專利名稱：治療胃腸炎的中藥提取物及含有該提取物的中藥組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種對于急、慢性胃腸炎具有治療活性的中藥提取物及其制備方法，以及含有該活性提取物的中藥組合物，屬于中藥領域。
背景技術：
牛耳楓為交讓木科交讓木屬植物牛耳楓(Daphniphyllumcalycinum Benth.)，以牛耳楓子、牛耳楓根、牛耳楓枝葉入藥。性味辛、苦、涼，具清熱解毒、活血舒筋的功效。
辣蓼為蓼科蓼屬植物水蓼(Polygonum hydropiper L.)，以全草入藥。性味辛、溫，具祛風利濕，散瘀止痛，解毒消腫，殺蟲止癢的功效。用于治療痢疾、胃腸炎、腹瀉、風濕關節痛、跌打腫痛等。
臨床上用牛耳楓的枝葉、辣蓼全草組方，采用水煎煮提取的方法得到清膏后加入輔料制成顆粒劑、片劑、硬膠囊劑等，用于治療急、慢性胃腸炎，療效確切。但該類產品均存在藥效物質不明確，質量標準可控性差的缺點，難于滿足中藥“安全、有效、可控、穩定”的要求。目前，盡管有多種劑型方便了患者的使用，但該類制劑僅是簡單的劑型轉換，在技術上未有創新之處，尚不能用科學的方法揭示其作用機理，難于被國際市場所接受。
發明內容
為解決該類中成藥存在的上述缺陷，本發明人對牛耳楓和辣蓼成方中的有效部位進行了提取。實驗表明，使用本發明方法所提取的牛耳楓和辣蓼活性提取物，具有解痙、鎮痛、抗炎的功效，且無毒副作用，對急、慢性胃腸炎具有確切的療效。
因此，本發明的目的之一在于，提供一種牛耳楓和辣蓼的中藥提取物，以及該中藥提取物的制備方法。該中藥提取物對急、慢性胃腸炎具有治療作用。
本發明中所述的牛耳楓是交讓木科交讓木屬植物牛耳楓(Daphniphyllum calycinum Benth.)的枝葉。
本發明中所述的辣蓼是蓼科蓼屬植物水蓼(Polygonumhydropiper L.)的全草。
本發明的中藥提取物的制備方法包括以下步驟a.使用可藥用溶劑對牛耳楓與辣蓼進行提取，得粗提物；b.提純該粗提物，制得所述中藥提取物。
優選通過以下步驟制得本發明中藥提取物a.將牛耳楓與辣蓼合并、加水煎煮提取，得粗提物；b.使用吸附樹脂對所述粗提物進行柱層析，制得所述中藥提取物。
所述步驟a中牛耳楓與辣蓼用量比為5～1∶1，優選3～1.5∶1，最為優選2∶1。
更為優選地，通過以下步驟制得本發明中藥提取物將牛耳楓和辣蓼合并加水煎煮提取，提取液合并濾過后濃縮，靜置、冷卻后離心，取上清液減壓濃縮，得粗提物(A)。使用吸附樹脂層析該粗提物(A)。首先以水為洗脫劑進行洗脫，濃縮、干燥，得水洗脫部分(AA)，然后以醇，優選乙醇為洗脫劑進行洗脫，對所得醇洗脫液減壓、濃縮、干燥，得醇洗脫部分(AB)，即為本發明中藥提取物。
優選地，牛耳楓和辣蓼合并煎煮提取的次數為3次。每次合并煎煮的提取時間為0.5-3小時。優選的水洗脫劑的用量為藥材量的10-20倍，優選醇洗脫劑的用量為藥材量的10-30倍。
更為優選地，本發明所述中藥提取物的制備方法包括以下步驟將牛耳楓2份、辣蓼1份(該比例與用于治療急、慢性腸胃炎的市售的中成藥—楓蓼腸胃康制劑處方中牛耳楓與辣蓼的比例相同)合并煎煮提取3次，每次加入水的用量為藥材量的8-12倍，提取時間分別是2小時、1.5小時、1.0小時。提取液合并濾過，濾液減壓濃縮，靜置冷卻6小時后，離心(3000r/h)，取上清液再減壓濃縮，得到粗提物(A)；將該粗提物(A)進行大孔吸附樹脂，優選AB-8大孔吸附樹脂層析，先以10-20倍量的水為洗脫劑進行洗脫得水洗脫部分(AA)；之后再以10-30倍量的60％-95％的乙醇為洗脫劑進行洗脫，收集該洗脫液，減壓濃縮、干燥即得本發明中藥提取物(AB)。
