專利名稱：：在昆蟲細胞中制備的重組e-選擇蛋白的制作方法在昆蟲細胞中制備的重組E-選擇蛋白相關申請本申請要求2005年3月10提交的美國臨時申請60/660,258的優先權。上述申請的全文并入本文參考。
背景技術：
：E-選擇蛋白是一種細胞表面糖蛋白細胞粘附分子，其是細胞因子可誘導的并且只在內皮細胞上發現。E-選擇蛋白介導多種白細胞與激活的內皮的粘附，所述白細胞包括中性粒細胞、單核細胞、嗜酸性細胞、天然殺傷細胞(NK)和T細胞亞類。E-選擇蛋白在人內皮細胞上的表達是由應答炎癥相關細胞因子IL-1和TNFa以及應答脂多糖(LPS)通過轉錄正調節而被誘導的。常規的抗炎干預包括耗盡白細胞的循環庫(circulatorypool)、抑制白細胞功能、和使用免疫抑制藥物如環孢菌素A和FK506。然而，大多數可利用的免疫抑制劑具有全身性副作用，限制了其長期應用。已經顯示出自身抗原的粘膜給藥在中風和動脈硬化模型中以及在一些自身免疫性疾病模型如糖尿病、關節炎和實驗變態反應性腦脊髓炎模型中可抑制炎癥和疾病活性。通過鼻/口腔多次給予低劑量的E-選擇蛋白誘導對E-選擇蛋白的粘膜耐受性。粘膜耐受性是一個公認的模型，由此通過鼻部滴注或鼻飼抗原而誘導對該特異抗原的免疫學耐受性。經鼻部給予的抗原遭遇到鼻部相關的淋巴組織，其已經進化為保護宿主免于入侵的病原體侵犯并獲得了防止宿主與吸入的非病原性蛋白質反應的固有性質。在重復給予低劑量抗原后產生主動耐受性(activetolerance),伴有調節性T細胞產生。E選擇蛋白表達不是組成型的，基本上限于應答炎癥刺激物如IL-I、TNF-a或LPS而變得活化的內皮。E-選擇蛋白可以在體內局部炎癥部位長期表達，由此E-選擇蛋白作為合適的耐受分子指導已經耐受E-選擇蛋白的調節性T細胞到達內皮激活的局部部位。這些已經用低劑量方案耐受的調節性T細胞在用抗原再刺激時分泌抑制TH1免疫應答的細胞因子如IL-10和轉化生長因子(TGF)bl。盡管這些T細胞的激活特異于耐受抗原(在這種情況中為E-選擇蛋白)，但是應答激活而分泌的免疫調節性細胞因子具有非特異性作用。因此，無論所述耐受抗原存在在哪里，局部免疫抑制均將發生。通過使用E-選擇蛋白作為耐受劑，可以將免疫抑制靶向于激活的血管節段(vesselsegment)。發明概述本發明的特征包括重組的哺乳動物E-選擇蛋白肽，編碼這些肽的核酸，具有這些核酸的載體和細胞，及生產所述肽的方法。本發明進一步的特征包括使用重組的哺乳動物E-選擇蛋白肽誘導對E-選擇蛋白的粘膜耐受性而治療炎癥疾病的方法。本發明提供了一系列哺乳動物E-選擇蛋白肽。一種E-選擇蛋白肽基本上由野生型人E-選擇蛋白(SEQIDNO:l)的第20—303位殘基組成。這種肽可具有附著于其的一或多個C末端標記，包括羧基末端二肽RS。另外，本發明包括附著有N末端分泌信號肽的這種肽。盡管優選人重組肽，但也可以使用其它哺乳動物肽，優選是與SEQIDNO:1具有至少60%相同性的由200—400個氨基酸組成的肽。本發明也涵蓋哺乳動物E-選擇蛋白肽的混合物和組合。本發明的肽的C末端標記包括純化標記和穩定化標記如c-myc標記和組氨酸標記。N末端分泌信號肽包括哺乳動物和昆蟲細胞衍生的肽。N末端分泌性信號肽包括AcMNPVgp64env分泌序列MGWSWIFLFLLSGTASVHS(SEQIDNO:3)，信號肽序列MGWSWIFLFLLSGTAS(SEQIDNO:4)，以及野生型人信號序列肽MIASQFLSALTLVLLIKESGA(SEQIDNO:2)。本發明的肽可以在多種細胞系中生產，包括昆蟲細胞、哺乳動物細胞、細菌細胞和酵母。本發明的特征還在于編碼一系列哺乳動物E-選擇蛋白肽的核酸分子。所述核酸分子編碼基本上由野生型人E-選擇蛋白(SEQIDNO:l)的第20—303位殘基組成的E-選擇蛋白肽。編碼這種E-選擇蛋白肽的核酸分子可具有附著于其的一或多個C末端標記，包括羧基末端二肽RS。另外，本發明包括編碼附著有N末端分泌性信號肽的這種基本E-選擇蛋白肽的核酸分子。盡管優選編碼優選地具有200—400個氨基酸的人重組肽的核酸分子，但是也可以使用編碼與SEQIDNO:1具有至少60%相同性的其它哺乳動物肽的核酸分子。本發明也涵蓋哺乳動物E-選擇蛋白肽的混合物和組合。本發明的特征還在于編碼純化標記和穩定化標記如c-myc標記和組氨酸標記的核酸分子。所述核酸分子可以編碼N末端分泌性信號肽，包括哺乳動物和昆蟲細胞衍生的肽。所述核酸分子可編碼N末端分泌性信號肽，包括AcMNPVgp64env分泌序列MGWSWIFLFLLSGTASVHS(SEQIDNO:3)，信號肽序列MGWSWIFLFLLSGTAS(SEQIDNO:4)，以及野生型人信號序列肽MIASQFLSALTLVLLIKESGA(SEQIDNO:2)。所述核酸分子可用于在多種細胞系中生產本發明的肽，包括昆蟲細胞、哺乳動物細胞、細菌細胞和酵母。本發明的特征還在于具有編碼E-選擇蛋白肽的核苷酸序列的桿狀病毒，具有編碼E-選擇蛋白肽的核苷酸序列的載體，或者包括編碼與編碼E-選擇蛋白肽的核酸連接的桿狀病毒信號肽的DNA節段的重組桿狀病毒轉移載體。所述DNA序列所處位置使得編碼的E-選擇蛋白肽與編碼的信號肽框內翻譯。這種重組桿狀病毒轉移載體優選與桿狀病毒啟動子可操縱地連接以在宿主細胞中表達編碼E-選擇蛋白肽的核酸。所述宿主細胞可包括昆蟲細胞、細菌細胞和哺乳動物細胞。優選地，所述重組桿狀病毒轉移載體包括用于將本發明的E-選擇蛋白肽分泌進所述昆蟲宿主細胞的培養基中的序列。本發明的特征還在于具有一或多種E-選擇蛋白肽或者核苷酸和載體(優選藥物可接受的載體)的組合物。包括E-選擇蛋白肽或者編碼E-選擇蛋白肽的核苷酸的分離的細胞和細胞組合物也是本發明的一部分。可用的細胞包括哺乳動物細胞、細菌細胞和昆蟲細胞，優選昆蟲細胞。本發明進一步特征在于一種生產本發明的E-選擇蛋白肽的方法。