光學活性的多沙唑嗪鹽的制作方法

專利名稱：光學活性的多沙唑嗪鹽的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有光學活性的多沙唑嗪鹽和使用該鹽的特異性的治療高血壓的多沙唑嗪制劑，其可以特異性地阻斷血管平滑肌的α1受體，同時可以明顯提高多沙唑嗪的抗高血壓活性。更具體的，本發明涉及光學活性的(+)(右旋)多沙唑嗪鹽酸鹽及其I型、II型和III型結晶。以及使用該光學活性的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的I型、II型或III型結晶的特異性治療高血壓的(+)多沙唑嗪制劑。
背景技術：
世界衛生組織與國際高血壓學會均將高血壓定義為，在未服用抗高血壓藥物的情況下，收縮壓≥140mmHg或舒張壓≥90mmHg，測量3次非同日血壓均符合上述標準，即可診斷為高血壓(《高血壓的診斷與治療》，葉平主編，2004年，人民軍醫出版社)。目前，我國高血壓患者已超過1億。我國三次大規模全國性高血壓抽樣調查結果顯示，15歲以上人群患病率1959年為5.11％，1979～1980年為7.73％，1991年為11.88％；1959～1979年的20年間高血壓的患病人數平均每年增長140萬，而1980～1991年的12年間，平均每年增加320萬(我國各地高血壓流行病學調查近況，劉忠仁，醫學綜述，2004；10(2)88-89)。長期血壓升高，導致心、腦、腎等靶器官損害，可伴隨許多臨床情況的發生，如腦血管病變(缺血性腦卒中、腦出血)、心臟病(心肌梗死、心絞痛、充血性心力衰竭)、腎臟病(糖尿病、腎病、腎衰)、眼視網膜病變。近20年來我國人民隨著生活水平普遍提高，由于膳食結構的改變、肉類食品的增加以及生活和工作節奏的加快，高血壓發病率有逐步上升的趨勢，不得不引起醫學界的重視。因此，合理用藥是治療高血壓病的關鍵所在。常用降壓藥主要分為六大類，即α受體阻滯劑、β受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉換酶抑制劑、血管緊張素受體阻滯劑和利尿劑(血壓調控機制與抗高血壓藥物靶標，殷曉峰等，中國藥理學通報，2003；19(9)971-975)。
高血壓病的發病機制目前還不完全清楚，一般認為，其發病的主要環節在于小動脈痙攣，造成外周血管阻力增加，血壓升高。而小動脈痙攣的發生是大腦皮層興奮和抑制過程平衡失調的結果；各種外界或內在的不良刺激，長期反復地作用于大腦皮層，使皮層和皮層下中樞的平衡調節作用紊亂，引起丘腦下部血管運動中樞調節障礙，表現為交感神經興奮性增高，兒茶酚胺類物質分泌增多，引起全身小動脈痙攣，外周血管阻力升高，心肌收縮力增強，以致血壓升高。小動脈長時間痙攣，導致臟器缺血。當腎臟缺血時，腎小球旁細胞分泌腎素增多。腎素是一種蛋白水解酶，它能使存在于血漿中的血管緊張素原轉化為血管緊張素I，后者在血管緊張素I轉換酶的作用下，轉化為血管緊張素II。血管緊張素II具有很高的生物活性，能使全身小動脈痙攣加重，并能刺激腎上腺皮質，使醛固酮分泌增加，從而促進腎小管對鈉和水的重吸收，增加血容量及鈉的潴留，又可使血管對加壓物質的敏感性增加，使小動脈更易痙攣(Busche S，Gallinat S，Bohle RM et al.Am J Pathol，2000；157(2)605-611)。
選擇性α1受體阻斷劑能阻斷交感神經突觸后膜α1受體，解除該神經對血管的收縮作用，由于藥物不阻斷突觸前膜α2受體，神經末梢釋放的遞質仍可反饋性抑制NA釋放。選擇性α1受體阻斷劑舒張全身動脈和靜脈血管，使總外周血管阻力下降。降低血壓時，不伴有反射性心率加快，無腎素活性升高，腎血流量和腎小球濾過不減少，心輸出量不變或略增。由于心臟的前、后負荷減小，可恢復心功能不全患者的心臟功能。選擇性α1受體阻斷劑尚可降低血液中的甘油三酯、總膽固醇和低密度脂蛋白，并能升高高密度脂蛋白水平(Bertram G.Katzung，Basic and ClinicalPharmacology，8th Edition，2001)。
(±)多沙唑嗪(doxazosin)最早公開于US4,188,390中，該藥物由Pfizer公司開發，并于1988年上市，是長效選擇性α1受體阻斷劑，已被用于治療高血壓和前列腺肥大(《默克索引》Merck Index，第12版，1996年，第3489條)。其結構如下 該化合物的系統命名為4-氨基-2-[4-(1，4-苯并二氧六環-2-羰基)哌嗪-1-基]-6，7-二甲氧基喹唑啉或記作1-(4-氨基-6，7-二甲氧基-2-喹唑啉基)-4-[(2，3-二氫-1，4-苯并二氧六環-2-基)羰基]哌嗪)。目前市售的多沙唑嗪制劑為甲磺酸鹽，是含有左旋和右旋多沙唑嗪的外消旋體混合物。臨床研究證明，多沙唑嗪的不良反應較小，對心、肝、腎功能和血液系統未見異常影響。多沙唑嗪還能改善血管平滑肌細胞和內皮細胞功能，減低胰島素抵抗，并增加血液的纖溶活性(多沙唑嗪對2型糖尿病并發高血壓病的治療及對胰島素敏感性的影響，黃繼良等，中國煤炭工業醫學雜志，2001；多沙唑嗪對高血壓患者動脈血管平滑肌細胞NO產生的影響，楊君等，山東醫學，2001；41(22)15-16；Raij L，et al.Am J Hypertens，1997；101257-1262.)。此外，現代抗高血壓治療原則更著重于減少不良反應、平穩降壓以及藥物對心血管病危險因子的影響，多沙唑嗪在這方面具有諸多優點，值得推廣和應用。迄今為止，一直沒有本領域的專業人員對(+)多沙唑嗪和(-)多沙唑嗪的降壓活性進行進一步研究；雖然在發明名稱為“治療高血壓的方法和(+)多沙唑嗪的組合物”(METHODSAND COMPOSITIONS OF(+)DOXAZOSIN FOR THE TREATMENT OFHYPERTENSION)WO94/09785號公報中公開了(+)多沙唑嗪的選擇性治療高血壓的用途，其中描述到“(+)多沙唑嗪可以用于治療高血壓，減少使用混旋物治療高血壓所產生不良反應”。但是在同一申請人提交的發明名稱為“治療高血壓的方法和(-)多沙唑嗪的組合物”(METHODS AND COMPOSITIONS OF(-)DOXAZOSIN FOR THE TREATMENT OFHYPERTENSION)WO94/09782號公報中公開了(-)多沙唑嗪的選擇性治療高血壓的用途，其中描述到“(-)多沙唑嗪可以用于治療高血壓，減少使用混旋物治療高血壓所產生不良反應”。因此，關于(-)或(+)多沙唑嗪的選擇性治療高血壓的效果，仍然沒有明確的結論。此外，關于(-)或(+)多沙唑嗪治療高血壓的特異性，現有技術文件也不清楚甚至自相矛盾，對于研制治療高血壓的新藥造成混亂。
同時，上述文獻中也沒有公開關于光學活性多沙唑嗪的鹽的內容，因此對于光學活性多沙唑嗪的鹽，目前也知之甚少。

