能夠抑制表皮生長因子受體旋酪氨酸激酶的雙環化合物的制作方法

專利名稱：能夠抑制表皮生長因子受體旋酪氨酸激酶的雙環化合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及抑制表皮生長因子受體及相關受體，尤其是其酪氨酸激酶活性的芳香雜雙環化合物。
背景技術：
癌癥通常是一種細胞內信號系統，或信號轉導機制的疾病。細胞從許多細胞外來源處接受指示，命令其繁殖或不繁殖。信號轉導系統的目的在于在細胞表面接收這些和其他信號，讓其進入細胞，然后將信號傳遞至細胞核，即細胞骨架及運輸和蛋白質合成機構。癌癥最常見的起因是一系列缺陷，要么是在這些蛋白質上(當它們產生突變時)，要么是在細胞內該蛋白質的定量調節上(使其過量產生或產生不足)。通常是在細胞內存在關鍵性損害，它導致一結構性態，從而使細胞核在繁殖信息實際上不存在時接受該信號。這可通過各種機制產生。有時細胞在不應產生生長因子時反而為自身的受體產生可靠的生長因子，即所謂的自分泌環機制。通常利用酪氨酸激酶向細胞內發送信號的細胞表面受體的突變可導致該繳酶在無配位體的情況下被激活，并傳遞并不真正存在的信號。或者，許多表面激酶也可能在細胞表面過量表達，導致了某一弱信號的不適當的強烈反應。在細胞內的多個水平上發生的突變或過量表達均可導致在細胞內產生同樣的虛假信號，而且許多其它種類的信號缺陷均與癌癥相關。本發明涉及由上面所述的三種機制產生的癌癥，而且它與表皮生長因子受體酪氨酸激酶族(EGFR)的細胞表面受體有關。該族受體由EGF受體(也稱為Erb-B1)、Erb-B2受體及其具有結構活性的瘤蛋白質突變體Neu、Erb-B3受體和Erb-B4受體。或者，也可利用下面所述的本發明化合物來處理由EGF族受體成員驅動的生物學過程。
EGFR以表皮生長因子(EGF)和轉化生長因子α(TGFα)作為其兩個最重要的配位體。該受體在成年人中似乎僅具有微小作用，但卻很明顯地與大部分癌癥，尤其是結腸癌和乳腺的疾病過程有關。密切相關的Erb-B2、Erb-B3和Erb-B4受體具有一族Heregulins作其主要配位體，且已經非均等地證明受體過量表達和突變是不良預后乳腺癌的主要危險因素。另外，也已證實該族受體的所有四種成員均可與該族的其它成員形成雜二聚體信號復合物，且當一個以上的該族成員在癌癥中過量表達時它可導致協同轉化能力。已證實在人的癌癥中一個以上的族成員的過量表達相對來說更為普遍。
目前對于增生性皮膚疾病牛皮癬沒有好的治療方法。通常是用抗癌藥如氨甲喋呤進行治療，該藥具有非常嚴重的副作用，而且在不得不使用的限毒劑量時不是很有效。據信在牛皮癬中TGFα是過量產生的主要生長因子，因為50％過量表達TGFα的轉基因小鼠產生牛皮癬。它提示EGFR信號的良好抑制劑可被用作抗牛皮癬的藥物，它優選但不是必須過通過局部給藥。
EGF是腎小管細胞有效的促細胞分裂素。在患有鏈佐星誘導的糖尿病的小鼠中，已發現EGF的尿分泌和EGF mRNA均增加了四倍。另外，還發現增生性腎小球性腎炎患者的EGFR的表達增強(Roychaudhury et al.Pathology 1993，25，327)。本發明的化合物應可用于治療增生性腎小球性腎炎以及糖尿病誘導的腎性疾病。
已報道慢性胰腺炎伴隨著EGFR和TGFα表達的大量增加(Korc et al.，Gut 1994，35，1468)。在該疾病更為嚴重(其特征是胰腺頭增大)的患者中還顯示出erb-B2受體的過量表達(Friess etal.Ann.Surg.1994，220，183)。因此，本發明的化合物應可用于治療胰腺炎。
在胚細胞成熟、胚細胞植入子宮內膜及其它周圍植入行為過程中，子宮組織產生EGF和TGFα(Taga Nippon Sanka Fujinka GakkaiZasshi 1992，44，939)，其EGFR水平提高(Brown et al.Endocrinology1989，124，2882)，以及由于正在發育但未被捕獲的胚細胞的接近而被誘導產生結合肝素的EGF(Das et al.Development1994，120，1071)。而胚細胞又具有非常高水平的TGFα和EGFR表達(Adam-son，Mol.Reprod.Dev.1990，27，16)。體內EGF分泌主要位點的下頜下腺的手術摘除以及用抗EGFR單克隆抗體進行治療均通過減少胚細胞的成功移植而大大降低了小鼠的生育力(Tsutsumi et al.J.Endocrinolgy 1993，138，437)。因此，本發明的化合物應被證明具有有用的避孕性能。
1992年5月14日公布的PCT專利申請WO 92/07844和1992年9月3日公布的WO92/14716敘述了在癌癥治療中作為化學治療劑的增效劑的2，4-二氨基喹唑啉。
1992年11月26日公布的PCT申請WO 92/20642公開了雙單和雙環芳香化合物和芳香雜環化合物，它們能夠抑制EGF和/或PDGF受體酪氨酸激酶。
本發明的一個目的就是要利用有效量的雙環嘧啶衍生物，尤其是稠合的雜環嘧啶衍生物來抑制表皮生長因子的促細胞分裂作用。
本發明的第二個目的是描述作為EGF、Erb-B2和erb-B4受體酪氨酸激酶抑制劑的雙環嘧啶衍生物，尤其是稠合的雜環嘧啶衍生物。
本發明的第三個目的是描述可在低劑量時用作EGF-誘導的有絲分裂抑制劑的雙環嘧啶衍生物，尤其是稠合的雜環嘧啶衍生物。因此，它導致的另一個目的是具有極抵細胞毒性的化合物。
本發明的第四個目的是描述雙環嘧啶衍生物，尤其是稠合的雜環嘧啶衍生物，它們可用于抑制腫瘤，尤其是乳腺癌，在這類癌癥中有絲分裂被EGFR組成員強烈驅動。
本發明的第五個目的是描述雙環嘧啶衍生物，尤其是稠合的雜環嘧啶衍生物，它們可作為EG F-誘導的反應的抑制劑而用于慢性治療。
本發明的第六個目的是描述雙環嘧啶衍生物，尤其是稠合的雜環嘧啶衍生物，它們可用作增生性過度生長疾病的治療劑，這類疾病包括，但不限于關節炎中的滑液血管翳侵害、血管再狹窄、牛皮癬和血管生成。本文公開的化合物也可用于治療胰腺炎和腎臟疾病，并可作為避孕藥。

發明內容
