專利名稱：從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法
技術領域：
本發明涉及一種應用逆流色譜技術分離加蘭他敏的方法，特別涉及一種應用高速逆流色譜技術從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法。
背景技術：
加蘭他敏(galanthamine)是50年代開發的膽堿酯酶抑制劑，是由石蒜科石蒜等植物提取的生物堿，多年來一直用于治療重癥肌無力、肌營養不良和小兒麻痹后遺癥。加蘭他敏(4a，5，9，10，11，12-六氫-3-甲氧基-11-甲基-6H-苯并呋喃并(3a，3，2-ef)-(2)并氮雜卓-6-醇)是一種四環生物堿，因其藥理特性其作用類似于毒扁豆堿和新斯的明，但加蘭他敏的治療范圍比毒扁豆堿和新斯的明寬，副作用更小。加蘭他敏還被用于脊髓灰質炎和各種神經系統疾病的治療，在治療青光眼方面也具有較好治療作用。近年，很多國家相繼開展了大量加蘭他敏深入研究相關的藥理學、藥效學和藥代動力學實驗，研究表明，作為第二代膽堿酯酶抑制劑的加蘭他敏在神經突觸中通過與乙酰膽堿競爭同乙酰膽堿酯酶結合，阻斷此酶對乙酰膽堿的降解，進而增加腦內乙酰膽堿的濃度。加蘭他敏治療早老性癡呆的新適應癥因此得到了深入廣泛的研究，相繼獲得世界各國的批準。
加蘭他敏在石蒜科植物中的含量很低，只有萬分之一左右，相伴其它生物堿的種類卻很多，因而提取分離純加蘭他敏存在很大的困難。采用傳統的提取萃取分離工藝，得率低，純度差，周期長，類似生物堿雜質去除困難，不適應目前世界各國對加蘭他敏的高質量要求，迫切需要一種穩定的高純度的加蘭他敏生產工藝。
發明內容
本發明的目的是采用逆流色譜技術分離得到98％以上高純度的加蘭他敏。
為實現上述目的，本發明采用以下技術方案以逆流色譜為分離技術，以逆流色譜設備為分離設備，應用動態液-液分配原理，以混合后上下分層的兩相溶劑組合為流動相和固定相，利用相對移動的互不混溶的兩相溶劑，在處于動態平衡的兩相中將具有不同分配比的石蒜粗提取物溶解液組進行分離，收集目標成分加蘭他敏，得到固體，其溶劑系統組合可為烷烴、鹵代烴、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚類、無機鹽緩沖液、水等溶劑的其中三個、四個或二個組分所構成；根據粗提物性質任一溶劑系統可包含適當無機鹽類等；其中烷烴是正乙烷、正庚烷、正戊烷；鹵代烴是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳；脂肪醇、脂肪酮是甲醇、乙醇、丙酮；脂肪酯是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯；醚類是乙醚、石油醚、叔丁基甲基醚等，無機鹽類是磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、碳酸氫鈉與碳酸鈉緩沖液等；典型的溶劑系統組合可以為鹵代烴、脂肪醇、水組合以上相為流動相，下相為固定相，調節體積比為2-6∶0-4∶2-6，經一次分離得到加蘭他敏純品。
脂肪酯、脂肪醇、水組合以上相為固定相，下相為流動相，調節體積比為2-5∶0-3∶2-5，經一次分離得到加蘭他敏純品。
烷烴、脂肪酯、脂肪醇、水組合以上相為固定相，下相為流動相，調節體積比為2.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3，經一次分離得到加蘭他敏純品。
醚類、烷烴、脂肪醇、水組合以上相為固定相，下相為流動相，調節體積比為1.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3，經一次分離得到加蘭他敏純品。
具體操作按以下步驟進行按體積比將上述溶劑體系配置，搖勻后靜置分層。將上、下相分開，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相充滿色譜柱中，使主機轉動，再將流動相泵入柱內，進樣，控制流速，按目標成份收集洗脫液，得到固體。
本發明的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法與傳統方法相比，它是一種連續的無需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術，避免了固態支持體或載體帶來的被吸附、損耗和變性等問題，具有分離量大，樣品無損失，回收率高，分離環境溫和，節約溶劑等特點，可以直接用粗提物分離結果能達到相當高的純度，且適用于各種工藝途徑制備的不同含量石蒜粗提取物分離制備高純度加蘭他敏單體。
具體實施例方式
實施例1本實施例溶劑系統采用三氯甲烷-甲醇-水，溶劑組分按4∶3∶2配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例2本實施例溶劑系統采用二氯甲烷-乙醇-水，溶劑組分按4∶3∶2配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例3本實施例溶劑系統采用乙醚-正己烷-甲醇-水，溶劑組分按4∶1∶3∶4配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例4本實施例溶劑系統采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，溶劑組分按1∶1∶1∶1配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例5本實施例溶劑系統采用正己烷-乙酸丙酯-甲醇-水，溶劑組分按2∶4∶3∶4配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例6本實施例溶劑系統采用乙酸乙酯-甲醇-水，溶劑組分按4∶2∶3配置，加入適當無機鹽搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