專利名稱：咪唑并硒唑類化合物及其預防和/或者治療與蛋白老化相關疾病的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及取代咪唑并硒唑類化合物、其幾何異構體及其藥學上可接受的鹽、它們的制備方法，含有它們的藥用組合物。本發明還涉及所述化合物用于(i)增加皮膚彈性或者減少皮膚皺紋，預防或者治療(ii)非胰島素依賴型糖尿病；(iii)糖尿病的并發癥；(iv)腎臟損傷；(v)血管損傷或者預防或治療血管硬化；(vi)高血壓；(vii)視網膜病變；(viii)晶狀體蛋白損傷；(ix)白內障；(x)周圍神經病變；(xi)吸煙引起的肺AGEs的形成，以及由此產生的肺纖維化、呼吸窘迫等肺部疾病；(xii)骨關節炎；或者用于口腔局部用藥用于防止或逆轉牙齒著色的用途；或者用于各種食物用植物或動物蛋白的保鮮用途。
背景技術：
早在1912年，Maillard發現葡萄糖和其他還原糖與氨基酸反應，經過一系列的脫氫重排形成了穩定的褐色色素，進一步的研究發現貯存和加熱食物也能夠產生這種由糖和多肽形成的色素，相應的這種色素的形成降低了蛋白的生物活性，相關的應用專利可以參考美國專利U.S.08/588249。這種非酶催化的還原糖和自由氨基酸的反應會形成一種穩定的二酮基的產物，就是已知的Amadori產物。特別是血紅素表面氨基酸的β側鏈殘基與葡萄糖反應生成血紅素A1c。體內其他蛋白也會發生這樣的反應，比如晶狀體，膠原蛋白和神經蛋白。(AdvancedGlycosylation；Chemistry，Bilolgy，and Implications for Diabetes andAging，Advances in Pharmacology，Vol.23，pp.1-34 Academic Press1992)
上述反應在糖尿病血糖水平增高的情況下會加速發生，正常血糖狀態下也會發生上述反應。同時衰老過程與脂褐素的形成密切相關，同樣膠原蛋白老化在體外可以用糖和膠原蛋白模擬。葡萄糖誘導的膠原產物被其他蛋白捕獲反應，這樣引起了蛋白之間的交聯反應。這種葡萄糖誘導的交聯反應所產生的就是晚期糖基化終產物(advancedglycosylation endproducts AGEs)，已知AGEs與糖尿病的并發作用相關，正常的衰老過程也引起AGEs的增加，體內的AGEs不僅由于其異常的病理化學結構而且還會被一些特定的受體識別從而引起復雜的糖尿病和衰老相關的病理改變。
目前，已經有一些抑制AGEs累積的療方法。其中一個方法見于U.S.4758583，其先導物氨基胍及其類似物可以抑制AGEs的形成，通過與早期糖基化產物反應從而阻止了糖基化產物進一步轉化而成為AGEs，同時也阻止了AGEs與組織進一步交聯。這個方法的有效性在糖尿病和老齡化大鼠的動物模型上進行了評價，同時也包括如大血管，腎臟，和神經病理方面的其他指標。Vlassara等人對這些數據進行了總結。(Vlassara et al，1994 Biology of Diseases.“Pathogeniceffects of advanced glycosylationbiochemical，biologic and clinicalimplications for diabetes and aging”Laboratory Investigation70138-151；Brownlee，1995，“The pathological implications of proteinglycation”Clin.Invest.Med.，18275-281；and Brownlee，1995，“Advanced protein glycosylation in diabetes and aging，”Ann.Rev.Med.46223-34.)另一種控制組織中AGEs的方法特別是在組織中已經形成并累積的AGEs交聯產物(這些交聯產物導致臨床或者亞臨床病理改變)的方法是逆轉或者裂解已經形成的AGEs交聯產物。Vassan等人證明這種裂解AGEs的方法是有效的。(vassan et al Nature.1996 Vol382(18)275-278)在美國專利U.S.5656261以及應用專利08/588249和08/848776中公布的化學實體，制劑，方法都可以在體內和體外裂解已經形成的AGEs交聯結構。研究表明這類化合物對于衰老造成的心血管疾病有良好的作用。(Wolffenbuttel et al.，1998，“Breakers ofAdvanced Glycation End Products Restores Large Artery Properitesin Experimental Diabetes”Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.954630-4634)在這些研究中9周的糖尿病大鼠給予AGEs裂解劑1-3周逆轉了由于糖尿病造成的大動脈硬化。改善的參數有心輸出量，外周阻力，體動脈順應性，主動脈輸入阻力，以及頸動脈順應性。(U.S.6319934)發明內容本發明的目的是尋找并且開發作用于AGEs的小分子裂解劑，用來裂解已經形成的AGEs從而阻止蛋白交聯，對已經交聯的蛋白裂解，從而促進蛋白的代謝，進一步改善由于AGEs在體內的增高導致的各種病理改變，包括增加皮膚彈性或者減少皮膚皺紋，治療糖尿病或者治療或緩解糖尿病的后遺癥，腎臟損傷，血管損傷，高血壓，視網膜病變，晶狀體蛋白損傷，白內障，周圍神經病，吸煙引起的肺AGEs的形成，以及由此產生的肺纖維化、呼吸窘迫等肺部疾病；或者骨關節炎。同時這種蛋白交聯結構裂解劑所作用的糖基化蛋白還不局限于人體蛋白，還包括糧食中的植物或者動物器官蛋白，因而可以擴展用于保鮮用途。
本發明已經發現通式I的化合物可以用于治療和/或預防由蛋白糖基化造成的多種疾病。
本發明涉及式I的化合物、其幾何異構體或其可藥用的鹽或水合物。