本發明描述了一種用有效抑制量的下式I化合物處理哺乳動物而抑制表皮生長因子的方法 其中A-E中至少一個，至多三個為氮原子，其余為碳原子，或者在A-E中任何兩個相鄰的位置結合在一起，為一單個雜原子N、O或S，在后一種情況下兩個剩余原子中的一個必須為碳原子，另一個可為碳原子或氮原子；X＝O、S、NH或NR7，R7為C1-4低級烷基OH、NH2，C1-4低級烷氧基，或C1-4低級單烷基氨基；n＝0，1，2；R1＝H或C1-4低級烷基；若n＝2，則R1可在任一相連碳原子上獨立為H或C1-4低級烷基；R2為C1-4低級烷基，C3-8環烷基，C1-4低級烷氧基，C3-8環烷氧基，硝基，鹵素，(氟，氯，溴，碘)，全氟化C1-4低級烷基，羥基，C1-4低級酰氧基(-O-C(O)-R)，氨基，一或二-C1-4低級烷基氨基，一或二-C3-8低級環烷基氨基，羥甲基，C1-4低級酰基(-C(O)R)、氰基，硫代低級烷基、亞硫酰基C1-4低級烷基，磺酰基C1-4低級烷基，C3-8硫代環烷基，C3-8亞硫酰基環烷基，C3-8磺酰基環烷基，磺酰氨基，一或二-C1-4低級烷基磺酰氨基，一或二-C3-8環烷基磺酰氨基，巰基，羧基，甲酰氨基(-C(O)-NH2)，一或二-C1-4低級烷基羧酰氨基，一或二-C3-8環烷基羧酰氨基，C1-4低級烷氧羰基，C3-8環烷氧羰基，C2-4低級鏈烯基，C4-8環烯基，C2-4低級炔基，或者相鄰碳原子上的兩個R2結合在一起，共同形成5-7元碳環或單不飽和的1，3-二氧戊環基、1，4-二氧雜環己基、1，4-二氧雜基(dioxepinyl)、吡喃基、呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、四氫噻吩基、噁唑烷基(oxazolanyl)、噻唑烷基(thiazolanyl)、二唑烷基(diazolanyl)、哌嗪基、嗎啉代或硫代嗎啉代環；m＝0-3，其中Ar為苯基，噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡啶基，嘧啶基，咪唑基，吡嗪基，噁唑基，噻唑基，萘基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，吲哚基，喹啉基，異喹啉基和喹唑啉基；R3、R4、R5和R6各自獨立地不存在，或為H，C1-4低級烷基，C3-8環烷基，C1-4低級烷氧基，C3-8環烷氧基，羥基，C1-4低級酰氧基，氨基，一或二-C1-4低級烷基氨基，一或二-C3-8低級環烷基氨基，C1-4低級烷基或C3-8環烷基，碳酸酯基(-OC(O)OR)，其中R為C1-4低級烷基或C3-8環烷基；或脲基或硫脲基或N-或O-連接的尿烷，它們均可選擇性地被一或二-C1-4低級烷基或C3-8環烷基取代；C1-4低級硫代烷基，C3-8硫代環烷基，巰基，C2-4低級鏈烯基，肼基，N′-C1-4低級烷基肼基，C1-4低級酰氨基，羥氨基，C1-4低級O-烷基羥氨基；或相鄰碳原子上的R3-R6中的任何兩個共同形成5-7元碳環或單不飽和1，3-二氧戊環基、1，4-二氧雜環己基、1，4-diox-epinyl、吡喃基、呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、四氫噻吩基、oxazolanyl、thiazolanyl、diazolanyl、哌嗪基、嗎啉代或硫代嗎啉代環；在R3-R6中任何取代基上的任何低級烷基取代基可選擇性地被一個或多個下列基團取代羥基，氨基，低級一烷基氨基，低級二烷基氨基，N-吡咯烷基，N-哌啶基，N-吡啶鎓，N-嗎啉代，N-硫代嗎啉代或N-哌嗪基；如果A至E中的-個或多個為N，則與N原子相鄰的碳原子上的R3-R6中的任何一個不為OH或SH；且如果取代基R1、R2、R3、R4、R5或R6中的任何一個含有手性中心，或R1在相連原子上產生手性中心時，則其所有單獨存在的和作為外消旋和/或非對映異構體混合物形式存在的立體異構體均包括在內。
本發明也敘述了利用有效抑制量的式II化合物處理哺乳動物以抑制表皮生長因子的方法 其中Ar、n、m、R1-7和X的定義同式I中；R8為C1-4烷基，氨基或一或二-C1-4低級烷基氨基。
本發明也可適用于式I和式II化合物的組合物，條件是R3-R6取代基中的至少一個必須單獨作為不同于氫、鹵素、C1-4低級烷基或C1-4低級烷氧基的取代基，且A、B、D和E必須均單獨為碳或氮原子。


圖1顯示了實施例6和7對于A431人表皮樣瘤中EGF受體自身磷酸化的作用；圖2是實施例8對A431人表皮樣瘤中EGF受體自身磷酸化的作用；圖3是由實施例27產生的對A431中EGF受體自身磷酸化抑制的時間曲線；圖4是實施例27對A431細胞中EGF受體自身磷酸化的作用；圖5是實施例40對A431人表皮樣瘤中EGF受體自身磷酸化的抑制；圖6是實施例40對Swiss3T3中生長因子介導的酪氨酸磷酸化的作用；圖7是實施例40對Swiss3T3小鼠成纖維細胞中生長因子依賴性C-jun mRNA表達的作用；
圖8是實施例40對生長因子介導的p39C-jun表達的作用；圖9是實施例59對A431人表皮樣瘤中EGF受體自身磷酸化的作用；圖10是實施例60對A431人表皮樣瘤中EGF受體自身磷酸化的作用；圖11是實施例61對A431人表皮樣瘤中EGF受體自身磷酸化的作用；圖12是實施例70對A431人表皮樣瘤中EGF受體自身磷酸化的作用；圖13是實施例27對EGF受體酪氨酸激酶的抑制圖；圖14是實施例40對Swiss3T3鼠成纖維細胞中生長因子介導的有絲分裂的作用圖；圖15是被人EGFR基因轉染的NIH 3T3鼠成纖維細胞系的照片，它顯示了正常的扁平形態；圖16是被100ng/ml EGF處理過的同樣細胞系的照片，它顯示出典型的紡綞狀轉化形態；圖17是在100ng/ml EGF和5μm實施例27存在下的同樣細胞的照片，它顯示出細胞形態由轉化型回復到正常型。
對優選實施方案的敘述1.在一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為低級烷氧基或鹵素。
2.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為氨基。
3.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為一或二-低級烷基氨基。
4.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為肼基。
5.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為低級烷基。
6.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4為低級烷氧基。
7.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4為低級烷基。
8.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為氨基，另一個為低級烷氧基。
9.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為一或二-低級烷基氨基，另一個為低級烷氧基。
10.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3為一或二-低級烷基氨基，R4為羥基。
1-10組的合適環結構為 11.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4共同為二氧亞甲基，二氧亞乙基，2，3-稠合的哌嗪，2，3-稠合的嗎啉或2，3-稠合的硫代嗎啉。合適的環結構為 12.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、D和E為碳原子，B為氮原子，且R4為低級烷氧基或鹵素。
