專利名稱：作為ccr5拮抗劑的化合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及作為CCR5拮抗劑的化合物(吡咯衍生物)，及其制法和用途。
背景技術：
趨化因子是一類引導淋巴細胞定向遷移的細胞因子，在炎癥反應、白細胞外滲、組織浸潤、腫瘤發生、胚胎發育中有重要的作用。趨化因子屬于分泌型信號分子大家族，分子量大約8至14kD。目前這一家族大約有45個成員，它們的共同特征是含有四個位置保守的半胱氨酸(Cys)。根據其靠近N端的兩個Cys間是否含有其它氨基酸，這一家族被分為四類C-C，C-X-C，C-X3-C，C。其中，CC類(又稱β-趨化因子)和CXC類(又稱α-趨化因子)是最主要的兩類。
體內趨化因子的功能是通過趨化因子受體介導的。趨化因子受體的目前標準的命名是根據其特異結合的趨化因子的特征(例如，若其配基是CC類趨化因子亞家族，則它就被命名為CCR)。趨化因子的受體屬于7次跨膜的G蛋白偶聯受體家族(GPCR)，這類受體N端在細胞外，C端在細胞內，含有七個非常保守的由α螺旋構成的跨膜區域。它們在與激動劑結合時能偶聯到G蛋白上，從而使細胞外的信號得以傳遞到細胞內。在激動劑的作用下，趨化因子受體能引起一系列的胞內信號及改變細胞的行為，如抑制腺苷酸環化酶(AC)，動員細胞內鈣釋放，激活一系列的蛋白激酶，引導細胞定向遷移(趨化)，影響細胞因子的釋放等。
目前發現的趨化因子受體有19個，它們是CCR1-11，CXCR1-6，XCR1，CX3CR1。趨化因子受體被認為是炎癥反應和自身免疫性疾病的重要介導者(Gerard et al.，Nat Immunol，2，108-15(2001))，因此，趨化因子受體的調節劑(包括激動劑和拮抗劑)能夠用于多種疾病，如炎癥或過敏性疾病，過敏反應、自身免疫性疾病、炎癥性腸道疾病、硬皮病、嗜酸細胞性肌炎、腫瘤發生和轉移等。
作為趨化因子受體家族一成員的CCR5，其內源性激動劑有RANTES、MIP-1α和MIP-1β，它表達于外周血來源的樹突狀細胞，T淋巴細胞，單核細胞，巨噬細胞以及參與維持長期炎癥反應的免疫細胞和炎癥細胞。因此，調節CCR5的功能可能調節T細胞向炎癥反應損傷處的募集，從而為治療炎癥反應和自身免疫性疾病提供了一個新的靶點，例如，CCR5缺失使得小鼠免于DSS誘導的嚴重的炎癥及粘膜的損傷(Andres et al.，J Immunol.，164，6303-12(2000))；在小鼠上，CCR5的小分子拮抗劑TAK-779抑制了膠原誘導的關節炎(Yang et al.，Eur JImmunol.，32，2124-32(2002))。所以，CCR5的拮抗劑可用于下述疾病的治療哮喘和局部紊亂(如局部性皮炎，局部過敏)，風濕性關節炎，動脈硬化，牛皮癬，肉狀瘤癥和其它纖維化疾病，自身免疫性疾病(如多發性硬化癥，炎癥性腸炎)。此外，由于CD8+T細胞與慢性梗阻性肺病(COPD)有關(Cosio et al.，Chest，121，160S-165S，(2002))，因此，CCR5的拮抗劑還可能用于COPD的治療。
除了在炎癥和免疫反應中的作用，趨化因子受體還可能是某些寄生蟲和病毒入侵細胞的重要受體。例如，Duffy受體是瘧原蟲進入紅細胞的受體，缺少Duffy受體的人群不容易患上瘧疾。更為重要的是，有幾個趨化因子受體參與了HIV的入侵，被稱為HIV的共受體。
研究表明，Th細胞上的CD4分子對于HIV的侵入必不可少，但僅CD4不足以介導HIV與細胞的融合。進一步的研究發現，另外的被稱為HIV侵入共受體的分子是趨化因子受體中的CCR5，CXCR4，CCR2b，CCR3，CCR8及孤兒受體V28，STRL-33，GPR1，GPR15，APJ(Doms et al.，virology，235，179-90，(1997))。在體內，CCR5及CXCR4是HIV進入的主要共受體，CCR3也可能參與了一部分HIV的進入。CCR5是巨噬細胞向型(M-向性)HIV-1的共受體而CXCR4是T細胞向性(T-向性)的HIV-1的共受體。因此，CCR5對HIV的傳播起重要作用，調節CCR5的物質能影響M向性HIV-1在人群中的傳播及把疾病控制在早期。在體外實驗中發現與能CCR5結合的趨化因子RANTES，MIP-1α及MIP-1β都能通過抑制M向性的HIV-1進入細胞從而抑制HIV感染。一些能與CCR5結合及拮抗CCR5功能的小分子化合物也在體外非常有效地抑制HIV侵入細胞。
綜上所述，本領域迫切需要開發作為具有潛在藥物用途的CCR5拮抗劑的化合物。
發明內容
本發明的目的就是提供一類作為CCR5拮抗劑的化合物。
本發明的另一目的是提供所述化合物的制法和用途。
在本發明的第一方面，提供了一種式I化合物或其藥學上可接受的鹽，
式中，R1為未取代的或被1-3個取代基取代的下列基團芐基、苯甲酰基、環己基甲酰基、環戊基甲酰基、苯磺酰基、或萘甲酰基，所述的取代基選自鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；R2為羥基、苯甲羧基、苯氧基、苯硫基、苯胺基或苯磺酰基，所述基團中苯環可被1-3個選自下組的取代基取代鹵素和C1-C4烷基；R3為氫、C1-C4烷基，苯基或 (苯并[1，3]-二氧五環-4基)，所述基團中苯環可被1-3個選自下組的取代基取代鹵素和C1-C4烷基；R4為無、H或羥基；R7為氫，C1-C6烷基或苯基；X為無、O、或C；條件是X為無或O時，R4、R5、R6和Y不存在；當X為C時，Y是N，R5為C1-C6烷基或烯丙基，且R6為對硝基芐氧羰基或芐氧羰基，或者R5、R6和Y一起構成苯基或-R8-苯基，其中R8是C1-C4的亞烷基。
一類較佳的化合物中，R1為芐基、苯甲酰基、鄰鹵代苯甲酰基、環己基甲酰基，環戊基甲酰基，苯磺酰基，萘甲酰基。
另一類優選化合物中，R2為羥基、苯甲羧基、苯氧基、苯硫基、苯胺基或苯磺酰基。
另一類優選化合物中，R3為氫、C1-C4烷基、苯基、4-鹵代苯基或 另一類優選化合物中，X為無或O，且R4、R5、R6和Y不存在。
另一類優選化合物中，X為C，且Y是N，R5為C1-C6烷基或烯丙基，R6為對硝基芐氧羰基或芐氧羰基，或者R5、R6和Y一起構成苯基、-CH2CH2CH2-苯基。
另一類優選化合物中，R7為氫，C1-C3烷基或苯基。
特別優選的化合物是表I所列的化合物。
在本發明的第二方面，提供了一種藥物組合物，它含有藥學上可接受的載體和式I化合物。
在本發明的第三方面，提供了一種本發明式I化合物的用途，用于制備藥物，尤其是用于治療HIV感染、哮喘、風濕性關節炎、自身免疫性疾病、慢性梗阻性肺病(COPD)。
具體實施例方式
本發明人經過廣泛而深入的研究，根據CCR5的結構特點，設計和合成了一類吡咯衍生物，測試結果表明這些化合物是有效的CCR5拮抗劑。在此基礎上完成了本發明。
本文所用的術語“烷基”指直鏈或支鏈飽和的、含有1-8個碳原子(較佳地1-6個碳原子)的脂族烴類基團；“鏈烯基”包括含有至少一個碳碳雙鍵和2-8個碳原子(較佳地2-6個碳原子)的直鏈和支鏈烴基；“炔基”包括含有至少一個碳碳三鍵和2-8個碳原子(較佳地2-6個碳原子)的直鏈和支鏈烴基。