其中R1，R2獨立地選自氫；取代的或未取代的C5～C8的脂環基；取代或未取代的C1～C8直鏈或支鏈烷基；取代或未取代的C2～C8直鏈或支鏈烯基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基烷基；取代或未取代的C1～C4羧酰氨基烷基；取代或未取代的C1～C4烷基亞磺酰基；取代或未取代的C1～C4烷基磺酰基；取代或未取代的C3～C8環烷基；取代或未取代的C5～C8環烯基，以上所述的取代基選自下述一組中的至少一個取代基團氧、鹵素、氨基、羥基、巰基、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C3～C8環烷基、C5～C7環烯基，或者R4；取代或未取代的的C5～C14芳香基；取代或未取代的的C5～C6芳香磺酰基；取代或未取代的的C5～C6芳香亞磺酰基，這里的芳香基環中包含1～6個選自下面的雜原子O，S，N，Se；所述的取代基選自下述一組中的1-3個取代基團C1-6烷氧基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、全氟C1-6烷基、羧酰胺、羧酰胺基C1-6烷基、硝基、羧基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷巰基、C1-6烷基亞磺酰基、C1-6烷基磺酰基、氨磺酰基、脒基、二C1-6烷氨基、C1-6烷氨基、C1-6烷氨基C1-6烷基、芳胺基、氧、鹵素、氨基、羥基、巰基、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C3～C8環烷基，C5～C7環烯基、芳烷基或者R4，R3獨立選自氫；C1～C8直鏈或支鏈烷基；C2～C8直鏈或支鏈烯基或者R4，R4獨立選自取代或未取代的C5～C14芳香碳環或雜環，雜環中包含1～6個選自下面的雜原子O，S，N，Se；所述的取代基選自下述一組中的至少1-3個取代基團C1-6烷氧基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、全氟C1-6烷基、羧酰胺、羧酰胺基C1-6烷基、硝基、羧基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷巰基、C1-6烷基亞磺酰基、C1-6烷基磺酰基、氨磺酰基、脒基、二C1-6烷氨基、C1-6烷氨基、C1-6烷氨基C1-6烷基、芳胺基、烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、氧、鹵素、硝基、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基或氨基。
根據本發明的一個優選實施方案，本發明涉及通式I的化合物、其幾何異構體或其藥學上可用的鹽 R1獨立地選自氫；取代或未取代的C2～C8烷基；取代或未取代的C5～C10芳香基，以上所述的取代基選自下述一組中的1-3個取代基團甲氧基、鹵素、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基，R2獨立地選自氫；取代或未取代的C2C8直鏈或支鏈烷基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基；取代或未取代的的C5～C10芳香基；取代或未取代的C5～C10芳香磺酰基；取代或未取代的C5C10芳香亞磺酰基，以上所述的取代基選自下述一組中的1-3個取代基團甲氧基、鹵素、羥基、巰基、氰基，硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基，R3獨立選自氫；甲基；乙基；苯基，R4獨立選自取代的或未取代的苯環、萘環、噻吩、硒吩、呋喃或者吡咯，所述的取代基選自下述一組中的1-3個取代基團鹵素、硝基、羥基、羥甲基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、苯氧基、芐氧基、羧基或氨基。
根據本發明本發明式I化合物、其幾何異構體或其藥學上可接受的鹽優選下面表1中的化合物。
表1.式I咪唑并硒唑類化合物中優選的化合物
根據本發明，本發明更優選的式I化合物為6-(4-氟-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯6-(2，4-二氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯5，6-二苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯6-(2，4-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯6-(4-苯基-苯基)-4-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯。
本發明另一方面涉及制備通式I的化合物、其幾何異構體或其藥學上可接受的鹽的方法，其包括1)將硒脲或KSeCN/SiO2及NH4OAc/Al2O3與式VI的α-鹵代酮反應， 其中R1，R2同本發明中式I化合物的定義；Z為離去基團，選自F、Cl、Br或I，得到式III化合物 2)將式III化合物與式IV化合物在非質子傳遞溶劑中反應，
其中R3，R4同上述式I化合物中的定義；X為離去基團，選自F、Cl、Br或I，得到式I化合物 或，將式III化合物與式IV化合物在質子化溶劑中反應 其中R3，R4同上述式I化合物的定義；X為離去基團，選自F、Cl、Br或I，得到式V化合物， 將式V化合物與酸或堿反應，得到式I化合物 根據本發明，本發明式I化合物的制備可通過反應路線1-3更詳細說明反應路線1
在反應路線1中，將式VI的α-鹵代酮和硒脲溶解于適量的丙酮或甲醇或乙醇或水中，升溫至回流溫度反應8h左右，真空濃縮，得到粗品，用硅膠柱純化或者重結晶的方法得到式III化合物(可以參考Shafiee A，Ebrahimzadeh MA，Maleki A，J.Heherocyclic Chem，1999，36901-903；Hanson RN，Davis MA，J.Heherocyclic Chem，1981，18205-206，Moriarty BM，Vaid BK，Duncan MP et al，synthesis，1992，11845-846 et al.)化合物III和化合物IV在非質子傳遞溶劑，其包括二甲基吡咯二酮，二甲基甲酰胺，N-甲基吡啶，N-甲基吡咯，N-甲基吡咯烷酮(NMP)，乙腈等，優選乙腈中，加熱溫度為不低于60℃，不高于81.5℃，反應時間為不低于2min，最好不超過96h的條件下反應得到式I化合物。詳細的制備方法參見實施例4-20。
反應路線2
