專利名稱：一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法
技術領域：
本發明涉及磷脂類，尤其涉及一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法。
背景技術：
磷脂普遍存在于動植物細胞的原生質和生物膜中，對生物膜的生理活性和機體的正常代謝有重要的調節功能，同時它具有良好的乳化性和抗氧化性，因而被廣泛應用于食品、醫藥、化妝品等行業。卵磷脂和腦磷脂是其中兩種重要的磷脂，化學名稱分別為磷脂酰膽堿(phosphotidylcholine，簡稱PC)和磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl Ethanolamine，簡稱PE)。
卵磷脂是構成人體細胞膜的主要成份，是保持細胞正常形態和功能的生命基礎物質之一，對人體的正常代謝有重要的調節作用。它對心、腦血管的作用是保持血管壁的彈性和滲透性，軟化血管，增加高密度脂蛋白的含量，減少或清除血管內壁沉積物，防止血液凝聚；對神經系統的作用是使神經反應敏銳，提高記憶力，預防健忘癥和老年癡呆癥；可有效地防治肝功能疾病和緩解糖尿病；可促進損傷細胞的更新，提高人體免疫力。70年代以來，世界上就把卵磷脂用于保健食品，總銷售量僅次于復合維生素C和維生素E，名列第三位。卵磷脂的缺乏是造成心腦血管疾病等現代文明病的主要原因之一。卵磷脂分子結構中同時具有親水基和疏水基，這種雙極性質使卵磷脂表現出優良的表面活性，屬于應用較廣的磷酸型兩性表面活性劑，具有乳化、增稠、穩定、分散、增溶、濕潤、潤滑等功能，可廣泛應用于食品、飼料、醫藥、化妝品、涂料、油墨、紡織、皮革、石油制品及植物保護等工農業生產。
腦磷脂是良好的天然表面活性劑，具有獨特的生物活性和生理功能，無毒、無污染、無刺激，易生物降解而受到國內外科技界和工業界的高度重視。
高純度卵磷脂和腦磷脂是指含量大于95％的卵磷脂和腦磷脂產品。由于高純度卵磷脂產品純度高，無異味、乳化性強，不僅在食品工業中可較大量地添加使用，還可做成保健品、醫藥品等。特別是在醫藥上，卵磷脂在水中可自動形成顆粒狀的脂質體，因此高純度卵磷脂可用作靜脈注射用水包油型乳液的乳化劑；由卵磷脂形成的脂質體用作活性組分的載體，可降低藥物毒性，增加藥效。同樣，高純度腦磷脂在醫藥、保健品、化妝品行業也具有廣泛的應用前景。目前純度大于95％的磷脂產品我國尚依賴進口，因此，開發出適合我國國情的、低成本、高純度卵磷脂和腦磷脂的制備方法，具有重要的經濟和社會價值。
磷脂的精制方法主要有萃取法、柱層析法、沉淀法、膜分離法等。柱層析法由于具有操作簡便、分離效果好、不需昂貴設備、處理量大等優點，因而倍受關注。在柱層析法研究中，目前主要集中在價廉的氧化鋁和硅膠。對于氧化鋁通常是PC先出峰，而對于硅膠通常是PE先出峰。為了同時得到高純度的PC和PE，本專利提出了一條將氧化鋁和硅膠柱層析有機結合的新工藝路線，以實現高純度PE和PE的同時、低成本制備，并選用除PC和PE外其它磷脂較少的蛋黃作為原料。
發明內容
本發明的目的是提供一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法。
方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2)經鈍化的氧化鋁用甲醇濕法裝柱，先用甲醇沖洗；3)粗磷脂用甲醇溶解后加入氧化鋁層析柱，并開始收集流出液；4)待腦磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液；5)流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的卵磷脂；餾份2為含腦磷脂的卵磷脂餾份，直接返回至步驟3；餾份3為含卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干；6)經鈍化的硅膠用鹵代烷烴濕法裝柱，先用鹵代烷烴沖洗；7)經濃縮的餾份3用鹵代烷烴溶解后加入硅膠層析柱，并開始收集流出液；8)待卵磷脂開始穿透后用鹵代烷烴-甲醇混合溶劑沖洗，收集流出液；9)流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的腦磷脂；餾份二為含卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后返回至步驟7；餾份三為含腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后返回步驟3；10)氧化鋁柱和硅膠柱用含氨水的甲醇溶液再生，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和鹵代烷烴沖洗后可重新進樣。
本發明的具有以下優點1)工藝簡單，操作方便，較適合于大規模工業化制備；
2)氧化鋁和硅膠可循環使用，成本較低；3)氧化鋁和硅膠柱層析過程可在室溫下進行；4)產品純度高，經本工藝精制后可同時獲得純度大于95％的卵磷脂和腦磷脂產品；5)柱層析過程處理量大、產率高；6)為近年來雞蛋豐產、供過于求、難以存放等問題的解決提供新方法，為雞蛋的深加工開辟一條新路，促進禽蛋行業的發展。
附圖是高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備工藝流程簡圖。
具體實施例方式
溶劑提取法得到的粗磷脂，用甲醇溶解后在室溫下過氧化鋁柱，待PE開始流出后改用純甲醇沖洗，收集流出液，經TLC分析后合并卵磷脂的餾份，再經濃縮、冷凍干燥后可得卵磷脂產品。富含腦磷脂的餾份再過硅膠柱，待PC開始流出后改用鹵代烷烴-甲醇混合溶劑沖洗，收集流出液，經TLC分析后合并腦磷脂的餾份，再經濃縮、冷凍干燥后可得腦磷脂產品。柱子經含氨水的甲醇溶液再生、溶劑沖洗后可循環使用。詳細的工藝流程如附圖所示。
氧化鋁和硅膠鈍化方法氧化鋁和硅膠在120℃下脫水活化12小時，活化好的氧化鋁和硅膠轉移至干燥器中，冷卻后，加入一定量的去離子水。密封存放72小時以上，以備柱層析用。
實施例1新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經HPLC分析，粗磷脂中PC含量為79.6％(wt％)，PE含量為14.8％(wt％)。取含水量為8％的氧化鋁用甲醇濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進110ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.5g，經HPLC分析產品中卵磷脂的含量為96.0％；餾份2為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，作為粗磷脂重新過氧化鋁柱；餾份3為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干作為硅膠柱層析的原料，經HPLC分析，餾份3中PC含量為15.2％(wt％)，PE含量為74.5％(wt％)。取含水量為10％的硅膠用二氯甲烷濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含二氯甲烷沖洗50ml。