發明內容
本發明人等通過長期深入研究，發現了以下所記載的右旋多沙唑嗪的鹽酸鹽，以下記作(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，及其多晶型物-I型、II型和III型結晶。另外，本發明人等還發現通過采用(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，可以獲得良好的治療高血壓的效果，同時可以降低用藥量。本發明就是在以上研究的基礎上完成的。
具體的，本發明的內容如下1.(+)多沙唑嗪鹽酸鹽。
2.如1所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為在2θ角6.7°、7.8°和25.8°處具有衍射峰的I型結晶。
3.如2所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為具有圖2所示的X-射線衍射模式的結晶。
4.如1所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為在2θ角為20.3°、22.5°、28.0°和31.9°左右具有衍射峰的I I型結晶。
5.如4所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，衍射峰相對強度最大的峰位于2θ角22.5°左右。
6.如4所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為具有圖4所示的X-射線衍射模式的結晶。
7.如1所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為在2θ角11.3°、12.7°和23.7°左右處具有衍射峰的III型結晶。
8.如7所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，其衍射峰相對強度最大的峰位于2θ角11.3°左右。
9.如7所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為具有圖6所示的X-射線衍射模式的結晶。
10.特異性治療高血壓病的多沙唑嗪制劑，其中含有權利要求1～9中任何一項的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，且實質上不含(-)多沙唑嗪。
附圖簡要說明

圖1是本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽I型結晶的紅外吸收光譜。
圖2是本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽I型結晶的X射線衍射光譜。
圖3是本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽II型結晶的紅外吸收光譜。
圖4是本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽II型結晶的X射線衍射光譜。
圖5是本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽III型結晶的紅外吸收光譜。
圖6是本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽III型結晶的X射線衍射光譜。
具體實施例方式
以下具體介紹本發明。
本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽是指系統命名為(+)4-氨基-2-[4-(1，4-苯并二氧戊環-2-羰基)哌嗪-1-基]-6，7-二甲氧基喹唑啉的化合物的單鹽酸鹽，具有如下式(II)所示的結構 本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽應當為基本上光學純的物質，所謂光學純是指(+)多沙唑嗪鹽酸鹽中，根據制備工藝，實際上不含或者含有含量不影響(+)多沙唑嗪的藥理活性的(-)多沙唑嗪的(+)多沙唑嗪和(-)多沙唑嗪的混合物。所謂含量不影響(+)多沙唑嗪的藥理活性的混合物，ee值應當在80％以上，優選90％以上，更優選95％以上，最優選99％以上。
本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的旋光度，在采用PERKIN-ELMER241型旋光度測定儀，濃度1mg/ml的DMSO(二甲基亞砜)溶液中，其旋光度[α]為+65.6°。
(+)多沙唑嗪鹽酸鹽具有多種晶型，現已發現了以下(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的I型、II型和III型結晶。
三種結晶的理化性質如下1.晶型I(無定型)溶解度溶解于乙醇、水、甲醇、二甲基亞砜等溶劑。
熔點沒有固定的熔點旋光度[α]+65.6°紅外光譜見圖1X-射線粉末衍射(CuKα1)見圖22.晶型II
溶解度溶解于二甲基亞砜，微溶于熱水，不溶于其他溶劑熔點266.1-267.6℃旋光度[α]+65.6°紅外光譜見圖3X-射線粉末衍射(CuKα1)見圖43.晶型III溶解度溶解于二甲基亞砜、熱水，微溶于水，不溶于甲醇和乙醇。
熔點265.9-266.6℃旋光度[α]+65.6°紅外光譜見圖5X-射線粉末衍射(CuKα1)見圖6具體來說，I型結晶，其在2θ角6.7°、7.8°和25.8°等處有衍射峰，衍射峰基峰位于25.8°左右。該I型結晶的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的紅外最大吸收位于波數1600cm-1左右處，另外在1500cm-1左右和1650cm-1左右的吸收峰也較強。
具體的，圖2中I型結晶的衍射圖譜總結如下