在反應路線2中，式III化合物制備如反應路線1所述，然后將化合物III和1.1倍量的化合物IV混和，加入適量的質子化溶劑，包括甲醇、乙醇、異丙醇等，最優選的為乙醇，80℃條件下攪拌反應，反應時間不低于1.5h，不超過24h。反應完畢，得到含有式V化合物的反應液。將式V化合物與酸反應，即將含有式V化合物的反應液冷卻到0℃，滴加等摩爾的酸(可為如無機酸，或有機酸，如硫酸，鹽酸，優選為濃鹽酸)，滴加完畢，于0℃繼續反應不低于1h，不超過3h。反應完畢，將反應混合物倒入冰水，中和到pH約為7，在用乙酸乙酯提取，酯層用無水硫酸鈉或者無水硫酸鎂干燥。然后，過濾得到酯層，蒸干得到粗品。粗品用硅膠層析的方法純化，這里所使用的硅膠為常規層析用硅膠，顆粒度10～40u，或者100-200目或者200-300目。洗脫劑由單一或者多種溶劑配制而成，優選由乙酸乙酯與石油醚(30-60℃石油醚或者60-90℃石油醚)或者與環己烷按不同比例(如1∶5-15，體積比)配制的混合溶劑。純化后得到本發明化合物I。或，將式V化合物與堿反應，即將含有式V化合物的反應液冷卻到0℃，滴加等摩爾的堿(可為無機堿或有機堿，如氨水，氫氧化鈉，氫氧化鉀，優選的為濃氨水)，滴加完畢，于0℃繼續反應不低于1h，不超過3h。反應完畢，將反應混合物倒入冰水，中和到pH約為7，在用乙酸乙酯提取，酯層用無水硫酸鈉或者無水硫酸鎂干燥。然后，過濾得到酯層，蒸干得到粗品。粗品用硅膠層析的方法純化，這里所使用的硅膠為常規層析用硅膠，顆粒度10～40u，或者100-200目或者200-300目。洗脫劑由單一或者多種溶劑配制而成，優選由乙酸乙酯與石油醚(30-60℃石油醚或者60-90℃石油醚)或者與環己烷按不同比例(如1∶5-15，體積比)配制的混合溶劑。純化后得到本發明化合物I。
反應路線3 在反應路線3中，將式VI的α-鹵代酮化合物 其中R1，R2同本發明中式I化合物的定義；Z為離去基團，選自F、Cl、Br或I；與固相在硅膠上硒氰化鉀(KSeCN/SiO2)和固相在三氧化二鋁上的乙酸銨(NH4OAc/Al2O3)，其中SiO2指常規用硅膠，顆粒度為10～40u，100目，100-200目，200-300目等，最優選的為100-200目；Al2O3(三氧化二鋁)指常用氧化鋁，最優選的為中性氧化鋁，粒度為100-200目，在惰性溶劑或者非質子傳遞溶劑中如苯，甲苯，乙苯和其它取代苯，二甲亞砜，二甲基吡咯二酮，二甲基甲酰胺，乙腈等，優選為甲苯和苯，在80℃反應，反應時間不低于4h，不超過24h得到式III化合物。
其中R1，R2同權利要求1中式I化合物的定義；C2和N原子之間的鍵為雙鍵；C4和C5之間的鍵為雙鍵。
制備固相在硅膠上的硒氰化鉀(KSeCN/SiO2)的方法為將KSeCN適量溶解于甲醇或者水或者乙醇中，一次性加入適量的100-200目的硅膠，混合物在室溫攪拌0.5h，然后旋轉蒸發減壓蒸除溶劑，浴溫不高于50℃，即得到固相在硅膠上硒氰化鉀(KSeCN/SiO2)。固相在硅膠上硒氰化鉀(KSeCN/SiO2)在使用前在25℃/20mmHg干燥，干燥時間不低于4h；制備固相在三氧化二鋁上的乙酸銨(NH4OAc/Al2O3)的方法為將醋酸胺適量溶解于甲醇或者水或者乙醇中，一次性加入適量的100-200目的Al2O3，混合物在室溫攪拌0.5h，然后旋轉蒸發減壓蒸除溶劑，浴溫不高于50℃，即得到固相在三氧化二鋁上乙酸銨(NH4OAc/Al2O3)。固相在三氧化二鋁上乙酸銨(NH4OAc/Al2O3)在使用前在25℃/10mmHg干燥，干燥時間不低于4h。
進一步講，式VI的α-鹵代酮或者具用α活潑氫的羰基化合物與固相在硅膠上的硒氰化鉀(KSeCN/SiO2)和固相在三氧化二鋁上的乙酸銨(NH4OAc/Al2O3)反應得到式III化合物的更詳細描述如下將3mmol的式VI化合物，5mmol的KSeCN/SiO2和6mmol的NH4OAc/Al2O3混合均勻，在適量的惰性溶劑或非質子傳遞溶劑(優選是甲苯)中，在80℃加熱攪拌反應不低于4h，不超過24h。反應結束，過濾除去殘留固體。濾液蒸干得到粗產物。粗產物重結晶或者使用硅膠柱層析處理提純。這里所使用的硅膠為常規層析用硅膠，顆粒度10～40u，200-300目，100-200目；洗脫劑由單一或者多種溶劑配制而成，優選由乙酸乙酯與石油醚(30-60℃石油醚或者60-90℃石油醚)或者與環己烷按不同比例(1∶5-15)配制的混合溶劑。純化后得到本發明式III化合物。
其中R1，R2同本發明中式I化合物的定義；C2和N原子之間的鍵為雙鍵；C4和C5之間的鍵為雙鍵。
所得式III化合物可按反應路線1中相應步驟與式IV化合物反應得到式I化合物，或式III化合物按反應路線2中相應步驟與式IV化合物反應先得到式V化合物，然后再由式V化合物轉化為式I化合物。
下表所列16個化合物作為式III化合物的舉例均按照上述方法合成(化合物a～p均經核磁和質譜結構確證)。
表2本發明權利要求8制備得到的式III化合物
本發明再一個方面涉及藥物組合物，其包括至少一種通式I咪唑并硒唑類化合物或其幾何異構體或其藥學上可接受的鹽以及藥用載體或賦形劑。
本發明中的藥用組合物可按本領域已知的方法制備，如將式I咪唑并硒唑類化合物、幾何異構體或其藥學上可接受的鹽與藥用載體或賦形劑混合。
本發明再一方面涉及至少一種式I咪唑并硒唑類化合物、幾何異構體或其藥學上可接受的鹽在制備用于預防和/或治療蛋白糖基化所導致的各種疾病的藥物的用途。
本發明還涉及預防和/或治療蛋白糖基化老化所導致的各種疾病的方法，其包括將預防和/或治療有效量的至少一種式I咪唑并硒唑類化合物、幾何異構體或其藥學上可接受的鹽給予需要預防和/或治療蛋白糖基化老化所導致的各種疾病的方法。
本發明所提到的糖基化蛋白不局限于人體蛋白，還包括食物中的植物或者動物器官蛋白，因而本發明公開的化合物或其組合物還可以用于食物的保鮮。
根據本發明，本發明化合物的可藥用鹽包括其無機鹽或有機鹽，其中鹽包括但不限于鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硝酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，乙酸鹽，丙酸鹽，丁酸鹽，草酸鹽，三甲基乙酸鹽，己二酸鹽，藻酸鹽，乳酸鹽，檸檬酸鹽，酒石酸鹽，琥珀酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，苦味酸鹽，天門冬氨酸鹽，葡糖酸鹽，苯甲酸鹽，甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽。
本發明所涉及的藥用組合物是在體內用于治療用，且具有生物相容性。藥用組合物是指本發明所提及的有效治療量的制劑或者含有本發明化合物的可接受的藥用載體，藥用載體可按本發明所涉及的用途和/或具體的劑型選擇。藥用組合物可以根據不同給藥方法而制備成各種形式。本發明所提及的化合物也可以被制備成各種藥學可接受的鹽。
