專利名稱：：穩定化的液體多肽制劑的制作方法穩定化的液體多肽制劑相關信息本申請要求題為"穩定化的液體多肽制劑"的具有序列號60/648,639的美國臨時專利申請(2005年1月28日提交)的權益。以上所提及申請的全部內容在本文中引用作為參考。本說明書通篇所引用的全部其它專利、專利申請和參考文獻的內容也因此完整地引用作為參考。
背景技術：
：為了使任意肽的藥學益處最大化，有必要獲得穩定的、容易而可重復制造的并且為標準施用途徑設計的成品劑型。具體而言，獲得原料蛋白質例如治療性多肽的穩定的濃縮形式是所需要的，這種穩定的濃縮形式適合用于進一步制造成多肽的成品劑型，其隨后可以通過所需的施用途徑施用。在原料多肽和成品劑型中，多肽的穩定性可以受到如下因素影響，如離子強度、pH、溫度、反復的凍/融循環和剪切力。活性多肽可能因包括變性和聚集(形成可溶的和不可溶的聚集物)在內的物理不穩定性及化學不穩定性的結果而丟失，化學不穩定性包括例如水解、脫跣胺作用和氧化作用，不一而足。對于蛋白質藥物穩定性的一般綜述，見例如，Manning等，PharmaceuticalResearch6:903-918(1989)。此外，需要在制劑中不包括栽體多肽時能維持穩定性。盡管廣泛認識到，這些可能的多肽不穩定性可以發生，然而在多肽已經得到研究前，不可能預測特定蛋白質可能具有的特殊穩定性問題。任何此類不穩定性可能潛在地導致形成如此多肽副產物或衍生物，即其具有降低的活性、增加的毒性和/或增加的免疫原性。實際上，多肽沉淀可能引起凝血、劑型的非均一性和免^LA應。因此，任何多肽藥物制劑的安全和效力直接與制劑的穩定性相關。因而，本領域中一直存在對如此方法的需要，即其用于在濃縮過程期間改善蛋白質的穩定性以及用于在缺乏其它載體蛋白質的情況下為濃度高到足夠用于多種施用途徑的蛋白質提供穩定性。發明簡述本發明提供設計旨在提供穩定性并維持所加入的生物活性蛋白質尤其是抗原結合性多肽(例如抗體或其片段)的生物學活性的制劑.本發明還提供多肽制劑，即抵抗不為所需的多肽副產物形成的穩定化的液體多肽制劑。用于治療用途的抗原結合性多肽的完整性尤其重要，因為如果在貯存期間多肽形成副產物，例如聚集物或降解片段，則生物活性可能喪失，因此損害每單位劑量分子的治療活性。此外，迫切需要穩定旨在用于特化的功能、用于在某些生物學適應癥中送遞和使用的治療性多肽，例如治療其中多肽必須穿越血腦屏障(BBB)并結合靶抗原的神經退化性疾病。為此用途必須加以穩定化的示例性抗體包括如此抗體，即其適用于結合疾病靶標，尤其是抗原性疾病把標，例如癌抗原、自身抗原、過敏原和病原體。因此，本發明具有數個優勢，包括但不限于-穩定化的液體多肽制劑，其通過添加抗氧化劑穩定化以防止多肽副產物形成；-適合在多種施用途徑中使用的穩定化的液體多肽制劑；-用于將藥物用途的治療性多肽制備成穩定化的液體多肽制劑的方法；以及-適合用于治療神經退行性疾病的穩定化的結合性多肽制劑。因而，在一個方面，本發明提供穩定化的液體多肽制劑，其設計旨在提供穩定性以及維持加入的多肽的生物學活性。仍在另一個方面，本發明提供包含有治療活性的抗原結合性多肽和抗氧化劑例如甲硫氨酸或其類似物的制劑，其中抗氧化劑處于足以減少在制劑貯存期間多肽的副產物形成的量。在一個實施方案中，制劑中有治療活性的抗原結合性多肽成分是抗體(例如，IgM、IgG"IgG2、IgG2、IgG3、IgG4)(例如，人IgM、IgG"IgG2、IgG2、IgG3、IgG4同種型抗體)、抗體Fv片段、抗體Fab片段、抗體Fab，(2)片段、抗體Fd片段、單鏈抗體(scFv)、單結構域抗體片段(Dab)、包含至少一個抗體互補性決定區域(CDR)的/3-折疊多肽或包含至少一個抗體互補性決定區域(CDR)的非球狀多肽。在特定的實施方案中，將液體多肽制劑穩定化以防止不需要的副產物如高分子量多肽聚集物、低分子量多肽降解產物或其混合物的形成。在相關實施方案中，其中治療性抗原結合性多肽是抗體，典型的高分子量的聚集物例如是抗體:抗體復合體、抗體:抗體片段復M、抗體片段抗體片段復合體或其混合物.通常，高分子量的復合體或副產物具有比抗原結合性多肽的單體更大的分子量，例如以IgG抗體為例，大于約150kD。在另一個相關實施方案中，當治療性多肽是抗體時，典型的低分子量的多肽降解產物例如是由抗體輕鏈、抗體重鏈、抗體輕鏈與抗體重鏈的復合體或其混合物組成的復合體。通常，低分子量的復合體或副產物具有比抗原結合性多肽的單體更小的分子量，例如以IgG抗體為例，小于約150kD。在一個方面，本發明提供穩定化的制劑，其包含有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、甲硫氨酸(在制劑中甲硫氨酸作為抗氧化劑以足夠抑制不想要的副產物形成的量存在)、張力劑(例如，甘露醇)(在制劑中張力劑以足夠使制劑適合用于施用例如靜脈內輸注的量存在)以及氨基酸(例如，組氨酸)或其衍生物(在制劑中氨基酸或其衍生物以足夠維持生理適合的pH的量存在)。在一個方面，本發明提供穩定化的制劑，其包含有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、甲硫氨酸(在制劑中甲多危氨酸作為抗氧化劑以足夠抑制不想要的副產物形成的量存在)、張力劑(例如，甘露醇)(在制劑中張力劑以足夠使制劑適合用于靜脈內輸注的量存在)以及氨基酸(例如，組氨酸)或其衍生物(在制劑中氨基酸或其衍生物以足夠維持生理適合的pH的量存在)。在另一個方面，本發明提供包含有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、甘露醇和組氨酸的制劑。在另一個方面，本發明提供包含有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、甲硫氨酸、甘露醇和組氨酸的穩定化的制劑。在某些實施方案中，有治療活性的抗原結合性多肽是這樣的抗體(或其部分或片段)，其結合選自包括例如癌抗原、自身免疫抗原、過敏原和病原體在內的抗原'在某些實施方案中，有治療活性的抗原結合性多肽是結合性多肽，例如抗A/S抗體(或其部分或片段)。在一些制劑中，至少一種A^結合性多肽是例如特異性地結合至A(3的第1-7、1-5、3-7、3-6、13-28、15-24、16-24、16-21、19-22、33-40、33-42位殘基范圍內表位的抗A卩抗體，或其Fab、Fab，(2)或Fv片段。示例性抗Aj3抗體特異性地結合至A卩的第1-10位殘基范圍內，例如A卩的第l-7、1-5、3-7、或3-6位殘基范圍內的表位。另一些示例性抗抗體特異性地結合至A卩的第13-28位殘基范圍內，例如AP的笫16-21或19-22位瓶基范圍內的表位。另一些示例性抗A/S抗體特異性地結合至AP的g末端表位，例如AP的33-40或33-42。在一個實施方案中，Aj3抗體是人源化抗體，例如人源化的3D6抗體、人源化的10D5抗體、人源化的12B4抗體、人源化的15C11抗體或人源化的12A11抗體。有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)可以以約0.1mg/ml至約200mg/ml(例如，在約20mg/ml或30mg/ml)存在。抗體的同種型可以是IgM、IgGl、IgG2、IgG3、IgG4或任何其它可藥用的同種型。在優選的制劑中，同種型是人IgGl或人IgG4。在一些液體制劑中，抗A/3抗體的濃度是約0.1mg/ml至約60mg/ml、約40mg/ml至約60mg/ml、約50mg/ml、約30mg/ml、約17mg/ml至約23mg/ml、約20mg/ml、約17mg/ml、約10mg/ml、約5mg/ml、約2mg/ml或約1mg/ml、優選地是約17mg/ml至約23mg/ml。在某些實施方案中，甘露醇以足夠維持制劑等張性的量存在。甘露醇可以以約2。/。w/v至約6。/。w/v(例如，約4Q/ow/v)存在。在前述方面的多種實施方案中，組氨酸可以以足夠維持生理適合的pH的量存在。組氨酸(例如，L-組氨酸)可以以約0.1mM至約25mM(例如，約10mM)存在。在其它實施方案中，制劑還可以包含抗氧化劑，如甲減裒酸。甲M酸可以以約0.1mM至約25mM(例如，約10mM)存在。在另一個實施方案中，制劑可以包含穩定劑如聚山梨酯80。聚山梨酯80可以以約0.001%w/v至約0.01%w/v(例如，約0.005。/ow/v)存在。在某些實施方案中，制劑具有約5至約7(例如，約6)的pH。在某些實施方案中，制劑可以對于冷凍是穩定的。此外，制劑可以適合于腸胃外、靜脈內、肌內、皮下、顱內或^外施用。在多種實施方案中，制劑可以適合用于定向送遞至受試者的腦或脊液。在其它實施方案中，制劑可以基本上不含防腐劑。制劑可以穩定至少約12個月、至少約18個月、至少約24個月或至少約30個月。在多種實施方案中，制劑在約-80。C至約40。C、在約0°C至約25°C或在約2°C至約8°C下穩定。某些制劑穩定至少約12個月、至少約18個月、至少約24個月或至少約30個月。某些制劑在約-80。C至約40°C、在約0°C至約25°C、在約0°C至約10°C、優選地在約-80。C至約-50。C或在約2°C至約8°C下穩定。某些制劑在高于冷凍至約10°C的溫度下穩定至少約12個月并具有約5.5至約6.5至的pH。在特定的方面，本發明提供適合用于靜脈內施用的制劑，其包含約20mg/ml的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mML-組氨酸、約10mM甲硫氨酸、約4%甘露醇并具有約6的pH。在另一個方面，本發明提供適合用于靜脈內施用的制劑，其包含約20mg/ml的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mML-組氨酸、約10mM甲硫氨酸、約4%甘露醇、約0.01%聚山梨酯80并具有約6的pH。在另一個方面，本發明提供適合用于靜脈內施用的制劑，其包含20mg/ml的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mML-組氨酸、約10mM甲石克氨酸、約4%甘露醇、約0.005%聚山梨酯80并具有約6的pH。一些制劑在高于冷凍至約10°C的溫度下穩定至少約12個月并具有約5.5至約6.5的pH。此制劑包含至少一種濃度為約1mg/ml至約30mg/ml的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、濃度為約4%w/v的甘露醇或濃度為約150mM的NaCl、濃度為約5mM至約10mM的組氨酸或琥珀酸以及10mM甲硫氨酸。一種此類制劑具有約6.0的pH、約lmg/ml的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mM組氨酸和約4%w/v甘露醇。另一些制劑于約2°C至8°C的溫度下穩定至少約24個月，并包含濃度為約0.001%w/v至約0.01%w/v的聚山梨酯80。一些此類制劑具有約6.0至約6.5的pH并且包含約10mM組氨酸、約4%w/v甘露醇以及約1mg/ml、約2mg/ml或約5mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)。其它的此類制劑包含約10mM組氨酸、約4°/。w/v甘露醇、約0.005%w/v聚山梨酯80以及約10mg/ml、約20mg/ml或30mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、優選地具有約6.0至約6.2的pH。優選的制劑在溫度約2。C至約8。C下穩定至少約24個月，具有約5.5至約6.5的pH并包含約2mg/ml至約23mg/ml、優選地約17mg/ml至約23mg/ml的人源化3D6抗體、約10mM組氨酸以及約10mM曱硫氨酸。優選地，該制劑還包含約4%w/v甘露醇。制劑優選地包含濃度為約0.001%w/v至約0.01%w/v的聚山梨酯80、更優選地是約0.005%w/v聚山梨酯80。在此類制劑中，人源化的3D6抗體可以以約20mg/ml至約23mg/ml的濃度存在。另一種制劑于溫度約2°C至約8°C下穩、定至少約24個月，具有約5.5至約6.5的pH并包含約2mg/ml至約23mg/ml的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mM琥珀酸、約10mM甲硫氨酸、約4%w/v甘露醇以及約0.005%w/v聚山梨酯80。在一些此類制劑中，有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)以約17mg/ml至約23mg/ml的濃度存在。本發明還提供制劑，其在從約-50°C至約-80。C融化時穩定，具有約6.0的pH并包含約40至約60mg/ml的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約1.0mg/ml至約2.0mg/ml組氨酸、約1.0mg/ml至2.0mg/ml曱硫氨酸以及約0.05mg/ml聚山梨酯80。優選地，不包M露醇。本發明還提供包含了有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、甘露醇和組氨酸的液體制劑。在一些此類制劑中，有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)以約lmg/ml至約30mg/ml存在。優選地，甘露醇以足夠維持制劑等張性的量存在。優選地，組氨酸以足夠維持生理適合的pH的量存在。一種此類制劑包含約20mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mML-組氨酸、約10mM甲琉氤酸、約4%甘露醇并具有約6的pH。