從圖2的X-射線衍射圖譜觀察，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的I型結晶實際上屬于無定形物。相對于其它2種結晶，I型結晶具有最佳的水溶解性。
(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽I I型結晶，其在2θ角20.3°、22.5°、28.0°和31.9°左右處有衍射峰，其衍射峰基峰位于22.5°左右。該II型結晶的(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的紅外最大吸收也是位于波數1600cm-1左右，同時在波數1200～1300cm-1、1400～1500cm-1和1600～1700cm-1間均具有極強的吸收。
具體的，圖4中II型結晶的衍射圖譜概括如下

(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽的III型結晶，其在2θ角11.3°、12.7°和23.7°左右處有衍射峰，其衍射峰基峰位于11.3°左右。該II型結晶的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的紅外最大吸收也是位于波數1600cm-1左右，同時在波數126cm-1左右和1500cm-1左右也具有較強的吸收。
具體的，圖6中III型結晶的衍射圖譜概括如下

根據我們的研究，III型結晶性質非常穩定，在室溫下放置2年之后，其X射線衍射圖譜和紅外吸收光譜基本不發生變化。
本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽包括以上所有3種晶型，但并不僅限于此3種晶型。
以下對本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的制備方法進行介紹。
本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽可以采用常規的光學拆分方法進行。例如，可以通過拆分市售的外消旋多沙唑嗪(以下記作(±)多沙唑嗪)進行，首先將市售的(±)多沙唑嗪鹽堿化，然后通過色譜法或者結晶法進行拆分得到(+)多沙唑嗪游離堿，之后用鹽酸酸化即得。
例如，可以使用普通制備量色譜柱，采用常規方法按照普通的分離方法進行拆分，例如在流動相中加入手性添加劑，通過手性添加劑與所要分離的外消旋多沙唑嗪的相互作用，使得(-)多沙唑嗪和(+)多沙唑嗪具有不同的保留時間，從而實現分離。之后，去除手性添加劑，用鹽酸(或者HCl的有機溶劑溶液等)酸化，即可獲得本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽。
或者，也可以采用具有手性填料的手性分離柱，按照常規方法進行色譜分離。
另外，不通過對(±)多沙唑嗪進行拆分，而是通過對手性中間體進行拆分，之后進行合成，也可以直接獲得光學活性的左旋多沙唑嗪或者多沙唑嗪鹽酸鹽，即(+)多沙唑嗪或者(+)多沙唑嗪鹽酸鹽。
例如，可以首先將式(III)的外消旋苯并二氧六環基羰基哌嗪(以下簡稱側鏈堿I)拆分， 得到式(IV)所示的左旋苯并二氧六環基羰基哌嗪(以下簡稱(+)側鏈堿I)，
然后與式(V)所示的二甲氧基喹唑啉(其中X表示離去基團如鹵素(氯、溴、碘等)、低級烷氧基或者低級烷硫基等)縮合， 得到式(VI)所示的(+)多沙唑嗪游離堿或者鹽， 將式(VI)的游離堿用例如HCl-醇或者HCl-醇等溶液酸化，即可獲得式(II)所示的本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽。另外，當X為氯的情況下，通過縮合反應可以直接獲得本發明的目的產物(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，無需進一步的酸化步驟。
在拆分側鏈堿I的時候，可以采用常規拆分方法，如采用與光學活性酸反應生成非對映異構體鹽，根據生成的鹽的溶解度差異，實現消旋側鏈堿I的拆分。作為所采用的光學活性的酸，例如有L-酒石酸、L-二乙酰酒石酸、L-二苯甲酰酒石酸、L-樟腦磺酸、D-谷氨酸等。從原料的易得、價格等方面考慮，優選L-酒石酸。
另外，除了拆分側鏈堿I以外，也可以首先拆分式(VII)表示的外消旋酸(以下簡稱側鏈酸II)或其反應性衍生物(如酰鹵化物、酸酐、酯等)， 得到式(VIII)表示的(+)側鏈酸II或轉變為其反應性衍生物(如酰鹵化物、酯等)， 然后與另外制備的式(IX)表示的中間體III反應， 得到式(VI)所示的(+)多沙唑嗪游離堿或者鹽，
將式(VI)的游離堿用例如HCl-甲醇或者HCl-乙醇等溶液酸化，即可獲得式(II)所示的本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽。另外，當(+)側鏈酸II的反應性衍生物為酰氯的情況下，通過縮合反應可以直接獲得本發明的目的產物(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，無需進一步的酸化步驟。
上述側鏈酸II的反應性衍生物，例如側鏈酸與其它酸形成的復合酸酐如低級烷酸酐、碳酸單酯酐等，與N-琥珀酰亞胺、鄰苯二甲酰亞胺等成的酯、酰氯、酰溴等酰鹵化物。
側鏈酸II的拆分方法，可以采用常規方法，例如與光學活性的堿反應，形成非對映異構體鹽，根據生成的鹽的溶解度差異，實現消旋側鏈酸II的拆分。作為可采用的光學活性的堿，例如常用的光學活性生物堿如番木鱉堿、馬錢子堿、喹寧、奎尼丁、咖啡堿、麻黃堿、D或L-α-苯乙胺、D或L-苯基異丙胺等。
通過后續的實驗例可以證實，在α1受體的特異性阻斷劑(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽和(-)多沙唑嗪鹽酸鹽中，多沙唑嗪鹽酸鹽對映體對心血管系統α1受體的阻斷作用具有立體選擇性，其中(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的作用最強。在目的為特異性地治療治療高血壓的時候，優選使用(+)多沙唑嗪及其鹽。