根據本發明，本發明的藥用組合物包括有效劑量的本發明式I咪唑并硒唑類化合物、幾何異構體或其藥學上可接受的鹽和一種或多種適宜的可藥用載體。這里的藥用載體包括但不限于離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，緩沖物質如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質，如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素物質，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蜂蠟，羊毛脂。
本發明化合物是一類強效交聯蛋白裂解劑，與美國專利US 5656267中優選ALT-711相比，本發明化合物有更好的裂解能力。裂解糖基化老化蛋白可以用于但不局限于(i)增加皮膚彈性或者減少皮膚皺紋；預防或者治療(ii)非胰島素依賴型糖尿病；(iii)糖尿病的并發癥；(iv)腎臟損傷；(v)血管損傷或者預防或治療血管硬化；(vi)高血壓；(vii)視網膜病變；(viii)晶狀體蛋白損傷；(ix)白內障；(x)周圍神經病變；(xi)吸煙引起的肺AGEs的形成，以及由此產生的肺纖維化、呼吸窘迫等肺部疾病；(xii)骨關節炎；或者用于各種食物中植物動物蛋白的保鮮用途。
本發明可以擴展應用于阻止或逆轉由于口腔中的非酶促糖基化反應導致的牙齒著色或變色。含有本發明的化合物的用藥方案可以根據所提及的用途進行變化。
發生在口腔中的非酶促反應可以導致牙齒著色。目前所使用的抗蛀蝕劑可以加速這種碳基化反應進一步導致了牙齒的著色。最近一類有抗蛀蝕功能的陽離子殺菌劑用于常規口腔清洗。這些陽離子抗菌劑有阿萊西丁，十六烷基吡啶氯酸鹽等等。而這些制劑可以加速糖基化反應中關鍵的一步Maillard反應，進而加速牙齒的著色(Nordbo，J.Dent.Res.，581429(1979))。并且有報道在體外觀察到了洗必泰和潔而滅能夠催化糖基化反應(褐化反應)。由于Maillard反應，洗必泰加入糖和氨基酸的混合物中加速了色素的形成。
基于上述原因，本發明所涉及的化合物及其藥用組合物可以用于口腔。特別是用于口腔清洗液和牙膏中的添加劑。
在有關本發明所述化合物的上述用途中，無毒并且藥學上可接受的載體可以采用方便的形式應用于潔口液和牙膏中。
根據本發明，本發明所述化合物的藥用組合形式可以以下面的任意方式施用口服，噴霧吸入，直腸用藥，鼻腔用藥，頰部用藥，局部用藥，非腸道用藥，如皮下，靜脈，肌內，腹膜內，鞘內，心室內，胸骨內和顱內注射或輸入，或借助一種外植儲器用藥。其中優選口服，腹膜內或靜脈內用藥方式。
當口服用藥時，本發明化合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不局限于片劑，膠囊，水溶液或水懸浮液。其中，片劑一般使用的載體包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入潤滑劑如硬脂酸鎂。膠囊制劑一般使用的稀釋劑包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通常是將活性成分與適宜的乳化劑和懸浮劑混合使用。如果需要，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑，芳香劑或著色劑。
當局部用藥時，特別是治療局部外敷容易達到的患面或器官，如眼睛，皮膚或下腸道神經性疾病時，本發明所述化合物可根據不同的患面或器官制成不同的局部用藥制劑形式，具體說明如下當眼部局部施用時，本發明化合物可配制成一種微粉化懸浮液或溶液的制劑形式，所使用載體為等滲的一定pH的無菌鹽水，其中可加入也可不加防腐劑如氯化芐基烷醇鹽。此外對于眼用，也可將化合物制成膏劑形式如凡士林膏。
當皮膚局部施用時，本發明化合物可制成適當的軟膏，洗劑或霜劑制劑形式，其中活性成分懸浮或溶解于一種或多種載體中。這里軟膏制劑可使用的載體包括但不限于礦物油，液體凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蠟和水；洗劑或霜劑可使用的載體包括但不限于礦物油，脫水山梨糖醇單硬脂酸酯，吐溫60，十六烷酯蠟，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，芐醇和水。
本發明化合物還可以無菌注射制劑形式用藥，包括無菌注射水或油懸浮液，或無菌注射溶液。其中，可使用的載體和溶劑包括水，林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發油也可用作溶劑或懸浮介質，如單甘油酯或二甘油酯。
另外需要指出，本發明化合物針對不同患者的特定使用劑量和使用方法決定于諸多因素，包括患者的年齡，體重，性別，自然健康狀況，營養狀況，化合物的活性強度，服用時間，代謝速率，病癥的嚴重程度以及診治醫師的主觀判斷。使用劑量介于0.01～100mg/kg體重/天，其中一般可在20mg/kg-30mg/kg。
具體實施例方式
實施例本發明可以通過下面的實施例得到說明，但是這些實施例對本發明不構成任何限制。
化合物熔點由SRY-1型熔點儀測定，溫度未經校正。1HNMR光譜由Bruker ARX 400或US Varian Unity Inova 600型核磁儀測定，質譜由Zabspect高分辨質譜儀測定。
實施例15-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑的合成取2.2g，15mmol的KSeCN(MW144.08)溶解于5ml的無水甲醇中，加入50ml的園底燒瓶中；一次性加入1.5g 100-200目的硅膠。然后旋轉蒸發減壓蒸除水分，浴溫不高于50℃。產物25℃/20mmHg干燥4h待用。醋酸胺7.7g(100mmol，MW77.08)溶解于甲醇，加入Al2O392.3g，混合物在室溫攪拌0.5h。然后蒸除甲醇，產物室溫真空干燥2h(15mmHg)，待用。
分別取5mmol的KSeCN/SiO2，6mmol的NH4OAc/Al2O3和3mmol的甲酰氯代乙酸甲酯，混合均勻，加入50ml甲苯為反應溶劑，于80℃下攪拌加熱反應6h。反應結束，過濾除去殘留固體。濾液蒸干得到粗產物。粗產物使用硅膠柱層析處理提純。洗脫劑為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，純化后得到5-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑。產率51.2％，mp202-203℃。
IR(KBr)3450cm-1；3260cm-1(NH2)；1695cm-1(C＝O)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.697(s，3H，CH3)；7.624(3，1H，H5)；8.151(s，2H，NH2).
