無水極性非質子性肽制劑的制作方法

專利名稱：無水極性非質子性肽制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及肽化合物的穩定的無水極性非質子性制劑，更特別是高濃度的肽化合物制劑。
背景技術：
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通過在相同程度上參考上述各個公開文本、專利或專利申請所公開的內容全文引入作為參考，就象各個獨立的出版物，專利或專利申請的語言由參考文獻特別地和獨立地引入本文一樣。
促黃體激素釋放激素(LHRH)，也已知為促性腺激素釋放激素(GnRH)，是一個具有以下結構的十肽pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2其由下丘腦分泌，與垂體上的受體結合，釋放促黃體生成激素(LH)和促卵泡成熟激素(FSH)的分泌。LH和FSH刺激性腺合成類固醇激素。目前，已知大量的LHRH類似物，包括與用作激動劑和拮抗劑的LHRH相關的肽。[1-15]已知的LHR類似物可用于治療激素依賴性疾病，如前列腺癌、良性前列腺肥大、子宮內膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、青春期早熟、乳腺癌以及作為避孕藥。[8]對重復施用后可以減少有效受體的數量，從而抑制類固醇激素產生的LHRH相關化合物激動劑以及長期服用可持久抑制內源性LHRH的LHRH相關的拮抗劑，優選為持續釋放給藥。[8]藥物，特別是肽類藥物的非腸道持續給藥具有很多的優點。可植入裝置用于多種藥物或其它有益物質的持續遞送為本領域所周知。典型的裝置如美國專利No.5,034,229；5,057,318和5,110,596中所述。此處引入這些專利作為參考。
一般地，肽類，包括LHRH相關化合物的口服生物利用度低[16-17]。
目前，市場上的LHRH、LHRH類似物和相關化合物的制劑都是用于非腸道注射的水溶液制劑，其含有相對較低濃度(0.05-5mg/ml)的LHRH相關化合物，也含有如甘露醇或乳糖等賦形劑。[18-20]這些LHRH相關化合物制劑必須冷藏或在室溫下短期貯存。
用于在體內持續釋放1-3個月的LHRH相關化合物的可得埋植制劑包括一種制劑，其含有分散在D，L-乳酸和羥基乙酸共聚物基質中制成的用于皮下注射圓柱體中的15％LHRH相關化合物[1]和含有由LHRH相關化合物與明膠組成核外包一層D，L-乳酸和羥基乙酸共聚物外殼的微粒制劑。這些微粒懸浮在用作皮下或肌肉注射的稀釋劑中。[21，26]這些產物必須在室溫或更低的溫度下貯存。已知LHRH相關化合物的水溶液制劑具有化學和物理不穩定性，且光照后易降解[12-16，22-25]。已表明非常低濃度(25μg/ml)水的緩沖液(10mM，離子強度0.15)制劑在不高于室溫(25℃)下儲存比較穩定(t90約五年)。[15]因此，需要穩定的肽制劑。
發明概述本發明提供了肽化合物在極性非質子性溶劑中的溶液的穩定的無水性制劑。特別的，肽化合物以至少約10％的濃度制成。這些穩定的制劑可在較高的溫度下(如37℃)長期貯存且特別用于長時間遞送(如，1-12個月或更長)藥物的可植入遞送裝置中。
一方面，本發明提供了肽化合物穩定的無水性制劑，該制劑在至少一種極性非質子性溶劑中含至少一種肽化合物。在一種優選的實施方案中制劑含有至少約10％(w/w)肽化合物。
另一方面，本發明提供了制備一種肽化合物穩定的無水性制劑的方法，該方法包括在至少一種極性非質子性溶劑中溶解至少一種肽化合物。優選的制劑含有至少約10％(w/w)肽化合物。
另一方面，本發明提供了治療一種病癥的方法，即通過施用一種肽化合物以減輕患者病情，該方法包括向該患者施用在至少一種極性非質子性溶劑中含有至少一種肽化合物的有效量的一種穩定的無水性制劑。