進60ml濃度為100mg/ml的餾份3溶液(溶劑為二氯甲烷)，接著用250ml二氯甲烷-甲醇混合溶劑(甲醇含量為10％)沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得腦磷脂3.8g，經HPLC分析產品中腦磷脂的含量為95.5％；餾份二為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后作為硅膠柱層析的原料；餾份三為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后作為粗磷脂重新過氧化鋁柱。最后，氧化鋁柱和硅膠柱用用含氨2％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗250ml，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和二氯甲烷沖洗后100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例2新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經HPLC分析，粗磷脂中PC含量為79.6％(wt％)，PE含量為14.8％(wt％)。取含水量為10％的氧化鋁用甲醇濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進110ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.6ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.7g，經HPLC分析產品中卵磷脂的含量為95.2％。；餾份2為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，作為粗磷脂重新過氧化鋁柱；餾份3為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干作為硅膠柱層析的原料，經HPLC分析，餾份3中PC含量為16.2％(wt％)，PE含量為73.8％(wt％)。取含水量為12％的硅膠用氯仿濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用氯仿沖洗50ml。進55ml濃度為100mg/ml的餾份3溶液(溶劑為氯仿)，接著用200ml氯仿-甲醇混合溶劑(甲醇含量為20％)沖洗，流速控制在0.6ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得腦磷脂3.6g，經HPLC分析產品中腦磷脂的含量為96％；餾份二為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后作為硅膠柱層析的原料；餾份三為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后作為粗磷脂重新過氧化鋁柱。最后，氧化鋁柱和硅膠柱用用含氨1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗300ml，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和氯仿沖洗后100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例3新鮮蛋黃先用丙酮脫脂二次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經HPLC分析，粗磷脂中含PC76.0％(wt％)、PE15.0％(wt％)。取含水量為12％的氧化鋁用甲醇濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進200ml濃度為50mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.8ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.0g，經HPLC分析產品中卵磷脂的含量為95.0％；餾份2為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，作為粗磷脂重新過氧化鋁柱；餾份3為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干作為硅膠柱層析的原料，經HPLC分析，餾份3中PC含量為15.8％(wt％)，PE含量為75.4％(wt％)。取含水量為14％的硅膠用二氯甲烷濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含二氯甲烷沖洗50ml。進50ml濃度為100mg/ml的餾份3溶液(溶劑為二氯甲烷)，接著用300ml二氯甲烷-甲醇混合溶劑(甲醇含量為5％)沖洗，流速控制在0.8ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得腦磷脂4.0g，經HPLC分析產品中腦磷脂的含量為95.1％；餾份二為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后作為硅膠柱層析的原料；餾份三為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后作為粗磷脂重新過氧化鋁柱。最后，氧化鋁柱和硅膠柱用用含氨0.5％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗400ml，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和二氯甲烷沖洗后100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例4新鮮蛋黃先用丙酮脫脂二次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經HPLC分析，粗磷脂中含PC76.0％(wt％)、PE15.0％(wt％)。取含水量為6％的氧化鋁用甲醇濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進70ml濃度為150mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.6ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.4g，經HPLC分析產品中卵磷脂的含量為94.8％；餾份2為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，作為粗磷脂重新過氧化鋁柱；餾份3為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干作為硅膠柱層析的原料，經HPLC分析，餾份3中PC含量為16.8％(wt％)，PE含量為72.4％(wt％)。取含水量為8％的硅膠用氯仿濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用氯仿沖洗50ml。進50ml濃度為100mg/ml的餾份3溶液(溶劑為氯仿)，接著用250ml氯仿-甲醇混合溶劑(甲醇含量為10％)沖洗，流速控制在0.6ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得腦磷脂3.9g，經HPLC分析產品中腦磷脂的含量為96.6％；餾份二為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后作為硅膠柱層析的原料；餾份三為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后作為粗磷脂重新過氧化鋁柱。