編碼SEQIDNO:2的成熟多肽的多核苷酸包括只編碼成熟多肽的編碼序列；成熟多肽的編碼序列和各種附加編碼序列；成熟多肽的編碼序列(和任選的附加編碼序列)以及非編碼序列。術(shù)語"編碼多肽的多核苷酸"可以是包括編碼此多肽的多核苷酸，也可以是還包括附加編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體，其編碼與本發(fā)明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。此多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領(lǐng)域所知的，等位變異體是一個多核苷酸的替換形式，它可能是一個或多個核苷酸的取代、缺失或插入，但不會從實質(zhì)上改變其編碼的多肽的功能。本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交且兩個序列之間具有至少70%，較佳地至少80%，更佳地至少90%相同性的多核苷酸。本發(fā)明特別涉及在嚴(yán)格條件下與本發(fā)明所述多核苷酸可雜交的多核苷酸。在本發(fā)明中，"嚴(yán)格條件"是指(l)在較低離子強度和較高溫度下的雜交和洗脫，如0.2XSSC，0.1%SDS，6CTC;或(2)雜交時加有變性劑，如50%(v/v)甲酰胺，0.1%小牛血清/0.l%Ficoll，42。C等；或(3)僅在兩條序列之間的相同性至少在90%以上，更好是95%以上時才發(fā)生雜交。并且，可雜交的多核苷酸編碼的多肽與SEQIDNO:2所示的成熟多肽有相同的生物學(xué)功能和活性。本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交的核酸片段。如本文所用，"核酸片段"的長度至少含15個核苷酸，較好是至少30個核苷酸，更好是至少50個核苷酸，最好是至少IOO個核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的擴增技術(shù)(如PCR)以確定和/或分離編碼OsHAL3蛋白的多聚核苷酸。本發(fā)明的OsHAL3蛋白核苷酸全長序列或其片段通常可以用PCR擴增法、重組法或人工合成的方法獲得。對于PCR擴增法，可根據(jù)本發(fā)明所公開的有關(guān)核苷酸序列，尤其是開放閱讀框序列來設(shè)計引物，并用市售的cDNA庫或按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫作為模板，擴增而得有關(guān)序列。當(dāng)序列較長時，常常需要進行兩次或多次PCR擴增，然后再將各次擴增出的片段按正確次序拼接在一起。一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細胞，然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細胞中分離得到有關(guān)序列。此外，還可用人工合成的方法來合成有關(guān)序列，尤其是片段長度較短時。通常，通過先合成多個小片段，然后再進行連接可獲得序列很長的片段。目前，已經(jīng)可以完全通過化學(xué)合成來得到編碼本發(fā)明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可將該DNA序列引入本領(lǐng)域中已知的各種現(xiàn)有的DNA分子(或如載體)和細胞中。此外，還可通過化學(xué)合成將突變引入本發(fā)明蛋白序列中。本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明的多核苷酸的載體，以及用本發(fā)明的載體或OsHAL3蛋白編碼序列經(jīng)基因工程產(chǎn)生的宿主細胞，以及經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明所述多肽的方法。通過常規(guī)的重組面A技術(shù)(Science,1984;224:1431)，可利用本發(fā)明的多聚核苷酸序列來表達或生產(chǎn)重組的OsHAL3蛋白。一般來說有以下步驟(1).用本發(fā)明的編碼0sHAL3蛋白的多核苷酸(或變異體)，或用含有該多核苷酸的重組表達載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)合適的宿主細胞；(2).在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的宿主細胞；(3).從培養(yǎng)基或細胞中分離、純化蛋白質(zhì)。