專利名稱：秦艽地上部分提取的龍膽總苷在促進腸胃消化功能藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及龍膽總苷的提取方法，具體涉及從秦艽地上部分提取龍膽總苷的方法以及通過該方法得到的龍膽總苷的用途，屬于醫藥領域。
背景技術：
秦艽為龍膽科多年生草本瀕危植物，以根入藥。具有祛風濕、清濕熱、止痹痛之功效，是臨床常用藥物之一。
龍膽苦苷可從秦艽或龍膽中提取。龍膽總苷(含龍膽苦苷在50％以上)可用于制備促進胃腸消化功能藥物(中國專利97108434.3)，龍膽苦苷可用于制備抑制乙型肝炎病毒藥物(中國專利200410073488.7)，用于制備保肝利膽抗炎藥物(中國專利03114558.2)。
《中華人民共和國藥典》自1977年版至2000年版規定秦艽為龍膽科植物秦艽Gentiana macrophylla Pall.、麻花秦艽G.straminea Maxim.、粗莖秦艽G..crassicaulis Duthie ex Burk.或小秦艽G.dahurica Fisch.的干燥根，通常所述的秦艽為秦艽的干燥根，中國專利97108434.3公開了一種從秦艽中提取龍膽苦苷的方法。
目前，無論用于藥物，還是用于提取其有效成分龍膽苦苷均使用秦艽的干燥根。而我國藥用秦艽長期以來主要靠野生資源供應市場需求，由于長期大量采挖，野生資源越來越稀少，市場資源十分緊缺。如果能夠綜合利用秦艽這種稀缺資源，將更有利于保護秦艽。本發明著眼于秦艽地上部分，從秦艽地上部分提取龍膽苦苷，有利于資源的保護利用。
發明內容
本發明目的之一是提供從秦艽地上部分提取的龍膽苦苷的方法。
本發明目的之二是提供從秦艽地上部分提取的龍膽苦苷在促進腸胃消化功能的藥物中的應用。
本發明所述的秦艽地上部分指除了秦艽的干燥根之外的部分，包括莖和葉，主要為葉。
本發明技術方案為 從秦艽地上部分提取得到龍膽總苷，特別是從秦艽地上部分通過水提得到龍膽總苷，主要是盡量避免葉綠素等油溶性成分進入水相。
具體提取工藝為取秦艽地上部分，先通過水提得到的煎煮液，煎煮液過D101或者HPD-100型大孔樹脂，用水洗脫至洗脫液無色，再用20％-50％乙醇洗脫，濃縮洗脫液至干，得龍膽總苷粗品。將龍膽總苷粗品溶于10-40倍丙酮，過濾、濃縮至干可得提純后龍膽總苷。
上述提取方法得到龍膽總苷可用于促進腸胃消化功能藥物中。
上述提取方法得到龍膽總苷含量測定方法 1、供試品溶液的制備 精密稱取所得成品適量，在容量瓶中配制濃度為2mg/ml的成品溶液，搖勻，靜置。
2、測定方法 2.1色譜柱 HIQ sil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相甲醇-水(30∶70)；檢測波長254nm；流速1ml/min；柱溫室溫；進樣量20μl。
2.2對照品溶液的制備 精密稱取龍膽苦苷對照品10.78mg，置10ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。
2.3線性關系的考察 分別精密吸取對照品溶液1，3，5，7，9，10μl注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定龍膽苦苷的峰面積，得線性回歸方程Y＝(4.92X-0.63)×105，相關系數r＝0.999。結果表明，對照品進樣量在1.078-10.78μg之間具有良好的線性關系。
