用神經肽ff受體2激動劑治療神經痛的制作方法

專利名稱：用神經肽ff受體2激動劑治療神經痛的制作方法
技術領域：
以下描述的本發明各方面涉及使用調節神經肽FF受體亞型的活性的化合物治療急性疼痛和慢性神經痛的方法，所述神經肽FF受體亞型介導急性傷害感受和慢性神經痛。本發明的各方面還涉及選擇性地與這種受體亞型互作的化合物以及鑒定所述化合物的方法。
背景技術：
疼痛是常見的人類體驗。其形式從急性到慢性；其強度從輕微到中等再到嚴重。在任意給定時間都有6500萬美國人遭受疼痛的折磨。每年直接和間接的疼痛開銷超過1200億美元。可采用鴉片、抗炎癥制劑和其他鎮痛藥治療急性疼痛；通常根據其嚴重程度選擇治療形式。這種疼痛治療形式的目的在于阻斷攜帶疼痛信號的感覺信號的傳導，并且控制對傷害性疼痛刺激的情感反應。
有效治療炎癥疼痛和急性疼痛的藥物通常對治療更為慢性的形式的疼痛效果不明顯。一種形式的慢性疼痛是在對感覺神經造成損傷之后產生的。這種體驗可從對觸摸或溫度的敏感性的輕度上升直到劇痛。這種類型的疼痛由于被認為涉及到神經系統功能的改變或神經系統結構的改造，所以被定義為神經性疼痛。
神經性疼痛非常普遍，并且在臨床上極難處理。大約有1.5％的美國人都遭受著這類或那類的神經痛，如果將來源于神經的各種形式的背痛也包括在內的話，這一人群的數量還將擴大。所以，神經痛可以與由創傷、疾病和化學傷害引起的神經損傷相關。可緩解神經痛的化合物可能并不能有效治療急性疼痛(例如，加巴噴丁(gapapentin)，三環抗抑郁藥)。然而現有的對神經痛的治療并不是針對這些類型的疼痛設計的，因此這些藥物的效率低下和不能對所有患者起效也是意料之中的。所以，亟需更有效的和耐受性更好的治療神經痛的方法。
發明概述本發明公開了鑒定有效治療疼痛的化合物的方法，包括將所述化合物與NPFF2受體接觸，并測定所述化合物是否與所述NPFF2受體結合。
本發明還公開了篩選能夠影響NPFF2受體的一種或多種活性的化合物的方法，包括如下步驟a)將重組細胞與測試化合物接觸，其中所述重組細胞包含表達所述NPFF2受體的重組核酸，假定所述細胞沒有來自內源核酸的功能性NPFF2受體表達；及b)測定所述測試化合物對所述NPFF2受體的一種或多種活性的影響能力，并將所述能力與所述測試化合物對不含所述重組核酸的細胞中的NPFF2受體的一種或多種活性的影響能力進行比較；其中，所述重組核酸包括NPFF2受體核酸，所述NPFF2受體核酸選自a)SEQ ID No1的核酸，b)編碼氨基酸SEQ ID No2的核酸，c)編碼所述NPFF2受體的上述核酸的衍生物，其中所述衍生物編碼具有一種或多種所述NPFF2受體活性的受體，并且含有能在嚴格的雜交條件下與SEQ ID No1的至少20個連續核苷酸的互補體雜交的至少20個連續核苷酸。
本發明還公開了治療任何類型的急性和慢性疼痛的方法，包括將有機體與有效量的至少一種化合物接觸，其中所述化合物激活NPFF2受體亞型。
本發明還公開了鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括將所述NPFF2受體與至少一種測試化合物接觸；并測定所述NPFF2受體活性水平的任何升高，從而鑒定檢測化合物是所述NPFF2受體激動劑。
此外，本發明還公開了鑒定化合物是NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括培養表達所述NPFF2受體的細胞；將所述細胞或提取自所述細胞的成分與至少一種測試化合物孵育；以及測定所述NPFF2受體活性的任何升高，從而鑒定檢測化合物是所述NPFF2受體激動劑。
本發明還公開了治療疼痛的方法，包括將遭受疼痛的個體與有效量的本文所述的至少一種通式I，通式II或通式III化合物接觸，從而減輕所述疼痛的一種或多種癥狀。
本發明還公開了鑒定緩解個體的痛覺過敏或異常性疼痛的化合物的方法，包括向遭受痛覺過敏或異常性疼痛的個體提供本文所述的至少一種通式I，通式II或通式III化合物；并且測定所述至少一種化合物是否減輕所述個體的痛覺過敏或異常性疼痛。
本發明還公開了鑒定通式I，通式II或通式III化合物是所述NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括將NPFF2受體與本文所述的至少一種通式I，通式II或通式III化合物接觸；及測定所述NPFF2受體活性水平的任何升高，從而鑒定通式I，通式II或通式III化合物是所述NPFF2受體激動劑。
本發明公開了鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括培養表達所述NPFF2受體的細胞；將所述細胞與本文所述的至少一種通式I，通式II或通式III化合物孵育；及測定所述NPFF2受體活性的任何升高，從而鑒定通式I，通式II或通式III化合物是所述NPFF2受體激動劑。
本發明還公開了鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括將所述NPFF2受體與本文所述的至少一種通式I，通式II或通式III化合物接觸；及測定所述通式I，通式II或通式III化合物是否與所述NPFF2受體結合；還公開了本文所述的通式I或通式II化合物，或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥。
還公開了本文所述的通式III化合物，或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥。
附圖的簡要說明

圖1所示為比較爪收縮(paw withdrawal)潛伏期的柱狀圖。
圖2所示為比較觸覺閾值水平的柱狀圖。
圖3所示為比較尾收縮(tail withdrawal)潛伏期的柱狀圖(以秒表示)。
圖4所示為比較選擇性FF2受體激動劑對福爾馬林誘導的退縮(flinching)效果的柱狀圖。*表示與每個階段的福爾馬林注射的載體處理的對照組相比較，p≤0.05。
圖5所示為比較角叉藻聚糖誘導的熱痛覺過敏的劑量依賴性逆轉(reversal)的柱狀圖。
圖6所示為說明L5/L6SNL誘導的觸覺異常性疼痛的劑量依賴性逆轉的柱狀圖。*表示與所述載體處理的對照相比較，p≤0.05。
圖7所示為使用化合物3099進行L5/L6SNL誘導的觸覺異常性疼痛的劑量依賴性逆轉的柱狀圖。*表示與所述載體處理的對照相比較，p≤0.05。
圖8所示為使用dPQR酰胺進行L5/L6SNL誘導的觸覺異常性疼痛的劑量依賴性逆轉的柱狀圖。*表示與所述載體處理的對照相比較，p≤0.05。
發明的詳細說明神經肽FF(NPFF)是一族內源表達的多肽的代表，其C末端具有RF-酰胺，并作為神經遞質。NPFF存在于中樞神經系統中，尤其是脊索、下丘腦、丘腦和腦干。這類多肽的功能之一就是調節疼痛。體內研究說明NPFF可在疼痛的動物模型中發揮原鴉片(pro-opioid)和抗鴉片(anti-opioid)的效果。
NPFF這些似乎相反的作用能夠通過多種受體的作用進行介導。事實上，公知地存在兩種被NPFF激活的G-蛋白偶合的受體。這些被定義為NPFF1和NPFF2的受體在整個機體和不同有機體中具有不同的表達。目前并不清楚這兩種受體中的哪一種介導了NPFF對多種疼痛類型的作用。解剖學研究顯示的在包括脊索、背根神經節、脊柱三叉神經核和丘腦的多個腦區域中的NPFF2結合位點說明，該受體可以介導兩種疼痛形式中的NPFF傷害性疼痛活性。然而，在沒有對NPFF受體中的一種而不是另一種具有選擇性的化合物的條件下，不可能證實這一論斷。
因此，與所述NPFF2受體結合的化合物可作為抗傷害性疼痛化合物深入研究的首選。本領域內對這些化合物的鑒定非常關注。
已發現了這樣的化合物，相對神經肽FF1(NPFF1)和相關受體，其可選擇性地激活神經肽FF2(NPFF2)受體。與所述NPFF2受體亞型互作的化合物具有此前未發現的止痛活性，并且可以有效治療急性和慢性疼痛。這些發現具有實際的應用，即支持NPFF2受體激動劑用于治療急性疼痛和慢性疼痛，所述疼痛是由創傷，由諸如糖尿病、帶狀皰疹(帶狀皰疹)、腸應激綜合征或晚期癌癥的疾病或由化學傷害引起的，如包括抗病毒藥物的藥物治療的無意識后果。
因此，本發明公開的化合物和方法涉及急性和慢性疼痛的治療。還公開了對所述NPFF2受體具有選擇性的化合物。本發明還公開了治療疼痛的方法，包括將個體與藥理學活性劑量的化合物接觸，所述化合物可與所述NPFF2受體亞型互作，從而達到控制疼痛的目的，而不引起不希望的副作用和劑量限制的副作用。
因此，在第一方面，本發明涉及鑒定有效治療疼痛的化合物的方法，包括將所述化合物與NPFF2受體接觸，并測定所述化合物是否與所述NPFF2受體結合。本發明還涉及NPFF2受體在鑒定與NPFF2受體結合的化合物中的用途。
在另一方面，本發明涉及篩選能夠影響NPFF2受體的一種或多種活性的化合物的方法，包括如下步驟a)將重組細胞與測試化合物接觸，其中所述重組細胞包含表達所述NPFF2受體的重組核酸，假定所述細胞沒有來自內源核酸的功能性NPFF2受體表達；及b)測定所述測試化合物影響所述NPFF2受體的一種或多種活性的能力，并將所述能力與所述測試化合物對不合所述重組核酸的細胞中的所述一種或多種NPFF2受體活性的影響能力進行比較；其中，所述重組核酸包括NPFF2受體核酸，所述NPFF2受體核酸選自a)SEQ ID No1的核酸，b)編碼氨基酸SEQ ID No2的核酸，c)上述核酸的衍生物，其編碼所述NPFF2受體，其中所述衍生物編碼具有所述NPFF2受體的一種或多種活性的受體，并且含有至少20個連續核苷酸，且所述至少20個連續核苷酸能在嚴格的雜交條件下與SEQ ID No1的互補體雜交。
在某些實施方案中，所述NPFF2受體核酸編碼SEQ ID No2衍生物的氨基酸序列，所述NPFF2受體核酸包含能在嚴格的雜交條件下與編碼SEQ ID No2氨基酸序列的至少20個連續核苷酸的互補體雜交的至少20個連續核苷酸。
在一些實施方案中，所述衍生物包含能在嚴格的雜交條件下與編碼SEQ ID No2氨基酸序列的連續核苷酸的互補體雜交的至少50、至少100、至少150、至少200、至少250、至少300、至少350、至少400、至少450、至少500、至少600、至少700、至少800、至少900、至少1000、至少1100、至少1200、至少1300、至少1400或至少1500個連續核苷酸。
在另一方面，本發明涉及治療任何類型急性和慢性疼痛的方法，該方法包括將有機體與有效量的至少一種化合物接觸，其中所述化合物激活NPFF2受體亞型。
在某些實施方案中，所述疼痛與糖尿病，病毒感染，腸應激綜合征，截肢，癌癥或化學傷害有關。
在其他方面，本發明涉及鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括將所述NPFF2受體與至少一種測試化合物接觸；并且測定所述NPFF2受體活性水平的任何提升，從而鑒定檢測化合物是所述NPFF2受體激動劑。
在某些實施方案中，所鑒定的激動劑激活所述NPFF2受體而不是NPFF1受體。在其他實施方案中，所鑒定的激動劑對所述NPFF2受體具有選擇性。
在另一方面，本發明涉及鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括培養表達所述NPFF2受體的細胞；將所述細胞或從所述細胞提取的成分與至少一種測試化合物孵育；以及測定所述NPFF2受體活性的任何提升，從而鑒定檢測化合物是所述NPFF2受體激動劑。
在某些實施方案中，上述培養步驟中的細胞過量表達所述NPFF2受體。
在另一方面，本發明涉及通式I或通式II化合物，或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥， 其中
R1選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一個都獨立地選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，取代或未取代的芳基或雜芳基，羥基，鹵代醚，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每個R7獨立地選自氫，任意被芳基或雜芳基取代的C1-C10直鏈或支鏈烷基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈烯基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，C5-C10環烯基，芳基和雜芳基；或R2和R3及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R3和R4及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R4和R5及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R5和R6及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；且Q選自芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環。
在又一方面，本發明涉及通式III化合物，或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥，
其中Cy1選自芳基，稠和芳基，雜芳基，稠和雜芳基，碳環，環烷基，稠和雜環和雜環；Cy2選自芳基，稠和芳基，雜芳基，稠和雜芳基，碳環，環烷基，稠和雜環和雜環；R8和R9分別出現0至6次，并獨立地選自氫，任意取代的C1-C8直鏈或支鏈烷基，任意取代的C2-C8直鏈或支鏈烯基，任意取代的C2-C8直鏈或支鏈炔基，任意取代的C3-C8環烷基，任意取代的碳環，任意取代的芳基，任意取代的稠和芳基，任意取代的雜芳基，任意取代的稠和雜芳基，任意取代的雜環基，任意取代的稠合雜環基，鹵代烷基，鹵素，-CN，-NO2，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-S(＝O)R7，-N(R7)-S(＝O)2R7，-OR7，-OC(＝Z)R7，-SO3H，-S(＝O)2N(R7)2，-S(＝O)N(R7)2，-S(＝O)2R7，-S(＝O)R7和-SR7，其中Z是氧或硫；且其中每個R7的定義如上所述；R10選自氫，任意取代的C1-C8直鏈或支鏈烷基，任意取代的C2-C8直鏈或支鏈烯基，任意取代的C2-C8直鏈或支鏈炔基，C3-C8環烷基，任意取代的芳基，任意取代的稠和芳基，任意取代的雜芳基，任意取代的稠和雜芳基，任意取代的雜環基，任意取代的稠合雜環基，X或者不存在，或者選自氧，硫，NR7，任意取代的亞乙基，雙亞乙基，其中R7的定義如上所述。
某些上述取代基含有不止一個“R”基團，但所述“R”基團被標為相同的數字，例如，N(R7)2基團有兩個R7基團。應該理解兩個具有相同標號的“R”基團可以相同或不同。因此，例如，甲胺、二甲胺和甲基丙基胺都可用“N(R7)2”來描述。
術語“藥物可接受的鹽”是指對給藥后的有機體不會引起明顯刺激，并且不會消除所述化合物的生物學活性和性質的化合物制劑。可可通過將本發明的化合物與諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、鹽酸、硝酸、磷酸的無機酸，甲磺酸，乙磺酸，對甲苯磺酸，水楊酸等等反應得到藥物可接受的鹽。還可以通過將本發明的化合物與堿反應形成鹽，例如銨鹽，堿金屬鹽如鈉鹽或鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣鹽或鎂鹽，諸如二環己胺，N-甲基-D-葡糖胺，三(羥甲基)甲胺的有機堿的鹽，以及與諸如精氨酸，賴氨酸的氨基酸的鹽，來獲得藥物可接受的鹽。
術語“酯”是指具有通式-(R)n-COOR’的化學部分，其中R和R’獨立地選自烷基、環烷基、芳基、雜芳基(通過環碳成鍵)和雜脂環(通過環碳成鍵)，其中n為0或1。
“酰胺”是具有通式-(R)n-C(O)NHR’或-(R)n-NHC(O)R’的化學部分，其中R和R’獨立地選自烷基、環烷基、芳基、雜芳基(通過環碳成鍵)和雜脂環(通過環碳成鍵)，其中n為0或1。酰胺可以是連接到本發明分子上的氨基酸或肽分子，從而形成原藥。
本發明化合物上的任何氨基、羥基或羧基側鏈都可以酯化或酰胺化。用于獲得該末端的方法和特異性基團是本領域所述技術人員公知的，并可輕而易舉地從諸如Greene和Wuts，《有機合成中的保護基團》(Protective Groups in Organic Synthesis)，第三版，John Wiley&Sons，New York，NY，1999年的參考資源中找到，在此將其全部引用。
“原藥”是指可在體內轉化成母體藥物的制劑。原藥通常是有用的，因為在某些情況下，它比母體藥物更容易給藥。例如，原藥通過口服給藥時是可以生物利用的，而母體藥物則不行。與母體藥物相比，原藥還可以增加在藥物組合物中的溶解度。原藥的一個非限定性的例子可以是本發明的化合物，其以酯(“原藥”)形式給藥從而促進跨細胞膜的傳輸，在那里水溶性對遷移具有副作用，但一旦進入到水溶性有益的細胞內部，所述原藥便被代謝水解成羧酸，即所述活性部分。另一個原藥的例子可以是結合于酸基團上的短肽(聚氨基酸)，其中所述肽被代謝釋放出所述活性部分。
術語“芳基”是指具有至少一個具有共軛π電子體系的環的芳基，并且包括碳環芳基(如苯基)和雜環芳基(如吡啶)。該術語包括單環或稠環(即共用相鄰碳原子對的環)基團。術語“碳環”是指含有一個或多個共價閉合環結構的化合物，并且形成所述環骨架的原子都是碳原子。該術語由此將碳環和環骨架中含有至少一個非碳原子的雜環區別開來。術語“雜芳香族基”或“雜芳基”指含有至少一個雜環的芳基。
芳環的例子包括但不限于苯和取代的苯，例如甲苯、苯胺、二甲苯等等。
稠芳環的例子包括但不限于萘，取代的萘，蒽和甘菊環(azulene)。
雜環的例子包括但不限于呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、噻唑、咪唑、吡唑、異噁唑、異噻唑、噁二唑、三唑、噻二唑、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪， 和 其中R如本文所述。
稠和雜芳環的例子包括但不限于吲嗪、吲哚、異吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、嘌呤、喹啉、異喹啉、噌啉、酞嗪、喹噁啉、喹噁啉、萘啶、蝶啶、吖啶氮蒽、吩嗪。
術語“雜環”是指具有3-15個單位的飽和或部分不飽和的環，其中至少一個原子不是碳原子。該術語包括單環或稠環多環(即共用相鄰碳原子對的環)基團。
雜環的例子包括但不限于吡咯啉，吡咯烷，二氧戊環，咪唑啉，咪唑烯，吡唑啉，吡唑烷，吡喃，哌啶，二噁烷，嗎啉，二噻烷，硫代嗎啉，哌嗪。
稠和雜環的例子包括但不限于二氫吲哚，二氫苯并呋喃，二氫苯并噻吩，咔唑，吩噻嗪，吩噁嗪，二氫吲哚類，二氫苯并咪唑。
碳環的例子包括茚，芴，金剛烷，降莰烷。
本文所用的術語“烴基”是指脂肪族烴基。所述烴基部分可以是“飽和烷基”，這是指其不含有任何的烯基部分或炔基部分。所述烴基部分還可以是“不飽和烴基”部分，指其含有至少一個烯基或炔基部分。“烯基”部分是指含有至少兩個碳原子和至少一個碳碳雙鍵的基團，“炔基”部分是指含有至少兩個碳原子和至少一個碳碳三鍵的基團。所述烴基部分，無論是飽和的或不飽和的，都可以是支鏈的，直鏈的或環狀的。
所述烴基可以含有1到20個碳原子(無論在本文中何時出現，諸如“1到20”的數值范圍是指所給定范圍的每一個整數；例如，“1到20個碳原子”是指所述烴基含有1個碳原子，2個碳原子，3個碳原子等等直到并且包括20個碳原子，然而本定義還覆蓋了出現未指定數值范圍的術語“烴基”的情況)。所述烴基也可以是具有1到10個碳原子的中等大小的烴基。所述烴基還可以是具有1到5個碳原子的較小的烴基。本發明所述化合物的烴基可被指定為“C1-C4烴基”或類似指定。示例性地，“C1-C4烴基”是指所述烴鏈中有1至4個碳原子，即所述烴鏈選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。
所述烴基可以是取代或未取代的。當被取代時，所述取代基可以是一或多個單獨和獨立選自環烴基、芳基、雜芳基、雜脂環基、羥基、烷氧基、芳氧基、巰基、烴硫基，芳硫基，氰基，鹵素，羰基，硫代羰基，O-氨甲酰基，N-氨甲酰基，O-硫代氨甲酰基，N-硫代氨甲酰基，C-酰氨基，N-酰氨基，S-磺酰氨基，N-磺酰氨基，C-羧基，O-羧基，異氰基，硫代氰基，異硫氰基，硝基，甲硅烷基，三鹵代甲烷磺酰基和氨基包括單取代和二取代氨基基團，及其被保護的衍生物的基團。常見的烴基基團包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基等等。當取代基被描述為“任意取代”時，該取代基可以被上述取代基中的任意一種所取代。
單獨出現且沒有數字標示的取代基“R”是指選自烴基，環烴基，芳基，雜芳基(通過環碳成鍵)和雜脂環(通過環碳成鍵)基。
“O-羰基”是指RC(＝O)O-基團，其中R如本文所定義。
“C-羰基”是指-C(＝O)OR基團，其中R如本文所定義。
“乙酰基”是指-C(＝O)CH3基團。
“三鹵代甲烷磺酰基”是指X3CS(＝O)2-基團，其中X是鹵素。
“氰基”是指-CN基團。
“異氰基”是指-NCO基團。
“硫代氰基”是指-CNS基團。
“異硫氰基”是指-NCS基團。
“亞磺酰基”是指-S(＝O)-R基團，R如本文所定義。
“S-磺酰氨基”是指-S(＝O)2NR基團，R如本文所定義。
“N-磺酰氨基”是指RS(＝O)2NH-基團，R如本文所定義。
“三鹵代甲烷磺酰氨基”是指X3CS(＝O)2NR-基團，R如本文所定義。
“O-氨甲酰基”是指-OC(＝O)-NR基團，R如本文所定義。
“N-氨甲酰基”是指ROC(＝O)NH-基團，R如本文所定義。
“O-硫代氨甲酰基”是指-OC(＝S)-NR基團，R如本文所定義。
“N-硫代氨甲酰基”是指ROC(＝S)NH-基團，R如本文所定義。
“C-酰氨基”是指-C(＝O)-NR2基團，R如本文所定義。
“N-酰氨基”是指RC(＝O)NH-基團，R如本文所定義。
術語“全鹵代烴基”是指一或多個氫原子獨立地被鹵素原子取代的烴基基團。
當兩個取代基和與它們相連的碳形成環時，是指以下結構 是下列結構的代表
在上述例子中，R1和R2以及與它們相連的碳形成了六元芳環。
除非特別指明，當取代基被認為是“任意取代的”，是指所述取代基是可以被一個或多個單獨和獨立選自環烴基，芳基，雜芳基，雜環基，羥基，烷氧基，芳氧基，巰基，烴基巰基，芳基巰基，氰基，鹵素，羰基，硫代羰基，O-氨甲酰基，N-氨甲酰基，O-硫代氨甲酰基，N-硫代氨甲酰基，C-酰氨基，N-酰氨基，S-磺酰氨基，N-磺酰氨基，C-羧基，O-羧基，異氰基，硫代氰基，異硫氰基，硝基，甲硅烷基，三鹵代甲烷磺酰基和氨基包括單取代和二取代的氨基基團，及其被保護的衍生物的基團。可以形成上述取代基的保護衍生物的保護基團是本領域所屬技術人員公知地，并且可以在諸如上述Greene和Wuts的參考文獻中找到。
在某些實施方案中，通式I或通式II化合物中的R1是氫或C1-C10的直鏈烴基。在一些實施方案中，R1是氫或C1-C5的直鏈烴基。在其他實施方案中，R1選自氫，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基和異戊基。
在一些實施方案中，通式I或通式II化合物中的R2選自氫，羥基，硝基，氨基，鹵素，-OR7和-N(R7)2，且其中R7是氫或C1-C10的直鏈烴基。在某些實施方案中，R2選自氫，羥基，硝基，鹵素和-OR7，且其中R7是氫或C1-C3的直鏈烴基。在其他實施方案中，R2選自氫，羥基，硝基，氯，溴，甲氧基和乙氧基。
在某些實施方案中，通式I或通式II化合物中的R3選自氫，羥基，硝基，氨基，鹵素，-OR7和-N(R7)2，且其中R7是氫或C1-C10的直鏈烴基。在一些實施方案中，R3選自氫，羥基，硝基，鹵素和-OR7，且其中R7是氫或C1-C3的直鏈烴基。在其他實施方案中，R3選自氫，硝基，氯和碘。
在本發明的某些實施方案中，通式I或通式II化合物中的R4選自氫，C1-C10的直鏈烴基，羥基，硝基，氨基，鹵素，-OR7和-N(R7)2，且其中每個R7獨立地為任意被芳基或雜芳基取代的C1-C10直鏈或支鏈烴基。在一些實施方案中，R4選自氫，C1-C3直鏈烴基，羥基，硝基，氨基，鹵素，-OR7和-N(R7)2，且其中每個R7獨立地為被芳基任意取代的C1-C3直鏈烴基。在其他實施方案中，R4選自氫，甲基，乙基，羥基，硝基，氨基，氯，氟，甲氧基，乙氧基，甲氨基，二甲氨基，二乙氨基和芐氧基。
在其他實施方案中，通式I或通式II化合物中的R5選自氫，C1-C10直鏈烴基，羥基，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烴基，-OR7和-N(R7)2，且其中每個R7獨立地為被芳基或雜芳基任意取代的C1-C10直鏈或支鏈烴基。在一些實施方案中，R5選自氫，C1-C3直鏈烴基，羥基，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烴基，-OR7和-N(R7)2，且其中每個R7獨立地為C1-C3直鏈烴基。在其他實施方案中，R5選自氫，羥基，氯，溴，三氟甲基和甲氧基。
在某些實施方案中，R6是氫。
如上所述，在一些實施方案中，R2和R3與和它們相連的碳形成了稠和芳基，雜芳基，C5-C10環烴基或雜烴環。在某些實施方案中，所述環可以是稠和芳環，其可以是苯基。
在一些實施方案中，R3和R4及與它們相連的碳形成了稠和芳基，雜芳基，C5-C10環烴基或雜烴環。所述環可以是稠和雜芳環，其可以是吡咯。
在某些實施方案中，R4和R5及與它們相連的碳形成了稠和芳基，雜芳基，C5-C10環烴基或雜烴環。所述環可以是雜烴環，其可以是1，3-二氧戊環。
在某些實施方案中，R5和R6及與它們相連的碳形成了稠和芳基，雜芳基，C5-C10環烴基或雜烴環。所述環可以是稠合芳環，其可以是苯基。
在某些實施方案中，Q選自任意取代的苯，甲苯，苯胺，萘，甘菊環，呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉，吡咯烷，噁唑、噻唑、咪唑、咪唑啉、咪唑烷(imidazolidine)、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、異噁唑、異噻唑、三唑、噻二唑、吡喃、吡啶、哌啶，嗎啉，硫代嗎啉，噠嗪，嘧啶，吡嗪，哌嗪，三嗪。在某些實施方案中，Q是呋喃。
本領域所屬技術人員應意識到Q是雙取代的具有任意取代的苯基和氨基胍基。還應意識到所述兩種取代基可以位于Q的不同位置。因此所述兩種取代基可以是鄰位的、間位的和對位的，即它們可以在Q上相互接近，或具有將與兩個所述取代基結合的兩個環原子隔開的一個或多個環原子。本發明也包括了由此得到的所有各種結構異構體。
在某些實施方案中，通式I化合物選自
或其藥物可接受的鹽或原藥。
在某些實施方案中，通式II化合物是 或其藥物可接受的鹽或原藥。
在某些實施方案中，所述方法也指治療神經痛的方法。特別優選的使用本發明所述方法化合物的實施方案可由化合物1045、3027、3099、1006、1005、3093和2616代表。
本發明的某些化合物可以包括旋光異構體在內的立體異構體形式存在。本發明包括了所有立體異構體和這些立體異構體的消旋混合物，以及可根據本領域所述技術人員公知的方法拆分的單獨的對映異構體。
在另一方面，本發明涉及治療急性和慢性疼痛的方法，包括鑒定需要治療的個體，并將所述個體與有效量的至少一種本文所述的通式I、通式II或通式III化合物接觸，從而減輕所述疼痛的一種或多種癥狀。
本發明的另一方面是發現所公開的NPFF2化合物是所述神經肽FF2受體的特異性激動劑。因此，這些激動劑預期與所述NPFF2受體結合并誘導抗痛覺過敏和抗異常性疼痛反應。本文所述的NPFF2受體激動劑可用于治療神經痛。
因此，在一些實施方案中，所述通式I、通式II或通式III化合物能激活所述NPFF受體。在某些實施方案中，所述化合物可選擇性地激活NPFF2受體亞型而不是NPFF1受體。
在某些實施方案中，由本發明方法治療的疼痛與糖尿病，病毒感染，腸應激綜合征，截肢，癌癥，炎癥或化學傷害有關。在其他實施方案中，所述疼痛是神經痛。
在某些實施方案中，所述個體表現出痛覺過敏。在一些實施方案中，所述痛覺過敏是熱痛覺過敏。在其他實施方案中，所述個體表現出異常性疼痛。在一些這樣的實施方案中，所述異常性疼痛是觸覺異常性疼痛。
另一方面，本發明涉及鑒定緩解個體的痛覺過敏或異常性疼痛的化合物的方法，包括鑒定遭受痛覺過敏或異常性疼痛的個體；為所述個體提供至少一種本文所述的通式I、通式II或通式III化合物；并測定所述至少一種化合物是否減輕了個體的痛覺過敏或異常性疼痛。
又一方面，本發明涉及鑒定通式I、通式II或通式III化合物是所述NPFF2受體的激動劑的方法，該方法包括將NPFF2受體與至少一種本發明所述的通式I、通式II或通式III化合物接觸；并測定所述NPFF2受體活性水平的任何提升，從而鑒定通式I、通式II或通式III化合物是所述NPFF2受體激動劑。
在本說明書中，“激動劑”定義為提高受體基礎活性的化合物(即，由所述受體介導的信號轉導)。“拮抗劑”定義為阻礙激動劑對受體起作用的化合物。“部分激動劑”定義為表現出有限的，或不完全活性的激動劑，以至于其不能在體外激活受體，在體內具有拮抗劑的功能。
術語“個體”是指作為治療，觀察或實驗對象的動物，優選為哺乳動物，最優選為人。
術語“治療有效量”是指能引起所指示的生物學或臨床反應的活性化合物或藥物制劑的量。這樣的反應可由研究人員，獸醫，醫生或其他醫務工作者在組織，系統，動物或人類中觀察到，且包括所治療疾病的癥狀的緩解。
另一方面，本發明涉及鑒定化合物是NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括培養表達所述NPFF2受體的細胞；將所述細胞與至少一種本發明所述的通式I、通式II或通式III化合物孵育；并且測定所述NPFF2受體活性的任何提升，從而鑒定通式I化合物是NPFF受體激動劑。
另一方面，本發明涉及治療個體神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與通式I、通式II或通式III化合物接觸，其中所述化合物作為所述NPFF1受體的拮抗劑或較弱的部分激動劑起作用。