本發(fā)明中，0sHAL3蛋白多核苷酸序列可插入到重組表達載體中。術(shù)語"重組表達載體"指本領(lǐng)域熟知的細菌質(zhì)粒、噬菌體、酵母質(zhì)粒、植物細胞病毒、哺乳動物細胞病毒或其他載體?？傊灰茉谒拗黧w內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定，任何質(zhì)粒和載體都可以用。表達載體的一個重要特征是通常含有復(fù)制起點、啟動子、標(biāo)記基因和翻譯控制元件。本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法能用于構(gòu)建含0sHAL3蛋白編碼DNA序列和合適的轉(zhuǎn)錄/翻譯控制信號的表達載體。這些方法包括體外重組DNA技術(shù)、DNA合成技術(shù)、體內(nèi)重組技術(shù)等。所述的DNA序列可有效連接到表達載體中的適當(dāng)啟動子上，以指導(dǎo)mRNA合成。表達載體還包括翻譯起始用的核糖體結(jié)合位點和轉(zhuǎn)錄終止子。此外，表達載體優(yōu)選地包含一個或多個選擇性標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細胞的表型性狀，如真核細胞培養(yǎng)用的二氫葉酸還原酶、新霉素抗性以及綠色熒光蛋白(GFP)，或用于大腸桿菌的卡那霉素或氨芐青霉素抗性。包含上述的適當(dāng)DNA序列以及適當(dāng)啟動子或者控制序列的載體，可以用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷毎?，以使其能夠表達蛋白質(zhì)。宿主細胞可以是原核細胞，如細菌細胞；或是低等真核細胞，如酵母細胞；或是高等真核細胞，如植物細胞。代表性例子有大腸桿菌，鏈霉菌屬、農(nóng)桿菌；真菌細胞如酵母；植物細胞(尤其是非生殖植物細胞)等。本發(fā)明的多核苷酸在高等真核細胞中表達時，如果在載體中插入增強子序列時將會使轉(zhuǎn)錄得到增強。增強子是DNA的順式作用因子，通常大約有10到300個堿基對，作用于啟動子以增強基因的轉(zhuǎn)錄。本領(lǐng)域一般技術(shù)人員都清楚如何選擇適當(dāng)?shù)妮d體、啟動子、增強子和宿主細胞。用重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細胞可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)進行。當(dāng)宿主為原核生物如大腸桿菌時，能吸收DNA的感受態(tài)細胞可在指數(shù)生長期后收獲，用CaCl2法處理，所用的步驟在本領(lǐng)域眾所周知。另一種方法是使用MgCl2。如果需要，轉(zhuǎn)化也可用電穿孔的方法進行。當(dāng)宿主是真核生物，可選用如下的DNA轉(zhuǎn)染方法磷酸鈣共沉淀法，常規(guī)機械方法如顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體包裝等。轉(zhuǎn)化植物也可使用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化或基因槍轉(zhuǎn)化等方法，例如葉盤法、水稻幼胚轉(zhuǎn)化法等。對于轉(zhuǎn)化的植物細胞、組織或器官可以用常規(guī)方法再生成植株，從而獲得性狀發(fā)生改變的植物。獲得的轉(zhuǎn)化子可以用常規(guī)方法培養(yǎng)，表達本發(fā)明的基因所編碼的多肽。根據(jù)所用的宿主細胞，培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基可選自各種常規(guī)培養(yǎng)基。在適于宿主細胞生長的條件下進行培養(yǎng)。當(dāng)宿主細胞生長到適當(dāng)?shù)募毎芏群螅煤线m的方法(如溫度轉(zhuǎn)換或化學(xué)誘導(dǎo))誘導(dǎo)選擇的啟動子，將細胞再培養(yǎng)一段時間。在上面的方法中的重組多肽可在細胞內(nèi)、或在細胞膜上表達、或分泌到細胞外。如果需要，可利用其物理的、化學(xué)的和其它特性通過各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于常規(guī)的復(fù)性處理、用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超處理、超離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術(shù)及這些方法的結(jié)合。重組的OsHAL3蛋白有多方面的用途。