附圖簡述

圖1說明用反相HPLC(RP-HPLC)測定的80℃兩個月后二甲亞砜(甲基亞砜或DMSO)中40％醋酸亮丙瑞林溶液(w/w)的穩定性。
圖2顯示與圖1同樣的樣品用體積排阻色譜(SEC)測定結果。此圖顯示存在極輕微的聚集現象，聚集物由二聚體和三聚體組成，沒有更高級的聚集。
圖3表示40％醋酸亮丙瑞林的二甲亞砜(DMSO)溶液中亮丙瑞林損失的阿侖尼烏斯(Arrhenius)曲線。
圖4說明40％亮丙瑞林的DMSO溶液80℃六個月后的物理化學穩定性。
圖5說明分別在37℃、50℃、65℃或80℃六個月期間40％醋酸亮丙瑞林DMSO溶液中亮丙瑞林的損失。
圖6說明400％醋酸亮丙瑞林DMSO溶液在37℃九個月期間的化學穩定性。
圖7說明在80℃亮丙瑞林DMSO溶液隨濃度升高而增加穩定性。
圖8說明在80℃40％亮丙瑞林-DMSO制劑隨水分含量升高而降低穩定性。
圖9說明圖8中所示的制劑中化學降解產物隨水分含量增加而增加。
發明詳述本發明出人意料地發現在無水極性非質子性溶劑中溶解肽化合物形成穩定的制劑。先前已知，肽化合物制劑都是含賦形劑如EDTA或抗壞血酸的稀的緩沖水溶液，其必須在低溫(4-25℃)下貯存，其可利用如酸/堿催化的水解、去酰胺化、外消旋化和氧化等途徑形成降解產物。相反，本權利要求的制劑在高溫(如37℃到80℃)和高濃度(如至少約10％)下能使肽化合物穩定。
標準的肽和蛋白質制劑是由稀的水溶液組成。一般通過改變以下的一種或幾種條件pH、緩沖液類型、離子強度、賦形劑(EDTA，抗壞血酸等)而使藥物穩定。對于這些制劑，不能完全穩定需要水的降解途徑(水解、去酰胺化作用、外消旋化)。相反，在本發明中，肽制成于無水溶液，如二甲基亞砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)溶液中的肽，其化學和物理穩定性都比水溶液制劑高。DMSO和DMF均是極性非質子性溶劑。因其缺乏給降解反應提供質子的能力，所以期望非質子性溶劑能降低降解速率。相反地，極性比水強(如，水的偶極矩為1.85，DMF為3.82，DMSO為3.96)的溶劑由于能輔助穩定限速步驟和增加降解速率，因而期望能增加降解速率。然而，我們發現，極性非質子性溶劑的總體效果一般地是穩定肽溶液。
本發明包含用無水非質子性溶劑如DMSO或DMF對抗物理和化學降解以穩定肽制劑。此發現包含利用DMSO或DMF提高在廣泛的制劑條件下(包括高濃度和高溫)肽的穩定性，使否則沒有其它可行辦法的在長期可植入裝置中的肽的遞送成為可能。
A.定義如此處所用下列術語的意思如下“化學穩定性”一詞是指通過如氧化或水解的化學途徑生產，形成可接受的百分比例的降解產物。特別的，一種制劑如果在37℃經過兩個月后形成不超過約20％的降解產物，可視為化學穩定。
“物理穩定性”一詞指形成可接受百分比的聚集體(如二聚體、三聚體和更大的聚集體)。特別的，一種制劑如果在37℃經過兩個月后形成不超過約15％的聚集體可視為物理穩定。
“穩定的制劑”一詞指在37℃(或相同條件在高溫條件下)兩個月后至少保留有約65％化學和物理穩定的肽化合物。特別優選的制劑指在這些條件下至少保留有約80％化學和物理穩定的肽。特別優選的穩定制劑指經過輻射滅菌(如，γ射線、β射線或電子束)后沒有顯示降解的制劑。
“肽”和/或“肽化合物”一詞指多至約五十個氨基酸殘基通過酰胺鍵(CONH)連接在一起的聚合物。該詞也包括它們的類似物、衍生物、激動劑、拮抗劑和上述任一種的藥學可接受的鹽，該詞還包括在D或L構型和/或作為其結構一部分的擬胨(peptomimetic)單位中含有D型氨基酸、修飾過的、衍生的或非天然氨基酸。