13.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、D和E為碳原子，B為氮原子，且R4為氨基。
14.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、D和E為碳原子，B為氮原子，且R4為一或二-低級烷基氨基。
15.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、D和E為碳原子，B為氮原子，且R4為肼基。
16.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、C和E為碳原子，B為氮原子，且R4為低級烷基。
12-16組的合適環結構為
17.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為低級烷氧基或鹵素。
18.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為氨基。
19.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為一或二-低級烷基氨基。
20.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為肼基。
21.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為低級烷基。
17-21組的合適環結構為 22.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為低級烷氧基。
23.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為氨基。
24.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為一或二-低級烷基氨基。
25.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為肼基。
26.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為低級烷基。
27.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4為低級烷氧基。
28.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4為低級氧基。
29.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為氨基，另一個為低級烷氧基。
30.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為一或二-低級烷基氨基，另一個為低級烷氧基。
31.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R4為一或二-低級烷基氨基，R3為羥基。
22-31組的合適環結構為
32.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4共同形成二氧亞甲基，二氧亞乙基，2，3-稠合的哌嗪，2，3-稠合的嗎啉或2，3-稠合的硫代嗎啉。
33.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和D為碳原子，B和E為氮原子，R4為低級烷氧基。
34.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和D為碳原子，B和E為氮原子，R4為一或二-低級烷氨基。
35.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和D為碳原子，B和E為氮原子，R4為氨基。
36.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和D為碳原子，B和E為氮原子，R4為肼基。
33-36組的合適環結構為 37.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，B和D為碳原子，A和E為氮原子，R3和R4為低級烷氧基。
38.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，B和D為碳原子，A和E為氮原子，R3和R4為一或二-低級烷基氨基。
39.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，B和D為碳原子，A和E為氮原子，R3和R4中一個為低級烷氧基，另一個為一或二-低級烷氨基。
40.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，B和D為碳原子，A和E為氮原子，R3和R4亞乙二氧基、2，3-稠合的哌嗪、2，3-稠合的嗎啉或2，3-稠合的硫代嗎啉。
37-40組的合適環結構為 41.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫原子，D和E為碳原子，或A和B為碳原子，而D和E共同為硫原子，R4或R3為H、低級烷基，低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
42.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氧原子，D和E為碳原子，或A和B為碳原子，而D和E共同為氧原子，R4或R3為H、低級烷基，低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
43.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氮原子，D和E為碳原子，或A和B為碳原子，而D和E共同為氮原子，R4或R3為H、低級烷基，低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
44.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫原子，D為碳原子，E為氮原子，或者D和E共同為硫原子，且A為氮原子，B為碳原子，R4或R3為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