這種方法包括從構建一種包括編碼與編碼E-選擇蛋白肽的核酸連接的桿狀病毒信號肽的DNA節段的重組轉移載體開始，使得所述信號序列和編碼E-選擇蛋白肽的核酸框內翻譯。所述編碼桿狀病毒信號肽的DNA節段與桿狀病毒啟動子可操縱地連接，以在昆蟲細胞中表達和分泌E-選擇蛋白肽。將第一種昆蟲細胞用所述重組轉移載體和桿狀病毒DNA共轉染以產生重組桿狀病毒。收獲所述重組桿狀病毒。將第二種昆蟲細胞用所述收獲的重組桿狀病毒感染。將感染的昆蟲細胞在培養基中培養以表達和分泌E-選擇蛋白肽。收集所述培養基并進行純化以收集所述E-選擇蛋白肽。本發明還包括一種通過誘導對可溶的E-選擇蛋白肽的粘膜耐受性而治療個體中炎癥介導的疾病或病變的方法。這可以通過經鼻或口腔途徑多次給予個體低劑量的E-選擇蛋白而實現。附圖簡述本發明的目的和特征參考以下的詳細描述和附圖可得以更好地理解。圖1(SEQIDNO:8)是推測的重組人E-選擇蛋白肽的氨基酸序列和蛋白質結構功能aldesignations。圖2示出重組E-選擇蛋白肽與野生型人E-選擇蛋白的序列對比。發明詳述本發明提供了重組的E-選擇蛋白肽，編碼所述E-選擇蛋白肽的DNA，及生產和使用所述肽的方法。全文應用如下定義。定義除非特別指出，則實施本發明應用本領域技術人員已知的分子生物學、微生物學和重組DNA技術的常規技術。這種技術在文獻中充分解釋。見例如Sambrook，Fritsch&Maniatis，1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,SecondEdition;OligonucleotideSynthesis(MJ.Gait,ed"1984);NucleicAcidHybridization(B.D.Harnes&SJ.Higgins,eds.，1984);APracticalGuidetoMolecularCloning(B.Perbal，1984);及MethodsinEnzymology(AcademicPress,Inc.);ShortProtocolsInMolecularBiology,(Ausubeletal.,ed.，1995)所述。本文提及的所有專利、專利申請和出版物在此以其全文并入作參考。如本文所用，肽的"N末端"區域是指由位于基因的5'末端內或在5'末端的(雙鏈或單鏈)多核苷酸序列編碼的肽序列，包括但非限于基因的5'蛋白質編碼區。如本文所用，"氨基末端"區域是指從所述肽的第一個氨基酸開始直至所述肽的前300個氨基酸或者1/3的肽的氨基末端。肽的"氨基末端"區域長度不短于3個氨基酸及不長于350個氨基酸。肽的"氨基末端"區域的其它可能的長度包括但非限于5、10、20、25、50、100和200個氨基酸。如本文所用，肽的"羧基末端"或"C末端"是指由位于基因的3'末端內或位于3'末端的(雙鏈或單鏈)多核苷酸序列編碼的多肽序列，包括但非限于基因的3'蛋白質編碼區。如本文所用，"羧基末端"區域是指從所述肽的最后一個氨基酸開始直至300個氨基酸或1/3的肽的羧基末端。所述"3'末端"不包括polyA尾部(如果其存在的話)。多肽的"羧基末端"區域長度不短于3個氨基酸及不長于350個氨基酸。肽的"羧基末端"區域的其它可能長度包括但非限于5、10、20、25、50、100和200個氨基酸。與第二種E-選擇蛋白肽具有相似氨基酸序列的E-選擇蛋白肽是滿足如下條件的至少一種的E-選擇蛋白肽(a)具有與第二種E-選擇蛋白肽的氨基酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或者至少99%相同的氨基酸序列的E-選擇蛋白肽；(b)由在嚴格條件下與編碼至少25、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、至少100、至少125、或者至少150個連續氨基酸殘基的第二種蛋白質物質的核苷酸序列雜交的核苷酸序列編碼的E-選擇蛋白肽；(c)與編碼第二種E-選擇蛋白肽的核苷酸序列至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或者99%相同的核苷酸序列編碼的E-選擇蛋白肽。與第二種E-選擇蛋白肽具有相似結構的第一種E-選擇蛋白肽是指與第二種E-選擇蛋白肽具有相似的二級、三級或四級結構的E-選擇蛋白肽。E-選擇蛋白肽的結構可以通過本領域技術人員己知的方法確定，包括但非限于肽測序、X-射線晶體學、核磁共振、圓二色性和晶體電子顯微鏡方法。為了確定兩個氨基酸序列或者兩個核酸序列的相同性百分比，將序列進行最佳對比(例如可以在第一個氨基酸或核酸序列中導入缺口以與第二個氨基酸或核酸序列進行最佳對比)。然后對比在相應氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸殘基或核苷酸。當第一個序列中的一個位置由與第二個序列相應位置的相同氨基酸殘基或核苷酸占據時，則所述分子在這個位置是相同的。兩個序列之間的相同性百分比是所述序列共有的相同位置數目的函數(即相同性％=相同的重疊位置數目/位置總數X100%)。所述兩個序列可以是相同長度。兩個序列之間的相同性百分比的確定也可以使用數學算法完成。優選的非限制性的用于對比兩個序列的數學算法的例子是KarlinandAltschul,1990,Proc.Natl.Acad,Sci.U.S.A.87:2264-2268所述，由KarlinandAltschul，1993,Proc.Natl.Acad,Sci.U.S.A.90:5873-5877修改的算法。這種算法摻入Altschuletal.，1990，J.Mol.Biol.215:403的NBLAST和XBLAST程序中。