另一方面，本發明涉及治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體和作為NPFF1受體的拮抗劑或部分激動劑的通式I、通式II或通式III化合物與作為NPFF2受體的完全激動劑或部分激動劑的其他通式I、通式II或通式III化合物的組合物接觸。
另一方面，本發明涉及治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與通式I、通式II或通式III化合物接觸，其中所述化合物同時作為NPFF2激動劑和NPFF1拮抗劑起作用。
另一方面，本發明涉及治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與通式I、通式II或通式III化合物接觸，其中所述化合物同時作為NPFF2部分激動劑和NPFF1拮抗劑起作用。
另一方面，本發明涉及治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與通式I、通式II或通式III化合物接觸，其中所述化合物同時作為NPFF2部分激動劑和NPFF1部分激動劑起作用。
另一方面，本發明涉及藥物組合物，所述組合物包含上述的通式I、通式II或通式III化合物，及生理可接受的載體，稀釋劑或賦型劑或其組合。
術語“藥物組合物”指本發明化合物與諸如稀釋劑或載體的其他化學組分的混合物。所述藥物組合物能協助所述化合物對有機體的給藥。本領域中現有的多種將化合物給藥的技術包括口服，注射，氣霧劑，胃腸外的和局部給藥。可通過將化合物與無機或有機酸反應得到藥物組合物，所述無機或有機酸例如鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，甲磺酸，乙磺酸，對甲苯磺酸，水楊酸等等。
術語“載體”定義為協助將化合物引入細胞或組織的化學物質。例如二甲亞砜(DMSO)是常用的載體，因為其可協助許多有機化合物攝取進入有機體的細胞或組織。
術語“稀釋劑”定義為稀釋于水中的可溶解興趣化合物以及穩定所述化合物的生物活性形式的化學物質。溶解于緩沖溶液中的鹽是本領域中常用的稀釋劑。磷酸鹽緩沖液是常用的緩沖溶液，因為其可模擬人類血液的鹽條件。因為緩沖鹽能控制較低濃度時溶液的pH值，所以緩沖的稀釋劑幾乎不會改變化合物的生物學活性。
術語“生理可接受的”是指不會消除所述化合物的生物學活性和性質的載體或稀釋劑。
可將本文所述的藥物組合物單獨，或以與其他活性成分(如在聯合治療中)、或適合的載體或賦型劑混合的藥物組合物形式對個體進行給藥。將本申請所述化合物制劑和給藥的技術可見于《雷明頓制藥科學》″Remington′s Pharmaceutical Sciences″，Mack Publishing Co.，Easton，PA，18版，1990年。
適于給藥的途徑可包括，例如口服給藥，直腸給藥，跨粘膜給藥或腸給藥；腸胃外給藥，包括肌肉注射，皮下注射，靜脈注射，髓內注射以及鞘內注射，直接心室注射，腹膜內注射，鼻內注射或眼內注射。
可選擇地，可以局部而不是系統的方式給藥所述化合物，例如，通常以貯存或持續釋放制劑形式將所述化合物直接注射到疼痛的區域。此外，還可以在靶藥物傳送系統中，例如在包被有組織特異性抗體的脂質體中，給藥所述藥物。所述脂質體可靶向于所述器官并選擇性地被所述器官吸收。
可以公知的方式制備本發明的所述藥物組合物，例如，通過常規的混合，溶解，制粒，制糖衣，研粉，乳化，膠囊，包埋(entrapping)或壓片方法。
可使用包括賦型劑和助劑的一種或多種生理可接受的載體以常規方式制備按照本發明使用的藥物組合物，所述生理可接受載體能夠協助將所述活性化合物加工成用于制藥的制劑。根據所選的給藥途徑來確定適當的制劑。如本領域所理解的，可以適合方式采用任意公知的技術，載體和賦型劑；例如參見上述的《雷明頓制藥科學》。
為了進行注射，可將本發明的所述制劑配制成水溶液，優選為生理相容的緩沖液，比如Hank’s溶液，Ringer’s溶液或生理鹽水緩沖液。為了進行跨粘膜給藥，所述制劑可使用適于待滲透的屏障的滲透劑。這樣的滲透劑是本領域所公知的。
為了進行口服給藥，可很容易地通過將所述活性化合物與本領域公知的藥物可接受載體結合來配制所述化合物。這類載體可以使本發明所述化合物配制成片劑、丸劑、糖衣、膠囊、液體、凝膠、糖漿、膏劑、懸液等等，從而適于擬接受治療個體的口服吸收。可通過將一種或多種固體賦型劑和本發明的藥物組合物混合得到適于口服的藥物制劑，如果需要，在加入適當的助劑之后，任意地磨碎所述混合物并且加工所述顆粒混合物，從而獲得片劑或糖衣核心。適合的賦型劑是，具體有，諸如糖的填充劑，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑，例如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、土豆淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解劑，例如交聯聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或藻酸或諸如藻酸鈉的藻酸鹽。
提供了具有適合包被的糖衣劑核。為了這個目的，可使用濃縮的糖溶液，該溶液可任選地包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯凝膠、聚乙二醇和\或二氧化鈦、紫膠漆溶液和適合的有機溶劑或溶劑混合物。為了識別或標示活性化合物劑量的不同組合，可向片劑或糖衣劑包衣中加入染料或色素。
可以口服的藥物制劑包括由明膠制造的推入-結合膠囊，以及由明膠和諸如甘油或山梨醇的可塑劑制成的軟的、密封的膠囊。所述推入-結合膠囊可在混合物中包含所述活性成分與諸如乳糖的填充劑，如淀粉的粘合劑，和/或諸如滑石或硬脂酸鎂的潤滑劑，以及，可任選地，穩定劑。在軟膠囊中，所述活性化合物可溶解于或混懸于合適的液體中，例如脂肪油、液體石蠟，或液體聚乙二醇。此外，可加入穩定劑。所有用于口服給藥的配方的劑量應適合這樣的給藥。
對于口腔給藥，所述組合物可以常規方式配制成片劑或錠劑形式。
對于吸入給藥，本發明所用的化合物可以方便地通過加壓包裝或噴霧器，使用合適的推進劑以噴霧劑的形式釋放，該推進劑例如是二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適的氣體。在加壓氣霧劑的情況下，所述劑量單位可以由提供的閥門來確定釋放的測定量。可將吸入器或吹入器中使用的膠囊和諸如凝膠的藥筒配制成包含所述化合物和諸如乳糖或淀粉的適合的粉末基質的粉末混合物。
可將所述化合物配制以通過諸如快速滴注或連續滴注的注射形式進行非經胃腸道給藥。用于注射的制劑可以加添加防腐劑的諸如安瓿或多劑量容器的單位劑型存在。所述組合物可采取諸如油或水載體中的懸浮液、溶液或者乳液形式，以及可包含諸如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑的配制劑。
用于非經胃腸道給藥的藥物制劑包括水溶性形式的所述活性化合物的水溶液。另外，可將所述活性化合物的混懸液制備為適當的油狀注射懸液。適當的親脂溶劑或載體包括諸如芝麻油的脂肪油，或諸如油酸乙酯或者甘油三酯的合成脂肪酸酯，或脂質體。水狀注射混懸液可以包含用于增加該混懸液的粘度的物質，例如羧甲級纖維素鈉、山梨醇或者右旋糖苷。任選地，所述混懸液也可包含適當的穩定劑或者可增加化合物溶解性的以制備高濃度溶液的試劑。
可選擇地，在使用前，所述活性成分可以是與諸如無菌無熱原水的合適的載體組成的粉末形式。
也可將所述化合物配制成諸如栓劑或保留灌腸劑的、例如包含諸如可可脂或其它甘油酯的常規栓劑基質的直腸組合物。
除了上述制劑以外，所述化合物還可配制為長效制劑。這樣的長效制劑可以通過植入(例如皮下地或者肌肉地)或肌肉注射給藥。因此，例如，所述化合物可以與適當的聚合物或疏水性物質(例如作為在可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂配制，或作為微溶性衍生物，例如，作為微溶性的鹽配制。
用于本發明的疏水性化合物的藥物載體是一種助溶劑系統，其包含芐醇、非極性表面活性劑、易與水混合的有機聚合物，和水相。所用的常規助溶系統為VPD共溶劑系統，其為3％重量/體積比的芐醇、8％重量/體積比的非離子表面活性劑聚山梨醇酯80TM，以及65％重量/體積比的聚乙二醇300的溶液，其在絕對乙醇中達到容積。自然地，在不破壞其溶解度及毒性特征的前提下，共溶劑系統的比例可以適當變化。此外，所述共溶劑組分的同一性可以變化例如，可以使用其它低毒性的非離子表面活性劑代替聚山梨醇酯80TM；聚乙二醇的比例可以變化；其它生物適合的聚合物可以替代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；并且其它的糖類或者多糖可以替代葡萄糖。
可選擇地，也可使用適于疏水性藥物化合物的其它遞藥系統。脂質體和乳劑是公知的用于疏水性藥物的輸送載體或載體的例子。盡管通常以其較大的毒性作為代價，也可以使用諸如二甲基亞砜的某些有機溶劑。另外，可使用緩釋系統輸送所述化合物，例如包含所述治療劑的固體疏水聚合物的半透性基質。已建立了多種緩釋材料并為本領域所屬技術人員所公知。根據其化學性質，緩釋膠囊可以在幾周到超過100天的時間里釋放所述化合物。根據所述治療劑的化學性質和生物穩定性，可采用其他的蛋白穩定化策略。
用于本發明的藥物組合物的許多化合物可作為具有藥物可配伍的平衡離子的鹽類被提供。藥物可配伍的鹽類可以與許多酸成形，所述酸包括但不局限于鹽酸、硫酸、醋酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸等等。所述鹽類比其相應的游離酸或堿的形式更易溶于水性溶劑或其它質子溶劑中。
適合本發明應用的藥物組合物包括含有有效量的、以完成其預期目的的有效成分的組合物。更特別地，治療有效量是指防止、緩解或改善疾病的癥狀或延長被治療個體的生命力的化合物有效量。對治療有效量的確定是本領域所屬技術人員公知的，尤其是在公開了本發明提供的詳細公開內容的情況下。
本發明藥物組合物的確切劑型、給藥途徑及劑量可由各個醫師根據所述患者的情況來選擇(參見，例如Fingl等人，1975，《治療學的藥理學基礎》(The Pharmacological Basis of Therapeutics)第1章，第1頁)。通常，對患者給藥的所述組合物的劑量范圍可為該患者體重的大約0.5-1000mg/kg，或1-500mg/kg，或該患者體重的50-100mg/kg。所述劑量可以是在一天或數天期間，單次或一系列的兩次或更多次的給藥，這根據所述患者來確定。值得注意的是對于本發明公開內容提及的幾乎所有的特定化合物，已確定了治療至少某些疾病狀態的人類劑量。因此，在大多數情況下，本發明使用那些相同的劑量或者大約為所確定的人類劑量的0.1％-500％，或25％-250％，或50％-100％的劑量。當人類劑量未確定時，在此情況下，對于新發現的藥物組合物，合適的人類劑量可從ED50或ID50值，或源于體外或體內研究的其它適當值中來推斷，正如在動物體內的毒性研究和有效性研究定量的那樣。
雖然可通過在逐個藥物(drug-by-drug)的基礎上確定其確切劑量，但是在大多數情況下，可歸納出關于所述劑量的某些普遍性。對于成年人類患者的每天劑量方案可以是，例如，每個成分0.1mg-500mg的口服劑量，優選為1mg-250mg，例如5-200mg，或者每個成分0.01mg-100mg劑量的靜脈注射、皮下注射或肌內注射，優選為0.1mg-60mg，例如以所述游離堿計算的、以每天1-4次給藥的1-40mg的本發明所述藥物組合物的每個成分或其藥物可接受的鹽。可選擇地，本發明的所述藥物組合物可通過連續的靜脈滴注來給藥，優選地以每天每個成分400mg的劑量給藥。因此，每個成分口服給藥的每天總劑量通常為1-2000mg，且非經胃腸道給藥的每天總劑量通常為0.1-400mg。適當地，可將所述化合物進行連續治療階段的給藥，例如一周或數周、或數月或數年。
可個別地調整劑量和給藥間隔以提供足以維持所述調節作用或最低有效濃度(MEC)的所述活性部分的血漿水平。所述MEC隨每個化合物得不同而變化，但是可從所述體外數據中來估計。達到所述MEC的必要劑量依賴于個體特征和給藥途徑。但是，也可使用HPLC分析或生物分析來確定血漿濃度。
也可應用MEC值確定給藥間隔。組合物應用用藥法來給藥，該用藥法在10-90％，優選為30-90％及更優選為50-90％的所述時間里，將血漿水平維持在MEC以上。
在局部給藥或選擇性吸收的情況下，所述藥物的有效局部濃度可能與血漿濃度無關。
所述組合物的給藥量當然依賴于治療的所述個體、所述個體的體重、所述疾病的嚴重性、給藥方式和開藥方醫生的判斷。
如果需要，所述組合物可能存在于包裝或配料裝置中，所述裝置可包含一個或多個含有所述活性成分的單位劑型。所述包裝例如可包含金屬箔或塑料箔，例如水泡包(blister pack)。所述包裝或配料裝置可帶有給藥說明書。所述包裝或配料裝置也可帶有與所述容器相關的通告，該通告形式上由調整藥物制造、應用或價格的政府機構來規定，該通告反映所述藥物形式已由所述機構許可用于人類或牲畜給藥。這樣的通告，例如，可以是由美國食品與藥品監督管理局許可的用于處方藥的標簽，或者所述許可的產品插入說明。可在恰當的容器內制備和放置包含在可配伍的藥物載體中配制的本發明化合物的組合物，并將其標記為可對指定的疾病狀態進行治療。
本領域所述技術人員應當理解，在不偏離本發明的精神下，可對本發明作出眾多和各異的修改。因此，應當清楚的認識到本發明僅是說明性的，而不應理解為是對本發明范圍的限制。
實驗的具體情況化合物的合成下述方案1是亞氨基胍合成的代表性的合成方案 方案1如方案2所示，可采用其他條件 方案2在某些實施方案中，在形成亞氨基胍基之前，需要初始的烷基化步驟，如方案3所示
方案3一般方法所使用的是96％乙醇和購買的溶劑。1H NMR光譜是在400MHz下，在Varian XL分光計中記錄的。化學位移是以百萬分率(ppm)報告的，并以殘留質子(即CHCl3，CH3OH)占氘化溶劑的量為參考。分裂方式指定為s＝單峰、d＝雙重峰、t＝三重峰、q＝四重峰、br.＝寬峰、m＝多重峰。在用硅膠60F254預涂布的鋁板上完成薄層色譜法(TLC)。在Isco CombiFlashSQ16x上應用以下公開的方法實施閃柱色譜法。應用來自PersonalChemistry的Smith Creator完成微波反應公析性HPLC，乙酸銨緩沖液(ZMD)系統由600E梯度泵、2700樣本管理器、996光電二極管矩陣檢測器和電噴射離子化界面組成的沃特斯(Waters)LC/ZMD儀器。
色譜柱反相色譜柱(XterraMS C185μm，50×4.6mm ID)。
流動相乙腈/10mM乙酸銨水溶液。
程序以10％乙腈開始梯度洗脫17分鐘，經10分鐘后到100％乙腈，持續1分鐘，再經0.5分鐘到10％乙腈，持續5.5分鐘。流速為1mL/分鐘。
分析性HPLC，乙酸銨緩沖液(ZQ)系統由2795分離組件、996光電二極管矩陣檢測器和電噴射離子化界面組成的沃特斯聯合HT/ZQ2000儀器。
色譜柱具有保護柱筒式系統的反相色譜柱(XterraMS C183.5μm，30×4.6mm ID)。
流動相乙腈/10mM乙酸銨水溶液。
程序以10％乙腈開始梯度洗脫11分鐘，經7分鐘到90％乙腈，再經0.5分鐘到10％乙腈，持續3分鐘。流速為1mL/分鐘。
分析性HPLC，碳酸氫銨緩沖液(ZMD)系統由600E梯度泵、2700樣本管理器、996光電二極管矩陣檢測器和電噴射離子化界面組成的沃特斯(Waters)LC/ZMD儀器。
色譜柱反相色譜柱(XterraMS C185μm，50×4.6mm ID)。
流動相乙腈/5mM碳酸氫銨水溶液(調到pH 9.5)。
程序以10％乙腈開始梯度洗脫17分鐘，經10分鐘到100％乙腈，持續1分鐘，再經0.5分鐘到10％乙腈，持續5.5分鐘。流速為1mL/分鐘。
制備性的LC/MS方法系統沃特斯LC/ZMD儀器。具有600E梯度泵、2700樣本管理器、996光電二極管矩陣檢測器和電噴射離子化界面的裝置。
色譜柱反相色譜柱(XterraPrep MS C185μm，19×100mm)。
流動相乙腈/10mM乙酸銨水溶液。
程序以30％乙腈開始梯度洗脫12分鐘，經8.5分鐘到100％乙腈，再經0.5分鐘到30％乙腈，持續0.5分鐘。流速為17mL/分鐘。
制備性的HPLC方法系統沃特斯Prep4000儀器。具有4000 Prep泵、Prep LC控制器、2487二元吸光率檢測器的裝置。
色譜柱半制備柱(PhenomenexLuna C185μm，21.1×250mm)流動相乙腈/25mM乙酸銨水溶液。
程序以10％乙腈開始梯度程序45分鐘，持續5分鐘，再經30分鐘到80％乙腈，持續10分鐘、流速為20mL/分鐘。
CombiFlash方法1(CF1)將所述樣本干燥地裝填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅膠柱及用EtOAc(3分鐘)、含0-20％MeOH的EtOAc(25分鐘)、隨后用含純化20％MeOH的EtOAc(15分鐘)以15mL/分鐘的流速洗脫純化。
CombiFlash方法2(CF2)將所述樣本干燥地裝填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅膠柱及用庚烷(1分鐘)、含0-10％EtOAc的庚烷(30分鐘)、含10-15％EtOAc的庚烷(10分鐘)、隨后用含15％EtOAc的庚烷(5分鐘)以16mL/分鐘的流速洗脫純化。
CombiFlash方法3(CF3)將所述樣本干燥地裝填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅膠柱及用庚烷(3分鐘)、含0-25％EtOAc的庚烷(25分鐘)、隨后用含25％EtOAc的庚烷(8分鐘)以15mL/分鐘的流速洗脫純化。
CombiFlash方法4(CF4)將所述樣本干燥地裝填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅膠柱及用庚烷(3分鐘)、含0-15％EtOAc的庚烷(25分鐘)、隨后用含15％EtOAc的庚烷(10分鐘)以15mL/分鐘的流速洗脫純化。
CombiFlash方法5(CF5)將所述樣本干燥地裝填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅膠柱及用庚烷(3分鐘)、含0-10％EtOAc的庚烷(25分鐘)、隨后用含10％EtOAc的庚烷(8分鐘)以15mL/分鐘的流速洗脫純化。
CombiFlash方法6(CF6)將所述樣本干燥地裝填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用10g硅膠柱及用DCM(15分鐘)、含0-10％MeOH的DCM(40分鐘)、隨后用含10％MeOH的DCM(10分鐘)以15mL/分鐘的流速洗脫純化。
一般操作步驟1(GP1)
在乙醇(3mL)中，將所述醛或酮(5.0mmol)和氨基胍硝酸鹽(5.0mmol，696mg)在120℃(醛)或160℃(酮)下微波加熱10分鐘然后冷卻至室溫。加入甲醇(20mL)，再加入含HCl的二噁烷(4.0M，6.0mL)并將該反應濃縮至干燥。加入甲醇，然后過濾所述混合物。加入Et2O促使所述產物的結晶。過濾該產物并高真空下干燥。
一般操作2(GP2)在EtOH(2mL)中，將所述醛或酮和氨基胍鹽酸鹽(0.95或1.0當量)在70℃下搖動18小時，然后冷卻至室溫。過濾該反應，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗滌所述沉淀物并在高真空下干燥。
一般操作3(GP3)在EtOH(2mL)中，將所述醛或酮和氨基胍鹽酸鹽(0.95或1.0當量)在70℃下搖動18小時，然后冷卻至室溫。加入Et2O(2-20mL)來促使結晶。過濾該反應，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗滌所述沉淀物并在高真空下干燥。
一般操作4(GP4)在EtOH(2mL)中，將所述醛或酮和氨基胍鹽酸鹽(0.95或1.0當量)在70℃下搖動18小時，然后冷卻至室溫。加入Et2O但不發生結晶。加入水(20mL)，并用EtOAc(2×20mL)洗滌水層。將NaOH(2M，5mL)加入到該水層并用EtOAc(2×20mL)提取所述產品。所述有機層經MgSO4干燥、過濾并濃縮。
一般操作5(GP5)將丙酮(1mL)中的3-氯-4-羥基苯醛(1.2mmol，188mg)加入到丙酮(1mL)中的烷基鹵(1.0mmol)、碳酸鉀(粉末，1.2mmol，166mg)中。將所述反應在40℃加熱72h，然后在55℃下加熱24h。將所述反應冷卻并經45μm過濾器過濾，用丙酮洗滌。
一般操作6(GP6)在EtOH(2mL)中，將所述醛或酮和氨基胍鹽酸鹽(0.95或1.0當量)在70℃下搖動18小時，然后冷卻至室溫。加入Et2O(2-20mL)來促使結晶但產生油狀物。但是，加入少量DCM產生了結晶。過濾所述沉淀物，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗滌并在高真空下干燥。
一般操作7(GP7)在EtOH(1mL/mmol)中，將所述醛和氨基胍鹽酸鹽(1當量)在130℃下微波加熱12分鐘，然后冷卻至室溫。過濾該反應，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗滌所述沉淀物并在高真空下干燥。
一般操作8(GP8)在EtOH(1mL/mmol)中，將所述醛和氨基胍鹽酸鹽(1當量)在130℃下微波加熱12分鐘，然后冷卻至室溫。隨后加入Et2O(2-4mL)來促使結晶。過濾該反應，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗滌所述沉淀物并在高真空下干燥。
實施例實施例11-(4-氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2001)根據GP1，應用4-氟苯甲醛(5.0mmol，621mg)產生白色粉末狀的所述標題化合物(2001)(534mg，49％)。1H NMR(CD3OD)δ8.13(s，1H)，7.85(m，2H)，7.17(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝181.1。
實施例21-[(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2002)根據GP1，應用3-(三氟甲基)苯甲醛(5.0mmol，871mg)得到白色粉末狀的所述標題化合物(2002)(643mg，48％)。1H NMR(CD3OD)δ8.22(s，1H)，8.17(m，1H)，8.05(m，1H)，7.74(m，1H)，7.65(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝231.1。
實施例31-[1-(3-溴苯基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(2003)
根據GP1，應用3′-溴苯乙酮(5.0mmol，995mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2003)(977mg，67％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(ap.t，J＝1.7Hz，1H)，7.84(ddd，J＝8.0，1.7，1.0Hz，1H)，7.59(ddd，J＝7.8，2.0，1.0Hz，1H)，7.35(ap.t，J＝8.0Hz，1H)，2.36(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝255.1，257.1。
實施例41-(5-氟-2-硝基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2004)根據GP1，應用5-氟-2-硝基苯甲醛(5.0mmol，846mg)產生淺褐色粉末狀的所述標題化合物(2004)(989mg)。1H NMR(CD3OD)δ8.67(d，J＝1.6Hz，1H)，8.21(dd，J＝9.4，4.9Hz，1H)，8.11(dd，J＝9.4，2.9Hz，1H)，7.41(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝226.1。
實施例51-[(苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-5-基)亞甲基氨基胍鹽酸鹽(2005)根據GP1，應用苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-5-醛(5.0mmol，751mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2005)(737mg，61％)。1H NMR(CD3OD)δ7.99(s，1H)，7.47(d，J＝1.6Hz，1H)，7.15(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，6.87(d，J＝8.0Hz，1H)，6.01(s，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝207.1。
實施例61-[(蒽-9-基)亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2006)根據GP1，應用9-蒽甲醛(5.0mmol，1.03g)得到黃色粉末狀的所述標題化合物(2006)(133mg，9％)。1H NMR(CD3OD)δ9.26(s，1H)，8.65(s，1H)，8.48(m，2H)，8.11(m，2H)，7.61(m，2H)，7.55(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝263.2。
實施例71-(3，5-二甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2007)根據GP3，應用3，5-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，332mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)產生白色粉末狀的所述標題化合物(2007)(516mg，99％)。1H NMR(CD3OD)δ8.03(s，1H)，6.97(d，J＝2.3Hz，2H)，6.57(t，J＝2.3Hz，1H)，3.82(s，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝223.3。
實施例81-(2，4-二氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2008)根據GP2，應用2，4-二氯苯甲醛(2.0mmol，350mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2008)(461mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.52(s，1H)，8.18(d，J＝8.6Hz，1H)，7.55(d，J＝2.0Hz，1H)，7.41(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝231.2。
實施例91-(3-氟-4-甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2009)根據GP2，應用3-氟-4-甲氧基苯甲醛(2.0mmol，308mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2009)(449mg，91％)。1H NMR(CD3OD)δ8.04(d，J＝1.4Hz，1H)，7.71(m，1H)，7.45(m，1H)，7.14(t，J＝8.4Hz，1H)，3.92(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝211.2。
實施例101-(3-溴-4-氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2010)根據GP2，應用3-溴-4-氟苯甲醛(2.0mmol，406mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2010)(445mg，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.20(dd，J＝6.8，2.2Hz，1H)，8.08(s，1H)，7.79(ddd，J＝8.6，4.7，2.2Hz，1H)，7.29(t，J＝8.6Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝259.2，261.2。
實施例111-(3，4，5-三甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2011)根據GP3，應用3，4，5-三甲氧基苯甲醛(2.0mmol，392mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2011)(565mg，97％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.14(s，2H)，3.89(s，6H)，3.80(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝253.3。
