專利名稱：亮丙瑞林的固液合成法的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種亮丙瑞林的合成方法，特別涉及一種亮丙瑞林的固液 合成法。
背景技術：
醋酸亮丙瑞林是促黃體生成釋放激素(LH-RH)的高活性衍生物，它廣泛用于治療早熟、子宮內膜異位癥、子宮肌瘤或絕經前乳腺癌等女性患者和前 列腺癌等男性患者。在以往的報道中有固相合成法合成亮丙瑞林(ref:Tetrahedron. 53,9, 1997,3179-3194),即采用類Merrifield樹脂，從碳 端開始前四個氨基酸采用BOC法，后四個氨基酸釆用Fmoc法依次連接，最終使 用乙胺液體從樹脂上切割下來。然而使用液體乙胺切割，需要在低溫、帶壓力密 封下進行，在工業化生產中不方便，難以大規模生產。我們從這個角度出發研發 了這種固液相結合的合成方法，通過Fmoc固相法合成全保護的多肽片斷，再通 過液相片斷合成法完成肽鏈的合成，既保持固相合成的快速，又可以在非常溫和 的條件下切割，便以大規模的制備。
發明內容
本發明的目的是提供一種合成亮丙瑞林的方法，解決目前采用固相合 成法使用液體乙胺切割不方便、不安全及采用液相片斷合成時間長的問題。
本實用的技術方案包括如下步驟
1. 選用Arg(pbf).Trt(2-Cl)-ClResin在有機溶劑中通過固相合成法合成序列 為PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg的全保護多肽。有機溶劑為二氯 甲烷、N,N-二甲基甲酰胺和N,N-二甲基乙酰胺中的一種。
2. BOC-Pro-OH溶解到適量的有機溶劑中，加入NMM或EOl，在-10°C -15。C加 入氯甲酸乙酯攪拌15 30min，加入乙胺鹽酸鹽和NMM或Et3N,室溫攪拌過 夜后處理得到BOC-Pro-NHEt。合成的BOC-Pro-NHEt經2mol/L 二氧六環鹽酸 氣脫保護得到H-Pro-NHEt. HC1。有機溶劑為四氫呋喃和N， N-二甲基甲酰胺中 的一種。
3. 全保護多肽PGluR-8和H-Pro-朋Et. HC1溶解到適量的有機溶劑中，加入HOBt 和薩或DIEA,冰浴下攪拌5 15min，加入BOP或DIC， 15 30min后撤掉 冰浴，10'C-3(TC攪拌24-36小時后得到全保護的PGluP-9-NHEt。有機溶劑
為N, N-二甲基甲酰胺和N, N-二甲基乙酰胺溶劑中的一種。
4.全保護肽PGluP-9-N冊t溶于切割液(V/W，三氟醋酸對甲苯酚水苯甲硫醚硫醇為82. 5 : 5 : 5 : 5 : 2. 5)經脫保護得到亮丙瑞林粗品。
本發明中一些常用的縮寫具有以下含義
BOC-Pro-OH: N-叔丁氧羰基-脯氨酸 DMF: N， N-二甲基甲酰胺 HOBt: 1-羥基苯并三唑 NMM: N-甲基嗎啡啉
BOC-Pro-N服t: N-叔丁氧羰基-脯氨酸乙胺
H-Pro-NHEt:脯氨酸乙胺
BOP:卡特縮合劑
EtaN:三乙胺
PGlu:焦谷氨酸
His:組氨酸
Trp:色氨酸
Ser:絲氨酸
Tyr:酪氨酸
(D)-Leu: D-亮氨酸
Leu:亮氨酸
Arg:精氨酸
Pbf :2， 2， 4, 6， 7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基
Trt(2-CI)-CIResin: 2-氯-三苯基氯樹脂
Fomc-Leu-OH: N-芴甲氧羰基-亮氨酸
collidine:三甲基吡啶
DIC: 二異丙基碳化二亞胺
DIEA:二異丙基乙胺
piperide:哌啶
Fmoc:荷甲氧羰基
TFA:三氟醋酸
CH2C12: 二氯甲垸
tBu:叔丁基
Trt:三苯基
PGluR-8:序列為PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg八肽的縮寫 PGluP-9-NHEt:序列為PGlu-His-T卬-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt九 肽的縮寫
合成路線如下
<formula>complex formula see original document page 5</formula>
本發明的有益效果是本發明通過固液結合合成亮丙瑞林，既避免了純固相 合成從樹脂上切割不方便、不安全，又簡化了純液相片斷合成的繁瑣，縮短了合 成時間。
具體實施例方式
以下將參照實例對本發明作進一步的詳細描述，但本發明不限于這具體實例。
實施例1,參照合成路線，5gArg(pbf).Trt(2-CI)-ClResin(load: 0.4,1/g) 置于接肽瓶浸泡在DMF溶液中，加入Fomc-Leu-0H(摩爾比1 : 3)， DIC(摩爾比1 :1) ， HOBT(摩爾比1:1)， collidine(摩爾比1:1)， 25。C下在搖床中震蕩40min