本文的術語“芳基”指芳族體系，可以是單環或原本稠合的或連接在一起的多芳環，從而使至少一部分稠合或連接的環形成共軛的芳系。芳基基團包括(但不限制于)苯基、萘基、四氫萘基。
本文所用的術語“雜環”指穩定的4-7元單環或穩定的多環雜環，該雜環可以是飽和的、部分不飽和的或不飽和的，且由碳原子和選自以下的1-4個雜原子構成N、O和S原子。N和S原子可以被氧化。雜環還可包括任何多環，其中任一上述雜環可稠合于芳環。
術語“取代的芳基”或“取代的雜環”指被1-4個選自下組的基團所取代的芳基或雜環鹵素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基或芳硫基。較佳地，取代基是鹵素、C1-C4烷基。
“鹵素”指F、Cl、Br、或I。
本發明的化合物可以以由藥學上或生理學可接受的酸或堿衍生的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)與如下無機酸形成的鹽如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及與有機酸形成的鹽，而有機酸則指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和馬來酸。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以酯、氨基甲酸酯或其他常規的“前體藥物”的形式(當以這種形式給藥時，在體內可轉化成活性部分)。
本發明還包括藥物組合物以及治療方法，它包括給哺乳動物施用藥物有效量的式I化合物。本發明的化合物可用于治療HIV感染、哮喘和局部紊亂(如局部性皮炎、局部過敏)、風濕性關節炎、動脈硬化、牛皮癬、肉狀瘤癥和其它纖維化疾病、自身免疫性疾病(如多發性硬化癥、炎癥性腸炎)、慢性梗阻性肺病(COPD)。
當化合物用于上述用途時，它們可與一種或多種藥學上可接受的載體或賦形劑混合，如溶劑、稀釋劑等，而且可以用如下形式口服給藥片劑、膠囊、可分散的粉末、顆粒或懸浮液(含有如約0.05-5％懸浮劑)、糖漿(含有如約10-50％糖)、和酏劑(含有約20-50％乙醇)，或者以無菌可注射溶液或懸浮液形式(在等滲介質中含有約0.05-5％懸浮劑)進行非腸胃給藥。例如，這些藥物制劑可含有與載體混合的約25-90％，通常約為5％-60％(重量)的活性成分。
所用的活性成分的有效劑量可隨所用的化合物、給藥的模式和待治療的疾病的嚴重程度而變化。然而，通常當本發明的化合物每天以約0.5-500mg/kg動物體重的劑量給予時，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以2-4次分開的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對大部分大型哺乳動物而言，每天的總劑量約為1-100mg，較佳地約為2-80mg。適用于內服的劑量形式，包含與固態或液態藥學上可接受的載體密切混合的約0.5-500mg的活性化合物。可調節此劑量方案以提供最佳治療應答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開的劑量，或將劑量按比例地減少。
這些活性化合物可通過口服以及靜脈內、肌內或皮下等途徑給藥。固態載體包括淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態載體包括無菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合活性成分的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、BHT和BHA。
從易于制備和給藥的立場看，優選的藥物組合物是固態組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊。化合物的口服給藥是優選的。
這些活性化合物也可腸胃外或腹腔內給藥。也可在適當混合有表面活性劑(如羥丙基纖維素)的水中制備這些活性化合物(作為游離堿或藥學上可接受的鹽)的溶液或懸浮液。還可在甘油、液體、聚乙二醇及其在油中的混合物中制備分散液。在常規儲存和使用條件下，這些制劑中含有防腐劑以防止微生物生長。
適應于注射的藥物形式包括無菌水溶液或分散液和無菌粉(用于臨時制備無菌注射溶液或分散液)。在所有情況中，這些形式必須是無菌的且必須是流體以易于注射器排出流體。在制造和儲存條件下必須是穩定的，且必須能防止微生物(如細菌和真菌)的污染影響。載體可以是溶劑或分散介質，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液態聚乙二醇)、它們的適當混合物和植物油。
本發明的化合物可用下列所示流程進行制備流程Iβ-丙胺酸化合物1在甲醇和二氯亞砜中回流上甲酯，再用兩分子芐溴在碳酸鉀作堿乙腈中保護氨基得化合物2。保護的β-丙氨酸酯2與酮酸酯3進行Aldol縮合得到兩組對映異構體4。
4(+/-)cis+(+/-)trans得到的縮合產物催化氫化掉一個芐基后關五元內酰胺環得到兩組順反異構體5。接下來用強堿(氫氧化鈉或氫氧化鉀)皂化分子中的甲酯為反式酸6。
與胺化合物在縮合試劑存在下縮合就得到酰胺化合物7。最后用鋰鋁氫還原就得到目標化合物8。
流程II流程I中得到的化合物8經催化氫化掉芐基后與酰氯進行反應得到化合物9。
流程III流程I中酸6與胺化合物11在縮合試劑作用下縮合得到化合物12，鋰鋁氫還原分子中的酰胺鍵得到化合物13，再與R6Cl反應的到化合物14
流程IV流程I中的酸6在縮合試劑存在下與水合哌啶酮鹽酸鹽縮合的酮化合物15，鋰鋁氫還原得醇化合物16，Swern氧化醇為酮化合物17，再與胺R5XH在醋酸鈉硼氫存在下縮合，最后與R6Cl反應得到化合物18。
流程V流程IV中的醇化合物16中的仲醇用乙酯保護得化合物19，催化氫化掉分子中的芐基，得到化合物20，再與R1Cl反應得化合物21，化合物21在碳酸鉀甲醇中脫區仲醇上的保護基得到化合物22，Swern氧化仲醇為酮23，再與胺R5Cl在醋酸鈉硼氫存在下縮合，最后與R6Cl反應得到化合物24。
流程VI流程I中化合物8用甲磺酰活化分子中的羥基為甲磺酰酯，再與R3H進行取代得到化合物25。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。
實施例1化合物I-a-a1-芐基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇按照流程I，冰浴下將SOCl2(10ml)滴入β-丙氨酸鹽酸鹽(7.05g)的甲醇(40ml)溶液后升溫回流3h，冷卻后旋干溶劑，抽干，加入K2CO3(38g)和150ml乙氰溶液攪拌，加入22ml芐溴室溫攪拌20h，加水把碳酸鉀溶解，乙酸乙酯萃取兩次，食鹽水洗，Na2SO4干燥，過濾濃縮，柱層析，得到N，N-二芐基β-丙氨酸甲酯(14.9g)，收率93.6％。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.27(m，10H)，3.56(s，3H)，3.51(s，4H)，2.74(t，J＝6.9Hz，2H)，2.45(t，2H).