實施例121-(4-氟-3-甲基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2012)根據GP3，應用4-氟-3-甲基苯甲醛(2.0mmol，276mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2012)(433mg，93％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.75(m，1H)，7.63(m，1H)，7.10(t，J＝9.2Hz，1H)，2.31(d，J＝2.0Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝295.2。
實施例131-(3-氯-4-氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2013)根據GP2，應用3-氯-4-氟苯甲醛(2.0mmol，317mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2013)(391mg，77％)。1H NMR(CD3OD)δ8.08(s，1H)，8.06(dd，J＝7.2，2.2Hz，1H)，7.74(ddd，J＝8.6，4.7，2.2Hz，1H)，7.32(ap.t，J＝8.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝215.2，217.2。
實施例141-(3-溴-4-甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2014)根據GP2，應用3-溴-4-甲氧基苯甲醛(2.0mmol，430mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(2014)(568mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(d，J＝2.2Hz，1H)，8.01(s，1H)，8.11(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.69(d，J＝8.6Hz，1H)，3.93(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝271.2，273.2。
實施例151-(2，5-二氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2015)根據GP2，應用2，5-二氟苯甲醛(2.0mmol，284mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2015)(377mg，80％)。1H NMR(CD3OD)δ8.31(d，J＝2.0Hz，1H)，7.92(m，1H)，7.23(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝199.2。
實施例161-(2，4-二氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2016)根據GP3，應用2，4-二氟苯甲醛(2.0mmol，284mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2016)(418mg，89％)。1H NMR(CD3OD)δ8.30(s，1H)，8.16(m，1H)，7.07(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝199.2。
實施例171-(2，3-二氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2017)根據GP2，應用2，3-二氯苯甲醛(2.0mmol，350mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2017)(441mg，82％)。1H NMR(CD3OD)δ8.60(s，1H)，8.13(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.37(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝231.2、233.2、235.2。
實施例181-(4-溴-2-氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2018)根據GP2，應用4-溴-2-氟苯甲醛(2.0mmol，406mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2018)(441mg，74％)。1H NMR(CD3OD)δ8.30(s，1H)，8.04(m，1H)，7.46(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝259.2，261.2。
實施例191-(4-苯基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2019)根據GP2，應用4-聯苯基醛(2.0mmol，364mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2019)(440mg，80％)。1H NMR(CD3OD)δ8.15(s，1H)，7.88(m，2H)，7.71(m，2H)，7.66(m，2H)，7.46(m，2H)，7.38(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝239.3。
實施例201-(4-苯氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2020)根據GP4，應用4-苯氧基苯甲醛(2.0mmol，396mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得淡粉紅色粉末狀的所述標題化合物(2020)(384mg，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.67(m，2H)，7.36(m，2H)，7.13(m，1H)，7.01(m，2H)，6.96(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝255.3。
實施例211-(3-苯氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2021)根據GP4，應用3-苯氧基苯甲醛(2.0mmol，396mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得淡粉紅色粉末狀的所述標題化合物(2021)(301mg，59％)。1H NMR(CD3OD)δ7.99(s，1H)；7.30-7.43(m，4H)，7.10(m，1H)，7.00(m，2H)，6.90(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝255.3。
實施例221-(3，5-二-叔丁基-2-羥基苯亞甲基氨基)胍(2022)根據GP4，應用3，5-二-叔丁基-2-羥基苯甲醛(2.0mmol，469mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得淡黃色/棕色粉末狀的所述標題化合物(2022)(501mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.19(s，1H)，7.28(d，J＝2.5Hz，1H)，7.07(d，J＝2.5Hz，1H)，1.44(s，9H)，1.30(s，9H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝。
實施例231-(2，3，5-三氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2023)根據GP2，應用2，3，5-三氯苯甲醛(2.0mmol，419mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2023)(410mg，68％)。1H NMR(CD3OD)δ8.54(s，1H)，8.26(d，J＝2.4Hz，1H)，7.72(d，J＝2.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝265.1、267.1、279.1。
實施例241-(3，5-二溴-4-羥基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2024)根據GP2，應用3，5-二溴-4-羥基苯甲醛(2.0mmol，560mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(2024)(701mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ7.98(s，2H)，7.96(s，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝335.1、337.1、339.1。
實施例251-(4-異丙氧基苯亞甲基氨基)胍(2025)根據GP4，應用4-異丙氧基苯甲醛(2.0mmol，328mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得膏粉狀的所述標題化合物(2025)(295mg，67％)。1H NMR(CD3OD)δ7.98(s，1H)，7.59(m，2H)，6.88(m，2H)，4.62(sept，J＝6.0Hz，1H)，1.31(d，J＝6.0Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝221.2。
實施例261-(3，4-二乙氧基苯亞甲基氨基)胍(2026)根據GP4，應用3，4-二乙氧基苯甲醛(2.0mmol，388mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2026)(355mg，71％)。1H NMR(CD3OD)δ7.95(s，1H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H)，7.11(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，6.91(d，J＝8.0Hz，1H)，4.11(q，J＝7.0Hz，2H)，4.09(q，J＝7.0Hz，2H)，1.42(t，J＝7.0Hz，3H)，1.41(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝251.1。
實施例271-(3，5-二氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2027)根據GP2，應用3，5-二氟苯甲醛(2.0mmol，284mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色結晶狀的所述標題化合物(2027)(412mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.47(m，2H)，7.03(tt，J＝9.0，2.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝199.1。
實施例281-(3.4-二氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2028)根據GP2，應用芴-2-醛(2.0mmol，388mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(2028)(559mg，97％)。1HNMR(CD3OD)δ8.16(s，1H)，8.01(br.s，1H)，7.85(m，2H)，7.77(m，1H)，7.57(m，1H)，7.38(m，1H)，7.34(dt，J＝7.4，1.2Hz，1H)，3.93(s，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝251.1。
實施例291-(3，4-二溴苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3093)根據GP2，應用3，4-二溴苯甲醛(2.0mmol，528mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3093)(655mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.20(d，J＝2.0Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝318.8、320.8、322.8。
實施例301-(4-氯-3-氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2030)根據GP2，應用4-氯-3-氟苯甲醛(2.0mmol，317mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色結晶狀的所述標題化合物(2030)(466mg，93％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.81(m，1H)，7.56(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝215.0，217.0。
實施例311-(3-氯-4-羥基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2031)根據GP2，應用3-氯-4-羥基苯甲醛(2.0mmol，313mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(2031)(468mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ7.97(s，1H)，7.84(d，J＝2.1Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.4，2.1Hz，1H)，6.94(d，J＝8.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝213.1，215.0。
實施例321-(4-氟-3-硝基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2032)根據GP2，應用2-氟-5-甲酰基芐腈(2.0mmol，298mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色結晶狀的所述標題化合物(2032)(452mg，93％)。1H NMR(CD3OD)δ8.32(dd，J＝6.2，2.2Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.14(ddd，J＝8.8，5.2，2.2Hz，1H)，7.45(t，J＝8.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝206.1。
實施例331-(3，5-二甲基-4-羥基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2033)根據GP2，應用3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛(2.0mmol，300mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(2033)(462mg，95％)。1H NMR(CD3OD)δ7.94(s，1H)，7.39(s，2H)，2.24(s，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝207.1實施例341-(4-甲氧基-2，3-二甲基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2034)根據GP2，應用4-甲氧基-2，3-二甲基苯甲醛(2.0mmol，328mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(2034)(461mg，89％)。1H NMR(CD3OD)δ8.45(s，1H)，7.83(d，J＝8.8Hz，1H)，6.86(d，J＝8.8Hz，1H)，3.85(s，3H)，2.37(s，3H)，2.17(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝221.1。
實施例351-[4-氯-3-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2035)根據GP2，應用4-氯-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，417mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2035)(524mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ8.24(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(s，1H)，8.04(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.69(d，J＝8.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝265.0，267.0。
實施例361-(3-溴-4，5-二甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3099)根據GP3，應用3-溴-4，5-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，490mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3099)(588mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ8.02(s，1H)，7.56(d，J＝1.9Hz，1H)，7.52(d，J＝1.9Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.85(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝300.9，302.9。
實施例371-[3，4-二氫-2H-苯并[b][1，4]二氧七環(dioxepin)-7-基)亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2038)根據GP3，應用3，4-二氫-2H-苯并[b][1，4]二氧七環(dioxepin)-7-醛(1.0mmol，178mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2038)(206mg，76％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.43(d，J＝2.2Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.4，2.2Hz，1H)，6.99(d，J＝8.4Hz，1H)，4.23(t，J＝5.6Hz，2H)，4.21(t，J＝5.6Hz，2H)，2.19(pent，J＝5.6Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝235.1。
實施例38[(環己基苯基亞甲基氨基]胍(2039)根據GP4，應用苯甲酰基環己烷(2.0mmol，377mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)。在所述CombiFlash上應用方法CF1純化所述粗品，獲得膏粉狀的所述標題化合物(2039)(109mg，22％)。1H NMR(CD3OD)δ7.42(m，2H)，7.35(m，1H)，7.18(m，2H)，2.48(m，1H)，1.85(m，2H)，1.77(m，2H)，1.67(m，1H)，1.14-1.39(m，5H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝245.2。
實施例391-[1-(2，3-二氫-苯并[1，4]二噁英-6-基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(2040)根據GP3，應用1-(2，3-二氫-苯并[1，4]二噁英-6-基)乙基酮(2.0mmol，356mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(2040)(492mg，91％)。1H NMR(CD3OD)δ7.42(d，J＝2.2Hz，1H)，7.37(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，6.86(d，J＝8.6Hz，1H)，4.27(m，4H)，2.30(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝235.1。
實施例401-(4-芐氧基-3-氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2041)根據GP5，應用溴芐(1.0mmol，171mg)，并用CF2純化所述粗品，產生白色粉末狀的4-芐氧基-3-氯苯甲醛(224mg，91％)。1H NMR(CDCl3)δ9.86(s，1H)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)，7.73(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.32-7.48(m，5H)，7.08(d，J＝8.4Hz，1H)，5.26(s，2H)。
根據GP3，應用4-芐氧基-3-氯苯甲醛(0.91mmol，224mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.86mmol，95mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2041)(238mg，77％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.98(d，J＝2.2Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.47(m，2H)，7.37(m，2H)，7.34(m，1H)，7.19(d，J＝8.6Hz，1H)，5.24(s，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝303.0，305.0。
實施例411-(4-烯丙氧基-3-氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2042)根據GP5，應用烯丙基溴(1.0mmol，121mg)，并用CF2純化所述粗品，產生淡黃色結晶狀的4-烯丙氧基-3-氯苯甲醛(181mg，92％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，6.06(ddt，J＝17.2，10.6，5.1Hz，1H)，5.49(m，1H)，5.36(m，1H)，4.71(dt，J＝5.1，1.7Hz，2H)。
根據GP3，應用4-烯丙氧基-3-氯苯甲醛(0.92mmol，181mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.87mmol，96mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2042)(189mg，71％)。1H NMR(CD3OD)δ7.97(s，1H)，7.96(d，J＝2.0Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.6Hz，1H)，6.08(ddt，J＝17.4，10.6，5.1Hz，1H)，5.47(ap.dq，17.4，1.6Hz，1H)，5.32(ap.dq，J＝10.6，1.6Hz，1H)，4.70(dt，J＝5.1，1.6Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝304.9，306.9。
實施例421-3-氯-4-甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2043)根據GP5，應用碘甲烷(1.0mmol，142mg)，并用CF2純化所述粗品，產生白色固體狀的3-氯-4-甲氧基苯甲醛(182mg，100％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，3.99(s，3H)。
根據GP2，應用3-氯-4-甲氧基苯甲醛(1.0mmol，182mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.95mmol，104mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2043)(219mg，83％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.13(d，J＝8.6Hz，1H)，3.94(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝227.1，229.0。
實施例431-[3-氯-4-(4-氰基丁氧基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2044)根據GP5，應用5-溴戊腈(1.0mmol，162mg)，并用CF3純化所述粗品，得到無色油狀的5-(2-氯-4-甲酰基苯氧基)-戊腈(151mg，63％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.17(t，J＝5.8Hz，2H)，2.52(t，J＝7.0Hz，2H)，2.07(m，2H)，1.95(m，2H)。
根據GP3，應用5-(2-氯-4-甲酰基苯氧基)-戊腈(0.63mmol，151mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.60mmol，66mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(2044)(161mg，77％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.97(d，J＝2.2Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，7.13(d，J＝8.8Hz，1H)，4.18(t，J＝5.9Hz，2H)，2.59(t，J＝7.0Hz，2H)，2.01(m，2H)，1.90(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝294.0，296.0。
實施例441-[3-氯-4-(3-苯氧基丙氧基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2045)根據GP5，應用3-(溴丙氧基)苯(1.0mmol，215mg)，并用CF4純化所述粗品，得到白色粉末狀的3-氯-4-(3-苯氧基丙氧基)苯甲醛(140mg，48％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.75(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.28(m，2H)，7.06(d，J＝8.6Hz，1H)，6.93(m，3H)，4.34(t，J＝6.0Hz，2H)，4.22(t，J＝6.0Hz，2H)，2.30(pent，J＝6.0Hz，2H)。
根據GP3，應用3-氯-4-(3-苯氧基丙氧基)苯甲醛(0.48mmol，140mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.46mmol，50mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2045)(159mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.25(m，2H)，7.15(d，J＝8.6Hz，1H)，6.92(m，3H)，4.31(t，J＝6.0Hz，2H)，4.21(t，J＝6.0Hz，2H)，2.30(pent，J＝6.0Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝347.0，349.0。