后，用DMF洗3次，頻2洗3次，再用20。/。piperide-DMF溶液脫去Fmoc，之后 用同樣的方法依次反應直至PGLu連接上，用1%TFA- CH2Cl2溶液切割，得到3g PGlu-His(Trt)-Trp-Ser(tBu)-Tyr (tBu)-(D)-Leu-Leu-Arg(Pbf)-OH 。 B0C-Pro-0H13g (60扁1)溶解到麵1四氫呋喃中，加入NMM6. 6ml (60畫1)， 在-10°C -15。C加入氯甲酸乙酯6ml (60mmo1),攪拌15 30min后，加入乙胺 鹽酸鹽4.8g (60腿o1)，室溫攪拌過夜，后處理得到化合物BOC-Pro-NHEt。合成 的BOC-Pro-NHEt 6g經2raol/L 二氧六環鹽酸氣脫保護得到H-Pro-NHEt. HC1。 全保護的多月太PGluR-8 (1,1)和Pro-NHEt.HCl (l.lmmol)溶解到50mlDMF 中，加入HOBt(l咖ol), N固(2ramol),冰浴攪拌5 15rain，加入DIC (lmmol), 20min后撤掉冰浴，25'C攪拌34小時后處理得到全保護肽PGluP-9-NHEu全保 護肽PGluP-9-NHEt溶于切割液(V/V%，三氟醋酸:對甲苯酚水苯甲硫醚 硫醇為82. 5 : 5 : 5 : 5 : 2. 5)經脫保護得到亮丙瑞林粗品650mg。亮丙瑞林粗品 經高效液相色譜純化得到醋酸亮丙瑞林200mg, HPLC98%。
實施例2，全保護的多肽PGluR-8 (2mmo1)和Pro-NHEt. HC1 (2.2咖o1)溶解到 100mlDMF中，加入H0Bt(2mrao1), DIEA(4ramo1)，冰浴攪拌5 15min，加入B0P (2mrao1)， 25min后撤掉冰浴，15。C攪拌28小時后處理得到全保護肽 PGluP-9-NHEt,全保護肽PGluP-9-N朋t溶于切割液(V/V%，三氟醋酸對甲苯
酚水苯甲硫醚硫醇為82. 5 : 5 : 5 : 5 : 2. 5)經脫保護得到亮丙瑞林粗品
1400mg。其余與實施例1相同。
權利要求
1、亮丙瑞林的固液合成法，包括以下步驟a.合成全保護的八肽PGluR-8選用Arg(pbf).Trt(2-Cl)-ClResin在有機溶劑中通過固相合成法合成序列為PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg的全保護八肽PGluR-8；b.以N-叔丁氧羰基-脯氨酸為原料合成脯氨酸乙胺鹽酸鹽N-叔丁氧羰基-脯氨酸溶解到適量的有機溶劑中，加入N-甲基嗎啡啉或三乙胺，在-10℃～-15℃加入氯甲酸乙酯攪拌15～30min，加入乙胺鹽酸鹽以及N-甲基嗎啡啉和三乙胺中的一種，室溫攪拌過夜后處理得到N-叔丁氧羰基-脯氨酸乙胺，合成的N-叔丁氧羰基-脯氨酸乙胺經二氧六環鹽酸氣脫保護得到脯氨酸乙胺鹽酸鹽；c.全保護八肽PGluR-8和脯氨酸乙胺鹽酸鹽溶解到適量的有機溶劑中，加入1-羥基苯并三唑以及N-甲基嗎啡啉和二異丙基乙胺中的一種，冰浴下攪拌5～15min，加入縮合劑，15～30min后撤掉冰浴，10℃-30℃攪拌24-36小時后得到全保護的九肽PGluP-9-NHEt；d.全保護九肽PGluP-9-NHEt溶于切割液經脫保護得到亮丙瑞林粗品。
2、 根據權利要求1所述的亮丙瑞林的固液合成法，其特征是步驟a中有 機溶劑為二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺中的一種。
3、 根據權利要求1所述的亮丙瑞林的固液合成法，其特征是步驟b中二 氧六環鹽酸濃度為2mol/L。
4、 根據權利要求1所述的亮丙瑞林的固液合成法，其特征是步驟b中有 機溶劑為四氫呋喃和N,N-二甲基甲酰胺中的一種。
5、 根據權利要求1所述的亮丙瑞林的固液合成法，其特征是步驟c中有 機溶劑為N,N-二甲基甲酰胺和N,N-二甲基乙酰胺中的一種，縮合劑為二異丙基 碳化二亞胺和卡特縮合劑中的一種。
6、 根據權利要求1所述的亮丙瑞林的固液合成法，其特征是步驟d中切割液各組分的體積比為三氟醋酸對甲苯酚水苯甲硫醚硫醇為82. 5 : 5 :5 : 5 : 2. 5。
全文摘要
本發明涉及亮丙瑞林的一種合成方法。解決目前采用固相合成亮丙瑞林從樹脂上切割不安全，液相合成時間又長的問題。主要合成步驟a.固相合成全保護的肽鏈PGluR-8；b.合成原料Pro-NHEt.HCl；c.通過液相片斷縮合合成全保護肽PGluP-9-NHEt，使用DIC或BOP，在10℃-30℃反應24-36小時后得到；d.脫保護得亮丙瑞林粗品。本發明主要可用于合成C端為酰胺類的多肽。
文檔編號C07K7/23GK101195653SQ20061011934
公開日2008年6月11日 申請日期2006年12月8日 優先權日2006年12月8日
發明者徐紅巖, 琦 朱 申請人:吉爾生化(上海)有限公司