2.4精密度考察 供試品溶液經微孔濾膜過濾后，精密吸取20 μl注入高效液相色譜儀測定，重復6次，得龍膽苦苷峰面積RSD為0.52％(n＝6)。
2.5加樣回收率試驗 精密吸取1ml供試品溶液6份，每份中加入一定量的對照品溶液，依法測定，結果龍膽苦苷平均回收率為99.12％，RSD為0.96％(n＝6)。
3、重金屬檢查法 3.1樣品溶液的制備精密稱取所得成品4.00g，溶于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得。
3.2標準鉛溶液的配制，按05版藥典附錄IX E重金屬檢查法配制儲備液。取儲備液10ml，置100ml容量瓶中即得(每1ml相當于10μg的鉛)。
3.3檢查方法按05版藥典附錄IXE重金屬檢查法，取標準鉛溶液1ml和樣品溶液25ml，分置甲乙兩支納氏比色管中，甲管加醋酸鹽緩沖液(PH＝3.5)2ml，再加適量稀焦糖溶液稀釋至25ml后使兩管顏色一致。向甲乙兩管中分別加入硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2min，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯示的顏色與甲管比較，不深與甲管顏色。即成品重金屬含量不大于10ppm。
從秦艽地上部分提取得到的龍膽總苷藥效學實驗結果如下 一.試驗材料 1.受試藥物(1).秦艽地上部分中龍膽總苷(以龍膽苦苷計含量58.1％)由陜西省生物醫藥重點實驗室提供。黃色固體，水溶性良好。批號060916(以下稱“龍膽總苷”)。
(2).秦艽地下部分中龍膽總苷(艽龍膠囊)，西安正大制藥有限公司生產，國藥準字Z20030201，產品批號060101(以下稱“艽龍膠囊”)。
(3).西藥必納維(西沙必利膠囊)，黑龍江省地納制藥有限公司生產，國藥準字H20020655，產品批號05100l(以下稱“西沙必利膠囊”)。
2.實驗動物健康ICR品系小白鼠，雌雄兼有，18-22g。由陜西省中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-24號； 健康SD品系大白鼠，雌雄兼有，220-260g。由陜西省中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-25號。
3.實驗條件室溫在20-25℃，相對濕度為38％-41％，人工照明，明暗各12h，供固體飼料和自來水，自由攝食飲水，良好通風。每日打掃室內衛生2次，保持室內沒有明顯的氨臭味。
4.實驗試劑及儀器參見各項試驗內容及要求。
5.實驗結果的統計方法試驗數據以均值±標準差(
±s)表示，組間進行t檢驗，以判斷藥物作用的顯著性。
二.試驗與結果 1.秦艽地上部分中龍膽總苷對正常小鼠排便功能的影響 1.1材料動物健康ICR品系小白鼠，雌雄兼有，18-22g。由陜西省中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-24號。藥品與試劑受試藥物，碳素墨汁。儀器灌胃針頭、注射器、250ml燒杯、3mm網徑的鐵絲網、吸水紙等。