實施例451-[3-氯-4-(2-苯乙氧基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2046)根據GP5，應用2-溴乙苯(1.0mmol，185mg)，并用CF4純化所述粗品，得到無色油狀的3-氯-4-(2-苯乙氧基)苯甲醛(146mg，56％)。1H NMR(CDCl3)δ9.83(s，1H)，7.89(d，J＝2.0Hz，1H)，7.72(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.33(m，4H)，7.27(m，1H)，6.98(d，J＝8.4Hz，1H)，4.30(t，J＝6.9Hz，2H)，3.20(t，J＝6.9Hz，2H)。
在EtOH(2mL)中，將3-氯-4-(2-苯乙氧基)苯甲醛(0.56mmol，146mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.55mmol，58mg)在70℃下搖動18小時，然后冷卻至室溫。加入Et2O來促使結晶以及將所述沉淀物(其為起始物氨基胍鹽酸鹽)濾過并棄去。在所述濾液中出現新沉淀物，因此過濾該濾液并用1∶1DCM∶EtOAc(2次)、Et2O(2次)洗滌并在高真空下干燥，獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2046)(70mg，35％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.34(m，2H)，7.29(m，2H)，7.22(m，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.30(t，J＝6.7Hz，2H)，3.13(t，J＝6.7Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝317.0，319.0。
實施例461-(3-氯-4-己氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2047)根據GP5，應用1-碘己烷(1.0mmol，212mg)，并用CF5純化所述粗品，得到白色固體狀的3-氯-4-己氧基苯甲醛(208mg，86％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.12(t，J＝6.5Hz，2H)，1.87(m，2H)，1.51(m，2H)，1.37(m，4H)，0.91(m，3H)。
根據GP3，應用3-氯-4-己氧基苯甲醛(0.86mmol，208mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.82mmol，90mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2047)(141mg，49％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝2.0Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.11(t，J＝6.5Hz，2H)，1.83(m，2H)，1.53(m，2H)，1.39(m，4H)，0.93(m，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝297.1，299。
實施例471-(3-氯-4-丙氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2048)根據GP5，應用1-碘丙烷(1.0mmol，170mg)，并用CF5純化所述粗品，得到白色固體狀的3-氯-4-丙氧基苯甲醛(211mg，100％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.09(t，J＝6.5Hz，2H)，1.91(m，2H)，1.09(t，J＝7.4Hz，3H)。
在EtOH(2mL)中，將3-氯-4-丙氧基苯甲醛(1.0mmol，211mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.95mmol，104mg)在70℃下搖動18小時，然后冷卻至室溫。加入Et2O來促使結晶以及將所述沉淀物(其為起始物氨基胍鹽酸鹽)濾過并棄去。在所述濾液中出現新沉淀物，因此過濾該濾液以及用EtOAc(2次)、Et2O(2次)洗滌并在高真空下干燥，獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2048)(70mg，24％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.07(t，J＝6.3Hz，2H)，1.85(m，2H)，1.09(t，J＝7.4Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝297.1，299.1。
實施例481-[3-氯-4-(9-甲基丙氧基)苯亞甲基氨基]胍醋酸鹽(2049)根據GF5，應用1-溴-2-甲基丙烷(1.0mmol，137mg)，并用CF5純化所述粗品，得到無色油狀的3-氯-4-(2-甲基丙氧基)苯甲醛(5mg，2％)。1HNMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.00(d，J＝8.4Hz，1H)，3.88(d，J＝6.4Hz，2H)，2.20(m，1H)，1.09(d，J＝6.8Hz，6H)。
在EtOH(1mL)中，將3-氯-4-(2-甲基丙氧基)苯甲醛(0.02mmol，5mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.04mmol，4mg)在70℃下搖動18小時，然后在真空中濃縮。用CH3CH∶H2O(3∶7，300μL)溶解所述粗品并經制備的LC/MS純化。將含有所需要的化合物的所述部分在真空中濃縮，獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2049)(6mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ8.02(s，1H)，7.94(d，J＝2.2Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.09(d，J＝8.6Hz，1H)，3.88(d，J＝6.5Hz，2H)，2.13(m，1H)，1.94(s，3H)，1.08(d，J＝6.7Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝269.1，271.1。
實施例491-[3-氯-4-(4-甲基戊氧基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2050)根據GP5，應用1-溴-4-甲基戊烷(1.0mmol，165mg)，并用CF4純化所述粗品，得到白色固體狀的3-氯-4-(4-甲基戊氧基)苯甲醛(162mg，67％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.10(d，J＝6.6Hz，2H)，1.87(m，2H)，1.63(m，1H)，1.38(m，2H)，0.93(d，J＝6.7Hz，6H)。
根據GP3(但不用DCM洗滌所述沉淀物)，應用3-氯-4-(4-甲基戊氧基)苯甲醛(0.67mmol，162mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.64mmol，70mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2050)(132mg，58％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.10(d，J＝6.4Hz，2H)，1.84(m，2H)，1.64(m，1H)，1.42(m，2H)，0.95(d，J＝6.7Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝297.1，299.1。
實施例501-[3-氯-4-(4-環己基甲氧基)苯亞甲基氨基)胍醋酸鹽(2051)根據GP5，應用溴甲基環己烷(1.0mmol，177mg)，并用CF5純化所述粗品，得到白色固體狀的3-氯-4-(4-環己基甲氧基)苯甲醛(6mg，2％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，3.91(d，J＝5.9Hz，2H)，1.84-1.95(m，3H)，1.68-1.82(m，3H)，1.21-1.39(m，3H)，1.05-1.20(m，2H)。
在EtOH(1mL)中，將3-氯-4-(4-環己基甲氧基)苯甲醛(0.02mmol，6mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.04mmol，4mg)在70℃下搖動18小時，然后在真空中濃縮。用CH3CH∶H2O(3∶7，300μL)溶解所述粗品并經制備的LC/MS純化。將含有所需要的化合物的所述部分在真空中濃縮，獲得無色油狀的所述標題化合物(2051)(3mg，40％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.93(d，J＝2.2Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.08(d，J＝8.6Hz，1H)，3.91(d，J＝5.9Hz，2H)，1.94(s，3H)，1.55-1.95(m，6H)，1.23-1.41(m，3H)，1.09-1.22(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝309.1，311.1。
實施例511-[3-氯-4-(2-乙基丁氧基)苯亞甲基氨基]胍醋酸鹽(2052)根據GP5，應用1-溴-2-乙基丁烷(1.0mmol，165mg)，并用CF5純化所述粗品，得到無色油狀的3-氯-4-(2-乙基丁氧基)苯甲醛(13mg，5％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，4.01(d，J＝5.7Hz，2H)，1.77(m，1H)，1.47-1.59(m，4H)，0.96(t，J＝7.4Hz，6H)。
在EtOH(1mL)中，將3-氯-4-(2-乙基丁氧基)苯甲醛(0.05mmol，13mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.10mmol，10mg)在70℃下搖動18小時，然后在真空中濃縮。用CH3CH∶H2O(3∶7，300μL)溶解所述粗品并經制備的LC/MS純化。將含有所需要的化合物的所述部分在真空中濃縮，獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2052)(5mg，27％)。1H NMR(CD3OD)δ8.02(s，1H)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.11(d，J＝8.6Hz，1H)，4.02(d，J＝5.7Hz，2H)，1.94(s，3H)，1.72(m，1H)，1.54(m，4H)，0.97(t，J＝7.5Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝297.1，299.1。
實施例521-(3-氯-4-辛氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2053)根據GP5，應用1-碘辛烷(1.0mmol，240mg)，并用CF5純化所述粗品，得到白色固體狀的3-氯-4-辛氧基苯甲醛(229mg，85％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.11(t，J＝6.5Hz，2H)，1.86(m，2H)，1.51(m，2H)，1.25-1.41(m，8H)，0.89(m，3H)。
根據GP3(但不用DCM洗滌所述沉淀物)，應用3-氯-4-辛氧基苯甲醛(0.85mmol，229mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.81mmol，89mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2053)(196mg，63％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.11(t，J＝6.5Hz，2H)，1.84(m，2H)，1.53(m，2H)，1.26-1.45(m，8H)，0.91(m，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝325.1，327.1。
實施例531-[3-氯-4-(2-乙氧基-乙氧基)苯亞甲基氨基]胍醋酸鹽(2054)
根據GP5，應用1-溴-2-乙氧基乙烷(1.0mmol，153mg)，并用CF4純化所述粗品，得到白色固體狀的3-氯-4-(2-乙氧基-乙氧基)苯甲醛(28mg，12％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.06(d，J＝8.4Hz，1H)，4.27(m，2H)，3.87(m，2H)，3.64(q，J＝7.0Hz，2H)，1.24(t，J＝7.0Hz，3H)。
在EtOH(1mL)中，將3-氯-4-(2-乙氧基-乙氧基)苯甲醛(0.12mmol，28mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.12mmol，12mg)在70℃下搖動18小時，然后在真空中濃縮。用CH3CH∶H2O(3∶7，600μL)溶解所述粗品并經制備的LC/MS純化。將含有所需要的化合物的所述部分在真空中濃縮，獲得淡黃色油末狀的所述標題化合物(2054)(22mg，52％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.94(d，J＝2.2Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.14(d，J＝8.6Hz，1H)，4.24(m，2H)，3.85(m，2H)，3.64(q，J＝7.0Hz，2H)，1.22(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝285.0，287.0。
實施例541-(2-苯基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2055)根據GP6，應用聯苯-2-醛(2.0mmol，364mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，209mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2055)(440mg，80％)。1H NMR(CD3OD)δ8.22(m，1H)，8.05(s，1H)，7.41-7.54(m，5H)，7.30-7.39(m，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝239.1。
實施例551-(3，4-二氯苯基)-(亞丙基氨基胍)鹽酸鹽(2056)根據GP6，應用1-(3，4-二氯苯基)丙-1-烷(2.0mmol，406mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，209mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2056)(534mg，90％)。1H NMR(CD3OD)δ8.13(d，J＝2.2Hz，1H)，7.80(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.58(d，J＝8.6Hz，1H)，2.82(q，J＝7.7Hz，2H)，1.19(t，J＝7.7Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝259.0、261.0、263.0。
實施例561-[4-(2-氟苯基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2057)在EtOH(2mL)中，將2′-氟-聯苯基-4-醛(0.144mmol，36mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.13mmol，14mg)在120℃下微波加熱10分鐘，然后冷卻至室溫。加入水(20mL)和NaOH(2M，5mL)并用EtOAc(2×20mL)提取所述產物。用水(10mL)、鹽水(10mL)洗滌所述有機層，經MgSO4干燥并過濾。加入含有HCl的乙醚(2M，0.5mL)并濃縮所述溶液。從MeOH/Et2O中重結晶得到膏粉狀的所述標題化合物(2057)(12mg，25％)；1H NMR(CD3OD)δ8.14(s，1H)，7.90(m，2H)，7.64(m，2H)，7.52(m，1H)，7.40(m，1H)，7.28(m，1H)，7.21(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝257.1。
實施例571-[3-(2-三氟甲基苯基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2058)在EtOH(2mL)中，將2′-三氟甲基-聯苯基-3-醛(0.132mmol，33mg)和氨基胍鹽酸鹽(0.12mmol，13mg)在120℃下微波加熱10分鐘，然后冷卻至室溫。加入水(20mL)和NaOH(2M，5mL)并用EtOAc(2×20mL)提取所述產物。用水(10mL)、鹽水(10mL)洗滌所述有機層，經MgSO4干燥并過濾。加入含有HCl的乙醚(2M，0.5mL)并濃縮所述溶液。從MeOH/Et2O中重結晶得到白色粉末狀的所述標題化合物(2058)(9mg，19％)；1H NMR(CD3OD)δ8.13(s，1H)，7.86(m，1H)，7.79(m，2H)，7.67(m，1H)，7.58(m，1H)，7.51(m，1H)，7.41(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝307.1。
實施例581-(5-氯-2，3-二甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(2059)根據GP3，應用5-氯-2，3-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，401mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2059)(449mg，80％)。1H NMR(CD3OD)δ8，38(d，J＝0.4Hz，1H)，7.69(dd，J＝2.5，0.4Hz，1H)，7.11(d，J＝2.5Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.87(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝257.0，259.0。
實施例591-[2-氟-4-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2060)根據GP3，應用2-氟-4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2060)(478mg，88％)。1H NMR(CD3OD)δ8.38(s，1H)，8.33(m，1H)，7.57(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝249.0。
實施例601-[2，4-二(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2061)根據GP3，應用2，4-二(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，484mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2061)(566mg，89％)。1H NMR(CD3OD)δ8.61(m，1H)，8.52(m，1H)，8.05(m，1H)，8.02(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝299.0。
實施例611-[2，3-二氟-4-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2062)根據GP3，應用2，4-二氟-4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，420mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2062)(520mg，90％)。1H NMR(CD3OD)δ8.36(s，1H)，8.09(m，1H)，7.55(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝267.0。
實施例621-[3-氟-4-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2063)根據GP3，應用3-氟-4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2063)(469mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.15(s，1H)，7.92(m，1H)，7.71-7.79(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝249.0。
實施例631-[3-硝基-4-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2064)根據GP2，應用3-硝基-4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，438mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(2064)(493mg，83％)。1H NMR(CD3OD)δ8.66(s，1H)，8.50(m，1H)，8.42(m，1H)，8.07(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝276.0。
實施例641-[2-氟-3-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2065)根據GP2，應用2-氟-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2065)(500mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.41(m，1H)，8.39(s，1H)，7.80(m，1H)，7.44(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝249.0。
實施例651-[2-氟-5-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2066)根據GP3，應用2-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2066)(410mg，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.54(dd，J＝6.5，2.2Hz，1H)，8.38(s，1H)，7.81(m，1H)，7.42(ap.t，J＝9.5Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝249.0。
實施例661-[3-氟-5-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2067)根據GP3，應用3-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2067)(458mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ8.17(s，1H)，7.98(br.s，1H)，7.95(m，1H)，7.55(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝249.0。
實施例671-[4-氟-3-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2068)根據GP3，應用4-氟-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2068)(459mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ8.21(dd，J＝6.7，2.2Hz，1H)，8.17(s，1H)，8.11(ddd，J＝8.6，4.7，2.2Hz，1H)，7.43(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝249.0。
實施例681-[2-氯-5-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2069)根據GP3，應用2-氯-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，417mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2069)(486mg，85％)。1H NMR(CD3OD)δ8.60(s，1H)，8.55(m，1H)，7.73(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.69(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝265.0，267.0。
實施例691-[2-氯-3-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2070)根據GP3，應用2-氯-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，417mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2070)(518mg，90％)。1H NMR(CD3OD)δ8.67(s，1H)，8.44(dd，J＝7.9，1.6Hz，1H)，7.88(dd，J＝7.9，1.0Hz，1H)，7.57(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝265.0，267.0。
實施例701-[3-氯-2-氟-5-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2071)根據GP3，應用3-氯-2-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，453mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2071)(527mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.50(m，1H)，8.37(s，1H)，7.95(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝283.0，285.0。
實施例711-[(4-氟-1-萘-1-基)亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2072)根據GP3，應用4-氟-1-萘醛(2.0mmol，348mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2072)(439mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.84(s，1H)，8.54(m，1H)，8.18(m，1H)，8.14(dd，J＝8.2，5.7Hz，1H)，7.74(m，1H)，7.67(m，1H)，7.30(dd，J＝10.2，8.2Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝231.0。
實施例721-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2073)根據GP3，應用4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，408mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2073)(313mg，55％)。1H NMR(CD3OD)δ8.09(s，1H)，8.08(d，J＝2.2Hz，1H)，8.00(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，3.97(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝261.0.
