專利名稱：一種淡水魚皮膠原蛋白的制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明一種淡水魚皮膠原蛋白的制備工藝，屬于水產加工技術領域，產品可廣泛應用于功能食品、生物醫藥、化妝品、皮革等領域。
二、技術背景隨著國內水產加工業的發展，水產品加工過程中產生的下腳料如魚頭、魚皮、魚骨等逐年增多，這些下腳料主要被用作低附加值的飼料、肥料等，或者直接拋棄，造成嚴重的環境污染，因此，研究開發利用這些低附加值的下腳料，提高其附加值具有重要意義。
魚皮中含有豐富的膠原蛋白，可用于制成有護膚美容、延緩皮膚老化和保持青春活力功能的化妝品和保健食品，亦可制成皮膚修復材料、止血劑、代血漿、藥物緩釋載體、體外三維培養組織細胞的材料等新型生物材料，廣泛應用于醫療衛生領域。目前膠原蛋白主要來源于哺乳動物，如豬、牛等，這類膠原蛋白提取的前處理比較麻煩，成本也相對較高，特別是近年來口蹄疫、瘋牛病、豬鏈球菌等疾病的爆發，讓人們對豬牛來源的產品產生了很大的擔憂，另外由于一些宗教原因導致豬來源產品的應用也受到了限制。因此，開發利用魚皮膠原蛋白有著廣闊的市場前景。
目前魚皮膠原蛋白提取技術仍存在很多問題，加工設備成本高，脫脂不完全，脫色效果差，最終導致提取的魚皮膠原蛋白產品帶有魚皮黑色素及明顯的魚腥味，這些都大大限制了魚皮膠原蛋白的開發和利用。
發明內容
技術問題本發明涉及一種淡水魚皮膠原蛋白制備工藝，克服了傳統水產膠原蛋白有腥味、純度低、色澤差等技術難題，提供了一種高效、廉價、高品質淡水魚皮膠原蛋白的制備新工藝技術。
技術方案1.一種從淡水魚皮中提取膠原蛋白的制備方法，步驟如下①將冷凍保存的魚皮在室溫下解凍，清除魚皮上的魚鱗及皮下組織，洗凈，瀝干，剪成1×1cm的碎片，用含有0.005％-2％(v/v)雙氧水的0.001-0.2M堿液(m/v，1∶5-1∶50)浸泡3-48h；②食品攪拌機20000-50000rpm攪拌1-5min，用2-4層紗布過濾后，再用有機試劑清洗魚皮2-4次，并浸泡1-6h；③將魚皮清洗后，在含有0.01％-2％(m/v)胃蛋白酶的pH在1.0-5.0的酸液(1∶50-1∶500，m/v)提取12-64h；④將上述體系用30-100μm的膜過濾，再用1-30μm的膜過濾，然后向濾液中加入5M NaCl溶液至最終鹽濃度為0.8-2.0M，離心所得沉淀用0.001-0.1M乙酸溶解，蒸餾水透析，冷凍干燥，即可得到潔白無腥味的膠原蛋白固體。
本發明一種淡水魚皮膠原蛋白制備方法，適用于草魚、青魚、鏈魚、鳙魚、鯉魚及其他淡水魚的魚皮；上述步驟①中，使用的堿溶液包含NaOH、KOH、Ca(OH)2中的任一種；步驟②中，使用的有機試劑包含乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮、己烷中的任一種；步驟③中，使用的酸是醋酸、檸檬酸、乳酸、鹽酸中的任一種。
有益效果本發明采用在堿液中加入雙氧水，可以有效地脫去魚皮上的黑色素，同時又可以有效的去除魚腥味，還可以滅活魚皮所內含的一些酶類；采用食品攪拌機高速攪拌將魚皮打碎，有效地提高了脫脂、脫雜蛋白的速度和效果；采用酶法提取膠原蛋白，切除了膠原蛋白的非螺旋末端，提高了膠原的溶解性，又保持著膠原蛋白的三螺旋結構，使膠原蛋白具有溫和的免疫反應特性。
本發明克服了傳統水產膠原蛋白有腥味、純度低、色澤差等技術難題，本工藝所制備的膠原蛋白，無論在氣味、色澤、組成結構、生物性能等指標上均優于以往產品，而且設備簡單，操作方便，產品可廣泛應用于食品、化妝品、生物醫學等領域。
四、發明的具體實施方式
實例(一)草魚皮膠原蛋白制備工藝取冷凍保存的草魚皮，在室溫下解凍，清除草魚皮上的魚鱗及皮下組織，用自來水清洗干凈，瀝干，用剪刀剪成1×1cm左右的碎片。取10g(以干基計)，加入200mL含有1％(v/v)雙氧水的0.01M氫氧化鈉溶液，在20℃浸泡24h后，用攪拌機(Philips，HR2964)高速(20000rpm)攪拌2min，雙層紗布過濾；用10％(v/v)正丁醇清洗魚皮3次后，再加入200mL 10％(v/v)正丁醇浸泡6h，紗布過濾，自來水清洗；然后加入1.5L含有1g胃蛋白酶、pH 2.5、0.5M醋酸溶液，在4℃提取36h，將上述體系用50μm的膜過濾后，再用5μm的膜過濾，然后加入5M NaCl溶液使最終濃度為0.9M，離心得沉淀用0.005M乙酸中溶解，透析，凍干，即可得到潔白無味的草魚皮膠原蛋白固體7.7g左右。