1.2方法與結果 取ICR品系小白鼠96只，雌雄各半，按體重、性別隨機分成6組(1)水對照組(0.8ml/只)、(2)龍膽總苷小劑量(70mg/kg)、(3)龍膽總苷中劑量(140mg/kg)、(4)龍膽總苷大劑量(280mg/kg)組、(5)艽龍膠囊組(200mg/kg)、(6)西沙必利膠囊組(15mg/kg)。每日灌胃給藥一次，連續6天后禁食不禁水12h后再給藥一次，于末次給藥30分鐘后每組小鼠灌胃給予0.3ml碳素墨汁。每只小鼠單獨放入一倒扣的250ml燒杯內，在3mm網徑的鐵絲網下接預先稱量好的吸水紙一張接糞便，觀察記錄每只小鼠首次排黑便時間和7小時排便粒數并稱糞便總重量，數據以均值±標準差表示，與水對照組進行組間t檢驗。結果龍膽總苷各劑量組、艽龍膠囊組、西沙必利膠囊組均能提高小鼠排便粒數與排便重量，縮短首次排便時間的作用，但均未達統計學顯著性。結果詳見表1。
表1秦艽地上部分中龍膽總苷對正常小鼠排便功能的影響(
) 注組間進行t檢驗，與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01 2.秦艽地上部分中龍膽總苷對地芬諾酯引起的便秘模型小鼠排便功能的影響 2.1材料動物健康ICR品系小白鼠，雌雄兼有，18-22g。由陜西省中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-24號。藥品與試劑受試藥物；地芬諾酯片，江蘇武進制藥廠生產 蘇衛藥準字〔1982〕第246401號2.5mg/片；碳素墨汁。儀器灌胃針頭、注射器、250ml燒杯、3mm網徑的鐵絲網、吸水紙等。
2.2方法與結果取ICR品系小白鼠80只，雌雄各半，按體重、性別隨機分成7組(1)水對照組(0.8ml/只)、(2)便秘模型地芬諾酯組(50mg/kg)、(3)龍膽總苷小劑量(70mg/kg)、(4)龍膽總苷中劑量(140mg/kg)、(5)龍膽總苷大劑量(280mg/kg)劑量組、(6)艽龍膠囊組(200mg/kg)、(7)西沙必利膠囊組(15mg/kg)。除(1)、(2)組灌胃蒸餾水0.8ml/只外，余5組按劑量給藥，每日灌胃給藥一次，連續6天后禁食不禁水12h。試驗當天便秘模型組和各劑量組先灌胃給予地芬諾酯50mg/kg，一小時后各劑量組給予受試藥物，便秘模型組和水對照組給予等容積蒸餾水，間隔30分鐘，再以碳素墨汁按每鼠0.3ml灌胃給予，每只動物單獨放入一倒扣的250ml燒杯內，在3mm網徑的鐵絲網下接預先稱量好的吸水紙一張接糞便，觀察記錄每只小鼠首次排黑便時間和9小時排便粒數并稱糞便總重量，數據以均值±標準差表示，與便秘模型組進行組間t檢驗。結果地芬諾酯組使首次排出黑便時間比對照組顯著延長(P＜0.01)，龍膽總苷小、中、大劑量組及艽龍膠囊、西沙必利組能顯著縮短因地芬諾酯引起的排便時間延長作用(P＜0.01)；地芬諾酯使排便粒數及排便重量顯著減少(P＜0.01)，龍膽總苷小、中、大劑量組及艽龍膠囊、西沙必利膠囊組能顯著增加因地芬諾酯引起的排便粒數減少及排便重量減少作用(P＜0.05、P＜0.01)結果詳見表2。
表2秦艽地上部分中龍膽總苷對地芬諾酯引起的便秘模型小鼠排便功能的影響(
) 注組間進行t檢驗，與地芬諾酯模型組比*P＜0.05，**P＜0.01 3.秦艽地上部分中龍膽總苷對小鼠胃排空及腸推進功能的影響 3.1材料 動物健康ICR品系小白鼠，雌雄兼有，18-22g。由陜西省中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-24號。藥品與試劑受試藥物；地芬諾酯片，江蘇武進制藥廠生產 蘇衛藥準字〔1982〕第246401號2.5mg/片；半固體營養黑糊(取10g羧甲基纖維素鈉(CMC)，溶于250ml蒸餾水中，分別加入16g奶粉、8g糖、8g淀粉和2g活性炭末，攪拌均勻。配置成300ml約300g的黑色半固體糊壯物)儀器灌胃針頭、注射器、直尺、手術剪、手術鑷、縫合線、天平。