45.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氧原子，D和E為氮原子，或D和E共同為-氧原子，A為氮原子，B為碳原子，R4或R3為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
46.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氮原子，D為碳原子，E為氮原子，R3/6為H或低級烷基，R4為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
47.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氧原子，D和E為碳原子，或A和B共同為-碳原子，而D為氮原子，E為氧原子，R3/6為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
48.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫原子，D為氮原子，E為碳原子，或A和B共同為碳原子，而D為氮原子，E為硫原子，R3/6為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
49.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氮原子，D為氮原子，E為碳原子，或A和B共同為碳原子，而D和E為氮原子，R3/6為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
其它合適的環結構為 其中Z＝氮、氧或硫本發明化合物可按一系列交替反應順序制得。
制備本發明化合物的途徑方案1制備R4＝H的優選組1-5的途徑在NMP(溶劑N-甲基-2-吡咯烷酮)中，利用氰化亞銅置換2，6-二氯-3-硝基吡啶中的2-氯，在這步驟中用氟置換該腈的第二個氯原子是有利的。接著，在鹵素不被氫解的條件下溫和還原硝基。在腈水解后進行原甲酸酯環和Vilsmeier型氯化將產生二鹵代吡啶并嘧啶。用合適的胺置換更具反應性的4-氯原子后，用合適的親核的試劑(氨、低級烷基胺、肼、甲醇鹽)置換6-鹵素原子，即得到最終產物。
1.在一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為低級烷氧基或鹵素。
2.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為氨基。
3.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為一或二-低級烷基氨基。
4.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為肼基。
5.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為低級烷基。
方案2制備R3＝H的優選組1-5的途徑在NMP中用CuCN置換2-氯-3，5-二硝基吡啶中的氯原子。將硝基還原為胺后水解腈成酰胺。用原甲酸酯將其環化為嘧啶酮，再用POCl3轉化為氯化物，或可能地通過用五硫化二磷及MeI和一種溫和的碘處理將其轉化為硫甲基衍生物。用合適的胺置換后產生所需的7-氨基化合物。胺官能團可通過如下方法被還原性烷基化或活化在酸性或堿性條件下使氨基重氮化，接著還原為酰肼或轉化為低級烷基醚或鹵素，然后按本領域熟悉的方法進行銅酸鹽或Stille偶聯。或者，可將胺還原性胺化或酰化并還原，形成烷基氨基側鏈。
方案3制備其中R4＝RO的優選組6和8-10的途徑用已知方法對2，6-二氟吡啶進行兩次金屬取代。經LDA處理及隨后的硼酸鹽/過氧化氫處理后引入3-羥基取代基。如果吡啶在4-位經歷第二次金屬取代，可將醇作為TIPS(三異丙基甲硅烷基)醚保護起來，它將迫使第二次金屬取代發生在5-位。或者，可利用硝化作用，如將鋰中間體轉化為錫烷，并用四硝基甲烷處理，或利用NO2BF4(四氟硼酸硝鎓)。利用氰化亞銅或其它來源的氰化物離子可置換C1。在腈水解和硝基還原后，可利用原甲酸乙酯代替甲酰胺進行環化，而且某些環化反應還需要在反應前用Mes置換F。通過氯化活化4-位，然后引入側鏈胺，利用醇鹽或胺親核試劑可完成最后的置換，產生各種二烷氧基和氨基-烷氧基化合物，且在合成結束時使用合適的R可使得7-羥基去保護(LDA指二異丙基氨基化鋰)。
6.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4為低級烷氧基。
8.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為氨基，另一個為低級烷氧基。
9.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4中一個為一或二-低級烷基氨基，另一個為低級烷氧基。
10.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3一或二-低級烷基氨基，R4為羥基。
方案4-制備優選組7的途徑在加壓條件下用6-烷基喹哪啶酸處理后再用離子溴處理，得到酐，將其用氨開環，重新環化為酰亞胺，接著在活性較小的羥基上產生Hoffman降解。按正常方式進行環化和環側鏈加成，接著進行Stille偶聯，引入R4烷基。在這一步中，也可利用該偶聯技術引入鏈烯基或芳基取代基。
7.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D&E為碳原子，A為氮原子，且R3和R4為低級烷基。
方案5-制備其中R3＝OR的優選組的途徑在2，6-二羥基吡啶被二硝化后，將其轉化為反應性很強的二氯化合物。在NMP中用氰化亞銅單置換二硝基二氯吡啶，然后在溫和條件下將其還原為二胺，將腈水解為酰胺，然后環化為吡啶并嘧啶酮，按通常方式將其4-氯化。在用4-側鏈置換更具反應性的氯后，再用醇鹽置換6-氯。對于第9組，應用本領域熟知的方法將胺適當地烷基化。
方案6-制備優選組11的途徑優選組11的化合物是優選組6，8，9和10的特殊情況，其中R3和R4被環化在一起。它們可按與所述優選組相同的方式制備，只需進行對于本領域技術人員來說是顯而易見的微小改進。例如，連位取代的烷氧基氨基化合物可被去烷基化，而相應的連位氨基醇則可被合適的二鹵代烷烴二烷基化。
11.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，B、D和E為碳原子，A為氮原子，R3和R4共同為二氧亞甲基，二氧亞乙基，2，3，-稠合的哌嗪，2，3，-稠合的嗎啉或2，3，-稠合的硫代嗎啉。