“LHRH-相關化合物”一詞指促黃體生成激素釋放激素(LHRH)和其類似物及其藥學可接受的鹽。八肽、九肽和十肽LHRH激動劑和拮抗劑和天然LHRH一樣均包括在LHRH相關化合物一詞中。特別優選的LHRH相關化合物包括LHRH、亮丙瑞林、戈舍瑞林、納發瑞林及其它已知的活性激動劑和拮抗劑。[1-21]“高濃度”一詞指至少約10％(w/w)和多至特定肽的最大溶解度。
“賦形劑”一詞指制劑中一種相對不活潑的物質，其作為一種稀釋劑或載體或者使制劑成型或具有一定密度而加入。賦形劑不同于制劑中用于溶解藥物的溶劑如乙醇和用于增加藥物溶解度的非離子型表面活性劑如吐溫-20以及用來阻止和抑制微生物生長的防腐劑如苯甲醇或對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯。
“極性非質子性溶劑”一詞指一種不含酸性氫以及不能作為氫鍵供體的極性溶劑。極性非質子性溶劑的例子為二甲亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)，六甲基磷酰三胺(HMPT)和N-甲基吡咯烷酮。
“無水質子性溶劑”一詞指一種含有連接在氧或氮上的氫以使形成氫鍵或提供一個質子的非極性溶劑。非極性質子性溶劑的例子有聚乙二醇類(PEG)，丙二醇(PG)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，甲氧基丙二醇(MPEG)，甘油和糖糠醛(glycofurol)。
B.制劑的制備本發明是關于極性非質子性溶劑中的肽化合物的無水制劑，它能在較高的溫度下穩定更長的期限。標準的稀的肽和蛋白質的水溶液制劑需調整緩沖液類型、離子強度、pH和賦形劑(如EDTA和抗壞血酸)以實現穩定。相反，本發明所要求的制劑是通過無水極性非質子性溶劑的使用實現肽化合物的穩定。特別的，本發明的制劑提供了高濃度(至少約10％，w/w)化合物的穩定性。
可用本發明配制的肽和肽化合物的實例包括有生物活性的肽或可用于治療某種疾病或其它病理狀況的肽。它們包括但不局限于以下這些肽促腎上腺皮質激素、血管緊張肽I和II、心房肽、鈴蟾肽、緩激肽、降鈣素、小腦肽、強啡肽A、α和β內啡肽、內皮素、腦啡肽、表皮生長因子、Fertirelin、卵泡促性腺激素釋放肽、galanin、胰高血糖素、戈那瑞林、促性腺激素、戈舍瑞林、生長激素釋放肽、組氨瑞林、胰島素、亮丙瑞林、LHRH、促胃動素、納發瑞林、神經降壓素、催產素、促生長抑制素、P物質、腫瘤壞死因子、色氨瑞林和血管升壓素。以上物質的類似物、衍生物、拮抗劑、激動劑和上述的藥學可接受的鹽類也可用于此。
本發明的制劑和方法中使用的肽和肽化合物可采用鹽的形式，優選的是一種藥學可接受的鹽。可用的鹽類包括與無機酸、有機酸、無機堿或有機堿所形成的鹽，其為本領域的普通技術人員所周知。優選的是醋酸鹽。
在本發明中優選的采用易溶解在無水極性非質子性溶劑中的肽及肽化合物。根據化合物的溶解度，即化合物溶在特定無水極性非質子性溶劑中至少能達到一種可接受的量，本領域普通技術人員可方便地決定采用何種化合物。優選的溶解度至少約10％(w/w)。特別優選的肽化合物是LHRH相關化合物，包括亮丙瑞林和醋酸亮丙瑞林。
肽的比例可依據所用化合物、所治療的狀況、化合物的溶解度、預期的劑量及用藥持續時間而變化。(參見如臨床藥理學基礎(ThePharmacological Bazis of Therapeutics)Gilman等，第七版(1985)和藥物學(Pharmaceutical Sciences)Remington，第十八版(1990)，此處引入這些公開作為參考)。高濃度肽制劑的濃度范圍從至少約10％(w/w)到該化合物的最大溶解度。優選的范圍是從約20％到約60％(w/w)。目前優選的范圍從約30％到約50％(w/w)，最優選的范圍是從約35％到約45％(w/w)。