實施例731-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2074)將2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，408mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)在70℃下搖動18小時，然后冷卻至室溫。用最小量的MeOH溶解所述粗品，加入Et2O并經過兩天后所述標題化合物以白色晶體狀(2074)結晶(477mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ8.50(s，1H)，8.37(d，J＝2.4Hz，1H)，7.72(ddd，J＝8.8，2.4，0.8Hz，1H)，7.25(d，J＝8.8Hz，1H)，3.98(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝261.0。
實施例741-[萘-2-基-亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2075)根據GP2，應用2-萘醛(2.0mmol，312mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2075)(428mg，90％)。1H NMR(CD3OD)δ8.27(s，1H)，8.12(br.s；1H)，8.08(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)，7.85-7.95(m，3H)，7.55(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝213.1。
實施例751-[5-溴-2-乙氧基苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2076)根據GP6，應用5-溴-2-乙氧基苯甲醛(2.0mmol，458mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2076)(363mg，59％)。1H NMR(CD3OD)δ8.45(s，1H)，8.21(d，J＝2.5Hz，1H)，7.51(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，7.00(d，J＝8.8Hz，1H)，4.13(q，J＝6.9Hz，2H)，1.44(t，J＝6.9Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝285.0，287.0。
實施例761-[2，4-二甲基苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2077)根據GP3，應用2，4-二甲基苯甲醛(2.0mmol，368mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(2077)(342mg，，79％)。1H NMR(CD3OD)δ8.40(s，1H)，7.85(d，J＝8.4Hz，1H)，7.07(m，2H)，2.44(s，3H)，2.33(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝191.1。
實施例771-[4-氯-3-硝基苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2078)根據GP2，應用4-氯-3-硝基苯甲醛(2.0mmol，371mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(2078)(487mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.44(d，J＝2.0Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.02(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.73(d，J＝8.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝242.0，244.0。
實施例781-(4-芐氧基-2-羥基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3001)根據GP7，應用4-芐氧基-2-羥基苯甲醛(2.0mmol，456mg)和氨基胍鹽酸鹽(1.9mmol，210mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3001)(358mg，64％)。1H NMR(CD3OD)δ8.39(s，1H)，7.72(d，J＝8.8Hz，1H)，7.48-7.34(m，5H)，6.63(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，6.57(d，J＝2.4Hz，1H)，5.14(s，2H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝285.2。
實施例791-[(1H-吲哚-5-基)亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(3002)根據GP8，應用吲哚-5-醛(2.0mmol，290mg)獲得紅色粉末狀的所述標題化合物(3002)(266mg，65％)。1H NMR(CD3OD)δ8.23(s，1H)，7.95(d，J＝1.4Hz，1H)，7.73(dd，J＝8.6，1.5Hz，1H)，7.49(d，J＝8.6Hz，1H)，7.34(d，J＝3.1Hz，2H)，6.57(dd，J＝3.1，0.8Hz，1H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝202.2.
實施例801-(4-丁氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3003)根據GP7，應用4-丁氧基苯甲醛(2.0mmol，356mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3003)(355mg，76％)。1H NMR(CD3OD)δ8.14(s，1H)，7.78(m，2H)，7.01(m，2H)，4.04(t，J＝6.4Hz，2H)，1.80(m，2H)，1.55(m，2H)，1.03(t，J＝7.2Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝235.2。
實施例811-(4-氰基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3004)根據GP8，應用4-氰基苯甲醛(2.0mmol，262mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3004)(343mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.25(s，1H)，8.05(m，2H)，7.86(m，2H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝188.1。
實施例821-(2，5-二甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3005)根據GP7，應用2，5-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，332mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(3005)(355mg，69％)。1H NMR(CD3OD)δ8.53(s，1H)，7.64(dd，J＝2.3，0.6Hz，1H)，7.06(m，2H)，3.90(s，3H)，3.87(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝223.2。
實施例831-(2-芐氧基-3-甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3006)根據GP7，應用2-芐氧基-3-甲氧基苯甲醛(2.0mmol，484mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3006)(460mg，69％)。1H NMR(CD3OD)δ8.35(s，1H)，7.63(dd，J＝6.8，2.3Hz，1H)，7.47-7.35(m，5H)，7.19(m，2H)，5.13(s，2H)，3.98(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝299.3。
實施例841-[1-(2-甲氧基-萘-1-基)亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(3007)根據GP7，應用2-甲氧基-1-萘醛(2.0mmol，372mg)獲得淡綠色粉末狀的所述標題化合物(3007)(275mg，49％)。1H NMR(CD3OD)δ8.94(d，J＝8.6Hz，1H)，8.88(s，1H)，7.99(d，J＝8.9Hz，1H)，7.86(d，J＝7.9Hz，1H)，7.62(m，1H)，7.45(m，2H)，4.03(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝243.2。
實施例851-(4-羥基-3-甲氧基-5-硝基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3008)根據GP7，應用4-羥基-3-甲氧基-5-硝基苯甲醛(2.0mmol，394mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(3008)(509mg，88％)。1H NMR(DMSO)δ7.69(s，1H)，7.43(s，1H)，7.36(s，1H)，3.50(s，3H)，2.97(m，3H，Nh)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝254.2。
實施例861-(3，4-二羥基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3009)根據GP8，應用3，4-二羥基苯甲醛(2.0mmol，276mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(3009)(375mg，81％)。1H NMR(CD3OD)δ7.99(s，1H)，7.30(d，J＝1.9Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.2，1.9，1H)，6.85(d，J＝8.2，1H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝195.1。
實施例871-(3-溴苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3010)根據GP8，應用3-溴苯甲醛(2.0mmol，370mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3010)(363mg，66％)。1H NMR(CD3OD)δ8.17(s，1H)，8.12(ap.t，J＝1.6Hz，1H)，7.78(ap.dt，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.64(ddd，J＝8.0，2.0，1.0Hz，1H)，7.41(ap.t，J＝8.1Hz，1H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝241.1，243.1。
實施例881-(3，5-二溴苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3011)根據GP7，應用3，5-二溴苯甲醛(2.0mmol，527mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3011)(488mg，68％)。1H NMR(CD3OD)δ8.11(s，1H)，8.08(d，J＝1.7Hz，2H)，7.86(ap.t，J＝1.7Hz，1H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝271.2，273.2。
實施例891-[1-(3，4-二氯苯基)亞乙基氨基)胍鹽酸鹽(3012)根據GP2，應用3，4-二氯苯乙酮(2.0mmol，378mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3012)(368mg，66％)。1H NMR(CD3OD)δ8.16(ap.t，J＝1.5Hz，1H)，7.85(dt，J＝8.6，2.1Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，1.5Hz，1H)，2.42(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝245.1、247.1、249.1。
實施例901-(4-n-己氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3013)根據GP7，應用4-n-己氧基苯甲醛(2.0mmol，412mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3013)(386mg，65％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.78(dd，J＝6.9，1.9Hz，2H)，7.02(dd，J＝6.8，1.9Hz，2H)，4.08(t，J＝6.4Hz，2H)，1.84(m，2H)，1.54(m，2H)，1.43(m，4H)，0.99(t，J＝7.2Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝263.3。
實施例911-(3，4-二芐氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3014)根據GP7，應用3，4-二芐氧基苯甲醛(2.0mmol，636mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3014)(583mg，72％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.67(d，J＝1.9Hz，1H)，7.52-7.45(m，4H)，7.41-7.31(m，6H)，7.27(dd，J＝8.2，1.9Hz，1H)，7.09(d，J＝8.4Hz，1H)，5.20(s，2H)，5.19(s，2H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝375.3。
實施例921-[(6-溴苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-5-基)亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3015)根據GP8，應用6-溴胡椒醛(2.0mmol，458mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3015)(539mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ8.52(s，1H)，7.76(s，1H)，7.18(s，1H)，6.13(s，2H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝285.2，287.2。
實施例931-[1-4-溴苯基)亞乙基氨基)胍鹽酸鹽(3016)根據GP3，應用4-溴苯乙酮(2.0mmol，398mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3016)(455mg，79％)。1H NMR(CD3OD)δ7.88(m，2H)，7.63(m，2H)，2.42(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝255.1，257.1。
實施例941-[1-(3-甲基苯基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3017)根據GP2，應用3-甲基苯乙酮(2.0mmol，268mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3017)(316mg，70％)。1H NMR(CD3OD)δ7.78(br.s，1H)，7.72(m，1H)，7.36(ap.t，J＝7.6Hz，1H)，7.31(m，1H)，2.45(s，3H)，2.42(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝191.2。
實施例951-(3-甲基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3018)根據GP7，應用3-甲基苯甲醛(2.0mmol，240mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(3018)(259mg，62％)。1H NMR(CD3OD)δ8.16(s，1H)，7.70(br.s，1H)，7.63(d，J＝7.6Hz，1H)，7.37(ap.t，J＝7.5Hz，1H)，7.32(m，1H)，2.43(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝177.2。
實施例961-(3，4-二甲基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3019)根據GP7，應用3，4-二甲基苯甲醛(2.0mmol，268mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3019)(355mg，78％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.65(br.s，1H)，7.55(dd，J＝7.8，1.8Hz，1H)，7.25(d，J＝7.6Hz，1H)，2.37(s，3H)，2.36(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝191.2。
實施例971-[1-(4-乙基苯基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3020)根據GP2，應用4-乙基苯乙酮(2.0mmol，296mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3020)(209mg，44％)。1H NMR(CD3OD)δ7.86(m，2H)，7.32(m，2H)，2.74(q，J＝7.6Hz，2H)，2.41(s，3H)，1.30(t，J＝7.6Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝205.3。
實施例981-[1-(3，4-二甲基苯基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3021)根據GP2，應用3，4-二甲基苯乙酮(2.0mmol，296mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3021)(415mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ7.74(br.s，1H)，7.64(m，1H)，7.23(d，J＝8.0，1H)，2.39(s，3H)，2.37(s，3H)，2.35(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝205.3。
實施例991-(4-正-戊基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3022)根據GP8，應用4-正-戊基苯甲醛(2.0mmol，362mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3022)(247mg，47％)。1H NMR(CD3OD)δ8.17(s，1H)，7.76(m，2H)，7.32(d，J＝8.2Hz，2H)，2.70(t，J＝7.5Hz，2H)，1.69(m，2H)，1.40(m，4H)，0.96(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝233.3。
實施例1001-[1-(4-正-庚基苯基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3023)根據GP3，應用4-正-己基苯乙酮(2.0mmol，408mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3023)(162mg，29％)。1H NMR(CD3OD)δ7.86(m，2H)，7.30(d，J＝8.6Hz，2H)，2.71(t，J＝7.4Hz，2H)，2.42(s，3H)，1.69(m，2H)，1.44-1.35(m，6H)，0.96(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝261.3。
實施例1011-[1-(5，6，7，8-四氫萘-2-基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3024)根據GP2，應用6-乙酰基-1，2，3，4-四氫萘(2.0mmol，348mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3024)(374mg，70％)。1H NMR(CD3OD)δ7.64(m，1H)，7.62(br.s，1H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H)，2.89-2.82(m，4H)，2.39(s，3H)，1.89-1.82(m，4H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝231.3。
實施例1021-(4-乙基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3025)根據GP7，應用4-乙基苯甲醛(2.0mmol，268mg)獲得淡黃色油狀的所述標題化合物(3025)(272mg，60％)。1H NMR(CD3OD)δ8.13(s，1H)，7.74(d，J＝8.2Hz，2H)，7.31(d，J＝8.3Hz，2H)，2.71(q，J＝7.6Hz，2H)，1.27(t，J＝7.6Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝191.2。
實施例1031-[1(2-溴苯基)亞乙基氨基)胍鹽酸鹽(3026)根據GP2，應用2-溴苯乙酮(2.0mmol，398mg)獲得淡粉紅色粉末狀的所述標題化合物(3026)(355mg，61％)，兩個異構體混合物的比例為7∶3。主要的異構體1H NMR(CD3OD)δ7.71(dd，J＝8.0，0.8Hz，1H)，7.49(m，2H)，7.39(m，1H)，2.43(s，3H)；次要的異構體1H NMR(CD3OD)δ7.84(dd，J＝8.0，0.9Hz，1H)，7.62(ap.dt，J＝7.4，0.8Hz，1H)，7.51(m，1H)，7.37(m，1H)，2.39(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝255.2，257.2(兩個異構體共同洗脫出)。
實施例1041-{1-[3-(三氟甲基)苯基]亞乙基氨基}胍鹽酸鹽(3027)根據GP3，應用3-(三氟甲基)苯乙酮(2.0mmol，376mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3027)(356mg，64％)。1H NMR(CD3OD)δ8.24(br.s，1H)，8.22(d，J＝8.0Hz，1H)，7.79(dd，J＝7.6，0.7Hz，1H)，7.69(dt，J＝7.8，0.6Hz，1H)，2.48(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝245.2。
實施例1051-{1-[3，5-二-(三氟甲基)苯基]亞乙基氨基}胍鹽酸鹽(3028)根據GP3，應用3，5-二-(三氟甲基)苯乙酮(2.0mmol，512mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3028)(606mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ8.54(s，2H)，8.08(s，1H)，2.53(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝313.2。
實施例1061-[1-(2，5-二甲氧基苯基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3029)根據GP2，應用2′，5′-二甲氧基苯乙酮(2.0mmol，360mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(3029)(402mg，75％)，兩個異構體混合物的比例大約為4∶1。主要的異構體1H NMR(CD3OD)δ7.07-7.03(m，3H)，3.88(s，3H)，3.84(s，3H)，2.37(s，3H)；次要的異構體1H NMR(CD3OD)δ7.16(br.s，1H)，7.13(d，J＝3.1Hz，1H)，6.81(d，J＝2.9Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.85(s，3H)，2.33(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝237.3(兩個異構體共同洗脫出)。
實施例1071-[1-(2-羥基-4-甲氧基苯基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3030)根據GP3，應用2′-羥基-4′-甲氧基苯乙酮(2.0mmol，332mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3030)(473mg，92％)，兩個異構體混合物的比例為9∶1。主要的異構體1H NMR(CD3OD)δ7.49(d，J＝8.8Hz，1H)，6.49(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，6.45(d，J＝2.5Hz，1H)，3.79(s，3H)，2.38(s，3H)；次要的異構體1H NMR(CD3OD)δ7.78(d，J＝8.9Hz，1H)，6.49(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，6.41(d，J＝2.5Hz，1H)，3.83(s，3H)，2.54(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝223.3(兩個異構體共同洗脫出)。
實施例1081-[1-(4-芐氧基-2-羥基-3-甲基苯基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3031)根據GP3，應用4′-芐氧基-2′-羥基-3′-甲基苯乙酮(2.0mmol，512mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3031)(586mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ7.50(m，3H)，7.45(m，2H)，7.38(m，1H)，6.71(d，J＝9.0Hz，1H)，5.21(s，2H)，2.49(s，3H)，2.22(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝313.3。
實施例1091-[1-(苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-5-基)亞乙基氨基]胍鹽酸鹽(3032)根據GP3，應用3′，4′-(亞甲二氧基)苯乙酮(2.0mmol，328mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(3032)(478mg，93％)。1H NMR(CD3OD)δ7.60(d，J＝1.7Hz，1H)，7.42(dd，J＝8.2，1.7Hz，1H)，6.91(d，J＝8.2Hz，1H)，6.06(s，2H)，2.38(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝221.2。
實施例1101-(3，4-二氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(1045)根據GP7，應用3，4-二氯苯甲醛(4.0mmol，700mg)獲得白色粉末狀的所述標題化合物(1045)(695mg，65％)。1H NMR(CD3OD)δ8.09(s，1H)，8.05(d，J＝1.9Hz，1H)，7.69(dd，J＝8.4，1.9Hz，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝231.1、233.1、235.1。
實施例1111-[1-(4-二甲基氨基苯基)亞戊基氨基]胍(3035)根據GP8，應用1-(4-二甲基氨基苯基)-戊-1-酮(0.5mmol，102mg)得到粗混合物，該粗混合物經制備HPLC純化。濃縮所需要的組合部分，用20％Na2CO3溶液稀釋并用EtOAc提取。所述有機層經Na2SO4干燥、過濾并在真空中濃縮，獲得白色粉末狀的所述標題化合物(3035)(32mg，25％)，兩個異構體混合物的比例大約為3∶1。主要的異構體1H NMR(CD3OD)δ7.31(m，2H)，6.84(m，2H)，3.02(s，6H)，2.63(t，J＝7.2Hz，2H)，1.52-1.34(m，4H)，0.94(t，J＝7.2Hz，3H)；次要的異構體1H NMR(CD3OD)δ7.69(m，2H)，6.79(m，2H)，3.30(m，2H)，3.01(s，6H)，1.50-1.35(m，4H)，0.97(t，J＝7.2Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝262.3(兩個異構體共同洗脫出)。
實施例1121-{4-[乙基-(2-羥乙基)氨基]-2甲基苯亞甲基氨基}胍鹽酸鹽(3036)根據GP7，應用4-[乙基-(2-羥乙基)氨基]-2甲基苯甲醛(2.0mmol，415mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)。在所述CombiFlash上應用方法CF6純化所述粗品，獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(3036)(256mg，44％)。1H NMR(CD3OD)δ8.32(s，1H)，7.83(d，J＝8.8Hz，1H)，6.68(dd，J＝8.8，2.7Hz，1H)，6.60(d，J＝2.7Hz，1H)，3.77(t，J＝6.5Hz，2H)，3.55(t，J＝6.2Hz，2H)，3.54(q，J＝7.0Hz，2H)，2.48(s，3H)，1.23(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氫銨)[M+H]+＝264.3。
實施例1131-(4-二乙基氨基-2-羥基苯亞甲基氨基}胍鹽酸鹽(3037)根據GP7，應用4-二乙基氨基-2-羥基苯甲醛(2.0mmol，386mg)獲得粉紅色粉末狀的所述標題化合物(3037)(538mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ8.25(s，1H)，7.46(d，J＝8.9Hz，1H)，6.37(dd，J＝8.9，2.5Hz，1H)，6.21(d，J＝2.5Hz，1H)，3.47(q，J＝7.0Hz，4H)，1.24(t，J＝7.0Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝250.2。
實施例1141-(4-二乙基氨基苯亞甲基氨基}胍鹽酸鹽(3038)根據GP8，應用4-二乙基氨基苯甲醛(2.0mmol，354mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(3038)(285mg，53％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.65(d，J＝8.4Hz，2H)，6.78(d，J＝8.1Hz，2H)，3.50(q，J＝7.0Hz，4H)，1.24(t，J＝7.0Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝234.2。
實施例1151-[1-(4-哌啶-1-基-苯基)]亞乙基氨基}胍鹽酸鹽(3039)根據GP3，應用4′-哌啶子基苯乙酮(2.0mmol，406mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(3039)(493mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ7.83(d，J＝8.8Hz，2H)，7.01(d，J＝8.9Hz，2H)，3.35(m，4H)，2.37(s，3H)，1.76-1.70(m，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝260.2.