3.2方法與結果取ICR品系小白鼠112只，雌雄各半，按體重、性別隨機分成7組(1)水對照組(0.8ml/只)、(2)龍膽總苷小劑量(70mg/kg)、(3)龍膽總苷中劑量(140mg/kg)、(4)龍膽總苷大劑量(280mg/kg)劑量組、(5)艽龍膠囊組(200mg/kg)、(6)西沙必利膠囊組(15mg/kg)、(8)地芬諾酯組(50mg/kg)。除(1)、(8)組灌胃蒸餾水0.8ml/只外，余5組按劑量給藥，每日灌胃給藥一次，連續6天后禁食不禁水12h。試驗當天灌胃給藥一次，地芬諾酯組灌胃給予50mg/kg地芬諾酯，40分鐘后各組小鼠灌胃給予半固體營養黑糊0.8ml/只。20分鐘后脫頸椎處死小鼠，開腹，結扎胃黃門和幽門，取胃，用濾紙拭干后稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內容物后拭干，稱胃凈重。以胃全重和胃凈重的差值為胃內殘留物重，計算胃內殘留物占所灌半固體營養黑糊的百分比為胃內殘留率，胃內殘留率與100％的差值為胃排空率。同時迅速取出小腸，輕輕剝離腸系膜后將小腸平鋪與玻璃板上拉成直線，測量幽門至回盲部的小腸全長及幽門至半固體營養黑糊前沿的距離。以幽門至半固體營養黑糊前沿的距離除以幽門至回盲部的小腸全長的百分率為小腸推進率。數據以均值±標準差表示，與水對照組進行組間t檢驗。結果龍膽總苷中、大劑量，艽龍膠囊，西沙必利膠囊能顯著提高半固體營養黑糊胃內排空率(P＜0.05、P＜0.01)；地芬諾酯能顯著減少半固體營養黑糊胃內排空率(P＜0.01)。龍膽總苷小、中、大劑量，艽龍膠囊，西沙必利膠囊能顯著提高半固體營養黑糊小腸推進率(P＜0.05、P＜0.01)；地芬諾酯能顯著減少半固體營養黑糊小腸推進率(P＜0.01)。結果詳見表3 表3秦艽地上部分中龍膽總苷對小鼠胃排空及腸推進功能的影響(
) 注組間進行t檢驗，與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01 4.秦艽地上部分中龍膽總苷對抗阿托品引起的小鼠胃排空延遲作用及腸推進延遲作用的影響 4.1材料動物健康ICR品系小白鼠，雌雄兼有，18-22g。由陜西中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-24號。藥品與試劑受試藥物；硫酸阿托品注射液，江蘇永大制藥有限公司生產國藥準字H32020045，產品批號20051002；半固體營養黑糊(取10g羧甲基纖維素鈉(CMC)，溶于250ml蒸餾水中，分別加入16g奶粉、8g糖、8g淀粉和2g活性炭末，攪拌均勻。配置成300ml約300g的黑色半固體糊壯物)儀器灌胃針頭、注射器、直尺、手術剪、手術鑷、縫合線、天平。