例如用于篩選促進或?qū)?sHAL3蛋白功能的抗體、多肽或其它配體。用表達的重組0sHAL3蛋白篩選多肽庫可用于尋找有價值的能抑制或刺激0sHAL3蛋白功能的多肽分子。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(raicroarray)或DNA芯片(又稱為"基因芯片")上，用于分析組織中基因的差異表達分析。用0sHAL3蛋白特異的引物進行RNA-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)體外擴增也可檢測0sHAL3蛋白的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。本發(fā)明還涉及一種改良作物的方法，該方法包括調(diào)節(jié)所述植物中0sHAL3基因或其同源基因的表達或活性。促進還是抑制0sHAL3的表達或活性主要取決于作物所需改良的性狀而定。當(dāng)需要提高作物的耐鹽性、提高作物的發(fā)芽率、延長作物種子的壽命、增加作物種子的儲藏時間時，可通過提高作物中OsHAL3的表達或活性來實現(xiàn)；當(dāng)需要抑制作物生長時，可通過抑制作物中OsHAL3的表達或活性來實現(xiàn)。本發(fā)明還涉及通過調(diào)節(jié)光照來調(diào)節(jié)作物(所述的作物含有OsHAL3基因)生長的方法。在黑暗條件下，0sHAL3基因能夠促進作物的生長，而在藍光下可抑制作物的生長。增加0sHAL3基因表達的方法是本領(lǐng)域周知的。例如，可通過轉(zhuǎn)入攜帶0sHAL3編碼基因的表達構(gòu)建物使植株過表達0sHAL3;或可通過用強啟動子驅(qū)動從而增強0sHAL3基因或其同源基因的表達；或者通過增強子(如水稻waxy基因第一內(nèi)含子、Actin基因第一內(nèi)含子等)來增強該0sHAL3基因的表達。適用于本發(fā)明方法的強啟動子包括但不限于35s啟動子、水稻、玉米的Ubi啟動子等。抑制0sHAL3基因表達的方法也是本領(lǐng)域周知的。例如，可通過反義或RNA干擾(RNAi)或基因敲除的技術(shù)來實現(xiàn)。作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方式，獲得0sHAL3高表達的植株的方法如下(1)提供攜帶表達載體的農(nóng)桿菌，所述的表達載體含有0sHAL3蛋白的DNA編碼序列；(2)將植物細胞或組織或器官與步驟(l)中的農(nóng)桿菌接觸，從而使該0sHAL3蛋白DNA編碼序列轉(zhuǎn)入植物細胞，并且整合到植物細胞的染色體上；(3)選擇出轉(zhuǎn)入所述0sHAL3蛋白DNA編碼序列的植物細胞或組織；和(4)將步驟(3)中的植物細胞或組織再生成植株。其中，可采用任何適當(dāng)?shù)某Ｒ?guī)手段，包括試劑、溫度、壓力條件等來實施此方法。本發(fā)明還包括0sHAL3蛋白或其編碼基因的拮抗劑或激動劑。由于0sHAL3的拮抗劑或激動劑可調(diào)節(jié)0sHAL3的活性或表達，因此，所述的0sHAL3的拮抗劑或激動劑也可通過對0sHAL3的影響來調(diào)節(jié)作物的生長、調(diào)節(jié)作物的耐鹽性、調(diào)節(jié)作物的發(fā)芽率、調(diào)節(jié)作物種子的壽命、或調(diào)節(jié)作物種子的儲藏時間時等，從而達到使作物性狀改良的目的。所述的0sHAL3的拮抗劑是指任何可降低0sHAL3的活性、降低0sHAL3的穩(wěn)定性、下調(diào)0sHAL3的表達、減少0sHAL3有效作用時間、或抑制OsHAL3的轉(zhuǎn)錄和翻譯的物質(zhì)，這些物質(zhì)均可用于本發(fā)明，作為調(diào)節(jié)作物生長有用的物質(zhì)。所述的OsHAL3的激動劑是指任何可提高OsHAL3的活性、維持0sHAL3的穩(wěn)定性、促進0sHAL3表達、延長0sHAL3有效作用時間、或促進0sHAL3的轉(zhuǎn)錄和翻譯的物質(zhì)，這些物質(zhì)均可用于本發(fā)明，作為提高作物的耐鹽性、提高作物的發(fā)芽率、延長作物種子的壽命、增加作物種子的儲藏時間時有用的物質(zhì)。在本發(fā)明的一個實例中，提供了一種OsHAL3基因，其基因序列如SEQIDNO:l所示，編碼一個含有220個氨基酸的蛋白質(zhì)(SEQIDNO:2)。本發(fā)明的主要優(yōu)點在于首次從水稻中發(fā)現(xiàn)水稻黃素蛋白基因(CW/AU)，該基因的揭示可以為水稻的生長、耐鹽性、種子耐儲藏性，種子發(fā)芽率等方面的改良提供新的途徑，因而具有巨大的應(yīng)用前景。