方案7-制備優選組12-16的途徑通過在高溫下用芐基胺和甲酸處理可將2，4-二氨基-5-氰基吡啶直接環化為多種4-芐基氨基吡啶并嘧啶衍生物。對于親核性較小的胺，可通過原甲酸乙酯/乙酸酐處理，然后在無水條件下用氫硫基離子環化而將2，4-二氨基-5-氰基吡啶轉化為7-氨基-4硫代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。經5-烷基化和用適宜的胺置換后產生所需的產物。如果R4不為氨基，則可將胺酰化或還原性烷基化。或者，水解2，4-二氨基-5-氰基-吡啶為相應的酰胺，然后用原甲酸酯將其環化為7-氨基-4-氧代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。在C4取代基以常規方式引入后，對7-胺進行重氮化并用氟取代將允許在合成結束時引入其它胺和醇鹽親核試劑。重氮化和用溴化物取代胺將使7-位發生Stille偶聯。
12.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、D和E為碳原子，B為氮原子，且R4為低級烷氧基或鹵素。
13.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、D和E為碳原子，B為氮原子，且R4為氨基。
14.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、D和E為碳原子，B為氮原子，R4為一或二-低級烷基氨基。
15.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、D和E為碳原子，B為氮原子，且R4為肼基。
16.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、C和E為碳原子，B為氮原子，且R4為低級烷基。
方案8-制備優選組17-21的途徑在DMSO中用KF將2-氯-5硝基吡啶轉化為2-氟化合物。經還原硝基和用BOC酐處理后產生BOC氨基衍生物，它可在4-位被金屬取代和羧化。用TFA除去BOC并用甲酰胺環化嘧啶環，產生6-氟-4-氧代-3H-吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。按常規方式將其4-氯化，并通過用合適的胺置換引入4-側鏈。用合適的親核試劑置換6-氟即得到各種不同的終產物。如果氟被硫代甲醇鹽取代，則后者可在Ni-催化的Grignard置換中被烷基取代。
17.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為低級烷氧基或鹵素。
18.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為氨基。
19.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為一或二-低級烷基氨基。
20.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3肼基。
21.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和E為碳原子，D為氮原子，R3為低級烷基。
方案9-制備優選組22-26(R4＝H)的途徑2-甲氧基煙酸的硝化及隨后的活化甲氧基的置換和嘧啶酮環的環化，可利用甲脒一步完成，或者可通過先用氨處理后再用甲酰胺等同物環化而分兩步完成。按常規方式將羰基轉化為氯化物并用側鏈置換，然后將硝基選擇性地還原為氨基。將其烷基化、酰化和重氮化。重氮化合物可轉化為羥基、溴化物或碘化物，后者再經Stiile偶聯即可在R3位引入低級烷基、鏈烯基或炔基。
22.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為低級烷氧基。
23.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為氨基。
24.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為一或二-低級烷基氨基。
25.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H，另一個為肼基。
26.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為H原子，另一個為低級烷基。方案10-制備優選組22-26(R3＝H)的途徑該途徑是按已知方式對2，6-二氟吡啶進行金屬取代和羧化，然后置換2-氟取代基。用甲酰胺環化嘧啶酮，然后按常規方式將羰基轉化為氯化物，即產生氯氟吡啶并嘧啶。通過置換更具反應性的嘧啶氯引入芳(烷)基側鏈，然后通過氟化物置換引入R4取代基。通過用醇鹽置換F引入烷基，后一種醚裂解為吡啶酮，O-三氟化并Stille偶聯。
方案11-制備優選組27和29-31(R3＝RO)的途徑該途徑依賴于類似方案10的2，6-二氟吡啶的金屬取代。第一次金屬取代被用于引入氧，第二次則引入羧酸。如果需要迫使第二次金屬取代發生在5-位，可將氧以非常龐大的TIPS醚形式保護起來，而且可能需要比LDA更強的堿。在高溫、高壓下在2-位引入氨，按常規方式環化吡啶酮環，并在4-位活化，然后用4-位側鏈置換。用合適親核試劑置換7-氟取代基，然后按前述途徑轉化，即完成合成。
27.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4為低級烷氧基。
29.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為氨基，另一個為低級烷氧基。
30.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4中一個為一或二-低級烷基氨基，另一個為低級烷氧基。
31.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R4為一或二-低級烷基氨基，R3為羥基。
方案12-制備優選組28的途徑通過利用LDA連續鋰化，由2，6-二氟吡啶制得5-溴-2，6-二氟煙酸。通過偶聯使5-位烷基化，分兩步環化嘧啶酮環。按常規方式引入4-取代基，并用硫代甲醇鹽置換7-氟基團。接著在鎳鹽催化劑存在下用Grignard試劑置換該硫醚。再次在Stille和Grignard偶聯中使用合適的有機金屬試劑可導致在R3和R4位產生鏈烯基、炔基和芳基取代基。
28.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4為低級烷基。
方案13-制備優選組29和30(R4＝RO)的途徑按適當順序硝化市售二氯煙酸，然后在溫和條件下選擇性置換更具反應性的Cl，以及置換另一個氯。環化產物6-烷氧基-2-氨基-5-硝基煙酸為嘧啶酮，將4-羰基轉化為氯，并按常規方式用合適的胺置換，即產生4-氨基-7-烷氧基-6-硝基吡啶并〔2，3-d〕嘧啶。還原硝基并進行任何所需的烷基化和酰化，得到所需化合物。