出人意料地發現，增加溶解于無水極性質子性溶劑中的肽濃度能增加肽制劑的穩定性。比如，如圖7中可見，當5％、10％、20％和40％的亮丙瑞林的DMSO溶液在80℃貯存8周，定期取樣，分析測定亮丙瑞林的殘余百分比例，發現含較高濃度亮丙瑞林的制劑比較低濃度亮丙瑞林制劑更穩定。
一般說來，本發明的穩定的制劑優選的通過簡單溶解所需要的治療有效劑量的肽化合物于所選擇的無水極性非質子性溶劑中而制備。優選的極性非質子性溶劑包括DMSO和DMF。
如圖8所示，增加本發明涉及的肽制劑中的水含量增加了肽的降解。降解的增加似乎主要是增加了化學降解產物，而聚集物的量相對保持穩定(圖9)。
同時還發現諸如PEG、PG和PVP等無水的非質子性溶劑也可以任選地加入到所要求的制劑中。
C.方法學我們發現穩定的無水肽化合物制劑可通過將肽化合物溶于無水極性非質子性溶劑而制成。
通過將其經過高溫下加速老化處理及測定制劑的化學和物理穩定性我們考察了這些肽化合物制劑，特別是LHRH相關化合物亮丙瑞林的穩定性。這些研究結果證明(參見如表II和圖1、2、4及6)這些制劑在37℃接近或一年以上的貯存期內是穩定的。
我們也考察了如上所述制備的肽化合物制劑經過2.5兆拉德γ-射線照射后的穩定性。結果如表III所示，表明這些制劑經這樣的照射后仍然保持化學和物理穩定。
如表I所示，我們考察了多種肽制劑，特別是亮丙瑞林、戈舍瑞林、LHRH、血管緊張肽I、緩激肽、降鈣素、腦啡肽、胰島素、神經降壓肽、P物質、胰蛋白酶原和血管升壓素的穩定性，這是通過將它們溶解(或試圖溶解)在無水極性非質子性溶劑DMSO中，然后進行高溫加速老化處理進行的。測定制劑的穩定性。結果列于表1，37℃的半衰期，假定Ea＝22.2kcal/mol。大部分被考察的肽可溶于DMSO中，在考察的條件下保持穩定。特定的肽在特定的無水極性非質子性溶劑中的溶解度和所得溶液的穩定性用本領域普通技術人員已知的常規方法很容易測定。
表I配制在DMSO溶中的肽的穩定性
40％肽的DMSO制劑在37℃、50℃、65℃和80℃貯存六個月，通過測定其肽從溶液中總損失情況呈現非線性阿侖尼烏斯動力學關系，顯示了這些制劑在高溫下的穩定性。分析在37℃收集的數據得到t90為14.4個月，說明在37℃穩定性仍然非常好。
溫度似乎影響本發明涉及的制劑的降解速率和降解產物的比例。研究亮丙瑞林DMSO制劑表明在65℃和80℃下氧化似乎是主要的化學降解途徑。而在37℃和50℃時水解和異構化似乎是這些制劑的主要降解途徑。
我們也無意中發現本發明的特定肽制劑是抑菌的(即抑制細菌生長)、殺菌的(即引起細菌死亡)和殺芽孢的(即殺死芽孢)。特別是，50-400mg/ml亮丙瑞林制劑呈現抑菌、殺菌和殺芽孢活性。樣品的穩定性不受細菌侵蝕的影響，說明從死亡的和被裂解的細菌中釋放的酶對產品的穩定性不造成負面影響。這證明這些制劑不助長酶的活性。
已知某些肽如降鈣素和亮丙瑞林當配制在水溶液中是物理不穩定的，易聚集、膠凝化和纖維化。改善物理穩定性可增加生物利用度，減少致敏作用和免疫反應，能便于進行非腸道給藥，包括通過可植入藥物遞送裝置給藥。
我們意外地發現特定的肽如亮丙瑞林、戈舍瑞林和降鈣素制成本發明的無水極性非質子性溶液制劑不發生膠凝。甚至在37℃經過12個月也不發生膠凝。這顯然是因為無水極性非質子性溶劑使肽形成無規則卷曲/α-螺旋構象而不折疊成β-折疊結構，因此不膠凝。所以，這些溶劑具有抗膠凝劑的效果。
本發明的一個主要方面是極性非質子性溶劑中含肽化合物的無水極性溶液在高溫下長時間內都是化學和物理穩定的。這種制劑甚至在采用高濃度時也穩定。因此，這些制劑有助于在室溫或高于室溫條件下長期運輸和貯存。它們也適合于用于可植入遞送裝置。
本發明實施例的公開下面的方法用于完成下列實施例中的研究。