另外，^/^ZJ基因也將在其它作物包括小麥、玉米、高梁等抗逆、種子耐儲藏等的育種中起重要作用。材料和方法(一)a5朋z3水稻轉(zhuǎn)基因?qū)嶒灡緦嵤├捎脕碓从谥参锉磉_載體pCAMBIA3301的雙元載體pHB(Mao等，尸roc力ca^5"ci"W102，12270-12275，2005)作為水稻轉(zhuǎn)基因載體。該載體編碼一個細菌復(fù)制起點(ori)、卡那霉素抗性基因(Kanr)、潮霉素抗性基因(Hyg0、除草劑抗性基因(Bar)、CaMV35S啟動子、N0S基因的終止信號序列以及后兩者之間的限制性內(nèi)切酶克隆位點(MCS)。在限制性內(nèi)切酶克隆位點可正向插入Os朋Z^的cDNA構(gòu)建成轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒。1.Os^I^正義過量表達的轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒構(gòu)建以水稻"中花11"品種的mRNA為模板，合成第一條鏈cDNA，以該DNA序列的5'端和3"端的PCR寡核苷酸為引物(SEQIDNO:3和SEQIDNO:4)，用高保真Taq酶pfuTaq進行擴增，獲得0sHAL3的cDNA擴增產(chǎn)物。5'端寡核苷酸引物序列為:5'-CGAAGCTTATGACTACATCAGAGTCAG-3'(SEQIDNO:3);3'端寡核苷酸引物序列為5，-CCTGCAGTCAGCTAGATGGGAGGTTTC-3，(SEQIDNO:4)。將上述擴增產(chǎn)物通過w/7dn和尸wi限制性酶切重組連接到載體phb，并對多個重組子進行測序，以驗證序列的正確性。連接物轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株DH5a，在含有Kan(5(^g/ml)的LB培養(yǎng)基上篩選轉(zhuǎn)化子，挑選單菌落提取質(zhì)粒，用歷'/K/HI和尸Wl酶解挑選出有約0.6Kb片段插入的克隆，并用該基因?qū)?yīng)的引物(SEQIDNO:3和SEQIDNO:4)測序檢驗核苷酸序列是否正確。這樣成功構(gòu)建pHB-35S-Os^4Z3質(zhì)粒(即0E-HAL3質(zhì)粒)。2.Os朋U轉(zhuǎn)化水稻上述pHB-35S-^朋Z3重組質(zhì)粒通過凍融法導(dǎo)入農(nóng)桿菌菌株EHA105(參見Hood，E,E.等，TransgenicRes.，1993，2，208-218)。每200(^1EHA105感受態(tài)細胞加0.5-化g(約10W)質(zhì)粒DNA混勻，依次于冰上、液氮和37。C水浴中各放置5分鐘；用新鮮的YEB液體培養(yǎng)基稀釋至lml，于28。C振搖培養(yǎng)2-4小時；取200W涂布于含抗生素Kan(50kg/ml)的YEB平板上，28。C培養(yǎng)2-3天。長出的菌落在含抗生素的YEB平板上劃單菌，連續(xù)劃3次。從YEB平板上挑取農(nóng)桿菌單菌落接種到3ml含抗生素的YEB液體培養(yǎng)基中于28。C振搖培養(yǎng)過夜，第2天按W接種量轉(zhuǎn)接入50ml含抗生素的AB液體培養(yǎng)基中，200rpm繼續(xù)振搖培養(yǎng)至OD,為0.6至0.8左右時，將新鮮的農(nóng)桿菌菌液于5000rpm、4。C離心5分鐘，收集并重懸于1/3體積的AAM液體培養(yǎng)基中，此時即可用于轉(zhuǎn)化水稻各種受體材料。本實施例采用常規(guī)的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化水稻中花11的幼胚愈傷。取授粉后12-15天的中花11未成熟種子經(jīng)70%乙醇浸泡1分鐘后，于NaClO溶液中(與水1:3混合，加2-3滴吐溫20)消毒90分鐘以上，用無菌水沖洗4_5次，然后用解剖刀和攝子挑出幼胚并接種于n6d2培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，在26士rC、避光條件下培育，4天后可用于轉(zhuǎn)化。將幼胚愈傷浸泡入新鮮的AAM農(nóng)桿菌菌液中并不時搖動，20分鐘后將水稻材料移出，在無菌濾紙上吸去過多的菌液，隨即轉(zhuǎn)移到n6d2c培養(yǎng)基上，于26。C共培養(yǎng)3天。共培養(yǎng)時，在共培養(yǎng)培養(yǎng)基中加入乙酰丁香酮作為農(nóng)桿菌Wr基因活化物，使用濃度為100Wnol/L。3天后，從共培養(yǎng)培養(yǎng)基上取出愈傷組織，切去胚芽并轉(zhuǎn)入選擇培養(yǎng)基N6D2Sl(Hyg25mg/l)進行選擇培養(yǎng)。