本發明中藥提取物對于急、慢性胃腸炎的治療活性通過下述動物藥效學試驗得到證明。
1.通過對兔腸平滑肌自主活動的抑制作用，以及對乙酰膽堿興奮兔腸肌的拮抗作用對上述兩種洗脫物治療急、慢性胃腸炎的活性進行評價1.1試驗材料選本發明所述粗提物(A)(陽性對照藥物，每克相當于生藥材5.45g)；水洗脫部分(AA)(每克相當于生藥材10.31g)；醇洗脫部分(AB)(每克相當于生藥材29.41g)；以上藥物均配制成每1ml水溶液相當于1g生藥材。乙酰膽堿溶液0.0550mol/L。臺氏液，充氧(含5％CO2)30分鐘備用。
1.2試驗儀器BL-410生物機能實驗系統1.3試驗方法標本的制作取純種家兔1只，體重2Kg左右，用木槌擊打頭部處死，立即剖開腹部，剪取回腸一段，立即放入冷臺氏液中，分離腸系膜，以臺氏液將回腸內容物沖洗干凈后，剪成2-2.5cm長的小段，置冷臺氏液中置冰箱中保存。實驗時，取1小段回腸，于冷臺氏液中，用縫線兩端對稱結扎好，固定在裝有臺氏液的恒溫杯中，使腸肌張力約1g左右。
試驗條件循環水溫保持36.5±5℃，恒溫杯中通O2量為2-3個氣泡/min。
試驗操作空白對照曲線的描繪取1小段回腸，給藥前先描繪一段平穩規則的曲線為空白對照曲線。
藥物對腸平滑肌自主活動的抑制作用曲線的描繪取1小段回腸，給藥前先描繪一段正常曲線，然后給予治療藥物，描繪該藥物的作用曲線，治療藥物作用時間約為4min。按以上操作方法分別描繪各治療藥物劑量分別為1ml、2ml時對腸平滑肌自主活動的抑制作用曲線。每次更換藥物時，用臺氏液將腸管沖洗3次，待收縮曲線恢復正常后再加第二種藥物。
藥物對乙酰膽堿興奮腸肌的拮抗作用曲線的描繪(1)取1小段回腸，描繪一段正常曲線后，給予20μl乙酰膽堿溶液，描繪一段乙酰膽堿的作用曲線作為對照曲線，作用時間約4min；(2)取1小段回腸，描繪一段正常曲線后，給予20μl乙酰膽堿溶液，乙酰膽堿作用后約30s給予治療藥物，描繪該藥物的作用曲線，治療藥物作用時間約為3min。按以上操作方法分別描繪各治療藥物各劑量分別為1ml、2ml、3ml時對抗乙酰膽堿的作用曲線。每次更換藥物時，用臺氏液將腸管沖洗3次，待收縮曲線恢復正常后再加第二個藥物。
應用BL-410生物機能實驗系統軟件對所取得的實驗信號進行數據轉換處理，并統計分析，結果見表1、表2。
1.4試驗結果結果表明粗提物(A)在給藥量為2g生藥材時對腸平滑肌自主活動有非常顯著的抑制作用，且對乙酰膽堿興奮腸肌也有非常顯著的拮抗作用；醇洗脫部分(AB)在給藥量為1g和2g生藥材時對腸平滑肌自主活動均有非常顯著的抑制作用，但對乙酰膽堿興奮腸肌的拮抗作用只有當給藥量為3g生藥材時才有顯著性意義；水洗脫部分(AA)在實驗劑量下對腸平滑肌自主活動的抑制作用和對乙酰膽堿興奮腸肌的拮抗作用均無顯著性意義。
觀察結果見表1和表2。
表1 藥物對腸平滑肌自主活動的抑制作用(χ±SD)
注給藥組與空白曲線比較，**P≤0.01。
n為試驗所用回腸片斷數。
表2 藥物對乙酰膽堿興奮腸肌的拮抗作用(χ±SD)
