專利名稱：中國南海信號芋螺神經毒素基因Lt3.2及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中國南海信號芋螺M-超家族毒素基因Lt3.2及其編碼的多 肽序列lt3b和該多肽的制備技術，以及該毒素在神經生物學研究，離子通道藥 物和鎮痛藥物開發中的應用。
背景技術：
芋螺屬于軟體動物門腹足綱芋螺科(Conidae)，多數棲息在熱帶海洋的淺海 水域，少數在水深幾米至200余米的深水區，因外形呈圓錐形或芋頭狀而得名。 芋螺是比較年輕的生物，化石記錄證明芋螺屬最早出現于始新世(Eocene)，中 生代(mesozoic)時期與陸地上恐龍同時滅絕的海洋捕食性軟體動物菊石的消失 客觀上促進了芋螺的第一次大規模的物種形成。芋螺的第二次大規模的輻射始于 中新世(Miocene)，基本上持續到現在。每個芋螺物種的形成都伴隨全新的毒液 成分和有效的毒液輸送裝置的進化。
芋螺具有強大的自然進化能力，全球有超過500種芋螺，單一種屬中就包括
數百種物種，這使芋螺成為海洋無脊椎動物中進化最成功的生物。芋螺是食肉動 物，靠毒液來捕食，根據其捕食習性可分為食魚芋螺(piscivorous)、食螺芋螺 (molluscivorous)、食蟲芋螺(vermivorous)。食蟲性芋螺種類最多，占全部芋 螺種類的70%左右。食魚性芋螺占芋螺總數最少，但毒性最強，報道的芋螺致死 事件基本上是該類芋螺造成的，如織錦芋螺(C&m7e)、地紋芋螺 (C geo^rajD力〃5^等。
芋螺毒液是捕食與防御作用的主要武器，它是由許多單一毒肽組成的雞尾酒 樣的混合毒素，稱為芋螺毒素(Conotoxin)。芋螺毒素能特異地作用于神經系統 的電壓門控和配體門控離子通道的不用亞型和遞質受體，因此被廣泛用于神經生 物學研究。芋螺毒素通常為由7 41個氨基酸殘基組成的小分子多肽。大多富含 半胱氨酸，具有高度保守的二硫鍵骨架。與蜘蛛、蝎、蛇、海葵等許多動物的毒 素比較(40 80個氨基酸左右)，芋螺毒素的肽鏈短得多，富含二硫鍵，分子結
構更為緊密，生物活性更高。大多數芋螺毒素均由單一的mRNA編碼，原始的翻譯 產物是一種特定的多肽前體，約為70-120個氨基酸殘基，經蛋白酶水解后得到 成熟肽。
二十世紀八十年代初，美國猶它大學01iveraBM學者實驗室最早開展了芋螺 毒素全面系統研究工作。芋螺毒素以其分子小，結構穩定，對受體作用范圍廣并 且活性強的特點，已經躍居于動物神經毒素研究的首位。由于它們作用靶點廣泛， 能高度特異地結合細胞膜上神經遞質和激肽的受體和各種離子通道， 一方面，可 以被直接開發成藥物或作為新藥的先導化合物應用于臨床；另一方面，可以成為 神經生物學中發現鑒定新受體,研究受體構效關系及其調控細胞分子機理的重要 探針,并推動了離子通道的進化研究。
保守估計有50000種以上不同的芋螺毒素存在，至今已經得到分離的芋螺毒 素有近千種，數十種芋螺毒素己申請美國專利。它們在鎮痛、局部缺血性保護、 癲癇治療、某些疾病診斷和受體研究中具有廣泛的應用價值，有的已進入臨床研 究或己被FDA正式批準為治療新藥，用作特異診斷試劑和鎮痛藥。目前，由Elan 公司進行開發的CTX M VEA (SNXIII，商品名Ziconotide)，因其直接作用 分布于神經組織的N-型鈣離子通道，無需第二信使或蛋白，不成癮，已成為治 療難治性神經疼痛的新一代藥物，已通過了III期臨床試驗，正式被FDA批準上市。 而另一個衍生于CTX C VID的化合物AM336作用類似于Ziconotide，因其對 N-鈣通道的選擇性更強，副作用更低，已經批準作為對抗嚴重抗嗎啡作用慢性疼 痛的治療藥物進入臨床試驗階段。此外，Conantokin-G作為麗DA受體高度選擇 性的拮抗劑，對難以治療的癲癇有效，也已完成I期臨床試驗。芋螺毒素藥用研 究的其他方向還有具有去甲腎上腺素轉運蛋白抑制作用的T-超家族芋螺毒素， 可用于治療抑郁癥。以及抑制al-腎上腺素受體的一些芋螺毒素，可用于治療 良性前列腺過度增生引起的尿失禁。與此同時，圍繞著增強藥物分子的穩定性， 降低過敏反應以及增加溶解性以利于口服目的的分子改造研究工作也正在進行。