方案14-制備優選組32的途徑32組化合物是優選組27、29、30和31的特例，其中R3和R4被環化在一起。它們可按與這些優選組相同的途徑制得，只需進行很小的改動。例如，連位取代的烷氧基氨基化合物可被去烷基化，而相應的連位氨基醇則可通過合適的二鹵代烷烴被二烷基化。可按方案13所示的途徑制備派嗉，條件是用合適的胺親核試劑代替醇鹽來置換6-氯取代基。
32.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A、B和D為碳原子，E為氮原子，R3和R4共同形成二氧亞甲基、二氧亞乙基、2，-3-稠合的哌嗪，2，3-稠合的嗎啉或2，3，-稠和的硫代嗎啉。
方案15-制備優選組33-36的途徑將合適的S-烷基異硫脲鹽與甲氧基甲脒丙二腈反應，產生全功能化的嘧啶前體。如果證明置換或氧化在后來產生問題，則可在腈水解前或水解后用R4置換初始形成的嘧啶的SET。也可以不經氧化置換SET基團以活化硫。環化次級嘧啶環，然后通過硫雜化和烷基化活化4-羰基。即使此時7-硫基未被置換，也優選引入4-氨基側鏈。
33.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和D為碳原子，B和E為氮原子，R4為低級烷氧基。
34.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和D為碳原子，B和E為氮原子，R4為一或二-低級烷基氨基。
35.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和D為碳原子，B和E為氮原子，R4為氨基。
36.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和D為碳原子，B和E為氮原子，R4為肼基。
方案16-制備優選組37-40的途徑按熟知方法制備蝶呤核。對于37組，可將蝶呤二酮中間體O-烷基化，且對于37組和其它組，可將蝶呤二酮轉化為三氯蝶呤，并按適當順序對鹵素進行選擇性置換，從而產生所需化合物。
37.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，B和D為碳原子，A和E為氮原子，R3和R4為低級烷氧基。
38.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，B和D為碳原子，A和E為氮原子，R3和R4為一或二-低級烷基氧基。
39.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，B和D為碳原子，A和E為氮原子，R3和R4中一個為低級烷氧基，另一個為一或二-低級烷基氨基。
40.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0，芳香環苯基可選擇性地被取代，B和D為碳原子，A和E為氮原子，R3和R4亞乙二氧基、2，3-稠合的哌嗪、2，3，-稠合的嗎啉或2，3-稠和的硫代嗎啉。
方案17-制備優選組41〔3，2-d〕環稠合的途徑可按標準化學方法由市售3-氨基噻吩羰酸乙酯和甲酰胺制備出3，H-噻吩并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮。利用標準方法將羰基轉化為氯化物，然后用合適的胺置換，即產生所需的噻吩并〔3，2-d〕嘧啶。如果R4不為H，則可在所示階段或更早的階段引入合適的親電子劑，例如針對基于胺或重氮化產生的取代基的硝基，然后通過還原和氨化或通過Stille偶聯，或本領域技術人員熟知的其它方法轉化為R4。〔這一技術也適用于所有下面的優選組，它們具有在R3或R4上被取代的可能性，因為它們都含有富含電子的五元環，能夠通過親電子芳族取代而被很容易地操作〕(DMSO為二甲基亞砜)。
41.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫原子，D和E為碳原子，或A&B為碳原子，而D和E共同為硫原子，R4和R3為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
方案18-制備優選組41〔2，3-d〕環稠合的途徑由2，5-二羥基-1，4-二噻烷和氰基乙酸乙酯進行Gewald合成，然后進行甲酰胺環化，即制備出噻吩并〔2，3-d〕嘧啶-4-酮。用標準方法將羰基轉化為氯化物，然后用合適的胺置換，產生所需的噻吩〔2，3-d〕嘧啶。
方案19-制備優選組42〔3，2-d〕環稠合的途徑〔3，2-d〕環稠合的化合物可如方案A中所示得自3-溴糠醛。用疊氮化物置換溴化物，接著氧化醛，從而建立起在嘧啶環上稠合所必需的基本的氨基糠醛酸。要使用所述的成環方法，或者通過處理實際使用的是其酸性生物的物質，人們可使用各種其它環化方法，然后根據需要活化4-位。
42.在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氧原子，D&E為碳原子，或A&B為碳原子，而D和E共同為氧原子，R4或R3為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
方案20-制備優選組42〔2，3-d〕環稠合的途徑將6-氯-4-甲硫基嘧啶與LDA及DMF反應，產生出相應的5-醛，后者用合適乙醇酸酯的鈉鹽處理，置換氯，并通過分子內3-羥基丁醛縮合就地形成呋喃環。酯的裂解和不需要的7-酸性官能團的朊羧，可于高溫下在兩極非質子傳遞溶劑中一步完成，或者在分開的皂化和Cul喹啉脫羧步驟中完成。用合適的胺置換4-甲硫基即產生所需的呋喃并〔2，3-d〕嘧啶。
方案21-制備優選組43〔2，3-d〕環稠合的途徑為了制備吡咯并〔2，3-d〕嘧啶，利用上述方案B中所示的已知技術將嘧啶環環化至氰基氨基吡咯上。在活化并用側鏈置換硫醇之前或之后可進行吡咯環的選擇性親電子取代。
43、在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氮原子，D和E為碳原子，或A和B為碳原子，而D和E共同為氮原子，R4或R3為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
方案22-制備優選組43(〔3，2-d〕環稠合)的途徑采用上面所述的將原甲酸酯與6-嘧啶酮的酸化的4-甲基縮合以形成吡咯并嘧啶的方法制備吡咯并〔3，2-d〕嘧啶。側鏈可按方案1中所示的標準方法加到其上，且R4取代基可按上面所述的標準親電子化學法引入。
方案23-制備優選組44(〔5，4-d〕環稠合)的途徑在脫水劑如PPA存在下，將二硫甲酸與2-氨基丙二腈縮合，產生5-氨基-4-氰基噻唑。將該產物與原甲酸酯反應。然后用MeSNa處理，產生噻唑并〔5，4-d〕嘧啶衍生物，它再經合適的胺處理即產生所需產物。