BLAST核苷酸搜索可以用NBLAST核苷酸程序參數進行，例如score-100,wordlength二12，以獲得與本發明的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白質搜索可以用XBLAST程序參數進行，例如score-50，wordlength=3，以獲得與本發明的蛋白質分子同源的氨基酸序列。為了獲得有缺口的序列排列以進行對比，利用如Altschuletal.，1997,NucleicAcidsRes.25:3389-3402所述的GappedBLAST。或者，可以使用PSI-BLAST進行反復搜索，以檢測兩個分子之間的親疏關系(Id.)。當利用BLAST、GappedBLAST和PSI-Blast程序時，可以使用各個程序的默認參數(例如XBLAST和NBLAST的參數)(見例如NCBI網站)。另一優選的非限制性的用于序列對比的數學算法的例子是MyersandMiller,1988，CABIOS4:11-17所述算法。這種算法摻入ALIGN程序(版本2.0)，其是GCG序列對比軟件包的一部分。當利用ALIGN程序對比氨基酸序列時，可以使用PAM120加權殘基表(weightresiduetable),缺口長度罰值12，和缺口罰值4。兩個序列之間的相同性百分比可以使用與上述相似的技術允許或不允許缺口的存在而確定。在計算相同性百分比中，典型地僅計算精確匹配。如本文所用，關于E-選擇蛋白肽類似物的術語"類似物"是指另一種有機或無機分子，其具有與E-選擇蛋白肽相似或相同的功能并且在結構上與E-選擇蛋白肽相似。術語"類似物"包括其核心結構與E-選擇蛋白肽相同或者非常相似、但具有經化學或物理修飾的分子。術語"類似物"包括可以與其它原子或分子連接的E-選擇蛋白肽的共聚物。"生物學活性類似物"與"類似物"可互換應用，涵蓋了基本呈現相同的E-選擇蛋白肽激動劑或拮抗劑效應的有機或無機分子。如本文所用，E-選擇蛋白肽的"核苷酸類似物"是指其中戊糖和/或一或多個磷酸酯由其各自的類似物置換。磷酸酯類似物例如包括但非限于烷基膦酸酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、磷酸三酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphorosdenoates)、二硒代磷酸酉旨(phosphorodiselenoates)、phosphoroanilothioates、phospho腦nilidates、氨基膦酸鹽、硼磷酸酉旨(bo腦ophosphates)等包括任何相關的反離子(如果存在的話)。"核苷酸類似物"的定義中還包括可以被聚合為其中DNA/RNA磷酸酯和/或糖磷酸酯主鏈由不同類型的鍵置換的多核苷酸類似物的核堿基單體。"核苷酸類似物"進一步包括其中核堿基部分是非常規的、即不同于G、A、T、U或C之一的核苷酸。通常非常規的核堿基具有與相鄰的反向多核苷酸鏈上存在的至少一個核堿基部分形成氫鍵的能力或者提供非相互作用非干擾的堿基。如本文所用，術語"有效量"是指E-選擇蛋白肽或核酸足以降低或改善炎癥或其一或多個癥狀的進展、嚴重程度和/或持續時間、阻止炎癥或其一或多個癥狀的發生、阻止炎癥或其一或多個癥狀的進展、或者增強或改善另一治療方法的預防或治療作用的量。如本文所用，術語"有效量"是指E-選擇蛋白肽通過經鼻給予而足以誘導對E-選擇蛋白的耐受性的量。如本文所用，術語E-選擇蛋白蛋白質的"片段"是指包含哺乳動物E-選擇蛋白氨基酸序列的至少25、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200或者至少250個連續氨基酸殘基的氨基酸序列的肽或多肽。可用于本發明的蛋白質或多肽的片段保留哺乳動物E-選擇蛋白的至少一種功能。蛋白質或多肽的片段可保留哺乳動物E-選擇蛋白的兩種、三種、四種或更多種功能。如本文所用，術語"組合"當用于描述治療處理時是指使用一種以上的治療方法(例如一種以上的預防劑和/或治療劑)。術語"組合"的應用不限制其中給予對象的治療(例如預防和/或治療劑)的順序。第一種治療(例如第一種預防或治療劑)可以在給予第二種治療(例如第二種預防或治療劑)之前(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或2周之前)、同時或之后(例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、l小時、2小曰寸、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小曰寸、96小時、l周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)給予對象。如本文所用，"分離的"或"純化的"當用于描述肽或核酸時是指天然發生的序列已經從其正常細胞(例如染色體)環境中移出，或者在非自然環境中合成(例如人工合成)。因此，"分離的"或"純化的"序列可以在無細胞溶液中或者被置于不同的細胞環境中。術語"純化的"不意味著所述序列只是存在的核苷酸或肽，而是基本沒有(大約卯一95%純)與其自然相關的非核苷酸或非肽材料，因此不同于分離的染色體。如本文所用，關于蛋白質物質(proteinaceousagent)(例如肽、多肽、蛋白質或抗體)所用術語"分離的"和"純化的"是指基本上沒有細胞材料及在一些實施方案中基本上沒有源于其從中衍生的細胞或組織的異源蛋白質物質(即污染蛋白質)的蛋白質物質，或者當是化學合成時基本上沒有化學前體或其它化合物。術語"基本上沒有細胞材料"包括蛋白質物質的制備物，其中所述蛋白質物質從其所分離自或重組產生自的細胞的細胞成分中分離。因此，基本上沒有細胞材料的蛋白質物質包括具有少于大約30。