專利名稱：卡介菌多糖、核酸原粉制備過程中破菌新工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及卡介菌多糖、核酸原粉制備過程中破菌新工藝，特別涉及到將卡介菌菌體采用高剪切分散乳化法進行破菌。
背景技術：
卡介菌多糖、核酸(BCG Polysaccharide and Nucleic)具有調節人體的免疫功能、治療及預防感冒、哮喘、慢性濕癥和慢性特發性蕁麻疹等疾病。
現有的卡介菌多糖、核酸原粉制備全過程是培養基制備、接種培養、收菌、破菌、提取、精制和制備干粉。其中破菌過程為整個制備過程的關鍵步驟，破菌的優劣嚴重影響產品的收率和質量。目前國內生產廠家一般采用高速組織搗碎法進行破菌。
現有的卡介菌多糖、核酸原粉制備過程中破菌方法為將上步培養所得菌體和注射用水置于高速組織搗碎機內，開動機器進行破菌，得勻漿，將制得的勻漿進入下一步工序，最后制得卡介菌多糖、核酸原粉。
然而現有的制備工藝，由于刀具轉動過程中破菌液形成渦流，刀具和菌體的接觸不夠充分，同時刀具和菌體之間為單純的切割，因此破菌不夠徹底，原粉收得率只有2％左右，核酸含量為10％±1％，明顯低于《2000年版生物制品規程》標準范圍的10-20％。
發明內容
本發明提供了卡介菌多糖、核酸原粉制備過程中破菌新工藝，采用高剪切分散乳化法進行破菌，提取卡介菌菌體內的多糖與核酸。
卡介菌多糖、核酸原粉制備過程中破菌的新工藝方法為取卡介菌菌體，加一定比例的注射用水，然后將剪切機伸入破菌液中，開動電源，連續運轉3小時進行破菌，破菌完畢，制備的勻漿進入下一道工序進行提取，最后制得卡介菌多糖、核酸原粉。
本發明由于改變了破菌方式，即采用高剪切分散乳化法破菌，在不增加任何賦形劑、破菌時間及其他提取工藝都未改變的情況下，使該原粉收得率提高到3％左右，比現有的制備工藝增加了30-40％；而且核酸的含量也提高至18-20％，在操作方法上也比現有方法方便、簡單。
實施例1將6公斤菌體放入20升容積的不銹鋼桶內，加注射用水6升，將破菌刀具伸入液體中，刀具離桶底5厘米左右，開啟電源，連續運轉(10000轉/分鐘)3小時，制備的勻漿進入下一道工序進一步提取，最后制得卡介菌多糖、核酸原粉。計算產品收得率和檢測產品中組分含量，結果見表1。
比較實施例1取6公斤菌體和16升注射用水置于搗碎機容器內，蓋上蓋子，連接刀具，慢速啟動，刀具旋轉至勻速(6000轉/分鐘)，然后開啟快速檔，運行時間1分鐘，并用手把扶容器，以免搗碎機震移。間隔1分鐘后，再按以上方法進行第二次操作，共搗碎3分鐘，將制備的勻漿進入下一道工序進行提取，最后制得卡介菌多糖、核酸原粉。計算產品收得率和檢測產品中組分含量，結果見表1。
表1卡介菌多糖、核酸原粉各組分含量及收率表 關于表1的說明1、糖含量與核酸含量參照《2000年版生物制品規程》；2、收得率＝卡介菌多糖、核酸原粉質量/菌體質量×100％。
采用高速組織搗碎法破菌，由于轉速低(約6000轉/分)，且運行過程中產生渦流，刀具和菌體的接觸不充分，同時刀具和菌體的作用過程為切割過程，菌體受力較弱，因此破菌不夠徹底；采用高剪切分散乳化法進行破菌，由于轉速高(大于10000轉/分)，且運行過程中產生紊流，刀片和菌體的接觸充分，同時刀片和菌體的作用過程為剪切過程，因此破菌較徹底。
本發明方法可提高卡介菌多糖、核酸原粉的收得率與核酸的含量，并且在整個破菌期間無須專人看守，從而節約了生產力，降低了生產成本。
雖然以上具體描述了本發明某些實施方案和實施例，但本領域所屬技術人員應當理解，在不脫離本發明基本精神和范圍的前提下可對本發明實施方案進行各種修改和替換，而這些修改和替換均應包括在本發明的等同范圍內。
權利要求
1.卡介菌多糖、核酸原粉制備過程中破菌新工藝采用高剪切分散乳化法進行破菌，提取卡介菌內的多糖與核酸。制備方法為取卡介菌菌體，加一定比例的注射用水，然后將剪切機伸入水中，刀具離桶底5厘米左右，開動電源，連續運轉3小時，破菌完畢，制備的勻漿進入下一道工序進行提取，最后制得卡介菌多糖、核酸原料。
2.如權利要求1所述的方法，采用高剪切分散乳化法進行破菌。
3.如權利要求2所述的方法，機器轉速為10000轉/分。
4.如權利要求2所述的方法，破菌時破菌液產生紊流。
5.如權利要求2所述的方法，破菌時刀片和菌體之間的剪切過程。
6.如權利要求1～5所述的方法，包括卡介菌多糖、核酸原粉制備過程中破菌新工藝方法。
全文摘要
本發明公開了卡介菌多糖核酸原粉制備過程中破菌新工藝。采用高剪切分散乳化法進行破菌。本發明方法可提高卡介菌多糖、核酸原粉的收得率及卡介菌多糖核酸原粉中核酸含量，從而降低生產成本和提高產品質量。
文檔編號C07H21/00GK1817910SQ20051013588
公開日2006年8月16日 申請日期2005年12月22日 優先權日2005年12月22日
發明者張德生 申請人:浙江萬馬藥業有限公司