另一種此類制劑包含約30mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mM琥珀酸、約10mM甲硫氨酸、約6%甘露醇并具有約6.2的pH。又一種此類制劑包含約20mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mML-組氨酸、約10mM甲石克氨酸、約4%甘露醇、約0.005%聚山梨酯80并具有約6的pH。另一種此類制劑包含約IOmg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約IOmM琥珀酸、約IOmM甲硫氨酸、約10%甘露醇、約0.005%聚山梨酯80并具有約6.5的卩11。又一種此類制劑包含約5mg/ml至約20mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約5mM至約10mML-組氨酸、約10mM甲硫氨酸、約4%甘露醇、約0.005%聚山梨酯80并具有約6.0至約6.5的pH。又一種此類制劑包含約5mg/ml至約20mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約5mM至約10mML-組氨酸、約10mM甲石危氨酸、約150mMNaCl、約0.005%聚山梨酯80并具有約6.0至約6.5的pH。本發明還提供適合用于靜脈內施用的制劑，其包含約20mg/ml的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約10mML-組氨酸、約10mM甲減裒酸、約4%甘露醇并具有約6的pH。優選地，此制劑包含約0.005%聚山梨酯80。本發明提供用于增加液體藥物制劑中抗原結合性多肽例如抗體穩定性的方法，否則在液體制劑貯存期間多肽將形成副產物。因此，該方法包括將抗氧化劑例如甲硫氨酸或其類似物以足夠減少副產物形成數量的量加入制劑中。本發明還提供方法，其用于維持待貯存在溫度約-50。C至約"80。C、隨后]i&存在溫度約2°C至約8°C的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)制劑的穩定性，包括(i)將約40mg/ml至約60mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約1mg/ml至約2mg/mlL-組氨酸、約1mg/ml至約2mg/ml甲減氨酸以及約0.05mg/ml聚山梨酯80組合；(ii)調節pH至約6.0;(iii)過濾至冷凍容器中并冷凍；(iv)融化；(v)添加其量足以產生約4%終濃度的甘露醇或約150mMNaCl、約2mg/ml至約20mg/ml有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)的甘露醇或NaCl以及稀釋劑；約5mM至約10mM組氨酸；約10mM甲硫氨酸以及約0.005%聚山梨酯80;(vi)過濾；(vii)轉移至玻璃小瓶并密封；和(viii)貯存在約2°C至約8°C的溫度下。本發明還提供試劑盒，其包含具有本文中所述制劑的容器和用途說明書。本發明還提供包含如此制劑的藥物單位劑型，所述制劑包含約IOmg至約250mg的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約4%甘露醇或約150mMNaCl、約5mM至約10mM組氨酸或琥珀酸以及約10mM甲硫氨酸，一些此類藥物單位劑型包含約0.001%至約0.1%的聚山梨酯80。一些此類藥物單位劑型包含約40mg至約60mg、約60mg至約80mg、約80mg至約120mg、約120mg至約160mg或約160mg至約240mg的有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)。一些此類制劑可以在施用至患者前在玻璃小瓶內于約2°C至約8°C的溫度下維持。此外，本發明提供包括包含如下制劑的玻璃小瓶的治療產品，所述制劑包含約10mg至約250mg有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、約4%甘露醇或約150mMNaCl、約5mM至約10mM組氨酸以及約10mM甲硫氨酸的制劑。一些此類治療產品還包括如此用途標簽，其包括在患者中實現約0.15mg/kg至約5mg/kg劑量所需務使用的適宜體積的說明書。一般地，小fcilml、2ml、5ml、10ml、25ml或50ml的小瓶。一些此類治療產品的劑量是約0.5mg/kg至約3mg/kg、優選地是約1mg/kg至約2mg/kg。在一些此類治療產品中，有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)的濃度是約10mg/ml至約60mg/ml、優選地是約20mg/ml。治療產品優選地包含約0.005%聚山梨酯80。一些此類治療產品的制劑用于皮下施用或靜脈內施用。在另一個方面，本發明提供用于增加液體藥物制劑中抗原結合性多肽例如抗體穩定性的方法，否則多肽將于液體制劑貯存期間形成副產物。因此，該方法包括將抗氧化劑例如甲硫氨酸或其類似物以足夠減少副產物形成數量的量加入制劑。在又一個方面，本發明提供試劑盒，其包含具有本文中所述制劑的容器和用途說明書。從如下的詳細描述和權利要求書中本發明的其它特征和優勢將顯而易見。附圖簡述圖l描述IgG抗體的預測結構以及鏈內和鏈間二硫鍵、糖基化作用位點(六角形符號)、互補性決定區域(CDR)、框架區(陰影標注)和恒定區的大致位置的示意圖。圖2鑒定了人源化3D6第2版(hu3D6.v2)抗Aj8抗體輕鏈和重鏈(分別為SEQIDNO:l和SEQIDNO:2)的完整M酸序列。輕鏈互補性決定區域(CDR)，即CDR1、CDR2、和CDR3分別在^l^位置24-39、55-61和94-102處(上半部分)。重鏈互補性決定區域(CDR),即CDR1、CDR2、和CDR3分別在殘基位置40-44、50-65和99-108處(下半部分)。預測的分子內二硫鍵由所涉及的半胱氨酸殘基的連接顯示。在預測形成分子內二硫鍵的半胱氨酸下劃線并且標出連接。抗體重鏈的N-連接糖基化作用共有位點以粗體斜體在殘基位置299-301處標出(下半部分)。預測的重鏈g末端賴氨酸在括號內顯示。圖3以圖形方式描述根據本發明制造并在5。C貯存的抗體制劑(含或不含聚山梨酯80(PS80))的貯藏壽命預測。圖4以圖形方式描述根據本發明制造并在25°C貯存的抗體制劑(含或不含PS80))的貯藏壽命預測。圖5以圖形方式描述根據本發明制造并在40°C貯存的抗體制劑(含或不含PS80))的貯藏壽命預測。圖6以圖形方式描述根據本發明制造并在5。C貯存的含PS80的制劑的降解預測。圖7以圖形方式描述根據本發明制造、在5。C貯存并再次加工以使分析變異最小化的含PS80的制劑的大小排阻層析(SEC)分析。圖8以圖形方式描述根據本發明制造并在5°C貯存的不含PS80的制劑的降解預測。圖9描述的層析表明PS80的存在使穩定化的多肽制劑中存在的副產物從高分子量種類遷移為低分子量種類，而未改變單體抗體特性曲線。圖10以圖形方式描述在包含IgG4的多肽制劑中在添加抗氧化劑如游離曱硫氨酸后抑制了不想要的副產物、尤其高分子量多肽聚集物的形成。圖11以圖形方式描述在包含IgG2的多肽制劑中在添加抗氧化劑如游離甲石克氨酸后抑制了不想要的副產物，尤其高分子量多肽聚集物的形成。發明詳述為了提供對說明書和權利要求書的清晰理解，以下定義方便地提供如下。如本文中所用，術語"抗原結合性多肽"包括能夠特異性地結合至耙分子例如抗原，例如A^肽，或結合至所述A/3肽內表位的多肽。一般地，抗(例如，受體)，其包含賦予此多肽特異性結合特征的一個或多個可變區或互補性決定區域(CDR)。優選的抗原結合性多肽包括抗體，例如IgM、IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。術語"抗體"包括單克隆抗體(包括全長的單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、嵌合抗體、CDR-移植抗體、人源化抗體、人抗體和單鏈抗體(scFvs)。術語"單鏈抗體，，指具有由重鏈和輕鏈組成的雙多肽鏈結構的蛋白質，該蛋白質具有特異性地結合抗原的能力，所述的鏈例如通過鏈間肽連M加以穩定化。術語"抗體片段"包括F(ab，)2片段、Fab片段、Fd片段、Fv片段和單結構域抗體片段(DAb)。術語"結構域"指重鏈或輕鏈多肽的包含免疫球蛋白折疊的球狀區域。免疫球蛋白折疊由^-折疊二級結構組成并包括二硫鍵。結構域在本文中又稱作為"恒定的，，或"可變的"，在"恒定，，結構域的情況下，其以多個類別成員的結構域內相對缺乏序列變異為基礎，在"可變，，結構域的情況下，以多個類別成員的結構域內的顯著變異為^。抗體或多肽"結構域"常在本領域內可互換地稱作抗體或多肽"區域"。抗體輕鏈的"恒定，，結構域可互換地稱作"輕鏈恒定區"、"輕鏈恒定結構域"、"CL"區域或"CL，，結構域。抗體重鏈的"恒定，，結構域可互換地稱作"重鏈恒定區"、"重鏈恒定結構域"、"CH"區域或"CH"結構域。抗體輕鏈的"可變，，結構域可互換地稱作"輕鏈可變區"、"輕鏈可變結構域"、"VL"區域或"VL，，結構域。抗體重鏈的"可變"結構域可互換地稱作"重鏈可變區"、"重鏈可變結構域"、"VH"區域或"VH"結構域。術語"區域，，還可以指抗體鏈或抗體鏈結構域的部分(如文中所定義例如，重鏈或輕鏈的部分或者恒定結構域或可變結構域的部分)，以及所述鏈或結構域的更加不連續的部分。如本文中所定義，例如，輕鏈和重鏈或者輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域包括在"框架區，，或"FR，，間散布的"互補性決定區域"或"CDR"。術語"抗抗體"包括能夠結合A-的表位的抗體(及其片段)。抗抗體包括例如在美國專利公布號20030165496A1,美國專利公布號20040087777Al，國際專利公布號WO02/46237A3，和國際專利公布號WO04/080419A2中描述的那些抗體。其它抗Aj8抗體描述于例如題目均為"HumannizedAntibodiesthatRecognizeBetaAmyliodPeptide，，的國際專利第WO03/077858A2和WO04/108895A2、題為"Anti-A/SAntibodies，，的國際專利公布號WO03/016466A2、題為"HumannizedAntibodiesthatSequesterAmyliodBetaP印tide"的國際專利/〉布號WO0162801A2和題為"HumannizedAntibodies，，的國際專利公布號WO02/088306A2中。術語"片段"指抗體或抗體鏈的部分，其包含比完整或完全的抗體或抗體鏈更少的氨基酸殘基。片段可以通過化學處理或酶處理完整或完全的抗體或抗體鏈得到。片段還可以通過重組方法得到。示例性片段包括Fab、Fab，、F(ab，)2和/或Fv片段。術語"抗原結合片段"指免疫球蛋白或抗體的多肽片段，其與抗原結合或與完整抗體(即，衍生它們的完整抗體)竟爭抗原結合(即，特異性結合)。術語"構象"指蛋白質或多肽(例如，抗體、抗體鏈、結構域或其區域)的三級結構。例如，短語"輕(或重)鏈構象"指輕(或重)鏈可變區的三級結構，并且短語"抗體構象"或"抗體片段構象，，指抗體或其片段的三級結構，抗體的"特異性結合"意指抗體對特定抗原或表位表現出可察覺的親和力，并且通常不表現明顯的交叉反應性。在示例性實施方案中，抗體不表現交叉反應性(例如，不與非A]3肽或與間接表位(remoteepitope)例如Aj8上的非連續表位發生交叉反應)。"可覺察的，，或優選的結合包括具有至少106、107、108、1()9M"或10"M"親和力的結合。更優選親和力比io7]vr1更大，優選地比10SM"更大。本文中所述親和力的中間值也旨在包括在本發明的范圍內并且優選的結合親和力可以表示為親和力的范圍，例如io6至101GM-1、優選地107至101GM-1、更優選地108至101()M_1。"不表現顯著交叉反應性"的抗體是將不明顯可覺察地結合至不想要的實體(例如，不想要的蛋白質、多肽或肽)的抗體。例如，特異性結合至A卩的抗體將明顯可覺察地結合AP但不顯著地與非A/J的蛋白質或肽(例如，斑內所包含的非的蛋白質或肽)>^應，對特定表位特異的抗體例如將不顯著地與同一蛋白質或肽上的間接表位發生交叉反應。特異性結合可以根據本領域已確認的用于測定此結合的任何方法測定。優選地，特異性結合根據斯卡查德(Scatchard)分析法和/或竟爭性結合測定法加以測定。結合性片段可以通過重組DNA技術或通過化學處理或酶處理完整免疫球蛋白產生。結合性片段包括Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv、單鏈和單鏈抗體。將免疫球蛋白或抗體理解為它的每一結合位點是相同的，"雙特異性"或"雙功能"免疫球蛋白或抗體除外。"雙特異性抗體"或"雙功能抗體"是具有兩條不同的重M/輕^t及兩個不同的結合位點的Ait雜合抗體。雙特異性抗體可以通過多種方法產生，包括雜交瘤融合或Fab'片段連接。見例如Songsivilai和Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79:315-321(1990);Kostelny等，J.Immunol.148,1547-1553(1992)。"抗原"是含有抗體特異性結合的抗原決定蔟的分子(例如，蛋白質、多肽、肽或糖)。術語"表位，，或"抗原決定簇"指抗原上免疫球蛋白或抗體(或其抗原結合片段)與其特異性結合的的位點。表位可以從連續的氨基酸中或通過蛋白質三級折疊拉近的非連續氨基酸中形成。