1.醋酸亮丙瑞林溶液的制備醋酸亮丙瑞林(如從Mallinckrodt，St.Louis，Missouri獲得)稱重，然后以適當的濃度用攪拌或離心的方法將其溶于載體(DMSO，DMF，DMSO/PEG，DMSO/PG，或DMSO/PVP)中。干燥DMSO一詞指DMSO制劑在低濕度環境下制備(即，干的氮氣環境)。
除非另外說明，亮丙瑞林游離堿含量是根據37℃游離堿的潛在值的分析標準計算的。除非另外指出，這是指的40％的醋酸亮丙瑞林。
2.儲藥室的制備可植入藥物遞送裝置(見如美國專利，申請號08/595,761的公開，此處引入作為參考。)的儲藥室用適當的醋酸亮丙瑞林溶液充滿。將亮丙瑞林制劑注入用聚合物塞子堵住每一頭的鈦或聚合物儲液室中。然后將儲液室密封在多層鋁箔袋中放入穩定性測試烘箱中。
應該說明的是在這些設備的儲藥室中的制劑是完全與外界環境隔絕的。
3.反相HPLC(RP-HPLC)全部穩定性樣品均使用帶有冷藏自動取樣器的梯度洗脫反相HPLC分析亮丙瑞林的濃度和峰面積百分數。分析在4℃條件下進行以減少樣品的降解。所用色譜條件如下表反相HPLC色譜條件
4到6個不同濃度水平的亮丙瑞林標準(水中)，通常為0.1-1.2mg/ml之間，隨穩定性實驗樣品一同進樣。樣品分析過程中進行標準校正，兩次校正之間分析樣品不超過40個。對空柱體積至泳動45分鐘之間所有的峰的峰面積積分。作出標準亮丙瑞林溶液的積分峰面積與濃度的函數圖。根據該線性回歸曲線計算亮丙瑞林的濃度以測定樣品穩定性。記錄亮丙瑞林峰的峰面積百分數和在亮丙瑞林之前洗脫下來的所有峰(標為“其它”)的峰面積百分數之和以及在亮丙瑞林之后洗脫下來的所有峰(標為“聚集物”)的峰面積百分數之和，然后作出相對于各個樣品時間點的函數圖。
4.體積排阻色譜(SEC)用無梯度溶液SEC分析所選穩定性樣品的峰面積百分數和分子量，使用帶冷藏自動取樣器(4℃)。所用色譜條件列表如下SEC色譜條件
測定分子量需用到體積排阻柱的空柱體積和總體積。用BioRad的高分子量標準和0.1％的丙酮分別測定空柱體積和總體積。記錄BioRad分子量標準的第一個峰和丙酮峰的保留時間，用下面的公式換算成體積單位。因為這些量對于特定的SEC柱和HPLC裝置恒定，所以更換SEC柱或改變HPLC裝置要重新測定空柱體積和總體積。分子量標準的分析進行之后進行穩定性樣品分析。標準混合物約含有大約0.2mg/ml的下列肽法氏囊肽(MW＝449)，WLFR肽(MW＝619)，血管緊張肽(MW＝1181)，GRF(MW＝5108)和細胞色素C(MW＝12394)。選擇這些標準是因為它們覆蓋了亮丙瑞林的分子量且都具有與亮丙瑞林相近的堿性等電點pI(9.8-11.0)。
記錄所有峰的面積百分數。用下面公式計算各分離物質的分子量。
Vs＝流速(ml/min)×樣品峰保留時間(分鐘)Vo＝流速(ml/min)×空柱體積峰的保留時間(分鐘)Vt＝流速(ml/min)×總體積峰的保留時間(分鐘)
Kd=Vs-VoVt-Vo]]>其中Vs＝標準或樣品體積Vo＝空柱體積Vt＝總體積計算每個肽標準峰的Vs。然后用先前測出的Vt和Vo值計算各肽的Kd。穩定性實驗樣品各峰的分子量用以LogMW對Kd-1所作的線性回歸直線確定。另外，記錄穩定性樣品的峰面積百分數。
5.儀器和材料用于RP-HPLC和SEC的儀器和材料如下Waters Millennium HPLC裝置包括717自動取樣器，626泵，6000S控制器，900二極管陣列檢測器和414折光指數檢測器(WatersChromatography，Milford，MA)。
