專利名稱：一種姬松茸粗多糖脫蛋白方法
技術領域：
本發明涉及一種姬松茸粗多糖脫蛋白方法。
背景技術：
真菌多糖是一類生物活性制品，一般需經過分離純化得到相對較純的多糖才能更好地發揮作用，尤其是要將其開發成純度較高的藥品時，除去粗多糖中所含雜蛋白的脫蛋白工藝一個必不可少的純化步驟。目前應用于多糖脫蛋白質的方法主要有采用加入一定比例的有機溶劑，如三氯乙酸、三氟乙酸法、鞣酸、Sevag試劑(三氯乙酸和正丁醇一定比例的混合液)，也可采用酶法，酶-Sevag聯用法等。其中Sevag法是一直以來經典的方法，至今應用最為廣泛。
但是在采用Sevag法脫姬松茸粗多糖蛋白時，不僅多糖損失嚴重，而且脫蛋白工藝要重復6次以上才能比較徹底，所消耗的有機溶劑數量巨大、成本高、對環境污染和操作人員傷害較大，防爆安全性差，操作周期長，一般要2天以上。
發明內容為解決現有姬松茸粗多糖脫蛋白工藝中多糖損失嚴重、有機溶劑消耗數量巨大、成本高，對環境污染和操作人員傷害較大，操作周期長等問題，本發明提供了一種姬松茸粗多糖脫蛋白方法。
本發明所述的姬松茸粗多糖脫蛋白方法，采用至少一種弱酸性陽離子樹脂或弱堿性陰離子樹脂，將姬松茸多糖進行柱層析分離游離蛋白和多糖。
依據姬松茸粗多糖所含多糖一般呈中性而蛋白帶電的性質，本發明利用離子交換樹脂與具有相反電荷的生物分子起相互交換吸附性質來實現姬松茸粗多糖脫蛋白。同時又考慮到生物活性物質不宜采用強酸、強堿型采用離子交換樹脂樹脂，故本發明采用了弱酸性陽離子樹脂或弱堿性陰離子樹脂。
所述的弱酸性陽離子樹脂可以選自下述樹脂母體為聚丙烯酸，陽離子為季銨離子，具體如德清漂萊特(中國)有限公司提供的D113。所述的弱酸性陽離子樹脂在剛出廠時一般需要進行下述步驟的預處理將樹脂置于2％鹽酸溶液中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性，然后再將樹脂置于2％NaOH中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性；最后將樹脂置于2％鹽酸溶液中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性。
所述的弱堿性陰離子樹脂可以選自下述樹脂母體為聚丙烯酸，陰離子為磺酸離子，具體如德清漂萊特(中國)有限公司提供的A830。所述的弱堿性陰離子樹脂在剛出廠時一般需要進行下述步驟的預處理將樹脂置于2％NaOH溶液中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性，然后再將樹脂置于2％鹽酸中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性；最后將樹脂置于2％NaOH溶液中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性。
離子交換樹脂產品說明
本發明所述的弱酸性陽離子樹脂或弱堿性陰離子樹脂均可以再生。弱堿性陰離子交換樹脂再生可采用2～4％NaOH溶液以3倍柱體積洗脫，動態1小時，再用純水代替NaOH洗脫洗至中性。而弱酸性陽離子交換樹脂的再生同弱堿性陰離子交換樹脂，只是用鹽酸代替NaOH。
采用本發明所述方法時，可以單柱層析，也可以多柱串聯層析。采用兩柱串聯層析時，推薦的步驟為依次采用弱堿性陰離子樹脂和弱酸性陽離子樹脂，將所述姬松茸粗多糖進行柱串聯層析分離游離蛋白和多糖。
采用本發明所述方法進行分離多糖和蛋白時，操作時間短(一般只需3～5h)，蛋白脫除率高，多糖損失小；操作過程不涉及有機溶劑采用，所用的酸、堿洗脫最后可中和成鹽，環境污染小；由于不使用有機溶劑而采用離子交換樹脂，成本低，而且可重復使用。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步說明，但本發明的保護范圍并不限于此。
實施例1 陽離子1次過柱將處理好的離子交換樹脂裝填于層析柱中，陽離子樹脂層析柱規格2.6×55cm，離子交換劑填料高45cm；上樣陽離子過柱脫蛋白，上樣量為10ml，上樣時姬松茸粗多糖中多糖含量13.00mg/ml，蛋白質含量6.23mg/ml，粗多糖料液pH為提取時自然pH(＝6.4)。