因此，本發明還涉及特異性治療高血壓病的多沙唑嗪制劑，其中含有(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，且實質上不含(-)多沙唑嗪。
本發明的特異性治療高血壓病的多沙唑嗪制劑中所含有(+)多沙唑嗪鹽酸鹽如前所定義，其中的實質上不含(-)多沙唑嗪與前面的敘述也相同。
在用于特異性治療高血壓的時候，本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的用法、用量等雖然與疾病的癥狀、患者的年齡、種族等有關；但是一般來說，對于一般體重(大約60～80kg)的患者，每日劑量0.8-3.0mg左右，每日1次或分2～3次服用。
對于給藥方式來說，可以采用口服或非經腸道給藥方式，優選采用口服制劑。當然，也可以采用貼劑、栓劑以及各種DDS(藥物釋放系統)給藥制劑，以提高藥物的釋放均勻性，實現緩釋或者減少首過效應等。
對于口服制劑來說，可以采用片劑、膠囊劑、糖錠劑、顆粒劑、混懸劑或者乳劑等劑型。
上述藥物制劑應當含有各種制劑所必需的藥用輔料，采用常規方法或者與具體劑型相應的制備方法加以制備。因為各種藥物輔料和制劑方法屬于本領域的常識，本發明中不擬對此做出限定。
例如，對于制備片劑或者膠囊劑來說，其制備工藝包括將本發明的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽與賦形劑相混合，制成軟材，造粒，然后裝膠囊或者與潤滑劑等混合打片得到相應的膠囊或者片劑。另外，根據情況，也可以將(+)多沙唑嗪鹽酸鹽與賦形劑的混合物不經造粒直接壓片。
在此，賦形劑包括各種常規的片劑或者膠囊劑中所用的成分，填充劑、崩解劑、粘合劑等。
在此，填充劑如淀粉、乳糖、微晶纖維素、糊精、甘露醇、氧化鎂、硫酸鈣等常用填充劑。崩解劑如羧甲基纖維素(及其鹽如鈉鹽)、交聯羧甲基纖維素(及其鹽如鈉鹽)、交聯聚維酮、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等常用崩解劑。粘合劑如聚維酮(PVP)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、淀粉漿等常用粘合劑。潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣等。
另外，也可以根據具體情況，使用可以賦予片劑或者膠囊劑特定釋放特性的輔料。
由于本發明的制劑中(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的用量較小，因此，為了保證藥物的均勻度等，在與賦形劑混合制軟材之前，也可以預先將(+)多沙唑嗪鹽酸鹽用制造片劑或者膠囊的賦形劑或者其他藥用輔料稀釋，制成倍散后使用。
以下舉出制備例、實驗例和實施例對本發明進行進一步說明。
本發明中除非特別說明，所有的百分比均為重量百分比。
制備例1(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的制備1(1)消旋N-(1，4-苯并二氧六環-2-羰基)哌嗪的制備14.22g(50mmol)N-(1，4-苯并二氧六環-2-羰基)哌嗪鹽酸鹽，4g(100mmol)NaOH溶于40ml水中，用40ml二氯甲烷萃取3次，蒸干后得8.84g固體混旋側鏈堿I。摩爾收率71％。
(2)消旋N-(1，4-苯并二氧六環-2-羰基)哌嗪的拆分12.4g(50mmol)消旋側鏈堿I(N-(1，4-苯并二氧六環-2-羰基)哌嗪)溶于80ml甲醇中，加入到溶有7.5g L-酒石酸的30ml水溶液中，室溫下加入少量晶種攪拌結晶24hr，過濾得約4.52g(+)側鏈堿的酒石酸鹽。[α]＝+24～+27°(c＝1，H2O)，摩爾收率46％。
上面獲得的(+)側鏈堿I的酒石酸鹽4.0g，加入95％乙醇16ml和水4ml重結晶，收量3.2g，[α]＝+30.5°(c＝1，H2O)。
按上述步驟再次重結晶。[α]＝+32.0°(c＝1，H2O)。
(3)(+)側鏈堿I(N-(1，4-苯并二氧六環-2-羰基)哌嗪))的制備上述經二次純化的(+)側鏈堿I的酒石酸鹽5g，加入30ml水，NaOH0.6g，溶解后，用30ml二氯甲烷萃取3次，加入硫酸鈉干燥，蒸干后得1.0g固體(+)側鏈堿I。
(4)(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的合成30ml正丁醇中加入1.27克2-氯-4-氨基-6，7，-二甲氧基喹唑啉，1.4克(+)側鏈堿I(N-(1，4-苯并二氧六環-2-羰基)哌嗪)，加熱回流4小時，冷卻后過濾，然后用乙酸乙酯洗滌。50℃真空干燥。得2.5克(+)多沙唑嗪鹽酸鹽。
所得化合物分別進行X射線粉末衍射、熔點、旋光、紅外光譜的測定。
X射線粉末衍射日本Rigaku D/max-2400型粉末X射線衍射儀，CuKα1輻射，石墨單色器，40KV，120mA，2θ掃描范圍3-80°，掃描速度8°/分，步長0.02°；熔點儀瑞BUCHI公司，B-540型熔點儀。
旋光度測定儀器PERKIN-ELMER 241型、溶劑DMSO(二甲基亞砜)、濃度1mg/ml。
溫度20±0.5℃紅外測定 儀器Nicolet Magna-IR 550型KCl片熔點265.9-266.6℃旋光度[α]+65.6紅外光譜見圖5X-射線粉末衍射見圖6如上所述，經過手性拆分和合成，獲得了III型結晶的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽。