％、20%、10%或者5%(干重)異源蛋白質物質(例如蛋白質、多肽、肽或者抗體；也稱作污染蛋白質)的蛋白質物質的制備物。當所述蛋白質物質是重組產生的，其也優選基本上沒有培養基，即培養基代表少于大約20%、10%或5%體積的蛋白質制備物。當所述蛋白質物質是通過化學合成產生的，其優選基本上沒有化學前體或其它化合物，即其從參與所述蛋白質物質的合成的化學前體或其它化合物中分離。因此，這種蛋白質物質的制備物具有少于大約30%、20%、10%、5%(干重)的除了感興趣的蛋白質物質之外的化學前體或化合物。優選地，所述蛋白質物質是分離的。如本文所用，術語"核酸"與"多核苷酸"可互換使用，通常是指任何多聚核糖核苷酸或者多聚脫氧核糖核苷酸，其可以是未修飾的RNA或DNA或者修飾的RNA或DNA或者其任何組合。"核酸"包括但非限于單鏈和雙鏈核酸。如本文所用，術語"核酸"也包括上述還有一或多個修飾堿基的DNA或RNA。因此，具有為了穩定性或者其它原因而修飾的主鏈的DNA或RNA是"核酸"。如本文所用，術語"核酸"包含這種經化學、酶或代謝修飾形式的核酸，以及病毒和細胞包括例如簡單細胞和復雜細胞特有的化學形式的DNA和RNA。"核酸"或"核酸序列"也可以包括單鏈或雙鏈RNA或DNA的區域或其任何組合。如本文所用，"核酸"涵蓋了長度為8個核苷酸以上的雙鏈DNA、單鏈DNA和雙鏈或單鏈RNA。術語"多核苷酸"包括任何長度的核苷酸聚合形式，核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸，其包含嘌呤和嘧啶堿基，或者其它天然的、化學或生物化學修飾的、非天然的、或者衍生的核苷酸堿基。所述多核苷酸的主鏈可包含可典型在RNA或DNA中發現的糖和磷酸酯基團，或者修飾或取代的糖或磷酸酯基團。多核苷酸可包含修飾的核苷酸，如甲基化核苷酸和核苷酸類似物。核苷酸的序列可以被非核苷酸成分中斷。如本文所用，"患者"或"個體"是指被給予E-選擇蛋白肽的哺乳動物，優選人。如本文所用，短語"藥物可接受的載體"包括但非限于包含使用本發明的方法鑒別的化合物中可存在的酸性或堿性基團的鹽的水相或非水相組合物。自然堿性的化合物能與多種無機和有機酸形成多種鹽。可用于制備藥物可接受的這種堿性化合物的酸加成鹽的酸是形成無毒的酸加成鹽的那些酸，所述鹽即含有藥物可接受的陰離子的鹽，包括但非限于硫酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、延胡索酸鹽、葡糖酸鹽、glucaronate、糖質酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和撲酸鹽(pamoate)(即U，-亞甲基-二-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。包含一個氨基部分的化合物可以與除了上述酸之外的多種氨基酸形成藥物可接受的鹽。自然條件下是酸性的化合物能與多種藥物可接受的陽離子形成堿性鹽。這種鹽的例子包括堿金屬或者堿土金屬鹽，特別是鈣、鎂、鈉、鋰、鋅、鉀和鐵鹽。如本文所用，"由.，.編碼的多^C序列"是指基因的蛋白質編碼區翻譯之后獲得的氨基酸序列。如本文所用，術語"蛋白質"和"肽"及"多肽"可互換應用，是指通過肽鍵連接在一起的氨基酸鏈。在一個特異的實施方案中，蛋白質由通過肽鍵連接在一起的少于200、少于175、少于150、少于125、少于100、少于50、少于45、少于40、少于35、少于30、少于25、少于20、少于15、少于10或少于5個氨基酸組成。蛋白質由通過肽鍵連接在一起的至少200、至少250、至少300、至少350、至少400、至少450、至少500或更多個氨基酸組成。"蛋白質編碼區"是指編碼多肽的mRNA的部分。本發明部分基于意識到E-選擇蛋白的胞外結構域的某些部分或結構域可具有有益作用。人E-選擇蛋白肽的重組的肽、優選20—303片段及編碼或產生這些肽的DNA和細胞可用于本發明中。設計為誘導耐受性的包含可溶的E-選擇蛋白肽的組合物實施例所述E-選擇蛋白肽是一種于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)溶液中的完全可溶的液態蛋白質溶液。所述藥物衍生自用重組AcMNPV桿狀病毒載體(桿狀病毒科的Autographicacalifomiica多核多角體病毒)感染的Sf-9S昆蟲細胞(鱗翅科的Spodopterafrugzperda)，所述載體編碼人E-選擇蛋白蛋白質的胞外部分，具有在氨基末端與gp64分泌信號融合的凝集素結合的表皮生長因子(EDF)結構域及在羧基末端的c-myc和多組氨酸肽標記(圖1)。編碼重組人E-選擇蛋白蛋白質的克隆的基因是由AcIVfNPV桿狀病毒gp64包膜蛋白分泌信號肽的19個氨基酸、人E-選擇蛋白蛋白質的291個氨基酸(具有第40—120位氨基酸的凝集素結合結構域及第200—275位氨基酸的EGF結構域的第20—310位氨基酸的胞外部分)、c-myc蛋白質的9個氨基酸、中性間隔肽的6個氨基酸、及6個氨基酸的多組氨酸標記(6xHIS)組成的331個氨基酸的多肽。在另一種形式中，c-myc標記被去除，在另一種形式中，c-myc禾nHis標記均被去除(圖2)。衍生自AcMINPV桿狀病毒gp64包膜蛋白的分泌性信號肽促進靶肽的細胞內轉運，加工，及重組人E-選擇蛋白蛋白質的分泌。所述藥物的人E-選擇蛋白胞外多肽部分作為耐受原(tolerogen)效應分子，在中風病理學中刺激炎癥的抑制及其它免疫應答激活。所述c-myc肽是位于c-myc的非轉化結構域的一個單克隆抗體表位，在蛋白質純化期間作為重組人E-選擇蛋白蛋白質分子的相同性標記。所述6xHIS肽結合重金屬如鎳、鈷及具有強結合常數(Kd>10力M)的其它重金屬，其通過固定的金屬親和性層析用于純化重組人E-選擇蛋白蛋白質。