專利名稱：純化普伐他汀的方法
技術領域：
本發明涉及普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，進行用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟；涉及以進行用無機酸分解雜質的步驟為特征的普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法；涉及以進行用無機堿分解雜質的步驟為特征的普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法。
本發明還涉及普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于將選自上述三個步驟中的兩個或多于兩個步驟組合。
本發明進而涉及一種含有可工業生產的普伐他汀鈉的組合物，其特征在于含有相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下的量的具有下述通式(I) 的化合物。
背景技術：
普伐他汀為特開昭57-2240號公報(USP4,346,227)中作為HMG-CoA還原酶抑制劑公開的化合物，具有下式(II)，
現在普伐他汀鈉正作為高脂血癥治療藥物出售。
作為HMG-CoA還原酶抑制劑，除普伐他汀外，還已知有許多化合物，例如阿托伐他汀、氟伐他汀、伊伐他汀等全都是通過合成制造的化合物。
另一方面，洛伐他汀和辛伐他汀雖然是與普伐他汀一樣可通過發酵制造的物質，但是前兩種物質可通過一段發酵生成，而普伐他汀則需通過兩段發酵才能生成，在這一點上存在區別。即，普伐他汀鈉如下式所示，通過將第一階段發酵生成的前體在第二階段進行微生物轉化培養而生成。
最初進行微生物發酵時，生成了比化學反應合成多許多的沒有想到的雜質。即使在各步驟進行純化，也無法完全除去所有雜質，特別是當以工業生產為目的進行大量培養時，雜質的除去變得更為困難。
另一方面，“制造安全有效藥物的一個重要因素是得到高純度的產物。化學物質可通過下述生產方法例如由原料物質化學合成、分離或純化由生物產生的該所述物質或者分離或純化在利用了基因重組細胞等的生產中所產生的該所述物質等方法而獲得。即使采用包括基因重組法的任何生產方法，通常也會因為原料的純度、反應的不完全性、分離或純化過程中的分解等原因而難于以100％的純度獲得所制造的物質。而且，在醫藥領域中，無法否認若診斷用藥、治療用藥含有雜質，則可能對診斷或治療產生不利影響，這顯然是本發明所屬技術領域中的技術常識，總之，獲得盡可能高純度的產物是重要的。”“東京高裁平成9年(換行)第302號事件(12年2月17日判決)”。
而且，HmG-CoA還原酶抑制劑為了有效降低血液中膽固醇，是需要長期服用的一種藥物。為了盡量減少副作用，必須特別要求高純度。
因此，如上所述，由兩段發酵生成的普伐他汀類與由一段發酵生成的辛伐他汀和洛伐他汀相比，由于含有更多的雜質，因而純化步驟特別重要，尋找除去雜質、分離或純化高純度普伐他汀的方法的研究持續至今。
本發明者們發現特別是在兩段發酵生成普伐他汀時，必定生成下述化合物(I)， 而且上述化合物(I)的產量是轉化培養普伐他汀時所生成雜質中最多的。不過，如上所述，雖然知道為獲得高純度普伐他汀，從在藥物制造中被認為是雜質的化合物中確實除去上述化合物(I)是重要的課題，但由于上述化合物(I)是關于普伐他汀的一個不對稱碳原子上的羥基的旋光異構體，因而與其它雜質相比極難除去。
從而，希望開發出一種方法，該方法不是色譜之類煩雜、不利于工業生產的方法，而是無損于工藝生產性、能以相當于色譜純化程度的高純度分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的方法，而且是可以除去上述化合物(I)、得到高純度普伐他汀的簡便的分離或純化方法。
另一方面，作為HMG-CoA還原酶抑制劑的純化方法，已知有下述各種方法。
(1)WO 92/16276號公報(特表平6-506210號公報)該公報涉及“以使用高效液相色譜法為特征的HMG-CoA還原酶抑制劑的純化方法，以及由該純化方法所獲得的HMG-CoA還原酶抑制劑”。
該公報的純化方法的特征在于在HMG-CoA還原酶抑制劑的純化工藝中使用高效液相色譜法。而本發明的分離或純化方法的特征在于通過使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑，除去普伐他汀的雜質，和/或用無機酸和/或無機堿通過分解除去雜質，可不用高效液相色譜法而得到高純度的普伐他汀，這一點與該公報的純化方法不同。