4-苯并[1，3]二氧五環-1-芐基-4-羥基-5-氧基吡咯-3-羧酸甲酯先將反應體系無水操作，氮氣保護下0℃向1.09ml(iPr)2NH的7ml THF溶液中滴加4.5ml 1.6M的丁基鋰正己烷溶液，攪拌10min冷至-78℃，滴加N，N-二芐基β-丙氨酸甲酯(1.00g，3.53mmol)的40ml THF溶液后攪拌1h，再滴加反應物苯并[1，3]二氧五環-4-乙酮酸酯的5ml THF溶液，-78℃反應4h。用飽和NH4Cl水溶液淬滅，用(60×2)乙酸乙酯萃取，水洗，食鹽水洗，Na2SO4干燥，過濾濃縮后柱層析，用(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶13)過柱得一固體化合物(0.654g)和一液體化合物(0.653g)，總收率73.3％。液體化合物(3.197g)溶于250ml MeOH中，加入0.32g Pd/C，室溫一個氣壓氫氣下反應3h，過濾，旋干甲醇，先用(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4)過下未反應的原料1.065g，再用(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)過柱得到白色固體0.935g，轉化率59.8％。
IR(KBr)3332，2962，2916，1725，1683，1504，1492cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.27-7.41(m，5H)，6.76-6.94(m，3H)，5.97(s，2H)，4.65(d，JAB＝14.7Hz，1H)，4.55(d，JAB＝14.7Hz，1H)，3.90(s，1H)，3.70(s，3H)，3.62(m，1H)，3.31-3.38(m，2H).
ESI-MS m/z 392(M++Na+).
計算值C20H19N1O6C，65.03；H，5.18；N，3.79；測量值；C，65.11；H，5.18；N.3.74.
4-苯并[1，3]二氧五環-1-芐基-4-羥基-5-氧基吡咯-3-羧酸向上面得到的甲酯化合物的甲醇溶液中加入1.4當量1N的NaOH水溶液，室溫反應到原料消失，旋干甲醇，加水用1N的HCl水溶液中和至pH＝3，用乙酸乙酯萃取兩次，水洗，食鹽水洗至中性，Na2SO4干燥，過濾濃縮得到固體化合物。
IR(KBr)3267，2887，1713，1688，1501，1487，1254，1299cm-1；EI-MS m/z(％)355(M+，54.49)，337(2.76)，282(3.64)，190(6.62)，149(100)，119(19.60)，91(41.13)；1H NMR(DMSO d6，300MHz)δ12.45(s，1H)7.41-7.30(m，5H)，6.94-6.86(m，3H)，6.44(s，1H)，6.019(s，2H)，4.46(d，JAB＝15.3Hz，1H)，4.44(d，JAB＝15.0Hz，1H)，3.58(m，1H)，3.37(m，2H)。
3-苯并[1，3]-二氧五環-1-芐基-3-羥基-4-(4-苯基哌啶基-1-羰基)吡咯烷酮0℃氮氣保護下向上面羧酸化合物(0.238g，0.67mmol)和氮羥基琥珀酰亞胺(0.085g，0.74mmol)的20ml THF溶液中加入DCC(0.152g，0.74mmol)自然升溫過夜，濾去固體并加入4-苯基哌啶，室溫反應12h，旋干THF，加水和乙酸乙酯分液，有機相用食鹽水洗，干燥。過濾濃縮，用(EA∶PE＝1∶1)過柱得到白色固體(0.152g)收率45％。
IR(KBr)3325，2921，1695，1682，1492，1442cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.31-7.20(m，8H)，7.12(d，2H)，6.98-6.78(m，3H)，5.97(s，2H)，4.76(m，2H)，4.51(d，JAB＝14.7Hz，1H)，3.76-3.67(m，2H)，3.54(dd，1H)，3.38-3.30(m，1H)，3.07-2.98(m，1H)，2.71-2.60(m，2H)，1.88-1.84(m，2H)，1.66-1.53(m，2H).
EI-MS m/z(％)498(M+，12.79)，480(67.79)，352(100)，283(70.60)，189(95.24)，160(55.04)；計算值C30H30N2O5C，72.27；H，6.06；N，5.62.測量值C，72.00；H，5.94；N，5.56.
1-芐基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇(I-a-a)0℃將LiAlH4(8eq)加入上面化合物(1eq)的THF溶液后，升溫回流24h，冷卻，0℃滴加10％NaOH水溶液淬滅，過濾，旋干THF，加乙酸乙酯溶解，食鹽水洗，干燥。過濾濃縮并用(EtOAc∶Et3N＝10∶1)過柱得油狀物，收率90％。
IR(KBr)2935，1503，1486cm-1；1H NMR(CDCl3300MHz)δ7.32-7.05(m，12H)，6.69(d，J＝8.1Hz，1H)，5.87(s，2H)，3.61(s，2H)，2.96-2.88(m，3H)，2.82-2.75(m，2H)，2.61-2.53(m，2H)，2.37-2.32(m，4H)，2.08-1.99(m，2H)，1.76-1.67(m，3H)；ESI-MS m/z 471(M++H+)，493(M++Na+).
實施例2化合物I-a-b1-芐基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)-4-(4-哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇按照制備化合物I-a-a相同的方法，將4-苯基哌啶換成哌啶即可以得到化合物I-a-b。
IR(film)2933，1504，1486cm-1；1H NMR(CDC13，300MHz)δ7.38-7.16(m，5H)，7.12(d，J＝1.8Hz，1H)，7.04(dd，J＝8.1Hz 1.8Hz，1H)，6.68(d，J＝8.1Hz，1H)，5.87(s，2H)，3.58(s，2H)，2.86(t，2H)，2.76-2.64(m，2H)，2.53(m，1H)，2.31-2.24(m，2H)，2.14(m，4H)，1.60-1.22(m，5H)，1.21-1.15(m，2H).
EI-MS m/z(％)394(M+，1.5)，277(100)，98(95.8)，91(93.2)；HRMS Calcd.for C24H30N2O3(M+)3942256，測量值394.2228.
實施例3化合物I-a-c1-芐基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)-4-(4-嗎啡啉-1-亞甲基)吡咯-3-醇按照制備化合物I-a-a相同的方法，將4-苯基哌啶換成嗎啡啉即可以制得化合物I-a-c。
IR(film)3370，2926，1504，1487cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.34-7.15(m，5H)，7.09(d，J＝1.5Hz，1H)，7.02(dd，J＝7.8Hz and J＝1.5Hz，1H)，6.68(d，J＝7.8Hz，1H)，5.87(s，2H)，3.58(s，2H)，3.56-3.49(m，4H)，2.88-2.83(m，2H)，2.78-2.71(m，2H)，2.60-2.50(m，1H)，2.35-2.29(m，2H)，2.20-2.15(m，4H)，1.53-1.47(m，1H).
EI-MS m/z(％)396(M+，7.1)，378(1.4)，278(51.7)，1656(100)，91(78.7)；HRMS Calcd.for C23H28N2O4(M+)396.2049，測量值396.2006.
實施例4化合物I-a-d1-芐基-4-二乙胺基甲基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)吡咯-3-醇按照制備化合物I-a-a相同的方法，將4-苯基哌啶換成乙二胺即可以制得化合物I-a-d。
IR(film)3314，2931，1665，1487，1452cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.31-7.17(m，5H)，7.11-7.02(m，2H)，6.70-6.67(m，1H)，5.87(s，2H)，3.64-3.58(m，3H)，2.86-2.76(m，4H)，2.46-2.35(m，4H)，2.21-2.14(m，2H)，1.58-1.49(m，1H)，1.28-1.13(m，6H)；EI-MS m/z(％)382(M+，2.1)，91(77.3)，56(100)；HRMS Calcd.for C23H30N2O3(M+)382.2256，found382.2296.