HPLC小瓶，48孔和96孔(Waters Chromatography，Miford，MA)。HaiSil C18，120A，5μm 4.6×250mm HPLC柱(Higgins Analytial，Mountain View，CA)Pharmacia Peptide，HR 10/30 SEC柱(Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)下面的實施例用于說明本發明，但并不意味著以任何方式限制本發明的范圍。
實施例1醋酸亮丙瑞林制劑的加速穩定性研究如上述制備40％(w/w)溶于載體中的醋酸亮丙瑞林制劑(相當于約37％亮丙瑞林游離堿)并如上述將其注入可植入藥物遞送裝置的儲藥室。全部的儲藥室均用鈦制成。
通過將已注滿的儲藥室放入溫箱(Precision Scientific或Thelco)中，在高溫(80℃)下放置七天進行加速老化。這相當于在37℃放置約1.5年或室溫(25℃)下放置約4年。
樣品如上述用RP-HPLC和SEC分析，測定已老化的制劑的化學和物理穩定性。
結果列于表II，說明這些制劑能保持LHRH相關化合物亮丙瑞林的穩定性。在每個制劑中，至少保留了65％亮丙瑞林。
表II在80℃經過七天鈦儲藥室中醋酸亮丙瑞林極性非質子性制劑的穩定性
實施例2經輻照的醋酸亮丙瑞林制劑的穩定性研究如上述制備的40％(w/w)醋酸亮丙瑞林DMSO制劑，并如上述將其注入藥物遞送裝置的儲藥室。全部儲藥室均用鈦制成。
已充滿的儲藥室送到Sterigenics(Tusin，California)，在那兒的Sterigenics′Tusin Main Cell，用鈷60，三級“搬運箱”照射，使它們受到2.5兆拉德γ射線的照射。在表III中，標有“冷”的樣品是保存在干冰上進行運輸和照射的。然后將這些樣品按實施例1的方法加速老化。分別在第零天和第七天取樣，用如上述的RP-HPLC和SEC分析，測定經輻照的制劑的化學和物理穩定性。
結果列于表III，說明這些醋酸亮丙瑞林制劑照射后穩定。在每個制劑中至少保留有65％亮丙瑞林，且形成聚集的水平低。
表III40％(w/w)醋酸亮丙瑞林極性非質子性制劑在鈦儲藥室中經過2.5兆拉德γ-射線照射后的穩定性
實施例3醋酸亮丙瑞林制劑的加速長期穩定性研究制備40％(w/w)醋酸亮丙瑞林DMSO溶液，注入儲藥室，在80℃下貯存兩個月，按上文所述方法分析。結果見圖1(RP-HPLC)和圖2(SEC)，表明可回收到81.1％亮丙瑞林，只有14.6％的化學降解和5.1％的物理聚集。
制備醋酸亮丙瑞林溶液，灌裝，在80℃貯存六個月，按上文的方法分析。圖4是亮丙瑞林及其物理和化學降解產物經六個月期間后的回收圖，表明我們可解釋起始的全部肽物質和這些肽制劑在80℃表現出很好的穩定性。這三個部分的總和仍保持質量平衡。圖5是這些數據的自然對數，表明這些制劑在整個測試溫度范圍內呈線性動力學關系。
如上述制備和分析的40％醋酸亮丙瑞林溶液的化學穩定性示于圖6。在37℃九個月后，出現90％以上(93.5％)的亮丙瑞林，形成了少于5％(2.9％)的化學降解產物(圖中標為“較早”)和少于5％(2.3％)物理降解產物(圖中標為“晚期”，且基于反相HPLC色譜曲線，與SEC色譜行為符合)。
制備40％醋酸亮丙瑞林(w/w)DMSO溶液，灌裝入儲藥室中，分別在37℃、50℃、65℃或80℃下貯存，如上述用RP-HPLC分析。結果按物理藥學藥物學中的物理化學原理，第三版，Martin等，第14章(1983)中所述方法計算，表明亮丙瑞林從DMSO制劑中的損失是非線性的。數據如下所示，阿侖尼烏斯曲線見圖3。
因為DMSO制劑貯存于80℃的阿侖尼烏斯曲線顯示亮丙瑞林的損失是非線性的，在37℃收集的穩定性數據用于計算在37℃這些制劑的t90為14.4個月。
Ea＝非線性實施例4在DMSO/水中的醋酸亮丙瑞林制劑的穩定性研究如上述制備在DMSO、DMSO/水(95∶5，90∶10，70∶30，50∶50和30∶70)和水溶液中的40％醋酸亮丙瑞林(w/w)制劑，在80℃孵育7天。在第零天和第七天進行傅立葉變換紅外光譜(FTIR)分析。