另一方面，芋螺毒素作為研究離子通道和膜受體的極好探針或工具，已經成 為電壓門控型鈣離子通道(VSCCs)和N型乙酰膽堿受體(nAChRs)等通道、受體 鑒定和診斷的標準工具，在神經藥理學領域得到了廣泛的應用。
芋螺在我國南海海域有廣泛分布，已査明的芋螺約有80余種，主要分布在
臺灣、廣東、廣西、海南諸省以及西沙和南沙群島等。近年來國內也開展了芋螺 毒素的生物化學、分子生物學以及藥理作用等方面的研究工作。中國科學院北京 藥物化學研究所的陳冀勝研究員等人已自桶形芋螺(C.6""W/7M)、獨特芋螺 (C. csrs"erj'"iJeo )、菖蒲芋螺(C.陀"'"腿)、地紋芋螺等類芋螺中分離 鑒定了十余種新序列的芋螺毒素。軍事醫學科學院生物工程研究所的盧柏松、黃 培堂以及戴秋云等從我國的線紋芋螺、織錦芋螺中也發現了一些新的毒素成分和 基因序列。熱帶農業大學彭世清、羅素蘭等己從菖蒲芋螺基因組中克隆到兩個新 芋螺毒素基因(GenBank登記號AY316159, AY316160);同時還從海南產的大理 石芋螺(C股2/7fforeiA )、幻芋螺(C/z a^/s)、信號芋螺(C.力'"er^AS)、勇 士芋螺(C啦7es)、獨特芋螺、織錦芋螺、桶形芋螺、疵篙芋螺(C乃'wV"s) 等共12個種中分別發現了多種具有藥用功能的芋螺毒素及其基因。雖然我國有 著豐富的芋螺資源，但由于起步較晚，目前對于芋螺毒素的研究尚處于初期階段， 有著廣闊的研究空間和開發前景。
由于芋螺毒素在其基因序列和蛋白質結構及功能方面差異較大，具有種類繁 多，結構復雜和高度遺傳多樣性特征。構建信號芋螺毒管cDNA文庫可以系統地 研究食蟲芋螺的毒素組成、表達譜，發現新的食蟲芋螺特有的毒素序列。迄今為 止，國外已構建了多種芋螺的cDNA文庫，中國南海信號芋螺是一種食蟲性芋螺， 世界上尚沒有關于它的毒素研究的報道。
因此，開展我國南海信號芋螺毒素的生物化學、藥理學尤其是其分子生物學 和基因工程技術領域的探索研究將有助于對新毒素分子相應受體及其作用機制 的深入研究，而且可為我國芋螺海洋資源的藥用開發利用提供重要理論依據。
發明內容
本發明的目的在于提供一種新的中國南海信號芋螺M-超家族毒素基因 Lt3. 2及其編碼的多肽序列lt3b及其片段、類似物和衍生物。 本發明的另一目的是提供該多肽的分離純化方法。 本發明的另一 目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。 本發明的另一目的是提供這些多肽的用途。
本發明的第一方面，提供一種新的神經毒素多肽，其包括含有序列表〈400〉2 所示的氨棊酸序列的多肽、或者其保守性變異多肽、或其活性衍生物。
上述的新的神經毒素多肽優選自以下組之一
(a) 由序列表〈400>2所示的氨基酸序列組成的多肽；
(b) 將(a)中的氨基酸序列經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失或舔加 而形成的具有相同功能的由(a)衍生的多肽。
本發明的第二方面，提供一種多核苷酸，該多核苷酸包含有選自以下組之一
核苷酸序列
(a) 編碼上述多肽的多核苷酸；
(b) 與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。
較佳的，該多核苷酸編碼〈400〉2所示的氨基酸序列。
本發明的第三方面，提供上述的神經毒素多肽的成熟肽RCCISP ACHE1CYCCQ(其中"g"為羧化谷氨酸)及其修飾物，以及含有上述成熟肽片段 的多肽。
本發明的第四個方面提供上述多肽的用途本發明獲得的中國南海信號芋螺 神經毒素多肽的成熟肽是一種神經毒素lt3b(注由于前體肽和成熟肽畢竟是兩 種不一樣的多肽，為了區分，前體肽在本專利申請中叫做神經毒素多肽，而其成 熟肽叫做神經毒素lt3b)，具有生物活性。該神經毒素具有鎮痛作用。分離純化 的lt3b能增大鈉離子通道的開放電流。因此，本發明的中國南海信號芋螺神經