從連續的氨基酸中形成的表位與變性溶劑接觸時通常得以維持，而由三級折疊形成的表位以變性溶劑處理時通常喪失。表位通常包含處于獨特空間構象的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個氨基酸。測定表位空間構象的方法包括例如X-射線晶體分析法和二維核磁共振法。見例如EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology,第66巻，G.E.Morris編輯(1996)。術語"穩定化的制劑"或"穩定化的液體多肽制劑"包括其中多貼貯存時基本上保持其物理和化學同一性和完整性的制劑。用于測量蛋白質穩定性的多種分析技術在本領域內可獲得并在本文中描述(綜述見，PeptideandProteinDrugDelivery,247-301,VincentLee編輯,MarcelDekker，Inc.,NewYorkjN.Y.，Pubs,(1991)和Jones,A.Adv.DrugDeliveryRev.10:29-卯(1993))。可以在選擇的時間長度在選擇的溫度上測量穩定性.對于快速測試，可以將制劑在較高的或"加速，，的溫度上例如40。C保持2周至1個月或更長時間，在該溫度上測量時間穩定性。在示例性實施方案中，制劑不易形成成分多肽的副產物，例如高分子量聚集產物、低分子量降解或片段化產物或其混合物。術語"副產物"包括不想要的產物，其減損或減少了特定制劑中的治療性多肽的比例。典型的副產物包括治療性多肽的聚集物、治療性多肽的片段(例如，通過脫酰胺作用或水解作用降解多肽所產生)或其混合物.術語"高分子量多肽聚集物，，包括隨后聚集的治療性多肽的聚集物、治療性多肽的片段(例如，通過水解作用降解多肽所產生)或其混合物。一般地，高分子量聚集物是具有比治療性單體多肽更大分子量的復合體。在抗體例如IgG抗體的例子中，此類聚集物比約150kD更大。然而，在其它治療性多肽例如通常具有分子量25kD的單鏈抗體的例子中，此類聚集物將具有比約25kD更大的分子量。術語"低分子量多肽降解產物"包括例如治療性多肽的片段，其例如由脫酰胺作用或水解作用產生。一般地，低分子量降解作用產物是具有比治療性單體多肽更小分子量的復合體。在抗體例如IgG抗體的例子中，此類降解作用產物比約150kD更小。然而，在其它治療性多肽例如通常具有分子量25kD的單鏈抗體的例子中，此類降解作用產物將具有比約25kD更小的分子量。術語"施用途徑"包括本領域已確認的用于送遞治療性多肽的施用途徑，例如腸胃外、靜脈內、肌內、皮下、顱內或硬膜外。為施用用于治療神經退行性疾病的治療性多肽，可能需要靜脈內、硬膜外或顱內途徑。術語"淀粉狀蛋白生成性疾病"包括與不可溶性淀粉狀蛋白原纖維形成或沉積有關(或由其所致)的任何疾病。示例性淀粉狀蛋白生成性疾病包括但不限于全身性淀粉樣變、阿爾茨海默病、成年型糖尿病、帕金森氏病、亨廷頓氏病、額顳葉癡呆和朊蛋白相關的傳染性海綿狀腦病(在人類中M魯病和Creutzfeldt-Jacob病，在綿羊和牛中是癢病和海綿狀腦病(BSE))。4j&。例如在患阿爾茨海默病的受試者或患者中，P-淀粉樣蛋白(例如，野生型、變異的或截短的P-淀粉樣蛋白)是淀粉樣蛋白沉積物的特征性多肽成分。因此，阿爾茨海默病是例如受試者或患者腦內"由A卩沉積物^^征的疾病，，或"與AP沉積物有關的疾病"的實例.術語"P-淀粉樣蛋白"、"p-淀粉樣肽"、"P-淀粉狀蛋白"、"AP"和"AP肽，，在本文中可互換地使用。術語"治療"如本文中所用定義為向患有疾病，具有疾病的癥狀或發病素質的患者，或向分離自患者的組織或細胞系應用或施用治療劑，目的是治愈、康復、緩和、延緩、減輕、改變、糾正、改良、改善或影響疾病、疾病的癥狀或發病素質。術語"有效劑量"或"有效的劑量"定義為足夠實現或至少部分實現所需要的效果的量。術語"治療有效劑量，，定義為足夠治愈或至少部分阻滯已患有該疾病的患者中疾病及疾病并發癥的量.對此用途有效的量將取決于感染的嚴重性和患者自身免疫系統的總體狀態。術語"患者，，包括接受預防性治療或治療性治療的人類受試者和其它哺乳動物受試者。術語"劑量單位形式，，(或"單位劑型，，)如本文中所用指物理上獨立的適合作為單位劑量用于待治療患者的單元，每一單元含有與所需要的藥物載體、稀釋劑或賦形劑結合的活性化合物的預定量，其經過計算以產生所需要的治療效果。用于本發明劑量單位形式的說明由活性化合物的獨特特征和待實現的具體治療效果以及為治療患者而復合該活性化合物的本領域內已知參數決定，并直接取決于它們。本發明制劑中活性成分(例如A/3多肽)的實際劑量水平可以變動以致于得到以下量的活性成分，即其有效實現對于特定患者、組合物和施用模式所需要的治療反應，而對患者無毒性。所選擇的劑量水平將取決于多種藥物代謝動力學因素，包括所采用的本發明特定組合物的活性、施用的途徑、施用的時間、當前釆用的特定化合物的排泄率、治療的持續期、與所采用的特定組合物組合使用的其它藥物、化合物和或材料、正在治療的患者的年齡、性別、體重、體況、一般健康和先前醫療史及醫藥領域內眾所周知的類似因素。術語"稀釋劑"如本文中所用指適合用于改變或實現示例性濃度或適宜濃度或如本文中所述的濃度的溶液。概述本發明提供用于抗原結合性多肽，尤其是抗體以及其部分和/或片段的制劑。在某些方面，本發明提供用于治療用途的穩定化的液體多肽制劑。具體而言，本發明為治療疾病和/或病癥中的用途提供抗原結合性多肽例如抗體和其抗原結合片段的穩定化。尤其，本發明提供經過穩定化以致于活性治療性多肽經it^長的時間段后仍穩定的并且可以經過多種施用途徑施用的制劑。這對于預定用于治療某些疾病和/或病癥例如神經病學疾病或病癥的那些抗原結合性多肽(例如，抗體)特別重要。在其它方面，本發明提供格外穩定的抗體制劑，其例如對多種脅迫如冷凍、凍干、加熱和/或重構穩定。此外，本發明的示例性制劑能夠經過延長的時間段并且甚至在不合適的溫度(例如，貯存制劑的一年期間)下維持抗體的穩定性、生物學活性、純度和質量。此外，本發明的示例性制劑適用于向受試者或患者(例如，向受試者或患者靜脈內施用)，例如患有或預計患有神經病學疾病或病癥例如涉及淀粉樣A|3多肽的淀粉狀蛋白生成性疾病的人施用。制劑在一個方面，本發明提供制劑，其包含有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、張力劑(例如，甘露醇)(其中張力劑以足夠使制劑適合用于靜脈內輸注的量存在)和IL^酸(例如，組氨酸)或其衍生物(其中M酸或其衍生物以足夠維持生理適合的pH的量存在)。在示例性實施方案中，本發明提供包含有治療活性的抗原結合性多肽(例如，抗體或其抗原結合片段)、甘露醇和組氨酸的制劑。在另一個方面，本發明提供包含有治療活性的抗原結合性多肽的穩定化,劑。適用于在本發明制劑中加以穩定化的抗原結合性多肽包括抗體及其片段，并且尤其包括能夠結合疾病或病癥中所涉及的治療性乾標的抗體。因此，治療性多肽根據本發明通過添加抗氧化劑加以穩定化以避免形成副產物，其通常是高分子量聚集物、低分子量降解片段或其混合物，其中抗氧化劑的量足以致抑制此類副產物形成。抗氧化劑包括如此濃度的甲硫氨酸和其類似物，如下討論，該濃d以實現所需要的對不想要副產物的抑制。任選地，本發明的穩定化多肽制劑還包含張力劑(例如，甘露醇)(其在)以及氨基酸(例如，組氨酸)或其衍生物(其中氨基酸或其衍生物以足夠維持生理適合的pH的量存在)*在示例性實施方案中，本發明提供包含有治療活性的抗原結合性多肽、甲硫氨酸、甘露醇和組氨酸的制劑。用于本發明制劑中的多肽如本文中所述，待根據本發明配制的多肽使用本領域內充分建立的并包括例如合成技術(如重組技術和肽合成技術或這些技術的組合)進行制備，或可以從該多肽的內在來源中分離。在本發明的某些實施方案中，選擇的多肽是抗原結合性多肽，更優選地是抗體并且尤其是抗抗體。用于產生抗原結合性多肽并且尤其是抗體的技術如下描述。抗體術語"抗體"如本文中所用指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫學活性部分，即^^有特異性地結合(識別)抗原的抗原結合位點的分子。免疫球蛋白分子的免疫學活性部分的實例包括可以通過用酶如胃蛋白酶處理生成或通過本領域已確認的重組工程技術產生的F(ab)和F(ab，)2片段。本發明的實施方案涉及結合抗原例如治療性靶抗原如AP的抗體，例如多克隆抗體和單克隆抗體的穩定化。術語"單克隆抗體，，或"單克隆抗體制劑"如本文中所用指含有僅一種抗原結合位點的抗體分子群體，其能夠識別和結合乾抗原的特定表位，例如A0的表位。單克隆抗體制劑因此通常表現出對與其發生免疫反應的特定靶抗原的單一結合特異性和親和力。多克隆抗體多克隆抗體可如上所述通過用免疫原免疫合適的受試者制備。免疫的受試者中的抗體滴度可以通過標準技術隨時間監測，例如使用固定化乾抗原的酶聯免疫吸附測定(ELISA)。根據需要，抗靶抗原的抗體分子可以自哺乳動物(例如M液)分離并通過眾所周知的技術如蛋白A瓊脂糖TM層析純化以得到抗體，如IgG級分。在免疫后的適合時間，例如當抗-抗原抗體的滴度最高時，可以從受試者中得到抗體生成細胞并且用于通過標準技術如最初由Kohler和Milstem(1975)Nature256:495-497)(還見Brown等(1981)J.Immunol.127:539-46;Brown等(1980)J.Biol.Chem.255:4980-83;Yeh等(1976)Proc.Natl.Acad.Sci.USA76:2927-31;和Yeh等(1982)Int.J.Cancer29:269-75)描述的雜交瘤技術制備單克隆抗體。對于嵌合多克隆抗體的制備，見Buechler美國專利號6,420,113。單克隆抗體用于融合淋巴細胞和永生化細胞系的任意多種眾所周知方案可以用于產生單克隆抗體(見例如G.Galfre等(1977)Nature266:55052;以上所引用的Gefter等SomaticCellGenet.;以上所引用的Lerner，YaleJ.Biol.Med.;以上所引用的Kenneth,MonoclonalAntibodies)。此外，普通技術人員將意識到，存在同樣有用的此類方法的眾多變體.通常，永生細胞系(例如，骨髓瘤細胞系)作為淋巴細胞衍生自同一哺乳動物物種。例如，小鼠淋巴瘤可以通過來自經本發明的免疫原性制劑免疫的小鼠的淋巴細胞與永生化小鼠細胞系融合產生。優選的永生細胞系是對含有次黃嘌呤、JLS^呤和胸苷的培養基("HAT培養基")敏感的小鼠骨髓瘤細胞系。任何眾多骨髓瘤細胞系可以根據標準技術作為融合伴侶使用，例如P3-NSl/l-Ag4-l、P3-x63-Ag8.653或Sp2/0-Agl4骨髄瘤系。這些骨髄瘤系可從ATCC獲得。通常，使用聚乙二醇("PEG")將HAT敏感的小鼠骨髄瘤細胞與小鼠脾細胞融合。隨后，自融合得到的雜交瘤細胞使用HAT培養基加以選擇，其未得到轉化在數天后死亡)。產生本發明單克隆抗體的雜交瘤細胞通過檢測,重組抗體作為對制M泌單克隆抗體的雜交瘤的備選方法，單克隆抗體可以通過用乾抗原篩選重組免疫球蛋白組合文庫(例如，抗體噬菌體展示文庫)因而分離結合耙抗原的免疫球蛋白文庫成員進行鑒定和分離。用于生成和篩選噬菌體展示文庫的試劑盒可商業獲得(例如，PharmaciaRecombinantPhageAntibodySystem,目錄號27-9400-01;和StratageneSurfZAPTM嗟菌體展示試劑盒，目錄號240612)。此外，特別適合用于生成和篩選抗體展示文庫的方法和試劑的實例可以例如在Ladner等美國專利號5,223,409;Kang等PCT國際專利公開號WO92/18619;Dower等PCT國際專利公開號WO91/17271;Winter等PCT國際專利公開WO92/20791;Markland等PCT國際專利公開號WO92/15679;Breitling等PCT國際專利公開WO93/01288;McCafferty等PCT國際專利公開號WO92/01047;Garrard等PCT國際專利公開號WO92/096卯;Ladner等PCT國際專利公開號WO謂2809;Fuchs等(1991)Bio/Technology9:1370-1372;Hay等(l992)Hum.Antibod.Hybridomas3:81-85;Huse等(1989)Science246:1275-1281;Griffiths等(1993)EMBOJ12:725-734;Hawkins等(1992)J.Mol.Biol.226:889-896;Clarkson等(1991)Nature352:624-628;Gram等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:3576-3580;Garrad等(1991)Bio/Technology9:1373-1377;Hoogenboom等(1991)Nuc.AcidRes.19:4133-4137;Barbas等(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:7978-7982;和McCafferty等Nature(19卯)348:552-554中找到。嵌合抗體和人源化抗體此外，可以使用標準重組DNA技術產生的包含人部分和非人部分的重組抗體,如嵌合抗體和人源化的單克隆抗體處于本發明的范圍內.術語"人源化免疫球蛋白"或"人源化抗體"指包括至少一條人源化的免疫球蛋白鏈或抗體鏈(即至少一條人源化的輕鏈或重鏈)的免疫球蛋白或抗體。術語"人源化免疫球蛋白鏈"或"人源化抗體鏈"(即，"人源化的免疫球蛋白輕鏈"或"人源化的免疫球蛋白重鏈")指具有如此的可變區的免疫球蛋白鏈或抗體鏈(即分別為輕鏈或重鏈)，該可變區包括基本來自人免疫球蛋白或抗體的可變框架區以;s^本來自非人的免疫球蛋白或抗體的互補性決定區域(CDR)(例如，至少一個CDR、優選地兩個CDR、更優選地三個CDR)并且還包括恒定區(例如以輕鏈為例，至少一個恒定區或其部分，以重鏈為例，優選地是三個恒定區)。