專利名稱：：染色體分布圖的方法和設(shè)備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的對(duì)象涉及細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域，更具體地涉及染色體分布圖。技術(shù)背景細(xì)胞遺傳學(xué)是研究細(xì)胞生命周期的中期(metaphase)階段過(guò)程中的染色體的領(lǐng)域。在該階段，染色體處于它們濃縮的最高點(diǎn)，并且最便于在正常狀態(tài)和疾病狀態(tài)下進(jìn)行研究。目前在細(xì)胞遺傳領(lǐng)域(世界范圍內(nèi))最常用的技術(shù)是短期(<10天)或長(zhǎng)期(最高達(dá)到45天)培養(yǎng)用于測(cè)試的樣品。這些樣品包括許多不同的類(lèi)型包括外周血、骨髓、羊水、實(shí)體組織、妊娠產(chǎn)物、胸腔積液等。在成功培養(yǎng)后，通過(guò)各種方法，通常獲得了中期染色體并被研究以確定是否被測(cè)試的個(gè)體具有遺傳異常。這種方法相當(dāng)復(fù)雜，并需要使用許多化學(xué)藥品和試劑以及大量的時(shí)間和專門(mén)知識(shí)。染色體研究經(jīng)常被用于進(jìn)行各種診斷目的，其包括下列l(wèi))產(chǎn)前診斷；2)外周血染色體測(cè)試(用于檢測(cè)具有異常表型特征、智力遲鈍的患者、具有不孕問(wèn)題以及多次流產(chǎn)問(wèn)題的夫婦，以確定病因是否是遺傳的)；3)白血病/淋巴瘤診斷(對(duì)于確診以及藥物治療方案的處理至關(guān)重要)以及4)實(shí)體瘤診斷和治療處理(對(duì)于包括膀胱癌、前列&t癌、腎癌、乳腺癌、肺癌等的癌癥)。大約15年來(lái)，被稱作熒光原位雜交(FISH)的技術(shù)已經(jīng)被用于獲得染色體/核型的信息。然而，該技術(shù)有限。使用FISH技術(shù)，不能夠獲得完整的核型信息。大量的FISH測(cè)試已經(jīng)被用于分裂間期階段的細(xì)胞核，通過(guò)常規(guī)的細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，在不進(jìn)行進(jìn)一步培養(yǎng)的情況下，染色體是不可見(jiàn)的。最近，使用多重?zé)晒庠浑s交(M-FISH)技術(shù)，得到更完整的染色體分析或者核型信息是可能的。但該技術(shù)的問(wèn)題是仍然需要進(jìn)行一次培養(yǎng)以獲得用于測(cè)試的染色體。只有這樣，M-FISH才能夠澄清可疑的異常，并檢測(cè)新的或者沒(méi)有被懷疑的變化。甚至更近，開(kāi)發(fā)了多種多色顯帶才支術(shù)，例如多色顯帶(MCG)、多色染色體條形碼技術(shù)、雜交種顏色顯帶技術(shù)(cross-speciescolorbandingtechnique,rx-FISH)、光譜顏色顯帶技術(shù)(SCAN)。所有這些技術(shù)中，只有MCG已經(jīng)凈皮應(yīng)用于分裂間期染色體。大部分基于FISH的技術(shù)都使用疾病特異性的探針。當(dāng)產(chǎn)生了疾病特異性的探針時(shí)，這些探針組就被限制于對(duì)具體變化現(xiàn)有的認(rèn)識(shí)例如易位、缺失、倒位、擴(kuò)增或者其他已知的染色體異常。如果沒(méi)有之前對(duì)可疑遺傳異常的了解，細(xì)胞遺傳學(xué)家們將不能夠?qū)ξ粗幕蛘邲](méi)有被懷疑的遺傳紊亂進(jìn)行診斷。利用完整的染色體描繪，能夠使之前未被發(fā)現(xiàn)的易位得到識(shí)別。然而，這是非常麻煩的工藝，并需要使用24個(gè)獨(dú)立的染色體描繪探針組。而且，該工藝僅對(duì)一種類(lèi)型的遺傳異常產(chǎn)生信息，即在兩個(gè)不同染色體之間的易位。通常在疾病過(guò)程中，遺傳變化包括許多表現(xiàn)，其包括易位、缺失或倒位。這些其它的變化特別是染色體間的改變不能夠都被目前的染色體描繪探針組所檢測(cè)。而且，它們?nèi)孕枰硗獾募膊√禺愋蕴结樈M或者多重疾病特異性探針組，進(jìn)而對(duì)于常規(guī)的臨床細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，變得成本昂貴。對(duì)于研究中期染色體，上述技術(shù)還存在許多其它的缺點(diǎn)，其包括用于識(shí)別人類(lèi)個(gè)體染色體所獲得的非常復(fù)雜的色帶帶型；這些技術(shù)需要使用非常昂貴的設(shè)備例如濾光器、雙色鏡、CCD相機(jī)、復(fù)雜的計(jì)算機(jī)軟件、干涉儀(inferometer)以及其它的專業(yè)設(shè)備以解釋帶型；這些技術(shù)并不提供完整的核型信息，即檢測(cè)某些類(lèi)型的異常例如羅伯遜易位；每種技術(shù)都是基于熒光物的，其中熒光會(huì)淬滅或者變?nèi)?，并且所得到的帶型也不是永久的；通過(guò)使用計(jì)算機(jī)軟件，所得到的帶型被指定為偽彩色(psuedo-color),而且也不能通過(guò)簡(jiǎn)單的人們的觀察而被解釋；盡管這些技術(shù)在研究配置中是有用的，但是對(duì)于在臨床細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)應(yīng)用則是不實(shí)用的；以及被結(jié)構(gòu)上改變的標(biāo)記物染色體通常是不能被描繪的，這一點(diǎn)是非常重要的，因?yàn)闃?biāo)記物染色體在許多臨床情況中具有診斷以及預(yù)測(cè)關(guān)聯(lián)。一種遺傳異常在遺傳診斷中特別重要，這種異常被稱作羅伯遜易位。羅伯遜易位是通過(guò)它們的著絲粒連接的近端著絲粒染色體之間的易位，這導(dǎo)致在核型中減少了一個(gè)著絲粒。羅伯遜易位在臨床上特別是在產(chǎn)前診斷中很重要。被稱作單親二體(UPD)的病理狀態(tài)存在于染色體13、14和15。在產(chǎn)前診斷中所檢測(cè)到的胎兒中的UPD會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)，并顯著地增加胎兒發(fā)病率。在本發(fā)明中所引用的文件和出版物，在這里被整體引入作為參考，它們的內(nèi)容與這里所提出的教導(dǎo)一致。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的是提供染色體分布圖的方法和設(shè)備。本發(fā)明的一些方面包括生成分裂間期染色體分布圖的方法，其包括獲得樣品，其含有具有用于形成分布圖的染色體的細(xì)胞；獲得物種特異性DNA才笨針，所述DNA探針能夠在染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一條染色體；將所述樣品與所述DNA探針進(jìn)行雜交；使用多種酶在染色體上產(chǎn)生有差別的色帶，以對(duì)樣品進(jìn)行比色分析；基于所述比色分析使用目視分析，以確定染色體的分布圖。該方法還"i殳計(jì)了原位雜交。在示例性實(shí)施方式中，所述原位雜交可以在載玻片上進(jìn)行。例如，該載玻片可以包括一系列的孔用于接受、雜交和分析所述DNA的分布圖。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，目視分析能夠包括光學(xué)顯微鏡或CCD相機(jī)。本發(fā)明的一些方面設(shè)計(jì)從來(lái)自羊水、外周血、胸水(pluralfluid)、骨髓、胂瘤組織、妊娠產(chǎn)物、或者含有具有用于分析的染色體的細(xì)胞的其它任何來(lái)源，獲得測(cè)試樣品。根據(jù)本發(fā)明的一些方面的方法包括目視檢測(cè)染色體異常例如諸如易位，或更具體的羅伯遜易位。根據(jù)本發(fā)明一些方面的方法設(shè)計(jì)產(chǎn)生全部核型。本發(fā)明還包括比色原位雜交的方法，該方法包括下列步驟獲得樣品，其含有具有用于形成分布圖的染色體的細(xì)胞；獲得物種特異性DNA纟笨針，所述DNA探針能夠在染色體基本等距離的位置上標(biāo)記染色體；將所述樣品與所述DNA探針進(jìn)行原位雜交；使用多種酶在染色體上產(chǎn)生有差別的色帶，以進(jìn)行比色分析；使用目視分析確定染色體的分布圖。該方法還可以包括在載玻片上進(jìn)行原位雜交樣品的步驟，其中所述載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。本發(fā)明還包括目視3金測(cè)染色體上羅伯遜易位的方法，其包括下列步驟獲得樣品，其含有具有用于形成分布圖的染色體的細(xì)胞；獲得人類(lèi)DNA探針，其能夠在每條染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少兩條染色體；將該樣品與所述DNA探針進(jìn)行雜交；使用多種酶在染色體上產(chǎn)生有差別的色帶，以進(jìn)行比色分析；以及使用目視分析以確定是否在所述染色體之間出現(xiàn)羅伯遜易位。根據(jù)本發(fā)明，該方法還可以包括在載玻片上對(duì)樣品進(jìn)行原位雜交，其中所述載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。該方法還可以包括利用光學(xué)顯微鏡或CCD相機(jī)進(jìn)行目視分析。該方法還設(shè)計(jì)DNA樣品，其中該樣品的來(lái)源選自由羊水、外周血、胸水(pluralfluid)、骨髓、腫瘤組織以及妊娠產(chǎn)物所組成的組中。在本發(fā)明的另外一個(gè)實(shí)施方式中，檢測(cè)標(biāo)記物染色體的方法包括以下步驟獲得樣品，其含有具有用于形成分布圖的染色體的細(xì)胞；獲得人類(lèi)DNA探針，所述探針能夠在每條染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少兩條染色體；將該樣品與所述DNA探針進(jìn)行雜交；使用多種酶在染色體上產(chǎn)生有差別的色帶，以進(jìn)行染色體的比色分析。所述載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。該檢測(cè)能夠通過(guò)利用光學(xué)顯微鏡或CCD相機(jī)進(jìn)行的目視分析來(lái)完成。用于檢測(cè)的DNA樣品可以源自下列之一羊水、外周血、胸水(pluralfluid)、骨髓、腫瘤組織以及妊娠產(chǎn)物。本發(fā)明的另一個(gè)方面設(shè)計(jì)了一種標(biāo)記染色體的方法，其包括下列步驟獲得樣品，其含有具有用于標(biāo)記的染色體的細(xì)胞；獲得物種特異性DNA探針，其中所述探針能夠在基本等距離的位置上標(biāo)記染色體；將該染色體與所述DNA探針進(jìn)行雜交，其中該染色體被標(biāo)記。該方法可以包括在載玻片上進(jìn)行染色體的原位雜交，其中所述載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。該方法還設(shè)計(jì)DNA的來(lái)源選自由羊水、外周血、胸水(pluralfluid)、骨髓、腫瘤組織以及^i^產(chǎn)物所組成的組中。