實施例5I-b-a1-芐基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶甲基)吡咯-3-醇按照制備化合物I-a-a相同的方法，將苯并[1，3]二氧五環-4-乙酮酸乙酯換成苯乙酮酸乙酯即可以制得化合物I-b-a。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.69-7.61(m，2H)，7.37-7.13(m，13H)，3.67(s，2H)，3.01-2.81(m，4H)，2.65(m，1H)，2.57-2.52(m，1H)，2.46-2.35(m，2H)，2.08-2.02(m，2H)，1.80-1.69(m，4H)，1.51-1.41(m，2H)；EI-MS m/z(％)427(M++1，0.79)，336(3.81)，293(43.34)，252(19.54)，233(95.09)，200(14.97)，174(97.91)，91(100)；HRMS Calcd.for C29H34N2O(M+)426.2671，測量值426.2657.
實施例6化合物I-b-b[3-羥基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶甲基)吡咯基]苯甲酮按照流程II，將化合物I-b-a(0.4g)溶于30ml甲醇中，加入50mg Pd/C，一個大氣壓氫氣下反應12h后過濾，旋干甲醇。取此產物96mg溶于2ml二氯甲烷(無水處理)，氮氣保護下加入0.059ml三乙氨，0℃滴加0.04ml苯甲酰氯的1ml二氯甲烷溶液，自然升溫反應4h后加水分液，食鹽水洗，干燥，過濾濃縮，先用(EA∶PE＝1∶2)過柱，再用(EA∶PE∶Et3N＝1∶1∶0.5)過柱得到固體(65mg)，收率52％。
IR(KBr)3269，3028，2922，2808，1723，1592，1571，1453，1381，1247cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)，δ7.61-6.91(m，15H)，4.14-3.92(m，2H)，3.79-3.64(m，2H)，3.18-3.18(m，1H)，3.05-2.96(m，1H)，2.87-2.78(m，2H)，2.65-2.59(m，1H)，2.53-2.43(m，2H)，2.29-2.05(m，2H)，1.88-1.73(m，4H)；EI-MS m/z(％)440(M+，0.93)，401(5.42)，292(16.12)，200(12.45)，186(35.38)，174(100)，160(7.34)；HRMS Calcd.for C29H32N2O2(M+)440.2463，測量值440.2448.
實施例7化合物I-b-c[3-羥基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶甲基)吡咯基]鄰碘苯甲酮按照制備化合物I-b-b相同的方法，將苯甲酰氯換成鄰碘苯甲酰氯即可以制備化合物I-b-c。
IR(KBr)3027，2933，2808，1732，1634，1440，1425，1248，762，699cm-1；1H NMR(CDCl3300MHz)δ7.89-7.79(m，1H)，7.62-7.59(m，1H)，7.54-7.46(m，1H)，7.46-7.17(m，11H)，4.10-4.02(m，1H)，3.97-3.93(m，1H)，3.59(m，1H)，3.40(m，1H)，3.14(m，1H)，3.00(m，1H)，2.85-2.79(m，2H)，2.63-2.44(m，3H)，2.29-2.04(m，2H)，1.89-1.74(m，4H)；EI-MS m/z(％)566(M+，0.37)，565(0.40)，406(0.68)，355(0.5)，231(8.77)，174(100)，160(3.43)，105(5.04)，91(3.57).
實施例8化合物I-b-d1-苯磺酰基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶甲基)吡咯-3-醇按照制備化合物I-b-b相同的方法，將苯甲酰氯換成苯磺酰氯即可以制備化合物I-b-d。
IR(KBr)3496，3062，2933，2812，1737，1494，1447，1345，1247，1168cm-11H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.83(d，J＝8.7Hz，2H)，7.57-7.47(m，3H)，7.34-7.07(m，10H)，3.64(d，JAB＝10.8Hz，1H)，3.60-3.58(m，1H)，3.43(d，JAB＝10.8Hz，1H)，3.32-3.27(q，1H)，2.76(d，1H)，2.68(d，1H)，2.42-2.30(m，4H)，2.07-1.94(m，2H)，1.74-1.59(m，4H)；EI-MS m/z(％)477(M++1，0.33)，336(25.49)，335(100)，174(83.55)，160(3.01).
實施例9化合物I-b-e環戊基-[3-羥基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-1-位]甲酮按照制備化合物I-b-b相同的方法，將苯甲酰氯換成環戊基甲酰氯即可以制得化合物I-b-e。
IR(KBr)3276，2953，1608，1493，1453，1381cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHZ)δ7.58(m，2H)，7.39(m，2H)，7，31(m，2H)，7.20(m，2H)，3.90-3.70(m，4H)，3.14-3.05(m，1H)，2.88-2.69(m，3H)，2.60-2.44(m，3H)，2.29-2.14(m，2H)，1.91-1.71(m，10H)，1.62-1.54(m，2H)EI-MS m/z(％)432(M+，0.56)，292(2.48)，174(100)HRMS Cal cd.forC28H36N2O2(M+)432.2776，測量值432.2800.
實施例10化合物I-b-f環己基-[3-羥基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-1-位]甲酮按照制備化合物I-b-b相同的方法，將苯甲酰氯換成環己基甲酰氯即可以得到化合物I-b-f。
IR(KBr)3253，2939，2850，1606，1493，1453，1398cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHZ)δ7.57-7.51(m，2H)，7.43-7.20(m，8H)，3.89-3.70(m，4H)，3.10(t，1H)，2.85-2.71(m，2H)，2.58-36(m，3H)，2.32-2.06(m，3H)，1.82-1.43(m，13H)；EI-MS m/z(％)446(M+，0.55)，174(100)；HRMS計算值C29H38N2O2(M+)446.2933，測量值446.2945.
實施例11化合物I-b-g1-芐基-3-苯基-4-[4-(3-苯丙基)哌啶-1-亞甲基]吡咯-3-醇按照制備化合物I-b-a相同的方法，將4-苯基哌啶換成4-苯丙基哌啶即可以得到化合物I-b-g。
IR(KBr)3200，3027，2928，2806，1739，1494，1474，1446，1376cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHZ)δ7.78-7.60(m，2H)，7.41-7.14(m，13H)，3.70(m，2H)，3.01-2.53(m，8H)，2.58-2.53(m，2H)，2.45-2.41(m，2H)，2.00-1.83(m，1H)，1.80-1.50(m，4H)，1.43-1.18(m，5H)；EI-MS m/z(％)377(3.08)，334(30.38)，233(79.19)，216(76.27)，91(100)。
實施例12化合物I-b-h1-(1-芐基-4-羥基-4-苯基哌啶-3-亞甲基)-4-(3-苯丙基)哌啶-4-醇按照制備化合物I-b-a相同的方法，將4-苯基哌啶換成4-苯丙基-4-羥基哌啶即可以得到化合物I-b-h。
1H NMR(CDCl3，300MHZ)δ7.54-7.51(m，2H)，7.32-7.08(m，13H)，3.61-3.57(m，3H)，2.96(m，2H)，2.84(d，1H)，2.73(q，1H)，2.63-2.48(m，4H)，2.40-2.18(m，3H)，2.12-1.97(m，1H)，1.62-1.32(m，7H)，1.26-1.15(m，2H)；EI-MS m/z(％)393(4.19)，350(31.62)，233(83.79)，91(100)；HRMS計算值C32H41N2O2(M+)485.3162，測量值485.3162.