術語"人源化的可變區"(例如，"人源化輕鏈可變區，，或"人源化重鏈可變區，，)指包括基本來自人免疫球蛋白或抗體的可變框架區以及基本來自非人的免疫球蛋白或抗體的互補性決定區域(CDR)的可變區。短語"基本來自人免疫球蛋白或抗體，，或"基本來自人，，意指，當為比較目的與人免疫球蛋白或抗體的JL^酸序列比對時，此區域與人的框架區或恒定區的序列具有至少80-90%、卯-95%或95-99%同一性(即局部序列同一性)，允許例如保守性替換、共有序列替換、種系替換、回復突變等等。常常稱導入保守性替換、共有序列替換、種系替換、回復突變等為人源化抗體或抗體鏈的最優化。短語"基本來自非人的免疫球蛋白或抗體"或"基本來自非人類，，意指具有這樣的免疫球蛋白或抗體序列，其與非人的生物例如非人的哺乳動物的免疫球蛋白或抗體序列至少80-95%、優選地至少90-95%、更優選地96%、97%、98%或99%相同。因此，除CDR之外，人源化免疫球蛋白或抗體或者人源化免疫球蛋白鏈或抗體鏈的全部區域或殘基與一個或多個天然的人免疫球蛋白序列的對應區域或對應殘基基^目同。術語"對應區域"或"對應殘基"指當第一序列和第二序列為比較目的進行最優比對時，占據如第一M酸序列或核苷酸序列上的區域或殘勤目同(等同)位置的第二M酸序列或核苷酸序列上的區域或殘基。術語"顯著相同，，意指，當例如通過使用默認空位加權值的程序GAP或BESTFIT進行最優比對時，兩種多肽序列共有至少50-60%序列同一性、優選地至少60-70%序列同一性、更優選地至少70-80%序列同一性、更優選地至少80-90%同一性、甚至更優選地至少卯-95%序列同一性以及甚至更優選地至少95%或更高的序列同一性(例如，99%或更高的序列同一性)。術語"基本相同"意指，當例如通過使用默認空位加權值的程序GAP或BESTFIT進行最優比對時，兩種多肽序列共有至少80-90%序列同一性、優選地至少90-95%的序列同一性以及更優選地至少95%或更高的序列同一性(例如，99%或更高的序列同一性)。為了比較序列，通常一個序列充當參考序列，測^列與之進行比較。當使用序列比較算法時，將測*列和參考序列輸入計算機，根據需要指定次級序列坐標，并且指M列算法程序的^lt。隨后序列比對算法基于指定的程序M計算測試序列相對于參考序列的序列同一性百分數。用于比較的序列最優比對可以例如通過Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源性算法、通過Needleman和Wunsch，J.Moi.Biol.48:443(1970)的同源性比對算法、通過Pearson和Lipman，Proc.Nat，l.Acad.Sci.USA85:2444(1988)的相似性搜索方法、通過這些算法的計算機化執行(威斯康辛遺傳軟件包中的GAP、BESTFIT、FASA和TFASTA,GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.，Madison,WI)或通過目M見檢查(通常見Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology)開展。適用于確定序列同一性和序列相似性百分數的算法的實例是由Altschul等，J.Mol.Biol.215:403(1990)描述的BLAST算法。用于開展BLAST分析的軟件可通過國立生物技術信息中心公開地獲得(通過國立健康研究院的NCBI互聯網服務器可公開獲取)。通常，默認的程序^lfc可以用于開展序列比較，盡管也可以使用自定義參數。對于氨基酸序列，BLASTP程序默認使用字長度(W)3，預期(E)10以及BLOSUM62記分矩陣(scoringmatrix)(見Henikoff和Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915(1989)).優選地，不相同的殘^^位置通過保守性ll&酸替換相區別。為將M酸替換劃分為保守性替換或非保守性替換的目的，M酸作如下分組組I(疏水性側鏈)leu、met、ala、val、leu、ile;組II(中性親水性側鏈)cys、ser、thr;組III(酸性側^):asp、glu;組IV(堿性側鏈)asn、gln、his、lys、arg;組V(影響側鏈方向的^J0:gly、pro和組VI(芳香族側鏈)trp、tyr、phe。保守性替換涉幼同組中#^酸之間的替換，非保守性替換由一個組中的成員與另一組成員的交換構成。優選地，人源化免疫球蛋白或抗體以相應非人源化抗體的親和力的三、四或五倍范圍內的親和力結合抗原。例如，若非人源化抗體具有109M-1的結合親和力，人源化抗體將具有至少3x109M"、4x109M"或5x109M"1的結合親和力。當描述免疫球蛋白或抗體鏈的結合特性時，鏈可以基于其"指導抗原(例如，AP)結合"的能力加以描述。當鏈對完整免疫球蛋白或抗體(或其抗原結合片段)賦予特異性的結合特性和結合親和力時，則稱其為"指導抗原結合"。如果與包含缺少該突變的等效鏈的抗體(或其抗原結合片段)結合親和力相比，突變(例如，回復突變)影響(例如，減少)包含所述鏈的完整免疫球蛋白或抗體(或其抗原結合片段)的結合親和力達至少一個數量級，則突變顯著地影響重鏈或輕鏈指導抗原結合的能力。當突變影響(例如，減少)包含所述鏈的完整免疫球蛋白或抗體(或其抗原結合片段)的結合親和力僅為包含缺少該突變的等效鏈的抗體(或其抗原結合片段)結合親和力的二、三或四倍時，突變"沒有顯著地影響鏈指導抗原結合的能力"。術語"嵌合的免疫球蛋白"或抗體指其可變區衍生自第一物種并且其恒定區衍生自第二物種的免疫球蛋白或抗體。嵌合的免疫球蛋白或抗體可以例如通過遺傳工程從屬于不同物種的免疫球蛋白基因片段構建。術語"人源化免疫球蛋白"或"人源化抗體，，不旨在包含如下所述的嵌合免疫球蛋白或嵌合抗體。雖然，人源化的免疫球蛋白或抗體在其結構上是嵌合的(即包含來自多于一個物種的蛋白質的區域)，如本文中所定義，它們包括不存在于嵌合的免疫球蛋白或抗體中的額外特征(即，包含供體CDR殘基和受體框架區殘基的可變區)。此類嵌合的和人源化的單克隆抗體可以例如使用在Robinson等InternationalApplicationNo.PCT/US86/02269;Akira等歐洲專利申請184,187;Taniguchi，M.，歐洲專利申請171,496;Morrison等歐洲專利申請173,494;Neuberger等PCT國際專利公開號WO86/01533;Cabilly等美國專利號4,816,567;Cabilly等歐洲專利申請125,023;Better等(1988)Science240:1041-1043;Liu等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:3439-3443;Liu等(1987)J.Immunol.139:3521-3526;Sun等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:214-218;Nishimura等(1987)Cane.Res.47:999-1005;Wood等(1985)Nature314:446-449;和Shaw等(1988)J.Natl.CancerInst.80:1553-1559;Morrison,S.L.(1985)Science229:1202-1207;Oi等(1986)BioTechniques4:214;Winter美國專利5,225,539;Jones等(1986)Nature321:552-525;Verhoeyan等(1988)Science239:1534;和Beidler等(1988)J.Immunol.141:4053-4060中描述的方法，通過本領域已知的重組DNA沖支術產生。來自轉基因動物和噬菌體展示的人抗體備選地，現在有可能產生這樣的轉基因動物(例如，小鼠)，其一經免疫就能夠在不產生內源性免疫球蛋白時產生完整的人抗體庫。例如，已描述，在嵌合小鼠和種系突變小鼠中抗體重鏈連接區(JH)基因的純*失導致完全抑制內源性抗體的產生。在此類種系突變小鼠中轉入人的種系免疫球蛋白基因陣列引起在抗原攻擊時產生人抗體。見例如美國專利號6,150,584;6,114,598和5，770，429。完全的人抗體還可以衍生自噬菌體展示文庫(Hoogenboom等，J.Mol.Biol"227:381(1991);Marks等，J.Mol.Biol"222:581-597(1991)),雙特異性抗體、抗體融合多肽和單鏈抗體雙特異性抗體(BsAb)是具有對至少兩種不同表位的結合特異性的抗體。此類抗體可以衍生自全長抗體或抗體片段(例如F(ab)，2雙特異性抗體)。用于產生雙特異性抗體的方法在本領域是已知的。全長雙特異性抗體的常規產生基于兩條免疫球蛋白重鏈-輕^t的共表達，其中兩M具有不同的特異性(MHlstein等，Nature,305:537-539(1983))。由于免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機組合，這些雜交瘤(四體雜交瘤)產生不同抗體分子的潛在混合物(見WO93/08829和在Traunecker等，EMBOJ.，10:3655-3659(1991)內)。雙特異性抗體還包括交聯的或"異源綴合"的抗體，例如，異源綴合物內的一種抗體可以與親和素偶聯，另一種抗體可與生物素或其它有效荷栽偶聯。異源綴合抗體可使用任何便利的交聯方法產生，合適的交聯劑在本領域眾所周知并且在美國專利號4,676,980中隨同眾多交聯技術一起公開。仍在另一個實施方案中，抗體可以與有效荷載結構域如反應性部分、可檢測部分或功能性部分，例如免疫毒素化學性或遺傳性融合，以產生抗體融合多肽.此類有效荷栽包括例如免疫毒素、化學治療劑和放射性同位素，這些有效荷載均在本領域是眾所周知的。穩定化。該片段包含以連接體與輕鏈可變結構域(VL)連接的重鏈可變結構域(VH)，所述連接體允許每一可變區彼此對接并再生出衍生VL和VH區的親代抗體的抗原結合袋。見Gmber等，J.Immunol"152:5368(1994)。應當理解，單獨或組合的前述任意多肽分子適合用于制備成本發明穩定化的制劑。治療性抗原結合性多肽眾多的治療性抗原結合性多肽適合才娥本發明的穩定化M進行配制。通常，抗原結合性多肽是抗M其片段(見如上)，其包含抗體可變區和/或抗體Fc區或至少部分免疫球蛋白、免疫球蛋白超家族蛋白質或受M受M結構域，其可以與乾抗原或免疫系統的分子例如Fc受糾目互作用。為方便起見，:下。此類^R4性^^結合性多^^合至包括例如癌^^、自身免疫抗原、過敏原和病原體的抗原類別。結合癌抗原的治療性抗原結合性多肽在某些實施方案中，接受本發明方法和組合物處理的抗原結合性多肽可以結合肺瘤細胞特異性分子，例如腫瘤特異性抗原。此類腫瘤特異性抗原包括例如大皰性類天皰瘡抗原2、前列腺粘蛋白抗原(PMA)、腫瘤相關Thomsen-Friedenreich抗原、前列腺特異性抗原(PSA)、乳腺癌和膀胱移行性細胞癌(TCC)的腔上皮抗原(LEA135)、癌相關血清抗原(CASA)和癌抗原125(CA125)、上皮糖蛋白40(EGP40)、鱗狀細胞癌抗原(SCC)、組織蛋白酶E、黑素瘤內的酪氨酸酶、大腦海綿狀瘤的細胞核抗原(PCNA)、DF3/MUC1乳腺癌抗原、癌胚抗原、腫瘤相關抗原CA19-9、人黑素瘤抗原MART誦I/Melan-A27-35和gplOO、T和Tnpancarcinoma(ca)糖jM^位、乳頭狀曱狀腺癌中的35kD腫瘤相關自身抗原、KH-1腺癌抗原、A60分4支桿菌抗原、熱休克蛋白(HSP)、突變的癌基因產物例如p53、ras和HER-2/neu。結合炎癥和自身免疫性疾病的分子的治療性抗原結合性多肽在某些實施方案中，接受本發明方法和組合物處理的抗原結合性多肽可以結合導致炎癥或自身免疫性疾病或病癥的分子。此類抗原結合性多肽可以結合與類風濕性關節炎、SLE、糖尿病、重癥肌無力、反應性關節炎、強直性脊柱炎、多發性硬化、IBD、銀屑病、胰腺炎和多種免疫缺陷有關的分子。其它靶抗原包括2-GPI、50kDa糖蛋白、Ku(p70/p80)自身抗原或其80-kd亞基蛋白、核自身抗原La(SS-B)和Ro(SS-A)、硬皮病抗原Rpp30、Rpp38或Scl-70、中心體自身抗原PCM-1、多肌炎-硬皮病自身抗原(PM-Scl)、硬皮病(和其它全身性自身免疫疾病)自身抗原CENP-A、U5、小核內核糖核蛋白(snRNP)、PM-Scl自身抗原的100-kd蛋白質、核仁的U3-和Th(7-2)核糖核蛋白、核糖體蛋白L7、來自核M抗原的36-kd蛋白質、胰島素、胰島素原、GAD65和GAD67、熱休克蛋白65(hsp65)和胰島細胞抗原69(ICA69)、胰島細胞抗原相關性蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)、GMH神經節苷脂、谷氨酸脫羧酶(GAD)、胰烏細胞抗原(ICA69)、T印69、由來自糖尿病患者的T細胞識別的單個T細胞表位、ICA512、I型糖尿病的自身抗原、I型糖尿病中的胰島細胞蛋白酪氨酸磷酸酶和由其衍生的37-kDa自身抗原(包括IA-2、IA-2)、來自In-lll細胞或人甲狀腺濾泡細胞的64kD蛋白質(其與來自具有胰島細JJ^面抗體(ICSA)的患者的血清發生免疫沉淀)。具體而言，類風濕性關節炎抗原包括45kDaDEK核抗原、尤其是幼年特發性類風濕性關節炎和虹膜睫狀體炎、人軟骨糖蛋白-39、類風濕性關節炎中的自身抗原、類風濕性關節炎中的68kd自身抗原、膠原、II型膠原、軟骨連接蛋白、埃茲蛋白、根蛋白和膜突蛋白、分枝桿菌熱休克蛋白65、甲狀腺過氧化物酶和促甲狀腺激素受體、來自人Graves甲狀腺組織的甲狀腺過氧化物酶、與甲狀腺相關性眼病有關的64-kDa抗原、人TSH受體和來自In-lll細胞或人甲狀腺濾泡細胞的64kD蛋白質(其與來自具有胰島細胞表面抗體的患者血清發生免疫沉淀)。