在根據(jù)本發(fā)明一些方面的示例性實(shí)施方式中，其包括用于產(chǎn)生分裂間期染色體分布圖的試劑盒、多種物種特異性DNA探針，其中所述DNA探針能夠在染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一條染色體，多種酶用于在染色體上產(chǎn)生有差別的色帶，以進(jìn)行比色分析，以及多個(gè)載玻片以進(jìn)行染色體和探針組的原位雜交。該試劑盒還可以包括進(jìn)行所述一條染色體比色分析的目視分析工具，例如諸如顯〗敬鏡或相機(jī)。根據(jù)本發(fā)明的一些方面的另一個(gè)實(shí)施方式，包括探針組，該探針組包括多種物種特異性DNA探針，其中所述DNA探針能夠被設(shè)計(jì)為在染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一條染色體。該探針組還可以包括多種用于在所述染色體上產(chǎn)生色帶的酶。根據(jù)本發(fā)明的一些方面的進(jìn)一步實(shí)施方式包括用于分裂間期染色體原位雜交的載玻片，其具有的玻璃載玻片還具有多個(gè)其中能夠發(fā)生原位雜交的孔。前面描述了一種使用分裂間期染色體分布圖法(ICP)獲得染色體分布圖的方法，以從任意細(xì)胞/樣品類(lèi)型獲得完整的染色體和核型信息，而不需要額外的組織培養(yǎng)。這是通過(guò)對(duì)分裂間期細(xì)胞核采用梳狀DNA(combingproprietaryDNA)探針組和CISH技術(shù)來(lái)完成的。利用這里所公開(kāi)的方法，接近99%的全部染色體異常都能夠凈皮;險(xiǎn)測(cè)，并且通過(guò)低于48小時(shí)的周期時(shí)間(turnaroundtime,TAT)能夠獲得結(jié)果。本發(fā)明涉及用于獲得完整人類(lèi)核型信息的方法和設(shè)備，其通過(guò)觀察多個(gè)載玻片上的雜交室內(nèi)分裂間期細(xì)胞中的人類(lèi)個(gè)體染色體。ICP不需要預(yù)先知道存在特異性或可疑的疾病，可以檢測(cè)已知或未知的遺傳變化，并在一次測(cè)試中提供完整的核型。而且，ICP不需要細(xì)胞培養(yǎng)，并提供對(duì)分裂間期細(xì)胞核中幾乎所有類(lèi)型染色體變化的檢測(cè)機(jī)制。通過(guò)參考下面對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)公開(kāi)和附圖，本發(fā)明進(jìn)一步的目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得清楚，其中類(lèi)似的參數(shù)代表相同的特征、組分或元素。本專利或申請(qǐng)的文檔含有至少一幅彩色制作的附圖和/或顯微照片。通過(guò)提出請(qǐng)求并支付必要的費(fèi)用，專利局將提供具有彩色照片的本專利或?qū)＠暾?qǐng)出版物的復(fù)制件。圖la和圖lb是分裂間期染色體分布圖的模式圖，其說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明的一些方面所得到的示例性色帶；圖2a和圖2b是400條帶水平的現(xiàn)有技術(shù)G-顯帶模式圖；圖3a至圖3d是根據(jù)本發(fā)明的一些方面，分裂間期染色體分布圖(ICP)和G-顯帶模式圖的并列比較；圖4a和圖4b分別是顯示根據(jù)本發(fā)明的一些方面，染色體9和染色體22之間的易位的顯微鏡視野圖；圖5a和圖5b分別是顯示根據(jù)本發(fā)明的一些方面，用于確i^目的的易位和沒(méi)有易位的顯微鏡視野圖；圖6a、圖6b和圖6c分別是根據(jù)本發(fā)明的一些方面，在染色體3、染色體7和染色體10中標(biāo)記物染色體鑒定的圖；圖7是根據(jù)本發(fā)明的一些方面，從包括染色體3、染色體7和染色體10的標(biāo)記物染色體鑒定所得到的顯微鏡視野圖；圖8是表示根據(jù)本發(fā)明的一些方面，染色體13中間缺失的顯微鏡視野圖；圖9是表示根據(jù)本發(fā)明的一些方面，染色體14和染色體21的羅伯遜易位的顯微鏡視野圖；圖IO是顯示根據(jù)本發(fā)明的一些方面，染色體8短臂的臂內(nèi)倒位的顯微鏡視野圖；圖11是顯示根據(jù)本發(fā)明的一些方面，染色體16的臂間倒位的顯微鏡視野圖；圖12a和圖12b是分別顯示根據(jù)本發(fā)明的一些方面，包括染色體17和染色體19的插入易位的顯微鏡視野圖；圖13a和圖13b是現(xiàn)有技術(shù)原位雜交比色的顯微照片。具體實(shí)施方式現(xiàn)參考圖1,每條染色體都被ICP色帶模式圖所表示。著絲粒/著絲粒周邊區(qū)域(pericentromerearea)是黑色的；短臂端粒是藍(lán)色的；長(zhǎng)臂端粒是紅色的。對(duì)于近端著絲粒染色體14、15和21,ICP示意圖被分成兩部分左和右。左模式圖表示第一個(gè)被引入的染色體的色帶，右模式圖表示第二個(gè)被引入的染色體的色帶。術(shù)語(yǔ)第一和第二表示在載玻片1上每條染色體在近端著絲粒染色體聯(lián)合中的次序。對(duì)于染色體13和染色體22，只存在一個(gè)ICP色帶，因?yàn)樗鼈兛偸欠謩e被第一個(gè)和第二個(gè)引入。圖2表示400條帶水平的傳統(tǒng)G-顯帶模式圖。每種染色體，例如諸如人類(lèi)染色體都能夠在分裂間期通過(guò)使用各種染色體上的特異DNA序列的雜交而被鑒定。這些序列能夠定位在染色體的著絲?；蚨肆；蛭挥谥z粒和端粒之間的區(qū)域特異性范圍?；谌旧w的長(zhǎng)臂和短臂的總體尺寸，染色體上序列的間距被設(shè)計(jì)為基本等距。使用基本等距的概念，所有的人類(lèi)染色體能夠被分為下列三組之一組1(小)、組2(中)和組3(大)。在每組中，每條帶被以基本相同的距離隔開(kāi)。這種與已經(jīng)公開(kāi)的染色技術(shù)相關(guān)的間隔產(chǎn)生了每條染色體的獨(dú)特的色帶圖式?；谒鼈兊拇笮?，染色體被分成許多組，每組中的染色體具有易于識(shí)別的相同的顏色序列圖式。每條染色體臂可以具有不同的色帶"簽名"。該簽名的任何變化都可以指示遺傳變化(即染色體異常)。通常，染色體的著絲粒被染成黑色，由于染色從著絲粒朝著臂的末端進(jìn)行，所以色帶是通過(guò)不同比例的兩種主要顏色的混合而產(chǎn)生的，其中所述的兩種主要的顏色被用于突出染色體末端(端粒)帶。作為實(shí)施例，如果短臂端粒被染成藍(lán)色，長(zhǎng)臂端粒被染成紅色，則著絲粒和端粒之間的色帶可以為紅色和藍(lán)色的不同程度的混合，例如暗紅、深藍(lán)、淡藍(lán)、紫色和紅褐色。利用這種顏色差異，在簡(jiǎn)單的光學(xué)顯微鏡下，分裂間期細(xì)胞中染色體的變化可以容易被識(shí)別，而不需要按照目前在基于FISH的檢測(cè)儀、濾光器、雙色鏡、CCD相機(jī)、復(fù)雜的計(jì)算機(jī)軟件、或者干涉儀光譜技術(shù)中所使用的方法進(jìn)行任何顏色的操作。在可以選擇的實(shí)施方式中，沿著染色體的短臂和長(zhǎng)臂在有差別的顏色(differentiatingcolor)染色位置之間額外的等距位置處，染色體可以被染成黑色或其他有差別的顏色。通過(guò)提高分辨率以及提供用戶用于鑒定的界標(biāo)(landmark),這類(lèi)額外的染色能夠允許更簡(jiǎn)單的目視;險(xiǎn)測(cè)遺傳異常。這里所使用的有差別的色帶被稱作主帶以及額外的實(shí)體帶，諸如例如黑色帶被稱作次帶。為了提供染色體短臂和長(zhǎng)臂之間進(jìn)一步的區(qū)分，短臂和長(zhǎng)臂次帶能夠被染色以提供在每條染色體臂之間有差別的帶深度'(bandthickness)。例如，短臂次帶能夠被染色以提供具有統(tǒng)一深度的次帶，該統(tǒng)一深度比染色體長(zhǎng)臂上的次帶要低。這類(lèi)染色能夠提供更簡(jiǎn)單的檢測(cè)異常，包括單一染色體。與FISH不同，本發(fā)明依賴于比色原位雜交(CISH)以檢測(cè)雜交的序列。根據(jù)本發(fā)明的一些方面，以特異比例偶聯(lián)到DNA探針上的特異性酶的混合物能夠?qū)е庐a(chǎn)生各種顏色。這可以允許在相同的分裂間期細(xì)胞中染色體的相同位點(diǎn)依次發(fā)生或者同時(shí)發(fā)生酶催化反應(yīng)。目前，在本領(lǐng)域中，基于FISH的方法使用中期染色體或者分裂間期細(xì)胞核，利用特異性的DNA探針檢測(cè)已知的遺傳異常。為了建立診斷，人們可以從特異性的探針組開(kāi)始，如果某些結(jié)果是陽(yáng)性的，則完成了該測(cè)試。然而，從臨床醫(yī)生得到的原始"初步診斷(workingdiagnosis)"經(jīng)常是錯(cuò)誤的，并且實(shí)驗(yàn)室工作人員被迫使用多次、依次應(yīng)用DNA探針組。這不僅非常浪費(fèi)時(shí)間，而且很昂貴。最不幸的是，可能會(huì)得不到足量的測(cè)試材料(即中期或分裂間期染色體)以進(jìn)行依次的雜交，其中依次的雜交對(duì)于完成核型和提供適當(dāng)?shù)脑\斷是必需的。傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)分析保留了標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)?)其不需要預(yù)先了解疾??；2)其不僅能夠檢測(cè)已知的遺傳異常，也能夠檢測(cè)未知的遺傳異常；以及3)在一次實(shí)驗(yàn)中，其產(chǎn)生完整的核型。然而，該方法需要培養(yǎng)，這導(dǎo)致了顯著的周期時(shí)間。而且，對(duì)于組織類(lèi)型，例如實(shí)體瘤和妊娠產(chǎn)物，培養(yǎng)成功率是很低的，因此，導(dǎo)致了非常少或者沒(méi)有相關(guān)信息。另外，使用標(biāo)準(zhǔn)的G-顯帶，標(biāo)記物染色體的檢定通常是非常困難和不可能的。本發(fā)明通過(guò)不需要任何細(xì)胞培養(yǎng)，和提供對(duì)于分裂間期核中所有類(lèi)型染色體變化在小于48小時(shí)的時(shí)間內(nèi)的可靠檢測(cè)機(jī)制，克服了這些挑戰(zhàn)。在對(duì)樣品中特異性的遺傳異常沒(méi)有已知的在先知識(shí)的情況下，ICP通過(guò)使用單獨(dú)的通用的探針組促進(jìn)鑒定幾乎所有的染色體異常。這種鑒定可以每次在一條染色體上發(fā)生，其中染色體在分裂間期細(xì)胞中、在指定的點(diǎn)或在雜交室(載玻片)上的孔中。作為實(shí)施例，雜交室包括一組三個(gè)載玻片，每個(gè)載玻片含有IO個(gè)孔。載玻片1能夠用于檢測(cè)羅伯遜易位(在近端著絲粒染色體(即染色體13、染色體14、染色體15、染色體21和染色體22)之間的易位)。載玻片2能夠用于鑒定染色體1至染色體10。載玻片3能夠用于鑒定染色體11、染色體12、染色體16至染色體20、染色體X和染色體Y。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，兩個(gè)孔可以被故意留作空白用于進(jìn)一步測(cè)試。ICP技術(shù)能夠減少與許多不同的探針組的不必要的雜交，進(jìn)而可以通過(guò)結(jié)合來(lái)自28個(gè)孔的結(jié)果，而使完整的核型信息匯集起來(lái)。