制備例2晶型I的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的制備0.2克上述制備例1所得的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽加10ml水中，加熱回流溶解后，迅速冷卻結晶。過濾后50℃真空干燥。得0.12克(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，為晶型I。
熔點沒有固定的熔點旋光度[α]+65.6紅外光譜見圖1X-射線粉末衍射見圖2制備例3晶型II的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的制備0.2克上述制備例1所得的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽加入10ml水中，加熱回流溶解后，60℃過濾結晶。過濾后50℃真空干燥。得0.18克(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，為晶型II。
熔點266.1-267.6℃旋光度[α]+65.6
紅外光譜見圖3X-射線粉末衍射見圖4實驗例1多沙唑嗪及其對映體對兔血管α1受體的阻斷特性本實驗例通過兔離體胸主動脈、頸總動脈等模型，研究了α1受體阻斷劑(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽及其對映體(鹽酸鹽)對心血管α1受體的阻斷作用及其在血管上的藥理學特性。
實驗方法新西蘭種白兔，雄性，體重2.5～3.5Kg，由河北醫科大學實驗動物中心提供。
(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽，市售品；(+)多沙唑嗪鹽酸鹽和(-)多沙唑嗪鹽酸鹽按照制備例1方法制得；鹽酸地昔帕明、鹽酸普萘洛爾、醋酸去氧皮質酮、哌唑嗪鹽酸鹽和重酒石酸去甲腎上腺素(NA)購自Sigma公司。除醋酸去氧皮質酮溶于1，2-丙二醇外，其他試藥溶解于雙重蒸餾水中。
由兔耳靜脈注射戊巴比妥鈉淺麻醉后，放血處死動物。立即取出胸主動脈、頸總動脈、耳動脈、腸系膜動脈和肺動脈，剝離脂肪和其他結締組織。為了避免血管內皮對實驗結果的影響，以表面粗糙的聚乙烯插管(外徑略小于血管內徑)小心摩擦血管內腔去除內皮。動脈環標本(長度為4mm)管腔中平行穿入兩個鎢絲環，一環固定于10ml浴槽下方的固定支撐點上，另一個鎢絲環連接于浴槽上方的張力傳感器，傳感器連接于四道生理記錄儀(ERT-884型，河南開封友林電子有限公司)。
于胸主動脈、頸總動脈、耳動脈、腸系膜動脈和肺動脈標本分別施以4.0g、3.0g、2.0g、1.5g和2.5g的前負荷，并使標本在營養液中平衡1.5h。營養液成分(mmol·L-1)為NaCl 133，KCl 4.7，NaH2PO41.35，NaHCO316.3，MgSO40.61，glucose 7.8and CaCl22.52，pH7.2。營養液保溫37℃±0.5，持續通含95％O2+5％CO2混合氣。實驗開始前加入去甲腎上腺素(NA)預收縮血管，待張力穩定后，加入乙酰膽堿(Ach)1mol·L-1以檢查內皮功能的有無，該濃度的Ach不產生任何舒張反應作為完全去除內皮的指標。
在浴槽溶液中，加入鹽酸地昔帕明(10-7mol·L-1)、醋酸去氧皮質酮(5×10-6mol·L-1)和鹽酸普萘洛爾(10-6mol·L-1)，分別阻斷NA的再攝取以及β受體。每個標本作6次NA累積量效曲線，棄去第1、2次的實驗結果，并在進行第4、5、6次實驗前30分鐘，將三個不同濃度(0.03，0.1和0.3μmol·L-1)的(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽分別加入浴槽溶液。每個標本只給一種阻斷劑。使用PHARM/PCS程序(第四版)中的Schild Plot計算pA2值。實驗中的樣本數見各表。
1.(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽對去甲腎上腺素(NA)誘發兔胸主動脈收縮的影響在給予各種多沙唑嗪之前，各組胸主動脈NA量效曲線的Emax和EC50值無明顯差異(P＞0.05)。各組分別給予(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽0.03、0.1、0.3mol·L-1后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線平行右移，但Emax不變(P＞0.05)。(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的Schild plot的斜率等于1(P＞0.05)，表明三種阻斷劑抑制NA收縮反應的作用方式為競爭性拮抗。(+)多沙唑嗪的pA2值明顯大于(±)多沙唑嗪的pA2值，而(-)多沙唑嗪的pA2值明顯小于(±)多沙唑嗪的pA2值，結果見表1。
2.(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽對去甲腎上腺素(NA)誘發兔頸總動脈收縮的影響在給予各種多沙唑嗪之前，各組胸主動脈NA量效曲線的Emax和EC50值無明顯差異(P＞0.05)。分別給予三個不同濃度(0.03、0.1、0.3μmol·L-1)的(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線均呈現平行右移，Emax值不變(P＞0.05)。(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的Schild plot斜率等于1(P＞0.05)，表明三種阻斷劑抑制NA收縮反應的作用方式為競爭性拮抗。(+)多沙唑嗪的pA2明顯大于(±)多沙唑嗪，而(-)多沙唑嗪的pA2值明顯小于(±)多沙唑嗪，結果見表1。
表1多沙唑嗪及其對映體對兔離體胸主動脈和頸動脈的pA2值