絲合過敏原的治療性抗原結合性多肽在某些實施方案中，接受本發明方法和組合物處理的抗原結合性多肽可以結合導致過敏性疾病或病癥的過敏原或分子。此類抗原結合性多肽可以結合至IgE、IgE受體、T細胞受體(TCR)、細胞因子或過敏原，例如來自室內塵螨、草花粉、樺樹花粉、M花粉、榛花粉、蟑螂、稻、￡樹花粉、真菌、蘑菇、蜂毒、動物過敏原例如來自馬、狗和貓等，過敏原還包括乳膠過敏原。結合病原體和相關毒素的治療性抗原結合性多肽在某些實施方案中，接受本發明方法和組合物處理的抗原結合性多肽可以結合病原體，例如細菌性、真菌性或病毒性病原體，或者例如其毒素。此類抗原結合性多肽結合至病原體(或其毒素)，包括耶爾森氏菌(Yersinia)例如鼠疫病原體鼠疫耶爾森氏菌(Yersiniapestis)，尤其是V抗原；炭疽病原體炭疽芽孢桿菌(Bacillusanthracis)，尤其是炭疽保護性抗原(PA)或致死因子(LF);葡萄球菌(Staphylococcus)例如金黃色葡萄球菌(S.aureus)和表皮葡萄球菌(S.epidermidis);和鏈球菌(Streptococcus)和/或它們相的關毒素；大腸桿菌(E.coli)，例如引起食源性疾病的0-157:H7林；霍亂菌(Cholerabacterium)例如霍亂弧菌(Vibriocholerae)或其腸毒素；幽門螺桿菌(Helicobacterpylori)，例如抗原CagA和VacA;衣原體(Chlamydia);淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhoeae);和腦膜炎奈瑟、菌(Neisseriameningitidis);百日咳桿菌(Bordetellapertussis);';充產布魯氏菌(Brucellaabortus);腦膜炎球菌抗原；肺炎球菌抗原；單核細胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes);沙門氏菌(Salmonella);志賀菌屬(Shigella)和結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis);病毒性病原體，例如漢坦病毒、黃病毒、流感病毒；HIV例如抗原Gag、Pol、Vif和Nef;輪狀病毒；單純皰滲病毒I/II型；A、B、C或G型肝炎；狂犬病毒；乳頭瘤病毒；Epstem-Barr病毒(EBV);麻滲病毒；CMV和寄生蟲。通常，本發明的制劑包含用于通過耙向A/J肽治療淀粉狀蛋白生成性疾病、尤其是阿爾茨海默病的多種抗體。術語"Aj8抗體"、"抗Aj8抗體，，和"抗A/3，，在本文中可互換地使用以指與人淀粉樣前體蛋白(APP)、蛋白或兩者的一個或多個表位或抗原決定簇結合的抗體。示例性表位或抗原決定蔟可以存在于APP內，但是優選地存在于APP的AP肽內。存在APP的多個同種型，例如APP695、APP751和APP770。APP內的4^酸根據APP770同種型的序列(見例如GenBank登錄號P05067)賦予編號。目前已知存在于人中的APP的特定同種型的實例是由Kang等(1987)Nature325:733-736描述的指定為"正常，，APP的695個氨基酸多肽；由Ponte等(1988)Nature331:525-527(1988)和Tanzi等(1988)Nature331:528-530描述的751個氨基酸多肽和由Kitaguchi等(1988)Nature331:530-532描述的770個氨基酸多肽。作為APP受不同分泌酶在體內(invivo)或原位(insitu)的蛋白水解加工的結果，A卩以40個M酸長度的"短形式"和范圍是42-43個絲酸長度的"長形式"存在，短形式的A|34()由APP的第672-711位殘基組成。長形式例如A^2或A^3分別由第672-713或672-714位g組成。APP疏水性結構域的部分存在于Aj5的氛基端，并且具有A/S聚集的能力，尤其^l^在長形式的情況下。Ap肽可以存在于人和其它哺乳動物，包括正常個體和患有淀粉狀蛋白生成性疾病個體的體液例如腦脊液內，或從其中純化。術語"P-淀粉樣蛋白"、'，淀粉樣肽"、"p-淀粉狀蛋白"、"AP"和"Aj3肽，，在本文中可互換地使用。A卩肽(例如AP39、AP40、Ap41、A|342和A(343)是APP的39-43個^J^酸的約4-kDa內部片段。例如，A&40由APP第672-711殘基組成并且AP42由APP第672-713位^JiBL成。A/S肽包括源自分泌酶切割APP所產生的肽和具有與切割產物的相同或基;M目同序列的合成肽.Aj3肽可以衍生自多種來源，例如組織、細胞系或體液(例如血清或腦脊液)。例如，如在Walsh等(2002)，Nature,416，第535-539頁所述，A3肽可以衍生自表達APP的細胞，如以APP717V—F穩定轉染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。Ai3肽制劑可以使用如前所述的方法衍生自組織來源(見例如Johnson-Wood等，(1997)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:1550)。備選地，A/3肽可以使用本領域眾所周知的方法合成。見例如，Fields等，SyntheticPeptieds:AUser'sGuide,Grant編輯，W.H.Freeman&Co.,NewYork，NY，1992，第77頁。因此，肽可以利用采用t-Boc或F-moc化學保護a-氨基團和側鏈受保護的氨基酸的自動化的Merrifield固相合成技術在例如AppliedBiosystems肽合成儀430A或431型上合成。較長的肽抗原可以4吏用眾所周知的重組DNA技術合成。例如，可以合成或分子克隆編碼肽或融合肽的多核苷酸并插入合適的表達載體，用于轉染合適的宿主細胞并異源表達。AP肽還指由正常基因的AP區內的突變產生的相關AP序列.術語"表位"或"抗原決定簇"指抗原上與免疫球蛋白或抗體(或其抗原結合片段)特異性結合的位點。與A^抗體結合的示例性表位或抗原決^H可以存在于人淀粉樣前體蛋白(APP)，但優選地存在于APP的AP肽內。A|3內的示例性表位或抗原決定簇可以位于A|3的JUl末端、中央區或g末端。"^J^末端表位"是位于AP肽的^J^末端內的表位或抗原決^JL示例性氨基末端表位包括AP的第1-10或1-12位氨基酸內的瓶基，優選地來自A卩42的第l-3、1-4、1-5、1-6、1-7、2-6、2-7、3-6或3-7位殘基。其它示例性M末端表位從的第1-3位^JJt開始并在第7-11位殘基處結束。額外的示例性M末端表位包括A卩的第24、5、6、7或8位戎基，A卩的第3-5、6、7、8或9位殘基或A卩42的第4-7、8、9或10位瓶基。"中央"表位是包含位于肽的中央或中間部分的瓶基的表位或抗原決定簇，示例性中央表位包括A^的第13-28位氨基酸內的殘基，優選地來自A0的第14-27、15-26、16-25、17-24、18-23或19-22位殘基,其它示例性中央表位包括A(3的第16-24、16-23、16-22、16-21、18-21、19-21、19-22、19-23或19-24位氨基酸內的殘基，"g末端"表位或抗原決;UI位于Ap肽的g末端內并包括Ap的第33-40、33-41或33-42位M酸內的殘基。額外的示例性氯基末端表位或抗原決定簇包括A3的第33-40位殘基。當稱抗體結合至所指定殘基例如AP第3-7位內的表位時，其所指的是抗體特異性地結合至含有指定殘基(即本實例中的A(3第3-7位)的多肽。此抗體實際并沒有接觸A卩第3-7位內的每一殘基。AP第3-7位內的每一單獨氨基酸替換或缺失實際也不顯著地影響結合親和力。在多種實施方案中，AP抗體是末端特異性的。如本文中所用，術語"末端特異性"指這樣的抗體，其特異性結合至AP肽的^末端^J^J^末端殘基，但不識別存在于包含該g的較長AP種類或在APP中的相同殘基。在多種實施方案中，AP抗體是"g末端特異性的"。如本文中所用，術語"絲末端特異性"意指抗體特異性地識別AP肽的游離絲末端。g末端特異性Ap抗體的實例包括這些Ap抗體:識別在第40位殘基處結束的AP肽但不識別在第41、42和/或43位泉基處結束的AP肽；識別在第42位殘基處結束的Aj3肽而不識別在第40、41和/或43位殘基處結束的AP肽等。在一個實施方案中，Aj8抗體可以是3D6抗體或其變體，或10D5抗體或其變體，兩種抗體均在美國專利公布號20030165496Al、美國專利公布號20040087777Al、國際專利>^布號WO02/46237A3和國際專利7〉布號WO04/080419A2中描述。對3D6和10D5抗體的描i^可以在例如國際專利公布號WO02/088306A2和國際專利公布號WO02/088307A2中找到。額外的3D6抗體在美國專利申請號11/303,478和國際專利申請號PCT/US05/45614中描述。3D6是特異性地結合至位于人0-淀粉樣肽內的M末端表位、尤其是第1-5位殘基的單克隆抗體(mAb)。作為比較，10D5是特異性結合至位于人i8-淀粉樣肽內的Jl^末端表位、尤其是第3-6位殘基的mAb.在另一個實施方案，抗體可以是如美國專利公布號20040082762Al和國際專利公布號WO03/077858A2中所述的12B4抗體或其變體。12B4是特異性地結合至位于人^淀粉樣肽內的ILi末端表位、尤其是第3-7位殘基的mAb。仍在另一個實施方案，抗體可以是如美國專利公布號20050118651Al和國際專利公布號WO04/10885A2中所述的12A11抗體或其變體。12A11是特異性地結合至位于人/3-淀粉樣肽內的M末端表位、尤其是第3-7位殘基的mAb。仍在另一個實施方案中，抗體可以是例如題為"HumanizedAntibodiesthatRecognizeBetaMmyloidPeptide."的美國專利申請號11/304,986和國際專利申請號PCT/US05/45515中所述的15C11抗體或其變體。15C11是特異性結合至位于人/3-淀粉樣肽內的中央表位、尤其是第19-22位殘基的mAb。仍在另一個實施方案中，抗體可以是如美國專利乂〉布號20050249725A1和國際專利7>布號WO01/62801A2中所述的266抗體。用于本發明中的設計旨在特異性結合至位于人^-淀粉樣肽內的^&末端表位的抗體包括但不限于如美國專利號5，786，160中所述的369.2B。本發明內所用的抗體可以重組產生或合成產生。例如，抗體可以通過重組中國倉鼠卵巢(CHO)細胞培養方法產生。此外，本發明考慮了具有較小修飾的保留了結合性Aj8肽主要功能性特性的抗體。在特定的實施方案中，抗體是選擇性地結合肽的人源化抗A/3肽3D6抗體。更具體地，將人源化的抗肽3D6抗體設計成特異性地結合至位于在(例如在患有的阿爾茨海默病的患者)腦內蝕斑沉積物中存在的人0-淀粉狀蛋白1-40或1-42肽的氨基末端表位。圖1提供了稱作h3D6v2的示例性人源化抗A/S肽3D6抗體的結構預測示意圖.^目應表達載體的DNA序列中預測的h3D6v2輕鏈和重鏈的完整M酸序列示于圖2(其中以輕鏈和重鏈的M末端作為瓶基編號1開始對殘基編號)。重鏈DNA序列所編碼的最末氨基酸^J^Lys449未在h3D6v2成熟的分泌形式中觀察到，并且不希望受到任何特定理論束縛，估計該氨基酸殘基可能在細胞內加工期間由CHO的細胞蛋白酶除去。因此，h3D6v2重鏈的g末端任選地是Gly448。g末端賴氨酸的加工已經在重組抗體和質粒衍生抗體內觀察到并且似乎不影響它們的功能(Harris(1995)J.Chromatogr.A.705:129-134)。純化的h3D6v2通過將N連接的葡聚糖添加至已知含有單個N糖基化作用共有位點的重鏈Fc部分進行翻譯后修飾。N-糖基化作用共有位點顯示具有在哺乳動物IgG蛋白質的類似N糖基化作用位點上常見的三種主要的二天線復雜型中性寡糖結構。另一個示例性人源化抗A/3肽抗體是具有圖2中所述的序列但在輕鏈的位置1處存在D—Y替換的人源化3D6版本1(hu3D6vl)。在本發明的多種實施方案中，抗A/3抗體(例如，人源化抗A/3肽3D6抗體)以約o.lmg/ml至約100mg/ml、以約0.1mg/ml至約75mg/ml、以約0.1mg/ml至約50mg/ml、以約0.1mg/ml至約60mg/ml、以約0.1mg/ml至約40mg/ml、以約0.1mg/ml至約30mg/ml、以約10mg/ml至約20mg/ml、以約20mg/mlto30mg/ml或更高濃度存在，例如，高至約100mg/ml、約200mg/ml、約500mg/ml或約1000mg/ml或更高濃度。在多種實施方案中，抗A0抗體以約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25mg/ml存在。在特定的實施方案中，抗體(例如，人源化抗Aj8肽3D6抗體)以約17mg/ml存在。在另一個特定的實施方案中，抗體(例如，人源化抗A/S肽3D6抗體)以約20mg/ml存在。在另一個特定的實施方案中，抗體(例如，人源化抗Aj8肽3D6抗體)以約30mg/ml存在。在以上所引用的濃度之間的范圍，例如約12mg/ml至約17mg/ml也是本發明的部分。例如，包括使用任意如上所引用的值的組合作為上限和/或下限的值范圍。賦形劑在多種實施方案中，本發明提供可以包括多種賦形劑的制劑，賦形劑包括但不限于緩沖劑、抗氧化劑、張力劑和穩定劑。此外，制劑可以^^有pH調節劑(例如HC1)和稀釋劑(例如7JC)。賦形劑部分地起到維持抗體的穩定性和生物學活性的作用(例如，通過維持蛋白質的正確構象)和/或維持pH。緩沖劑在本發明的多個方面，制劑包括緩沖劑.緩沖劑可以起到增強制劑的等張性和化學穩定性的作用。