最后，氧化鋁柱和硅膠柱用用含氨5％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗150ml，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和氯仿沖洗后100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例5新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取三次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經HPLC分析，粗磷脂中含PC77.5％(wt％)、PE15.2％(wt％)。取含水量為8％的氧化鋁用甲醇濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進200ml濃度為50mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在1.0ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.3g，經HPLC分析產品中卵磷脂的含量為95.1％；餾份2為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，作為粗磷脂重新過氧化鋁柱；餾份3為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干作為硅膠柱層析的原料，經HPLC分析，餾份3中PC含量為16.0％(wt％)，PE含量為72.1％(wt％)。取含水量為10％的硅膠用二氯甲烷濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含二氯甲烷沖洗50ml。進50ml濃度為100mg/ml的餾份3溶液(溶劑為二氯甲烷)，接著用150ml二氯甲烷-甲醇混合溶劑(甲醇含量為40％)沖洗，流速控制在1.0ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得腦磷脂3.6g，經HPLC分析產品中腦磷脂的含量為94.8％；餾份二為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后作為硅膠柱層析的原料；餾份三為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后作為粗磷脂重新過氧化鋁柱。最后，氧化鋁柱和硅膠柱用用含氨0.2％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗500ml，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和二氯甲烷沖洗后500ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例6新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取三次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經HPLC分析，粗磷脂中含PC77.5％(wt％)、PE15.2％(wt％)。取含水量為10％的氧化鋁用甲醇濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進110ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.6ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.8g，經HPLC分析產品中卵磷脂的含量為95.9％。；餾份2為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，作為粗磷脂重新過氧化鋁柱；餾份3為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干作為硅膠柱層析的原料，經HPLC分析，餾份3中PC含量為18.3％(wt％)，PE含量為71.2％(wt％)。取含水量為12％的硅膠用氯仿濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用氯仿沖洗50ml。進55ml濃度為100mg/ml的餾份3溶液(溶劑為氯仿)，接著用200ml氯仿-甲醇混合溶劑(甲醇含量為20％)沖洗，流速控制在0.6ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得腦磷脂3.5g，經HPLC分析產品中腦磷脂的含量為96.1％；餾份二為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后作為硅膠柱層析的原料；餾份三為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后作為粗磷脂重新過氧化鋁柱。最后，氧化鋁柱和硅膠柱用用含氨1.0％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗300ml，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和氯仿沖洗后100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例7新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用無水酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經HPLC分析，粗磷脂中含PC77.0％(wt％)、PE15.5％(wt％)。取含水量為10％的氧化鋁用甲醇濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進110ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.8ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.5g，經HPLC分析產品中卵磷脂的含量為95.7％；餾份2為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，作為粗磷脂重新過氧化鋁柱；餾份3為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干作為硅膠柱層析的原料，經HPLC分析，餾份3中PC含量為14.1％(wt％)，PE含量為75.6％(wt％)。取含水量為12％的硅膠用二氯甲烷濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含二氯甲烷沖洗50ml。