而且也沒有關于本發明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下為特征的”分離或純化方法的記載或暗示。
另外，由于高效液相色譜法需要大量的溶劑，而這些溶劑中含有少量不揮發性雜質，在大規模生產的情況下則更嚴重。在除去溶劑時，這些雜質混入試料中。而且，使用這樣大量的溶劑將引起嚴重的環境污染、帶來高額的蒸餾費用。
因此，高效液相色譜法煩雜，不利于工業生產，沒法考慮將其用于工業分離或純化普伐他汀。
在普伐他汀的工業生產中，即使采用高效液相色譜法，也難于除去作為普伐他汀旋光異構體的上述化合物(I)而得到所需高純度的普伐他汀。
(2)WO 99/42601號公報該公報涉及“通過將HMG-CoA還原酶抑制劑的濃縮培養液用酸調節至pH4.5-7.5，然后用乙酸乙酯萃取HMG-CoA還原酶抑制劑，根據需要使其內酯化后結晶，得到純度等于或大于99.6％的HMG-CoA還原酶抑制劑的分離或純化方法”。
該公報的純化方法在用有機溶劑從含有由微生物生成的普伐他汀的培養濃縮液萃取普伐他汀類的步驟中，使用乙酸乙酯，而與之相對，本發明的純化方法使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑，就這一點而言兩種分離或純化方法是不同的。
而且，本發明的分離或純化方法的特征在于通過用無機酸和/或無機堿分解普伐他汀的雜質，得到高純度的普伐他汀。而該公報中沒有關于用無機酸和/或無機堿分解HMG-CoA還原酶抑制劑的雜質這一步驟的記載或暗示。
另外，也沒有記載或暗示本發明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下為特征”的分離或純化方法。
確實，該公報的實施例3中記載有普伐他汀的分離或純化方法，但該實施例中記載用乙酸乙酯萃取后的普伐他汀的純度停留在不足70.3％，之后則采用與本發明的分離或純化方法不同的色譜法進行純化，而關于最終所得普伐他汀的純度則完全沒有記載。因此，不知道最終是否得到了高純度的普伐他汀，而且也沒有關于是否對其進行純化，以將上述化合物(I)的含量降低至相對于普伐他汀為0.1％重量或以下的記載或暗示。
而且，對于該公報實施例中記載可以以99.6％或以上的高純度獲得的洛伐他汀，僅從最終產物的HPLC圖(圖4)來看，難以認為得到了純度為99.6％或以上的洛伐他汀，沒有可信性。
(3)WO 00/17182號公報該公報涉及“以使用頂替色譜法為特征的HMG-CoA還原酶抑制劑的純化方法以及由該純化方法所獲得的HMG-CoA還原酶抑制劑”。
該公報的純化方法的特征是在HMG-CoA還原酶抑制劑的純化工藝中使用頂替色譜法。而本發明的分離或純化方法的特征在于使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑除去普伐他汀的雜質，和/或通過用無機酸和/或無機堿分解除去雜質，可不用包括頂替色譜法在內的一切色譜法而得到高純度的普伐他汀，這一點與該公報的純化方法不同。
而且也沒有關于本發明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下為特征的”分離或純化方法的記載或暗示。
由此，在普伐他汀的工業生產中，即使采用頂替色譜法，不僅煩雜，而且也難以除去作為普伐他汀旋光異構體的上述化合物(I)。
另外，除上述純化方法外，本領域人員通常采用的分離或純化方法還有例如分析用高壓液相色譜法(HPLC)，但分析用HPLC不是作為分離或純化普伐他汀的方法的實用手段。分析用HPLC使用直徑非常細的填充柱(直徑4.6mm×長度25cm)，每次分析時向高壓柱中添加約10μg(1×10-2mg)試料，一次分析要大約30分鐘。雖然試料會全部從柱中流出，但是是極端稀釋的溶液狀態，雖然可在分析系統中檢測成分，但對于收集并不實用。而且，分析用HPLC上沒有附屬的收集系統，即使裝了收集系統，在想得到固體試料的情況下也需要除去溶劑。如果將分析用HPLC用于普伐他汀的分離或純化，則分離或純化制作1個僅5mg片劑所需的普伐他汀，就需要500次分析和250小時，分析用HPLC對于普伐他汀的分離或純化目的而言是一種不現實的操作，可知不利于工業生產。
并且基于前述理由，分析用HPLC也不是以工業規模分離或純化普伐他汀的合適手段。
硅膠色層分離法雖然可根據硅膠粒子的大小大致分為柱層析和快速柱層析法，但無法期待其成為用于工業規模分離或純化的合適手段。
