專利名稱：從白術揮發油中分離有效成分白術內酯Ⅲ的方法
技術領域：
本發明屬于中藥藥物領域，尤其涉及一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法。
背景技術：
白術是一種傳統的中藥材，為菊科植物白術(Atractylodes macrocephalaKoidz.)的干燥根莖。白術，別名于術、冬術、浙術等，為多年生草本植物。其性溫，味甘、苦。有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎的功能。主要用于脾虛食少、消化不良、腹脹泄瀉、倦怠無力、痰飲眩悸、水腫、自汗、胎動不安，為中藥補脾要藥。現代藥理研究表明，白術有保肝、利膽、利尿、抑菌、抗炎、抗腫瘤、增強免疫力、降壓、降血糖、抗凝血、強壯、鎮靜等作用。
白術的化學成分主要為白術揮發油，油顯黃色，粘稠有香氣。白術中主要有效成分為蒼術酮，白術內酯類和白術多糖。白術內酯I、II、III為抗炎有效成分(Endo，K.，Toguchi，T.，Toguchi，F.，Hikino，H.，Yamahara，J.and Fujimura，H.，1979Antiinflammatory and autoxidation ofatractylone.Chem.Pharm.Bull.，12755-760)，白術揮發油和白術內酯III有抗癌作用(湯德芳，郝玉珩，劉佐雅，苗樹林，衛華，昊健，平江白術根莖揮發油成分及其抑瘤作用研究，藥學通報，1984，19(9)43-46)。
白術內酯III(atractylenoide III)屬倍半萜內酯類化學物，分子式為C15H20O3，分子結構式為 白術內酯III為無色針晶，溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等，不溶于石油醚、正己烷等低極性溶劑。
白術內酯III在白術中含量很低，約占0.01-0.05％(白術)，由于揮發油中蒼術酮不穩定，極易氧化生成白術內酯類物質。因此，炒白術中白術內酯III的含量明顯高于生白術。白術內酯III的含量低，使其分離困難。文獻中常用的分離白術內酯III的方法是柱色譜分離，這種分離方法費時費力，而且工業化困難。
發明內容
本發明目的是提供一種簡單、成本低、操作簡單，較適合工業生產的從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法。
一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法的步驟如下1)將粉碎的白術粉末用中等極性的溶劑浸取，回收溶劑得黃褐色揮發油；2)用低碳鏈醇溶解揮發油并置于-4℃～0℃，除去不溶物，濾液經濃縮得到精制的揮發油；3)揮發油用中等極性溶劑溶解，然后逐步加入低極性溶劑，直到低極性溶劑濃度達到體積百分比80～90％，除去沉淀物；4)將濾液濃縮并用低極性溶劑脫脂后進行重結晶，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III。
另一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法的步驟如下1)將粉碎的白術粉末用低極性溶劑脫脂；2)脫脂后的白術用中等極性溶劑浸取，回收溶劑得黃褐色揮發油；3)揮發油用中等極性溶劑溶解，然后逐步加入低極性溶劑，直到低極性溶劑濃度達到體積百分比80～90％，除去沉淀物；4)將濾液濃縮并用低極性溶劑脫脂后進行重結晶，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III。
所述的低極性溶劑為石油醚、正己烷、環己烷、正庚烷或它們的混合物；中等極性溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯或它們的混合物；低碳鏈醇為甲醇、乙醇、丙醇或它們的混合物。溶劑浸取或溶劑脫脂是采用冷浸、熱提、索氏提取、滲漉或超聲輔助提取方法，所述的溶劑回收和濾液濃縮采用常壓蒸餾或減壓蒸餾。重結晶溶劑是以低級性溶劑和中等極性溶劑的混合物，混合的體積比為8∶1～10∶1。
本發明的優點是白術是一種常用的中草藥，其有效成分的分離文獻中多采用柱色譜方法，柱色譜方法實驗室中可行，但對于大量的制備卻不易實現。本發明操作簡單，方便。
附圖是從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的流程圖。