洗脫陽離子交換樹脂上樣后，去離子水蠕動泵洗脫，流速1-4mL/min，苯酚-硫酸法檢測流出液糖含量，洗脫至無糖析出，約400～800ml，然后進行再生，重復使用。分離結果見表1。
實施例2 陰離子1次過柱將處理好的離子交換樹脂裝填于層析柱中，陰離子交換樹脂規格2.6×55cm，離子交換劑填料高45cm。
上樣陰離子過柱脫蛋白，上樣量均為10ml，上樣時姬松茸粗多糖中多糖含量13.00mg/ml，蛋白質含量6.23mg/ml，粗多糖料液pH為提取時自然pH(＝6.4)。
洗脫陰離子交換樹脂上樣后，去離子水蠕動泵洗脫，流速1-4mL/min，苯酚-硫酸法檢測流出液糖含量，洗脫至無糖析出，約400～800ml。分離結果見表1。
實施例3 陰離子1次過柱將實施例2所述陰離子交換樹脂用4％NaOH溶液以3倍柱體積洗脫，動態1小時，再用純水代替NaOH洗脫洗至中性。
上樣陰離子過柱脫蛋白，上樣量均為10ml，上樣時姬松茸粗多糖中多糖含量13.00mg/ml，蛋白質含量6.23mg/ml，粗多糖料液pH為提取時自然pH(＝6.4)。
洗脫陰離子交換樹脂上樣后，去離子水蠕動泵洗脫，流速1-4mL/min，苯酚-硫酸法檢測流出液糖含量，洗脫至無糖析出，約400～800ml。分離結果見表1。
實施例4 陰陽離子串聯1次過柱將處理好的離子交換樹脂裝填于層析柱中，陰離子樹脂層析柱規格2.6×55cm，離子交換劑填料高45cm；陽離子交換樹脂規格2.6×55cm，離子交換劑填料高45cm。
上樣陰陽離子串聯過柱脫蛋白，上樣量均為10ml，上樣時姬松茸粗多糖中多糖含量13.00mg/ml，蛋白質含量6.23mg/ml，粗多糖料液pH為提取時自然pH(＝6.4)。
洗脫陰陽離子交換樹脂上樣后，去離子水蠕動泵洗脫，流速1-4mL/min，苯酚-硫酸法檢測流出液糖含量，洗脫至無糖析出，約400～800ml，然后進行再生，重復使用。分離結果見表1。
表1陰陽離子交換樹脂脫蛋白效果
權利要求
1.一種姬松茸粗多糖脫蛋白方法，其特征在于采用至少一種弱酸性陽離子樹脂或弱堿性陰離子樹脂，將姬松茸多糖進行柱層析分離游離蛋白和多糖。
2.如權利要求1所述的姬松茸粗多糖脫蛋白方法，其特征在于所述的弱酸性陽離子樹脂母體為聚丙烯酸，陽離子為季銨離子。
3.如權利要求2所述的姬松茸粗多糖脫蛋白方法，其特征在于所述的弱酸性陽離子樹脂進行下述步驟的預處理將樹脂置于2％鹽酸溶液中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性，然后再將樹脂置于2％NaOH中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性；最后將樹脂置于2％鹽酸溶液中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性。
4.如權利要求1所述的姬松茸粗多糖脫蛋白方法，其特征在于所述的弱堿性陰離子樹脂母體為聚丙烯酸，陰離子為磺酸離子。
5.如權利要求4所述的姬松茸粗多糖脫蛋白方法，其特征在于所述的弱堿性陰離子樹脂進行下述步驟的預處理將樹脂置于2％NaOH溶液中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性，然后再將樹脂置于2％鹽酸中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性；最后將樹脂置于2％NaOH溶液中浸泡2～4小時，純水洗滌3～5次至中性。
6.如權利要求1～5之一所述的姬松茸粗多糖脫蛋白方法，其特征在于依次采用弱堿性陰離子樹脂和弱酸性陽離子樹脂，將所述姬松茸粗多糖進行柱串聯層析分離游離蛋白和多糖。
全文摘要
本發明涉及一種姬松茸粗多糖脫蛋白方法，采用至少一種弱酸性陽離子樹脂或弱堿性陰離子樹脂，將姬松茸多糖進行柱層析分離游離蛋白和多糖。采用本發明所述方法進行分離多糖和蛋白時，操作時間短(一般只需3～5h)，蛋白脫除率高，多糖損失小；操作過程不涉及有機溶劑采用，所用的酸、堿洗脫最后可中和成鹽，環境污染小；由于不使用有機溶劑而采用離子交換樹脂，成本低，而且可重復使用。
文檔編號C07K1/14GK1821274SQ20061004989
公開日2006年8月23日 申請日期2006年3月17日 優先權日2006年3月17日
發明者孫培龍, 楊開, 何榮軍, 吳學謙 申請人:浙江工業大學