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，ICP技術(shù)根據(jù)下面的步驟進(jìn)行l(wèi))產(chǎn)生DNA探針；2)原位雜交；3)對(duì)DNA雜交進(jìn)行比色檢測(cè)；以及4)顯微鏡分析。步驟1可以包括使用來(lái)自24條人類(lèi)染色體的探針，其被標(biāo)記有例如DNP、生物素、熒光素(Flourescein)等的標(biāo)記。能夠通過(guò)染色體《敬切(microdissection)或者其他本領(lǐng)域中已知的方法特異性地產(chǎn)生這些探針，以獲得該染色體期望雜交的精確部分。例如，可以利用微切技術(shù)、質(zhì)粒、粘端質(zhì)粒、從基因組信息的計(jì)算方法、合成等，進(jìn)行探針的生成。在步驟2中，每個(gè)孔中的分裂間期細(xì)胞能夠與單獨(dú)一組的DNA探針雜交過(guò)夜，其中所述探針對(duì)于所要檢測(cè)的染色體或者異常是特異性的。雜交可以通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)的雜交技術(shù)來(lái)進(jìn)行，例如使用酶進(jìn)行預(yù)處理以使DNA探針滲入到核膜內(nèi)，并使DNA變性以分離兩條DNA鏈。在步驟3中，每種獨(dú)特的標(biāo)記都能夠通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)技術(shù)來(lái)被檢測(cè)。該檢測(cè)可以是依次或者是同時(shí)的。基于沿著各條染色體長(zhǎng)度的不同帶上的預(yù)定比例，兩種顏色的混合例如兩種酶反應(yīng)產(chǎn)生了可以檢測(cè)的新顏色。在染色體上用于帶的各種顏色可以被預(yù)先確定，如圖l所示，也能夠在模式圖上進(jìn)行表示，以便于比較分析。根據(jù)步驟4，在各條染色體帶上顯影的顏色可以被人們使用簡(jiǎn)單、標(biāo)準(zhǔn)的光學(xué)顯微鏡觀察和理解。在產(chǎn)前診斷中，TAT是極其重要的，懷孕的父母會(huì)對(duì)測(cè)試產(chǎn)生很大的焦慮。為了做出決定和懷孕的處理，得到結(jié)果的期限是懷孕24周內(nèi)。在正常情況下，標(biāo)準(zhǔn)的染色體測(cè)試是在大約懷孕1620周時(shí)進(jìn)行，在1014天之后可得到結(jié)果。因此，懷孕晚期的羊水診斷通常是不期望的。在某些臨床情況中，需要在懷孕的最后幾個(gè)星期進(jìn)行染色體測(cè)試。在這些情況下，其結(jié)果需要緊急獲得。在早期羊水診斷測(cè)試(即12周)中，結(jié)果通常需要大大長(zhǎng)于1014天。這通常是由于少量的細(xì)胞可以用于測(cè)試。在每個(gè)這些情況中，傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)通常不能夠鑒定標(biāo)記物染色體的特征。結(jié)果，需要進(jìn)行專門(mén)研究，這需要額外的時(shí)間和金錢(qián)。傳統(tǒng)的FISH測(cè)試能夠在48小時(shí)內(nèi)完成，但其在范圍方面高度受限，而且不能夠產(chǎn)生包括任何羅伯遜易位檢測(cè)在內(nèi)的完整染色體信息，其中羅伯遜易位會(huì)潛在地通過(guò)諸如單親二體(UPD)的病理狀態(tài)而提高發(fā)病率。可以對(duì)具有異常表型特征(諸如例如智力遲鈍或具有不孕問(wèn)題以及多次流產(chǎn)問(wèn)題的夫婦)的患者進(jìn)行外周血染色體測(cè)試，以建立遺傳診斷。一般使用現(xiàn)有的方法，這類(lèi)測(cè)試的TAT通常為5天，然而常規(guī)的染色體研究不能夠鑒定標(biāo)記物染色體以及不平衡的染色體重排。這些情況需要額外的測(cè)試，這會(huì)提高TAT并增加成本。在某些情況中，異常包括染色體的末端(即精細(xì)的重排)，其可能在常規(guī)測(cè)試中丟失。目前，這些異常的檢測(cè)需要昂貴的FISH測(cè)試以解決可能存在的任何診斷問(wèn)題。例如，在患有諸如原發(fā)性智力遲鈍(ID)病癥的患者中，大約5~9°/。會(huì)具有亞顯微、亞-端粒重排，這不能夠被傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)所檢測(cè)。而且，全部ID、發(fā)育紊亂的具有正常核型的患者中大約7%將具有亞-端粒重排。在某些情況下，需要額外的細(xì)胞通過(guò)常規(guī)測(cè)試進(jìn)行分析，這將顯著地提高成本。在白血病/淋巴瘤癌癥測(cè)試中，染色體信息不^f義在確診中至關(guān)重要，而且在制定不同的用藥方案中也是重要的。通常醫(yī)生要等待結(jié)果以做出關(guān)鍵的治療決定。通過(guò)使用目前的方法，TAT通常為大約5天。目前測(cè)試的主要缺點(diǎn)是常規(guī)的染色體研究不能夠鑒定標(biāo)記物和衍生的染色體以及前面所提到的包括染色體端粒的精細(xì)重排。這些情況需要額外的測(cè)試，這會(huì)導(dǎo)致提高的TAT和成本。在某些正常/異常結(jié)果的情況中，需要更多的細(xì)胞進(jìn)行利用常規(guī)測(cè)試來(lái)進(jìn)行分析，這也會(huì)才是高成本。不幸的是，在許多病例中，具有染色體的額外細(xì)胞不能簡(jiǎn)單地獲得用于測(cè)試。在大約510%的病例中，由于培養(yǎng)的失敗，而導(dǎo)致根本沒(méi)有得到染色體結(jié)果。染色體信息在實(shí)體瘤診斷和患者治療中的重要性迅速提高。在實(shí)體組織(例如膀胱、前列腺、腎、乳房、肺等)的癌癥中，常規(guī)的染色體研究能夠耗費(fèi)最高達(dá)到30天或者更多的時(shí)間，在超過(guò)70~80%的測(cè)試中，不能夠得到這些結(jié)果。這導(dǎo)致了研究的高失敗率。與上述的白血病和淋巴瘤類(lèi)似，標(biāo)記物和衍生染色體是不可能通過(guò)常規(guī)染色體測(cè)試進(jìn)行鑒定的?？梢詮牧鳟a(chǎn)的材料獲得染色體信息，以獲得遺傳診斷，并對(duì)患者就未來(lái)的懷孕決定提供咨詢。利用目前的方法，對(duì)這類(lèi)問(wèn)題的遺傳測(cè)試的TAT能夠高達(dá)3045天。更重要的是，在2040%的病例中，由于受到破壞的樣品(compromisedsample),不能夠通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的染色體測(cè)試得到這些結(jié)果。因此，通常需要額外的測(cè)試以正確診斷遺傳異常，并對(duì)患者纟是供咨詢。接著，這些額外的測(cè)試會(huì)提高所需要的成本和時(shí)間。ICP填補(bǔ)了由于現(xiàn)有4支術(shù)的限制所造成的空白，其以時(shí)間和成本上有效的方式，滿足了臨床細(xì)胞遺傳學(xué)和醫(yī)學(xué)團(tuán)體從未得到滿足的需求。下面是說(shuō)明實(shí)施本發(fā)明的程序的實(shí)施例。這些實(shí)施例應(yīng)當(dāng)被解釋為包括顯而易見(jiàn)的變化而且不是限制性的。實(shí)施例1-雜交室的應(yīng)用在目前的方法中，使用24種不同的顏色以獲得基于中期染色體的多色核型。為了制備中期染色體，必須要培養(yǎng)來(lái)自諸如外周血、骨髓、羊水、實(shí)體組織(solidmass)等的各種樣品類(lèi)型的材料。通常必須研究20個(gè)細(xì)胞以獲得完整的核型信息。通常，可以獲得的細(xì)胞的量是有限的。在本發(fā)明之前，沒(méi)有可以利用的方法能夠有效地利用該來(lái)源材料以便完成對(duì)用于研究的樣品中所出現(xiàn)的遺傳改變進(jìn)行完整的鑒定。本領(lǐng)域中存在許多方法能夠研究染色體的特異組，然而，這些方法是相當(dāng)有限的。正如上面所討^淪的，可疑的遺傳異常必須是之前已知的，并且通過(guò)這類(lèi)測(cè)試只能夠得到有限的信息。利用本發(fā)明，使用單獨(dú)一組通用的探針組，不需要對(duì)樣品中存在的特異遺傳改變預(yù)先了解，幾乎所有的染色體改變都能夠被完全鑒定。這可以對(duì)在雜交室上的指定點(diǎn)或孔中的分裂間期細(xì)胞中一次處理一條染色體。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，雜交室可以由一組載玻片構(gòu)成，如圖所示，每個(gè)載玻片可以帶有孔。作為實(shí)施例，載玻片l可以是檢測(cè)被稱作羅伯遜易位的特殊類(lèi)型染色體重排。羅伯遜易位是在近端著絲粒染色體之間的易位，其通過(guò)它們的著絲粒連接，這導(dǎo)致在核型中減少一個(gè)著絲粒。例如，如果羅伯遜易位發(fā)生在染色體14和染色體21之間，則在核型中，以平tf的形式存在一條正常的染色體21,—條正常的染色體14,以及一條連接在一起的染色體14/21，因此染色體的總數(shù)目從46變成45。在人類(lèi)基因組中，有5種近端著絲粒染色體(染色體13、染色體14、染色體15、染色體21和染色體22)，這5種染色體中的任何一種都能夠參與這種類(lèi)型的重排，包括在相同染色體拷貝之間的重排，即染色體導(dǎo)致21/21染色體連接在一起。重排可以導(dǎo)致平衡的核型或不平衡的核型。在不平衡的形式中，通常總的染色體數(shù)目保持46，然而，它們將可能會(huì)在該核型中有這些近端著絲粒染色體之一的三份拷貝。對(duì)來(lái)自患有唐氏綜合癥的患者的臨床樣品采用目前的FISH方法，通常可以檢測(cè)到唐氏綜合癥特異區(qū)域即(21q22)的三4分拷貝。這樣的結(jié)果足以說(shuō)明自由形式的唐氏綜合癥具有染色體21的三份拷貝，而不存在羅伯遜易位。然而，與唐氏綜合癥相同的臨床表型也能夠來(lái)自包括染色體21與另外一個(gè)近端著絲粒染色體的羅伯遜易位。使用本領(lǐng)域中現(xiàn)有的方法不能對(duì)這種進(jìn)行檢測(cè)。這對(duì)于遺傳咨詢和下一步懷孕處理是重要的臨床指示，其作為復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)值在自由形式的唐氏綜合癥和羅伯遜形式的唐氏綜合癥之間是完全不同的。因此，有價(jià)值的信息被丟失了?？梢酝ㄟ^(guò)本發(fā)明來(lái)克服這種限制。包括除染色體21以外的染色體的羅伯遜易位也可以在臨床上產(chǎn)前診斷中很重要。被稱作單親二體(UPD)的病理狀態(tài)存在于染色體13、染色體14和染色體15。當(dāng)在近端著絲粒染色體之間出現(xiàn)平衡的羅伯遜易位并且參與的染色體是染色體13、染色體14或染色體15時(shí)，攜帶者將具有提高的UPD風(fēng)險(xiǎn)。在產(chǎn)前診斷中檢測(cè)到的胎兒的UPD促使嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)，并顯著地增加發(fā)病率。在本發(fā)明之前，檢測(cè)羅伯遜易位和識(shí)別潛在UPD的唯一方法是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞遺傳學(xué)。