實際上，曾嘗試用各種色譜法分離上述化合物(I)和其它雜質，但由于上述化合物(I)是普伐他汀的立體異構體，因而無法將該化合物自普伐他汀分離。
重結晶是醫藥品領域廣泛使用的分離或純化操作。然而即使采用重結晶，對于從普伐他汀中選擇性分離結構類似于普伐他汀的上述化合物(I)，將組合物中的普伐他汀純度改善至所需程度而言也是沒有效果的。
也考慮了氣相色譜法、蒸餾等其它分離或純化方法，但任何一種方法的基礎都是以試料分子的大小差異為基準進行的分離，兩者都需要加熱試料。而普伐他汀具有在其熔點分離的趨勢，無法將這些作為分離或純化的方法。
即使反復進行任何前述分離或純化方法以除去上述化合物(I)，普伐他汀的收率反而減少了。
而且，如上所述，即使將歷來已知的任何分離或純化方法組合，以將上述化合物(I)減少至0.1％或以下的量，也未成為適用于普伐他汀的工業生產的方法。
因此，至今為止根本不知道有不損害工藝生產性而得到高純度普伐他汀，特別是通過除去作為普伐他汀類似物的具有上述通式(I)的化合物而得到高純度普伐他汀的分離或純化方法。
發明內容
本發明者們對含有普伐他汀的藥物組合物進行了深入研究，結果發現了獲得高純度普伐他汀(優選純度為99.5％或以上)的分離或純化方法，進而從該藥物組合物中除去包括普伐他汀類似物的上述化合物(I)的雜質的分離或純化方法，特別是除去上述化合物(I)使其含量相對于普伐他汀為0.1％重量或以下的分離或純化方法，從而完成了本發明。
本發明涉及(1)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，進行用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟；(2)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，進行用無機酸分解雜質的步驟；以及(3)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，進行用無機堿分解雜質的步驟；優選(4)(1)中所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為碳原子數3或4的直鏈或支鏈烷基；(5)(1)中所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基；(6)(2)中所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中無機酸為磷酸；以及(7)(2)或(6)中所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中用無機酸進行分解的步驟中pH為2-5。
本發明進而涉及(8)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機酸分解雜質的步驟組合進行；(9)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，將用無機酸分解雜質的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行；以及(10)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟、用無機酸分解雜質的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行；優選(11)(8)或(10)中所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為碳原子數3或4的直鏈或支鏈烷基；(12)(8)或(10)中所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基；(13)(8)-(12)中任一項所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中無機酸為磷酸；以及(14)(8)-(13)中任一項所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中用無機酸進行分解的步驟中pH為2-5。
另外，本發明涉及(15)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行；優選