編碼E-選擇蛋白肽的病毒原種(virusstock)在體外合成的DNA片段的重組DNA克隆使用編碼人E-選擇蛋白胞外部分(第20_310位氨基酸殘基)的、融合羧基末端c-myc肽和多組氨酸(6xHIS)肽標記的密碼子優化的基因，基于得自GenBankAccessionNo.NM000655的核苷酸序列，以在桿狀病毒表達載體系統(BEVS)中表達。最初將含有人E-選擇蛋白基因的999bpEcoRIDNA片段克隆在亞克隆載體pCR-BluntIl-TOPO(InVitrogen)的多克隆位點，隨后克隆在bacmid轉移載體pFASTBACI(InVitrogen)的多角體基因座內的多角體啟動子的下游。將Sf-9S昆蟲細胞用含有位于AcMNPV基因組內的人E-選擇蛋白基因的重組bacmidDNA轉染。自轉染的細胞分離重組桿狀病毒，并通過噬斑純化方法選擇表達高水平重組人E-選擇蛋白蛋白質的病毒克隆。主病毒原種(mastervirusstock)(9.6L)是通過以MOI為0.1pfu/ml用擴增的噬斑純化的重組桿狀病毒分離株(R612)感染Sf-9S昆蟲細胞(第60代；WCB#38)而建立的，所述病毒分離株表達高水平的重組人E-選擇蛋白蛋白質并提供高效價的病毒。針對基因完整性及重組蛋白質產生情況鑒定所述主病毒原種。對主病毒原種樣品進行鑒定，所述鑒定包括微生物無菌分析、支原體檢測分析、螺原體檢測分析、LAL內毒素chrornogenic分析、體夕卜夕卜來物觀ij試(invitroadventitiousagenttesting)、及體內外來物測試(AnMed/Taconic)。外來物測試能檢測可感染昆蟲細胞的或者可以是載體病毒的RNA病毒的存在。與c-myc和多組氨酸肽標記融合的重組人E-選擇蛋白基因序列的相同性通過對分離自所述主病毒原種及編碼人E-選擇蛋白基因的重組桿狀病毒的桿狀病毒基因組DNA的插入和側翼核苷酸序列的兩個DNA鏈進行核苷酸序列確定及分析而表明。核苷酸序列分析表明來自所述主病毒原種的基因組DNA與在體外合成的并用于克隆基因中的桿狀病毒轉移載體pFASTBACl中的人E-選擇蛋白基因序列100^匹配。從與人E-選擇蛋白的推定的氨基酸序列100%匹配的基因組DNA樣品的核苷酸序列中推測氨基酸序列。所述主病毒原種通過相同性測試。主病毒原種支持高效價病毒復制的能力通過在感染復數(MOI)為0.1噬斑形成單位(pfia)/細胞的條件下對感染3天的Sf-9S昆蟲細胞的澄清上清進行桿狀病毒噬斑分析而確定。Sf-9S昆蟲細胞中5x107pfti/ml的病毒效價通過桿狀病毒瓊脂糖噬斑分析確定，使用在Sf9S昆蟲細胞中傳代的主病毒原種樣品進行。通過對用所述主病毒原種以3—5pfU/細胞的MOI感染1—3天的Sf-9S昆蟲細胞的細胞裂解產物和上清進行SDS-PAGE和Western印跡分析，針對重組人E-選擇蛋白的產生情況進一步評價主病毒原種。細胞裂解產物和細胞上清含有分子量為50kDa且特異性結合人E-選擇蛋白蛋白質的單克隆抗體(BBA2;R&D)的重組蛋白質。將適于產生病毒原種的主病毒原種用于預定生產重組人E-選擇蛋白蛋白質產物的工作病毒原種(workingvirusstock)的生產中。工作病毒原種(9.6L)通過在O.lpfli/細胞的MOI下用主病毒原種的接種體感染Sf-9S昆蟲細胞(第52代；WCBtf37)建立。將主病毒原種和工作病毒原種短期(<3個月)貯存在避光低溫試驗箱(2—8'C)中避光包裝的PETG瓶中，在低于一7(TC超低溫冰箱中長期貯存。細胞庫重組人E-選擇蛋白蛋白質的表達在Sf-9S昆蟲細胞中得以最佳實現。Sf-9S昆蟲細胞的主細胞庫從一瓶Sf-9S細胞中建立，將其適應無血清培養基(懸浮細胞培養)，及針對從得自ATCC的親代Sf-9細胞的桿狀病毒載體中表達的重組蛋白質的分泌情況進行選擇。Sf-9S主細胞庫用最初衍生自Spodopterafrugiperda卵巢上皮細胞但已經經過幾次有效適應過程以使得重組蛋白質在大規模生物反應器中在無血清培養基中作為懸浮培養物最大化表達的Sf-9細胞系而建立。Sf-9S主細胞庫由586個3.5ml冷凍小瓶的于昆蟲細胞冷凍培養基(7.5%二甲基亞砜、46%Sf-900IISFM、47%條件化培養基)中的第48代Spodopterafrugiperda細胞組成。工作細胞庫通過將來自主細胞庫的一個冷凍小瓶(共3.5x107個細胞)解凍并將細胞接種于(于500ml搖瓶中)新鮮的HyQSFX無血清昆蟲細胞培養基(100ml;lotno.ALF14050)中而建立。使細胞適應環境幾天，以懸浮培養物在28。C和125rpm條件下生長。當細胞密度達到0.6x1(^個細胞/ml時，將培養物以l:20分離比分入更多的搖瓶中，終體積為800ml/2L搖瓶。將該新的培養物相似進行次培養幾次傳代，以保證細胞最佳生長并且不被污染。第49代的Sf-9S細胞培養物達到細胞密度為5.36xl()S個細胞/ml，存活力為94%，通過低速(500xg)離心分離細胞并再懸浮于昆蟲細胞冷凍培養基中，所述培養基包含如下成分46.5份的HyQSFX無血清昆蟲細胞培養基(條件化)46.5份的HyQSFX無血清昆蟲細胞培養基(新鮮的)7.0份的二甲基亞砜(Sigmalotno.68H1092)將細胞(lxl(^個細胞/ml)無菌分散于49個冷凍小瓶(3.5ml/瓶)禾口30個冷凍小瓶(1.0ml/瓶)中，以每分鐘降低rC緩慢冷凍貯存在低于一7(TC的超低溫冰箱中。密碼子優化的重組人E-選擇蛋白的核苷酸序列如下序列是來自主病毒原種桿狀病毒基因組的密碼子優化的重組人E-選擇蛋白基因的核苷酸序列以生產重組的人E-選擇蛋白蛋白質。