注給藥組與乙酰膽堿比較，**P≤0.01，*P≤0.05；乙酰膽堿與正常曲線比較，ΔΔP≤0.01。
n為試驗所用回腸片斷數。
2.通過對二甲苯致鼠耳腫脹的抑制作用，對于上述兩種洗脫物治療急、慢性胃腸炎的活性進行評價2.1試驗材料選本發明所述粗提物(A)(陽性對照藥物，每克相當于生藥材5.45g)；水洗脫部分(AA)(每克相當于生藥材10.31g)；醇洗脫部分(AB)(每克相當于生藥材29.41g)；以上各藥物以0.5％CMC-Na溶液分別配制成每1ml含藥量相當于2g生藥材。二甲苯分析純，由汕頭市光華化學廠提供。
2.2試驗儀器電子天平(北京瑞利，精度0.1mg)；φ9mm打孔器；微量進樣器(20μl)；2.3試驗方法取昆明種小白鼠，體重20～22g，雌雄各半，隨機分組，每組10只。給藥組按0.5ml/只灌胃給藥，空白對照組給同體積的0.5％CMC-Na溶液，1h后于小鼠右耳兩面各浸潤給致炎劑二甲苯0.01ml，左耳不涂為正常耳。2h后脫頸處死小鼠，用直徑為9mm的打孔器在相同部位打下左耳和右耳的圓耳片，用電子天平稱重，計算耳腫脹度及腫脹抑制率
耳腫脹度(mg)＝右耳重量-左耳重量腫脹度抑制率(％)＝(對照組腫脹度-給藥組腫脹度)÷對照組腫脹度×100％2.4試驗結果結果表明粗提物(A)、水洗脫部分(AA)及醇洗脫部分(AB)對二甲苯致小鼠耳腫脹均有非常顯著的抑制作用，且醇洗脫部分(AB)對二甲苯致小鼠耳腫脹度的抑制率高于其它給藥組。結果見表3。
表3 藥物對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用
序值法檢驗各給藥組與對照組比較，**P≤0.01。
n為試驗所用小鼠數目。
3.藥物一次口服最大耐受量試驗3.1試驗材料選本發明粗提物(A)(陽性對照藥物，每克相當于生藥材5.45g)；水洗脫部份(AA)(每克相當于生藥材10.31g)；醇洗脫部分(AB)(每克相當于生藥材29.41g)；以上各藥物以0.5％CMC-Na溶液分別配制成每1ml含藥量相當于6.25g生藥材。
3.2試驗儀器電子天平(北京瑞利，精度0.1mg)；3.3試驗方法取昆明種小白鼠，體重20～22g，隨機分組，每組20只，雌雄各半，分籠飼養。給藥前禁食14h，自由攝水，用電子天平稱重后，給藥組按0.8ml/只灌胃給藥，空白對照組給同體積的0.5％CMC-Na溶液，并立即觀察小鼠中毒情況。4h后給予飼料正常喂養，每隔4h觀察一次，觀察7d。主要觀察指標有小鼠的體征、行為活動及糞便情況；對中途死亡及試驗結束處死的小鼠立即剖檢，主要觀察其內臟(心、肺、肝、胰、腎、胃、腸等)有無異常，主要觀察內容包括臟器的大小、顏色、硬度、表面光滑程度及胸腹腔有無積液等。并每天記錄一次體重，觀察小鼠體重變化情況。
3.4實驗結果
一般癥狀及死亡情況給藥當天，除空白對照組小鼠活動正常外，其它各給藥組小鼠均表現為活動減少、豎毛、多尿、糞便不成形且顏色變深棕色、有粘肛現象，個別小鼠俯臥、腹部膻動。水洗脫部份(AA)給藥組給藥后30min時，即有小鼠驚闕死亡，給藥后60min時，雌雄各組各死亡9只；粗提物(A)給藥組給藥60min后，雌性小鼠死亡1只；醇洗脫部分(AB)給藥組試驗過程無死亡小鼠。給藥第一天，各給藥組小鼠活動正常，糞便恢復成形，但顏色仍顯深棕色，且多尿；第二天以后，各給藥組小鼠的活動癥狀與對照組比較無差異。