實施例1161-{4-[甲基-(2-氰基乙基)氨基]苯亞甲基氨基}胍鹽酸鹽(3040)根據GP7，應用3-[(4-甲酰苯基)-甲氨基]丙腈(2.0mmol，376mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(3040)(509mg，91％)。1H NMR(CD3OD)δ8.07(s，1H)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，6.88(d，J＝8.4Hz，2H)，3.84(t，J＝6.4Hz，2H)，3.15(s，3H)，2.79(t，J＝6.5Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝245.2。
實施例1171-4-[甲基-(2-羥乙基氨基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(3041)根據GP7，應用4-[甲基-(2-羥乙基)氨基]苯甲醛(2.0mmol，358mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(3041)(320mg，59％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.65(d，J＝8.0Hz，2H)，6.82(d，J＝8.0Hz，2H)，3.78(t，J＝6.4Hz，2H)，3.59(t，J＝6.4Hz，2H)，3.11(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝236.2。
實施例1181-(4-二-n-丁基氨基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3042)根據GP7，應用4-二-n-丁基氨基苯甲醛(2.0mmol，466mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(3042)(458mg，70％)。1H NMR(CD3OD)δ7.99(s，1H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，6.72(d，J＝8.8Hz，2H)，3.40(t，J＝7.6Hz，4H)，1.65-1.59(m，4H)，1.46-1.39(m，4H)，1.02(t，J＝7.2Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝290.2。
實施例1191-(2-甲氧基-4-N，N-二乙基氨基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(3043)根據GP8，應用2-甲氧基-4-N，N-二乙基氨基苯甲醛(1.0mmol，207mg)獲得黃色粉末狀的所述標題化合物(3043)(152mg，57％)，兩個異構體混合物的比例大約為9∶1。主要異構體1H NMR(CD3OD)δ8.38(s，1H)，7.86(d，J＝9.0Hz，1H)，6.42(m，1H)，6.26(s，1H)，3.92(s，3H)，3.51(q，J＝6.8Hz，4H)，1.19(t，J＝7.0Hz，6H)；次要異構體1H NMR(CD3OD)δ7.63(s，1H)，7.34(d，J＝8.6Hz，1H)，6.44(m，1H)，6.28(s，1H)，3.96(s，3H)，3.51(q，J＝7.2Hz，4H)，0.92(t，J＝7.3Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝264.2(兩個異構體共同洗脫出)。
實施例1201-(3-氰基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4001)根據GP3，應用3-氰基苯甲醛(2.0mmol，260mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4001)(250mg，56％)。1H NMR(CD3OD)δ8.26(t，J＝1.5Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.07(m，1H)，7.77(m，1H)，7.62(t，J＝7.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝188.1。
實施例1211-[(4-(三氟甲基)苯亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(4002)根據GP3，應用4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，250mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4002)(400mg，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.23(s，1H)，8.01(br.d，J＝8.2Hz，2H)，7.72(br.d，J＝8.3Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝231.1。
實施例1221-(2，4-二甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4003)根據GP3，應用2，4-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，332mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4003)(300mg，58％)。1H NMR(CD3OD)δ8.39(s，1H)，7.95(m，1H)，6.59(m，2H)，3.87(s，3H)，3.85(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝223.1。
實施例1231-(2，3-二甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4004)根據GP3，應用2，3-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，332mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4004)(370mg，72％)。1H NMR(CD3OD)δ8.45(s，1H)，7.62(m，1H)，7.11(m，2H)，3.88(s，3H)，3.87(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝223.1。
實施例1241-(4-乙氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4005)根據GP3，應用4-乙氧基苯甲醛(2.0mmol，300mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4005)(290mg，60％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.71(m，2H)，6.96(m，2H)，4.08(q，J＝7.0Hz，2H)，1.40(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝207.2。
實施例1251-(4-正-丙氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4006)根據GP3，應用4-正-丙氧基苯甲醛(2.0mmol，328mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4006)(250mg，49％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.72(m，2H)，6.96(m，2H)，3.99(t，J＝6.5Hz，2H)，1.80(dt，J＝7.4，6.7Hz，2H)，1.05(t，J＝7.4Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝221.1。
實施例1261-(2，3，6-三氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4007)根據GP3，應用2，3，6-三氯苯甲醛(2.0mmol，209mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4007)(470mg，78％)。1H NMR(CD3OD)δ8.20(s，1H)，7.81(d，J＝7.8Hz，1H)，7.68(d，J＝7.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝265.0。
實施例1271-(4-氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4008)根據GP3，應用4-氯苯甲醛(2.0mmol，281mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4008)(380mg，82％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.79(m，2H)，7.44(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝197.1。
實施例1281-(5-溴-2-氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4009)根據GP3，應用5-溴-2-氟苯甲醛(2.0mmol，406mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4009)(410mg，69％)。1H NMR(CD3OD)δ8.34(dd，J＝6.5，2.6Hz，1H)，8.30(s，1H)，7.60(ddd，J＝8.8，4.7，2.6，1H)，7.15(dd，J＝10.2Hz，J＝8.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝259.0。
實施例1291-(2-溴-5-氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4010)根據GP3，應用2-溴-5-氟苯甲醛(2.0mmol，406mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4010)(450mg，76％)。1H NMR(CD3OD)δ8.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.98(dd，J＝9.8，3.1Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.9，5.2Hz，1H)，7.15(ddd，J＝8.9，7.93.1，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝259.0。
實施例1301-(3-氯苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4011)根據GP3，應用3-氯苯甲醛(2.0mmol，281mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4011)(370mg，79％)。1H NMR(CD3OD)δ8.11(s，1H)，7.92(s，1H)，7.68(d，J＝6.5Hz，1H)，7.43(m，2H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝197.1。
實施例1311-(3-氟苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4012)根據GP3，應用3-氟苯甲醛(2.0mmol，248mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4012)(230mg，53％)。1H NMR(CD3OD)δ8.14(s，1H)，7.66(d，J＝9.9Hz，1H)，7.55(d，J＝7.6Hz，1H)，7.45(dd，J＝13.8，7.7Hz，1H)，7.17(m，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝181.1。
實施例1321-(2，3，4-三甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4013)根據GP3，應用2，3，4-三甲氧基苯甲醛(2.0mmol，392mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4013)(330mg，57％)。1H NMR(CD3OD)δ8.34(s，1H)，7.78(d，J＝8.9Hz，1H)，6.86(d，J＝9.0Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.90(s，3H)，3.84(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝253.1。
實施例1331-(3，5-二-三氟甲基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4014)根據GP3，應用3，5-二-三氟甲基苯甲醛(2.0mmol，484mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4014)(360mg，54％)。1H NMR(CD3OD)δ8.47(s，2H)，8.30(s，1H)，8.02(s，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝299.0。
實施例1341-(5-溴-2，4-二甲氧基苯亞甲基氨基)胍鹽酸鹽(4015)根據GP3，應用5-溴-2，4-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，490mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)獲得粉末狀的所述標題化合物(4015)(450mg，67％)。1H NMR(CD3OD)δ8.34(s，1H)，8.20(s，1H)，6.69(s，1H)，3.95(s，3H)，3.93(s，3H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝303.0。
實施例1351-[5-(2-(三氟甲基)苯基)-呋喃-2-基)-亞甲基氨基]胍鹽酸鹽(2616)根據GP8，應用5-(2-(三氟甲基)苯基)-2-呋喃醛(2.0mmol，480mg)和氨基胍鹽酸鹽(2.0mmol，220mg)。在所述CombiFlash上應用CF6方法純化所述粗品，獲得淡黃色粉末狀的所述標題化合物(137FB59-8-HCl)(318mg，48％)，兩個異構體混合物的比例為9∶1。主要異構體1H NMR(CD3OD)δ8.07(s，1H)，7.83(d，J＝8.0Hz，1H)，7.78(dd，J＝8.0，0.6Hz，1H)，7.67(t，J＝7.7Hz，1H)，7.54(t，J＝7.6Hz，1H)，7.05(d，J＝3.7Hz，1H)，6.82(d，J＝3.6Hz，1H)；次要異構體1H NMR(CD3OD)δ7.84(d，J＝8.0Hz，1H)，7.79(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(t，J＝7.4Hz，1H)，7.61(t，J＝7.6Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.25(d，J＝3.7Hz，1H)，6.86(d，J＝3.7Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸銨)[M+H]+＝297.3(兩個異構體共同洗脫出)。
化合物的測試實施例136受體選擇和擴增技術分析將所述功能性受體分析、受體選擇及擴增技術(R-SAT)用于研究公知的和新NPFF激動劑的藥理性質。R-SAT公開于美國專利號第5,707,798號、第5,912,132號和第5,955,281號，在此將其全部內容，包括任何附圖作為參考全文引用。
簡而言之，將NIH3T3細胞在96孔的組織培養皿中生長至70-80％匯合。按照制造商的方案，應用Polyfect(Qiagen Inc.)和質粒DNA轉染細胞16-20h。通常用40ng/孔受體和20ng/孔的β-半乳糖苷酶質粒DNA來實施R-SATs。所用過的全部受體和G-蛋白構建體都存在于如先前所述的pSI衍生的哺乳動物表達載體(Promega Inc)中。通過PCR，從精巢cDNA中應用基于所述公開序列(GenBank登錄號AF257210)的寡聚脫氧核苷酸引物擴增所述NPFF受體基因。對于大規模的轉染，將細胞轉染16-20h，然后胰蛋白酶消化并在DMSO中冷凍。隨后將冷凍的細胞解凍，將所述細胞以大約20,000細胞/孔的濃度接種在含有藥物的96半面積孔的平板上。然后利用兩種方法，將細胞在有5％環境CO2的潮濕氣氛中生長五天。隨后將培養基從所述平板中除去，并通過加入所述β-半乳糖苷酶的底物o-硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG，，在含有0.5％NP-40的PBS中)來檢測標記基因的活性。在分光光度平板讀數器中(Titertek Inc.)，在420nm下檢測所得到的比色反應。應用所述計算機程序XLFit(IDBSm)對所有數據進行分析。有效性是與對照化合物(例如，關于NPFF2的NPFF)引起的最大效應相比較的最大效應百分比。pEC50是log(EC50)的負數，其中EC50是以摩爾計算的、產生50％最大效應的濃度。
這些實驗為經過最具有意義的受體，所述NPFF1和NPFF2受體亞型的這些因子中的每一種因子提供了分子特征譜，或指紋圖譜。如表1中所見，相對于NPFF1受體，某些化合物選擇性地激活NPFF2受體。
表1
NA＝在最高劑量測試中未檢測到活性(20μM)NT＝未測試ND＝未測定有效性與內源性配體相關實施例137CCI/熱痛覺過敏在無菌和加熱狀態下，用異氟烷將大鼠麻醉。將左側四頭肌去毛并用碘溶液徹底地清洗。將坐骨神經暴露在坐骨三叉神經遠端的坐骨切跡水平上。在未損傷神經的情況下，將所述坐骨神經非常小心地從下面的肌肉和連接的組織中分離。應用4-0鉻腸線縫合材料，環繞該坐骨神經系四個半松的結，從最接近的水平開始、接著所述坐骨切跡、以大約1mm間隔并終止于接近該坐骨三叉神經。在放大的情況下，將所述結系緊直到在所述動物的左爪或所述神經周圍的肌肉組織處觀察到輕微的顫搐。用4-0絲線縫合材料將肌肉的切口閉合，以及用縫合夾將所述皮膚夾住。密切地觀察所述動物直到其完全地從麻醉中恢復。所述外科手術同樣用于痛覺過敏和異常性疼痛實驗。
對于痛覺過敏試驗，將大鼠放置在透明玻璃上的帶色彩的塑料盒內，其具有透明的玻璃頂部，調節溫度的底部，將溫度維持在31℃±1℃。所述底部包含局部的輻射熱源(鹵素發射燈，CXL/CXP，50W，8v，USHIO，東京)。所述熱源可在所述玻璃下移動，且其具有直徑大約為3mm的輻射光線，該輻射光線可定位在該大鼠后爪的跖面下。
為了開始所述試驗，將大鼠放置在彩色盒內，并允許10-20分鐘以適應新環境。然后將所述輻射熱源定位在后爪的跖面下。所述熱源激活時，同時觸發計時器。后爪反射性運動時，激活運動傳感器，停止所述計時器并失活所述熱源。調整所述熱輻射源使得未損傷動物的平均反應潛伏期不超過20秒。每只大鼠都有兩天的手術前的基線潛伏期測量，在該基線潛伏期中，將左后爪的跖面測量3至4次。在給予所述處理之前和之后，進行兩至三次左側的手術后基線潛伏期的測量。手術后的第2天和第4天產生最大程度的痛覺過敏，因此其可應用于所述分析中。每只動物試驗兩次并且每次試驗至少間隔48小時。
正如縮足反射潛伏期中對熱刺激的減少所證明的，在外科手術處理的左爪中，熱痛覺過敏發展。在手術后處理的第2天至第4天發生最大的痛覺過敏。所述外科手術處理的左側的縮足反射潛伏期經手術后5-12天的過程逐漸地恢復到基線水平。正如12天試驗期中自始至終相似的縮足反射潛伏期所證明的，外科手術未處理的右爪未顯著地受外科手術影響。
每組中的載體給藥沒有改變所述熱痛覺過敏。相反，所述NPFF2選擇性激動劑化合物1劑量依賴性地逆轉了這些外科手術處理的大鼠中的熱痛覺過敏；在10mg/kg劑量水平時達到了統計學顯著性(圖1)。
實施例138CCI/觸覺異常性疼痛在如上所述的相同手術操作后，CCI手術后顯著的機械異常性疼痛發作和持續時間大約為10-14天并維持大約2個月。在該異常性疼痛時幀內，且對于每個特定的異常性疼痛實驗，利用七根yon Frey毛發進行藥物給藥前和給藥后的測量，所述七根von Frey毛發由[log(10*彎曲毛發所需要的力，mg)]指定且范圍是2-26克(#′s 4.31-5.46)。用足夠的力量將每根毛發垂直地壓靠在左側損傷的足底中后爪表面上以引起輕微的彎曲，并持續6-8秒，用最細的標準毛發開始并逐漸達到最粗的毛發。當所受傷的爪急劇撤回時，記錄陽性反應，并通過下一根最粗的標準毛發對相同反應的測試，證實該反應為陽性。只有當觀察到兩次反應時，所述得分被認可。如果達到26克最大限度的力時依然沒有反應，則認為此為異常性疼痛行為峰閾值的中止并記錄所述得分。當手術后的基線測量結果為6克及以下時，認為該動物是異常性疼痛。利用每天發生的一輪周期試驗進行兩天的基線測量。在藥物檢測當天，進行一輪基線測量，利用腹腔內注射給藥進行恰當的預處理并記錄第二輪測量結果。每只動物應用于多重試驗，每次實驗進行一次處理并在每次實驗之間進行適當的消除期。
在第8天開始觀察到顯著的觸覺異常性疼痛，并自始至終地持續到手術后的第35天。在化合物1的給藥后，在這些手術后時間點內實施觸覺響應度的評估。在所述載體處理組中，損傷后預處理得分與基線相比沒有統計學上的顯著性差異。化合物1劑量依賴性地逆轉了這些外科手術處理的大鼠中的觸覺異常性疼痛；在3.0和10.0mg/kg劑量時達到統計學顯著性(圖2)。
實施例139急性熱鎮痛將體重大約為20g-30g的雄性小鼠適應所述的測試儀器。在進行所述實驗當天，將每只小鼠放置在玻璃平臺上的塑料制動器內。將來自所述玻璃平臺下面的熱源集中在距離尾部尖端大約1英寸的位置。開啟所述熱源(IR 45)并逐漸地增強，直到該小鼠搖動其尾遠離該熱源。記錄直到所述小鼠搖動其尾巴的時間量。如果該動物在20秒內未反應，則實驗者關掉所述熱源并記錄其為最大得分。收集一輪的基線測量結果。將測試化合物給藥，并在適當的預處理間隔后，重復所述操作。圖3中顯示了化合物1對急性傷害感受的作用。化合物1在10.0mg/kg劑量時產生顯著的抗傷害感受(圖3)。
實施例140NPFF受體結合分析應用以下試劑、輔助材料和方法，在受體結合分析中可容易地測定本發明所述化合物結合所述NPFF受體的能力1.在24孔培養皿中的合適的生長培養基中生長NPFFS受體轉染的COS細胞(或非內源性表達所述NPFF受體的其它轉染細胞系可以被代替)。
2.通過將245μL的0.25nM[125I]NPFF工作液與5μL以下試劑(每種溶液中一種)混合制備放射標記的分析溶液50μM未標記的NPFF工作液、0.25nM[125I]NPFF工作液、僅HEPES緩沖液或50×測試化合物。
3.應用附加真空源的巴斯德吸管從24孔板中吸出培養基。不洗滌細胞。
4.將來自步驟2的250μL放射標記的分析溶液加入到每個分析孔中，并在室溫(大約22℃)，在定軌搖床上以低速孵育平板60分鐘。
5.用24孔Brandel細胞采集器抽吸所述放射性溶液以終止孵育。用所述細胞采集器，使用0.5mL冰冷的HEPES緩沖液洗滌所述孔三次。