7-12天后將抗性愈傷組織轉(zhuǎn)到N6D2S2(Hyg50mg/l)選擇培養(yǎng)基上繼續(xù)篩選。10-12天后生長旺盛的抗性愈傷組織轉(zhuǎn)移到預(yù)分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)一周左右，再移至分化培養(yǎng)基上分化(12小時光照/天)。再生的小苗在1/2MS。H培養(yǎng)基上生根壯苗，隨后移入人工氣候室盆土栽培。獲得的再生植株移栽成活后以除草劑再次篩選轉(zhuǎn)化植株；陽性植株提取葉片總DNA，經(jīng)PCR進一步鑒定轉(zhuǎn)化植株。3.鹽脅迫試驗對^朋Z3轉(zhuǎn)化水稻T2代進行鹽脅迫，即在轉(zhuǎn)基因植物的培養(yǎng)液中加入NaCl至終濃度120mM，觀察植株在鹽處理前以及鹽處理7天、10天、25天后的耐鹽性表型，以轉(zhuǎn)入P朋質(zhì)粒(空質(zhì)粒)的轉(zhuǎn)基因水稻為對照。并且，檢測鹽處理前后植物中Na+和K+的含量和比例。4.種子出芽試驗在制備了fci^丄J過表達的轉(zhuǎn)基因植物后，收獲其種子，將其種子儲藏l-2年(陳年種子)，然后檢測種子的發(fā)芽率，研究fc^!^基因功能。即將陳年水稻種子置于含水的培養(yǎng)皿中，置3(TC培養(yǎng)3天后，觀察出芽情況，統(tǒng)計出芽比例；并且，以相同條件下儲藏1-2年的轉(zhuǎn)入pHB質(zhì)粒(空質(zhì)粒)的轉(zhuǎn)基因水稻種子或野生型"中花11"水稻種子的出芽情況作為對照。5.Os朋丄3的組織表達特異性以水稻基因組DNA為模板，擴增0s^lZ3基因起始密碼子前1534bp，常規(guī)方法在擴增產(chǎn)物的兩端引入5"aW和尸sW酶切位點，用SaW和尸sW酶切后連接到經(jīng)過同樣酶切的pCA鵬IA1300GN(pCAMBIA1300購自CAMBIA公司，常規(guī)方法在pCAMBIA1300載體的多克隆位點的末端加入報告基因GUS，構(gòu)成pC認BIA1300GN)載體上，用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)入"中花11"品種中，獲得轉(zhuǎn)基因植株。將獲得的陽性轉(zhuǎn)基因植株各個部位放入GUS染色液中37t:放置2小時左右，觀察各個部位的染色情況。0^//LL基因除了在根尖和莖的分生組織以及分裂旺盛的幼嫩組織中表達，還在種子的胚中有很高表達(圖3B)。(二)0sHAL3蛋白質(zhì)分析實驗1、抗體制備以水稻"中花ll"品種的raRNA為模板，以下列序列為引物(SEQIDNO:5和SEQIDNO:6)，PCR擴增獲得OsHAL3cDNA擴增產(chǎn)物。5'端寡核苷酸引物序列為5'CCGCGAATTCATGACTACATCAGAGTCAG3，(SEQIDNO:5);3'端寡核苷酸引物序列為5'CCGCCTCGAGCGCTAGATGGGAGGTTTCTG3，(SEQIDNO:6)。擴增產(chǎn)物用I和J力oI酶切后重組連接到pET32a(+)的相應(yīng)酶切位點中。將重組有fe朋W的原核表達載體pET32a(+)轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21，IPTG誘導(dǎo)原核表達，然后用His-tag柱(珠)純化蛋白，常規(guī)方法免疫兔子，從而獲得抗0sHAL3的抗體。2、檢測抗體效價采用常規(guī)的Western印跡法檢測0sHAL3過量表達的表達量，并同時以未轉(zhuǎn)化親本、空質(zhì)粒及反義轉(zhuǎn)基因植株作為負對照，0sHAL3原核表達蛋白作為正對照。3、檢測水稻HIS-OsHAL3融合蛋白對光譜的吸收將重組有fc朋U全長cDNA的原核表達載體pET32a(+)(購自Novagen)轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21中，IPTG、低溫(12'C)誘導(dǎo)原核表達，利用Ni-柱采用非變性的方法從原核表達細菌中提取活性蛋白，以等體積的洗脫液為空白對照，用BeckmanDU640核酸&蛋白分析儀掃描此蛋白在300800nm范圍內(nèi)的吸收峰值。該蛋白的吸收峰在藍光區(qū)有兩個吸收峰與F腦(黃素單核苷酸)的吸收峰一致。表明OsHAL3具有藍光吸收特性。實施例l水稻黃素蛋白基因經(jīng)鑒定，水稻黃素蛋白基因Os^4ZJ的全長0RF為663個核苷酸，編碼220個氨基酸，其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示或見圖IB;其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示或見圖1A。