毒素lt3b可用于制備神經生物學研究的工具藥和鎮痛藥物。
通過cDNA文庫的構建和測序的方法，從中國南海信號芋螺毒管中分離得到 具有新的半胱氨酸骨架的芋螺毒素U3.2基因，其DNA序列如序列表中〈400〉 1 序列所示。
上述本發明基因所編碼的多肽lt3b，其氨基酸序列如序列表中〈400〉 2序列 所示；其成熟肽序列如序列表中〈400〉3序列所示
本發明所選擇的信號芋螺釆自中國南海西沙群島一帶。
信號芋螺毒管cDNA文庫的構建取活螺體，使用喉閘破碎螺殼，暴露出螺 肉，冰上小心并快速分離毒管組織，提取總RNA。反轉錄為一鏈cDNA后合成雙 鏈cDNA，雙鏈cDNA與pMD18T載體連接后轉化￡ c^i',并保存每個重組克隆。
本發明通過對文庫重組克隆大規模序列測定，從中得到了 1個新的編碼芋螺 毒素的克隆，命名為Lt3.2 (其DNA序列如序列表中〈400〉 1序列所示)。新基
因編碼70個氨基酸殘基。
電生理實驗結果證實，信號芋螺毒素U3b能增加大鼠DRG細胞鈉離子通道
的開放電流，可作為探針用于離子通道類型及亞型的分類鑒定或者用于工具藥的
研究開發，用于制備神經生物學研究的工具藥和治療心律失常、頑痛、癲癇以及
中風等疾病的藥物。
小鼠熱板試驗結果證實，重組信號芋螺毒素lt3b的中、高劑量組與空白對
照組相比，具有顯著性差異(P〈0.05，P〈0.001);由此可初步認為lt3b的中、高 劑量組具有一定的鎮痛作用，從而為制備鎮痛藥物提供數據。
圖1為信號芋螺粗毒經S印hadex G25分離的層析峰圖
圖2為芋螺粗毒凝膠過濾后洗脫各峰的電泳圖，其中
1: G25峰III經過1KD超濾膜超濾后；2: G25峰I; 3: G25峰II
圖3為凝膠色譜II號峰的離子交換層析圖
圖4為芋螺毒素lt3b高效液相色譜圖
圖5為芋螺毒素lt3b的MOLDI-TOF質譜圖
圖6為芋螺毒素lt3b對大鼠背根神經節細胞電壓門控鈉離子通道電流的影
響
圖6A :鉗制電壓為-80mV，刺激電壓從-80mV至+30mV，脈沖間隔為10 mV， 刺激電壓的脈沖寬度為100ms。對照和加IOO nM lt3b后電流峰形的變化 圖6B : I-V曲線表明了對照和加100 nM lt3b 20 min后峰電流的變化 圖7為重組芋螺毒素lt3b生理模型上的鎮痛藥效
NS :空白對照組,H: lt3b樣品高劑量組，M : lt3b樣品中劑量組，L : lt3b 樣品低劑量組
具體實施例方式
在本發明申請中，"片段"、"衍生物"和"類似物"是指基本上保持本發明 的多肽相同的生物學功能或活性的多肽。本發明的多肽片段、衍生物或類似物可 以是(i)有一個或多個保守或非保守性氨基酸殘基(優選保守性氨基酸殘基)被取代，而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的；或(ii) 在一個或多個氨基酸殘基中具有取代基團的多肽，或(iii)成熟多肽與另外一個 化合物(比如延長多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或 (iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導序列或分泌序列 或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列，或與抗原IgG片段的形成的融合蛋白)。 本發明中的多核苷酸指腦A序列、DNA序列或cDNA。
本發明用構建cDNA文庫的方法，從中國南海信號芋螺毒管中克隆得到的芋 螺毒素M-超家族成員Lt3. 2，其DNA序列如序列表中〈400M序列所示。