6.用微量移液器從所述孔中抽吸所述溶液，并轉移至12×75-mm聚苯乙烯試管中。用伽瑪計數器(Packard，Cobra II)進行分析。
7.測定特異性結合并計算解離常數Kd。
實施例142其它實驗鞘內給藥的NPFF在52℃水彈尾試驗中的評價大鼠被植入可以使化合物運送到腰部脊索的長期留置的鞘內導管(PE-10；7.5cm)。作為陽性對照，用多個劑量的嗎啡處理大鼠(3、10和30μg)。嗎啡產生劑量相關性抗傷害感受，使得計算的A50為9.8μg(8.1-12.0；95％CI)。NPFF的給藥(100μg)沒有引起抗傷害感受。
鞘內給藥的化合物1045在52℃水彈尾試驗中的評價大鼠被植入可以使化合物運送到腰部脊索的長期留置的鞘內導管(PE-10；7.5cm)。化合物1045的給藥(11.6或115.5μg)沒有引起抗傷害感受。
鞘內給藥的1DME在52℃水彈尾試驗中的評價大鼠被植入可以使化合物運送到腰部脊索的長期留置的鞘內導管(PE-10；7.5cm)。為了排除NPFF未產生抗傷害感受的可能性是由于所述肽的降解，我們對大鼠給藥1DME(穩定的NPFF類似物)。1DME在試驗劑量(5.6、55.6或556.0μg)的給藥沒有引起抗傷害感受全身給藥的dPQR對化合物2616誘導的觸覺異常性疼痛的作用為了證實化合物2616的前傷害性活動是經NPFF1受體介導的，我們實施了藥理學試驗，我們對用化合物2616處理的大鼠給藥dPQR(丹磺酰-脯氨酰-谷氨酰胺酰-精氨酸肽，一種已報道的NPFF拮抗物，由PhoenixPharmaceuticals按客戶要求合成)。在自然大鼠中獲得基線的縮足反射閾值。測試后，所述大鼠接受載體或化合物2616(10mg/kg，腹腔注射)。然后在注射后，對大鼠進行75分鐘的測試，與接受載體的那些大鼠比較，接受化合物2616的大鼠的所述縮足反射閾值顯著地降低。隨后對一半接受化合物2616的大鼠注射載體或dPQR(30mg/kg，腹腔注射)。dPQR的給藥顯著地減弱了由化合物2616引起的觸覺超敏性，這說明該化合物的前傷害性活動是經所述NPFF1受體介導的。
全身給藥的化合物2616在熱板試驗中的評價用載體或10mg/kg化合物2616(腹腔注射)對大鼠進行注射，然后應用所述52℃熱板試驗，評定其對有害熱刺激的靈敏性方面的可能變化。與載體處理的大鼠比較，化合物2616產生顯著降低的所述熱板潛伏期，這表明存在熱痛覺過敏。
腦室內給藥的NPFF在旋轉桶中的評價在化合物3093及化合物3099給藥后(30mg/kg，腹腔注射)，大鼠表顯一種或多種的以下行為固定不動和凝視、運動失調、張開后肢、身體搖擺、躺在一旁且痙攣的肢外展，以及身體扭曲。這些行為通常先于“滾桶”發作。
已報導了NPFF的ICV給藥(60g)引起桶-旋轉反應。(參見Panula，P.，A.A.Aarnisalo和K.Wasowicz，《神經肽FF，具有多重功能的哺乳動物的神經肽》(Neuropeptide FF，a mammalian neuropeptide with multiple)ProgNeurobiol，1996.48(4-5)p.461-87)。鑒于這是唯一提及關于NPFF和桶-旋轉反應的文獻，我們應用植入ICV插管的自然大鼠嘗試重復該結果。簡而言之，在60、120和150μg的NPFF分別ICV給藥后，在三只大鼠中的零只、兩只大鼠中的一只、五只大鼠中的三只中證實了滾桶發作。
實施例143福爾馬林退縮試驗用測試化合物對自然雄性斯普拉-道來氏(Sprague-Dawley)大鼠(175-200g)進行注射，隨后將50μl的5.0％福爾馬林溶液注射進其后爪的背面，然后將大鼠放置在單獨的塑料籠中進行觀察。在福爾馬林注射后，在60分鐘期間內計算疼痛反應的數量(即，縮足/舔足/咬足)。用載體或用10mg/kg(腹腔注射)的嗎啡、化合物3093或化合物3099處理大鼠。化合物是在福爾馬林注射前15分鐘給藥的。在圖4中描述了所述結果。
全身給藥的化合物3099在福爾馬林模型中的評價通過將5.0％福爾馬林溶液(50μl)注射給藥進后爪的背面，然后將大鼠放置在單獨的塑料籠內進行觀察，在大鼠體內創建緊張性疼痛模型。在60分鐘期間內，計數縮足/舔足/咬足。在福爾馬林注射前15分鐘，大鼠接受載體或化合物3099(10mg/kg，腹腔注射)。化合物3099經過階段I時無活性(福爾馬林注射后0-10分鐘)，這表明該NPFF2受體選擇性化合物不是急性鎮痛劑。該發現與我們早先的數據一致。相反，經過階段II(福爾馬林注射后15-60分鐘)時，化合物3099顯著地減弱了(大約67.1％抑制作用)福爾馬林誘導的退縮。該發現表明選擇性的NPFF2受體激動劑在慢性疼痛(即，神經性的和/或炎癥的)狀態下有效。
全身給藥的化合物3093在福爾馬林模型中的評價通過將5.0％福爾馬林溶液(50μl)注射給藥進后爪的背部表面，然后將大鼠放置在單獨的塑料籠內進行觀察，在大鼠體內創建緊張性疼痛模型。在60分鐘期間內，計數縮足/舔足/咬足。在福爾馬林注射前15分鐘，大鼠接受載體或化合物3093(10mg/kg，腹腔注射)。化合物3093經過階段I時無活性(福爾馬林注射后0-10分鐘)，這表明該NPFF2受體選擇性化合物不是急性鎮痛劑。該發現與我們早先的數據一致。相反，經過階段II(福爾馬林注射后15-60分鐘)時，化合物3093顯著地減弱了(大約62.1％抑制作用)福爾馬林誘導的退縮。該發現表明選擇性的NPFF2受體激動劑在慢性疼痛(即，神經性的和/或炎癥的)情況下有效。
實施例144角叉藻聚糖誘導的熱痛覺過敏使用自然雄性斯普拉-道來氏(Sprague-Dawley)大鼠(175-200g)來評價其對有害的熱刺激的反應性。應用所述熱板試驗測定反應潛伏期。將大鼠放置在恒溫控制金屬板上的有機玻璃箱內，該恒溫控制金屬板維持在52℃。時間流逝直到所述動物表現了明顯的疼痛反應(即，跳躍、舔、跺腳、抬起后爪)時測定該時間。測試后，通過將100μl的2％λ-角叉藻聚糖離子注射進后爪內，創建急性炎癥疼痛的動物模型。在注射角叉藻聚糖三小時后，再次獲得熱板潛伏期。所述熱板潛伏期的顯著減少解釋為存在熱痛覺過敏。用化合物或載體對大鼠進行注射，然后在藥物給藥后在不同的時間點進行試驗。數據通過所述公式轉換為最大可能作用百分比(％MPE)，％MPE＝((試驗的-炎癥疼痛后的)/(自然的-炎癥疼痛后的))*100，其中所述試驗得分是化合物給藥后獲得的所述熱板潛伏期，所述炎癥疼痛后得分是角叉藻聚糖注射后3小時獲得的平均反應，且自然的得分是處理前獲得的平均反應。另外，在測試后測量爪的厚度(用千分尺)以量化水腫。雖然所測試的化合物一個也沒有逆轉角叉藻聚糖誘導的水腫形成(數據未顯示)，但是這些化合物產生了角叉藻聚糖誘導的熱痛覺過敏劑量相關性逆轉。在圖5中顯示所述結果。
全身給藥的化合物1045在角叉藻聚糖模型中的評價用100μl的2％角叉藻聚糖或載體(dH2O)對大鼠進行注射(經爪注射)以產生急性炎癥疼痛狀態。在角叉藻聚糖給藥而不是載體給藥后3小時，給藥的大鼠表顯出了對有害熱刺激的敏感性顯著增加(即，減少所述熱板潛伏期)。然后用不同劑量的化合物1045處理大鼠(1、3和10mg/kg，腹腔注射)，并在三小時期間內，測試熱板潛伏期。在所述角叉藻聚糖處理的大鼠中，化合物1045產生了熱痛覺過敏劑量相關性逆轉。該化合物完成57.6％最大效力，其計算的A50為7.8mg/kg(3.9-16.0；95％CI)。化合物1045對載體處理的大鼠的給藥并未顯著改變其對有害熱刺激的敏感性，即不鎮痛。該化合物也并未顯著改變由角叉藻聚糖產生的后爪中的水腫形成。
另外，在化合物1045的鹽酸鹽的給藥后(10mg/kg，腹腔注射)，大鼠表現扭體行為和出現昏睡。這些效應維持了15-20分鐘。這些效應在接受小于10mg/kg的劑量的大鼠中未觀察到。
全身給藥的化合物3093在角叉藻聚糖模型中的評價用100μl的2％角叉藻聚糖或載體(dH2O)對大鼠進行注射(經爪注射)以產生急性炎癥疼痛狀態。在角叉藻聚糖給藥而不是載體給藥后3小時后，大鼠表顯出了對有害熱刺激的敏感性顯著增加(即，減少所述熱板潛伏期)。然后用不同劑量的化合物3093處理大鼠(1、3和10mg/kg，腹腔注射)，并在三小時期間內，測試熱板潛伏期。化合物3093產生了由2％角叉藻聚糖誘導的熱痛覺過敏劑量的相關性逆轉。在給藥后30-60分鐘時，觀察到化合物3093的峰效應，且其計算的A50為1.6mg(1.1-2.3；95％CI)。化合物3093(10mg/kg)并未顯著改變載體處理的大鼠的所述熱板潛伏期。
全身給藥的化合物3099在角叉藻聚糖模型中的評價用100μl的2％角叉藻聚糖或載體(dH2O)對大鼠進行注射(經爪注射)以產生急性炎癥疼痛狀態。在角叉藻聚糖給藥而不是載體給藥后3小時后，大鼠表顯出了對有害熱刺激的敏感性顯著增加(即，減少所述熱板潛伏期)。然后用不同劑量的化合物3099處理大鼠(1、3和10mg/kg，腹腔注射)，并在三小時期間內，測試熱板潛伏期。化合物3099產生了由2％角叉藻聚糖誘導的熱痛覺過敏劑量的相關性逆轉。在給藥后30-60分鐘時，觀察到化合物3099的峰效應，且其計算的A50為1.1mg(0.7-1.6；95％CI)。化合物3099(10mg/kg)并未顯著改變載體處理的大鼠的所述熱板潛伏期。
實施例145L5/L6SNL誘導的觸覺異常性疼痛由Kim和Chung開發了神經痛模型(參見Kim SH，Chung JM.，“在大鼠中通過分段的脊神經結扎產生外周神經病的實驗模型”(Anexperimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinalnerve ligation in the rat)Pain，1992Sep；50(3)355-63)。該模型要求結扎位于脊索和坐骨神經內進入點之間的L5和L6脊神經。在SNL手術七至十四天后，再評價大鼠對機械刺激的效應閾值。為了評價縮足反射閾值，將大鼠在有機玻璃箱內放置大約20分鐘以適應新環境。將一系列的校準的von Frey發絲(1.56-15.0g，具有對數間隔的)應用于受傷后爪的足底面直到引起反應。根據先前所述方法測定縮足反射閾值(參見Chaplan SR，Bach FW，Pogrel JW，Chung JM，Yaksh TL.，“定量評價大鼠足中的觸覺異常性疼痛”JNeurosci Methods，1994Jul，53(1)55-63)。在手術前，然后化合物給藥后在多重時間點前和多重時間點上，以最接近0.1g測定縮足反射閾值。所述縮足反射閾值的顯著減少解釋為存在觸覺異常性疼痛。在圖6中顯示所述結果。
這些數據表明所述選擇性FF2受體激動劑(例如化合物3093和3099)劑量依賴性地逆轉了由L5和L6脊神經結扎誘導的觸覺異常性疼痛。此外，對FF1受體具有較大活性的化合物(例如化合物1045和2616)表現了極低的有效性或加強了觸覺異常性疼痛。化合物2616在模擬手術的大鼠中也產生觸覺異常性疼痛。在圖7中顯示所述結果。
為了研究外周神經損傷后所述NPFF系統的內源活性，在神經痛模型中評定了FF1受體拮抗劑dPQR的活性。在該模型中，位于脊索和坐骨神經內進入點之間的L5和L6脊神經被結扎(Kim和Chung，1992)。在SNL手術七至十四天后，再評價大鼠對機械刺激的效應閾值。為了評價縮足反射閾值，將大鼠在有機玻璃箱內放置大約20分鐘以適應新環境。將一系列校準的von Frey發絲(1.56-15.0g，具有對數間隔的)應用于受傷后爪的足底面直到引起反應。根據先前所述方法測定縮足反射閾值(Chaplan et al.，1994)。在手術前，然后化合物給藥后在多重時間點前和多重時間點上，以最接近0.1g測定縮足反射閾值。所述縮足反射閾值的顯著減少解釋為存在觸覺異常性疼痛。在圖8中顯示所述結果。
dPQR的給藥產生了L5/L6SNL誘導的觸覺異常性疼痛劑量依賴性逆轉。這些數據說明外周神經損傷后，可能存在脊髓上的FF1受體激活的不恰當水平，這可能加速神經痛。
根據所述文獻，NPFF的脊柱給藥引起急性抗傷害性疼痛。但是，在ICV給藥后，NPFF導致前傷害性疼痛。已證實FF2受體位于腦和脊髓中，而FF1受體位于腦中但不位于脊髓中。綜上所述，這些數據顯示NPFF的前傷害性疼痛行為是經脊髓上的FF1受體介導的。
因此，第一次證實了選擇性的FF2受體激動劑(例如化合物3093和3099)有效地針對炎性痛覺過敏和神經損傷誘導的異常性疼痛。另外，還顯示出當本發明公開的所述化合物對所述FF1受體的活性增加時，其對疼痛的緩解作用降低。此外，本發明公開的諸如化合物2616的所述FF1激動劑的給藥導致對無害觸覺刺激的敏感性(即，觸覺異常性疼痛)增加。通過用所述FF1拮抗劑dPQR的處理完全阻滯了所增加的敏感性。這些數據第一次為脊髓上的FF1和FF2受體的相反作用提供了直接證據。
廣泛地的認為神經肽在CNS中的作用是對內源性系統進行調控。認為NPFF調節痛覺，因此，在正常情況下，FF1和FF2受體間的相反作用可能負責設置基線感覺閾。在此顯示出內源性的NPFF性的系統逐漸變得有效，這使得在關鍵位點的FF1受體活性增強。所增加的FF1受體激活作用在行為上顯示為異常疼痛狀態。該結論由實驗支持，該實驗在自然大鼠體內外源性地給藥FF1激動劑，化合物2616。通過以下實驗在概念上提供了另外的支持應用dPQR(FF1拮抗劑)阻斷內源性FF1受體活動，這導致感覺閾的正常化。
此外，FF1拮抗劑和FF2激動劑的組合以協同作用方式阻斷慢性疼痛。因為a)外周神經損傷后，脊髓上的FF1受體出現活性增加；b)脊髓上的FF1受體對抗脊髓上的FF2受體的活動以及c)觸覺異常性疼痛是經脊髓機制介導的，脊髓上FF1受體的阻斷允許FF2受體無競爭的活性不被屏蔽。
全身給藥的化合物1045在SNL模型中的評價通過所述L5和L6脊神經的緊緊結扎在大鼠體內創建神經性疼痛模型。手術后7-14天，接受SNL，但不是模擬手術的大鼠顯示出對無害機械刺激的敏感性顯著增加(即縮足反射閾值的減少)。然后用不同劑量的化合物1045(1、3和10mg/kg，腹腔注射)處理大鼠，并在2小時期間內，測試縮足反射閾值。化合物1045在所述SNL大鼠體內產生觸覺異常性疼痛劑量相關性逆轉。該化合物完成37.9％最大效應。化合物1045對模擬手術的大鼠的給藥并未顯著改變對無害機械刺激的敏感性。
此外，在化合物1045的給藥(10mg/kg，腹腔注射)后，大鼠表現扭體行為和出現昏睡。這些效果持續15-20分鐘，并且模擬手術的大鼠和SNL大鼠都顯示出所述效果。在接受小于10mg/kg劑量的大鼠中未觀察到這些效果。
全身給藥的化合物1045(30mg/kg)在SNL模型中的評價為了增加化合物1045在所述SNL模型中的效力，我們對SNL大鼠以30mg/kg劑量給藥。化合物1045的給藥最初在30分鐘時間點時有效，但是經過60分鐘及直到所述測試終點，該化合物具有顯著減少的所述縮足反射閾值，其水平低于在SNL載體處理的大鼠中獲得的水平，這說明觸覺異常性疼痛增強。
另外，在30mg/kg化合物1045給藥后，記錄到與接受10mg/kg大鼠中觀察到的相似的副作用。但是，這些作用較強且有較長的持續時間(60-90分鐘)。記錄新副作用的數量，該新副作用包括上瞼下垂、拖著腳走/跺腳及咬前肢和后肢。
全身給藥的化合物2616在SNL模型中的評價通過所述L5和L6脊神經的緊緊結扎在大鼠體內創建神經性疼痛模型。手術后7-14天，接受脊神經結扎手術(SNL)，但不是模擬手術的大鼠顯示出對無害機械刺激的敏感性顯著增加(即縮足反射閾值的減少)。然后用不同劑量的化合物2616(1、3和10mg/kg，腹腔注射)處理大鼠，并在2.5小時期間內，測試縮足反射閾值。化合物2616在所述SNL大鼠體內產生觸覺異常性疼痛的劑量相關性逆轉。此外，10mg/kg的該化合物顯著減少模擬手術大鼠的縮足反射閾值。
此外，在化合物2616的給藥(10mg/kg，腹腔注射)后，大鼠表現扭體行為和出現昏睡。這些效果持續60-90分鐘，并且模擬手術大鼠和SNL大鼠都顯示出所述效果。在接受小于10mg/kg劑量的大鼠中未觀察到這些效果。
全身給藥的dPQR在SNL模型中的作用通過所述L5和L6脊神經的緊緊結扎在大鼠體內創建神經性疼痛模型。手術后7-14天，接受脊神經結扎手術(SNL)，但不是模擬手術的大鼠顯示出對無害機械刺激的敏感性顯著增加(即縮足反射閾值的減少)。然后用不同劑量的化合物dPQR(3、10和30mg/kg，腹腔注射)處理大鼠，并在3小時期間內測試縮足反射閾值。dPQR的給藥導致所述SNL大鼠體內觸覺異常性疼痛劑量相關性逆轉。該化合物完成76.7％最大效力，且計算的A50為12.3mg(8.0-18.9；95％CI)。dPQR對模擬手術大鼠的給藥(30mg/kg，腹腔注射)不顯著改變對無害機械刺激的敏感性。在任何接受dPQR的大鼠中未觀察到明顯的不良副作用。
全身給藥的化合物3099在SNL模型中的評價通過所述L5和L6脊神經的緊緊結扎在大鼠體內創建神經性疼痛模型。手術后7-14天，接受脊神經結扎手術(SNL)，但不是模擬手術的大鼠顯示出對無害機械刺激的敏感性顯著增加(即縮足反射閾值的減少)。然后用不同劑量的化合物3099(1、3和10mg/kg，腹腔注射)處理大鼠，并在3小時期間內測試縮足反射閾值。選擇性的NPFF2受體激動劑，化合物3099產生L5/L6SNL誘導的觸覺異常性疼痛劑量相關性逆轉。在給藥后30分鐘觀察到化合物3099的峰效應，且所計算的A50為4.1mg(3.0-5.5；95％CI)。在接受的10mg/kg大鼠中只注意到上瞼下垂和昏睡的副作用。
全身給藥的化合物3093在SNL模型中的評價通過所述L5和L6脊神經的緊緊結扎在大鼠體內創建神經性疼痛模型。手術后7-14天，接受脊神經結扎手術(SNL)，但不是模擬手術的大鼠顯示出對無害機械刺激的敏感性顯著增加(即縮足反射閾值的減少)。然后用不同劑量的化合物3093(1、3、10和30mg/kg，腹腔注射)處理大鼠，并在3小時期間內測試縮足反射閾值。選擇性的NPFF2受體激動劑，化合物3093產生L5/L6SNL誘導的觸覺異常性疼痛劑量相關性逆轉。在給藥后30分鐘觀察到化合物3093的峰效應，且所計算的A50為6.2mg(4.5-8.1；95％CI)。
全身給藥的化合物3099(30mg/kg)在SNL模型中的評價為了增加化合物3099在所述SNL模型中的效力，我們對SNL大鼠以30mg/kg劑量給藥(腹腔注射)。雖然在逆轉SNL誘導的觸覺異常性疼痛中有近乎完全的有效性，化合物3099(30mg/kg，i.p.)也產生與所報導的化合物3099的作用相似的作用。特異地，大鼠表現出一種或多種以下行為固定不動和凝視、運動失調、張開后肢、身體搖擺、躺在一旁且痙攣的肢外展，以及身體扭曲。此外，這些行為是偶然的，及其不干擾所述行為的測定。另外，這些行為也是暫時的，因此，通過測定期的結束，出現的這些效果已解決。
口服給藥的化合物3099在SNL模型中的評價通過所述L5和L6脊神經的緊緊結扎在大鼠體內創建神經性疼痛模型。手術后14-28天，接受脊神經結扎手術(SNL)，但不是模擬手術的大鼠顯示出對無害機械刺激的敏感性顯著增加(即縮足反射閾值的減少)。然后用不同劑量的化合物3099(6、60和200mg/kg，p.o.)處理大鼠，并在3小時期間內測試縮足反射閾值。選擇性的NPFF2受體激動劑，化合物3099產生L5/L6SNL誘導的觸覺異常性疼痛劑量相關性逆轉。在給藥后60-90分鐘時觀察到化合物3099的峰效應，且所計算的A50為50.5mg(22.1-115.5；95％CI)。
實施例146cAMP分析利用用一種基因轉染的大多數細胞可同時用其它基因轉染的事實，在瞬時轉染的細胞中建立了測定cAMP的分析。因此，所述NPFF1和NPFF2受體與Gs-軛合受體(EP2)一起以5∶1的比例被轉染。在未轉染的HEK-T細胞中，在10μM的高劑量時沒有對PGE2(對EP2的激動劑)的反應。在大約300nM時用PGE2常規地刺激所述細胞，該300nM是PGE2在EP2受體的EC50值(170nM)的兩倍。在某些情況下，當用AC5以1/2-1/5的所研究的Gi-軛合受體的DNA量共轉染細胞時，也檢測到所述分析的靈敏度的改進。
該裝置常規地用于利用NPFF1和NPFF2受體對HEK-T細胞的轉染。48小時后，在白色底板中，在不同濃度的所述NPFF配體和300Nm EP2的存在下，應用DiscoveRx分析方案和利用混懸液中轉染的細胞建立所述cAMP分析。在37℃下細胞孵育15分鐘。在孵育結束后，將細胞溶解并按照DiscoveRx方案實施所述分析的剩余部分。
對于拮抗劑分析，在按順序加入激動劑然后加入PGE2之前，在37℃下用拮抗劑將所述細胞預孵育15分鐘。在37℃下將細胞再孵育15分鐘后，隨后將所述細胞溶解并按照試劑盒方案處理。
如實施例136中所描述的進行R-SAT分析。
所述結果如以下表2中所示。單一化合物的多重條目表示不同的試驗批次。
表2
序列表<110>奧德拉·L·斯庫利羅伯特·E·戴維斯金伯利·E·瓦努韋爾路易斯·羅伯托·加德爾耶爾韋和·拉梅赫尼古拉斯·邁克爾·凱利法布里奧·貝爾托齊<120>用神經肽FF受體2激動劑治療神經痛<130>ACADIA.038VPC<150>60/508,008<151>2003-10-02<150>60/506,130<151>2003-09-25<160>2<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>1560<212>DNA<213>Homo sapiens<400>1tgcctctgcc cacctcttct cttctgcttc catattacag gttcatcatg aatgagaaat 60gggacacaaa ctcttcagaa aactggcatc ccatctggaa tgtcaatgac acaaagcatc 120atctgtactc agatattaat attacctatg tgaactacta tcttcaccag cctcaagtgg 180cagcaatctt cattatttcc tactttctga tcttcttttt gtgcatgatg ggaaatactg 240tggtttgctt tattgtaatg aggaacaaac atatgcacac agtcactaat ctcttcatct 300taaacctggc cataagtgat ttactagttg gcatattctg catgcctata acactgctgg 360acaatattat agcaggatgg ccatttggaa acacgatgtg caagatcagt ggattggtcc 420agggaatatc tgtcgcagct tcagtcttta cgttagttgc aattgctgta gataggttcc 480agtgtgtggt ctaccctttt aaaccaaagc tcactatcaa gacagcgttt gtcattatta 540tgatcatctg ggtcctagcc atcaccatta tgtctccatc tgcagtaatg ttacatgtgc 600aagaagaaaa atattaccga gtgagactca actcccagaa taaaaccagt ccagtctact 660