ICP通過(guò)檢測(cè)分裂間期細(xì)胞中所有的羅伯遜易位而克服了這一點(diǎn)，這樣在產(chǎn)前診斷中，為懷孕處理提供了有價(jià)值的信息。載玻片2可以包才封全測(cè)染色體1至染色體10的孔。載玻片3包括檢測(cè)染色體ll、染色體12、染色體16、染色體17、染色體18、染色體19、染色體20、染色體X/Y的孔，其還具有故意留出空白進(jìn)行進(jìn)一步測(cè)試用的孔。通過(guò)小心地將2530個(gè)分裂間期細(xì)胞覆蓋到每個(gè)孔中，即使是被破壞的樣品也可以被研究，因?yàn)椴槐匾碾s交被去除，完整的核型信息可以通過(guò)將這些孔中得到的結(jié)果組合起來(lái)而被匯集。實(shí)施例2-DNA纟笨針組該揭:針組由針對(duì)24條染色體中每一條所獨(dú)特設(shè)計(jì)的DNA探針組合構(gòu)成。每條染色體含有著絲粒以及在著絲粒處連接的一條短臂和一條長(zhǎng)臂。所有的染色體在這些臂的末端都含有對(duì)于每條染色體是獨(dú)特的特異DNA序列，其被稱作端粒。近端著絲粒染色體僅僅含有著絲粒和長(zhǎng)臂。在基因組中，它們的短臂是可變的，并能夠消失，并且沒(méi)有臨床意義。由于這個(gè)原因，沒(méi)有設(shè)計(jì)探針來(lái)檢測(cè)近端著絲粒染色體的短臂。現(xiàn)在參考圖1,說(shuō)明基于本發(fā)明的色帶圖式。為了比較，還包括了標(biāo)準(zhǔn)的G-顯帶(即金標(biāo)準(zhǔn))。該模式圖表示染色體上所有帶的圖形?；谀壳暗腉-顯帶模式圖，每條人類(lèi)染色體被提供了各自的單元長(zhǎng)度。例如，染色體l是最大的人類(lèi)染色體，其具有73個(gè)單位尺寸，其中短臂具有36個(gè)單位尺寸，長(zhǎng)臂為37個(gè)單位尺寸；染色體2具有68個(gè)單位尺寸，其中短臂和長(zhǎng)臂分別為27個(gè)單位尺寸和41個(gè)單位尺寸。所有染色體的單位尺寸數(shù)都被描繪在這些模式圖上。根據(jù)目前的方法，染色體分類(lèi)通?；贕-顯帶圖式，染色體被分組為A至G以及性染色體。染色體13被分在A組，34被分在B組，612和X染色體被分在C組，1315被分在D組，16~18被分在F組，以及1920包括Y染色體被分在G組。每條染色體上的帶通常是通過(guò)化學(xué)染色產(chǎn)生的，并且在染色體上具有固定的位置，并且不會(huì)改變。因此，落入到兩條自然近鄰隔開(kāi)的G帶的染色體變化的尺狀形成可以是并且通常是非常困難的?？梢酝ㄟ^(guò)本發(fā)明利用基于短臂和長(zhǎng)臂的整體尺寸，以互相基本等距離的位置將"帶"分開(kāi)而克服了該問(wèn)題。這能夠達(dá)到容易識(shí)別分裂間期細(xì)胞核的染色體變化。利用基本等距染色體雜交的概念，人類(lèi)染色體的臂能夠被分到下列三組之一組1(小)具有4~6個(gè)單位尺寸；組2(中)具有719個(gè)單位尺寸和組3(大)具有2041個(gè)單位尺寸。在每組中，每條帶被以基本相同的距離隔開(kāi)。作為實(shí)施例，短臂可以具有5條帶，長(zhǎng)臂也可以具有5條帶。加上著絲粒帶，染色體1具有總數(shù)為11條色帶(5+1+5)。因此，利用本發(fā)明的ICP，觀察分裂間期細(xì)胞的人類(lèi)染色體1，人們會(huì)從短臂的末端開(kāi)始觀察到色帶、"無(wú)色，，帶、色帶、無(wú)色帶等，直到它們到達(dá)著絲粒，該圖式將繼續(xù)，直到它們到達(dá)具有色帶的長(zhǎng)臂末端。計(jì)算所有的帶，色帶和無(wú)色帶，正常染色體l將具有總共21條帶。這種類(lèi)型的分辨率與標(biāo)準(zhǔn)的G-顯帶圖式相同，或者更好，其中標(biāo)準(zhǔn)的G-顯帶需要只能在培養(yǎng)后獲得的中期染色體。作為另一個(gè)實(shí)施例，根據(jù)上述模型，染色體18將具有組1短臂和組2長(zhǎng)臂；染色體Y將具有組1短臂和組1長(zhǎng)臂。作為進(jìn)一步的實(shí)施例，關(guān)于染色體l，次帶可以在色帶之間的位置縫隙中被染色。這類(lèi)次帶染色，例如可以增加八(8)條額外的帶，這使得染色體上被染色的所有帶達(dá)到了十九(19)條。從圖1中可以看出，該分類(lèi)方法是利用人類(lèi)染色體的相應(yīng)色帶圖式進(jìn)4亍表示的。通常并只為了說(shuō)明的目的，著絲粒帶能夠被染成黑色，并且當(dāng)染色從著絲粒向短臂的末端前進(jìn)時(shí)，色帶可以通過(guò)用與突出染色體末端(端粒)帶的主色的不同比例的混合而產(chǎn)生。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，短臂端粒帶可以被染成藍(lán)色，長(zhǎng)臂端粒帶可以^皮染稱紅色。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，對(duì)于染色體l、染色體5、染色體9、染色體16和染色體19,著絲粒周邊區(qū)帶(即近鄰著絲粒的帶)能夠替代著絲粒被使用。僅僅為了說(shuō)明的目的，使用染色體l為例，著絲?？梢允呛谏?，短臂上的下一條帶可以為l藍(lán)9紅，這產(chǎn)生了暗紅色。下一條帶可以是7藍(lán)3紅，這產(chǎn)生了淡藍(lán)色。下一條帶可以是5藍(lán)5紅，這產(chǎn)生了紫色。下一條帶可以是3藍(lán)7紅，這產(chǎn)生了紅褐色。最后，端粒帶可以為100%藍(lán)色，這說(shuō)明端粒的末端。在著絲粒和端粒之間的這種帶的順序(3:7、5:5、7:3)對(duì)于長(zhǎng)臂關(guān)于主色的比例可以反過(guò)來(lái)。因此，以黑色著絲粒為開(kāi)始的染色體1的長(zhǎng)臂將具有3紅7藍(lán)(紅褐色)；5紅5藍(lán)(紫色)；7紅3藍(lán)(淡藍(lán)色)，最后是紅色的端粒帶(100%)。從短臂到長(zhǎng)臂的簡(jiǎn)單閱讀是藍(lán)色、紅褐色、紫色、淡藍(lán)色、暗紅色、黑色、紅褐色、紫色、淡藍(lán)色和紅色。從本文中可以看出，每條臂具有其不同的色帶"簽名"，并且該簽名的任何改變都將代表遺傳變化。根據(jù)本發(fā)明的一些方面，在分裂間期細(xì)胞中，變化可以在簡(jiǎn)單的光學(xué)顯微鏡下容易被識(shí)別，而不需要通過(guò)目前在本領(lǐng)域中進(jìn)行基于FISH的檢測(cè)染色體改變所使用的濾光器、雙色鏡、CCD相機(jī)、復(fù)雜的計(jì)算機(jī)軟件、干涉儀(inferometer)等顏色4喿作。因?yàn)?，根?jù)本發(fā)明的色帶被或多或少地相互等距隔開(kāi)，因此不管臂的尺寸，顏色順序的偏差、色帶的缺失或額外的色帶、非色帶單位尺寸的減少或放大、色帶序列的移位將指示染色體異常。這種方法可以用于檢測(cè)實(shí)際上任何人類(lèi)染色體的數(shù)值異常和結(jié)構(gòu)異常。下面討論使用ICP鑒定染色體異常的一些例子，特別是標(biāo)記物染色體。根據(jù)目前的方法，標(biāo)記物染色體可以^f義僅在中期染色體中被鑒定。利用本發(fā)明，標(biāo)記物染色體可以在分裂間期細(xì)胞核中被鑒定。該結(jié)果顯著地節(jié)省時(shí)間和金錢(qián)。實(shí)施例3-CISH法本發(fā)明利用比色原位雜交(CISH)。使用CISH有許多優(yōu)點(diǎn)。最重要的優(yōu)點(diǎn)是在細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室中可以利用的設(shè)備的實(shí)用性，以及避免了與基于FISH的設(shè)備相關(guān)的昂貴成本。盡管基于FISH的方法在研究環(huán)境中是充分的，但是CISH獨(dú)特地用于常規(guī)的臨床細(xì)胞遺傳學(xué)和其他的病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室。正如上面所討論的，染色體異常在分裂間期細(xì)胞中，在簡(jiǎn)單的光學(xué)顯微鏡下是容易被識(shí)別的，而不需要操作。利用CISH方法，沒(méi)有在多色FISH法中的偽彩色表現(xiàn)。另外，通常在視野中看到的就是測(cè)試所產(chǎn)生的真正的顏色表現(xiàn)。例如上面所述的顏色被設(shè)計(jì)為普通"非色盲"的人眼能夠分辨的臨近的顏色。這為目前的細(xì)胞遺傳學(xué)分析，甚至為不具有本領(lǐng)域高超技能的人例如技術(shù)員提供了另外的機(jī)會(huì)。因此，這是顯著的財(cái)務(wù)上和時(shí)間上的節(jié)約，因?yàn)楦叱寄艿目萍既藛T是昂貴和難以找到的。目前的CISH方法只利用全部酶反應(yīng)以在反應(yīng)位點(diǎn)產(chǎn)生特異的顏色。此處所述的以特異的比例混合偶聯(lián)到DNA探針的特異性酶的混合物產(chǎn)生不同的顏色還沒(méi)有^皮公開(kāi)。盡管，本領(lǐng)域技術(shù)人員已經(jīng)知道在分裂間期細(xì)胞核中不同的位點(diǎn)進(jìn)行連續(xù)的酶反應(yīng)，但是在本發(fā)明之前，在相同位點(diǎn)的連續(xù)的酶反應(yīng)(即在分裂間期細(xì)胞核的任何給定位點(diǎn))還不可能。CISH與FISH相比的主要缺點(diǎn)是在反應(yīng)位點(diǎn)的信號(hào)分辨率(即亮度)。在過(guò)去的幾年中，在CISH領(lǐng)域已有許多進(jìn)步，所以現(xiàn)在如果需要的話，在反應(yīng)位點(diǎn)對(duì)信號(hào)進(jìn)行放大是可能的。另外，在DNA探針制備步驟中，通過(guò)將多種隨后附著于酶的配體摻入，色帶的信號(hào)強(qiáng)度可以得到增強(qiáng)。CISH法有一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是持久。所發(fā)生的顏色反應(yīng)持久，并能夠保持到以后的應(yīng)用。另一方面，F(xiàn)ISH信號(hào)會(huì)快速減弱，并且并不是全部都能用于反向分析(retrospectiveanalysis)。當(dāng)在患者中發(fā)現(xiàn)了新的遺傳改變(即在治療中)，為了建立臨床校正，使用之前雜交的載玻片將對(duì)于比較目的將是特別有用的。實(shí)施例4-工作實(shí)施例目前的細(xì)胞遺傳學(xué)方法依賴染色體中的自然斷裂點(diǎn)以設(shè)計(jì)補(bǔ)平這些區(qū)域的探針。例如，為了檢測(cè)白血病特異性的易位例如染色體9和染色體22之間的易位，探針被設(shè)計(jì)為檢測(cè)染色體上在帶9q34UW基因)和帶22ql1.2(kr基因)處的斷裂點(diǎn)。使用兩種顏色，紅色用于染色體22,綠色用于染色體9，正常的分裂間期反應(yīng)將出現(xiàn)為兩個(gè)紅點(diǎn)和兩個(gè)綠點(diǎn)，而易位將導(dǎo)致一個(gè)綠點(diǎn)、一個(gè)紅點(diǎn)和由于綠色/紅色融合而產(chǎn)生的黃色點(diǎn)。作為實(shí)施例，利用本發(fā)明，同樣的易位將出現(xiàn)為染色體9被置換成兩個(gè)部分，染色體22被置換成兩個(gè)部分。