(16)(15)中所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為碳原子數3或4的直鏈或支鏈烷基；以及(17)(15)中所述普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基。
本發明還涉及(18)普伐他汀鈉的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀鈉的工藝中，通過將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機酸分解雜質的步驟組合進行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下；(19)普伐他汀鈉的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀鈉的工藝中，通過將用無機酸分解雜質的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下；以及(20)普伐他汀鈉的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀鈉的工藝中，通過將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟、用無機酸分解雜質的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下；優選(21)(18)或(20)中所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中R為碳原子數3或4的直鏈或支鏈烷基；(22)(18)或(20)中所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基；(23)(18)-(22)中任一項所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中無機酸為磷酸；(24)(18)-(23)中任一項所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中用無機酸進行分解的步驟中pH為2-5；以及(25)(18)-(24)中任一項所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中普伐他汀鈉的純度為99.5％或以上。
本發明進一步涉及(26)普伐他汀鈉的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀鈉的工藝中，通過將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行，除去具有下述通式(I)
的化合物，使其含量相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下；優選(27)(26)中所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中R為碳原子數3或4的直鏈或支鏈烷基；(28)(26)中所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中R為正丙基或正丁基；(29)(26)-(28)中任一項所述普伐他汀鈉的分離或純化方法，其中普伐他汀鈉的純度為99.5％或以上。
本發明還涉及(30)含有可工業生產的普伐他汀鈉的組合物，其特征在于含有相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下的量的具有下述通式(I) 的化合物；優選(31)(30)中所述含有可工業生產的普伐他汀鈉的組合物，其中普伐他汀鈉的純度為99.5％或以上；(32)含有普伐他汀鈉的組合物，其特征在于含有相對于普伐他汀鈉為0.1％重量或以下的量的、由(8)-(17)中任一項所述分離或純化方法制得的具有下述通式(I) 的化合物；(33)(32)中所述含有普伐他汀鈉的組合物，其中普伐他汀鈉的純度為99.5％或以上。
本發明中，“普伐他汀類”是指具有下式(II) 的普伐他汀或其藥學上可接受的鹽以及具有類似于上式(II)的結構的化合物，即普伐他汀的類似物“例如上述化合物(I)”。
通常可以通過下述分離或純化方法實現普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化。