均值±標準差，**P＜0.01與(±)多沙唑嗪比較。
3.(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽對去甲腎上腺素(NA)誘發兔耳動脈收縮反應的影響給予哌唑嗪(Pra)鹽酸鹽1、10、100nM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線右移，Schild plot分析結果表明，Pra的作用為非競爭性拮抗(斜率小于1)。給予(+)多沙唑嗪鹽酸鹽0.03、0.1、0.3μM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線平行右移，Emax值不變，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的Schild plot的斜率等于1(P＞0.05)。給予(-)多沙唑嗪鹽酸鹽0.03、0.1、0.3μM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線平行右移，Emax值不變，(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的Schildplot的斜率等于1(P＞0.05)。此外，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的pA2值明顯大于(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的pA2值，結果見表2。
表2多沙唑嗪對映體對兔離體耳動脈的pA2值

均值±標準差，**P＜0.01與(+)多沙唑嗪比較，▲▲P＜0.01與1比較。
4.(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽對去甲腎上腺素(NA)誘發兔腸系膜動脈收縮反應的影響給予Pra 1、10、100nM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線平行右移，Emax值不變(P＞0.05)，Pra的Schild plot的斜率等于1。給予(+)多沙唑嗪鹽酸鹽0.03、0.1、0.3μM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線平行右移，Emax值不變，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的Schild plot的斜率等于1。給予(-)多沙唑嗪鹽酸鹽0.03、0.1、0.3μM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線平行右移，Emax值不變，(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的Schild plot的斜率等于1。此外，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的pA2值明顯大于(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的pA2值，結果見表3。
表3多沙唑嗪對映體對兔離體腸系膜動脈的pA2值

均值±標準差，**P＜0.01與(+)多沙唑嗪比較。
5.(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽對去甲腎上腺素(NA)誘發兔肺動脈收縮反應的影響給予Pra 1、10、100nM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線右移，Schild plot分析結果表明，Pra的作用屬非競爭性拮抗(斜率小于1)。給予(+)多沙唑嗪鹽酸鹽0.03、0.1、0.3μM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線平行右移，Emax值不變，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的Schild plot的斜率等于1。給予(-)多沙唑嗪鹽酸鹽0.03、0.1、0.3μM后，隨著阻斷劑濃度增加，NA量效曲線平行右移，Emax值不變，(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的Schild plot的斜率等于1。此外，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的pA2值明顯大于(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的pA2值，結果見表4。
表4多沙唑嗪對映體對兔離體肺動脈的pA2值