實例(二)青魚皮膠原蛋白制備工藝取冷凍保存的青魚皮，在室溫下解凍，然后清除青魚皮上的魚鱗及皮下組織，用自來水清洗干凈，瀝干，用剪刀剪成1×1cm左右的碎片。取10g(以干基計)，加入300mL含有0.3％(v/v)雙氧水的0.01mol/L氫氧化鈉溶液，在4℃浸泡36h后，用攪拌機(Philips，HR2964)高速攪拌3min，雙層紗布過濾；用乙醇清洗魚皮3次，再加入200mL乙醇浸泡6h，紗布過濾，自來水清洗；然后加入2L含有0.5g胃蛋白酶、pH 2.5、0.5M醋酸溶液，在20℃提取36h，將上述體系用30μm的膜過濾后，再用3μm的膜過濾，然后加入5M NaCl溶液，使最終鹽濃度為2.0M，離心得沉淀在0.05mol/L乙酸溶解透析，透析凍干，即可得到潔白無味的青魚皮膠原蛋白固體7.2g左右。
實例(三)鯉魚皮膠原蛋白制備工藝取冷凍保存的鯉魚皮，在室溫下解凍，然后清除鯉魚皮上的魚鱗及皮下組織，用自來水清洗干凈，瀝干，用剪刀剪成1×1cm左右的碎片。取10g(以干基計)，加入300mL含有2％(v/v)的0.01mol/L氫氧化鈉溶液，在20℃浸泡24h后，用攪拌機(Philips，HR2964)高速(50000rpm)攪拌4min，雙層紗布過濾；用丙酮清洗魚皮3次，再加入200mL丙酮浸泡6h，紗布過濾，用自來水清洗；然后加入3L含有1g胃蛋白酶、pH 2.5、0.5M醋酸溶液中，在20℃提取48h，將上述體系用30μm的膜過濾后，再用2μm的膜過濾，然后加入5M NaCl溶液至最終濃度為0.9M，離心得沉淀在0.01M乙酸溶解，透析，凍干，即可得到潔白無味鯉魚皮膠原蛋白固體8.0g左右。
上述實施例中，使用的NaOH堿溶液可以用KOH、Ca(OH)2代替；使用的正丁醇、乙醇、丙酮有機試劑可以用丙醇或己烷代替；使用的醋酸溶液可以用檸檬酸、乳酸或鹽酸代替，并可以得到相似的技術效果。
權利要求
1.一種從淡水魚皮中制備膠原蛋白的工藝方法，步驟如下①清除魚皮上的魚鱗及皮下組織，洗凈、瀝干、剪成1×1cm的碎片，用含有0.005％-2％(v/v)雙氧水的0.001-0.2M堿液(1∶5-1∶50，m/v)浸泡3-48h；②食品攪拌機20000-50000rpm攪拌1-5min，用2-4層紗布過濾后，再用有機試劑清洗魚皮2-4次，并浸泡1-6h；③將魚皮清洗后，用含有0.01％-2％(m/v)胃蛋白酶的pH在1.0-5.0的酸液(1∶50-1∶500，m/v)提取12-64h；④將上述體系用30-100μm的膜過濾，再用1-30μm的膜過濾，然后向濾液中加入5M NaCl溶液至最終鹽濃度為0.8-2.0M，離心所得沉淀用0.001-0.1M乙酸溶解，蒸餾水透析，冷凍干燥，即可得到潔白無腥味的膠原蛋白固體。
2.如權利要求1所述的淡水魚皮膠原蛋白制備方法，適用于草魚、青魚、鏈魚、鳙魚、鯉魚及其他淡水魚的魚皮。
3.如權利要求1或2所述的淡水魚皮膠原蛋白制備方法，其特征在于步驟①中，使用的堿溶液包含NaOH、KOH、Ca(OH)2中的任一種；步驟②中，使用的有機試劑包含乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮、己烷中的任一種；步驟③中，使用的酸是醋酸、檸檬酸、乳酸、鹽酸中的任一種。
全文摘要
本發明公開了一種淡水魚皮膠原蛋白的制備方法，屬于水產加工技術領域。將魚皮洗凈、瀝干、剪碎后，首先用含有0.005％－2％(v/v)雙氧水的0.001－0.2M的堿液浸泡3－48h；高速攪拌后，再用有機試劑清洗、浸泡；然后用含有0.01％－2％(m/v)胃蛋白酶的pH在1.0－5.0的酸液提取12－64h，所得體系用30－100μm的膜過濾后，再用1－30μm的膜過濾；最后向濾液中加入5M NaCl溶液至0.8－2.0M，離心所得沉淀用0.001－0.1M乙酸溶解，蒸餾水透析，冷凍干燥，即可得到潔白無腥味的膠原蛋白固體。所制備的膠原蛋白潔白、無腥味，可以廣泛應用于食品、化妝品、生物醫學等領域。
文檔編號C07K1/00GK101092449SQ20071002438
公開日2007年12月26日 申請日期2007年6月18日 優先權日2007年6月18日
發明者胡秋輝, 安辛欣, 楊方美, 辛志宏, 張建忠, 王林, 趙立艷 申請人:南京農業大學