首先，根據常規方法過濾和/或離心完成轉化培養后的含有普伐他汀的培養液，分離菌體，之后濃縮得到培養濃縮液。
將所得培養濃縮液根據需要用酸調節pH后，用乙酸乙酯等與水難混合的有機溶劑萃取普伐他汀類。例如WO 99/42601號公報中，用酸將含有HMG-CoA還原酶抑制劑的培養濃縮液調節至pH4.5-7.5(優選5.5-7.5)，然后用乙酸乙酯萃取。
可根據常規方法從上述萃取液中收集由此得到的普伐他汀類。例如，將上述萃取液用水、飽和食鹽水等洗滌，然后加入氫氧化鈉，萃取分液，可得到作為反萃取水層的普伐他汀鹽的水溶液。可根據需要使所得普伐他汀鹽結晶。
根據需要所進行的結晶化可通過有機合成化學技術中普遍已知的方法“例如Ullmann’s，Encyclopedia of Industrial Chemistry，卷A24，第5版(1993)，437-505頁上所記載的方法”如下進行。
作為結晶化的方法，例如可以將有機溶劑和水加入到所得普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的組合物中，通過加熱溶解，加入晶種，得到作為結晶體的普伐他汀。
可用于結晶化的有機溶劑有例如己烷、庚烷等脂族烴類；甲苯、二甲苯等芳香族烴類；乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等酯類；乙酸等有機酸類；甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、異戊醇、二甘醇、丙三醇、辛醇等醇類；丙酮、丁酮等酮類；二乙醚、二異丙醚、四氫呋喃、二烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚等醚類；甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、六甲替磷酰三胺等酰胺類；二甲基亞砜等亞砜類；或者水與一種或多種上述有機溶劑的混合溶劑。優選水與一種或多種上述有機溶劑的混合溶劑，更優選水與選自醇類、酯類和酮類的一種或多種有機溶劑的混合溶劑，最優選水、醇類和酯類的混合溶劑。
本發明的分離或純化方法的特征在于如上所述根據常規方法得到培養濃縮液后，在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的步驟中，不用乙酸乙酯而是用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑進行萃取。
上式中，R的定義中“碳原子數等于或大于3的烷基”有例如正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、己基、異己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基等基團，優選碳原子數3-6的直鏈或支鏈烷基，更優選碳原子數3或4的直鏈或支鏈烷基，最優選正丙基或正丁基。
本發明的分離或純化方法的特征在于在上述分離或純化普伐他汀的方法中，進行用無機酸分解普伐他汀的雜質的步驟和/或用無機堿分解雜質的步驟。
將選自用具有上式CH3CO2R的有機溶劑萃取普伐他汀的步驟、用無機酸分解普伐他汀的雜質的步驟和用無機堿分解雜質的步驟的兩個或兩個以上步驟組合進行時，可以在分離或純化方法中以不同順序適當實施所需步驟。這樣的分離或純化方法的具體例子如下(a)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機酸分解雜質的步驟組合進行；(b)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行；(c)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，將用無機酸分解雜質的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行；以及(d)普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，將用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子數等于或大于3的烷基)的有機溶劑萃取普伐他汀類的步驟、用無機酸分解雜質的步驟和用無機堿分解雜質的步驟組合進行。