均值±標準差，**P＜0.01與(+)多沙唑嗪比較，▲▲P＜0.01與1比較。
從上述表1～4所示結果可見，在兔離體胸主動脈、頸總動脈、兔耳動脈、腸系膜動脈和肺動脈，多沙唑嗪及其對映體三種阻斷劑拮抗NA誘發收縮反應的pA2值不同，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的pA2值明顯高于其消旋體及(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的pA2值。因此，各對映體對兔動脈血管平滑肌α1受體的阻斷作用具有立體選擇性，其中(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的作用最強。
實驗例2多沙唑嗪及其對映體對麻醉大鼠血壓及心室內壓的影響實驗方法雄性Wistar大鼠，體重250～300g，由河北醫科大學實驗動物中心提供。
試劑同實驗例1。
頸總動脈血壓的測定雄性Wistar大鼠，用25％烏拉坦(2g/kg，其中1g/kg皮下注射，1g/kg腹腔注射)麻醉，仰臥固定，頸前正中做縱行皮膚切口，行氣管插管以保持呼吸道通暢，用鑷子分離筋膜、肌間隙，游離出左側頸總動脈后，細線結扎遠心端，動脈夾固定近心端。用眼科剪刀在動脈壁上作一小切口，將充有肝素(25kU/L)生理鹽水的硬質聚乙烯導管(內徑1mm)插入動脈，細絲線結扎固定，管的另一側經三通、壓力換能器與八道生理記錄儀相連，用于測定頸總動脈血壓。將心電電極與一鋼針用膠布纏繞固定，鋼針刺入大鼠四肢皮下，引導心電，用于測定心率。5號半輸液針頭通過膠管與另一個三通相連。左后肢股靜脈處做縱行皮膚切口，暴露股靜脈，將5號半輸液針頭刺入股靜脈，膠布固定，以備靜脈給藥用。
左心室內壓的測定雄性Wistar大鼠，用25％烏拉坦(2g/kg，其中1g/kg皮下注射，1g/kg腹腔注射)麻醉，仰臥固定，于頸前正中皮膚做縱行切口，做氣管插管，分離右側頸總動脈后，結扎其遠心端。把聚乙烯導管(內徑1mm)用肝素(25kU/L)生理鹽水充滿后經三通與壓力換能器和八道生理記錄儀相連。以動脈夾夾住頸總動脈近心端，用眼科剪刀在動脈壁上作一小切口，將液體石蠟潤滑外壁的上述聚乙烯導管插入頸總動脈，并用細線結扎在頸總動脈上，既使切口處不漏血，又讓導管自由推進。之后打開動脈夾，從顯示器上可看到動脈血壓波形，待動脈血壓穩定后，將頸總動脈內的聚乙烯導管順著主動脈(在主動脈瓣開放時)插入左心室；導管進入左心室的瞬間，血壓突然下降，脈壓差明顯加大；固定聚乙烯導管，待穩定后，測定左心室內壓。心電電極與鋼針相連，把鋼針刺入大鼠四肢表皮下，引導心電，用于測定心率。5號半輸液針頭通過膠管與另一個三通相連，其中充有已排空氣泡的生理鹽水。左后肢骨靜脈處做縱行皮膚切口，暴露股靜脈，將5號半輸液針頭刺入股靜脈，膠布固定，備靜脈給藥用。
1.(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽和(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽對麻醉大鼠頸總動脈壓的影響(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽劑量依賴性地降低頸總動脈收縮壓，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的最大降壓幅度明顯大于(-)多沙唑嗪鹽酸鹽。(+)多沙唑嗪鹽酸鹽對頸總動脈舒張壓的降低作用顯著強于對收縮壓的作用，而(-)多沙唑嗪鹽酸鹽無此現象。(+)多沙唑嗪鹽酸鹽對舒張壓的最大降壓幅度明顯大于(-)多沙唑嗪鹽酸鹽。降壓的強度按從高到低的順序排列依次是(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽和(-)多沙唑嗪鹽酸鹽。以平均動脈壓的下降百分比計算ED30值時，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽和(-)多沙唑嗪鹽酸鹽的ED30值依次為15.64±9.40nmol/kg(均值±標準差)、45.93±20.61nmol/kg和128.81±35.70nmol/kg，三種藥物ED30的比值為1∶2.94∶8.24，提示(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的降壓效果顯著高于(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽與(-)多沙唑嗪鹽酸鹽。結果見表5和表6。
表5多沙唑嗪及其對映體對麻醉大鼠頸動脈收縮壓的影響

*P＜0.05，**P＜0.01與對照組比較；△p＜0.05，△△P＜0.01與(+)多沙唑嗪比較；n＝8。
表6多沙唑嗪及其對映體對麻醉大鼠頸動脈舒張壓的影響

*P＜0.05，**P＜0.01與對照組比較；△△P＜0.01與(+)多沙唑嗪比較；n＝8。
2.(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪甲磺酸鹽和(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽對麻醉大鼠左心室內壓的影響(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽和(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽均劑量依賴性地降低左心室收縮壓，250nmol/kg時的作用最強(表7)。同劑量的三種藥物，其左心室收縮壓的抑制強度從強到弱限次是(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽和(-)多沙唑嗪鹽酸鹽。大鼠左心室瞬時壓力(±dp/dt)隨著藥物劑量的增加，±dp/dt的絕對值逐漸減少，250nmol/kg時的作用最強。三種藥物抑制±dp/dt的強度是(+)多沙唑嗪鹽酸鹽＞(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽＞(-)多沙唑嗪鹽酸鹽。(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽和(-)多沙唑嗪鹽酸鹽股靜脈給藥后，除了(+)多沙唑嗪鹽酸鹽250nmol/kg顯著降低心率(P＜0.01)之外，其他劑量和其他兩個藥物對大鼠心率的作用無統計學意義(P＞0.05)。
表7多沙唑嗪及其對映體對麻醉大鼠左心室壓的影響

*P＜0.05，**P＜0.01與對照組比較；△P＜0.05，△△P＜0.01與(+)多沙唑嗪比較；n＝8。
結論(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽和(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽對麻醉大鼠心血管系統的作用存在明顯差異。三種藥物對大鼠的降壓作用和心臟抑制作用的強度，從高到低依次是(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(-)多沙唑嗪鹽酸鹽。因此，多沙唑嗪對映體對麻醉大鼠心血管系統α1受體的阻斷作用具有立體選擇性，其中(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的作用最強。
實驗例3(+)多沙唑嗪鹽酸鹽治療高血壓最佳劑量的研究試驗方法雄性Wistar大鼠，體重250～300g，由河北醫科大學實驗動物中心提供。
試劑同實驗例1。
1.麻醉大鼠頸總動脈血壓測定 同前。
2.麻醉大鼠左心室內壓測定 同前。
3.劑量設定(±)多沙唑嗪甲磺酸鹽、(+)多沙唑嗪鹽酸鹽和(-)多沙唑嗪鹽酸鹽均采用灌胃給藥。每只大鼠只給一個劑量，給藥后連續觀察并記錄動脈平均壓和左室內壓的變化，記錄最大反應，并計算最大反應的百分率。實驗分五個劑量組0.05mg/kg、0.08mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg和0.4mg/kg，每個劑量組5只大鼠。按照大鼠與人的劑量進行折算(人用量mg/60kg＝大鼠劑量mg/kg÷5.4×60)，上述五個劑量分別相當于臨床人用量(口服劑量)為0.5mg/60kg、0.8mg/60kg、2mg/60kg、3mg/60kg和4mg/60kg。
實驗結果見表7和表8。
1藥物對醉大鼠頸總動脈血壓的影響表7多沙唑嗪及其對映體對麻醉大鼠頸動脈平均動脈壓的影響