實施例13化合物I-b-j1-芐基-3-苯基-4-[1-(4-氟苯基哌啶-1-亞甲基)]吡咯-3-醇按照制備化合物I-b-a相同的方法，將苯乙酮酸酯換成4-氟苯乙酮酸酯即可以得到化合物I-b-j。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.62-7.55(m，2H)，7.37-7.08(m，12H)，3.6(s，2H)，2.99-2.75(m，5H)，2.64-2.45(m，2H)，2.43-2.33(m，3H)，2.03(m，1H)，1.80-1.42(m，5H)；EI-MS m/z(％)353(1.64)，335(1.81)，310(25.31)，292(24.04)，252(38.22)，234(38.90)，174(100)，91(54.63)。
實施例14化合物I-b-k1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟苯基哌啶-3-亞甲基)]-4-(3-苯丙基)哌啶-4-醇按照制備化合物I-b-h相同的方法，將苯乙酮酸酯換成4-氟苯乙酮酸酯即可以得到化合物I-b-k。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.63-7.57(m，2H)，7.38-7.16(，10H)，7.02-6.96(m，2H)，3.73-3.66(m，3H)，2.96-2.89(m，2H)，2.89-2.81(m，2H)，2.63-2.54(m，4H)，2.43-2.18(m，4H)，1.71-1.64(m，3H)，1.61-1.42(m，4H)，1.32-1.24(m，2H)；EI-MS m/z(％)283(3.31)，268(5.14)，258(18.72)，232(52.00)，91(100)；實施例15化合物I-c-a1-芐基-3-甲基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇按照制備化合物I-b-a相同的方法，將苯乙酮酸酯換成丙酮酸乙酯即可以得到化合物I-c-a(0.088g，產率30.2％)。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.20-7.06(m，10H)，3.73(t，J＝5.4Hz，1H)，3.58-3.45(m，2H)，3.16(d，1H)，2.89(d，1H)，2.75-2.31(m，5H)，2.18-2.00(m，2H)，1.90(m，1H)，1.78-1.54(m，4H)，1.26(s，3H)；EI-MS m/z(％)274(1.47)，273(7.49)，172(100)，160(16.83)，91(94.57)。
實施例16化合物I-c-b苯甲酸-1-芐基-3-甲基-4-(4-苯哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇酯上面得到的化合物I-c-a(1eq)溶于二氯甲烷中，加入三乙胺(1.5eq)，零度下加入苯甲酰氯(1.2eq)并室溫反應6小時，加水洗，水相用二氯甲烷萃取一次，合并有機相，飽和食鹽水洗，干燥，柱層析得到化合物I-c-b。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.95-7.87(m，2H)，7.46-7.08(m，13H)，4.26(t，J＝6.1Hz，1H)，3.65-3.51(m，3H)，3.32(d，1H)，3.08-2.83(m，5H)，2.78-2.56(m，3H)，2.42-2.20(m，3H)，2.09(m，1H)，1.94(m，1H)，1.65(s，3H)；EI-MS m/z(％)377(1.45)，172(100)，91(73.73)。
實施例17化合物I-d-a1-芐基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇按照制備化合物I-b-a相同的方法，將苯乙酮酸酯換成乙醛酸乙酯即可以得到化合物I-d-a。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.33-7.19(m，10H)，3.70(d，J＝12.9Hz，1H)，3.62(d，J＝12.9Hz，1H)，3.20(d，1H)，3.04-2.70(m，6H)，2.56-2.25(m，4H)，2.23-2.13(m，2H)，1.90-1.76(m，4H)；EI-MS m/z(％)332(0.54)，259(13.15)，174(57.86)，91(100)；實施例18化合物I-d-b1-(1-芐基-4-苯氧基吡咯-3-亞甲基)-4-苯哌啶按照流程VI，化合物I-b-a(1eq)溶于二氯甲烷中，向其中加入三乙胺(1.5eq)。零度下加入甲磺酰氯(1.2eq)并在此溫度下反應半小時，分別加水、食鹽水洗，干燥旋干得白色固體。
得到的固體溶于四氫呋喃中加入苯酚鈉(2eq)并升溫回流，6小時后結束，加水洗，干燥，柱層析得到化合物I-d-b。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.35-7.17(m，10H)，6.98-6.89(m，3H)，6.84-6.80(m，2H)，4.19-4.15(m，1H)，3.99(t，1H)，3.80(d，J＝13.2Hz，1H)，3.73(d，J＝13，2Hz，1H)，3.18-3.12(m，2H)，2.95-2.83(m，5H)，2.79-2.62(m，2H)，2.50(m，1H)，2.06-1.99(m，2H)，1.80-1.73(m，4H)；EI-MS m/z(％)426(M++1，1.00)，335(17.96)，266(18.06)，94(100)，91(57.79)；實施例19化合物I-d-c1-(1-芐基-4-苯硫基吡咯-3-亞甲基)-4-苯哌啶按照制備化合物I-d-b相同的方法，將苯酚鈉換成苯硫酚鈉即可以得到化合物I-d-c。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.40-7.16(m，15H)，3.75(dd，JAB＝13.2Hz，2H)，3.33(m，1H)，2.94-2.70(m，8H)，2.68(m，1H)，2.59(m，1H)，2.01(m，1H)，1.90(m，1H)，1.78-1.60(m，4H)；EI-MS m/z(％)442(M++1，3.83)，351(21.14)，333(100)，174(30.73)，91(83.42)。
實施例20化合物I-d-d1-(4-苯磺酰基-1-芐基吡咯-3-亞甲基)-4-苯哌啶化合物I-d-c(1eq)溶于二氯甲烷中，加入mCPBA(2.0eq)并室溫攪拌過夜，加水洗，干燥并柱層析得到化合物I-d-d。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.84-7.81(m，2H)，7.58-7.21(m，13H)，4.80-4.68(m，1H)，4.53(dd，JAB＝13.2Hz，2H)，4.20-4.11(m，2H)，4.08-3.96(m，1H)，3.64-3.51(m，3H)，3.30-3.12(m，3H)，2.98-2.84(m，1H)，2.59(m，3H)，1.70(m，2H)；EI-MS m/z(％)382(12.12)，332(8.52)，282(27.51)，267(33.19)，91(100)。
實施例21化合物I-d-e[1-芐基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇]苯胺按照制備化合物I-d-b相同的方法，將苯酚鈉換成苯胺即可以得到化合物I-d-e。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.33-7.20(m，15H)，4.07(q，1H)，3.64(dd，JAB＝13.2Hz，2H)，3.17(d，1H)，3.07-2.91(m，2H)，2.75-2.72(m，2H)，2.56-2.40(m，2H)，2.40-2.25(m，1H)，2.18(m，2H)，2.00(m，2H)，1.90-1.65(m，4H)；ESI-MS m/z 426(M++1)；實施例22化合物II-a-a[1-(1-芐基-4-羥基-4-苯基吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]乙酰甲酸芐酯按照流程III，將制備化合物I-b-a時的中間體4-苯基-1-芐基-5-氧基吡咯-3-羧酸(1eq)與DCC(1.1eq)和HOSu(1.1eq)溶于四氫呋喃中，室溫反應6小時后過濾，向母液中加入4-乙酰胺哌啶(1.1eq)并室溫反應6小時后旋干溶劑，加水和乙酸乙酯震蕩分液，有機相用食鹽水洗，干燥。柱層析后得到固體化合物。
固體化合物溶于四氫呋喃中，加入鋰鋁氫(8eq)并升溫回流24小時后用10％氫氧化鈉水溶液淬滅。過濾并旋干溶劑得到粘稠化合物。
上述粘稠化合物溶于二氯甲烷中，加入三乙胺(2.0eq)和苯氧羰基氯(1.5eq)并反應3小時，向體系中加水震蕩分液，有機相用食鹽水洗，干燥后柱層析得到化合物II-a-a。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.38-7.12(m，15H)，5.07(m，2H)，3.91-3.89(m，1H)，3.87-3.33(m，2H)，3.20-3.07(m，3H)，2.95-2.85(m，3H)，2.82-2.72(m，2H)，2.62-2.56(m，1H)，2.45-2.40(m，2H)，2.36-2.29(m，1H)，2.04-1.98(m，2H)，1.39-1.12(m，3H)，1.06(t，J＝7.2Hz，3H)；EI-MS m/z(％)528(M++H+，1.43)，484(2.56)，395(61.84)，394(67.91)，259(16.15)，234(58.02)，141(48.31)，98(40.18)，91(100).