每塊載玻片上染色體9孔中所得到的色帶圖式將是從短臂端粒的藍(lán)色開(kāi)始、紅褐色、黑色、紫色、淡藍(lán)色是連續(xù)延伸的部分，紅色遠(yuǎn)離該延伸部分，即紅色的移位說(shuō)明在淡藍(lán)色和紅色之間存在斷裂，此處是W/基因在染色體9上的定位。在相同的孔中，不分開(kāi)的顏色順序代表正常的染色體9。類(lèi)似的，染色體22上的色帶圖式將是紅色從紫色、深藍(lán)色延伸部分分離出來(lái)，這暗示在紅色和紫色中存在斷裂。染色體22上的^r基因位于兩條色帶紅色和紫色之間。此外，未分開(kāi)的紅色、紫色和深藍(lán)色顏色圖式代表正常的染色體22。由于染色體22的著絲粒與染色體14交叉雜交，所以將出現(xiàn)兩個(gè)額外獨(dú)立的紅色信號(hào)。染色體14雜交孔也將具有兩個(gè)額外的紅色或藍(lán)色點(diǎn)。如果這是樣品中唯一的遺傳變化，則當(dāng)進(jìn)行讀取ICP載玻片時(shí)，所有含有染色體22的孔將表現(xiàn)出上述的圖式，含有染色體9的孔將具有上述顏色圖式，其他所有的染色體將具有兩部分連續(xù)延伸的色帶圖式。根據(jù)患者的性別，在含有X和Y染色體4笨針的孔中，XX或XY染色體顏色圖式將被閱讀。正如從本實(shí)施例中可以看出，對(duì)于利用ICP方法，對(duì)于疾病狀態(tài)的預(yù)先了解是不必要的。在根據(jù)本發(fā)明某些方面的實(shí)施方式中，在類(lèi)似上面實(shí)施例中9:22易位的簡(jiǎn)單易位，該易位的確認(rèn)可以通過(guò)目視設(shè)備來(lái)完成。在所有人類(lèi)染色體的基因組中，每條單獨(dú)的色帶，包括形成空隙的黑色次帶可以作為紅色或藍(lán)色帶用于試劑盒中。正如前面所提到的，在雜交室中可以故意留有槽或孔保持空白已用于根據(jù)情況選擇的和/或確認(rèn)測(cè)試。因此，選擇在染色體9和染色體22上斷裂處每一側(cè)的非著絲?；蚍嵌肆е唬⑵湟氲诫s交室中，任何具有這些易位的分裂間期細(xì)胞將具有紅色、紅色、藍(lán)色、藍(lán)色的顏色圖式。紅色和藍(lán)色的并排(juxtaposition)表示該易位。不帶有這種易位的細(xì)胞，在這種顏色i殳計(jì)中將具有下列讀取結(jié)果紅色、紅色、藍(lán)色和藍(lán)色。因?yàn)闆](méi)有引入著絲粒帶，因此所以染色體22的交叉雜交也被去除了。作為實(shí)施例，該顏色設(shè)計(jì)能夠被用于驗(yàn)證實(shí)際上任何簡(jiǎn)單的易位，而不管所參與的染色體帶。即使是包括兩條以上染色體的復(fù)雜易位也能夠通過(guò)使用上面所述的方法進(jìn)行的系統(tǒng)化額外雜交而被檢測(cè)并診斷。實(shí)施例5-標(biāo)記物染色體鑒定根據(jù)臨床細(xì)胞遺傳學(xué)上的定義，標(biāo)記物染色體表示通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的G-顯帶技術(shù)，染色體上著絲粒和其他材料的來(lái)源不能被鑒定。然而這些標(biāo)記物染色體在疾病的產(chǎn)生和/或進(jìn)展中發(fā)揮了重要的作用。使用中期染色體和24色FISH技術(shù)，通?？梢澡b定標(biāo)記物染色體特征。然而，在分裂間期細(xì)胞核中的鑒定是非常有挑戰(zhàn)性的，并使用目前的方法還不能完成。標(biāo)記物染色體的一個(gè)例子被如下描述具有染色體3的著絲粒；染色體3的全部短臂；兩條帶來(lái)自染色體7的長(zhǎng)臂；以及來(lái)自染色體10的長(zhǎng)臂端粒。在癌癥細(xì)胞遺傳學(xué)中，特別是實(shí)體瘤細(xì)胞遺傳學(xué)中，這是一個(gè)非常復(fù)雜的標(biāo)記物，人們經(jīng)常會(huì)遇到這種情況。通過(guò)利用此處所述的本發(fā)明的技術(shù)，在ICP模型中，雜交是利用三載玻片技術(shù)完成的，將讀取到下列結(jié)果載玻片1,普通的(即正常)；載玻片2，1-2、4-6、8-9(即正常)；載玻片3普通的(即正常)。在載玻片2上，在染色體3的雜交孔中，將讀取到異常的色帶圖式。除了兩個(gè)正常連續(xù)的色帶外，可能會(huì)存在額外的著絲粒和短臂帶。類(lèi)似的，在染色體7孔中，除了兩個(gè)連續(xù)的色帶外，將會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)額外的相鄰的色帶。最后，在染色體10孔中，根據(jù)染色體10長(zhǎng)臂端粒組合物是否平衡，人們可以觀察到或者兩個(gè)連續(xù)的色帶，以及額外的端粒單獨(dú)帶，或者一個(gè)連續(xù)的色帶部分和端粒帶從另一個(gè)色帶序列的移位。圖6表示在3個(gè)不同分裂間期細(xì)胞中的標(biāo)記物染色體。根據(jù)本發(fā)明的一些方面，在ICP模型中，標(biāo)記物染色體可以被"重建"。取來(lái)自染色體3的中心片段和來(lái)自染色體7和染色體IO的非中心片段，并在分裂間期細(xì)胞中雜交在一起，人們可以確認(rèn)是否所有的這些片段都形成了"可疑的，，標(biāo)記物。如果發(fā)現(xiàn)了連續(xù)的色帶順序，則這些結(jié)果可能是陽(yáng)性的。另夕卜，在染色體3、染色體7和染色體10上相應(yīng)的帶也可能是突出的，進(jìn)而確認(rèn)了標(biāo)記物染色體的特征。圖7描述了具有這里所述其余色帶的"重建標(biāo)記物"。表A1234513/1413/1513/2113/2214/1514/2114/2215/2115/2221/22678910表A代表才艮據(jù)本發(fā)明一些方面的載玻片1上的近端著絲粒染色體組合。根據(jù)染色體是第一個(gè)被引入還是第二個(gè)被引入，著絲粒將具有紅色或者藍(lán)色，其余顏色順序如模式圖中所示。在模式圖中染色體左側(cè)的顏色序列代表第一個(gè)，右側(cè)的序列代表組合中的第二個(gè)。對(duì)于染色體13和染色體22,只有一種顏色被表示出來(lái)，因?yàn)樗鼈円恢敝皇堑谝粋€(gè)或者第二個(gè)被引入。由于染色體13和染色體21著絲?？梢曰ハ嚯s交，所以在第3號(hào)(#3)孔中，所有的著絲粒都將是紫色的(紅色+藍(lán)色)。不管是否在這兩條染色體之間存在易位，這都將是真實(shí)的。如果存在易位，在該孔中的分裂間期細(xì)胞中在平衡的狀態(tài)下將會(huì)減少一個(gè)著絲粒(即不是4個(gè)，而是3個(gè))，然而，在不平衡狀態(tài)，該數(shù)目仍為4。也將相同的普通藍(lán)色應(yīng)用到染色體14和染色體22。因此，在第7號(hào)(#7)孔中的分裂間期細(xì)胞將與染色體13和染色體21表現(xiàn)類(lèi)似。在平衡的和不平衡的狀態(tài)，都將存在來(lái)自兩條染色體的較大連續(xù)彩色部分，而不含著絲粒，這代表存在羅伯遜易位。在除了第3號(hào)和第7號(hào)孔以外的所有孔中，兩條或者更多條著絲粒帶代表可能存在交叉雜交。這種設(shè)計(jì)為相互證明遺傳異常提供了多種機(jī)會(huì)。實(shí)施例7-細(xì)l包^:測(cè)纟支術(shù)根據(jù)本發(fā)明的一些方面，ICP可以對(duì)所有類(lèi)型的樣品類(lèi)型進(jìn)行研究例如諸如外周血、骨髓吸液(aspirate)、羊水、絨毛膜、胸腔積液、淋巴結(jié)活檢樣品、實(shí)體瘤組織、妊娠產(chǎn)物等。在這些樣品中，只有"液體"樣品例如血液、骨髓、羊水和胸腔積液含有單細(xì)胞。其余的樣品是含有連接在一起的細(xì)胞聚集體的組織。為了進(jìn)行ICP,需要分裂間期單細(xì)胞。因此，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，需要設(shè)計(jì)一種方法用于精確地在雜交室載玻片上的每個(gè)孔中加入或者平鋪25~30個(gè)細(xì)胞。目前存在方法將實(shí)體組織解離成單細(xì)胞懸液，例如利用類(lèi)似膠原酶和胰蛋白酶的酶。如前所述，液體樣品通常不需要這種類(lèi)型的處理來(lái)獲得單細(xì)胞。一旦從任何類(lèi)型的樣品中獲得單細(xì)胞懸浮液，這些細(xì)胞的濃度將^皮調(diào)節(jié)成每"移液器液滴，，含有2530個(gè)細(xì)胞。例如如果lml含有1000個(gè)細(xì)胞，每ml包含10移液器液滴，則每滴含有100個(gè)細(xì)胞。由于通常每個(gè)孔僅接納1滴進(jìn)行ICP，則該樣品通常在這種情況下被稀釋3.5~4倍，以便每滴能夠含有期望的細(xì)胞濃度。如果起始體積是每移液器液滴含有10個(gè)細(xì)胞，則該樣品需要通過(guò)離心(spinningdown)和去除多余的體積而被濃縮2.53倍，以便每移液器液滴能夠含有期望的細(xì)胞濃度。這種技術(shù)確保，即便是"被破壞"的樣品，具有小體積的樣品也能夠根據(jù)本發(fā)明被完全分析，而本領(lǐng)域的其他方法則不能夠捕獲完整的核型信息。實(shí)施例8-低滲處理的應(yīng)用目前大部分FISH方法僅僅使用不經(jīng)過(guò)低滲處理的樣品制備的涂片。低滲處理例如KC1和檸檬酸鈉溶液的低滲處理的發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)生了新的細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域。中期細(xì)胞的適當(dāng)"膨脹"確保了中期染色體在它們被滴到顯微鏡載玻片上時(shí)的分開(kāi)。類(lèi)似地，分裂間期染色體的適當(dāng)分離對(duì)于成功描繪多色帶順序是至關(guān)重要的。通過(guò)使用不同濃度的不同低滲溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無(wú)論單獨(dú)還是結(jié)合實(shí)驗(yàn)，都可能正確地使分裂間期細(xì)胞在其被固定到顯微鏡載玻片上的雜交孔中前適當(dāng)"膨脹"。實(shí)施例9-ICP過(guò)程人類(lèi)DNA探針的產(chǎn)生1)在每條染色體上，DNA探針雜交的位置被描繪在標(biāo)準(zhǔn)G-帶模式圖上。如前面所公開(kāi)的，染色體1可以具有19個(gè)DNA探針l個(gè)著絲粒周邊區(qū)、4個(gè)短臂彩色+5個(gè)短臂黑色+1個(gè)短臂端粒、3個(gè)長(zhǎng)臂彩色+4個(gè)長(zhǎng)臂黑色+1個(gè)長(zhǎng)臂端粒。2)每條染色體帶可以被例如微切或者使用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)從標(biāo)準(zhǔn)的G-帶中期染色體制備物中分離。3)每條微切的染色體帶可以通過(guò)Telenius(1992)概括描述的DOP-PCR技術(shù)所擴(kuò)增。4)這些探針的重復(fù)序列可以被去除，其通過(guò)Craig(1997)概括描述的使用生物素-標(biāo)記的Cot-lDNA，接著是抗生物素蛋白磁珠。5)來(lái)自DOP-PCR首次循壞的無(wú)重復(fù)探針可以被進(jìn)一步進(jìn)行使用多輪Liehr(2002)所描述的方法的擴(kuò)增。6)使用標(biāo)準(zhǔn)的超聲降解技術(shù)，探針的長(zhǎng)度能夠被調(diào)節(jié)到大約200bp至600bp?？