2.2方法與結果取ICR品系小白鼠112只，雌雄各半，按體重、性別隨機分成7組(1)水對照組(0.8ml/只)、(2)硫酸阿托品注射液組(2mg/kg)、(3)龍膽總苷小劑量(70mg/kg)、(4)龍膽總苷中劑量(140mg/kg)、(5)龍膽總苷大劑量(280mg/kg)劑量組、(6)艽龍膠囊組(200mg/kg)、(7)西沙必利膠囊組(15mg/kg)。除(1)、(2)組灌胃蒸餾水0.8ml/只外，余5組按劑量給藥，每日灌胃給藥一次，連續6天后禁食不禁水12h，試驗當天硫酸阿托品注射液組和各劑量組先皮下注射給予硫酸阿托品注射液2mg/kg，20分鐘后各劑量組給予受試藥物，硫酸阿托品注射液組和水對照組給予等容積蒸餾水，40分鐘后各組小鼠灌胃給予半固體營養黑糊0.8ml/只。20分鐘后脫頸椎處死小鼠，開腹，結扎胃賁門和幽門，取胃，用濾紙拭干后稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內容物后拭干，稱胃凈重。以胃全重和胃凈重的差值為胃內殘留物重，計算胃內殘留物占所灌半固體營養黑糊的百分比為胃內殘留率，胃內殘留率與100％的差值為胃排空率。同時迅速取出小腸，輕輕剝離腸系膜后將小腸平鋪于玻璃板上拉成直線，測量幽門至回盲部的小腸全長及幽門至半固體營養黑糊前沿的距離。以幽門至半固體營養黑糊前沿的距離除以幽門至回盲部的小腸全長的百分率為小腸推進率。數據以均值±標準差表示，與硫酸阿托品注射液組進行組間t檢驗。結果硫酸阿托品注射液組與正常水對照組比能顯著降低半固體營養黑糊胃內排空率；龍膽總苷小、中、大劑量，艽龍膠囊，西沙必利膠囊均能顯著對抗因硫酸阿托品注射液引起的胃內半固體營養黑糊胃內排空率的降低作用(P＜0.01)。硫酸阿托品注射液組與正常水對照組比能顯著降低半固體營養黑糊小腸推進率；龍膽總苷小、中、大劑量，艽龍膠囊，西沙必利膠囊均能顯著對抗因硫酸阿托品注射液引起的半固體營養黑糊小腸推進率的降低作用(P＜0.05，P＜0.01)。結果詳見表4。
表4秦艽地上部分中龍膽總苷對抗阿托品引起的小鼠胃排空腸推進延遲作用的影響(
) 注組間進行t檢驗，與硫酸阿托品注射液組比*P＜0.05，**P＜0.01 5.秦艽地上部分中龍膽總苷對大鼠在體胃收縮活動的影響 5.1材料動物健康SD品系大白鼠，雄性，260-280g。由陜西省中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-25號。藥品與試劑受試藥物；10％烏拉坦溶液。儀器灌胃針頭、注射器、三通管、手術剪、手術鑷、縫合線、臺式自動平衡記錄儀，中國上海大華儀表廠生產，型號XWT-264，編號1499。
5.2方法與結果取SD品系大白鼠60只，雄性。試驗大鼠以10％烏拉坦溶液1.0g/kg(1ml/100g)腹腔注射麻醉，仰臥固定后開腹，分離出胃，在胃大彎處取相距1cm距離的兩點縫線，在縫線中點處穿一直線固定好后接臺式自動平衡記錄儀的探頭，測量胃收縮頻率(次/10分)；胃收縮幅度(mm)并計算胃收縮力(收縮頻率*收縮幅度)。手術完畢，待所觀察的指標穩定后，記錄給藥前值。十二指腸給藥(將各組藥物按相應給藥劑量配置成溶液2.5ml/只)或水。(1)水對照組水，2.5ml/只；(2)龍膽總苷小劑量組，55mg/kg；(3)龍膽總苷中劑量組，110mg/kg；(4)龍膽總苷大劑量組220mg/kg；(5)艽龍膠囊組320mg/kg；(6)西沙必利膠囊組15mg/kg。于給藥后10、20、30、40、50分鐘進行上述指標的記錄。將各項觀測指標及參數進行統計學處理，以不同觀察時間的數值進行給藥前后自身比較和與水對照組進行組間比較，以t檢驗判斷其顯著性。結果龍膽總苷小、中、大劑量組于給藥10分鐘后顯著升高大鼠胃收縮頻率(P＜0.05，P＜0.01)，分別持續40、40、50分鐘，艽龍膠囊與西沙必利膠囊組于給藥10分鐘后顯著升高大鼠胃收縮頻率(P＜0.05，P＜0.01)，分別持續30、40分鐘。結果詳見表5。