實施例23化合物II-a-b{1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟)苯基吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位}乙酰甲酸芐酯按照制備化合物II-a-a相同的方法，將4-苯基-1-芐基-5-氧基吡咯-3-羧酸換成4-(4-氟)苯基-1-芐基-5-氧基吡咯-3-羧酸即可以制得化合物II-a-b。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.60(m，2H)，7.36-7.28(m，11H)，6.98(t，2H)，5.11(s，2H)，3.76-3.60(m，2H)，3.10(s，2H)，3.00-2.87(m，2H)，2.87-2.71(m，2H)，2.63-2.30(m，3H)，2.05(m，2H)，1.73(m，3H)，1.40-1.20(m，2H)，1.11(m，2H)，0.85(t，3H)；ESI-MS m/z 546(M++1).
實施例24化合物II-a-c[1-(1-芐基-4-羥基-4-甲基吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]乙酰甲酸芐酯按照制備化合物II-a-a相同的方法，將4-苯基-1-芐基-5-氧基吡咯-3-羧酸換成4-甲基-1-芐基-5-氧基吡咯-3-羧酸即可以制得化合物II-a-c。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.38-7.27(m，10H)，5.14(s，2H)，4.20(t，J＝4.2Hz，1H)，3.58(dd，JAB＝13.2Hz)，3.20(d，2H)，2.98(d，1H)，2.80-2.65(m，3H)，2.55(d，1H)，2.40-1.84(m，5H)，1.80-1.55(m，4H)，1.42-1.05(m，4H)，0.88(t，3H)；ESI-MS m/z 466(M++1)。
實施例25化合物III-a-a烯丙基-[1-(1-芐基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照流程IV，將制備化合物I-b-a時的中間體4-苯基-1-芐基-5-氧基吡咯-3-羧酸(1eq)與DCC(1.1eq)和HOSu(1.1eq)溶于四氫呋喃中，室溫反應6小時后過濾，加入三乙胺(2.0eq)和水合哌啶酮鹽酸鹽(1.1eq)并攪拌過夜。旋干四氫呋喃后加水和乙酸乙酯震蕩分液，有機相用食鹽水洗后干燥，過濾并旋干溶劑得到白色固體。
將固體溶于四氫呋喃中并加入鋰鋁氫(8eq)，升溫回流24小時后用10％氫氧化鈉淬滅，過濾并旋干溶劑得到固體泡沫仲醇化合物。
將上面的固體泡沫溶于二氯甲烷，加入三乙胺(1.5eq)和對硝基苯氧羰基氯(1.2eq)并室溫反應4小時，水洗分液后干燥，柱層析后得到化合物III-a-a。
IR(kBr)2938，2806，1751，1710，1608，1523，1496，1448，1378，1348，1261cm-11H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.27-8.22(m，2H)，7.55-7.25(m，12H)，5.97-5.82(m，1H)，5.36-5.07(m，4H)，4.39(m，1H)，3.68(m，2H)，3.25(m，2H)，2.80-2.22(m，6H)，1.79(m，4H)；ESI-MS m/z 585(M++1)；HRMS計算值C34H41N4O5(M++1)585.3071，測量值585.3070.
實施例26化合物III-a-b烯丙基-[1-(1-苯甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照流程V，將制備化合物III-a-a時得到的中間體仲醇化合物(1eq)溶于二氯甲烷中，向體系中加入催化量的DMAP(0.1eq)，三乙胺(5.0eq)和醋干(3.0eq)零度反應2小時后加水震蕩分液，有機相用食鹽水洗并干燥，柱層析后得到固體泡沫。
上面的固體泡沫溶于甲醇中，加入5％的Pd/C在一大氣壓氫氣下氫化過夜，濾除催化劑并旋干溶劑得到泡沫化合物。產物溶于二氯甲烷中并加入三乙胺(1.5eq)和苯甲酰氯(1.2eq)攪拌2小時，水洗并干燥后柱層析得到泡沫化合物。
得到的化合物(1eq)溶于甲醇∶水為5∶1溶劑中，加入碳酸鉀(2.0eq)并攪拌4小時后旋干甲醇，用乙酸乙酯萃取兩次后合并有機相，食鹽水洗，干燥后過濾并旋干溶劑得到白色泡沫化合物。
-78℃下，草酰氯(1.3eq)的二氯甲烷溶液滴加到二甲亞砜的二氯甲烷溶液中并攪拌10分鐘，將上面的白色泡沫化合物(1eq)的二氯甲烷溶液加入上述體系中反應30分鐘后加入三乙胺(3eq)并升溫到室溫，加水和乙酸乙酯震蕩分液，有機相用食鹽水洗后干燥，柱層析得到酮化合物。
向上面的酮化合物(1eq)和NaBH(OAc)3(1.5eq)的混合物中加入1，2-二氯乙烷，再向體系中加入烯丙胺(1eq)和醋酸(1eq)，反應過夜后加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯萃取兩次后合并有機相，食鹽水洗后干燥，過濾旋干溶劑得到白色泡沫化合物。
上面得到的泡沫化合物(1eq)溶于二氯甲烷中，加入三乙胺(2eq)和對硝基苯氧羰基氯(1.5eq)后攪拌2小時。加水和乙酸乙酯震蕩后分液，有機相用食鹽水洗后干燥，過濾后柱層析得到化合物III-a-b。
IR(KBr)3375，3063，2943，1701，1627，1608，1577，1522，1496，1421，1346，1250cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.24-8.19(m，2H)，7.61-7.21(m，12H)，5.82-5.77(m，1H)，5.22-5.11(m，4H)，4.14-3.61(m，8H)，3.17-3.07(m，1H)，2.98-2.40(m，4H)，2.20(m，1H)，1.82-1.50(m，4H)；ESI-MS m/z 599(M++1)；
HRMS計算值C34H39N4O6(M++1)599.2864，測量值599.2879。
實施例27化合物III-a-c烯丙基-[1-[1-(2-碘)苯甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-b相同的方法，將苯甲酰氯換成鄰碘苯甲酰氯即可以得到化合物III-a-c。
IR(KBr)3375，2941，1701，1637，1522，1467，1421，1345，1249cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.24-8.20(m，2H)，7.86-7.80(m，1H)，7.55-7.06(m，10H)，5.95-5.76(m，1H)，5.23-5.12(m，4H)，4.16-4.04(m，2H)，3.96-3.85(m，3H)，3.70-3.13(m，3H)，3.03(m，1H)，2.80(m，2H)，2.57(m，1H)，2.18-2.02(m，2H)，1.87-1.64(m，4H)；ESI-MS m/z 725(M++1)；HRMS計算值C34H38N4O6I(M++1)725.1831，測量值725.1833。
實施例28III-a-d烯丙基-[1-(1-萘甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-b相同的方法，將苯甲酰氯換成1-萘甲酰氯即可以得到化合物III-a-d。
IR(KBr)3381，3060，2943，1701，1633，1522，1465，1428，1384，1346，1249cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.23-8.18(m，2H)，7.96-7.82(m，3H)，7.58-7.21(m，11H)，5.95-5.76(m，1H)，5.21-5.11(m，4H)，4.20-3.96(m，3H)，3.94-3.58(m，3H)，3.52-3.21(m，2H)，3.10(m，1H)，2.82-2.52(m，4H)，2.25-2.06(m，1H)，1.74-1.39(m，4H)；ESI-MS m/z 649(M++1)；HRMS計算值C38H41N4O6(M++1)649.3021，測量值649.3016。
實施例29III-a-e烯丙基-[1-(1-環戊基甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-b相同的方法，將苯甲酰氯換成環戊基甲酰氯即可以得到化合物III-a-eIR(KBr)3375，2948，1700，1637，1523，1467，1345，1249cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.23(d，2H)，7.54-7.23(m，8H)，5.83-5.77(m，1H)，5.23-5.12(m，4H)，4.10-3.67(m，7H)，3.58-3.40(m，1H)，3.06-2.60(m，4H)，2.59-2.40(m，1H)，2.14-2.03(m，1H)，2.00-1.48(m，13H)；ESI-MS m/z 591(M++1)；HRMS計算值C33H43N4O6(M++1)591.3177，測量值591.3168。
實施例30化合物III-a-f烯丙基-[1-(1-環己基甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-b相同的方法，將苯甲酰氯換成環己基甲酰氯即可以得到化合物III-a-f。
IR(KBr)3375，2933，2855，1701，1638，1523，1450，1346，1250cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.22(d，J＝7.8Hz)，7.60-7.52(m，3H)，7.42-7.11(m，4H)，5.92-5.76(m，1H)，5.22(s，2H)，5.16-5.10(m，2H)，4.15-3.62(m，7H)，3.58-3.37(m，1H)，3.11-2.60(m，4H)，2.58-2.00(m，2H)，2.00-1.44(m，15H)；ESI-MS m/z 605(M++1)；HRMS計算值C34H45N4O6(M++1)605.3334，測量值605.3333.