結果顯示，所有考察的制劑經加速老化后亮丙瑞林的結構形態變化非常小。一般來說，在DMSO制劑中肽的結構主要是無規則卷曲或α-螺旋，而在水溶液制劑中肽的結構主要是β-折疊。
對于遵照本發明的精神的本領域普通技術人員，可對本發明的多種實施方案的上述模式進行修飾是顯而易見的。上述這些實施例只是為了本發明的舉例，而不是限制本發明，本發明的范圍由下述權利要求限定。
權利要求
1.一種肽化合物的穩定的無水制劑，其包括a)至少一種肽化合物；和b)至少一種極性非質子性溶劑。
2.權利要求1的制劑，其包含至少約10％(w/w)的肽化合物。
3.權利要求1的制劑，其包含至少約30％(w/w)的肽化合物。
4.權利要求1的制劑，其中該肽化合物是一種LHRH相關化合物。
5.權利要求4的制劑，其中該肽化合物選自亮丙瑞林、LHRH、納發瑞林和戈舍瑞林。
6.權利要求1的制劑，其在80℃至少穩定兩個月。
7.權利要求1的制劑，其在37℃至少穩定三個月。
8.權利要求1的制劑，其在37℃至少穩定一年。
9.權利要求1的制劑，其適合用于一種可植入藥物遞送裝置。
10.權利要求1的制劑，其還包含一種無水質子性溶劑。
11.權利要求1的制劑，其中該極性非質子性溶劑選自DMSO和DMF。
12.權利要求1的制劑，其中該極性非質子性溶劑具有抗膠凝劑作用。
13.權利要求1的制劑，其基本上由溶于DMSO中的約30％到約50％(w/w)的LHRH相關化合物醋酸亮丙瑞林組成。
14.權利要求1的制劑，其基本上由亮丙瑞林和DMSO按370mg亮丙瑞林溶于1ml DMSO中的比例組成。
15.權利要求1的制劑，其經輻照后穩定。
16.制備權利要求1的穩定的無水制劑的一種方法，其包括在至少一種極性非質子性溶劑中溶解至少一種肽化合物。
17.權利要求16的方法，其中至少溶解了約10％(w/w)肽化合物。
18.權利要求16的方法，其中至少溶解了約30％(w/w)肽化合物。
19.權利要求16的方法，其中該肽化合物是一種LHRH相關化合物。
20.權利要求19的方法，其中該肽化合物選自亮丙瑞林、LHRH、納發瑞林和戈舍瑞林。
21.權利要求16的方法，其還包含加入一種無水質子性溶劑的步驟。
22.權利要求16的方法，其中約30％到約50％(w/w)的LHRH相關化合物醋酸亮丙瑞林溶于DMSO中。
23.權利要求16的方法，其中370mg亮丙瑞林溶于1ml DMSO中。
24.通過施用一種肽化合物可以減輕病情的治療病癥的一種方法，其包括給該患者施用有效劑量的權利要求1的制劑。
25.權利要求24的方法，其中給藥是非腸道給藥。
26.權利要求24的方法，其中給藥是長期連續給藥。
27.權利要求26的方法，其中給藥是使用可植入藥物遞送裝置來完成的。
28.權利要求24的方法，其中所述病癥是前列腺癌且所述的肽化合物是亮丙瑞林。
29.權利要求28的方法，其中每天至少給藥約80毫克亮丙瑞林。
30.權利要求29的方法，其中所述的每天給藥持續的時間選自3個月、6個月和12個月。
31.權利要求30的方法，其中所述的每天給藥的時間是通過一種可植入藥物遞送裝置來完成連續給藥的。
32.權利要求24的方法，其中所述的病癥是前列腺癌且所述的肽化合物是一種LHR拮抗劑。
全文摘要
本發明涉及肽化合物的穩定的無水極性非質子性制劑。這些穩定的制劑包含無水極性非質子性溶劑中的肽化合物。它們能在高溫下長期貯存，特別適用于長時期遞送藥物的可植入遞送裝置。
文檔編號C07K7/23GK1636589SQ200410092618
公開日2005年7月13日 申請日期1997年7月1日 優先權日1996年7月3日
發明者C·L·斯蒂威森, S·J·普里斯特雷斯基 申請人:阿爾薩公司