表5秦艽地上部分中龍膽總苷對大鼠在體胃收縮頻率的影響(
) 注藥前后自身比較*P＜0.05，**P＜0.01；與水對照組比△P＜0.05，△△P＜0.01 龍膽總苷小、中、西沙必利膠囊組于給藥10分鐘后顯著升高大鼠胃收縮幅度(P＜0.05，P＜0.01)，分別持續40、20、40分鐘，艽龍膠囊組于給藥30分鐘后顯著升高大鼠胃收縮幅度(P＜0.05)，持續10分鐘，龍膽總苷大劑量組自身給藥前后比有升高大鼠胃收縮幅度的趨勢但無統計學差異；龍膽總苷大劑量與對照組比藥后10分、40分能顯著升高大鼠胃收縮幅度((P＜0.05)。結果詳見表6。
表6秦艽地上部分中龍膽總苷對大鼠在體胃收縮幅度的影響(
) 注藥前后自身比較*P＜0.05，**P＜0.01；與水對照組比△P＜0.05，△△P＜0.01 龍膽總苷小、中、大劑量組于給藥10分鐘后顯著升高大鼠胃收縮力(P＜0.05，P＜0.01)，分別持續50、40、50分鐘，艽龍膠囊與西沙必利膠囊組于給藥10分鐘后顯著升高大鼠胃收縮力(P＜0.05，P＜0.01)，分別持續50、50分鐘。結果詳見表7。
表7秦艽地上部分中龍膽總苷對大鼠在體胃收縮力的影響(
) 注藥前后自身比較*P＜0.05，**P＜0.01；與水對照組比△P＜0.05，△△P＜0.01 6.秦艽地上部分中龍膽總苷對大鼠胃排空及腸推進功能的影響 6.1材料動物健康SD品系大白鼠，雌雄兼有，220-260g。由陜西省中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-25號。藥品與試劑受試藥物；半固體營養黑糊(取10g羧甲基纖維素鈉(CMC)，溶于250ml蒸餾水中，分別加入16g奶粉、8g糖、8g淀粉和2g活性炭末，攪拌均勻。配置成300ml約300g的黑色半固體糊壯物)儀器灌胃針頭、注射器、直尺、手術剪、手術鑷、縫合線、天平。
6.2方法與結果取SD品系大白鼠63只，雌雄各半，按體重、性別隨機分成6組(1)水對照組(2.5ml/只)、(2)龍膽總苷小劑量(55mg/kg)、(3)龍膽總苷中劑量(110mg/kg)、(4)龍膽總苷大劑量(220mg/kg)劑量組、(5)艽龍膠囊組(320mg/kg)、(6)西沙必利膠囊組(15mg/kg)。除(1)組灌胃蒸餾水2.5ml/只外，余5組按劑量給藥，每日灌胃給藥一次，連續6天后禁食不禁水12h再灌胃給藥一次，40分鐘后各組大鼠灌胃給予半固體營養黑糊2.5ml/只。20分鐘后脫頸椎處死大鼠，開腹，結扎胃賁門和幽門，取胃，用濾紙拭干后稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內容物后拭干，稱胃凈重。以胃全重和胃凈重的差值為胃內殘留物重，計算胃內殘留物占所灌半固體營養黑糊的百分比為胃內殘留率，胃內殘留率與100％的差值為胃排空率。同時迅速取出小腸，輕輕剝離腸系膜后將小腸平鋪于玻璃板上拉成直線，測量幽門至回盲部的小腸全長及幽門至半固體營養黑糊前沿的距離。以幽門至半固體營養黑糊前沿的距離除以幽門至回盲部的小腸全長的百分率為小腸推進率。數據以均值±標準差表示，與水對照組進行組間t檢驗。結果龍膽總苷小、中、大劑量，艽龍膠囊，西沙必利膠囊均能顯著提高半固體營養黑糊胃內排空率(P＜0.05、P＜0.01)。龍膽總苷大劑量，西沙必利膠囊能顯著提高半固體營養黑糊小腸推進率(P＜0.05、P＜0.01)；其余各給藥組均有提高半固體營養黑糊小腸推進率的趨勢，但無統計學差異。結果詳見表8 表8秦艽地上部分中龍膽總苷對大鼠胃排空腸推進功能的影響(