各藥物對小鼠體重的影響，結果見表4。
結果表明，粗提物(A)及醇洗脫部分(AB)給藥組小鼠的體重變化與空白對照組比較無顯著差異。
剖檢對給藥當天死亡的小鼠進行剖檢，見胃脹大，內有氣泡；腸管舒張；其它內臟未見異常。實驗結束，對處死的小鼠立即剖檢，肉眼觀察主要臟器(心、肺、肝、胰、腎、胃、腸等)無異常。
小鼠最大耐受量倍數市售的楓蓼腸胃康制劑成人日用量為15.53g生藥材。各給藥組耐受藥量為5g/只(以生藥材計)，按下式計算小鼠最大耐受量倍數每只小鼠的耐受藥量(g)/20g×50000g/15.53g＝804(倍)3.5結論實驗結果表明當給藥量為5g/只(以生藥材計)時，水洗脫部份(AA)的毒性最大，粗提物(A)次之，小鼠對粗提物(A)最大耐受量倍數小于804倍；而醇洗脫部分(AB)最為安全，小鼠對其最大耐受量倍數大于804倍。
上述藥理實驗結果表明上述醇洗脫部分(AB)具有解痙、鎮痛、抗炎的功能，且無毒副作用，故可以確定醇洗脫部分(AB)為用于治療急、慢性胃腸炎的牛耳楓和辣蓼制劑的有效部位。
經提取分離和結構分析確認，本發明粗提物(A)、醇洗脫部分(AB)中均含有下述式I化合物蘆丁(Rutin)、式II化合物槲皮素(Quercetin)、式III化合物3，5，7，4′-四羥基黃酮、式IV化合物5，7，4′-三羥基黃酮和式V化合物3，5，7，4′-四羥基黃酮醇-3-O-葡萄糖-鼠李糖苷
表4 各藥物對小鼠體重的影響
本發明的另一個目的在于提供一種治療急、慢性胃腸炎的中藥組合物，以及該中藥組合物的制備方法。本發明的中藥組合物含有本發明所述的中藥提取物，以及可藥用載體。
本發明中藥組合物的制備方法包括，將本發明所述的中藥提取物與可藥用載體混合。
本發明所述的中藥組合物可以被制成各種劑型，例如散劑、片劑、丸劑、分散劑、膠囊劑。
根據本發明所公開的技術內容，本領域技術人員將很清楚本發明的其它實施方案，下述實施例僅作為示例。在不違反本發明主旨及范圍的情況下，可對本發明進行各種改變和改進。這些改變和改進均應在本發明的保護范圍之內。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步的詳細描述。
實施例1牛耳楓、辣蓼中藥提取物的制備例按2∶1的比例取牛耳楓及辣蓼共6800克，合并煎煮提取3次，每次加入水的用量為藥材量的9.5倍，提取時間分別是2小時、1.5小時、1.0小時。提取液合并濾過，濾液減壓濃縮，靜置冷卻6小時后，離心(3000r/h)，取上清液再減壓濃縮，得到粗取物(A)1072克；將該粗提物(A)進行AB-8型大孔吸附樹脂層析，先以14倍量的水為洗脫劑進行洗脫，將水洗脫物濃縮、干燥，得680克水洗脫部分(AA)；之后再以21倍量的60％-95％的醇為洗脫劑進行洗脫，收集該洗脫液，減壓濃縮、回收醇、干燥即得醇洗脫部分(AB)256克，該醇洗脫部分(AB)即為牛耳楓、辣蓼的有效提取物。
實施例2本發明中藥組合物散劑的制備將實施例1所制得的中藥提取物研成細粉、過篩，取已過篩的該中藥提取物細粉1份，加入淀粉3.5份、乳糖粉6.5份按等量遞加混合法混合均勻，按容量法分劑量制得散劑。
實施例3本發明中藥組合物硬膠囊劑的制備將實施例1所制得的中藥提取物粉碎，過60-100目篩，取已過篩的該中藥提取物細粉1份，加入干淀粉1.1份作為充填劑，加入1-3％滑石粉作助流劑，混合均勻后用空心膠囊充填，制得硬膠囊劑。