1ATGGGTTGGTCTTGGATTTTCTTGTTCTTGTTGTCTGGTACTGCTTCTGT51TCACTCTTGGTCTTACAACACTTCTACTGAAGCTATGACTTACGACGAAG101CTTCTGCTTACTGTCAACAAAGATACACTCACTTGGTTGCTATTCAAAAC201CTACTGGATTGGTATTAGAAAGGTTAACAACGTTTGGGTTTGGGTTGGTA25135140145150155160651701751801851951AGACTTGAACGGTACTAGATCTGGT(SEQIDNO:5)細胞擴增含有重組人E-選擇蛋白的細胞的細胞擴增包含于2.0LCorning塑料搖瓶(21個搖瓶，每瓶含有800ml的HyQSFX無血清培養基)中16.8升。將培養瓶在裝備了彈簧承載的瓶夾的平臺搖床溫箱(Fisher)中保溫。將細胞在28土rC和125土25rpm條件下保溫。病毒感染將Sf-9S細胞用新鮮的無血清培養基稀釋為最終細胞密度為2.0xl(^個細胞/ml，以800ml等份分布于21個培養瓶(2L)中。將昆蟲細胞用含有HuE-選擇蛋白肽的桿狀病毒感染，MOI為3pfu/細胞。從病毒原種中回收病毒，分配于ClassIOO生物安全性通風柜中的培養瓶中。將感染的細胞培養物維持在28X:和125rpm。定時檢測感染的細胞培養物的病毒致細胞病變作用(CPE)、細胞密度和細胞存活力。病毒感染進行3天。在感染后3天，病毒CPE達到+3(即包含體形成及膜皺褶)，細胞密度為1.1x1()S個細胞/ml，細胞存活力降低至50%。如下述收獲感染的細胞培養物。收獲將感染的細胞懸浮液從培養瓶中移至生物安全性柜子中的500ml離心瓶中。將感染的細胞懸浮液在SorvalRC-5B離心機中在4"C以2300rpm進行低速離心IO分鐘，以除去感染的細胞。含有胞外重組人E-選擇蛋白的感染的細胞培養物上清通過在SorvalRC-5B離心機中在4°C以7500rpm離心45分鐘進行澄清。將澄清的上清倒入Class100生物安全性通風柜中的20L玻璃小口大玻璃瓶中，在低溫箱中在2—8X:貯存過夜以進行進一步濃縮和滲濾。經超濾進行濃縮和滲濾將含有胞外重組人E-選擇蛋白肽的澄清的細胞培養上清(16.0L)使用A/GTechnologiesFlexStandBenchtopPilot超濾系統濃縮，以獲得可處理的體積以進一步純化。使用這個系統，將澄清的細胞培養上清以230ml/分鐘的流速通過具有Masterfiex蠕動泵的經消毒的硅酮管狀系統從20L玻璃小口大玻璃瓶中移至A/GTechUFP-10-C-9A中空纖維超濾器中，所述超濾器具有10kDa分子量過濾截留值(MWCO)。單獨從過濾物中收集含有重組人E-選擇蛋白肽的存留物(retentate)，通過連續流經螺旋纏繞超濾器(spiralwoundultrafiltrationcartridge)濃縮為0.8L(20倍)。濃縮后，將濃縮的細胞培養上清用10L的Q緩沖液1滲濾90分鐘。將濃縮的滲濾物(0.8L)濾器的兩次漂洗液(每次0.7L)收集在無菌Nalgene瓶中(共3.2L)，在低溫箱(2—8X:)貯存過夜以進行隨后的通過Q陰離子交換層析的蛋白質純化。O瓊脂糖陰離子交換層析重組人E-選擇蛋白肽藥物的下游加工程序中的初始蛋白質捕獲步驟是陰離子交換層析步驟，使用強陰離子交換樹脂、QSepharoseFastFlow進行。預期這個步驟可以從重組人E-選擇蛋白肽中除去內毒素、加工賦形劑和宿主蛋白質污染物。所述Q陰離子交換層析步驟使用確認的由Unicorn軟件控制的PharmaciaAKTAExplorerBiopilotFPLC系統進行。將QSepharoseFastFlow樹脂(400ml)加樣于PharmaciaXX50/30層析柱中。將所述Q柱滅菌并用Q再生緩沖液以10ml/分鐘流速再生，用5個柱體積(2000ml)的WFI水以10ml/分鐘流速漂洗至pH為7.1，用5個柱體積(2000ml)的Q緩沖液1以10ml/分鐘流速平衡。將濃縮的滲濾物(3.2L)以20ml/分鐘流速加樣(13.6mg蛋白質/mlQ樹脂)。將加樣的Q柱用10個柱體積(4000ml)的Q緩沖液1以20ml/分鐘流速洗滌。收集Q柱流出級分(FT;3200ml)和洗滌級分(1600ml)，在4"C貯存以進行加工中(in-process)測試剩余的未結合的重組人E-選擇蛋白肽。與Q柱結合的蛋白質以20ml/分鐘流速用Q緩沖液2洗脫，形成0—1000mM氯化鈉線性梯度。收集UV280吸光度的Q洗脫物的級分(200x10ml)，暫時貯存在4'C低溫箱中。將使用的Q柱用Q再生緩沖液消毒。^^Q洗脫級分以及加樣、流出和洗滌級分的樣品(O.lml)進行加工(in-process)中測試，包括使用人E-選擇蛋白血清的SDS-PAGE和Western印跡分析。含有作為主要組成成分的重組人E-選擇蛋白蛋白質的Q洗脫級分在單峰中(級分80—112)通過SDS-PAGE和Western印跡分析鑒別，將其集合在一起(320ml)。與Q柱不能結合的重組人E-選擇蛋白蛋白質的量不顯著，因此不需要再次處理FT級分。Ni-NTA瓊脂糖親和性層析在重組人E-選擇蛋白蛋白質的羧基末端存在多組氨酸(6xHIS)標記肽使得可以通過固定的金屬親和性層析方法使用基于Nr的樹脂而將這些重金屬結合蛋白質從Q集合的洗脫級分中剩余的其它蛋白質中純化出來。下游加工程序中的Ni-NTA親和性層析步驟用于純化重組人E-選擇蛋白蛋白質并除去剩余的宿主蛋白質污染物和桿狀病毒。Ni-NTA親和性層析步驟使用確認的由Unicorn⑧軟件控制的PharmaciaAKTAExplorerBiopilotFPLC系統進行。將Ni-NTAAgaroseSuperfiow樹脂(38ml)加樣于PharmaciaXK26層析柱中。