上述本發明基因編碼的多肽的氨基酸序列如序列表〈400〉2所示，該多肽是 一前體肽，其成熟肽(神經毒素lt3b)的氨基酸序列如序列表中〈400〉3序列所 示該成熟肽由16個氨基酸組成，分子量為1930.30道爾頓。
本發明所選擇的信號芋螺屬于中國南海食蟲性信號芋螺(6b/7M 〗i"erato)，采自海南省三亞市。
中國南海信號芋螺毒管cDNA文庫的構建首先分離信號芋螺毒管，提取總 RNA。取總RNA進行反轉錄合成cDNA第一鏈產物。再取cDNA用于連接反應，轉 化液分別涂板，其余用于搖總庫菌液，從平板上挑取單克隆保種。
本發明通過對以上重組克隆大規模序列測定，得到EST序列編碼中國南海信 號芋螺神經毒素M-超家族成員，命名為Lt3.2 (其DNA序列如序列表中〈400〉1 序列所示)。新基因編碼的前體肽的氨基酸序列如序列表〈400〉2所示,而該前體 肽的成熟肽氨基酸序列如序列表中〈400〉3序列所示由16個氨基酸組成，分子量 為1930.30道爾頓，具有典型芋螺毒素一級結構的特征，分子內具有三對二硫鍵。
本發明通過分離純化得到了一條多肽lt3b， RCCISPACH逕CYCCQ，分子 量為1930.30道爾頓，其中為羧化谷氨酸。其分子內第一個和第四個半胱 氨酸成一對二硫鍵，第二個和第五個半胱氨酸成一對二硫鍵，第三個和第六個半 胱氨酸成一對二硫鍵。
以下實施例將有助于本領域的普通技術人員進一步理解本發明，但不以任何 形式限制本發明。
實施例1:信號芋螺毒管cDNA文庫的構建和鑒定
總RNA的提取和cDNA合成分離中國南海信號芋螺毒管，參照Gibco BRL
公司的TRIZOL LS試劑說明書進行毒管總RNA提取。取1 u g信號芋螺毒管總RNA 以SMART III olignuclotide(5' -AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGGCCATTATGGCCGGG-3') 和CDSII工/3' PCR引物(5，-ATTCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACATG-d(T)3QN—,N-3')進行 逆轉錄合成第一鏈，得到10ul cDNA第一鏈產物。
信號芋螺毒管cDNA文庫的構建和鑒定取cDNA1.5pl用于連接反應，轉化 后涂板。從平板中挑取單克隆保種并隨機挑取一定數目的單克隆進行測序和生物 信息學分析。
實施例2:信號芋螺粗毒提取
將新鮮分離的毒液管放置于培養皿，采用三種不同方式獲取粗毒。1)擠出 法。捏住毒囊一端，將漿液從毒液管擠出。2)勻漿法。將毒管及毒囊解剖出來 后，放到冰浴的燒杯里，用勻漿器粉碎。3)液氮碾磨法。在碾缽中加入液氮， 使毒管和毒泡磨成粉末。將三種方法獲得的毒液分別在1.1%的乙酸緩沖液中萃 取，反復離心收集上清液，即時上凝膠層析或者放置于-2(TC冷凍保存。
實施例3:凝膠色譜分離純化
將實施例2萃取的粗毒用S印hadexG-25層析柱(用1. 1%的乙酸溶液平衡) 進行初步分離，流速為lml/min。信號芋螺粗毒經S印hadex G25分離的層析峰 圖如圖1所示。收集各個洗脫峰，然后用SDS-PAGE電泳確定每個峰所含組分的 大致分子量，結果如圖2所示。
將收集的各峰用Tris-HCl調節pH到8. 8，然后分別上樣到Q s印harose high performance陰離子交換柱(20X2. 6cm，預先用pH8. 8的50mM Tris-HCl溶液 平衡)進行離子交換層析，同時收集穿透峰；流速lml/min。用0 1M NaCl溶液 進行梯度洗脫，收集各洗脫峰。其中，G25凝膠色譜II號峰的離子交換層析圖 分別如圖3所示。
實施例4: RP-HPLC分離純化、質譜與測序