實施例4本發明中藥組合物片劑的制備將實施例1所制得的中藥提取物粉碎過60-100目篩，取已過篩的該中藥提取物細粉1份，加入羥丙基纖維素1.1份作崩解劑，加入藥用糊精0.4份作粘合劑，加入適量50-95％的乙醇作潤濕劑，濕法制粒、干燥、整粒后加入1-3％的潤滑劑混合均勻、壓制成片劑。
實施例5本發明中藥組合物分散片的制備將實施例1所制得的中藥提取物1份和載體材料(PVP或甘露醇)4份共同溶于50-95％的乙醇中，用噴霧干燥法(或冷凍干燥法)干燥后，過篩，加入1.9份的微晶纖維素作崩解劑，加入適量微粉硅膠作助流劑，混合均勻后將粉末直接壓制成片劑，即制得分散片。
權利要求
1.一種中藥提取物，通過以下步驟制得a.使用可藥用溶劑對牛耳楓與辣蓼進行提取，得粗提物；b.提純該粗提物，制得所述中藥提取物。
2.根據權利要求1的中藥提取物，通過以下步驟制得a.將牛耳楓與辣蓼合并、加水煎煮提取，得粗提物；b.使用吸附樹脂對所述粗提物進行柱層析，制得所述中藥提取物。
3.根據權利要求1或2的中藥提取物，通過以下步驟制得a.將牛耳楓與辣蓼合并、加水煎煮提取，濃縮提取液并離心；取離心后上清液濃縮，得粗提物；b.使用吸附樹脂將所述粗提物進行柱層析，首先以水為洗脫劑進行洗脫，然后以醇進行洗脫；c.對所得醇洗脫液減壓、濃縮、干燥，制得所述中藥提取物。
4.根據權利要求1或2的中藥提取物，其特征在于，所述步驟a中牛耳楓與辣蓼用量比為5～1∶1，優選3～1.5∶1，最為優選2∶1。
5.根據權利要求1、2或3的中藥提取物，其特征在于，所述步驟a中提取的次數為3次，每次提取時間為0.5-3小時。
6.根據權利要求3的中藥提取物，其特征在于，所述步驟b中水洗脫劑的用量為牛耳楓與辣蓼用量的10-20倍，醇洗脫劑的用量為牛耳楓與辣蓼用量的10-30倍，所使用的吸附樹脂為大孔吸附樹脂。
7.根據權利要求3的中藥提取物，其特征在于，所述吸附樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂，所述醇洗脫劑為60％-95％的乙醇，所述提取物含有下述式I-式V化合物
8.一種中藥提取物的制備方法，該方法包括以下步驟a.將牛耳楓與辣蓼合并、加水煎煮提取，濃縮提取液并離心；取離心后上清液再濃縮，得粗提物；b.使用吸附樹脂將所述粗提物進行柱層析，首先以水為洗脫劑進行洗脫，然后以醇進行洗脫；c.對所得醇洗脫液減壓、濃縮、干燥，制得所述中藥提取物。
9.一種中藥組合物，含有權利要求1-7中任一項所述的中藥提取物，以及可藥用載體。
10.根據權利要求9的組合物，其特征在于所述組合物制成片劑、膠囊劑、散劑和分散片。
全文摘要
本發明涉及從牛耳楓和辣蓼中提取的、對于急、慢性胃腸炎具有治療活性的中藥提取物及其制備方法，以及含有該活性提取物的中藥組合物。該中藥提取物以及含有該提取物的中藥組合物具有解痙、鎮痛、抗炎的功效，并且無毒副作用。本發明中藥組合物可以被制備成任何一種適于治療胃腸疾病的口服制劑。
文檔編號C07B63/00GK1843418SQ20051007109
公開日2006年10月11日 申請日期2005年5月24日 優先權日2005年4月7日
發明者劉明生, 靳德軍, 陳德梅, 張俊清, 王元國, 郭小明, 劉紅雨, 康勝利, 符乃光 申請人:海南醫學院