將Ni-NTA用硫酸鎳六水合物(O.lM)帶電荷，用0.5NNaOH以3ml/分鐘流速消毒，用5個柱體積的WFI水以3ml/分鐘流速漂洗，及用5個柱體積的(190ml)的Ni-NTA緩沖液1以3ml/分鐘流速平衡，至pH為8.5。將Q集合的洗脫級分以3ml/分鐘流速加樣(19.8蛋白質/mlM-NTA樹脂)。將加樣的Ni-NTA柱用3個柱體積(115ml)的Ni-NTA緩沖液1以3ml/分鐘流速洗滌。收集Ni-NTA柱FT(320ml)和洗滌級分(115ml)，在4。C貯存以進行加工中(in-process)測試剩余的未結合的重組人E-選擇蛋白蛋白質。與Ni-NTA柱結合的蛋白質用Ni-NTA緩沖液2以3ml/分鐘的流速洗脫，形成0—300mM的咪唑鈉線性梯度。收集DY280吸光度的Ni-NTA洗脫物級分(43x3ml)，暫時貯存在4t低溫箱中。使用的Ni-NTA柱用EDTA再生緩沖液消毒。將Ni-NTA洗脫級分、以及加樣、流出和洗滌級分的樣品(O.lml)進行加工中(in-process)測試，包括使用人E-選擇蛋白血清的SDS-PAGE和Western印跡分析。含有作為主要組成成分的重組人E-選擇蛋白蛋白質的Ni-NTA洗脫級分在單峰中(級分12—26)通過SDS-PAGE和Western印跡分析鑒別，將其集合在一起(43ml)。與NiNTA柱不能結合的重組人E-選擇蛋白蛋白質的量不明顯，因此不需要再次處理FT級分。將集合的Ni-NTA洗脫柱級分的樣品(2ml)進行加工中(in-process)測試，包括使用人E-選擇蛋白血清的SDS-PAG和Western印跡分析、BCA蛋白質分析、及LAL內毒素分析。另夕卜，對等份的Ni-NTA集合的洗脫級分進行桿狀病毒瓊脂糖噬斑分析，以計算在純化階段存在的桿狀病毒的量。病毒效價為6.42xl()7pfu/ml，共為2.76x109pfu，通過Q和Ni-NTA層析步驟病毒效價降低3loglO。滲濾為了除去來自Ni-NTA集合的洗脫級分的加工賦形劑咪唑，及在合適的緩沖液PBS溶液中配制藥物，將Ni-NTA集合的洗脫級分在低溫箱(2—8。C)中進行滲濾。將集合的Ni-NTA洗脫級分用2x90體積(4L)的PBS溶液在22i:分別滲析15和7小時。最終滲析物體積為41ml。取出滲析物樣品(lml)進行加工中(in-process)測試，包括SDSPAGE分析、Western印跡分析、BCA蛋白質分析、及LAL動力學生色分析。最終過濾為了除去微生物污染，將滲析液(41ml)在生物安全性通風柜(class100)中通過0.22~iMilliporeStericap濾膜無菌過濾到無菌Nalgene瓶中。將使用的膜進行泡點分析以確定膜完整性，所得結果(50psi)超過32psi的完整性膜規格，確信微生物從藥物中清除。過濾物的終體積為36.5ml。將0.2p過濾物在低于一7(TC貯存在超低溫冰箱中。將0.2p過濾物解凍，用PBS溶液稀釋至終體積為95ml，以防止在先前高蛋白質濃度的蛋白質聚集，在生物安全性通風柜(classIOO)中通過第二個0.2p膜無菌過濾。對第二個使用的0.2p膜的泡點測試的結果表明所述膜是完整的。將第一個0.2p過濾物樣品進行BCA蛋白質和LAL加工中(in-process)測試。對第一個0.2p過濾物進行BCA蛋白質分析的結果5.28mg/ml,總收率為192.72mg。對第一個0.2p過濾物進行LAL內毒素分析的結果是1.84EU/ml，總量為67EU。從第二次最終過濾中獲得總體積95ml。為了除去藥物中剩余的桿狀病毒，在藥物產品的配制和過濾步驟中利用PallDV20subO.lp膜濾器。最終總產物(bulkproduct)(藥物)的總內毒素荷載為45.6EU;最終總產物的總蛋白質產量為133mg，通過確認的BCS蛋白質分析確定。遲發型超每夂性分析(Delayedtypehypersentivityassay)在經過鼻內用多種劑量的重組人E-選擇蛋白治療的高血壓大鼠中進行遲發型超敏性測試。進行藥物樣品(l.Oml)的遲發型超敏性分析，以確定與人E-選擇蛋白的耐受和阻止高血壓動物中發生中風的能力相關的體內產物潛力。這項研究中DTH抑制包括測定在誘導粘膜耐受性中作為不同劑量的重組人E-選擇蛋白及安慰劑的函數的由于炎癥導致的動物耳部厚度。將具有原發性高血壓中風傾向(SRR-SP)的大鼠(20只)分為四組，每隔一天經鼻內(20^d/鼻孔)進行接種，給予5種治療措施。l組PBS安慰劑，用40一治療耐受，n=5，2組重組人E-選擇蛋白5Vpg/40^il治療，n=53組重組人E-選擇蛋白W/40W治療，n=54組重組人E-選擇蛋白0.1嗎/40|11治療，n-5在耐受方案結束2周后，經皮下用等份(200pl)的與完全Freimd's佐劑(FCA)在375pg/ml抗原終濃度配制的重組人E-選擇蛋白對動物進行免疫(抗原敏化)。在免疫2周后，使用標準皮膚褶彎腳器測定經處理的動物的耳部厚度。然后，在耳垂注射(100p.l)重組人E-選擇蛋白，抗原濃度為于PBS中50昭/100nl(再次應用抗原或者抗原攻擊)。在攻擊后48和72小時進行重復耳部厚度測定以評定遲發型超敏性。淋巴細胞對E-選擇蛋白的耐受作用、特別是粘膜耐受作用，是一種治療炎癥疾病的有效方法。促炎細胞因子水平升高也與許多疾病和病變相關，包括自身免疫疾病。