將離子交換層析中收集的各組分用Stirred cell 8200超濾裝置(配截留分 子量為1KD的濾膜)過濾濃縮。濾缸內液用Hypersil BDS C18 RP-HPLC柱再 次純化，所用的平衡液為BufferA(O. 1%TFA)，洗脫液為Buffer B(含0.1% TFA 的乙腈)，流速為0.8ml/min。高效液相色譜圖如圖3所示。圖4所示的高效液 相色譜圖是收集圖3的IV號峰來進行的。收集洗脫峰，用MOLDI-TOF質譜分析 后，在ABI 492cLC型蛋白質序列測定儀上用Edman降解法測定氨基酸序列， 獲得的信號芋螺毒素lt3b的氨基酸序列與序列表400<3>—致。
實施例5:信號芋螺毒素lt3b對鈉離子通道的作用
選用細胞表面光滑的DRG細胞進行全細胞電流膜片鉗實驗。利用內液中CsCl 與外液中TEA-CI阻斷鉀離子電流，內液中NaF和外液中LaCl阻斷鈣離子電流。 細胞鉗制電壓為一80mV，刺激電壓為一80mV到+ 30mV，步階為10mV，刺激電壓 脈沖寬度為100mS。記錄的電流為鈉內向電流。將用上述方法分離純化獲得的新 的芋螺毒素lt3b加到細胞外液中至終濃度為100nM，約20min后，當芋螺毒素 均勻擴散到溶液中后，鈉通道的開放電流比對照有明顯的增大，增大比例15%左 右。
實施例6:生理模型上的中樞鎮痛藥效實驗法
基本方案小鼠熱板法
選取NIH系小鼠100只，體重20土2g，全為雌性。實驗前先對小鼠進行篩選， 將小鼠放于事先加熱到55'C的熱板測痛儀上，用秒表記錄小鼠自投入熱板至出 現舔后足的時間為該鼠的痛閾值，測定2次，挑選出痛閾值不超過20s的小鼠為 合格者進行正式實驗。將篩選后的小鼠隨機分成4組，即空白對照組、lt3b樣 品低、中、高劑量組，每組10只。實驗開始時進行腹腔注射給藥，其中H3b 樣品低、中、高劑量組給予劑量分別為0. 07mg/kg， 0. 14mg/kg， 0. 28mg/kg，空 白對照組給予等體積的生理鹽水。于注射給藥后0.5h、 lh、 1.5h、 2h、 3h測定 一次，如痛閾值超過60s則按60s計算(注意時間不宜太久以免燙傷小鼠足部)。 實驗結束后，進行統計學處理并計算痛閾提高百分率。痛閾提高百分率=(用藥 后平均痛閾值-用藥前平均痛閾值)+用藥前平均痛閾值乂100%。
由實驗結果可得，空白對照組小鼠給藥前后的痛閾值基本穩定，提示經過篩 選后的小鼠對熱刺激反應的耐受性較好。受試樣品lt3b的低、中、高劑量組小
鼠給藥后的痛閾值均不同程度的提高，其中給藥0. 5h時，受試樣品lt3b的三個 劑量組小鼠的痛閾值與同期空白對照組相比，具有顯著性差異 (P<0. 01， P〈0. 001);給藥lh和2h時，受試樣品lt3b的中、高劑量組小鼠的痛 閾值與同期空白對照組相比，具有顯著性差異(P〈0.01,P〈0.001);給藥3h時， 受試樣品的痛閾值降至最低，其中lt3b的中、高劑量組與空白對照組相比，具 有顯著性差異(P〈0.05,P〈0.001);由此可初步認為lt3b的中、高劑量組具有一 定的鎮痛作用。(見圖7)
序列表
〈110〉中山大學
〈120〉中國南海信號芋螺神經毒素基因Lt3. 2及其應用
〈160〉3
<210〉1
〈211〉480
<212〉腿
〈213〉中國南海信號芋螺(Conus Jitterarw)
〈400〉1
g3C3C3CC3C
ggccacagct ctattcacct gtagaacgat atgtctgctt tgctgccagt gcgtttgttg attgcactct
cagccagacg acgtg犯g犯 ttctggtcct atgcgg卿a tggggc卿g agcgcccaac 已tcacatgga gattcag已tt
acaaggaaca gggtgg卿g gtttcccttg caaacaggac gcgatgctgt atccatggcg ttatcgcgcc ttgtgatctt
gtcagcccca aggttcg卿 gcaacgctcc
CtC犯CCC33
atttcgccag ctgtgccggg cacgtctctt ttctgacaat
cagccacgcc tgttgaaaat agctggatgc atgaaaggst cgtgtcacga cggttttatc gtct^g3at