FAB MSm/z＝206.1(100)[M+]元素分析，理論值C5H6N2O2Se(204.982)C，29.27；H，2.93；N，13.66實測值C，29.38；H，2.95；N，13.82實施例25-甲基-6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯
1g(4.88mmol)的5-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑溶解在30ml無水乙醇中，加熱到回流。取1.14g(5.37mmol)α-溴代苯丙酮溶解在5ml無水乙醇中，滴加到回流的反應液中，滴速為1d/s。滴加完畢，繼續在回流加熱4h。反應完畢，反應液冷卻到0℃，滴加2.2ml濃鹽酸，滴加完畢，于0℃繼續反應1h，反應完畢，將反應混合物倒入冰水，氨水中和到pH約為7，用乙酸乙酯提取，酯層用無水硫酸鈉干燥。過濾得到酯層，蒸干得到粗品。粗品用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，純化后得到白色絮狀結晶。產率63.13％，mp 190-192℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.648(s，3H)；3.874(s，3H，CH3O-)；7.310(t，J＝7.30Hz，1H)；7.446(t，J1＝7.55Hz，J2＝7.80Hz，2H)；7.715(d，J＝7.30Hz，2H)；8.783(s，1H)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝10.386(5-CH3)；52.792(CH3O-)；119.313(5-C)；121.222(ph，C)；126.692(ph，2CH)；126.912(ph，CH)；127.434(3-CH)；128.544(ph，2CH)；134.196(6-C)；142.024(8-C)；144.048(2-C)；162.683(C＝O)。
FAB MSm/z＝321.0(87)[M+]，303.1(52)，274.2(18)，239.0(17)，159.0(24)，132.9(100)元素分析，理論值C14H12N2O2Se(319.22)C，52.68；H，3.79；N，8.78實測值C，52.89；H，3.67；N，8.75實施例35-甲基-6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯1g(4.88mmol)的5-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑溶解在30ml無水乙醇中，加熱到回流。取1.14g(5.37mmol)α-溴代苯丙酮溶解在5ml無水乙醇中，滴加到回流的反應液中，滴速為1d/s。滴加完畢，繼續在回流加熱4h。反應完畢，反應液冷卻到0℃，滴加1ml濃氨水，滴加完畢，于0℃繼續反應1h，反應完畢，將反應混合物倒入冰水，用乙酸乙酯提取，酯層用無水硫酸鈉干燥。過濾得到酯層，蒸干得到粗品。粗品用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，純化后得到白色絮狀結晶。產率63.13％，mp 190-192℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.648(s，3H)；3.874(s，3H，CH3O-)；7.310(t，J＝7.30Hz，1H)；7.446(t，J1＝7.55Hz，J2＝7.80Hz，2H)；7.715(d，J＝7.30Hz，2H)；8.783(s，1H)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝10.386(5-CH3)；52.792(CH3O-)；119.313(5-C)；121.222(ph，C)；126.692(ph，2CH)；126.912(ph，CH)；127.434(3-CH)；128.544(ph，2CH)；134.196(6-C)；142.024(8-C)；144.048(2-C)；162.683(C＝O)。
FAB MSm/z＝321.0(87)[M+]，303.1(52)，274.2(18)，239.0(17)，159.0(24)，132.9(100)元素分析，理論值C14H12N2O2Se(319.22)C，52.68；H，3.79；N，8.78實測值C，52.89；H，3.67；N，8.75實施例45-甲基-6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯1g(4.88mmol)的5-甲氧甲酰基-2-氨基-1，3-硒唑溶解在30ml無水乙腈中，加熱到81.5℃回流。取1.14g(5.34mmol)α-溴代苯丙酮溶解在5ml無水乙腈中，滴加到回流的反應液中，滴速為1d/s。滴加完畢，繼續在81.5℃回流加熱8h。反應完畢，反應液蒸干得到棕色殘渣，加10ml甲醇溶解，使用硅膠柱層析處理提純。洗脫劑為乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3，純化后得到白色絮狀結晶。產率63.13％，mp 190-192℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δ＝2.648(s，3H)；3.874(s，3H，CH3O-)；7.310(t，J＝7.30Hz，1H)；7.446(t，J1＝7.55Hz，J2＝7.80Hz，2H)；7.715(d，J＝7.30Hz，2H)；8.783(s，1H)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝10.386(5-CH3)；52.792(CH3O-)；119.313(5-C)；121.222(ph，C)；126.692(ph，2CH)；126.912(ph，CH)；127.434(3-CH)；128.544(ph，2CH)；134.196(6-C)；142.024(8-C)；144.048(2-C)；162.683(C＝O)。
FAB MSm/z＝321.0(87)[M+]，303.1(52)，274.2(18)，239.0(17)，159.0(24)，132.9(100)元素分析，理論值C14H12N2O2Se(319.22)C，52.68；H，3.79；N，8.78實測值C，52.89；H，3.67；N，8.75
說明性實施例4 可按與實施例4相同的方法制備，只是用相同或不同的反應物III和反應物IV分別進行制備。在不同的反應過程中反應現象不完全一樣，有的在反應進行中即生成大量的沉淀，有的在反應完畢后靜置后析出沉淀。這些反應，過濾得到沉淀，再將沉淀用無水甲醇溶解，按照實施例4的方法用硅膠柱層析處理純化后得到目標化合物。
實施例56-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-苯基-乙基-1-酮。為淡黃色針狀結晶，產率51.04％，mp 158-159℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.868(s，3H)；7.304(t，J＝7.30Hz，1H)；7.427(t，J＝7.80Hz，2H)；7.849(d，J＝7.55Hz，2H)；8.318(s，1H，5-CH)；8.768(s，1H，3-CH)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝52.751(CH3O-)；112.037(5-C)；119.911(ph，C)；124.869(ph，2CH)；127.482(ph，CH)；128.380(3-CH)；128.664(ph，2CH)；133.229(6-C)；144.748(8-C)；146.822(2-C)；162.460(C＝O)。
FAB MSm/z＝306.9(100)[M+]，292.9(4)，274.2(9)，248.9(2)，224.9(9)，145.1(5)，132.9(58)元素分析，理論值C13H10N2O2Se(305.2)C，51.15；H，3.28；N，9.18實測值C，51.17；H，3.14；N，9.12實施例66-(4-氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(4-氯-苯基)-乙基-1-酮。回流加熱過程中即生成黃色沉淀。目標產物為類白色結晶，產率40.25％，mp 180-182℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.858(s，3H)；7.463(dd，J1＝1.76Hz，J2＝2.52Hz，2H)；7.860(dd，J1＝1.76Hz，J2＝2.01Hz，2H)；8.359(s，1H，5-CH)；8.779(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝339.9(40)，292.9(4)，306.9(4)，280.9(5)，243.0(4)，193.0(4)，169.0(10)，131.0(59)HRMS理論值C13H9ClN2O2Se339.9517 實測值339.9514實施例76-(4-氟-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(4-氟-苯基)-乙基-1-酮。目標產物為類白色結晶，產率37.98％，mp195-196℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.868(s，3H)；7.250(m，2H)；7.887(m，2H)；8.316(s，1H，5-CH)；8.787(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝324.0(47)，291.0(3)，306.9(4)，230.9(5)，211.0(3)，162.0(11)，143.0(2)，119.0(11)，99.9(10).