ggtgccggga agactggcca aatcaggaaa tgaggaagat ctacaccact gtgctgtttg 720ccaacatcta cctggctccc ctctccctca ttgtcatcat gtatggaagg attggaattt 780cactcttcag ggctgcagtt cctcacacag gcaggaagaa ccaggagcag tggcacgtgg 840tgtccaggaa gaagcagaag atcattaaga tgctcctgat tgtggccctg ctttttattc 900tctcatggct gcccctgtgg actctaatga tgctctcaga ctacgctgac ctttctccaa 960atgaactgca gatcatcaac atctacatct acccttttgc acactggctg gcattcggca 1020acagcagtgt caatcccatc atttatggtt tcttcaacga gaatttccgc cgtggtttcc 1080aagaagcttt ccagctccag ctctgccaaa aaagagcaaa gcctatggaa gcttatgccc 1140taaaagctaa aagccatgtg ctcataaaca catctaatca gcttgtccag gaatctacat 1200ttcaaaaccc tcatggggaa accttgcttt ataggaaaag tgctgaaaaa ccccaacagg 1260aattagtgat ggaagaatta aaagaaacta ctaacagcag tgagatttaa aaagagctag 1320tgtgataatc ctaactctac tacgcattat atatttaaat ccattgcttt ttgtggcttt 1380gcacttcaaa tttttcaaag aatgttctaa ataaaacatt tactgaaagc cctctctggc 1440aaaaaaatta aaaataaaca aaaatggtca taagatcata aacaatctta tgttgtataa 1500aaatacgtag agtgacttag acatgtttgc atgaataaat atatttctag agaacagtta 1560<210>2<211>420<212>蛋白質<213>H0mo sapiens<400>2Met Asn Glu Lys Trp Asp Thr Asn Ser Ser Glu Asn Trp His Pro Ile1 5 10 15Trp Asn Val Asn Asp Thr Lys His His Leu Tyr Ser Asp Ile Asn Ile20 25 30Thr Tyr Val Asn Tyr Tyr Leu His Gln Pro Gln Val Ala Ala Ile Phe35 40 45Ile Ile Ser Tyr Phe Leu Ile Phe Phe Leu Cys Met Met Gly Asn Thr50 55 60Val Val Cys Phe Ile Val Met Arg Asn Lys His Met His Thr Val Thr65 70 75 80Asn Leu Phe Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ser Asp Leu Leu Val Gly Ile85 90 95Phe Cys Met Pro Ile Thr Leu Leu Asp Asn Ile Ile Ala Gly Trp Pro100 105 110Phe Gly Asn Thr Met Cys Lys Ile Ser Gly Leu Val Gln Gly Ile Ser115 120 125Val Ala Ala Ser Val Phe Thr Leu Val Ala Ile Ala Val Asp Arg Phe130 135 140Gln Cys Val Val Tyr Pro Phe Lys Pro Lys Leu Thr Ile Lys Thr Ala145 150 155 160Phe Val Ile Ile Met Ile Ile Trp Val Leu Ala Ile Thr Ile Met Ser
165 170 175Pro Ser Ala Val Met Leu His Val Gln Glu Glu Lys Tyr Tyr Arg Val180 185 190Arg Leu Asn Ser Gln Asn Lys Thr Ser Pro Val Tyr Trp Cys Arg Glu195 200 205Asp Trp Pro Asn Gln Glu Met Arg Lys Ile Tyr Thr Thr Val Leu Phe210 215 220Ala Asn Ile Tyr Leu Ala Pro Leu Ser Leu Ile Val Ile Met Tyr Gly225 230 235 240Arg Ile Gly Ile Ser Leu Phe Arg Ala Ala Val Pro His Thr Gly Arg245 250 255Lys Asn Gln Glu Gln Trp His Val Val Ser Arg Lys Lys Gln Lys Ile260 265 270Ile Lys Met Leu Leu Ile Val Ala Leu Leu Phe Ile Leu Ser Trp Leu275 280 285Pro Leu Trp Thr Leu Met Met Leu Ser Asp Tyr Ala Asp Leu Ser Pro290 295 300Asn Glu Leu Gln Ile Ile Asn Ile Tyr Ile Tyr Pro Phe Ala His Trp305 310 315 320Leu Ala Phe Gly Asn Ser Ser Val Asn Pro Ile Ile Tyr Gly Phe Phe325 330 335Asn Glu Asn Phe Arg Arg Gly Phe Gln Glu Ala Phe Gln Leu Gln Leu340 345 350Cys Gln Lys Arg Ala Lys Pro Met Glu Ala Tyr Ala Leu Lys Ala Lys355 360 365Ser His Val Leu Ile Asn Thr Ser Asn Gln Leu Val Gln Glu Ser Thr370 375 380Phe Gln Asn Pro His Gly Glu Thr Leu Leu Tyr Arg Lys Ser Ala Glu385 390 395 400Lys Pro Gln Gln Glu Leu Val Met Glu Glu Leu Lys Glu Thr Thr Asn405 410 415Ser Ser Glu Ile420
權利要求
1.鑒定有效治療疼痛的化合物的方法，包括將所述化合物與NPFF2受體接觸，并測定所述化合物是否與所述NPFF2受體結合。
2.篩選能夠影響NPFF2受體的一種或多種活性的化合物的方法，包括如下步驟a)將重組細胞與測試化合物接觸，其中所述重組細胞包含表達所述NPFF2受體的重組核酸，假定所述細胞沒有來自內源核酸的功能性NPFF2受體表達；及b)測定所述測試化合物影響所述NPFF2受體的一種或多種活性的能力，并將所述能力與所述測試化合物對不含所述重組核酸的細胞中的所述一種或多種NPFF2受體活性的影響能力進行比較；其中，所述重組核酸包括NPFF2受體核酸，所述NPFF2受體核酸選自a)SEQ ID No1的核酸，b)編碼氨基酸SEQ ID No2的核酸，c)上述核酸的衍生物，其編碼所述NPFF2受體，其中所述衍生物編碼具有所述NPFF2受體的一種或多種活性的受體，并且含有至少20個連續核苷酸，且所述至少20個連續核苷酸能在嚴格的雜交條件下與SEQ ID No1的至少20個連續核苷酸的互補體雜交。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述NPFF2受體核酸編碼SEQID No2衍生物的氨基酸序列，所述NPFF2受體核酸包含至少20個連續核苷酸，且所述至少20個連續核苷酸能在嚴格的雜交條件下與編碼SEQ ID No2氨基酸序列的至少20個連續核苷酸的互補體雜交。
4.治療任何類型的急性和慢性疼痛的方法，該方法包括將有機體與有效量的至少一種化合物接觸，其中所述化合物激活NPFF2受體亞型。
5.如權利要求4所述的方法，其中所述疼痛與糖尿病，病毒感染，腸應激綜合征，截肢，癌癥或化學傷害有關。
6.鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括將所述NPFF2受體與至少一種測試化合物接觸；及測定所述NPFF2受體活性水平的任何升高，從而鑒定檢測化合物是所述NPFF2受體激動劑。
7.如權利要求6所述的方法，其中所鑒定的激動劑激活所述NPFF2受體而不是NPFF1受體。
8.如權利要求6所述的方法，其中所鑒定的激動劑對所述NPFF2受體具有選擇性。
9.鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括培養表達所述NPFF2受體的細胞；將所述細胞或從所述細胞提取的成分與至少一種測試化合物孵育；及測定所述NPFF2受體活性的任何升高，從而鑒定檢測化合物是所述NPFF2受體激動劑。
10.如權利要求7所述的方法，其中所述培養步驟中的細胞過量表達所述NPFF2受體。
11.治療疼痛的方法，包括將遭受疼痛的個體與有效量的至少一種通式I或通式II化合物接觸；從而減輕所述疼痛的一種或多種癥狀；其中所述通式I或通式II化合物具有如下結構 或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥，其中R1選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一個都獨立地選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，取代或未取代的芳基或雜芳基，羥基，鹵代醚，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每個R7獨立地選自氫，任意被芳基或雜芳基取代的C1-C10直鏈或支鏈烷基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈烯基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，C5-C10環烯基，芳基和雜芳基；或R2和R3及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R3和R4及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R4和R5及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R5和R6及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；且Q選自芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環。
12.如權利要求1所述的方法，還包括在所述接觸步驟前鑒定需要疼痛治療的個體的步驟。
13.如權利要求11所述的方法，其中所述通式I或通式II化合物選擇性地激活所述NPFF2受體亞型。
14.如權利要求11所述的方法，其中所述疼痛與糖尿病，病毒感染，腸應激綜合征，截肢，癌癥或化學傷害有關。
15.如權利要求11所述的方法，其中所述疼痛是神經痛。
16.如權利要求15所述的方法，其中所述個體表現出痛覺過敏。
17.如權利要求15所述的方法，其中所述個體表現出異常性疼痛。
18.鑒定緩解個體的痛覺過敏或異常性疼痛的化合物的方法，包括向遭受痛覺過敏或異常性疼痛的個體供給至少一種通式I或通式II化合物；及測定所述至少一種化合物是否減輕了所述個體的痛覺過敏或異常性疼痛；其中所述通式I或通式II化合物具有如下結構 或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥，其中R1選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一個都獨立地選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基，取代或未取代的芳基或雜芳基，羥基，鹵代醚，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每個R7獨立地選自氫，任意被芳基或雜芳基取代的C1-C10直鏈或支鏈烷基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈烯基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，C5-C10環烯基，芳基和雜芳基；或R2和R3及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R3和R4及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R4和R5及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R5和R6及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；且Q選自芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環。
19.如權利要求18所述的方法，還包括在所述供給步驟前鑒定遭受痛覺過敏或異常性疼痛的個體的步驟。
20.如權利要求18所述的方法，其中所述至少一種化合物對所述NPFF2受體而不是NPFF1受體具有選擇性。
21.如權利要求18所述的方法，其中所述痛覺過敏是熱痛覺過敏。
22.如權利要求18所述的方法，其中所述異常性疼痛是觸覺異常性疼痛。
23.鑒定通式I或通式II化合物是所述NPFF2受體激動劑的方法，所述方法包括將NPFF2受體與至少一種通式I或通式II化合物接觸；及測定所述NPFF2受體活性水平的任何升高，從而鑒定通式I或通式II化合物是所述NPFF2受體激動劑；其中所述通式I或通式II化合物具有如下結構 或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥，其中R1選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一個都獨立地選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基，取代或未取代的芳基或雜芳基，羥基，鹵代醚，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烷，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每個R7獨立地選自氫，任意被芳基或雜芳基取代的C1-C10直鏈或支鏈烷基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈烯基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，C5-C10環烯基，芳基和雜芳基；或R2和R3及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R3和R4及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R4和R5及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R5和R6及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；且Q選自芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環。
24.鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括培養表達所述NPFF2受體的細胞；將所述細胞與至少一種通式I或通式II化合物孵育；及測定所述NPFF2受體活性的任何升高，從而鑒定通式I或通式II化合物是所述NPFF2受體激動劑；其中所述通式I或通式II化合物具有如下結構 或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥，其中R1選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一個都獨立地選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基，取代或未取代的芳基或雜芳基，羥基，鹵代醚，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每個R7獨立地選自氫，任意被芳基或雜芳基取代的C1-C10直鏈或支鏈烷基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈烯基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，C5-C10環烯基，芳基和雜芳基；或R2和R3及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R3和R4及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R4和R5及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R5和R6及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；且Q選自芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環。
25.如權利要求24所述的方法，其中所鑒定的激動劑激活所述NPFF2受體而不是NPFF1受體。
26.如權利要求24所述的方法，其中所鑒定的激動劑對所述NPFF2受體具有選擇性。
27.鑒定化合物是的NPFF2受體激動劑的方法，該方法包括將所述NPFF2受體與至少一種通式I或通式II化合物接觸；及測定所述通式I或通式II化合物是否與所述NPFF2受體結合；其中所述通式I或通式II化合物具有如下結構 或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥，其中R1選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一個都獨立地選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基，取代的或未取代的芳基或雜芳基，羥基，鹵代醚，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每個R7獨立地選自氫，任意被芳基或雜芳基取代的C1-C10直鏈或支鏈烷基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈烯基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，C5-C10環烯基，芳基或雜芳基；或R2和R3及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R3和R4及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R4和R5及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R5和R6及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；且Q選自芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環。
28.如權利要求21所述的方法，其中所鑒定的通式I或通式II化合物對所述NPFF2受體具有選擇性。
29.通式I或通式II化合物，或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥， 其中R1選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一個都獨立地選自氫，C1-C10直鏈或支鏈烷基，C2-C10直鏈或支鏈烯基，C2-C10直鏈或支鏈炔基和C3-C10環烷基，取代或未取代的芳基或雜芳基，羥基，鹵代醚，硝基，氨基，鹵素，全鹵代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每個R7獨立地選自氫，任意被芳基或雜芳基取代的C1-C10直鏈或支鏈烷基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈烯基，任意被芳基或雜芳基取代的C2-C10直鏈或支鏈炔基，C3-C10環烷基，C5-C10環烯基，芳基或雜芳基；或R2和R3及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R3和R4及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R4和R5及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；或R5和R6及其所連接的碳形成稠和芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環；且Q選自芳基，雜芳基，C5-C10碳環或雜環。
30.通式III化合物，或其藥物可接受的鹽、酯、酰胺或原藥， 其中Cy1選自芳基，稠和芳基，雜芳基，稠和雜芳基，碳環，環烷基，稠和雜環和雜環；Cy2選自芳基，稠和芳基，雜芳基，稠和雜芳基，碳環，環烷基，稠和雜環和雜環；R8和R9分別出現0至6次，并獨立地選自氫，任意取代的C1-C8直鏈或支鏈烷基，任意取代的C2-C8直鏈或支鏈烯基，任意取代的C2-C8直鏈或支鏈炔基，任意取代的C3-C8環烷基，任意取代的碳環，任意取代的芳基，任意取代的稠和芳基，任意取代的雜芳基，任意取代的稠和雜芳基，任意取代的雜環基，任意取代的稠合雜環基，鹵代烷基，鹵素，-CN，-NO2，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-S(＝O)R7，-N(R7)-S(＝O)2R7，-OR7，-OC(＝Z)R7，-SO3H，-S(＝O)2N(R7)2，-S(＝O)N(R7)2，-S(＝O)2R7，-S(＝O)R7和-SR7，其中Z是氧或硫；且其中每個R7的定義如上所述；R10選自氫，任意取代的C1-C8直鏈或支鏈烷基，任意取代的C2-C8直鏈或支鏈烯基，任意取代的C2-C8直鏈或支鏈炔基，C3-C8環烷基，任意取代的芳基，任意取代的稠和芳基，任意取代的雜芳基，任意取代的稠和雜芳基，任意取代的雜環基，任意取代的稠合雜環基，X或者不存在，或者選自氧，硫，NR7，任意取代的亞乙基，雙亞乙基，其中R7的定義如上所述。
31.治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與所述NPFF1受體拮抗劑接觸，其中所述拮抗劑是通式I，通式II或通式III化合物。
32.治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與所述NPFF1受體的較弱的部分激動劑接觸，其中所述較弱的部分激動劑是通式I，通式II或通式III化合物。
33.治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體和作為NPFF1受體的拮抗劑或部分激動劑的通式I，通式II或通式III化合物與作為NPFF2受體的完全激動劑或部分激動劑的其他通式I，通式II或通式III化合物的組合物接觸。
34.治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與通式I，通式II或通式III化合物接觸，其中所述化合物同時作為NPFF2激動劑和NPFF1拮抗劑。
35.治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與通式I，通式II或通式III化合物接觸，其中所述化合物同時作為NPFF2部分激動劑和NPFF1拮抗劑。
36.治療個體的神經痛或炎癥疼痛的方法，包括將所述個體與通式I，通式II或通式III化合物接觸，其中所述化合物同時作為NPFF2部分激動劑和NPFF1部分激動劑。
全文摘要
本發明公開了介導急性傷害感受和慢性神經痛的神經肽FF受體亞型，選擇性與這種受體亞型互作的化合物，以及治療急性疼痛和慢性神經痛的方法。
文檔編號C07C279/36GK1875271SQ200480032231
公開日2006年12月6日 申請日期2004年9月24日 優先權日2003年9月25日
發明者奧德拉·L·斯庫利, 羅伯特·E·戴維斯, 金伯利·E·瓦努韋爾, 路易斯·羅伯托·加德爾, 耶爾韋和·拉梅赫, 尼古拉斯·邁克爾·凱利, 法布里奧·貝爾托齊, 弗拉迪米爾·舍伯克基 申請人:阿卡蒂亞藥品公司