實施例2Os朋A3基因?qū)τ谒灸望}性的影響將Os朋L基因按正義方向置于CaMV35S啟動子的控制下，構(gòu)建到水稻表達載體pHB上；接著，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其導(dǎo)入水稻品種"中花ll"中。對陽性轉(zhuǎn)化植株進行鹽脅迫分析表明，過量表達fc^L^基因?qū)е罗D(zhuǎn)基因水稻株系的耐鹽性明顯提高，這是由于轉(zhuǎn)基因株系的Na+離子顯著下降而K+離子顯著增加引起的，見圖2。由圖2A和圖2B可見，給予120mM的NaCl培養(yǎng)IO天后，過量表達Os^4U的轉(zhuǎn)基因水稻生長基本正常，而PHB空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)基因水稻生長不佳，葉子枯萎較為嚴(yán)重；在培養(yǎng)25天后，過量表達0^^^的轉(zhuǎn)基因水稻盡管葉子有所損害，但還處于存活狀態(tài)，然而pHB空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)基因水稻已處于枯死狀態(tài)。上述結(jié)果明確表明，fc^4"基因在水稻耐鹽過程中起著重要的作用，有良好的應(yīng)用前景。實施例30s朋丄3基因提髙水稻種子耐儲藏性過量表達Os^4i^基因轉(zhuǎn)基因株系的種子雖然經(jīng)過2年的儲藏，其種子發(fā)芽率高達95%,而pHB空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)基因水稻或野生型對照種子的發(fā)芽率僅為25%，見圖3A。這明確表明a^LL基因在水稻種子耐儲藏過程中起著重要的作用，有重要應(yīng)用前景。實施例4fo朋i:3基因的組織表達采用GUS染色的方法，本發(fā)明人鑒定了Os^I^基因在水稻組織中的表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該基因在水稻幼嫩和伸長組織以及水稻種子的胚乳中表達(見圖4B)。實施例50sHAL3蛋白的活性和表達量受光的調(diào)控本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一個非常值得關(guān)注的結(jié)果，0sHAL3蛋白的活性和表達量受光的調(diào)控，從而控制水稻的生長。經(jīng)確定0sHAL3蛋白的活性形式是三聚體。本發(fā)明人通過酵母雙雜交實驗發(fā)現(xiàn)0sHAL3蛋白的多聚化是受光調(diào)控的。具體實驗如下用以下引物擴增水稻獲得OsHAL3的cDNA產(chǎn)物，用EcoRI和BamHI酶切后分別連入在pEG202載體(ClonTech，作為誘餌載體)和pJG4-5載體(ClonTech，作為捕獲載體)上。5'CCGCGAATTCATGACTACATCAGAGTCAG3'(SEQIDN0:7);5，CCGCGGATCCGCTAGATGGGAGGTTTCTG3'(SEQID紙8)。將上述載體轉(zhuǎn)化酵母EGY48(購自Clontech公司)后，在SD/Xgal培養(yǎng)基中生長。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在黑暗中，0sHAL3蛋白可以發(fā)生多聚化，啟動酵母中半乳糖苷酶的活性，使生長在SD/Xgal培養(yǎng)基中的菌落變藍，OsHAL3蛋白的多聚化也能啟動酵母體內(nèi)亮氨酸的合成，將轉(zhuǎn)化后的酵母稀釋四個梯度后(10°，10—'，If)—2,10—3)仍能在50/-1^11的培養(yǎng)基中生長；而在藍光、紅光和遠紅光下，該蛋白的多聚化受到抑制。在實驗中，用已知多聚化不受光影響的CRY1蛋白和其N端-CNT1(參見Sang，Y.等，PlantCell17，1569-1584(2005))作為對照(圖4)。結(jié)果表明0sHAL3蛋白黑暗中具有活性，但在藍光(或白光)條件下，0sHAL3蛋白的三聚體被解聚而沒有活性，見圖4。另外，用WesthernBlot方法檢測到在黑暗條件下0sHAL3蛋白表達量增加，而在藍光(或白光)條件下0sHAL3蛋白表達量受到抑制。因此，在黑暗條件下0sHAL3促進水稻生長，而在藍光條件下0sHAL3抑制水稻生長。實施例60sHAL3蛋白變體的功能采用常規(guī)的基因技術(shù)，本發(fā)明人將SEQIDNO:2所示的0sHAL3氨基酸序列的第217位Leu替換為Ile，構(gòu)成0sHAL3蛋白變異體(0sHAL3-M)。