專利名稱：一種黃芪甲苷純品的制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種以中藥黃芪為原料大量制備黃芪甲苷純品的方法。
背景技術：
中國藥典收載的黃芪為豆科植物膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.及蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。黃芪具有補氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌等功效。
黃芪的主要化學成分有三萜皂苷、黃酮和多糖類。三萜類主要有黃芪皂苷I～VIII(astragaloside I～VIII)及大豆皂苷I。其中黃芪皂苷IV(即黃芪甲苷)是黃芪中的主要活性成分之一，是目前評價黃芪質量及黃芪制劑質量的重要指標性成分。黃芪甲苷具有穩定紅細胞膜、增加蛋白質合成、促進肝細胞再生及增加血漿內cAMP、抗血小板聚集、降壓等作用，是抗病毒性心肌炎、保護腦組織的活性成分。
黃芪甲苷(Astragaloside IV)的化學結構式如下
據文獻報道，黃芪甲苷在黃芪藥材中的含量極低，約為0.04％，提取分離十分困難(張宇，呂哲，李鑫昶等，黃芪總皂甙水解為黃芪甲苷的工藝研究)，這是黃芪甲苷未能研制出單體制劑應用于臨床的主要原因之一；有關黃芪甲苷制備方法的文獻報道較少，僅有一篇用RP-HPLC制備黃芪甲苷的報道(張鑒，張振海，余增亮.RP-HPLC制備色譜法分離黃芪甲苷)，用RP-HPLC只能小量制備，生產成本很高，不適合工業化生產。
發明內容
綜上所述，黃芪甲苷具有明確的生理活性，但在植物中的含量很低(約0.04％)，分離純化相當困難，制約了黃芪甲苷的深度開發。本發明的目的是公開一種黃芪甲苷純品的制備方法。
本發明方法可通過以下方式得以實施以中藥黃芪為原料，包括提取、富集、除去雜質、水解轉化、溶劑萃取和純化精制等步驟。
本發明具體過程如下將黃芪根粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加70～95％乙醇加熱回流提取2～5次，每次60～120分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上大孔吸附樹脂柱，所用的吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，如D101，HPD100，D140，樹脂用量為藥材量的0.5～5倍，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用3～10倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以3～10倍量樹脂床體積的70～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(每100kg藥材得浸膏約10～15kg)，加堿液進行堿水解，水解所用的堿性水溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀等強堿的水溶液，堿用量為藥材量的0.1~1.0％，水解溫度10～100℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取2～6次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品，該粗品經重結晶純化即得黃芪甲苷純品，產品純度大于99％。
大孔吸附樹脂是20世紀60年代發展起來的一類新型吸附劑，它是一類不含交換基團且具有大孔網狀結構的高分子材料。其理化性質穩定，不溶于酸、堿及常用有機溶劑，對有機物的吸附選擇性好，不受無機鹽類、強離子及低分子化合物存在的影響。它的吸附作用是通過表面吸附、表面電性或形成氫鍵而達到。自問世以來，大孔吸附樹脂已廣泛應用于環保、化工、食品和醫藥等領域。在醫藥領域中大孔樹脂常用于富集、分離和純化樣品。
非極性大孔吸附樹脂對黃芪皂苷有很好的吸附選擇性，通過大孔吸附樹脂可以富集黃芪皂苷，去除部分色素及糖類等雜質。
黃芪甲苷在黃芪中的含量極低，一般為0.04％左右，但黃芪中的黃芪甲苷類似物見下圖，通過堿水解可以轉化為黃芪甲苷。本發明的原理之一即是基于此，通過該方法可以大大提高黃芪甲苷的收率。
本方法具有以下優點1、黃芪皂苷用乙醇或甲醇作溶劑比用水作溶劑提取更完全，收率比水提取的高很多，因此本發明選用有機溶劑作提取溶劑能更完全有效的提取出黃芪皂苷。
2、用大孔吸附樹脂富集皂苷，可以除去大部分雜質，洗脫濃縮后樣品量大幅度減少，因此，水解時堿的用量大大降低，減少了環境污染。有報道在樹脂上用堿液進行脫色，堿的用量很大，勢必會對環境造成較嚴重的污染。
3、本方法進行堿水解時可在常溫下進行。
4、本方法的分離純化不用上柱層析分離，即可使產品純度達99％以上，大大降低了生產成本，且生產方法簡便，產品質量穩定，適合工業化大規模生產，這是本方法的最大優點。
5、本方法操作簡便、產品收率高。
四
下面接合附圖詳細說明本發明方法將黃芪根粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加70～95％乙醇加熱回流提取2～5次，每次60～120分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上大孔吸附樹脂柱，所用的吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，如D101，HPD100，D140，樹脂用量為藥材量的0.5～5倍，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用3～10倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以3～10倍量樹脂床體積的70～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(每100kg藥材得浸膏約10～15kg)，加堿液進行堿水解，水解所用的堿性水溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀等強堿的水溶液，堿用量為藥材量的0.1～1.0％，水解溫度10～100℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取2～6次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品，該粗品經重結晶純化即得黃芪甲苷純品，產品純度大于99％。