實施例31化合物III-a-g烯丙基-{1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟)苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位}甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-a相同的方法，將中間體4-苯基-1-芐基-5-氧基吡咯-3-羧酸換成4-(4-氟)苯基-1芐基-5-氧基吡咯-3-羧酸即可以得到化合物III-a-g。
IR(KBr)1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.21(m，2H)，7.64-7.47(m，3H)，7.40-7.20(m，6H)，7.05-6.96(m，2H)，5.89(m，1H)，5.18-5.06(m，4H)，3.68(m，3H)，3.28-3.21(m，3H)，2.95(d，1H)，2.86-2.74(m，3H)，2.60(m，1H)，2.53-2.25(m，5H)，1.85-1.75(m，4H).
ESI-MS m/z(M++1)603HRMS計算值C34H39N4O5F(M++1)625.2797，測量值625.2808。
實施例32化合物I-c-c按照制備類似化合物I-c-b相同的方法，將丙酮酸乙酯換成乙醛酸乙酯可以得到化合物I-c-c(0.086g，產率29％)。
實施例33化合物IV-a-a和IV-a-b按照制備化合物I-b-a相似的方法，將β-丙氨酸換成β-丁氨酸，得到對映異構體化合物IV-a-a和IV-a-b(0.020g，產率31％)。
上述實施例所制備的各化合物總結于表I中表I化合物
注“+”表示10,000nM時有一點抑制，“++”表示10,000nM時有較大的抑制，但抑制率仍小于50％。
生物學活性的測試例A.[35S]GTPγS結合實驗CCR5與激動劑結合后，發生構象變化，從而使得CCR5與G蛋白發生相互作用，從而激活了G蛋白。G蛋白是由α亞基，βγ亞基共同組成的三聚體。由于α亞基與GTP結合的能力取決于CCR5與激動劑的作用，測定α亞基結合的GTP量就能反映激動劑對CCR5的激活能力。在GTPγS結合實驗中，為了排除由于GTP酶水解GTP造成與G蛋白結合的GTP量不能準確反映CCR5的激活，同時也為了檢測方便，采用35S標記的GTP的結構類似物GTPγS替代GTP，GTPγS不能被水解。這樣，在CCR5未被激活時，α亞基結合GDP；CCR5激活后，α亞基結合GTPγS，測定α亞基結合35S-GTPγS的數量就能反映出CCR5被激動劑激活的程度。當加入本發明的拮抗劑時，將使得激動劑激活CCR5的能力下降。
CCR5對G蛋白的激活按以下實驗進行測定。
表達CCR5的CHO永久細胞系(CHO-CCR5)(可購自Euroscreen S.A.，Belgium)用裂解緩沖液(5mM Tris-HCl，pH7.5，5mM EDTA and 5mM EGTA)裂解，以15,000×g離心10min。細胞膜用反應緩沖液(50mM Tris-HCl，pH7.5，5mMMgCl2，1mM EGTA，100mM NaCl)重懸后，用Bio-Rad的Bioford法定蛋白。然后，在反應緩沖液中進行GTPγS結合實驗，其中，反應體系為100μl，含10μg膜蛋白，40μM GDP，0.5nM[35S]GTP-γ-S(1200Ci/mmol)，加入待測的化合物后，振蕩混勻，于冰上放置5分鐘后，再加入CCR5激動劑(10nM的RANTES或30nM的MIP-1β)。振蕩混勻后，將反應的試管于30℃孵育1小時。反應結束后，將試管置于冰上，用PBS稀釋以終止反應，用GF/C濾膜真空抽濾。結合的放射性活性用液體閃爍計數儀測定。基礎結合(basal)在無激動劑的情況下測定，非特異性結合(non-specific)在有10μM非同位素的GTPγS存在的情況下測定。[35S]GTPγS結合百分比按100×[c.p.m.sample-c.p.m.non-specific]/[c.p.m.basal-c.p.m.non-specific]來計算。IC50是抑制10nM的RANTES或30nM的MIP-1β引起的[35S]GTPγS結合50％時的化合物濃度，從化合物的濃度曲線上得到(6-7個化合物的濃度點)。
B.細胞趨化實驗表達趨化因子受體的細胞在與激動劑接觸時會向有激動劑的地方發生遷移，因此，測定細胞的遷移能夠反應受體與激動劑的相互作用。測量方法如下。
采用48孔板(AP48，Neuroprobe Inc.，USA)及8μm的濾膜(25×80mm)進行實驗，濾膜預先浸入鼠尾膠原，至少兩小時，取出后在超凈臺上吹干，然后浸入0.1％BSA-MEM。細胞為表達人CCR5的HEK293(293-CCR5)(可購自EuroscreenS.A.，Belgium)。用胰酶消化細胞1分鐘，200g離心收集細胞，加入0.1％BSA-MEM重懸細胞，使細胞密度約為3×106/ml。在每個孔中加26.5μl的趨化因子或1％BSA MEM，然后放置濾膜，蓋上蓋子后，每孔加入50μl的細胞懸液。在做化合物拮抗實驗時，細胞懸液中加入待測的化合物，并于37℃預孵育20min。將孔板置于37℃培養箱進行細胞趨化6小時。然后，取出濾膜，去除加樣孔的細胞后，于4％多聚甲醛4℃固定過夜。次日取出濾膜，用0.5％結晶紫染色2小時以上，用水脫色后晾干，用掃描儀掃下濾膜的圖象，并用Scion Image統計灰度計算。以未加拮抗劑的細胞趨化數為100％進行計算及作圖。
C.MTT細胞毒實驗細胞制備成單細胞懸液，依細胞大小和其生長特性調整細胞密度，用100μl培液接種于96孔培養板中，37℃，5％CO2培養箱飽和濕度下孵育，待處理。接種密度為外周血單核細胞(PBMC)105個/孔，Jurkat細胞4×104個/孔。鋪細胞24小時后，加入待測的化合物與細胞孵育。48小時后，每孔加10μl MTT(Sigma，USA.，5mg/ml，用PBS培液配制，置于-20℃冰箱中保存)，于37℃細胞培養箱中繼續孵育4小時。然后，加入溶解甲臢的三聯劑(10％SDS-5％異丁醇-0.01MHCl)50μl在培養箱中過夜，在酶標儀上測定OD570/OD630nm。通過抑制曲線得到半數有毒劑量CC50。
活性測定結果A.[35S]GTPγS結合實驗表明，本發明的一系列化合物是CCR5的拮抗劑，它們抑制10nM的RANTES激活CCR5而引起的GTPγS的結合，其抑制情況及IC50列于下表。
注“+”表示10,000nM時有一點抑制，“++”表示10,000nM時有較大的抑制，但抑制率仍小于50％。IC50值越低，拮抗作用越強。
對其中一些化合物測定了它們對CXCR4及CCR1受體激活的影響，發現它們(II-a-a，III-a-a，III-a-b，III-a-c，III-a-d，III-a-e，III-a-f)在10,000nM時對這兩個受體都不產生激活或拮抗作用，因此，它們是特異的CCR5的拮抗劑。
另外，II-a-a的甲磺酸鹽除了水溶性顯著提高(約十倍)外，其活性和特異性與未成鹽時是一樣的，IC50為341.5±72.5nM。
對部分化合物(包括II-a-a及其甲磺酸鹽)測定了它們對30nM的MIP-1β(另一種CCR5的激動劑)引起的GTPγS結合的IC50，其結果與抑制RANTES引起的GTPγS結合一致。
B.趨化實驗證明了本發明化合物在較低濃度下可抑制RANTES引起細胞趨化。其中，化合物III-a-e對10nM的RANTES引起細胞趨化的IC50約為30nM。
C.細胞毒實驗表明，測試的化合物的毒性較低或沒有。化合物II-a-a，III-a-b、III-a-c、III-a-d、III-a-e、III-a-f等在10,000nM時對細胞均沒有顯著的毒性，CC50約為30,000nM。
綜上所述，本發明化合物是對CCR5親和力高并且選擇性強的拮抗劑。由于其毒性比較低，治療指數CC50/IC50大于1000，故可運用于臨床上通過拮抗CCR5而治療與CCR5有關的疾病，如AIDS，自身免疫性疾病，炎癥反應。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
權利要求