此外，緩沖劑起到維持生理適合的pH(例如，約pH6.0)的作用。通常，制劑應當具有生理適合的pH。在本發明的多種實施方案中，制劑應當具有約5至約7至或從約5.5至約6.5的？11。在特定的實施方案中，制劑具有約6的pH。在以上所引用的pH水平之間的范圍，例如約pH5.2至約pH6.3(例如，pH6.2)也是本發明的部分。例如，包括4吏用任意如上所引用的值的組合作為上限和/或下限的值范圍。pH可以在需要時通過本領域已知的技術調節。例如，可以根據需要添加HC1以pH至所需要的水平。緩沖劑可以包括但不限于琥珀酸(鈉或磷酸鹽)、組氨酸、磷酸(鈉或鉀)、Tris(三(羥甲基)氨基甲烷)、二乙醇胺、檸檬酸、其它有機酸及其混合物。在特定的實施方案中，緩沖劑是組氨酸(例如，L-組氨酸)。在另一個特定的實施方案中，緩沖劑是琥珀酸。在另一個實施方案中，制劑包括以足夠維持制劑處于生理適合的pH的量存在的氨基酸，如組氨酸。組氨M在生理pH范圍內具有緩沖能力的示例性氨基酸。組氨酸的緩沖能力源自它的咪哇基團。在一個示例性實施方案中，緩沖劑是L-組氨酸(堿)(例如C6H9N302，FW:155.15)。在另一個實施方案中，緩沖劑是單鹽酸一水L-組氨酸(例如C6H9N302.HC1.H20，FW:209.63)。在另一個示例性實施方案中，緩沖劑是L-組氨酸(堿)和單鹽酸一水L-組氨酸的混合物。在一個實施方案中，緩沖劑(例如，L-組氨酸或琥珀酸)以約0.1mM至約50mM、以約O.lmM至約40mM、以約0.1mM至約25mM、以約0.1mM至約30mM、以約0.1mM至約20mM或以約5mM至約15mM、優選地約5mM或lOmM存在。在多種實施方案中，緩沖劑可以以約5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、或15mM存在。在特定的實施方案中，緩沖劑以約10mM存在。在以上所引用的濃度之間的范圍，例如約12mM至約17mM，也是本發明的部分。例如，包括使用任意如上所引用的值的組合作為上限和/或下限的值范圍。在某些實施方案中，緩沖劑以足夠維持生理適合的pH的量存在，張力劑在本發明的多個方面，制劑包括張力劑。張力劑部分地助于維持制劑的等張性及維持蛋白質水平。張力劑部分地助于保持制劑中存在的有治療活性的多肽的水平、比率或比例。如本文中所用，術語"張力"指流體環境或溶液中生物成分的特性。等張溶液具有與血漿相同的滲透壓，并且因此可以靜脈內輸注至受試者而不改變受試者的血漿滲透壓。因此，在本發明的一個實施方案中，張力劑以足夠使制劑適合用于靜脈內輸注的量存在。張力劑常常也起到填充劑的功能。因此，張力劑可以允許蛋白質經受多種脅迫如冷凍和剪切。張力劑可以包括但不限于CaCh、NaCl、MgCl2.乳糖、山梨醇、蔗糖、甘露醇、海藻糖、棉子糖、聚乙二醇、羥乙基淀粉、甘氨酸及其混合物。在特定的實施方案中，張力劑是甘露醇(例如D-甘露醇，例如C6H1406，FW:182.17)。在一個實施方案中，張力劑(例如，甘露醇)以約2%至約6。/。w/v或約3%至約5。/。w/v存在。在另一個實施方案中，張力劑以約3.5%至約4.5%w/v存在。在另一個實施方案中，張力劑以約20mg/ml至約60mg/ml、約30mg/ml至約50mg/ml、或約35mg/ml至約45mg/ml存在。在特定的實施方案中，張力劑以約4。/。w/v或約40mg/ml存在。在另一個特定實施方案中，張力劑以約6%w/v存在。仍在另一個特定實施方案中，張力劑以約10。/。w/v存在。在以上所引用的濃度之間的范圍，例如約3.2%至約4.3%w/v或約32mg/ml至約43mg/ml，也是本發明的部分。例如，包括使用任意如上所引用的值的組*為上限和/或下限的值范圍。張力劑應當以足夠的量存在于以致維持制劑的張力。抗氧化劑在本發明的多個方面，制劑包括抗氧化劑以致于部分地保存制劑(例如，通過防止氧化作用)。抗氧化劑可以包括但不限于GLACy-亞麻酸)-硫辛酸、DHA(二十二碳六烯酸)-硫辛酸、GLA-生育酚、二-GLA-3，3，-硫代二丙酸以及例如任意的與任何天然或合成抗氧化劑化學連接的GLA、DGLA(二高y亞麻酸)、AA(花生四烯酸)、SA(7JC楊酸)、EPA(二十碳五烯酸)或DHA(二十二碳六烯酸)。這些抗氧化劑包括酚類抗氧化劑(例如，丁子香酚、鼠尾草酸、咖啡酸、BHT(丁基化羥基苯甲醚)、沒食子酸、生育酚、生育三烯酚和黃酮類抗氧化劑(如楊梅黃酮和漆黃素))、多烯(例如，視黃酸)、不飽和固醇(例如，As-avenosteroI)、有積J危化合物(例如，蒜素)、薛烯(例如，香葉醇、樅酸)和M酸抗氧化劑(例如、曱硫氨酸、半胱氨酸、肌肽)。在一個實施方案中，抗氧化劑是抗壞血酸。在特定的實施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸或其類似物，例如硒代甲減表酸、羥甲基丁烯酸、乙疏氨酸、或三氟曱減裒酸。在一個實施方案中，抗氧化劑(例如，甲疏氨酸如L-甲硫氨酸，例如CH3SCH2CH2CH(NH2)C02H,FW-149,21)以約0.1mM至約50mM、以約0.1mM至約40mM、以約0.1mM至約30mM、以約0.1mM至約20mM、或以約5mM至約15mM存在，在多種實施方案中，抗氧化劑可以約5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、或15mM存在。在特定的實施方案中，抗氧化劑以10mM存在。在另一個特定的實施方案中，抗氧化劑以15mM存在。在以上所引用的濃度之間的范圍，例如約12mM至約17mM,也是本發明的部分。例如，包括4吏用任意如上所引用的值的組合作為上限和/或下限的值范圍。在某些實施方案中，抗氧化劑應當以足夠的量存在以致于部分地通過預防氧化作用而保存制劑。穩定劑在本發明的多個方面，制劑包M定劑，也稱作表面活性劑.穩定劑是相互作用并穩定制劑中的生物分子和/或常見藥物賦形劑的特定化學化合物。在某些實施方案中，穩定劑可以與較低溫度貯藏聯合使用。穩定劑通常保護蛋白質免受常常導致蛋白質聚集的空氣/溶液界面誘導的張力和溶'^/表面誘導的張力影響。穩定劑可以包括但不限于甘油、聚山梨酯如聚山梨酯80、二羧酸、草酸、琥珀酸、已二酸、延胡索酸、苯二甲酸及其組合。在特定的實施方案，穩定劑是聚山梨酯80。在一個實施方案中，穩定劑(例如，聚山梨酯80)以約0.00"/。w/v至約0.01%w/v間、約0.001%w/v至約0.009%w/v間、或約0.003%w/v至約0.007。/。w/v存在。在特定的實施方案中，穩定劑以占制劑的約0.005°/ow/v存在。在另一個特定的實施方案中，穩定劑以約0.01。/ow/v存在。在以上所引用的濃度之間的范圍，例如約0.002%w/v至約0.006%w/v，也是本發明的部分。例如，包括使用任意如上所引用的值的組合作為上限和/或下限的值范圍。穩定劑應當以足夠量存在以致于穩定A)S結合性多肽(例如，抗抗體)。其它可藥用的栽體、賦形劑或穩定劑，如在Osol,A編輯的Remington'sPharmaceuticalSciences第16版(1980)中所述的栽體、賦形劑或穩定劑，可以包括在制劑內，只要它們沒有不利地影響制劑所需要的特性即可。在特定的實施方案中，制劑基本上無防腐劑，雖然在替代實施方案中，可以根據需要包括防腐劑，例如，當將制劑凍干時可以包括冷凍保護劑或凍干保護劑。在本發明的多個方面，制劑任選地包括一些類別或所有類別的如上所述的賦形劑，在一個方面。本發明的制劑包括抗原結合性多肽(例如，抗AiS抗體)、甘露醇和組氨酸。在特定的實施方案中，制劑可以包括抗ll/化劑如甲名危氨酸和/或穩定劑如聚山梨酯80。在某些實施方案中，制劑具有約6的pH。在另一個方面，制劑包括抗原結合性多肽(例如，抗A^抗體)、甘露醇、組氨酸和甲硫氨酸。仍在另一個方面，制劑包括A^結合性多肽(例如，抗A/S抗體)、甘露醇、組氨酸、甲硫氨酸和聚山梨酯80。在本發明的特定方面，制劑包括約20mg/ml的AjS結合性多肽(例如，抗Aj8抗體)、10mM組氨酸、10mM甲硫氨酸、4%甘露醇并具有約6的pH。在本發明的另一個方面，制劑包括約20mg/ml的A/3結合性多肽(例如，抗Aj3抗體)、10mM組氨酸、10mM甲硫氨酸、4。/。w/v甘露醇、0.01V。w/v聚山梨酯80并具有約6的pH。在本發明的另一個方面，制劑包括約20mg/ml的Aj8結合性多肽(例如，抗A/3抗體)、10mM組氨酸、10mM甲硫氨酸、4%w/v甘露醇、0.005%w/v聚山梨酯80并具有約6的pH。本發明的示例性實施方案提供常常用作原料藥物產物的抗原結合性多肽(例如，抗Aj8抗體)的濃縮制品。此外，本發明的示例性實施方案對冷凍、凍干和/或重構穩定。此外，本發明的示例性實施方案經歷延長的時間期限后穩定.例如，本發明的制劑穩定至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個月。在特定的實施方案中，本發明的制劑穩定至少約12個月、至少約18個月、至少約24個月、或至少約30個月。根據本發明，制劑可以在約-80。C至約40°C、約0°C至約25。C、約0°C至約15°C、或約0°C至約10。C、優選地約2。C至約8°C的溫度下貯存。在多種實施方案中，制劑可以在約0。C、1。C、2。C、3。C、4。C、5。C、6。C、7°C、8°C、9。C或10。貯存。在特定的實施方案中，制劑在約5。C貯存。通常，制劑在這些溫度范圍內穩定并且保留生物學活性。在以上所引用的溫度之間的范圍，例如約2°<:至約17°0:，也是本發明的部分。例如，包括使用任意如上所引用的值的組合作為上限和/或下限的值范圍。本發明的制劑適合于通過多種技術送遞。在某些實施方案中，制劑經腸胃外如靜脈內或肌內施用。額外地，人們可以將制劑向腦(例如，以便抗體可以穿過血腦屏障)或脊液耙向遞送。在特定的實施方案中，制劑經靜脈內施用。本發明制劑的有效劑量根據眾多不同因素變動，包括施用手段、把位點、患者生理狀態、患者是人還是動物、所施用的其它藥物、以及治療是預防性的還是治療性的。通常，患者是人，但&可以治療包括轉基因哺乳動物在內的非人哺乳動物。治療劑量需要滴定以最優化安全性和效力。對于用抗體的被動免疫，示例性劑量范圍為占宿主體重的約0.0001mg/kg至100mg/kg、并且更通常約O.Olmg/kg至約5mg/kg、約0.15mg/kg至約3mg/kg、約0.5mg/kg至約2mg/kg、優選地約1mg/kg至約2mg/kg。例如劑量可以是1mg/kg體重或20mg/kg體重或在1-20mg/kg的范圍內，優選地約1mg/kg、約2mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg或約15mg/kg。在其它的示例性實施方案中，劑量可以是至少0.5mg/kg(例如0.5、0.6、0.7、0.75、0.8、0.9、1.0、1.2、1.25、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.75、1.8、1.9、或2.0mg/kg)、至少0.75mg/kg、至少1.25mg/kg、至少1.5mg/kg、至少1.75mg/kg或至少2mg/kg。受試者可以每日、隔日、每周或根據經驗性分析所確定的任何其它方案施用此劑量.示例性治療使得以多次劑量在延長的時間例如至少6個月內施用成為可能。其它示例性治療方案使得每兩周一次、每月一次或每3至6個月一次施用成為可能。示例性劑量方案包括在連續日內施用1-10mg/kg或15mg/kg、隔日施用30mg/kg或每周施用60mg/kg。在一些方法中，同時施用具有不同結合特異性的兩種或多種單克隆抗體，在此情況下所施用的每一抗體的劑量處于所標注的范圍內。抗體通常多次施用。單次劑量間的間隔期可以是每周、每月或每年。間隔期還可以是不規則的，如測量患者中抗AP抗體的血液水平所指示。在一些方法中，調整劑量以實現1-1000ng/ml的血漿抗體濃度并且在某些方法中，實現25-300jig/ml的血漿抗體濃度。備選地，抗體可以作為緩釋制劑施用，在此情況下需要較少頻率的施用。劑量和頻率根據患者中抗體的半壽期變動。通常，人抗體顯示具有最長的半壽期，1^是人源化抗體、嵌合抗體和非人類抗體。施用的劑量和頻率根據治療是預防性還是治療性而變動。在預防性應用時，將含有本抗體或其混合物的制劑施用至已經不處于疾病狀態的患者以增強患者的抵抗力。將此量定義為"預防有效量"。在該用途中，精確的劑量再次取決于患者的健康和總體免疫狀態，但是通常范圍在每劑量0.1至25mg,特別是每劑量0.5至2.5mg。將相對低劑量以相對不頻繁的間隔期長時間施用。一些患者在余生持續接受治療。在治療性應用下，有時候需要在相對短的間隔期內施用相對高的劑量(例如，每劑量從約0.5或l至約200mg/kg(例如0.5、1、1.5、2、5、10、20、25、50、或100mg/kg)的抗體，更常用從5至25mg/kg的劑量)直至疾病進程被控制或終止，并且優選地直至患者表現出疾病癥狀得到部分或完全改善。此后，對患者可以執行預防性方案。為了易于施用和劑量的均一性，提供劑量單位形式的本發明制劑是有用的。本發明的制劑可以存在于膠囊、安瓿或在多劑量容器內。單位劑型可以包含本文中所描述的任意制劑，其包括活性組分的混懸劑、溶液劑或乳劑以及配制劑如混懸劑、穩定劑和/或^t劑。在示例性實施方案中，藥物劑量單位形式可以在例如通過靜脈內輸注向患者施用之前添加至具有合適的稀釋劑例如無菌無熱源7jc或生理鹽水的靜脈內滴注袋(例如50ml、100ml、或250ml、或500ml滴注袋)或在其中重構。一些藥物單位劑型可能需要在添加至靜脈內滴注袋之前以合適的稀釋劑重構，特別是凍干形式的藥物單位劑型，在示例性的實施方案中，藥物單位劑型是含有本文中所述制劑的容器。術語"容器"指為貯存可以將物體或流體在其中放置或容納的某物，例如儲蓄器、接受器或貯器。