炎癥相關的疾病包括但非限于中毒性休克綜合征、類風濕性關節炎、骨關節炎、糖尿病和炎癥性腸道疾病、HIV感染相關的癡呆、青光眼、視神經病、視神經炎、視網膜缺血、激光導致的視覺損害、手術或外傷導致的增殖性玻璃體視網膜病變、腦供血不足、缺氧-缺血癥、低血糖癥、軟骨藻酸中毒、缺氧癥、一氧化碳或錳或氰化物中毒、Huntington's病、Alzheimer's病、Parkinson's病、腦膜炎、性硬化癥及其它脫髓鞘病、肌萎縮性脊髓側索硬化、頭部和脊髓損傷、癲癇、驚厥、橄欖體腦橋小腦萎縮、神經性疼痛綜合征、糖尿病祌經病變、HIV-相關的神經病變、MERRF和MELAS綜合征、Leber's病、Wernicke's腦病、Rett綜合征、高胱氨酸尿癥、血脯氨酸過多癥、超高胱氨酸血癥、非酮癥性高甘氨酸血癥、羥基丁酸氨基酸尿癥、亞硫酸氧化酶缺陷癥、聯合系統病、鉛毒性腦病、Tourett's綜合征、肝性腦病、藥癮、耐藥、藥物依賴性、抑郁癥、焦慮和精神分裂癥、外傷性關節炎、Guillain-Barre綜合征、Crohn's病、潰瘍性結腸炎、銀屑病、移植物抗宿主病、系統性紅斑狼瘡、腎小球腎炎、再灌注損傷、敗血癥、骨再吸收病包括骨質疏松癥、慢性阻塞性肺病、充血性心力衰竭、動脈硬化癥、中毒性休克綜合征、哮喘、接觸性皮炎、經皮冠狀動脈腔內血管成型術(PTCA)及胰島素依賴性糖尿病。本領域技術人員已知在不偏離本發明的精神和范圍的前提下對本文所述的本發明可以進行改變、修改及以其它方式執行。下文提供的參考文獻在本文以其全部內容并入本文作參考。本文引用的所有專利、專利申請和出版物在本文均以其全部內容并入作參考。雖然參考其優選的實施方案對本發明已經進行特別揭示和描述，但是本領域技術人員已知在不偏離所附權利要求書涵蓋的本發明范圍的前提下可以對本發明在形式和詳細資料方面進行各種改變。本領域技術人員意識到本領域已知的其它實施方案和構型包含在本發明的精神和范圍內。權利要求1.一種選自如下一組的分離的哺乳動物肽基本上由野生型人E選擇蛋白(SEQIDNO1)的第20-303位殘基組成的肽，附著于一或多個C末端標記的基本上由野生型人E選擇蛋白(SEQIDNO1)的第20-303位殘基組成的肽，附著于羧基末端二肽RS的基本上由野生型人E選擇蛋白(SEQIDNO1)的第20-303位殘基組成的肽，附著于N末端分泌性信號肽的基本上由野生型人E選擇蛋白(SEQIDNO1)的第20一303位殘基組成的肽，及由與SEQIDNO1具有至少60％相同性的200-400個氨基酸組成的肽，及前述肽的混合物或組合。2.權利要求1的肽，其中所述一或多個C末端標記選自純化標記和穩定化標記。3.權利要求2的肽，其中所述純化標記選自cmyc標記和組氨酸標記。4.權利要求1的肽，其中所述N末端分泌性信號肽選自SEQIDNO:3禾BSEQIDNO:4。5.權利要求l的肽，其中所述肽在昆蟲細胞中產生。6.編碼選自如下一組肽的核酸基本上由野生型人E選擇蛋白(SEQIDNO:l)的第20_303位殘基組成的肽，附著于一或多個C末端標記的基本上由野生型人E選擇蛋白(SEQIDNO:l)的第20—303位殘基組成的肽，附著于羧基末端二肽RS的基本上由野生型人E選擇蛋白(SEQIDNO:l)的第20—303位殘基組成的肽，附著于N末端分泌性信號肽的基本上由野生型人E選擇蛋白(SEQIDNO:l)的第20—303位殘基組成的肽，及由與SEQIDNO:1具有至少60%相同性的200—400個氨基酸組成的肽，及前述肽的混合物或組合。7.權利要求6的核酸，其中所述一或多個C末端標記選自純化1i^記和穩定化標記。8.權利要求7的核酸，其中所述純化標記選自cmyc標記和組氨酸標記。9.權利要求6的核酸，其中所述N末端分泌性信號肽選自SEQIDNO:3和SEQIDNO:4。10.權利要求6的核酸，其中所述肽由一或多個選自純化標記和穩定化標記的C末端標記組成，且其中所述N末端標記選自SEQIDNO:3禾卩SEQIDNO:4。11.權利要求10的核酸，其中所述純化標記選自cmyc標記和組氨酸標記。12.—種包含編碼權利要求1的肽的核苷酸序列的桿狀病毒。13.—種包含編碼權利要求1的肽的核苷酸序列的載體。14.一種重組桿狀病毒轉移載體，其包含與編碼權利要求1的肽的核酸連接的編碼桿狀病毒信號肽的DNA節段，所述核酸與編碼所述信號肽的DNA節段框內翻譯。15.權利要求14的重組桿狀病毒轉移載體，其與桿狀病毒啟動子可操縱地連接形成可操縱的連接以在昆蟲宿主細胞中表達所述編碼權利要求1的肽的核酸。16.權利要求15的重組桿狀病毒轉移載體，其包括將權利要求1的肽分泌進入所述昆蟲宿主細胞的培養基中的序列。17.包含權利要求1的肽的分離的細胞。18.包含權利要求10的核酸的分離的細胞。19.權利要求18的分離的細胞，其中所述細胞選自哺乳動物細胞、細菌細胞和昆蟲細胞。20.權利要求19的分離的細胞，其中所述細胞是昆蟲細胞。21.—種生產權利要求l的肽的方法，包括如下步驟a)構建包含與權利要求10的核酸連接的編碼桿狀病毒信號肽的DNA節段的重組轉移載體，所述核酸與編碼所述信號肽的DNA節段框內翻譯并與桿狀病毒啟動子可操縱地連接以在昆蟲細胞中表達權利要求1的肽及分泌所述肽；b)用重組轉移載體和桿狀病毒DNA共轉染第一種昆蟲細胞以產生重組桿狀病毒；c)收獲所述重組桿狀病毒；d)用收獲的重組桿狀病毒感染第二種昆蟲細胞并將感染的昆蟲細胞在培養基中培養以表達和分泌權利要求1的肽；及e)收集所述培養基并純化分泌的權利要求1的肽。22.—種通過誘導粘膜對可溶的E-選擇蛋白肽的耐受性而在需要其的個體中治療炎癥介導的疾病或病變的方法，包括通過經鼻給藥而多次給予所述個體低劑量的E-選擇蛋白，其中所述E-選擇蛋白由權利要求1的肽組成。23.權利要求22的方法，其中所述E-選擇蛋白基本上由權利要求1的肽組成。24.—種組合物，包含權利要求1的肽和載體。25.—種組合物，包含權利要求10的核酸和載體。全文摘要本發明包括重組哺乳動物E-選擇蛋白肽，編碼所述肽的核酸，具有這些核酸的載體和細胞，及生產所述肽的方法。本發明進一步包括使用重組哺乳動物E-選擇蛋白肽誘導粘膜對E-選擇蛋白的耐受性以治療炎癥相關的疾病和病變的方法。文檔編號C07K14/78GK101189263SQ200680015945公開日2008年5月28日申請日期2006年3月8日優先權日2005年3月10日發明者G·史密斯,P·普什科,V·科伊斯申請人:諾瓦瓦克斯公司