*P＜0.05，**P＜0.01與給藥前比較；△p＜0.05，△△P＜0.01與R(+)多沙唑嗪比較；n＝5。
2藥物對麻醉大鼠左心室內壓的影響表8多沙唑嗪及其對映體對麻醉大鼠左心室內壓的影響

*P＜0.05，**P＜0.01與給藥前比較；△P＜0.05，△△P＜0.01與(+)多沙唑嗪比較；n＝5。
結論根據上述3個實驗的結果可以推知，臨床成人每日口服(+)多沙唑嗪鹽酸鹽0.8mg、2mg、3mg及4mg時，均可降低血壓，而且藥物的效果隨劑量增加而增強。同時，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽2mg、3mg及4mg/日(給大鼠灌胃(+)多沙唑嗪鹽酸鹽0.2、0.3、0.4mg/kg，相當于成人用量2、3、4mg/日)的降壓作用明顯強于等劑量(±)多沙唑嗪鹽酸鹽。此外，(+)多沙唑嗪鹽酸鹽0.05、0.08、0.2、0.3、0.4mg/kg的心臟抑制作用與等劑量(±)多沙唑嗪鹽酸鹽相同。故成人每日口服(+)多沙唑嗪鹽酸鹽治療高血壓的最佳臨床劑量范圍是0.8mg～3mg。
實施例1(+)多沙唑嗪鹽酸鹽片劑的制備1(+)多沙唑嗪鹽酸鹽 3％乳糖40％淀粉33％微晶纖維素 20％交聯羧甲基纖維素鈉 3％5％PVP乙醇溶液 適量硬脂酸鎂 1％實施例2(+)多沙唑嗪鹽酸鹽片劑的制備2(+)多沙唑嗪鹽酸鹽 1％乳糖 42％淀粉 33％微晶纖維素 20％交聯羧甲基纖維素鈉 3％5％PVP乙醇溶液 適量硬脂酸鎂 1％實施例1、2的制備步驟將(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、乳糖、微晶纖維素以及1％交聯羧甲基纖維素鈉過篩混勻，以5％PVP 乙醇溶液為黏合劑制軟材，制粒、干燥、整粒，再加入2％交聯羧甲基纖維素鈉和硬脂酸鎂，混勻，壓片。
實施例3(+)多沙唑嗪鹽酸鹽膠囊的制備1(+)多沙唑嗪鹽酸鹽 3％淀粉54％乳糖42％5％PVP乙醇溶液 適量硬脂酸鎂1％實施例4(+)多沙唑嗪鹽酸鹽膠囊的制備2(+)多沙唑嗪鹽酸鹽 1％淀粉56％乳糖42％5％PVP乙醇溶液 適量硬脂酸鎂1％實施例3、4的制備步驟將(+)多沙唑嗪鹽酸鹽、淀粉、乳糖過篩混勻，以5％PVP乙醇溶液為粘合劑制軟材、制粒、干燥，整粒，加硬脂酸鎂混勻，裝入膠囊(實施例3裝3號膠囊、實施例4裝4號膠囊)。
權利要求
1.(+)多沙唑嗪鹽酸鹽。
2.如權利要求1所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為在2θ角為6.7°、7.8°和25.8°左右處具有衍射峰的I型結晶。
3.如權利要求2所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為具有圖2所示的X-射線衍射模式的結晶。
4.如權利要求1所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為在2θ角為20.3°、22.5°、28.0°和31.9°左右具有衍射峰的II型結晶。
5.如權利要求4所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，其衍射峰相對強度最大的峰位于2θ角22.5°左右。
6.如權利要求4所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為具有圖4所示的X-射線衍射模式的結晶。
7.如權利要求1所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為在2θ角為11.3°、12.7°和23.7°左右處具有衍射峰的III型結晶。
8.如權利要求7所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，衍射峰相對強度最大的峰位于2θ角11.3度左右。
9.如權利要求7所述的(+)多沙唑嗪的鹽酸鹽，為具有圖6所示的X-射線衍射模式的結晶。
10.特異性治療高血壓的多沙唑嗪制劑，其中含有根據權利要求1的(+)多沙唑嗪鹽酸鹽，且實質上不含(-)多沙唑嗪。
全文摘要
(+)多沙唑嗪鹽酸鹽及其多晶型化合物，含有該(+)多沙唑嗪鹽酸鹽的特異性治療高血壓的多沙唑嗪制劑。
文檔編號C07D319/16GK1769285SQ200410064528
公開日2006年5月10日 申請日期2004年11月5日 優先權日2004年11月5日
發明者任雷鳴, 牛長群, 李彩輝, 劉慶彬, 賀建功 申請人:華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司