HRMS理論值C13H9FlN2O2Se323.9813 實測值323.9833實施例86-(4-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(4-硝基-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生產大量沉淀。目標產物為黃色結晶，產率41.56％，mp 240-244℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.877(s，3H)；8.121(d，J＝8.96Hz，2H)；8.276(d，J＝8.96Hz，2H)；8.590(s，1H，5-CH)；8.830(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝351.0(65)，323.0(5)，302.9(5)，267.0(2)，245.0(3)，162.0(5)，114.0(3)，100.0(9)HRMS理論值C13H9N3O4Se350.9758 實測值350.9776實施例96-(4-溴-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(4-溴-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生成大量的黃色沉淀。目標產物為黃色結晶，產率51.01％，mp 197-200℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.868(s，3H)；7.608(d，J＝8.40Hz，2H)；7.804(d，J＝8.40Hz，2H)；8.383(s，1H，5-CH)；8.792(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝384.0(39)，353.0(2)，265.0(4)，211.9(7)，193.0(3)，162.0(9)，93.0(9)，HRMS理論值C13H9BrN2O2Se383.9013 實測值383.9027實施例106-萘基-2-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(2-萘-2-基)-乙基-1-酮。目標產物為黃色結晶，產率49.13％，mp187-191℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.880(s，3H)；7.512(m，2H)；7.940(m，4H)；8.410(s，1H)；8.467(s，1H，5-CH)；8.835(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝356.0(95)，331.0(4)，241.9(8)，280.9(5)，220.1(14)，181.0(30)，162.0(10)，119.0(17)，93.0(6)HRMS理論值C17H12N2O2Se356.0064 實測值356.0061實施例116-(3-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(3-硝基-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生成大量的黃色沉淀。目標產物為黃色結晶，產率82.50％，mp 185-187℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.890(s，3H)；7.713(t，J1＝7.84Hz，J2＝8.12Hz，1H)；8.128(dd，1H)；8.280(d，J＝7.84Hz，1H)；8.5719(s，1H)；8.655(s，1H，5-CH)；8.811(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝351.0(62)，302.9(11)，245.0(4)，230.9(6)，181.0(26)，162.0(12)，143.0(3)，119.0(15)，100(11)HRMS理論值C13H9N3O4Se350.9758 實測值350.9752實施例126-(2，5-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生成大量的黃色沉淀。目標產物為黃色結晶，產率51.12％，mp 192-195℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.876(s，3H)；3.889(s，3H)；3.907(s，3H)；6.901(dd，J＝3.08Hz，1H)；7.084(d，J＝8.961Hz，1H)；7.652(d，1H，J2＝3.08Hz)；8.412(s，1H，5-CH)；8.833(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝366.0(15)，331.9(5)，262.0(8)，205.0(2)，162.0(9)，123.9(4)，100.0(12)，HRMS理論值C15H14N2O4Se366.0119 實測值366.0128實施例136-(4-甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(4-甲氧基-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生成大量的黃色沉淀。目標產物為白色結晶，產率39.69％，mp 169-171℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.792(s，3H)；3.870(s，3H)；7.003(d，J＝8.96Hz，2H)；7.768(d，J＝8.68Hz，2H)；8.247(s，1H，5-CH)；8.797(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝336.0(100)，321.0(36)，294.0(6)，267.0(8)，231.0(6)，212.0(11)，181.0(70)，162.0(19)，132.0(7)，119.0(18)，100.0(31)HRMS理論值C14H12N2O3Se336.0013 實測值336.0018實施例146-(2-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備3中的溴代酮為2-溴-1-(2-硝基-苯基)-乙基-1-酮。目標產物為黃色結晶，產率75.18％，mp129-130℃1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝3.932(s，3H)；7.468(t，J1＝7.56Hz，J2＝7.84Hz，1H)；7.630(t，J1＝7.56Hz，J2＝7.56Hz，1H)；7.716(d，J＝8.12Hz，1H)；7.797(s，1H，5-CH)；7.893(d，J＝7.56Hz，1H)；8.779(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝351.0(30)，323.0(29)，292.0(5)，264.0(9)，234.0(5)，215.1(7)，200(42)，172.0(12)，141.0(10)，129.0(12)，119.0(100)，105.0(20)，90.0(31)HRMS理論值C13H9N3O4Se350.9758 實測值350.9756實施例156-(2，4-二氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(2，4-二氯-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生成大量的白色沉淀。目標產物為白色結晶，產率56.84％，mp 199-201℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.872(s，3H)；7.535(dd，J1＝2.24Hz，
J2＝1.96Hz，1H)；7.720(d，J＝2.24Hz，1H)；8.177(d，J＝8.68Hz，1H)；8.584(s，1H，5-CH)；8.798(s，1H，3-CH)。
13C NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝52.966(CH3O-)；116.327(5-CH)；120.890(2-C)；127.697(3-CH)；128.441(ph，CH)；129.797；130.322(ph，CH)；130.618(3-CH)；131.038(ph，CH)；132.336； 141.578(6-C)；146.351(8-C)；1 62.427(C＝O)。