a^gagcasac 60 aggagtagta 120 agatcaacct 180 g犯aatgata 240 ggagtgttat 300 cacaatgaca 360 gacga已catg 420 已cttc犯aaa 480
<210〉2
<211>70
<212>PRT
〈213〉中國南海信號芋螺(Conus乃'tterar〃s)
〈400>2
Met Leu Lys lie Gly Val Val Leu Phe Thr Phe
1 5 10
Phe Leu Ala Thr Leu Gin Leu Asp Ala Asp Gin
20 25 Tyr Ala Glu Asn Lys Gin Asp Leu Asn Pro Gin
35 40 Met lie Met Ser Ala Leu Gly Gin Arg Arg Cys
50 55 Ala Cys His Glu Glu Cys Tyr Cys Cys Gin
65 70
Leu Val Leu Phe 15
Pro Val Glu Arg 30
Glu Arg Met Lys 45
Cys lie Ser Pro 60
〈210〉3
<211〉16
<212>PRT
〈213〉中國南海信號芋螺(Conus "'"erariA ) 〈220〉
<221〉M0D—RES <222〉(10， 11)
〈223〉羧化谷氨酸，羧化谷氨酸 <400>3
Arg Cys Cys lie Ser Pro Ala Cys His ^胞Cys Tyr Cys Cys
15 10 15 Gin
1權利要求
1、一種神經毒素多肽，其包括含有序列表<400>2所示的氨基酸序列的多肽、或者其保守性變異多肽、或其活性衍生物。
2、 按照權利要求1所述的神經毒素多肽，其特征在于該新的神經毒素多肽選自以下組之一(a) 由序列表〈400〉2所示的氨基酸序列組成的多肽；(b) 將(a)中的氨基酸序列經過一個或多個氨基酸殘基的取代、缺失或舔加 而形成的具有相同功能的由(a)衍生的多肽。
3、 一種多核苷酸，該多核苷酸包含有選自以下組之一核苷酸序列(a) 編碼權利要求1的多肽的多核苷酸；(b) 與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。
4、 按權利要求3所述的多核苷酸，其特征在于該核苷酸是編碼序列表<400>2 所示的氨基酸序列的多核苷酸。
5、 權利要求2的所述的神經毒素多肽的成熟肽片段，其氨基酸序列如序列表 400<3>所示。
6、 權利要求1、 2或5所述多肽作為神經生物學工具藥物和鎮痛藥物的應用。
7、 權利要求5所述的神經毒素多肽的成熟肽片段RCCISPACH11CYCCQ，其 中為羧化谷氨酸，用于制備神經生物學研究的工具藥和鎮痛藥物的應 用。
8、 權利要求1、 2或5所述多肽作為增加鈉離子通道開放電流的試劑的應用。
9、 權利要求l、 2或5所述多肽作為離子通道類型的檢測的探針的應用。
全文摘要
本發明涉及一種新的中國南海信號芋螺M-超家族毒素基因Lt3.2及其編碼的多肽序列lt3b，以及該多肽在制備神經生物學研究的工具藥和鎮痛藥物中的應用。本發明通過構建cDNA文庫的方法，從中國南海信號芋螺毒管中克隆得到的新的M-超家族芋螺毒素基因，Lt3.2的cDNA序列如序列表中(400)1序列所示。該基因編碼的多肽(芋螺毒素lt3b)，前體肽氨基酸序列如序列表(400)2序列所示，推測的成熟肽氨基酸序列如序列表(400)3序列所示。本發明的神經毒素lt3b能增加鈉通道開放電流且具有鎮痛作用，可用于制備神經生物學研究的工具藥和鎮痛劑。
文檔編號C07K14/435GK101205251SQ20071003180
公開日2008年6月25日 申請日期2007年11月29日 優先權日2007年11月29日
發明者任政華, 劉君梁, 周茂軍, 孫丹丹, 徐安龍, 曾夏蕓, 磊 王, 皮燦輝 申請人:中山大學