具體實施例方式
實施例1將白術(浙江新昌)自然晾干，粉碎，取白術粉，用6倍體積的乙酸乙酯浸取3次(每次1h，70℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)，回收溶劑得黃褐色揮發油。用甲醇溶解揮發油并置于0℃24小時，除去不溶物，濾液減壓蒸餾得到精制的揮發油。揮發油用2倍體積的乙酸乙酯溶解，然后逐步加入石油醚(60～90℃)，直到最終體積濃度達到80％，除去沉淀。將濾液減壓蒸餾濃縮并用8倍體積的石油醚(60～90℃)脫脂4次(每次1h，60℃恒溫水浴，攪拌轉速300r/min)，進行重結晶(石油醚-乙酸乙酯體積比10∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約2.0％(以揮發油計)。
實施例2將白術(浙江新昌)在烘箱內60℃下干燥，粉碎，取白術粉，用8倍體積的二氯甲烷室溫浸取3次(每次1h，攪拌轉速400r/min)，回收溶劑得黃褐色揮發油。用無水乙醇溶解揮發油并置于-4℃24小時，除去不溶物，濾液常壓蒸餾得到精制的揮發油。揮發油用2倍體積的二氯甲烷溶解，然后逐步加入正己烷，直到最終體積濃度達到90％，除去沉淀。將濾液減壓蒸餾濃縮并用4倍體積的正己烷室溫浸取脫脂3次(每次1h，500r/min)，進行重結晶(正己烷-二氯甲烷體積比9∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約2.6％(以揮發油計)。
實施例3將白術(浙江新昌)自然晾干，粉碎，取白術粉，用8倍體積的三氯甲烷在索氏提取裝置中提取2次(每次3h)，回收溶劑得黃褐色揮發油。用丙醇溶解揮發油并置于-2℃24小時，除去不溶物，濾液經減壓蒸餾濃縮得到精制的揮發油。揮發油用2倍體積的三氯甲烷溶解，然后逐步加入環己烷，直到最終體積濃度達到85％，除去沉淀。將濾液常壓蒸餾濃縮并用6倍體積的環己烷脫脂3次(每次1h，60℃恒溫水浴，攪拌轉速300r/min)，進行重結晶(環己烷-三氯甲烷體積比10∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約2.2％(以揮發油計)。
實施例4將白術(浙江新昌)自然晾干，粉碎，取白術粉，用四氯化碳在滲漉裝置中提取2次，回收溶劑得黃褐色揮發油。用無水乙醇溶解揮發油并置于-3℃24小時，除去不溶物，濾液經減壓蒸餾濃縮得到精制的揮發油。揮發油用2倍體積的四氯化碳溶解，然后逐步加入環庚烷，直到最終體積濃度達到90％，除去沉淀。將濾液減壓濃縮并用6倍體積的環庚烷脫脂3次(每次1h，50℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)，進行重結晶(環庚烷—四氯化碳體積比9∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約2.4％(以揮發油計)。
實施例5將白術(浙江新昌)自然晾干，粉碎，取白術粉，用8倍體積的四氯化碳和三氯甲烷(體積比1∶1)，超聲輔助提取裝置中提取3次(每次1h，室溫，攪拌轉速300r/min)，回收溶劑得黃褐色揮發油。用無水甲醇和無水乙醇(體積比1∶1)溶解揮發油并置于-4℃24小時，除去不溶物，濾液經減壓蒸餾濃縮得到精制的揮發油。揮發油用2倍體積的乙酸乙酯溶解，然后逐步加入正己烷，直到最終體積濃度達到80％，除去沉淀。將濾液減壓蒸餾濃縮并用6倍量正己烷和石油醚(60-90℃)(體積比1∶1)脫脂3次(每次1h，50℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)，進行重結晶(正己烷-乙酸乙酯體積比8∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約2.5％(以揮發油計)。
實施例6將白術(浙江新昌)自然晾干，粉碎，取白術粉，用石油醚(60～90℃)在滲漉裝置中提取2次，脫去脂溶性成分。脫脂后的白術用8倍體積的乙酸乙酯浸取3次(每次1h，70℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)。減壓蒸餾濃縮回收乙酸乙酯得黃褐色揮發油。揮發油用2倍體積的乙酸乙酯溶解，然后逐步加入石油醚(60～90℃)，直到最終體積濃度達到90％，除去沉淀。將濾液減壓濃縮并用6倍量石油醚(60～90℃)脫脂3次(每次1h，50℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)，進行重結晶(石油醚—乙酸乙酯體積比8∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約2.7％(以揮發油計)。