EI MSm/z＝373.9(100)，292.9(4)，345.0(7)，212.0(5)，171.0(6)，148.0(3)，131.0(27)，116.0.0(3)，100.0(5)HRMS理論值C13H8Cl2N2O2Se373.9128 實測值373.9137實施例166-(4-溴-苯基)-5-甲基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(4-溴-苯基)-丙基-1-酮。反應過程中生成大量的黃色沉淀。目標產物為白色結晶，產率32.26％，mp 192-195℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.6426(s，3H)；3.885(s，3H)；7.639(4H)；8.881(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝397.9(88)，368.9(3)，338.9(3)，312.0(5)，282.0.0(4)，262.0(4)，213.0(8)，162.0(46)，131.0(100)，100.0(7)HRMS理論值C14H11BrN2O2Se397.9169 實測值397.9163實施例175，6-二苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1，2-二苯基-乙基-1-酮。目標產物為淡黃色結晶，產率22.43％，mp180-182℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.841(s，3H)；7.304(m，3H)；7.535(m，7H)；8.105(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝382.49(100)，351.4(3)，321.4(7)，242.4(6)，203.4(3)，178.4(8)，165.4(21)，140.3(4)，103.3(5)，77.2(5)HRMS理論值C19H14N2O2Se381.9857 實測值381.9845實施例186-(2，4-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(2，4-二甲氧基-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生成大量的黃色沉淀。目標產物為白色結晶，產率57.57％，mp 189-192℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.820(s，3H)；3.873(s，3H)；3.951(s，3H)；6.677(ddd，J1＝2.52Hz，J2＝8.68Hz，2H)；7.962(d，J＝8.68Hz，1H)；8.277(s，1H，5-CH)；8.846(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝366.0(61)，324.0(10)，262.0(10)，244.0(5)，231.0(6)，131.0(100)，93.0(19)HRMS理論值C15H14N2O4Se336.0119 實測值336.0126實施例196-二苯基-4-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(4-苯基-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生成大量的黃色沉淀。目標產物為黃色結晶，產率53.80％，mp 229-230℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.879(s，3H)；7.382(t，J1＝7.56Hz，J2＝7.28Hz，1H)；7.487(t，J1＝7.84Hz，J2＝7.38Hz，2H)；7.733(m，4H)；7.953(d，J＝8.40Hz，2H)；8.428(s，1H，5-CH)；8.844(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝382.0(100)，353.0(4)，317.0(4)，280.9(5)，281.0(12)，262.0(4)，231.0(18)，212.0(5)，182.0(7)，162.0(18)，119.0(31)HRMS理論值C19H14N2O2Se382.0220 實測值382.0218實施例206-(3-甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(3-甲氧基-苯基)-乙基-1-酮。反應完畢靜置生成大量的黃色沉淀。目標產物為黃色結晶，產率33.85％，mp 177-1 79℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.807(s，3H)；3.869(s，3H)；6.875(dd，J1＝1.68Hz，J2＝7.28Hz，1H)；7.329(t，J1＝8.1Hz，J2＝7.84Hz，1H)；7.425(m，2H)；8.383(s，1H，5-CH)；8.816(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝336.0(100)，206.0(33)，306.9(4)，275.0(5)，243.0(6)，182.0(4)，162.0(7)，81.9(12)HRMS理論值C14H12N2O3Se336.0013 實測值336.0018實施例216-(4-腈基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯按實施例4方法制備該化合物，只是實施例4制備中的溴代酮為2-溴-1-(4-腈基-苯基)-乙基-1-酮。反應過程中生成大量的黃色沉淀。目標產物為白色結晶，產率32.61％，mp 234-236℃1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.889(s，3H)；7.879(d，J＝8.40Hz，2H)；8.04(d，J＝8.40Hz，2H)；8.552(s，1H，5-CH)；8.843(s，1H，3-CH)。
EI MSm/z＝329.0(100)，300.0(43)，272.0(11)，194.0(4)，166.0(4)，142.0(8)，127.0(6)，114.0(3)，102.0(2)HRMS理論值C14H9N3O2Se328.9868實測值328.9826實施例22 裂解AGE-BSA-膠原交聯結構的ELISA篩選試驗以AGE-BSA與包被在96孔酶標板上大鼠尾膠蛋白交聯、體外制備AGEs交聯結構，采用ELISA方法評價化合物對AGEs交聯的裂解作用。
尾膠原包被96孔酶標板制備正常Wister大鼠(體重200±20g)，急性處死，取尾，4℃下進行以下尾膠原蛋白制備過程。首先，抽取尾腱膠原絲，用生理鹽水洗并去除非膠原絲組織，再經雙蒸水洗3次，剪碎、浸泡于0.1％冰醋酸中4℃1周，期間時常進行震搖。最后以8000g×30min離心，收集離心上清膠原蛋白溶液，稀釋后測定蛋白含量。以每孔70μg膠原蛋白，滿孔包被96孔酶標板(Costar)，4℃、24h，棄包被液，無菌條件下風干、保鮮膜包被，4℃貯存備用。
AGE-BSA制備牛血清白蛋白BSA(V)(Roch)50mg/ml及0.5M葡萄糖在0.2MPBS(PH7.4)中，37℃無菌條件下，避光孵育3-4個月，使其形成糖基化BSA即BSA-AGEs。同時，以無葡萄糖的BSA制備無糖基化BSA。然后在0.01MPBS(pH7.4)透析液中透析，除去未反應的葡萄糖，熒光掃描(Exi/Em(395/460nm))，及SDS-PAGE鑒定BSA-AGEs形成，同時采用Lowery方法進行蛋白定量。
分析測定方法流程尾膠原包被96孔板，用pH7.4 PBS滿孔中和酸性膠原1h；SuperBlock(PIERCE)37℃，封閉1h；PBST(PBS-Tween)洗板3次，每次振蕩1分鐘；用PBS稀釋AGE-BSA，以獲得最大交聯度濃度的AGE-BSA 100μl加入96孔板的A、B、C、D行的孔中，相同濃度的BSA加入E、F、G、H行的孔中，1列前3孔中PBS，作為系統和試劑空白，37℃，4h使之與膠原交聯；PBST洗板4次，間隔振蕩1 min；受試化合物采用pH7.4 PBS稀釋，取100μl/孔分別加于AGE-BSA交聯和BSA孔各4孔，同樣方式加入PBS 100μl/孔作為非裂解對照，37℃孵育16h；PBST洗板4次，間隔振蕩1min；加80μl/孔兔抗BSA抗體(1∶500)37℃，50min；PBST洗板4次，間隔振蕩1min；加入80μl/孔辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG(1∶1000)37℃，50min；PBST洗板3次，間隔振蕩1min；加底物液TMB(3、3’、5、5’-四甲基聯苯胺)100μl/孔室溫，閉光20min；用2mol/L H2SO4終止反應；10min內，BOBRAD Model550讀板機450nm下，板空白孔調零讀取OD值。
數據分析平均OD值采用4孔平均值。
校正OD＝AGE-BSA孔的OD平均值-BSA孔的OD平均值裂解率以OD值降低的百分率表示[(PBS孔的OD平均值-受試藥物孔OD平均值)/PBS孔的OD平均值]×％根據上述步驟受試化合物在0.1、1mmol/L或較低濃度下裂解率結果見下表(以下結果均為5次以上篩選結果的平均值)ELISA測定式I化合物對AGE-BSA-膠原交聯的裂解率
權利要求