如前所述類似的方法，利用農(nóng)桿菌制備轉(zhuǎn)入了OsHAL3-M基因且能夠高表達OsHAL3-M的轉(zhuǎn)基因水稻，測定該轉(zhuǎn)基因水稻的生長情況、耐鹽性、種子儲藏時間，發(fā)現(xiàn)高表達0sHAL3-M的轉(zhuǎn)基因植物也具有生長快、耐鹽性好、種子儲藏時間長的特點；并且，其表達量和活性也受光的調(diào)控。在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。序列表<110〉中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院<120〉水稻黃素蛋n基H及應(yīng)用<130>074503<160>8<170〉Patentlnversion3.3<210〉1<211〉663<212〉DNA<213〉稻屬(OryzasativaL.)<400〉1atgactacatcagagtcagtacaaga^ccttgggattggatttccctcatcctagcaaa60cctcgggtcctccttgctgcctctggaagcgtcgctgctataaaatttgagagcctttgc120cgtagcttctcggaatgggcagaagtcagagccgtcgccaccaaggcttcattacatttt180attgatagaacgtctctgcctagcaatattattctttacactgatgatgatgaatggtct2403CCtgg^g3agataggggatgaagttttgcacattgaactgcgaaaatgggcagatstc300cgccattatcagctaataccctagctaagattgctggtggtttatgtgac360犯cctcttgacatgcatagtg卿gcatgggactacagcaaaccactctttgttgcccca420gctdtg犯caccttcatgtggaacaacccgttCELCCagtCgtcatcttgagacaatcaac480ctgctaggtatatctttggtccctcccattacc犯犯ggctggcctgtggtgattatggt540aatggtgcaatggctgagccttctgtgatcgattccaccgtcaggcttgcttgcaagaga600cagccacttaataceaatagttcacctgtggttcctgccggcagaaacctcccatctagc660tg3663<210〉2<211>220<212>PRT<213>稻屬(OryzasativaL.)<400>2MetThrThrSerGluSerValGinGluThrLeuGlyLeuAspPhePro151015HisProSerLysProArgValLeuLeuAlaAlaSerGlySerValAla202530AlalieLysPheGluSerLeuCysArgSerPheSerGluTrpAlaGlu354045ValArgAlaValAlaThrLysAlaSerLeuHisPhelieAspArgThr505560SerLeuProSerAsnlielieLeuTyrThrAspAspAspGluTrpSer65707580ThrTrpLysLyslieGlyAspGluValLeuHislieGluLeuArgLys859095TrpLysAlaPhe145LeuGlyThrProAlalieTrp130MetLeuAspValVal210Asplie100AlaGly115AspTyrTrpAsnGlylieTyrGly180ArgLeu195VslProMetVallieGlyLeuCysSerLysPro135AsnProPhe150SerLeuVal165AsnGlyAlaAlaCysLysAlaGlyArg215AlaProLeuSerAla105AspAsnLeuLeuThr120LeuPheValAlaPro140ThrSerArgHisLeu155ProProlieThrLys170MetAlaGluProSer185ArgGinProLeuAsn200AsnLeuProSerSer220AsnThrLeuAla110CyslieValArg125AlaMetAsnThrGluThrlieAsn160ArgLeuAlaCys175VallieAspSer190ThrAsnSerSer205<210><211><212〉<213〉<220><221><223>327DNA人工序列misc_feature引物<400〉3cgaagcttatgactacatcagsgtcag27<210〉<211><212><213〉<220〉<221><223〉427腿人工序列misc—feature引物<400〉4cctgcagtcagctagatgggaggtttc27<210>5<211〉29<212>廳<213〉人T序列<220><221〉misc一feature<223〉引物<400〉5ccgcgaattcatgactacatcagagtcag29<210〉6<211〉30<212〉DNA<213>人丁序列<220〉<221〉misc—feature<223>引物<400〉6ccgcctcgagcgctagatgggaggtttctg30<210〉7<211〉29<212〉DNA<213>人丁序列<220〉<221>raisc一feature<223〉引物<400>7ccgcgaattcatgact.acatcagagtcag29<210〉8<211>29<212〉DNA<213>人工序列<220><221〉misc一feature<223>引物<400〉8ccgcggatccgct卿tgggaggtttctg29權(quán)利要求1.一種分離的OsHAL3蛋白，其特征在于，該蛋白選自下組(a)具有SEQIDNO:2氨基酸序列的多肽；或(b)將SEQIDNO:2氨基酸序列經(jīng)過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有與SEQIDNO:2所示的氨基酸序列相同功能的由(a)衍生的多肽。2.—種分離的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸選自下組(i)編碼權(quán)利要求1所述的OsHAL3蛋白的多核苷酸；或(ii)與(i)中的多核苷酸互補的多核苷酸。3.如權(quán)利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸編碼含有SEQIDNO:2所示氨基酸序列的多肽。4.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。5.—種載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求2所述的多核苷酸。6.—種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，它含有權(quán)利要求5所述的載體或基因組中整合有權(quán)利要求2所述的多核苷酸。7.權(quán)利要求l所述的OsHAL3蛋白或其編碼基因的用途，其特征在于，用于調(diào)節(jié)作物的生長，提高作物對鹽脅迫的抗性，提高作物種子的耐儲藏性。8.—種提高作物對脅迫的抗性或提高作物種子的耐儲藏性的方法，其特征在于，該方法包括提高所述作物中OsHAL3基因的表達或活性。9.一種改良作物的方法，其特征在于，它包括步驟(1)提供攜帶表達載體的農(nóng)桿菌，所述的表達載體含有權(quán)利要求1所述的OsHAL3蛋白的編碼序列；(2)將作物細胞或組織或器官與步驟(l)中的農(nóng)桿菌接觸，從而使所述OsHAL3蛋白的編碼序列轉(zhuǎn)入作物細胞，并且整合到作物細胞的染色體上；(3)選擇出轉(zhuǎn)入所述OsHAL3蛋白的編碼序列的作物細胞或組織；(4)將步驟(3)中的作物細胞或組織再生成植株。10.—種權(quán)利要求1所述的OsHAL3或其編碼基因的激動劑或拮抗劑。11.一種促進作物中權(quán)利要求l所述的蛋白表達或活性的方法，其特征在于，所述的方法包括將作物置于黑暗的環(huán)境中，或降低作物照射光中藍光、紅光、遠紅光和/或白光的量。12.—種抑制作物中權(quán)利要求l所述的蛋白表達或活性的方法，其特征在于，所述的方法包括提高作物照射光中藍光、紅光、遠紅光和/或白光的量。全文摘要本發(fā)明屬于基因
技術(shù)領(lǐng)域：
，公開了一種水稻黃素蛋白基因及應(yīng)用。所述的水稻黃素蛋白基因可用于調(diào)節(jié)作物的生長，提高作物對鹽脅迫的抗性，提高作物種子的耐儲藏性，延長作物種子的壽命，提高種子的發(fā)芽率等。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)所述水稻黃素蛋白的活性和表達受到光的調(diào)控，從而調(diào)節(jié)水稻的生長。本發(fā)明的水稻黃素蛋白基因在作物耐鹽、作物生長調(diào)節(jié)以及作物耐儲藏育種方面具有廣泛的用途。文檔編號C07K14/415GK101376674SQ20071004535公開日2009年3月4日申請日期2007年8月29日優(yōu)先權(quán)日2007年8月29日發(fā)明者孫世勇,敏施,晁代印,朱美珍,林鴻宣,高繼平申請人:中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院