44、在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫原子，D為碳原子，E為氮原子，或者D和E共同為硫原子，且A為氮原子，B為碳原子，R4或R3為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
方案24-制備優選組44(〔4，5-d〕環稠合)的途徑將N-氰基二甲硫基甲基與硫代乙醇酸乙酯反應，產生乙基2-甲硫基-4-氨基噻唑-5-甲酰胺。用甲酰胺或其等同物環化，然后使甲硫基脫硫化，產生噻唑并嘧啶酮，再經Vilsmeier試劑活化及用所需胺置換氯化物，即產生如上所示的所需噻唑并〔4，5-d〕嘧啶衍生物。
方案25-制備優選組45(〔5，4-d〕環稠合)的途徑用原甲酸乙酯/乙酸酐處理已知的5-氨基-4-氰基噁唑，然后與MesNa反應，產生4-甲硫基噁唑并〔5，4-d〕嘧啶，它經用合適的胺置換后產生如上所述的所需噁唑并〔5，4-d〕嘧啶。
45、在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氧原子，D和E為氮原子，或D和E共同為-氧原子，A為氮原子，B為碳原子，R4或R3為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。方案26-制備優選組45(〔4，5-d〕環稠合)的途徑將已知的5-氨基-4，6-二氯嘧啶重氮化后用稀硫酸處理即得到相應的5-羥基化合物。用氨置換氯原子之一，并用甲酸或其合適的等同物使噁唑環成環，再用合適的胺置換其它的氯即得到所需的噁唑并〔4，5-d〕嘧啶。
方案27-制備優選組46的途徑通過利用本領域熟知的技術直接置換合適6-氯嘌呤上的鹵素即可制備出這組化合物。通過在活化的嘌呤核的8-位進行親電子取代，然后進行前例所述的各種轉化。即可引入R3取代基。
46、在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氮原子，D為碳原子，E為氮原子，R3/6為H或低級烷基，R4為H、低級烷基、低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
方案28-制備優選組47(〔5，4-d〕環稠合)的途徑將6-氯-4-甲硫基嘧啶與LDA及DMF反應，產生相應的5-醛，將其在溫和酸性條件下用羥胺處理，然后在堿性條件下處理，以完成成環，產生4-甲硫基異噁唑并〔5，4-d〕嘧啶，再經用合適的胺置換即產生所需的異噁唑并〔5，4-d〕嘧啶衍生物。
47、在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氧原子，D和E為碳原子，或A和B共同為-碳原子，而D為氮原子，E為氧原子，R3/6為H、低級烷基，低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
方案29-制備優選組47(〔4，5-d〕環稠合)的途徑將4，6-二氯-5-硝基嘧啶與CucN/NMP反應，產生4-腈。將硝基還原為相應乙胺，然后重氮化并用稀硫酸處理，產生相應的5-羥基化合物。將其與Me3Al/NH4Cl反應，產生脒。將該脒氧化環化為7-氨基-4-氯異噁唑并〔4，5-d〕嘧啶。通過重氮化/連二磷酸除去氨基官能團，然后用適宜的胺置換4-氯，產生如上所述的所需異噁唑并〔4，5-d〕嘧啶衍生物。
方案30-制備優選組48(〔5，4-d〕環稠合)的途徑將6-氯-4-甲硫基嘧啶與LDA和DMF反應，產生相應的5-醛，然后用NaSH、NBS和氨處理以完成成環，產生4-甲硫基異噻唑并〔5，4-d〕嘧啶。經用合適的胺置換后，產生如上所述的所需異噻唑并〔5，4-d〕嘧啶衍生物。
48、在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫原子，D為氮原子，E為碳原子，或A和B共同為碳原子，而D為氮原子，E為硫原子，R3/6為H、低級烷基，低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
方案31-制備優選組48(〔4，5-d〕環稠合)的途徑將4，6-二氯-5-硝基嘧啶與CuCN/NMP反應，產生4-腈。還原硝基為胺，然后進行重氮化/硫雜化，產生相應的5-硫基化合物。將其與Me3Al/NH4Cl反應，產生脒。用NBS進行氧化環化，形成7-氨基-4-氯異噻唑并〔4，5-d〕嘧啶。通過重氮化/連二磷酸除去氨基官能團，并用合適的胺置換4-氯，即產生如上所述的所需異噻唑并〔4，3-d〕嘧啶衍生物。
方案32-制備優選組49(〔3，4-d〕環稠合)的途徑將6-氯-4-甲硫基嘧啶與LDA和DMF反應，產生相應的5-醛，用肼處理使其成環，產生4-甲硫基吡唑并〔3，4-d〕嘧啶，再經用合適的胺置換，即產生如上所述的所需吡唑并〔3，4-d〕嘧啶衍生物。
49、在另一優選的實施方案中，X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為氮原子，D為氮原子，E為碳原子，或A和B共同為碳原子，而D和E氮原子，R3/6為H、低級烷基，低級烷氧基、氨基或一或二-低級烷基氨基。
方案33-制備優選組49(〔4，3-d〕環稠合)的途徑硝化并還原吡唑-3-羧酸，產生4-氨基吡唑-3-羧酸。將其用甲脒HCl環化為吡唑并〔4，3-d〕嘧啶-4-酮，然后利用常規方法用鹵化物置換羰基，再用合適的胺置換氯化物，產生如上所述的所需吡唑并〔4，3-d〕嘧啶。
本發明的最優選形式1.本發明的最優選形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，B、D和E為碳，A為氮，R4為氨基。
2.本發明的最優選形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，B、D和E為碳，A為氮，R4為甲氨基。
3.本發明的最優選形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，B、D和E為碳，A為氮，R4為二甲氨基。
4.本發明的最優選形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-硝基苯基，A、D和E為碳，B為氮，R4為氨基。
5.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳，B為氮，R4為氨基。
6.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為4-溴苯基，A、D和E為碳原子，B為氮，R4為氨基。