蛇x地，利用標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)如諸如VectorlabsNickit試劑盒的試劑盒能夠形成更小的探針片段。7)這些DNA片段可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)記沖支術(shù)或工藝?yán)鏥ectorLabsFastTag，被例如諸如DNP、生物素、熒光素等的標(biāo)記物標(biāo)記。8)#>據(jù)預(yù)定的方法原則該標(biāo)記物。9)例如FastTag技術(shù)可以在整條DNA鏈上的多個(gè)位點(diǎn)《I入標(biāo)記物，以達(dá)到在雜交位點(diǎn)上更高的靈敏度。10)這樣備好了來(lái)自24條人類(lèi)染色體的DNA探針進(jìn)行在雜交室載玻片上的分裂間期細(xì)胞的原位雜交。探針可以為ICP目的獲得，不需要標(biāo)記物，如上所述，適當(dāng)?shù)臉?biāo)記物可以被引入到DNA中。原位雜交1)可以將單細(xì)胞懸浮液鋪到3個(gè)雜交室載玻片上的每個(gè)孔中。使用低滲溶液對(duì)該懸浮液進(jìn)行處理，并使用3:1甲醇乙酸溶液進(jìn)行固定。2)每個(gè)孔中的分裂間期細(xì)胞可以與單獨(dú)一組該孔特異性的DNA探針進(jìn)行雜交，其^f吏用標(biāo)準(zhǔn)的原位雜交技術(shù)例如使用酶預(yù)處理以允許DNA探針滲入核膜，其中進(jìn)行DNA變性以分離DNA鏈。3)雜交可以過(guò)夜進(jìn)行。4)可以進(jìn)行雜交后的清洗以從載玻片去除過(guò)量、沒(méi)有雜交的探針。DNA雜交(CISH)的比色檢測(cè)1)生物素標(biāo)記可以通過(guò)偶聯(lián)抗生物素蛋白D的葡萄糖氧化酶在與葡萄糖氧化酶特異的TNBT底物進(jìn)行反應(yīng)之后被纟全測(cè)。這可以在DNA雜交的位點(diǎn)產(chǎn)生黑色沉淀物(即在著絲粒和著絲粒周邊區(qū)帶以及所有染色體上的短臂和長(zhǎng)臂間隙的位置)。2)熒光素標(biāo)記可以通過(guò)偶聯(lián)抗熒光素抗體的過(guò)氧化物酶，在與過(guò)氧化物酶的特異底物例如NovaRed反應(yīng)之后被檢測(cè)。這在DNA雜交的位點(diǎn)產(chǎn)生紅色沉淀，即在所有染色體的長(zhǎng)臂端粒和整條染色體的其他帶上。3)DNP標(biāo)記可以通過(guò)偶耳關(guān)抗DNP抗體的石咸性-粦酸酶，通過(guò)與對(duì)石咸性石粦酸酶特異的底物例如載體藍(lán)反應(yīng)而祐j企測(cè)。這在DNA雜交的位點(diǎn)產(chǎn)生藍(lán)色;冗淀，即在在所有染色體的短臂端粒和整條染色體的其他帶上。4)這三種反應(yīng)是以依次的方式進(jìn)行的，其間有必要的封閉和清洗步驟。使用商業(yè)上購(gòu)買(mǎi)的底物需要根據(jù)賣(mài)家的規(guī)程進(jìn)行。5)該順序可以是生物素、熒光素和DNP檢測(cè)。6)可選地，可以同時(shí)完成所有的三個(gè)反應(yīng)，因?yàn)檫@些酶以及每種酶的特異性底物都是不同的。7)如前面所公開(kāi)的，近端著絲粒染色體著絲粒能夠被染色例如藍(lán)色或紅色但不是黑色。在染色體IO、染色體12和染色體Y以及近端著絲粒染色體長(zhǎng)臂帶上可以進(jìn)行類(lèi)似的調(diào)節(jié)以保證對(duì)所有染色體重排的正確鑒定。8)可以使用復(fù)染法對(duì)這些載玻片進(jìn)行復(fù)染，例如曱基綠(VectorLabs)，并永久封固在封固劑(mountingmedia)中，諸如例如permount(VectorLabs)?？梢允褂脮趸G，因?yàn)樗軌蛱峁┨厥獾呐c三種主要顏色(黑色、藍(lán)色和紅色)的對(duì)照。9)基于在每條染色體長(zhǎng)度上不同帶的顏色的預(yù)定比例，兩種顏色(兩種酶反應(yīng))的混合產(chǎn)生了新的可以檢測(cè)的顏色。圖1中表示了所有人類(lèi)染色體上的所有帶的顏色示意圖的例子。顯微鏡分析1)通過(guò)產(chǎn)生每條染色體帶的顏色，分裂間期染色體可以被使用簡(jiǎn)單的標(biāo)準(zhǔn)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察，而不需要任何進(jìn)一步的輔助。CCD相機(jī)可以被作為視覺(jué)觀察而使用，但不是必需的。2)從載玻片l開(kāi)始，每個(gè)分裂間期細(xì)胞的顏色圖式可以被記錄?；谀Ｊ綀D中所期望的正常顏色圖式，可以分別確定每條近端著絲粒染色體的正常或者異常的狀態(tài)。通常會(huì)對(duì)每個(gè)孔的分裂間期細(xì)胞進(jìn)行20打分。3)對(duì)載玻片2和3上的其余染色體重復(fù)相同的分析，即使用20個(gè)分裂間期細(xì)胞對(duì)每條染色體的正常和異常狀態(tài)進(jìn)行記錄，可以將結(jié)果進(jìn)行組合以得到所測(cè)試個(gè)體的完整核型分布圖。4)如果需要其他的分析，例如懷疑有正常細(xì)胞和異常細(xì)胞的鑲嵌，澄清簡(jiǎn)單的易位或復(fù)雜易位，標(biāo)記物染色體等，則空白孔(例如載玻片#3上)可以用于確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。如果需要，可以使用完全新的載玻片，這依賴確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)。5)所有染色體的顯帶圖式都可以被簡(jiǎn)單的數(shù)字照相技術(shù)記錄。6)簡(jiǎn)單的鑲嵌可以通過(guò)在顯微鏡上的分析而容易被檢測(cè)。即使是復(fù)雜的鑲嵌，顯然相關(guān)的克隆鑲嵌也能夠被澄清。下面的實(shí)施例是根據(jù)本發(fā)明一些方面的澄清方法的說(shuō)明。實(shí)施例10-核型分析作為實(shí)施例，分析具有下列結(jié)果的核型十8/t(9;22)/t(9;22)，+8/正常。在慢性粒細(xì)胞白血病的病例中，存在兩種克隆異常t(9;22)，如前面所述的這種疾病的特征性變化。8三體(+8)表示高級(jí)的疾病進(jìn)展。然而8三體可以作為"無(wú)關(guān)，，的克隆單獨(dú)存在。因此，臨床上非常重要的是確定相同的克隆是否同時(shí)具有t(9;22)和+8。作為實(shí)施例，在第一個(gè)ICP常規(guī)反應(yīng)中，有10個(gè)細(xì)胞具有t(9;22);5個(gè)細(xì)胞具有+8,15個(gè)細(xì)胞的染色體8正常，10個(gè)細(xì)胞的染色體9和染色體22正常。如本文所述，對(duì)易位的澄清可以通過(guò)紅色藍(lán)色實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行，其中紅色藍(lán)色并排表明易位，獨(dú)立的紅色和藍(lán)色說(shuō)明沒(méi)有易位。結(jié)合染色體8著絲粒探針的結(jié)果(黑色)，這些結(jié)果可以如下可能5個(gè)細(xì)胞具有t(9;22);5個(gè)細(xì)胞具有t(9;22)和+8;10個(gè)細(xì)胞的染色體8、染色體9和染色體22是正常的。這些結(jié)果將清楚地說(shuō)明+8是該疾病進(jìn)展的一部分，而不是獨(dú)立的事件。如果它是獨(dú)立的事件，則不會(huì)觀察到具有組合結(jié)果的細(xì)胞?，F(xiàn)在參考圖14,表示了根據(jù)本發(fā)明一些方面的雜交載玻片，并被參數(shù)IO所統(tǒng)稱。該載玻片10可以包括主體20、一些孔22和鑒定標(biāo)記區(qū)24。該主體20可以包括玻璃或者其他足以在其上進(jìn)行雜交的半透明材料。孔22可以包括為分離這些孔22所印制的區(qū)域?？?2可以還包括從底部伸出的鋸齒、澆注的鋸齒等以接受和雜交樣品。鑒定標(biāo)記區(qū)24可以包括空曠區(qū)或者被覆蓋的區(qū)域以接受標(biāo)記物或其他的鑒定設(shè)備。果與利用金標(biāo)準(zhǔn)G-顯帶技術(shù)所得到的結(jié)果進(jìn)行比較。下表展示了分裂間期染色體分布圖(ICP)顯帶與標(biāo)準(zhǔn)G-顯帶方法的比較。為了參考方便，提供了下面的縮寫(xiě)(^=長(zhǎng)臂；P-短臂；p-接近著絲粒；q-著絲粒遠(yuǎn)端；TeF端粒；ma-主帶；mi-次帶。表1-染色體lICP帶G-帶端粒(pter)Pma5P36.3Pmi5P36.1dPma4P34.3d/p35pPmi4P33Pma3P31.3dPmi3P31.1dPma2P31.1pPmi2P22.1PmalP13.3d/p21pPmilP13.1著絲粒Q0Q12QmilQ21.3QmalQ23Qmi2Q25Qma2Q31dQmi3Q32.1Qma3Q32.2/q32.3Qmi4Q42.1端粒(qter)Qma4Q44表2-染色體2<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表4-染色體4<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表5-染色體5<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表6-染色體6<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>表7-染色體7<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>表10-染色體IO<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>表11-染色體ll<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>表12-<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表13-<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表14-<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表15-染色體15<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>表18-染色體18<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表21-染色體21<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表22-染色體22<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表X-染色體X<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表Y-染色體Y<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>因?yàn)榍懊娴墓_(kāi)內(nèi)容代表本發(fā)明為實(shí)施本發(fā)發(fā)明所涉及的最佳方式，并為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)嵤┍景l(fā)明，明顯的是這些方法包括了對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的修改和改變。