通過無機酸分解普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的雜質的步驟可在惰性溶劑的存在或不存在下(優選存在下)，將普伐他汀或其藥學上可接受的鹽在pH2-5的條件(優選pH3-4)下進行。
可用于雜質的無機酸分解的“無機酸”只要是可在通常的反應中用作無機酸的物質即可，對其沒有特別限定，可以是例如氫溴酸、鹽酸、硫酸、高氯酸、磷酸、硝酸等無機酸，優選磷酸或硫酸，最優選磷酸。
雜質的無機酸分解中的反應溫度和反應時間雖然取決于pH值，但基本上是如果反應溫度低則需要延長反應時間，如果反應溫度高則需要縮短反應時間，例如反應溫度為20℃至80℃(優選40℃至60℃)，反應時間為1分鐘至6小時(優選5分鐘至20分鐘)。
可用于雜質的無機酸分解中的“惰性溶劑”只要是通常可用作溶劑的物質即可，對其沒有特別限定，可以是例如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、異戊醇、二甘醇、甘油、辛醇、環己醇、甲氧基乙醇等醇類；水；或者水與上述醇類的混合溶劑。優選水或者水與上述醇類的混合溶劑。最優選水或者水與乙醇的混合溶劑。
反應結束后，可通過常規方法從反應溶液中收集目標化合物普伐他汀。例如，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機溶劑，分離含有目標化合物的有機層，用水等洗滌，餾去溶劑后得到所需物質。進一步如果需要，還可以加入活性炭脫色，過濾除去活性炭，然后加入氫氧化鈉、甲醇鈉、乙醇鈉等形成鹽的試劑，用旋轉蒸發器等減壓濃縮，可得到普伐他汀的鹽。
通過無機堿分解普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的雜質的步驟可在惰性溶劑的存在或不存在下(優選存在下)，將普伐他汀或其藥學上可接受的鹽在pH10-14的條件下進行。
可用于雜質的無機堿分解的“無機堿”只要是可在通常的反應中用作無機堿的物質即可，對其沒有特別限定，可以是例如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等堿金屬碳酸鹽類；碳酸氫鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等堿金屬碳酸氫鹽類；氫化鋰、氫化鈉、氫化鉀等堿金屬氫化物類；氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀等堿金屬氫氧化物類；或者甲醇鋰、甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鉀等堿金屬醇鹽類。優選堿金屬氫氧化物類。最優選氫氧化鈉。
雜質的無機堿分解中的反應溫度和反應時間雖然取決于pH值，但基本上是如果反應溫度低則需要延長反應時間，如果反應溫度高則需要縮短反應時間，例如反應溫度為-10℃至110℃，反應時間為15分鐘至200小時。
可用于雜質的無機堿分解中的“惰性溶劑”只要是對本反應呈惰性的溶劑即可，對其沒有特別限定，可以是例如與雜質的無機酸分解中使用的惰性溶劑相同的溶劑。
用無機堿分解含有由微生物生成的普伐他汀類的培養濃縮液中所含的雜質時的優選反應條件是pH為11-14(更優選11-12)，反應溫度為40℃-110℃(更優選95℃-105℃)，反應時間為2小時-24小時(更優選2小時-5小時)。
另一方面，當用有機溶劑將含有由微生物生成的普伐他汀類的培養濃縮液在酸性條件(優選pH4-6)下萃取分液后，再用無機堿分解在堿性(優選pH8-9)條件下反萃取的水溶液中所含雜質時的優選反應條件是pH為13-14(更優選13.5-14)，反應溫度為-10℃至50℃(更優選-5℃至5℃)，反應時間為2小時至180小時(更優選20小時至50小時，最優選25小時至35小時)。
反應結束后，可通過常規方法從上述反應溶液中收集目標化合物普伐他汀。例如，加入硫酸水溶液等酸的水溶液，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機溶劑，分離含有目標化合物的有機層，用水等洗滌，餾去溶劑后得到所需物質。進一步如果需要，還可以加入活性炭脫色，過濾除去活性炭，然后加入甲醇鈉、乙醇鈉、氫氧化鈉等形成鹽的試劑，用旋轉蒸發器等減壓濃縮，可得到普伐他汀的鹽。
進而，本發明的分離或純化方法也可以包括將所得普伐他汀鹽結晶化的步驟，結晶化的方法可以根據上述常規方法進行。
發明的效果本發明的分離或純化方法是不使用柱色譜法等煩雜、不便于工業應用的方法而獲得高純度普伐他汀或其藥學上可接受的鹽(優選純度為99.5％或以上)的方法。