例如，容器可以是IOml玻璃I型管狀小瓶。通常，容器應當保持制劑的無菌性和穩定性。例如，小瓶可以用血清瓶塞密封。此外在多種實施方案中，應當如此設計容器以便允許抽取100mg制劑或活性成分(例如，用于單次使用)。備選地，容器可以適用于大量的制劑或活性成分，例如從約10mg至約5000mg、從約100mg至約1000mg并且從約100mg至約500mg、從約40mg至約250mg、從約60mg至約80mg、從約80mg至約120mg、從約120mg至約160mg、或其范圍或間隔、例如從約100mg至約200mg。在以上所引用的量之間的范圍，例如例如從約25mg至約195mg，也是本發明的部分。例如，包括使用任意如上所引用的值的組合作為上限和/或下限的值范圍，在特定的實施方案中，常常提供作為單位劑型的液體制劑.在另一個方面、本發明提供試劑盒，其包括藥物劑量單位形式(例如，具有本文中公開的制劑的容器)和用途說明書。因此，容器和試劑盒可以設計成能提供足夠制劑用于多種用途。在多種實施方案中，試劑盒還可以包括稀釋劑。稀釋劑可以包括獨立的或組合的賦形劑。例如，稀釋劑可以包括張力調節劑如甘露醇、緩沖劑如組氨酸、穩定劑如聚山梨酯80、抗氧化劑如甲硫氨酸和/或其組合。稀釋劑可以含有如本領域技術人員認為必要的其它賦形劑，例如凍干保護劑.本發明其它的有用實施方案在本申請中題為"發明簡述"的部分中陳述。本發明進一步由如下實施例說明，實施例不應當解釋為是限制性的。本申請通篇所引用的全部參考文獻、專利和公開的專利申請的內容，以及附圖引入本文作為參考。實施例在全部實施例中，使用如下材料和方法，除非另外說明。材料和方法通常，除非另外說明，本發明的實施采用了化學、分子生物學、重組DNA技術、免疫學(尤其是例如抗體技術)中的常規技術和多肽制備的標準技術。見例如Sambrook;Fritsch和Maniatis，MolecularCloning:ColdSpringHarborLaboratoryPress(1989);AntibaodyEngineeringProtocols(MethodsinMolecularBiology),510，Paul,S.，HumanaPr(1996);AntibaodyEngineering:APracticalApproach(PracticalApproachSeries,169)，McCafferty編輯，IrlPr(1996);Antibaody:ALaboratoryManual,Harlow等，C.S.H丄.Press,Pub.(1999);和CurrentProtocolsinMolecularBiology,編者Ausubel等，JohnWiley&Sons(1992)。實施例1:治療性多肽的克隆和表達在本實施例中，描述了治療性多肽，尤其是抗原結合性多肽(即能夠結合AP的抗體)的克隆和表達。用于才艮據本發明方法配制的示例性抗體是3D6。3D6mAb對A/3M末端具有特異性并且已經證實介導淀粉樣斑的胞^(例如，誘導M)。3D6不識別分泌型APP或全長APP，但是僅檢測具有^J^末端天冬氨酸的A/S。因此3D6是末端特異性抗體。指定為RB963D6.32.2.4的產生3D6抗體的細胞系具有ATCC登錄號PTA-5130，已于2003年4月8日保藏。3D6抗體的克隆、表征和人源化在美國專利申請公開號20030165496Al中描述。簡而言之，抗AP肽小鼠單克隆抗體(稱為m3D6)的人源化如下實施，即通過逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)分離用于m3D6輕鏈和重鏈可變區(Vl和Vh)的DNA序列。基于已確定的m3D6W和VhDNA序列，鑒定同源的人框架區。為保iiA源化抗體保留與肽抗原相互作用的能力，在人源化的3D6序列中保留小鼠v^和vh框架關鍵殘基以在人k輕鏈和IgGl重鏈序列環境下保留恒定結構域區(CDR)的蒼沐結構。通過此方法鑒定的編碼人源化3D6Vl和Vh序列的DNA序列(包括5'信號肽序列和3，內含子剪#^序列)如下產生，即通過使合成的重疊DNA寡核苷酸退火，隨后通過DNA聚合酶填充反應。每一人源化可變區序列的完整性通過DNA測序發汪。圖1描述了稱作h3D6v2的示例性人源化抗Aj8肽3D6抗體的結構預測示意圖。圖2確定了h3D6v2輕鏈和重鏈的完整^酸序列。人源化3D6抗體通過用編碼抗AjS抗體輕鏈和重鏈基因的表達質粒轉染中國倉鼠卵巢(CHO)宿主細胞系得到表達.表達抗體的CHO細胞使用基于氨甲蝶呤的標準藥物選擇/基因擴增方法分離。選擇顯示具有所需生產力和生長表型的克隆性CHO細胞系并用于使用無動物源成分或人源成分的化學限定培養基建立表達抗體的細胞系。實施例2:使用大恥漠生物反應器制備治療性多肽在本實施例中，描述治療性多肽、尤其是抗A^抗體的制備。多肽制造過程從穩定表達抗抗體的克隆性細胞的引子培養物的融化開始。細胞使用不含動物源或人源蛋白質的化學限定培養基培養。擴增培養物并用于接種種子反應器，其隨后用于接種多個生產生物反應器循環。生產生物反應器在補料批量培養模式下操作，在生產循環結束時，通過微過濾使條件培養基收獲物澄清，為進一步的下游加工做制備。純化過程由標準層析步驟及隨后的過濾組成。純化的抗體通it^濾加以濃縮并且滲濾至無聚山梨酯-80的配制緩沖液內。任選地，將(植物衍生的)聚山梨酯80添加至超濾/滲濾滯留池，JS1^進行滯留細菌性過濾。將藥物在-80。C冷凍貯存直至用于進一步制造成藥物產物，包括本文中所述的穩定化液體制劑。實施例3:穩定化液體多肽制劑的制備在本實施例中，描述了穩定化液體多肽制劑的一般組合物。制造兩個批次的抗體藥物產物。初始批次通過將藥物物質配制成無動物蛋白質或人蛋白質制劑，所述制劑含有每毫升20mg抗A^抗體活性物質、10mM組氨酸、10mM甲硫氨酸、4%甘露醇、0.005%聚山梨酯-80，pH6.0。將藥物產物除菌并以100mg抗抗體活性物質/瓶加至小瓶中。最終的藥物產物小瓶不含防腐劑并且僅用于單次使用.笫二批次藥物產物^吏用無聚山梨酯-80的配制緩沖液制造。實施例4:穩定化液體多肽制劑的分析在本實施例中，描述了多種穩定化的液體多肽制劑的分析。制劑的穩定性以及(尤其是)物理化學完整性(如聚集和脫酰胺作用)通過以下本領域眾所周知的方法評估外觀；pH;蛋白濃度(A280);部分地作為生物活性測試的ELISA;部分地作為聚集測試的十二烷J^L酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE);部分地作為聚集和整體穩定性測試的大小排阻高效液相色語(SEC-HPLC);部分地作為氨基化和整體穩定性測試的陽離子交換高效液相色鐠(CEX-HPLC)以及肽作圖。這些方法評估蛋白質在多種溫度的測試條件下的回收率和完整性。開展制劑的外觀分析以便確定制劑在多個溫度點的質量。分析基于視觀檢查透明度、色澤以及顆粒存在開展。例如，乳光度通過參考混懸液進行分析。根據本發明在含聚山梨酯80和不含聚山梨酯80時所制造的制劑的外觀分析表明，兩種制劑分別在-80。C、5。C、25°C和40°C下貯存如下時間點起始、l個月、2個月、3個月、6個月、9個月和12個月是可接受的，pH分析試圖確定制劑的pH是否維持于約5.5至約6.5的可接受范圍內。根據本發明在含聚山梨酯80和不含聚山梨酯80時所制造的制劑的pH分析表明，兩種制劑分別在-80。C、5°C、25。C和40。C下貯存如下時間點起始、l個月、2個月、3個月、6個月、9個月和12個月是可接受的。通常，pH從不低于5,8或高于6.2。通過A280測定蛋白質濃度以確定制劑的蛋白質濃^否維持于約17mg/ml至約23mg/ml的可接受范圍內。根據本發明在含聚山梨酯80和不含聚山梨酯80時所制造的制劑的蛋白質濃度分析表明，兩種制劑分別在-80。C、5°C、25。C和40。C下貯存如下時間點起始、1個月、2個月、3個月、6個月、9個月和12個月通常是可接受的。除了在5°C、25°C和40°C下貯存3個月的無聚山梨酯80的制劑蛋白質濃度范圍flML高于23mg/ml之外，蛋白質濃度保持在可接受的范圍內。因此，蛋白質濃度分析表明沒有可檢測的蛋白質損失發生，尤其是對于含聚山梨酯80的制劑即便在加速的條件下亦如此。此外，蛋白質濃度通常沒有在初始時間點后表現出顯著的時間和溫度依賴性變化。生物學活性的維持通過ELISA技術部分地分析。生物學活性分析為BU/mg，可接受活性是^2500BU/mg或50%(即5000BU/mg相當于100%)。根據本發明在含聚山梨酯80和不含聚山梨酯80時所制造的制劑的ELISA分析表明，兩種制劑分別在-80。C、5°C、25°C和40°C下貯存如下時間點起始、l個月、2個月、3個月、6個月、9個月和12個月通常是可接受的。除了在40°C貯存12個月的兩種制劑的生物學活性范圍略低于50%之外，生物學活性保持在可接受的范圍內。開展SEC-HPLC分析作為聚集、純度和整體穩定性的測試。SEC-HPLC在使用所指定磷酸氫二鈉緩沖液的流動相色鐠的條件下運行，若與高分子量產物和低分子量產物的百分數相比，SEC-HPLC分析確定IgG單體^90。/。，則制劑是可接受的。根據本發明在含聚山梨酯80和不含聚山梨酯80時所制造的制劑的SEC-HPLC分析表明，兩種制劑分別在-80。C、5。C、25。C和40。C下貯存如下時間點起始、1個月、2個月、3個月、6個月、9個月和12個月通常是可接受的。當兩種制劑在40。C下貯存6個月以及6個月后，兩種制劑的單體百分數范圍低于卯％(其中分析鑒定了兩種制劑在每一時間點低分子量產物大于至少10%),除此之外，單體百分數處于可接受的范圍內。SEC-HPLC分析通常表明，雖然含聚山梨酯和不含聚山梨酯的樣品的高分子量曲線和低分子量曲線隨時間不同，但是當制劑在5°C貯存時，抗體的單體形式通常保持恒定，例如保持12個月恒定。開展CEX-HPLC作為#^化和整體穩定性的測試。CEX-HPLC在使用能產生優勢峰的洗脫曲線和存留時間的NaCl緩沖液的流動相色鐠4Hf下運行，被分析成為與參考標準曲線可比或不可比的曲線.根據本發明在含聚山梨酯80和不含聚山梨酯80時所制造的制劑的CEX-HPLC分析表明，兩種制劑分別在-80。C、5°C、25。C和40。C下貯存如下時間點起始、l個月、2個月、3個月、6個月、9個月和12個月通常是可接受的。當在4o。c貯存三個月以及3個月后，兩種制劑的優勢峰'^yt曲線和存留時間不可比，除此之外，優勢峰與參考峰是可比的。通常，對5。C貯存的含聚山梨酯80的制劑的分析得出如下特別重要的結論l)乳光、pH、ELISA、CEX-HPLC、SEC誦HPLC和SDSPAGE分析均顯示，制劑經9個月后變化極微；2)在5。C貯存的制劑似乎比經加速的樣品更像經貯存9個月后的參考樣品；3)肽作圖顯示，在5。C發生變化；和4)在5。C的SEC-HPLC趨勢數據預測具有至少17.2個月的穩定性(見圖6)，然而，當消除了柱、設備和緩沖液的變異之后，用該數據預測具有大于30個月的穩定性(見圖7)。此外，在25°C貯存的含聚山梨酯80的加速的樣品在9個月后通過全部要求(圖4)。另夕卜，分析在5。C貯存的不含聚山梨酯80的制劑，得出如下特別重要的結論l)乳光、pH和ELISA分析均顯示，制劑經9個月后變化極微；2)CEX-HPLC和SDSPAGE的結果顯示，與參考樣品或-80。C貯存9個月的對照是可比的；3)SEC-HPLC分析顯示，經9個月后變化細微，而在加速的溫度下變化更顯著；和4)SEC-HPLC趨勢數據預測具有至少18個月的穩定性，即便存在測定變異亦如此(見圖8)。圖3-5是對根據本發明制造并分別在5°C、25°C和40°C貯存的制劑(含和不含PS80)的貨架壽命預測的圖形描述。通常，圖3-5表明，在較高溫度貯藏本發明的制劑降低了預期的貨架壽命.圖3尤其表明，當制劑在5。C貯藏時，制劑具有至少18個月的預期貨架壽命。圖4表明，在室溫(25。C)貯藏制劑使預期貨架壽命降低至12個月。圖5進一步表明，在40°C貯藏制劑使預期貨架壽命降低至約4個月。圖9進一步表明，例如在5。C貯存12個月和有PS80存在的情況下減少高分子量副產物例如多肽聚集物的存在。實施例5:對使用甲硫氨酸作為抗氧化劑的穩定性研究在本實施例中，描述了用氧化劑、尤其是甲硫氨酸穩定的多種液體多肽制劑的分析。開展研究以確定甲硫氨酸對治療性抗體制劑中抗體的穩定性的影響。對在多個溫度下貯存的4個抗體(抗CD22IgG4抗體)樣品開展6個月的SEC-HPLC分析pH6.0的具有20mM琥珀酸的抗體制劑；具有20mM琥珀酸和10mM甲石克氨酸的抗體制劑；具有20mM琥珀酸和0.01%PS80的抗體制劑和具有20mM琥珀酸、10mM甲硫氨酸和0.01%PS80的抗體制劑。通常，結果表明，甲硫氨酸有利地減少高分子量(HMW)形成，例如聚集物的形成。此外，甲硫氨酸降低了HMW百分數的溫度依賴性增加(見圖10)。此外，對在多個溫度(5。C和40。C)下貯存的如下4個抗體(抗B7.2IgG2抗體)樣品上開展pH穩定性研究(在pH5.8，6.0和6.2)6周(1)包括抗體、10mM組氨酸和150mMNaCl的樣品；(2)包括抗體、10mM組氨酸、150mMNaCI和0.01%PS80的樣品；(3)包括抗體、10mM組氨酸、150mMNaCl和10mM甲硫氨酸的樣品；和(4)包括抗體、10mM組氨酸、ISOmMNaCl、10mM曱硫氨酸和0.01。/oPS80的樣品。開展SEC-HPLC分析。結果顯示甲石危氨酸在指定pH范圍內降4氐副產物形成(例如HMW副產物)百分數的溫度依賴性增加(見圖11)。如圖11所示，含有甲硝森酸的樣品當在40。C維持6周時顯示具有少量聚集，這與在5。C維持6周的樣品類似。實施例6:使用差示掃描量熱法對穩定化液體多肽制劑的賦形劑分析在本實施例中，描述了使用差示掃描量熱法對多種液體多肽制劑的賦形劑分析。蛋白質藥物制劑的主要目的;l^吏處于其天然生物活性形式下的蛋白質穩定。