五具體實施例方式
實施例1取黃芪藥材10kg，粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加70％乙醇加熱回流提取3次，第一次120分鐘，第二、三次各90分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上D101大孔吸附樹脂柱(10kg)，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用3倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以3倍量樹脂床體積的70％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(浸膏約1.5kg)，加10g NaOH溶液進行堿水解，水解溫度30℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取3次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品9g，該粗品經重結晶純化即得黃芪甲苷純品8.4g，收率0.084％，產品中黃芪甲苷含量99.5％。
實施例2取黃芪藥材20kg，粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加80％乙醇加熱回流提取3次，每次各90分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上HPD100大孔吸附樹脂柱(20kg)，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用4倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以4倍量樹脂床體積的80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(浸膏約3.0kg)，加20g KOH溶液進行堿水解，水解溫度50℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取4次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品18.2g，該粗品經重結晶純化即得黃芪甲苷純品16.4g，收率0.091％，產品中黃芪甲苷含量99.7％。
實施例3取黃芪藥材100kg，粉碎成粗粉，在回流提取罐中，加70％乙醇加熱回流提取3次，第一次120分鐘，第二、三次各90分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上D101大孔吸附樹脂柱(100kg)，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用4倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以5倍量樹脂床體積的80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至適量(浸膏約13kg)，加150g KOH溶液進行堿水解，水解溫度20℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取3次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品88g，該粗品經重結晶純化即得黃芪甲苷純品85g，收率0.085％，產品中黃芪甲苷含量99.6％。
權利要求
1.一種黃芪甲苷純品的制備方法，其特征是以中藥黃芪為原料，包括提取、富集、除去雜質、水解轉化、溶劑萃取和純化精制步驟。
2.權利要求1所述的黃芪甲苷純品的制備方法，其特征是將黃芪根粉碎成粗粉，在回流提取罐中加70～95％乙醇加熱回流提取2～5次，每次60～120分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇后，加水稀釋，水液上藥材量0.5～5倍非極性大孔吸附樹脂，上樣流速為2～5BV/h，藥液上完后，用3～10倍量樹脂床體積的去離子水洗滌，再以3～10倍量樹脂床體積的70～95％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收，加堿液進行堿水解，水解溫度10～100℃，水解完全后，用稀酸中和至中性，繼用乙酸乙酯萃取2～6次，水相減壓濃縮至適量體積，放置結晶，過濾，用少量甲醇洗滌晶體，即得黃芪甲苷粗品，該粗品經重結晶純化即得黃芪甲苷純品。
3.權利要求1或2所述的黃芪甲苷純品的制備方法，其特征是減壓濃縮至每100kg藥材得浸膏約10～15kg，水解所用的堿性水溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀等強堿的水溶液，堿用量為藥材量的0.1～1.0％，水解溫度10～100℃。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，針對目前黃芪甲苷制備量小，生產成本高等問題，公開了一種黃芪甲苷純品的制備方法，本方法以中藥黃芪為原料，包括提取、富集、除去雜質、水解轉化、溶劑萃取和純化精制等步驟，能較大量地制備高純度的黃芪甲苷。本發明方法具有操作簡便、提取率高和污染小等優點。
文檔編號C07J71/00GK1869060SQ20051002097
公開日2006年11月29日 申請日期2005年5月26日 優先權日2005年5月26日
發明者彭樹林, 李銳, 丁立生, 廖循, 梁健, 白冰如 申請人:中國科學院成都生物研究所