) 注組間進行t檢驗，與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01 7.秦艽地上部分中龍膽總苷對大鼠胃內給藥胃分泌的影響 7.1材料動物健康SD品系大白鼠，雌雄兼有，220-260g。由陜西省中醫藥研究院試驗動物中心提供，醫動證字08-25號。藥品與試劑受試藥物。儀器試劑灌胃針頭、注射器、直尺、手術剪、手術鑷、縫合線、刻度試管、堿式滴定管(0.02mol/LNaOH溶液)、1-14PH試紙、0.05mol/L鹽酸溶液、酚酞指示劑、麥特氏毛細管(將內徑1-2mm粗細均勻的毛細管裁成10cm長，洗凈烤干。用雞蛋一枚，取其蛋清充分打勻后用紗布過濾，將上述毛細管利用虹吸作用灌滿蛋清，然后放在85℃熱水中使蛋白凝固)、恒溫水浴箱、離心機。
7.2方法與結果取SD品系大白鼠48只，雌雄各半，按體重、性別隨機分成6組(1)水對照組(2.5ml/只)、(2)龍膽總苷小劑量(55mg/kg)、(3)龍膽總苷中劑量(110mg/kg)、(4)龍膽總苷大劑量(220mg/kg)劑量組、(5)艽龍膠囊組(320mg/kg)、(6)西沙必利膠囊組(15mg/kg)。除(1)組灌胃蒸餾水2.5ml/只外，其余5組按劑量給藥，每日灌胃給藥一次，連續6天后禁食不禁水12h。試驗當天再灌胃給藥一次，20分鐘后用10％烏拉坦1.0g/kg(1ml/100g)腹腔注射麻醉，開腹，結扎胃幽門，再按照各組劑量灌胃給藥一次(將各組藥物按相應給藥劑量配置成溶液2.5ml/只)，水對照組給予蒸餾水2.5ml/只。5小時后脫頸椎處死大鼠，取胃，將胃內容物倒入試管，用離心機(3000轉/分)離心15分鐘。取上清液計測量5小時胃液量及計算每小時胃液量(胃液量/5)，PH試紙測定胃液PH值，取清晰胃液1ml加酚酞指示劑2滴用0.02mol/LNaOH溶液進行滴定，邊滴定邊搖晃直到紅色不褪為止，即為總酸度滴定終點，記錄所消耗NaOH溶液的總毫升數。計算總酸度(mEq/L)＝滴定消耗NaOH溶液的總毫升數×10。再取澄清胃液1ml放入10ml試管中，加入0.05mol/L鹽酸溶液5ml搖勻，放入蛋白管2根。塞好試管口，在37℃恒溫水浴箱中孵育24小時，取出蛋白管，用直尺測量透明部分的長度(mm)，以4端之值的和求平均值。計算胃蛋白酶活性單位＝平均值的平方×16；胃蛋白酶排出量(活性單位/小時)＝胃蛋白酶活性單位×每小時胃液量。結果龍膽總苷小、大劑量，艽龍膠囊，均能顯著增加大鼠胃液量(P＜0.05)；龍膽總苷小、中、大劑量，艽龍膠囊，西沙必利膠囊均能顯著增加胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量(P＜0.05，P＜0.01)結果詳見表9。
表9秦艽地上部分中龍膽總苷對大鼠胃內給藥胃分泌的影響(