1.一種式I化合物或其藥學上可接受的鹽， 式中，R1為未取代的或被1-3個取代基取代的下列基團芐基、苯甲酰基、環己基甲酰基、環戊基甲酰基、苯磺酰基、或萘甲酰基，所述的取代基選自鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；R2為羥基、苯甲羧基、苯氧基、苯硫基、苯胺基或苯磺酰基，所述基團中苯環可被1-3個選自下組的取代基取代鹵素和C1-C4烷基；R3為氫、C1-C4烷基，苯基或 所述基團中苯環可被1-3個選自下組的取代基取代鹵素和C1-C4烷基；R4為無、H或羥基；R7為氫，C1-C6烷基或苯基；X為無、O、或C；條件是X為無或O時，R4、R5、R6和Y不存在；當X為C時，Y是N，R5為C1-C6烷基或烯丙基，且R6為對硝基芐氧羰基或芐氧羰基，或者R5、R6和Y一起構成苯基或-R8-苯基，其中R8是C1-C4的亞烷基。
2.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，R1為芐基、苯甲酰基、鄰鹵代苯甲酰基、環己基甲酰基，環戊基甲酰基，苯磺酰基，萘甲酰基。
3.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，R2為羥基、苯甲羧基、苯氧基、苯硫基、苯胺基或苯磺酰基。
4.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，R3為氫、C1-C4烷基、苯基、4-鹵代苯基或
5.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，X為無或O，且R4、R5、R6和Y不存在。
6.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，X為C，且Y是N，R5為C1-C6烷基或烯丙基，R6為對硝基芐氧羰基或芐氧羰基，或者R5、R6和Y一起構成苯基、-CH2CH2CH2-苯基。
7.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，R7為氫，C1-C3烷基或苯基。
8.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，選自下組1-芐基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇；1-芐基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)-4-(4-哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇；1-芐基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇；1-芐基-4-二乙胺基甲基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)吡咯-3-醇；1-芐基-3-(3a，7a-二氫苯并[1，3]二氧五環-5-位)-4-(4-嗎啡啉-1-亞甲基)吡咯-3-醇；[3-羥基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-1-位]苯甲酮；[3-羥基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-1-位]-2-碘苯甲酮；1-苯磺酰基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇；[1-(1-芐基-4-羥基-4-苯基吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]乙酰甲酸芐酯；1-芐基-3-苯基-4-[4-(4-氟苯基哌啶-1-亞甲基)]吡咯-3-醇；1-(1-芐基-4-羥基-4-苯基哌啶-3-亞甲基)-4-(3-苯丙基)哌啶-4-醇；1-芐基-3-甲基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇；環己基-[3-羥基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-1-位]甲酮；環戊基-[3-羥基-3-苯基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-1-位]甲酮；1-芐基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇；苯甲酸-1-芐基-3-甲基-4-(4-苯哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇酯；苯甲酸-1-芐基-4-(4-苯哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇酯；1-(1-芐基-4-苯氧基吡咯-3-亞甲基)-4-苯哌啶；1-芐基-3-苯基-4-[4-(3-苯丙基)哌啶-1-亞甲基]吡咯-3-醇；1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟苯基哌啶-3-亞甲基)]-4-(3-苯丙基)哌啶-4-醇；1-芐基-5-甲基-3-苯基4-(4-苯哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇；1-芐基-5-甲基-3-苯基4-(4-苯哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇；烯丙基-{1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟)苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位}甲酰胺-4-硝基芐酯；{1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟)苯基吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位}乙酰甲酸芐酯；[1-(1-芐基-4-羥基-4-甲基吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]乙酰甲酸芐酯；1-芐基-4-苯硫基吡咯-3-亞甲基)-4-苯哌啶；1-(4-苯磺酰基-1-芐基吡咯-3-亞甲基)-4-苯哌啶；[1-芐基-4-(4-苯基哌啶-1-亞甲基)吡咯-3-醇]苯胺；烯丙基-[1-(1-芐基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-苯甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-[1-(2-碘)苯甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-萘甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-環戊基甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-環己基甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯。
9.一種藥物組合物，其特征在于，它含有藥學上可接受的載體和權利要求1所述的化合物。
10.一種權利要求1所述化合物的用途，其特征在于，用于制備藥物。
全文摘要
本發明公開了一種式I化合物或其藥學上可接受的鹽，它們可作為CCR5拮抗劑。還公開了式I化合物的制法和用途，以及含有式I化合物的藥物組合物。
文檔編號C07D207/09GK1706824SQ20041002500
公開日2005年12月14日 申請日期2004年6月9日 優先權日2004年6月9日
發明者裴鋼, 馬大為, 陳力, 余尚海, 張文波, 董方, 呂燕慧, 陳仁海 申請人:上海靶點藥物有限公司, 中國科學院上海有機化學研究所, 中國科學院上海生命科學研究院