進65ml濃度為100mg/ml的餾份3溶液(溶劑為二氯甲烷)，接著用200ml二氯甲烷-甲醇混合溶劑(甲醇含量為15％)沖洗，流速控制在0.8ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得腦磷脂3.9g，經HPLC分析產品中腦磷脂的含量為96.2％；餾份二為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后作為硅膠柱層析的原料；餾份三為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后作為粗磷脂重新過氧化鋁柱。最后，氧化鋁柱和硅膠柱用用含氨4％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗150ml，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和二氯甲烷沖洗后100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例8新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用無水酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經HPLC分析，粗磷脂中含PC77.0％(wt％)、PE15.5％(wt％)。取含水量為8％的氧化鋁用甲醇濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進70ml濃度為150mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.3g，經HPLC分析產品中卵磷脂的含量為95.0％。；餾份2為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，作為粗磷脂重新過氧化鋁柱；餾份3為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干作為硅膠柱層析的原料，經HPLC分析，餾份3中PC含量為13.8％(wt％)，PE含量為76.0％(wt％)。取含水量為10％的硅膠用氯仿濕法裝Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用氯仿沖洗50ml。進50ml濃度為100mg/ml的餾份3溶液(溶劑為氯仿)，接著用200ml氯仿-甲醇混合溶劑(甲醇含量為30％)沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后得腦磷脂3.8g，經HPLC分析產品中腦磷脂的含量為95.7％；餾份二為含少量卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后作為硅膠柱層析的原料；餾份三為含少量腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后作為粗磷脂重新過氧化鋁柱。最后，氧化鋁柱和硅膠柱用用含氨3％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗200ml，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和氯仿沖洗后100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
權利要求
1.一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法，其特征在于，方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2)經鈍化的氧化鋁用甲醇濕法裝柱，先用甲醇沖洗；3)粗磷脂用甲醇溶解后加入氧化鋁層析柱，并開始收集流出液；4)待腦磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液；5)流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份1為卵磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的卵磷脂；餾份2為含腦磷脂的卵磷脂餾份，直接返回至步驟3；餾份3為含卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮至干；6)經鈍化的硅膠用鹵代烷烴濕法裝柱，先用鹵代烷烴沖洗；7)經濃縮的餾份3用鹵代烷烴溶解后加入硅膠層析柱，并開始收集流出液；8)待卵磷脂開始穿透后用鹵代烷烴—甲醇混合溶劑沖洗，收集流出液；9)流出液經薄層色譜TLC分析后合并成三個餾份餾份一為腦磷脂餾份，經真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的腦磷脂；餾份二為含卵磷脂的腦磷脂餾份，經真空濃縮后返回至步驟7；餾份三為含腦磷脂的卵磷脂餾份，經真空濃縮后返回步驟3；10)氧化鋁柱和硅膠柱用含氨水的甲醇溶液再生，接著氧化鋁柱和硅膠柱分別用甲醇和鹵代烷烴沖洗后可重新進樣。
2.根據權利要求1所述的一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法，其特征在于所說的經鈍化的氧化鋁是指通過加入去離子水以減少氧化鋁的活性，經鈍化后的氧化鋁含水量為重量百分比6％～12％。
3.根據權利要求1所述的一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法，其特征在于所說的經鈍化的硅膠是指通過加入去離子水以減少硅膠的活性，經鈍化后的硅膠含水量為重量百分比8％～14％。
4.根據權利要求1所述的一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法，其特征在于所說的鹵代烷烴指二氯甲烷和氯仿。
5.根據權利要求1和4所述的一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法，其特征在于所說的鹵代烷烴—甲醇混合溶劑中甲醇的含量為體積百分比5％～40％。
6.根據權利要求1所述的一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法，其特征在于所說的含氨水的甲醇溶液中氨的含量為重量百分比0.2～5％。
全文摘要
本發明公開了一種高純度蛋黃卵磷脂和腦磷脂的同時制備方法。方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用溶劑提取制備粗磷脂；2)以甲醇為流動相，粗磷脂先過經鈍化的氧化鋁柱；3)流出液經TLC分析后合并成三個餾份，餾份1經真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的卵磷脂；餾份2返回氧化鋁柱；餾份3為含卵磷脂的腦磷脂餾份；4)以鹵代烷烴－甲醇混合溶劑為流動相，餾份3過經鈍化硅膠柱；5)流出液經TLC分析后合并成三個餾份，餾份一經真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的腦磷脂，其余餾份返回；6)氧化鋁柱和硅膠柱用含氨水的甲醇溶液再生后可重新進樣。本發明具有工藝簡單、處理量大、產品純度高、較適合于大規模工業化制備等優點。
文檔編號C07F9/00GK1740180SQ20051006050
公開日2006年3月1日 申請日期2005年8月26日 優先權日2005年8月26日
發明者呂秀陽 申請人:浙江大學