所以，其不能被認(rèn)為受到限制，而且需要包括前面所述的顯而易見(jiàn)的變化，需要被限制為下面權(quán)利要求的主旨和范圍。參考文獻(xiàn)BabuVR和WiktorA.反向細(xì)胞遺傳學(xué)分析的焚光原位雜交技術(shù)(Afluorescenceinsituhybridizationtechniqueforretrospectivecytogeneticanalysis)1991,57:16-17。BerendSa，HorwitzJ,McCaskillC，ShafferLG.在親代檢測(cè)羅伯遜易位和異染色體之后鑒定單親三體(IdentificationofuniparentaldisomyfollowingprenataldetectionofRobertsoniantranslocationsandisochromosomes)AmJHumGenet.2000,66(6):1787-93。Chudobal，PleschA,LorchT等人，高分辨率多色顯帶新型精確的人類(lèi)染色體FISH分析(Highresolutionmulticolor-banding:anewtechniqueforrefinedFISHanalysisofhumanchromosomes)CytogenetCellGenet.1999，84(3-4):156-160。CraigJM,KrausJ,CremerT.使用PCR輔助親和層析從FISH探針去除重復(fù)序歹'j(RemovalofrepetitivesequencesfromFISHprobesusingPCR-assistedaffinitychromatography)HumGenet.1997Sep;100(3-4):472-6。KakazuN，Bar-AmI，HadaS等人，新型現(xiàn)代技術(shù)，光譜顯色(SCAN),用于對(duì)染色體異常的完全鑒定(Anewchromosomebandingtechnique,spectralcolorbanding(SCAN),forMlcharacterizationofchromosomalabnormalities)GenesChromosomesCancer.2003Aug,37(4):412-16。LemkeJ,ClaussenJ,MichelS等人，間期人類(lèi)染色體5的DNA基結(jié)構(gòu)(TheDNA-basedstructureofhumanchromosome5inInterphase)AmJHumGenet.2002，71(5):1051-59。LiehrT，HellerA,StarkeH等人，基于微切，全部24條人類(lèi)染色體的高分辨率多色顯帶(Microdissectionbasedhighresolutionmulticolorbandingforall24humanchromosomes)IntJMolMed.2002Apr;9(4):335-9。MullerS,RocchiM,Ferguson-SmithMA等人，多色染色體條形碼用于通過(guò)焚光原位雜交得到完整的人類(lèi)核型(Towardamulticolorchromosomebarcodefortheentirehumankaryotypebyfluorescenceinsituhybridization)HumGenet.1997，100:271-8。MullerS，O'BrienPC，F(xiàn)erguson-SmithMA等人，交叉類(lèi)型的色彩片段人類(lèi)核型研究中的新型工具(Crossspeciescolorsegmenting:anoveltoolinhumankaryotypeanalysis)Cytometry.1998,33:445-52。SilversteinS,LererI,SagiM,FrumkinA,Ben-NeriahZ，AbeliovichD.沖企觀'J具有穩(wěn)定羅伯遜易位的胎兒中的單親染色體風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)(UniparentaldisomyinfetusesdiagnosedwithbalancedRobertsoniantranslocations:riskestimate)PrenatDiagn.2002,22(8):649-51。TdeniusH,CarterNP，BebbCE等人，降解性寡聚核苷酸引導(dǎo)的PCR:通過(guò)單一降解性引物進(jìn)行目標(biāo)DNA的普遍擴(kuò)增(Degenmtiveoligonucleotide-primedPCR:generalamplificationoftargetDNAbyasingledegenerateprimer)Genomics.1992Jul;13(3):718-25。DavidsonJM，MorganTW，HisBL等人，截短的獨(dú)特序列，原位雜交(Substracted，Unique-Sequence,InSituHybridization)AmJPathol.1998,153:1401-09。PinkdD,StmumeT，GrayJW.使用定量高靈敏度熒光雜交的細(xì)胞遺傳學(xué)分析(Cytogeneticanalysisusingquantitative,high-sensitivity,fluorescencehybridization)ProcNatlAcadSci，USA.1986,83:2934-38。MeltzerPS，GuanXY,BurgessA等人，通過(guò)染色體微切快速產(chǎn)生區(qū)域特異性的探針及其應(yīng)用(Rapidgenerationofregionspecificprobesbychromosomemicrodissectionandtheirapplication)NatureGenetics,1992,Apr;1(1):24-8。HuL,ShamJ,TjiaW等人，通過(guò)染色體微切產(chǎn)生人類(lèi)端粒帶繪制探針的完整組(Generationofacompletesetofhumantelomericbandpaintingprobesbychromosomemicrodissection)Genomics,2004，F(xiàn)eb;83②:298-302。MeltzerPandBittnerM.人類(lèi)遺傳學(xué)中目前方法中的染色體微切(ChromosomeMicrodissectioninCurrentProtocolsinHumanGenetics),Unit4.8，2001JohnWiley&Sons,Inc。人類(lèi)染色體-基礎(chǔ)技術(shù)手冊(cè)(HumanChromosomes-ManualofBasicTechniques)VermaRandBabuA.PergamonPress,NewYork.1989。ISCN(1995):人類(lèi)免疫學(xué)術(shù)語(yǔ)的國(guó)際系統(tǒng)(AnInternationalSystemforHumanCytogeneticNomenclature)MitelmanF(ed);S.Karger，Basel,1995。AGT細(xì)胞遺傳學(xué)手冊(cè)(TheAGTCytogeneticsManual)3rded.BarchMJ，KnutsenJL,Spurbeck(ed).Lippincot-Raven，Philadelphia.1997。臨床細(xì)胞遺傳學(xué)原理(ThePrinciplesofClinicalCytogenetics)GersenSandKeagleM，(ed).HumanPress,Totowa，NewJersey.2004。權(quán)利要求1.一種用于生成分裂間期染色體分布圖的方法，該方法包括獲得樣品，其含有具有用于形成分布圖的染色體的細(xì)胞；獲得物種特異性DNA探針，所述DNA探針能夠在染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一條染色體；將所述樣品與所述DNA探針進(jìn)行雜交；使用多種酶在所述染色體上產(chǎn)生有差別的主帶，以對(duì)樣品進(jìn)行比色分析；使用目視分析，以確定染色體的分布圖。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，使用額外的有差別的染色以在所述染色體的所述主帶之間形成有差別的次帶。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述的額外有差別的染色包括黑色色素。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述主帶和所述次帶以1:l的比例存在。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述染色體包括長(zhǎng)臂和短臂，其中所述次帶被染色以提供每條染色體臂上不同的次帶深度。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的雜交是原位雜交。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述的原位雜交在載玻片上進(jìn)行。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述的載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的目視分析包括光學(xué)顯微鏡。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的目視分析包括CCD相機(jī)。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的DNA樣品的來(lái)源選自由羊水、外周血、胸水、骨髓、腫瘤組織和妊娠產(chǎn)物所組成的組中。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的目視分析能夠檢測(cè)染色體異常。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述的染色體異常是易位。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述的易位包括羅伯遜易位。15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的目視分析得到核型。16.—種比色原位雜交的方法，該方法包括下列步驟獲得樣品，其含有具有用于形成分布圖的染色體的細(xì)胞；獲得物種特異性DNA探針，所述DNA探針能夠在染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一條染色體；將所述樣品與所述DNA探針進(jìn)行原位雜交；使用多種酶在所述染色體上產(chǎn)生有差別的主帶，以進(jìn)行所述樣品的比色分析；以及使用目視分析確定所述染色體的分布圖。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，使用額外的有差別的染色以在所述染色體上的所述主帶之間形成有差別的次帶。