通過本發明的分離或純化方法，可以除去上述化合物(I)，使其含量相對于普伐他汀為0.1％重量或以下。
產業上的可利用性當將本發明的普伐他汀或其藥學上可接受的鹽用作藥物時，可以將其本身或者與合適的藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑等混合，制成例如片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑或糖漿劑等進行經口給藥或者制成注射劑或栓劑等進行非經口給藥。
另外，本發明的純化度的分析可用高效液相色譜(HPLC)進行。HPLC的測定條件為A移動相20％乙腈、30％甲醇、50％TEAP緩沖液(0.3％三乙胺-H3PO4(PH3.2))；檢測波長UV238nm；柱Waters公司制造的反相柱Symmetry C183.5μm，φ4.6mm×15cm；流量1ml/分鐘B移動相甲醇∶水∶乙酸(100)∶三乙胺混合液(600∶400∶1∶1)；檢測波長UV 238nm；柱ELMER OPTICS制造的柱ERC-ODS-1262φ6mm×10cm；柱溫30℃；
流量1ml/分鐘，或者C移動相甲醇∶水∶乙酸(100)∶三乙胺混合液(450∶550∶1∶1)；檢測波長UV 238nm；柱BECKMAN公司制造的ULTRASPHERE ODSφ4.6mm×15cm 5μm；柱溫25℃；流量1.3ml/分鐘。
具體實施例方式
下面給出實施例對本發明進行更詳細的說明，但本發明的范圍并不限于這些實施例。
實施例1 用乙酸正丁酯由培養濃縮液萃取(1a)培養液的濃縮用氫氧化鈉將10L完成轉化培養后的普伐他汀培養液調節至pH12后，加熱至50℃攪拌30分鐘。將培養液冷卻至室溫后，加入作為助濾劑的500gCelite 545(商標)(CELITE CORPORATION制造)過濾。向分離后的菌體中加入3L水，再次使其懸浮后過濾。將所得兩份濃縮液合并，得到10L培養濃縮液。
(1b)用乙酸正丁酯萃取用25％硫酸將所得培養濃縮液調節至pH5.7后，加入5L乙酸正丁酯，攪拌，萃取普伐他汀。用75％硫酸將分離后的水層調節至pH5.7，然后加入5L乙酸正丁酯，攪拌萃取。合并所得的兩份乙酸正丁酯層，向其中加入2L飽和食鹽水，攪拌洗滌。分離上層，向得到的8L萃取液中加入1L水，邊攪拌邊加入25％氫氧化鈉將其調節至pH9.5，之后分離水層，得到1L普伐他汀的鈉鹽水溶液。經HPLC(條件A)測定，普伐他汀鈉的純度為90％或以上。由本實施例的結果可知，通過使用乙酸正丁酯，可得到高純度的普伐他汀鈉。
實施例2 用乙酸正丙酯由培養濃縮液萃取用乙酸正丙酯代替乙酸正丁酯，與實施例1一樣進行處理，得到普伐他汀的鈉鹽水溶液。經HPLC(條件A)測定，普伐他汀鈉的純度為85％或以上。由本實施例的結果可知，通過使用乙酸正丙酯，可得到高純度的普伐他汀鈉。
實施例3用磷酸進行雜質的分解向實施例1所得水溶液[經HPLC(條件A)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為9.3％]中加入350ml乙醇，用磷酸將其調節至pH3.0，然后在50℃攪拌10分鐘。經HPLC(條件A)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為0.9％。由本實施例的結果可知，通過使用磷酸，可以顯著除去化合物(I)。
實施例4用硫酸進行雜質的分解用硫酸代替磷酸，與實施例3一樣進行處理。經HPLC(條件A)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為3％。由本實施例的結果可知，通過使用硫酸，可以顯著除去化合物(I)。
實施例5用氫氧化鈉進行的雜質的分解、萃取和結晶化(5a)用氫氧化鈉進行的雜質的分解將500ml普伐他汀的培養濃縮液[經HPLC(條件B)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為12.1％]加熱至100℃，然后以水溶液形式添加2當量的氫氧化鈉(pH11.3)。在100℃攪拌3小時后冷卻，在室溫用20％硫酸水溶液調節至pH8.5，得到氫氧化鈉堿處理液(普伐他汀鈉含量56.6g)。經HPLC(條件B)測定的化合物(I)/普伐他汀鈉為0.41％。由本實施例的結果可知，通過使用氫氧化鈉，可以顯著除去化合物(I)。
(5b)用氫氧化鈉進行雜質分解后的萃取和結晶化用乙酸正丁酯將260g由(5a)所得的氫氧化鈉堿處理液(普伐他汀鈉含量19g)與實施例(1b)一樣進行處理，分離水層，得到普伐他汀的鈉鹽水溶液。