通常，這可以通it^基礎制劑中篩選多種賦形劑并檢測它們對分子的分子量和活性的影響而實現。這些M指示著穩定性。穩定性的另一個度量是可以使用多種生物物理學技術監測的熱變性。通常，將增加的蛋白質穩定性水平歸因于高的融化溫度、變性溫度和分解溫度.因此，示例性抗原結合性多肽、尤其是IgGl單克隆抗體的熱特性可使用VP-毛細管差異掃描量熱器在多種賦形劑存在下監測。具體地，測定含多種賦形劑和10mM組氨酸(pH6.0)的制劑的表觀Tm。證實數種賦形劑使熱穩定性提高或降低。因為已將增加的蛋白質穩定性水平歸因于高的融化溫度，所以與對照Tm2/Tm3值(分別是74.9°C和83.4。C)相比，賦予樣品Tm2或Tm3值增加的賦形劑被認為是特別受到歡迎的賦形劑(見下表1)。因此，得出結論賦形劑如(配制成濃度4%和10%)葡萄糖、(配制成濃度4%和10%)蔗糖、(配制成濃度4%和10%)山梨醇和(配制成濃度4%和10%)甘露醇在穩定液體多肽制劑、尤其是抗體IgG制劑中表現特別優良。表l賦形劑分析結果<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>六在對照(10mM組氨酸，pH6.0)中，觀察到兩次轉變，1\2和1\3。在某些賦形劑存在下見到較早的轉變(Tml),等效物僅僅使用常規實驗，本領域技術人員將識別或能夠確定本文中所述的本發明具體實施方案的眾多等效物。此類等效物旨在由如下權利要求書所涵蓋。權利要求1.液體制劑，包含有治療活性的抗原結合性多肽，其中多肽表現出在貯存期間形成副產物，以及抗氧化劑，其中所述的抗氧化劑以足夠減少制劑貯存期間多肽副產物形成的量存在。2.權利要求1所述的制劑，其中有治療活性的抗原結合性多肽成分選自抗體、抗體Fv片段、抗體Fab片段、抗體Fab，(2)片段、抗體Fd片段、單鏈抗體(scFv)、單結構域抗體片段(Dab)、包含至少一個抗體互補性決定區域(CDR)的P-折疊多肽和包含至少一個抗體互補性決定區域的非球狀多肽。3.權利要求1所述的制劑，其中有治療活性的抗原結合性多肽是抗體。4.權利要求3所述的制劑，其中抗體選自亞型IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。5.權利要求3所述的制劑，其中副產物選自高分子量多肽聚集物、低分子量多肽降解產物及其組合。6.權利要求5所述的制劑，其中高分子量聚集物選自抗體抗體復合體、抗體:抗體片段復合體、抗體片段:抗體片段復合體及其組合。7.權利要求5所述的制劑，其中低分子量多肽降解產物選自抗體輕鏈、抗體重鏈、抗體輕鏈與抗體重鏈復合體、抗體片段及其組合。8.權利要求1所述的制劑，其中抗氧化劑選自甲硫氨酸及其類似物。9.權利要求8所述的制劑，其中甲硫氨酸以約0.1mM至約25mM的量存在。10.權利要求8所述的制劑，其中甲硫氨酸以約10mM的量存在。11.權利要求1所述的制劑，其中制劑適合用于腸胃外、靜脈內、肌內、皮下、顱內或硬膜外施用。12.權利要求l所述的制劑，其中制劑能夠穿越血腦屏障。13.權利要求l所述的制劑，其中制劑還包含張力劑。14.權利要求13所述的制劑，其中張力劑是甘露醇。15.權利要求13所述的制劑，其中制劑適合用于靜脈內施用。16.權利要求l所述的制劑，其中制劑還包含組氨酸。17.液體制劑，其包含抗原結合性多肽、甲硫氨酸、組氨酸和甘露醇。18.權利要求17所述的制劑，其中制劑適合用于靜脈內施用。19.前述權利要求中任一項所述的制劑，其中抗原結合性多肽與選自癌抗原、自身免疫抗原、過敏原和病原體的抗原結合。20.前a利要求中任一項所述的制劑，其中抗原結合性多肽以約O.lmg/ml至約200mg/ml存在。21.前i^利要求中任一項所述的制劑，其中抗原結合性多肽以約17mg/ml存在。22.權利要求1-20中任一項所述的制劑，其中抗原結合性多肽以約20mg/ml存在。23.權利要求1-20中任一項所述的制劑，其中抗原結合性多肽以約30mg/m存在.24.權利要求14和17-23中任一項所述的制劑，其中甘露醇以足夠維持制劑等張性的量存在。25.權利要求14和17-24中任一項所述的制劑，其中甘露醇以約2%w/v至約10%w/v存在。26.權利要求14和17-24中任一項所述的制劑，其中甘露醇以約4V。w/v存在。27.權利要求14和17-24中任一項所述的制劑，其中甘露醇以約6y。w/v存在。28.權利要求14和17-24中任一項所述的制劑，其中甘露醇以約10。/。w/v存在。29.權利要求16-28中任一項所述的制劑，其中組氨酸以足夠維持生理適合pH的量存在。30.權利要求16-29中任一項所述的制劑，其中組氨酸以約0.1mM至約25mM存在。31.權利要求16-29中任一項所述的制劑，其中組氨酸以約10mM存在。32.前述權利要求中任一項所述的制劑，還包含穩定劑。33.權利要求32所述的制劑，其中穩定劑包含聚山梨酯80。34.權利要求33所述的制劑，其中聚山梨酯80以約0.001%w/v至約0.01。/。w/v存在。35.權利要求33所述的制劑，其中聚山梨酯80以約0.005%w/v存在。36.權利要求33所述的制劑，其中聚山梨酯80以約0.01。/ow/v存在。37.前述權利要求中任一項所述的制劑，其中制劑具有約4至約9的pH。38.前n利要求中任一項所述的制劑，其中制劑具有約6至約7的pH。39.前述權利要求中任一項所述的制劑，其中制劑對于冷凍是穩定的。40.前述權利要求中任一項所述的制劑，其中制劑穩定至少約12個月。41.前述權利要求中任一項所述的制劑，其中制劑穩定至少約18個月。42.前述權利要求中任一項所述的制劑，其中制劑穩定至少約24個月。43.前i^利要求中任一項所述的制劑，其中制劑穩定至少約30個月。44.前述權利要求中任一項所述的制劑，其中制劑在約-80。C至約40°C穩定。45.前a利要求中任一項所述的制劑，其中制劑在約0。C至約25。C穩定《46.前述權利要求中任一項所述的制劑，其中制劑在約2°C至約8°C穩定。47.藥物單位劑型，包含有效量的前述權利要求任一項所述制劑，用于通過向患者施用所述劑型而治療該患者的疾病。48.權利要求47所述的藥物單位劑型，其是含有所述制劑的容器。49.權利要求47所述的容器，其是含有約1mg至約2000mg所述的A^結合性多肽的小瓶。50.權利要求47所述的容器，其是含有約50mg至約1500mg所述的A0結合性多肽的小瓶。51.權利要求47所述的容器，其是含有約5mg至約50mg所述的A)S結合性多肽的小瓶。52.權利要求47所述的藥物單位劑型，其中所述小瓶具有約2ml至約100ml的體積。53.權利要求47所述的藥物單位劑型，其中所述小瓶具有約2ml至約10ml的體積。54.權利要求47-53中任一項所述的藥物單位劑型，其適合用于向所述患者靜脈內輸注。55.試劑盒，包含a)權利要求47-54中任一項所述的藥物單位劑型；以及b)用途說明書。56.容器，包含權利要求47所述的藥物單位劑型，該容器是標注用途的容器。57.權利要求56所述的容器，其標注用于預防用途。58.權利要求56所述的容器，其標注用于治療用途。59.用于提高液體藥物制劑中抗原結合性多肽穩定性的方法，其中多M現出在液體制劑貯存期間形成副產物，該方法包括向制劑中加AJL以減少多肽副產物形成量之數量的抗氧化劑。60.權利要求59所述的方法，其中抗原結合性多肽成分選自抗體、抗體Fv片段、抗體Fab片段、抗體Fab，(2)片段、抗體Fd片段、單鏈抗體(scFv)、單結構域抗體片段(Dab)、包含至少一個抗體互補性決定區域(CDR)的^-折疊多肽和包含至少一個抗體互補性決定區域的非球狀多肽。61.權利要求59所述的方法，其中副產物選自高分子量多肽聚集物、低分子量多肽降解產物及其組合。62.權利要求59所述的方法，其中抗氧化劑選自甲硫氨酸及其類似物。63.用于制備權利要求1-46中任一項所述制劑的方法，包括組合制劑賦形劑。64.用于制備權利要求1-46中任一項所述制劑的方法，包括將抗原結合性多肽與一種或多種稀釋劑組合，其中所述的一種或多種稀釋劑包含制劑賦形劑。65.用于制備藥物單位劑型的方法，包括在合適的容器中組合權利要求1-46中任一項所述的制劑。66.用于制備權利要求1-46中任一項所述制劑的方法，包括將包含抗原結合性多肽和至少一部分賦形劑的溶液與包含剩余賦形劑的稀釋劑組合。67.在高于冷凍至約10。C的溫度下穩定至少約12個月并具有約5.5至約6,5的pH的制劑，包含i.濃度約1mg/ml至約30mg/ml的抗原結合性多肽；ii.濃度約4%w/v的甘露醇或濃度約150mM的NaCl;iii.約5mM至約10mM組氨酸或琥珀酸；和iv.10mM甲硫氨酸。68.權利要求67所述的制劑，其中制劑在約2。C至8°C的溫度下穩定至少約24個月，并且包含濃度約0.001%w/v至約0.01%w/v的聚山梨酯80。69.權利要求67所述的制劑，其中制劑具有約6.0至約6.5的？11，并且包含約10mg/ml抗原結合性多肽、約10mM組氨酸和約4%w/v甘露醇以及約0.005%w/v聚山梨酯80。70.權利要求67所述的制劑，其中制劑具有約6.0至約6.2的？11，并且包含約20mg/ml抗原結合性多肽、約10mM組氨酸、約4%w/v甘露醇以及約0.005%w/v聚山梨酯80。71.權利要求67所述的制劑，其中制劑具有約6.0至約6.2的卩11,并且包含約30mg/ml抗原結合性多肽、約10mM組氨酸、約4%w/v甘露醇以及約0.005%w/v聚山梨酯80。72.權利要求71所述的制劑，還包含約4y。w/v甘露醇。73.權利要求71所述的制劑，還包含濃度約0.001%w/v至約0.01%w/v的聚山梨酯80。74.權利要求73所述的制劑，包含約0.005o/。w/v聚山梨酯80。75.權利要求71所述的制劑，其中抗原結合性多肽以約17mg/ml至約23mg/ml的濃度存在。76.在約2°C至約8°C的溫度下穩定至少約24個月并具有約5.5至約6.5的pH的制劑，包含約2mg/ml至約23mg/ml的抗原結合性多肽、約10mM琥珀酸、約10mM甲石危氨酸、約4%w/v甘露醇以及約0.005%w/v聚山梨酯80。77.從約-50。C至-80'C融化時穩定的制劑，其包含約40mg/ml至約60mg/ml的抗原結合性多肽、約1.0mg/ml至約2.0mg/ml組氨酸、約1.0mg/ml至2.0mg/ml甲石i^酸以及約0.05mg/ml聚山梨酯80,其中制劑具有約6.0的pH。78.權利要求77所述的制劑，其中不包含甘露醇。79.制劑，其包含約20mg/ml抗原結合性多肽、約10mML-組氨酸、約10mM甲硫氨酸、約4%甘露醇并具有約6.0的pH。80.制劑，其包含約30mg/ml抗原結合性多肽、約10mM琥珀酸、約10mM甲硫氨酸、約6%甘露醇并具有約6.2的pH。81.制劑，其包含約20mg/ml抗原結合性多肽、約10mML-組氨酸、約10mM甲石泉氨酸、約4%甘露醇、約0.005%聚山梨酯80，并具有約6的pH。82.制劑，其包含約10mg/ml抗原結合性多肽、約10mM琥珀酸、約10mM甲石危氨酸、約10%甘露醇、約0.005%聚山梨酯80,并具有約6.5的pH,83.制劑，其包含約5mg/ml至約20mg/ml抗原結合性多肽、約5mM至約10mML-組氨酸、約10mM甲硫氨酸、約4。/。甘露醇、約0.005%聚山梨酯80，并具有約6.0至約6.5的？11。84.制劑，其包含約5mg/ml至約20mg/ml抗原結合性多肽、約5mM至約10mML-組氨酸、約10mM甲石;t^酸、約150mMNaCl、約0.005%聚山梨酯80，并具有約6.0至約6.5的pH。85.包含制劑的藥物單位劑型，該制劑包含a約10mg至約250mg的抗原結合性多肽；b約4%甘露醇或約150mMNaCl;c約5mM至約10mM組氨酸或琥珀酸；以及d約10mM甲硫氨酸。86.權利要求85所述的藥物單位劑型，包含約0.001%至約0.1%聚山梨酯80。87.權利要求86所述的藥物單位劑型，包含約40mg至約60mg的抗原結合性多肽。88.權利要求86所述的藥物單位劑型，包含約60mg至約80mg的抗原結合性多肽。89.權利要求86所述的藥物單位劑型，包含約80mg至約120mg的抗原結合性多肽。90.權利要求86所述的藥物單位劑型，包含約120mg至約160mg的抗原結合性多肽。91.權利要求86所述的藥物單位劑型，包含約160mg至約240mg的抗原結合性多肽。92.治療產品，包含a.包含制劑的小瓶，該制劑包含i.約10mg至約250mg的抗原結合性多肽；ii.約4%甘露醇或約150mMNaCl;Hi.約5mM至約10mM組氨酸；和iv.約10mM甲硫氨酸；以及b.用途標簽，其包含實現約0.15mg/kg至約5mg/kg劑量所需要使用的適宜體積的說明書。93.權利要求92所述的治療產品，其中劑量為約0.5mg/kg至約3mg/kg。94.權利要求92所述的治療產品，其中劑量為約1mg/kg至約2mg/kg。95.權利要求92所述的治療產品，其中抗原結合性多肽的濃度為約10mg/ml至約60mg/ml。96.權利要求92所述的治療產品，其中抗原結合性多肽的濃度為約20mg/ml。97.權利要求92所述的治療產品，還包含約0.005%聚山梨酯80。98.權利要求92所述的治療產品，其中用法是皮下施用。99.權利要求92所述的治療產品，其中用法是靜脈內施用。全文摘要本發明提供用于維持多肽、尤其是治療性抗原結合性多肽如抗體等(例如抗Aβ抗體)穩定性的制劑。制劑通常包括其量足以抑制副產物形成例如高分子量多肽聚集物、低分子量多肽降解片段和其混合物的形成的抗氧化劑。本發明的制劑任選地包含張力劑如甘露醇，以及緩沖劑或氨基酸(如組氨酸)，因此該制劑適合于數種不同的施用途徑。文檔編號C07K16/18GK101111264SQ200680003387公開日2008年1月23日申請日期2006年1月27日優先權日2005年1月28日發明者A·坎托爾,D·路易斯,N·W·沃恩申請人:惠氏公司