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述的額外的有差別的染色包括黑色色素。19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述主帶和所述次帶以1:l的比例存在。20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述染色體包括長(zhǎng)臂和短臂，其中所述次帶被染色以提供每條染色體臂上不同的次帶深度。21.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述的原位雜交在載玻片上進(jìn)行。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述的載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。23.—種目視檢測(cè)染色體中羅伯遜易位的方法，該方法包括下列步驟獲得樣品，其含有具有用于形成分布圖的染色體的細(xì)胞；獲得人類(lèi)DNA探針，所述DNA探針能夠在每條染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少兩條染色體；將所述樣品與所述DNA探針進(jìn)行雜交；使用多種酶在染色體上產(chǎn)生有差別的主帶，以進(jìn)行所述染色體的比色分析；以及使用目視分析以確定是否在所述染色體之間出現(xiàn)羅伯遜易位。24.根據(jù)權(quán)利要求23所迷的方法，其中，使用額外的有差別的染色以在所述染色體的所述主帶之間形成有差別的次帶。25.根據(jù)權(quán)利要求24所迷的方法，其中，所述的額外有差別的染色包括黑色色素。26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中，所述主帶和所述次帶以1:l的比例存在。27.根據(jù)權(quán)利要求24所迷的方法，其中，所述染色體包括長(zhǎng)臂和短臂，其中所述次帶被染色以提供每條染色體臂上不同的次帶深度。28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述的雜交是原位雜交。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述的雜交在載玻片上進(jìn)行。30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中，所述的載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。31.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述的目視分析包括使用光學(xué)顯微鏡。32.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述的目視分析包括使用CCD相機(jī)。33.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述的DNA樣品的來(lái)源選自由羊水、外周血、胸水、骨髓、腫瘤組織和妊娠產(chǎn)物所組成的組中。34.—種檢測(cè)標(biāo)記物染色體的方法，該方法包括下列步驟獲得樣品，其含有具有用于形成分布圖的染色體的細(xì)胞；獲得人類(lèi)DNA探針，所述DNA探針能夠在每條染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少兩條染色體；將所述樣品與所述DNA探針進(jìn)行雜交；使用多種酶在染色體上產(chǎn)生有差別的主帶，以進(jìn)行所述染色體的比色分析。35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，使用額外的有差別的染色以在所述染色體的所述主帶之間形成有差別的次帶。36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述的額外的有差別的染色包括黑色色素。37.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述主帶和所述次帶以1:1的比例存在。38.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述染色體包括長(zhǎng)臂和短臂，其中所述次帶被染色以提供每條染色體臂上不同的次帶深度。39.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述的雜交是原位雜交。40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中，所述的原位雜交在載玻片上進(jìn)行。41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中，所述的載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。42.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述的目視分析包括使用光學(xué)顯微鏡。43.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述的目視分析包括使用CCD相機(jī)。44.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述的DNA樣品的來(lái)源選自由羊水、外周血、胸水、骨髓、腫瘤組織和妊娠產(chǎn)物所組成的組中。45.—種標(biāo)記染色體的方法，該方法包括下列步驟獲得樣品，其含有具有用于標(biāo)記的至少一條染色體的細(xì)胞；獲得物種特異性DNA探針，其中所述DNA探針能夠在所述染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一條染色體；將該染色體與所述DNA探針進(jìn)行雜交，其中該染色體被標(biāo)記。46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中，所述的標(biāo)記包括有差別的染色，因而形成了有差別的主帶。47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中，使用額外的有差別的染色以在所述染色體的所述主帶之間形成有差別的次帶。48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中，所述的額外的有差別的染色包括黑色色素。49.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中，所述主帶和所述次帶以1:l的比例存在。50.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中，所述染色體包括長(zhǎng)臂和短臂，其中所述次帶被染色以提供每條染色體臂上不同的次帶深度。51.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中，所述的雜交是原位雜交。52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中，所述的雜交在載玻片上進(jìn)行。53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述的載玻片包括一系列孔用于接受、雜交和分析所述的DNA分布圖。54.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中，所述的DNA樣品的來(lái)源選自由羊水、外周血、胸水、骨髓、腫瘤組織和妊娠產(chǎn)物所組成的組中。55.—種產(chǎn)生分裂間期染色體分布圖的試劑盒，該試劑盒包括多種物種特異性DNA探針，其中，所述DNA探針能夠在所述至少一條染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一條染色體；以及多種酶用于在染色體上產(chǎn)生有差別的主帶，以進(jìn)行所述染色體的比色分析。56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的試劑盒，其中，使用額外的有差別的染色以在所述染色上的所述主帶之間形成有差別的次帶。57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的試劑盒，其中，所述的額外的有差別的染色包括黑色色素。58.根據(jù)權(quán)利要求56所述的試劑盒，其中，所述主帶和所述次帶以1:1的比例存在。59.根據(jù)權(quán)利要求56所述的試劑盒，其中，所述染色體包括長(zhǎng)臂和短臂，其中所述次帶被染色以提供每條染色體臂上不同的次帶深度。60.根據(jù)權(quán)利要求55所述的試劑盒，該試劑盒還包括一些載玻片用于至少一條所述染色體與所述探針組的原位雜交。61.根據(jù)權(quán)利要求55所述的試劑盒，該試劑盒還包括所述至少一條染色體比色分析的目視分析設(shè)備。62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的試劑盒，其中，所述目視分析設(shè)備包括顯微鏡。63.根據(jù)權(quán)利要求61所述的試劑盒，其中，所述目視分析設(shè)備包括相機(jī)。64.—種探針組，該探針組包括多種物種特異性DNA探針，其中，所述DNA探針能夠被設(shè)計(jì)在染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一條染色體。65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的探針組，該探針組還包括多種用于在所述染色體上產(chǎn)生染色主帶的酶。66.根據(jù)權(quán)利要求65所述的探針組，其中，使用額外的有差別的染色以在所述染色上的所述主帶之間形成有差別的次帶。67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的探針組，其中，所述的額外的有差別的染色包括黑色色素。68.根據(jù)權(quán)利要求66所述的探針組，其中，所述主帶和所述次帶以1:1的比例存在。69.根據(jù)權(quán)利要求66所述的探針組，其中，所述染色體包括長(zhǎng)臂和短臂，其中所述次帶被染色以提供每條染色體臂上不同的次帶深度。70.—種用于原位分裂間期染色體雜交的載玻片，該載玻片包括還具有多個(gè)進(jìn)行原位雜交的孔的玻璃載玻片。全文摘要用于生成間期染色體分布圖的方法和設(shè)備。該方法包括獲得含有細(xì)胞的樣品，其中細(xì)胞具有用于形成分布圖的染色體；獲得物種特異性的DNA探針，其中所述的DNA探針能夠在染色體基本等距離的位置上標(biāo)記至少一個(gè)所述染色體；將所述樣品與所述DNA探針進(jìn)行雜交；使用多種酶在染色體上產(chǎn)生有差別的色帶，以進(jìn)行樣品的比色分析；以及使用目視分析以確定所述染色體的分布圖。文檔編號(hào)C07H21/04GK101128602SQ200580048678公開(kāi)日2008年2月20日申請(qǐng)日期2005年12月22日優(yōu)先權(quán)日2005年1月12日發(fā)明者拉梅什·瓦拉巴恩尼申請(qǐng)人:拉梅什·瓦拉巴恩尼