將所得普伐他汀的鈉鹽水溶液減壓濃縮至大約1/2量，然后加入77ml水再次減壓濃縮。用水調整濃縮液的液量，使之達到普伐他汀游離形態(free form)的6倍量，冷卻至0-5℃，滴加20％硫酸水溶液，在pH4.6析出普伐他汀的游離形態結晶，攪拌1晚后過濾。用冷的稀硫酸(pH4)洗滌結晶，得到普伐他汀的游離形態濕結晶。
向普伐他汀的游離形態濕產物中加入63ml乙酸乙酯，在室溫下溶解后，在室溫下邊攪拌邊用20％硫酸水溶液將其調節至pH4.5，攪拌萃取分液后，向乙酸乙酯層中加入21ml水，萃取洗滌后分液。向萃取洗滌后的乙酸乙酯層中加入25ml乙醇，然后在室溫下邊攪拌邊用6％氫氧化鈉·乙醇溶液將其調節至pH8.7，得到鈉鹽溶液。之后，通過常規方法結晶，得到8.95g普伐他汀鈉鹽的結晶。經HPLC(條件C)測定由該方法制得的普伐他汀鈉鹽的純度為99.67％，化合物(I)/普伐他汀鈉為0.1％重量。
由本實施例的結果可知，通過由氫氧化鈉進行的雜質的分解步驟和用乙酸正丁酯進行的萃取步驟，可以顯著除去化合物(I)。
實施例6用乙酸正丁酯進行的萃取、用磷酸進行的雜質的分解和結晶化向實施例3所得酸處理液中加入25％氫氧化鈉將其調節至pH12，再在50℃繼續攪拌30分鐘。將溶液在旋轉式蒸發器中減壓濃縮至1L，得到含有普伐他汀鈉鹽的濃縮液。用硫酸將所得濃縮液調節至pH4.0，然后用0.5L乙酸乙酯萃取普伐他汀，用0.2L水洗滌萃取液。向萃取液中加入5g活性炭，放置10分鐘后，用濾紙過濾，將濾液用25％氫氧化鈉調節至pH8.7，之后在旋轉式蒸發器中減壓干燥固化，得到50g普伐他汀鈉鹽。用常規方法進行結晶，得到34g普伐他汀鈉鹽的粗結晶。將粗結晶用相同組成的溶劑重結晶，得到32g普伐他汀鈉鹽的純結晶。
經HPLC(條件A)測定由該方法制得的普伐他汀鈉鹽的純度為99.7％或以上，化合物(I)/普伐他汀鈉為0.1％重量。
由本實施例可知，通過用乙酸正丁酯進行的萃取和用磷酸進行的雜質的分解步驟，可以除去化合物(I)使其含量為0.1％重量或以下，得到高純度的普伐他汀鈉。
而且可知，通過在用乙酸正丁酯進行的萃取步驟和用磷酸進行的雜質的分解步驟的基礎上增加用氫氧化鈉進行的雜質的分解步驟，可以進一步除去化合物(I)，得到高純度普伐他汀鈉。
實施例7用氫氧化鈉進行的雜質的分解、用硫酸進行的分解和結晶化用乙酸乙酯與實施例(5b)一樣萃取實施例(5a)所得用氫氧化鈉處理的堿處理液，得到普伐他汀的鈉鹽水溶液。向所得水溶液中加入350ml乙醇，用硫酸將其調節至pH1.5，然后在20℃攪拌1小時。通過常規方法結晶，得到普伐他汀鈉鹽的純結晶。經HPLC(條件C)測定化合物(I)/普伐他汀鈉為0.1％重量或以下。
由本實施例可知，通過用硫酸進行的雜質的分解步驟和用氫氧化鈉進行的雜質的分解步驟，可以除去化合物(I)使其含量達到0.1％重量或以下，得到高純度的普伐他汀鈉。
比較例1用乙酸乙酯進行的普伐他汀的萃取用乙酸乙酯代替乙酸正丁酯，與實施例(1a)一樣進行處理，得到普伐他汀的鈉鹽水溶液。經HPLC(條件A)測定，普伐他汀鈉的純度約為70％。
當從培養濃縮液萃取普伐他汀類的有機溶劑為乙酸乙酯、乙酸正丙酯和乙酸正丁酯時，普伐他汀鈉的純度(％)如下所示。由下述結果可知，用乙酸正丙酯或乙酸正丁酯進行萃取比用乙酸乙酯進行萃取更能得到高純度的普伐他汀。
權利要求
1.普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法，其包括用無機堿分解雜質的步驟。
2.權利要求1的方法，其中所述無機堿選自堿金屬碳酸鹽、堿金屬碳酸氫鹽、堿金屬氫化物、堿金屬氫氧化物和堿金屬醇鹽。
3.權利要求1的方法，其中所述無機堿是堿金屬氫氧化物。
4.權利要求1的方法，其中所述無機堿是氫氧化鈉。
5.權利要求1的方法，其中用無機堿進行分解的步驟中pH為10-14。
全文摘要
普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的分離或純化方法以及含有由該方法所制得的普伐他汀鈉的組合物，所述分離或純化方法的特征在于在分離或純化普伐他汀或其藥學上可接受的鹽的工藝中，進行用具有式CH
文檔編號C07C67/60GK1868996SQ20051007006
公開日2006年11月29日 申請日期2001年10月15日 優先權日2000年10月16日
發明者杉尾伸弼, 高松安行, 小島俊氏, 鈴木睦夫, 萩澤稔, 浜野潔 申請人:三共株式會社