實施例7將白術(浙江新昌)在烘箱內60℃下干燥，粉碎，取白術粉，用6倍體積的正己烷在索氏提取裝置中脫脂2次(每次3h)。脫脂后的白術用6倍體積的二氯甲烷在索氏提取裝置中提取2次(每次3h)。減壓蒸餾濃縮回收二氯甲烷得黃褐色揮發油。揮發油用2倍體積的二氯甲烷溶解，然后逐步加入正己烷，直到最終體積濃度達到90％，除去沉淀。將濾液減壓蒸餾濃縮并用6倍體積的正己烷脫脂3次(每次1h，50℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)，進行重結晶(正己烷—二氯甲烷體積比10∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約3.2％(以揮發油計)。
實施例8將白術(浙江新昌)自然晾干，粉碎，取白術粉，用6倍體積的環己烷在超聲輔助提取裝置中脫脂3次(每次1h，室溫，攪拌轉速300r/min)。脫脂后的白術用6倍體積的三氯甲烷室溫浸取3次(每次1h，，攪拌轉速500r/min)。減壓蒸餾濃縮回收三氯甲烷得黃褐色揮發油。揮發油用2倍體積的三氯甲烷溶解，然后逐步加入環己烷，直到最終體積濃度達到80％，除去沉淀。將濾液濃縮并用6倍體積的環己烷脫脂3次(每次1h，50℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)，進行重結晶(環己烷—三氯甲烷體積比9∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約2.3％(以揮發油計)。
實施例9將白術(浙江新昌)自然晾干，粉碎，取白術粉，用6倍體積的環庚烷脫脂3次(每次1h，70℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)。脫脂后的白術用6倍體積的四氯化碳室溫浸取3次(每次1h，攪拌轉速500r/min)。減壓蒸餾濃縮回收四氯化碳得黃褐色揮發油。揮發油用2倍體積的四氯化碳溶解，然后逐步加入環庚烷，直到最終體積濃度達到90％，除去沉淀。將濾液濃縮并用6倍體積的環庚烷脫脂3次(每次1h，50℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)，進行重結晶(環庚烷—四氯化碳體積比10∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約2.9％(以揮發油計)。
實施例10將白術(浙江新昌)自然晾干，粉碎，取白術粉，用6倍體積的正己烷和環己烷(體積比1∶1)的混合物脫脂3次(每次1h，50℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)。脫脂后的白術用6倍體積的乙酸乙酯浸取3次(每次1h，60℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)。減壓蒸餾濃縮回收乙酸乙酯得黃褐色揮發油。揮發油用2倍體積的四氯化碳溶解，然后逐步加入正己烷，直到最終體積濃度達到80％，除去沉淀。將濾液減壓濃縮并用6倍體積的正己烷和石油醚(60～90℃)(體積比1∶1)脫脂3次(每次1h，50℃恒溫水浴，攪拌轉速500r/min)，進行重結晶(正己烷—乙酸乙酯體積比8∶1)，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III，純度＞95％，得率約3.1％(以揮發油計)。
鑒別氣相色譜—質譜聯用方法(GC-MS)取少量白術內酯III晶體進行GC-MS分析，儀器TRACEGC 2000/TRACE MS(ThermoQuest熱電儀器公司).GC條件色譜柱HP-5 30m×0.25mm×0.25μm，柱溫50℃(2min)-15℃/min-240℃(10min)，進樣溫度260℃，分流比10∶1，進樣量1μl。載氣He，流速1ml/min，EIMS條件電子能量70Ev，質量范圍35～500，離子源溫度200℃，界面溫度250℃。白術內酯III的保留時間為14.00min。
紅外光譜將白術內酯III晶體用溴化鉀壓片法在紅外光譜儀上(Impact-410，美國Nicolet公司)測定。