例7本實施例溶劑系統采用乙酸乙酯-乙醇-水，溶劑組分按4∶2∶3配置，加入適當無機鹽搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例8本實施例溶劑系統采用叔丁基甲基醚-正乙烷-甲醇-水，溶劑組分按1∶3∶2∶3配置，加入適當無機鹽搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例9本實施例溶劑系統采用三氯甲烷-磷酸鹽緩沖液，溶劑組分按1∶1配置，搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例10本實施例溶劑系統采用正戊烷-乙酸乙酯-碳酸鈉緩沖液，溶劑組分按1∶5∶5配置，搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例11本實施例溶劑系統采用乙醚-正庚烷-甲醇-水，溶劑組分按2∶4∶3∶4配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
實施例12本實施例溶劑系統采用正己烷-乙酸正丁酯-乙醇-水，溶劑組分按2∶4∶3∶4配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動相。稱取石蒜粗提物溶解于流動相中，先用固定相充滿整個色譜柱，調整主機轉速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動相泵入柱內，調整設備平衡后，進樣，用收集器收集洗脫液，根據檢測器接收目標成分。得到固體，用HPLC檢測純度達到98％以上。
權利要求
1.一種從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于它是采用逆流色譜技術從石蒜粗提物中分離制備加蘭他敏，所用的溶劑體系為烷烴、鹵代烴、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚類、無機鹽緩沖液、水等其中的三個、四個或二個組分所構成。
2.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其三個組分構成的溶劑體系是由鹵代烴、脂肪醇、水構成，體積比為2-6∶0-4∶2-6。
3.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其三個組分構成的溶劑體系是由脂肪酯、脂肪醇、水構成，體積比為2-5∶0-3∶2-5。
4.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其四個組分構成的溶劑體系是由烷烴、脂肪酯、脂肪醇、水構成，體積比為2.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3。
5.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其四個組分構成的溶劑體系是由醚類、烷烴、脂肪醇、水構成，體積比為1.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3。
6.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其二個組分構成的溶劑體系是由鹵代烴或脂肪醇與無機鹽緩沖液構成，體積比為1∶1。
7.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于烷烴是正乙烷、正庚烷、正戊烷。
8.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于鹵代烴是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳。
9.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于脂肪醇、脂肪酮是甲醇、乙醇、丙酮。
10.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于脂肪酯是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯。
11.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于醚類是乙醚、石油醚、叔丁基甲基醚等。
12.根據權利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于無機鹽類是磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、碳酸氫鈉與碳酸鈉緩沖液等。
全文摘要
本發明涉及一種用逆流色譜技術從石蒜粗提物中分離制備高純度加蘭他敏的方法，其所用的溶劑體系為烷烴、鹵代烴、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚類、無機鹽緩沖液、水等溶劑其中的三個、四個或二個組分構成，具體是按體積比將上述溶劑體系配置，搖勻后靜置分層，以混合后上下分層的兩相溶劑組合為流動相和固定相，利用相對移動的互不混溶的兩相溶劑，在處于動態平衡的兩相中將具有不同分配比的石蒜粗提取物溶解液組份進行分離，得到固體加蘭他敏。該方法避免了固態支持體或載體帶來的被吸附、損耗和變性等問題，具有分離量大，樣品無損失，回收率高，分離環境溫和，節約溶劑等特點。
文檔編號C07D491/00GK1490319SQ03142010
公開日2004年4月21日 申請日期2003年7月28日 優先權日2003年7月28日
發明者鄭亞津, 陳紅輝 申請人:浙江一新制藥股份有限公司