1.式I的咪唑并硒唑化合物或其藥用鹽 其中R1，R2獨立地選自氫；取代的或未取代的C5～C8的脂環基；取代或未取代的C1～C8直鏈或支鏈烷基；取代或未取代的C2～C8直鏈或支鏈烯基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基烷基；取代或未取代的C1～C4羧酰氨基烷基；取代或未取代的C1～C4烷基亞磺酰基；取代或未取代的C1～C4烷基磺酰基；取代或未取代的C3～C8環烷基；取代或未取代的C5～C8環烯基，以上所述的取代基選自下述一組中的至少一個取代基團氧、鹵素、氨基、羥基、巰基、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C3～C8環烷基、C5～C7環烯基，或者R4；取代或未取代的的C5～C14芳香基；取代或未取代的的C5～C6芳香磺酰基；取代或未取代的的C5～C6芳香亞磺酰基，這里的芳香基環中包含1～6個選自下面的雜原子O，S，N，Se；所述的取代基選自下述一組中的1-3個取代基團C1-6烷氧基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、全氟C1-6烷基、羧酰胺、羧酰胺基C1-6烷基、硝基、羧基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷巰基、C1-6烷基亞磺酰基、C1-6烷基磺酰基、氨磺酰基、脒基、二C1-6烷氨基、C1-6烷氨基、C1-6烷氨基C1-6烷基、芳胺基、氧、鹵素、氨基、羥基、巰基、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C3～C8環烷基，C5～C7環烯基、芳烷基或者R4，R3獨立選自氫；C1～C8直鏈或支鏈烷基；C2～C8直鏈或支鏈烯基或者R4，R4獨立選自取代或未取代的C5～C14芳香碳環或雜環，雜環中包含1～6個選自下面的雜原子O，S，N，Se；所述的取代基選自下述一組中的至少1～3個取代基團C1-6烷氧基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、全氟C1-6烷基、羧酰胺、羧酰胺基C1-6烷基、硝基、羧基C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷巰基、C1-6烷基亞磺酰基、C1-6烷基磺酰基、氨磺酰基、脒基、二C1-6烷氨基、C1-6烷氨基、C1-6烷氨基C1-6烷基、芳胺基、烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、氧、鹵素、硝基、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基或氨基。
2.權利要求1所述化合物其中 R1獨立地選自氫；取代或未取代的C2～C8烷基；取代或未取代的C5～C10芳香基，以上所述的取代基選自下述一組中的1-3個取代基團甲氧基、鹵素、氰基、硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基，R2獨立地選自氫；取代或未取代的C2～C8直鏈或支鏈烷基；取代或未取代的C1～C4烷氧羰基；取代或未取代的的C5～C10芳香基；取代或未取代的C5～C10芳香磺酰基；取代或未取代的C5～C10芳香亞磺酰基，以上所述的取代基選自下述一組中的1-3個取代基團甲氧基、鹵素、羥基、巰基、氰基，硫氰基、硒氰基、三氟甲基、三氟甲氧基，R3獨立選自氫；甲基；乙基；苯基，R4獨立選自取代的或未取代的苯環、萘環、噻吩、硒吩、呋喃或者吡咯，所述的取代基選自下述一組中的1-3個取代基團鹵素、硝基、羥基、羥甲基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、苯氧基、芐氧基、羧基或氨基。
3.權利要求1所述化合物的季胺鹽或水合物，其中 R1和R2，R3和R4取代基定義同權利要求1，2，Z是藥學上可以接受的鹽，包括鹵素形成的鹽，F，Cl，Br，I，或者甲磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽，優選的鹽為氫溴酸鹽和甲磺酸鹽。
4.權利要求1的化合物，其包括5-甲基-6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-氟-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-溴-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-萘基-2-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(3-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，5-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2-硝基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，4-二氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-溴-苯基)-5-甲基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，5，6-二苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，4-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-苯基-苯基)-4-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(3-甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-腈基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯。
5.權利要求4的化合物，其中所述化合物為6-(4-氟-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，4-二氯-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，5，6-二苯基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(2，4-二甲氧基-苯基)-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯，6-(4-苯基-苯基)-4-基-咪唑并[2，1-b]硒唑-2-甲酸甲酯。
6.藥物組合物，其含有權利要求1～5任一項所述的化合物、其幾何異構體或者其藥學上可接受的鹽以及至少一種藥學上可接受的載體。
7.制備權利要求1-5任一項所述化合物的方法，該方法包括1)將硒脲或KSeCN/SiO2及NH4OAc/Al2O3與式VI的α-鹵代酮反應， 其中R1，R2同本發明中式I化合物的定義；Z為離去基團，選自F、Cl、Br或I，得到式III化合物 2)將式III化合物與式IV化合物在非質子傳遞溶劑中反應， 其中R3，R4同上述式I化合物中的定義；X為離去基團，選自F、Cl、Br或I，得到式I化合物 或，將式III化合物與式IV化合物在質子化溶劑中反應 其中R3，R4同上述式I化合物的定義；X為離去基團，選自F、Cl、Br或I，得到式V化合物， 將式V化合物與酸或堿反應，得到式I化合物
8.權利要求1～6任一項所述的化合物、其幾何異構體或者其藥學上可接受的鹽在制備用于抑制或者/和裂解晚期糖基化終產物(AGEs)的產品中用途。
9.權利要求8的用途，其中所述產品是指用于(i)增加皮膚彈性或者減少皮膚皺紋，預防或者治療(ii)非胰島素依賴型糖尿病；(iii)糖尿病的并發癥；(iv)腎臟損傷；(v)血管損傷或者預防或治療血管硬化；(vi)高血壓；(vii)視網膜病變；(viii)晶狀體蛋白損傷；(ix)白內障；(x)周圍神經病變；(xi)吸煙引起的肺AGEs的形成，以及由此產生的肺纖維化、呼吸窘迫等肺部疾病；(xii)骨關節炎的產品。
10.權利要求1～6任一項所述的化合物、其幾何異構體或者其藥學上可接受的鹽在制備用于牙齒著色的逆轉劑或者用于防止和逆轉牙齒著色的產品中用途。
11.權利要求1～6任一項所述的化合物、其幾何異構體或者其藥學上可接受的鹽在制備用于植物ak動物體保鮮的產品中用途。
全文摘要
本發明涉及通式I的咪唑并硒唑類化合物，其幾何異構體及其藥學上可接受的鹽，式中各個基團的定義如權利要求書所述。本發明還涉及制備式I化合物的方法、含有上述化合物的藥用組合物以及這些所述化合物用于(i)增加皮膚彈性或者減少皮膚皺紋，預防或者治療(ii)非胰島素依賴型糖尿病；(iii)糖尿病的并發癥；(iv)腎臟損傷；(v)血管損傷或者預防或治療血管硬化；(vi)高血壓；(vii)視網膜病變；(viii)晶狀體蛋白損傷；(ix)白內障；(x)周圍神經病變；(xi)吸煙引起的肺AGEs的形成，以及由此產生的肺纖維化、呼吸窘迫等肺部疾病；(xii)骨關節炎；或者用于口腔局部用藥用于防止或逆轉牙齒著色的用途；或者用于各種食物中植物或動物蛋白的保鮮用途。
文檔編號C07D517/00GK1690061SQ20041003401
公開日2005年11月2日 申請日期2004年4月21日 優先權日2004年4月21日
發明者李松, 鐘武, 王莉莉, 程罡, 劉洪英, 阮承邁, 崔浩, 肖軍海, 鄭志兵, 謝云德, 胡遠東, 聶愛華 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所