核磁共振譜將白術內酯III晶體作氫(1H)核磁共振分析。儀器Advance DMX500瑞士Bruker公司，工作頻率1H-NMR 500MHz，溶劑氘代氯仿(CDCl3)。
將該化合物的MS，IR，1H-NMR譜與文獻相對照，鑒定為白術內酯III。
綜合以上分析可證實，本發明從白術揮發油中分離得到的無色針狀晶體為白術內酯III。
權利要求
1.一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法，其特征在于，方法的步驟如下1)將粉碎的白術粉末用中等極性的溶劑浸取，回收溶劑得黃褐色揮發油；2)用低碳鏈醇溶解揮發油并置于-4℃～0℃，除去不溶物，濾液經濃縮得到精制的揮發油；3)揮發油用中等極性溶劑溶解，然后逐步加入低極性溶劑，直到低極性溶劑濃度達到體積百分比80～90％，除去沉淀物；4)將濾液濃縮并用低極性溶劑脫脂后進行重結晶，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III。
2.根據權利要求1所述的一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法，其特征在于低極性溶劑為石油醚、正己烷、環己烷、正庚烷或它們的混合物；中等極性溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯或它們的混合物；低碳鏈醇為甲醇、乙醇、丙醇或它們的混合物。
3.根據權利要求1所述的一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法，其特征在于所述的溶劑浸取或溶劑脫脂是采用冷浸、熱提、索氏提取、滲漉或超聲輔助提取方法，所述的溶劑回收和濾液濃縮采用常壓蒸餾或減壓蒸餾。
4.根據權利要求1所述的一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法，其特征在于所述的重結晶溶劑是以低級性溶劑和中等極性溶劑的混合物，混合的體積比為8∶1～10∶1。
5.一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法，其特征在于，方法的步驟如下1)將粉碎的白術粉末用低極性溶劑脫脂；2)脫脂后的白術用中等極性溶劑浸取，回收溶劑得黃褐色揮發油；3)揮發油用中等極性溶劑溶解，然后逐步加入低極性溶劑，直到低極性溶劑濃度達到體積百分比80～90％，除去沉淀物；4)將濾液濃縮并用低極性溶劑脫脂后進行重結晶，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III。
6.根據權利要求5所述的一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法，其特征在于所述的低極性溶劑為石油醚、正己烷、環己烷、正庚烷或它們的混合物；中等極性溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯或它們的混合物；低碳鏈醇為甲醇、乙醇、丙醇或它們的混合物。
7.根據權利要求5所述的一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法，其特征在于所述的溶劑浸取或溶劑脫脂采用冷浸、熱提、索氏提取、滲漉或超聲輔助提取方法，所述的溶劑回收和濾液濃縮采用常壓蒸餾或減壓蒸餾。
8.根據權利要求5所述的一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法，其特征在于所述的重結晶是以低極性溶劑和中等極性溶劑的混合物，混合的體積比為8∶1～10∶1。
全文摘要
本發明公開了一種從白術揮發油中分離有效成分白術內酯III的方法。該方法是將粉碎的白術粉末用中等極性的溶劑浸取，回收溶劑得黃褐色揮發油。用低碳鏈醇溶解揮發油并置于－4℃～0℃，除去不溶物，濾液經濃縮得到精制的揮發油。揮發油用中等極性溶劑溶解，然后逐步加入低極性溶劑，直到低極性溶劑濃度達到80～90％，除去沉淀。將濾液濃縮并用低極性溶劑脫脂后進行重結晶，即可得到無色針狀結晶的白術內酯III。本發明工藝簡單易行，所得白術內酯III成本較低、純度高。
文檔編號C07D307/00GK1733750SQ20051006064
公開日2006年2月15日 申請日期2005年9月6日 優先權日2005年9月6日
發明者何潮洪, 趙春霞 申請人:浙江大學