) 注組間進行t檢驗，與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01 結論 秦艽地上部分中龍膽總苷的主要藥效學試驗研究表明秦艽地上部分中龍膽總苷具有一定的促進正常小鼠排便功能的作用；能顯著對抗因地芬諾酯引起的便秘模型小鼠排便功能降低的作用；能顯著促進正常小鼠固體、液體胃排空腸推進的作用；能顯著對抗因阿托品引起的小鼠胃排空延遲作用及腸推進延遲的作用；能顯著提高大鼠在體胃收縮頻率、收縮幅度、收縮力；能顯著促進大鼠固體、液體胃排空腸推進的作用；能顯著增加大鼠胃液分泌量，顯著提高大鼠胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量。秦艽地上部分中龍膽總苷與秦艽地下部分中龍膽總苷(艽龍膠囊)相比較在以上7項試驗中具有相同的效果，見表10。
表10秦艽地上部分中龍膽總苷與秦艽地下部分中龍膽總苷(艽龍膠囊) 在以上7項試驗中作用效果的比較 “-”無統計學差異，促進作用不明顯；兩組數據經統計學分析比較無顯著性差異 “+”具有統計學差異，促進作用顯著明顯；兩組數據經統計學分析比較無顯著性差異因此從上述試驗中可見，秦艽地上部分中龍膽總苷與秦艽地下部分中龍膽總苷(艽龍膠囊)相比在促進胃腸道動力方面，在治療消化不良等胃腸道疾病方面具有相同的良好效果。
具體實施例方式 實施例1 取秦艽地上部分1kg，水15kg，將水煮沸，投入秦艽地上部分，煎煮30min，放冷濾過，濾渣如法再煎煮兩次，其中第二次煎液做為下次煎煮的水液套用，第一、二兩次煎煮的濾液合并，濃縮至原體積的一半，過D101或者HPD-100型大孔樹脂，先用4升水洗脫至洗脫液無色，再用30％乙醇洗脫，用薄層色譜法檢查(其中薄層板為硅膠G-CMC，展開劑為乙酸乙酯-甲醇-水比例為20∶2∶1，對照品為龍膽苦苷純品，碘蒸氣顯色)點樣10μl，直至洗脫液不能檢出含有龍膽苦苷，減壓濃縮洗脫液至干，得粗品。將粗品溶于25倍工業丙酮，攪勻，靜置7小時，過濾，取濾液濃縮至干即得成品。
權利要求
1.龍膽總苷的提取方法，其特征在于從秦艽地上部分提取得到龍膽總苷。
2.根據權利要求1所述的龍膽總苷的提取方法，其特征在于從秦艽地上部分通過水提得到龍膽總苷。
3.根據權利要求2所述的龍膽總苷的提取方法，其特征在于取秦艽地上部分，先通過水提得到的煎煮液，煎煮液過D101或者HPD-100型大孔樹脂，用水洗脫至洗脫液無色，再用20％-50％乙醇洗脫，濃縮洗脫液至干，得龍膽總苷粗品。
4.根據權利要求3所述的龍膽總苷的提取方法，其特征在于將龍膽總苷粗品溶于10-40倍丙酮，過濾、濃縮至干可得提純后龍膽總苷。
5.權利要求1-4任意之一所述的提取方法得到的龍膽總苷在促進腸胃消化功能藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了從秦艽地上部分提取龍膽總苷的方法以及通過該方法得到的龍膽總苷在促進腸胃消化功能藥物中的應用。龍膽總苷的提取方法是從秦艽地上部分提取，所述的秦艽地上部分指除了秦艽的干燥根之外的部分，包括莖和葉，主要為葉，具體提取工藝為取秦艽地上部分，先通過水提得到的煎煮液，煎煮液過D101或者HPD－100型大孔樹脂，用水洗脫至洗脫液無色，再用20％－50％乙醇洗脫，減壓濃縮洗脫液至干，得龍膽總苷粗品。提取得到的龍膽總苷藥效學實驗結果表明，秦艽地上部分中龍膽總苷與秦艽地下部分中龍膽總苷相比在促進胃腸道動力方面，在治療消化不良等胃腸道疾病方面具有相同的良好效果。
文檔編號C07H1/08GK101019924SQ20071001731
公開日2007年8月22日 申請日期2007年1月29日 優先權日2007年1月29日
發明者孫文基, 謝人明, 皇甫澤坤, 姚灼, 侯杰文 申請人:西北大學