7.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為三氟甲苯基，A、D和E為碳，B為氮，R4為氨基。
8.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳原子，B為氮原子，R4為乙酰氨基。
9.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝1，R1＝H，芳香環為苯基，A、D和E為碳，B為氮。
10.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝1，R1＝H，芳香環為苯基，A、D和E為碳，B為氮原子，R4為乙酰氨基。
11.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、B和E為碳，D為氮，R3＝Cl。
12.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳，D為氮，R3為甲氧基。
13.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳，D為氮，R3為甲氨基。
14.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳，D為氮，R3為二甲氨基。
15.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，D和E為碳，A和B共同為S。
16.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝1，R1＝H，芳香環為苯基，D和E為碳，A和B共同為S。
17.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A和B為碳原子，D和E共同為S。
18.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，B為碳，A及D和E一起為氮。
19.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、B和E為碳，D為氮，R3為N-哌啶基。
20.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳，B為氮，R4為氟。
21.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-羥基苯基，A、D和E為碳，B為氮，R4為氨基。
22.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳，B為氮，R4為甲氨基。
23.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳，B為氮，R4為二甲氨基。
24.本發明最優選的形式之一為X＝NMe，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳，B為氮，R4為甲氨基。
25. 本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、D和E為碳原子，B為氮原子，R4為甲氧基。
26.本發明最優選的形式之一為X＝NH，x＝0，芳香環為3-溴苯基，A、B和D為碳，E為氮，且R4為氟。
生物學這些化合物是人EGF受體酪氨酸激酶及包括ERB-B2、ERB-B3和ERB-B4受體激酶在內之其他EGF受體家族其他成員的強有力的和選擇性的抑制劑，并可用于治療哺乳動物的增殖性疾病。這些抑制劑可阻止那些其分裂是由該受體激酶家族中一個或多個成員驅使之細胞的細胞分裂。其中可包括期望阻止分裂的正常細胞，例如那些因該激酶家族過表達或突變而轉化的細胞，如預后不良的乳腺癌細胞，中EGFR、FRB-B2和ERB-B3的過表達及ERB-B2突變成癌蛋白質NEU是細胞轉化的主要因素。鑒于優選的化合物是沒有高度毒性的并且沒有顯示出強有力的生長抑制性質(由于它們對EGF激酶家族之抑制作用是高度特異的)，所以它應比大多數抗腫瘤和抗細胞增殖藥物有更清楚的毒性曲線。它們與目前抗腫瘤藥物的很不同的作用方式應利于將其用于那些預期與可得到的治療劑有協同作用的多藥物治療中。
已顯示本發明的化合物以高親和力結合于激酶的三磷酸腺苷(ATP)結合位點，而成為強有力的EGF受體酪氨酸激酶的可逆抑制劑。基于檢測衍生于蛋白質PLC-υ1(一種已知的EGFR磷酸化底物)之磷酸化位點的肽的磷酸化作用，發現這些化合物對酶的酪氨酸激酶活性表現有很強的即從10μM至50μM的IC50值。這一數據示于表1中。
生物學數據材料和方法表皮生長因子受體酪氨酸激酶的純化-用下述方法從過表達EGF受體的A431人表皮樣癌細胞中分離人EGF受體酪氨酸激酶。在加有50％Delbuco氏改良的Eagle培養基和含10％胎牛血清之50％HAMF-R營養培養基(Gibco)的旋轉瓶中培養細胞。在兩倍體積的含20mM2-(4N-〔2-羥乙基〕哌嗪-1-基)乙磺酸(Hep-es)(pH7.4)、5mM亞乙二醇雙(2-氨基乙醚)N，N，N’，N’-四乙酸、1％Tritom X-100、10％甘油、0.1mM原釩酸鈉、5mM氟化鈉、4mM焦磷酸、4mM苯甲酰胺、1mM二硫蘇糖醇、80μg/ml抑蛋白酶肽、40μg/mL亮抑蛋白酶肽和1mM苯基甲基磺酰氟的緩沖液中約109個細胞溶解。以25,000g離心10分鐘后，用10mL先前已在50mM Hepes、10％甘油、0.1％Triton X-100和150mM NaCl(pH7.5)(平衡緩沖液)中平衡過的麥胚凝集素-瓊脂糖將上清液4℃平衡2小時。用加在平衡緩沖液中的1M NaCl從樹脂上洗去污染的蛋白質，并先用加在平衡緩沖液中的0.5M N-乙酰基-1-D-葡糖胺，再用1mM尿素洗脫酶。用0.1mg/ml EGF洗脫酶。用考馬斯蘭染色的聚丙烯酰胺電泳凝膠估測受體似乎是均質的。
IC50值的測定——在含有25mM Hepes(pH7.4)、5mM MgCl2、2mM MnCl2、50μM釩酸鈉、5-10ng EGF受體酪氨酸激酶、200μM底物肽(Ac-Lys-His-Lys-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Ser-Ala-Tyr472-Glu-Glu-Val-NH2，根據氨基酸序列推導的(已證明Tyr472是受EGF受體酪氨酸激酶作用而磷酸化的PLC(磷脂酶C)-r1中的四個酪氨酸之一〔Wah1，M.I.；Nishibe，S.；Kim，J.W.；Kim，H.；Rhee，S.G.；Carpenter，G.J.Biol.Chem.，(1990)，265，3944-3948〕，并且從該位點周圍的酶序列衍生的肽是酶的極好底物)、含有1μCi〔32P〕ATP的10μMATP中進行，并在室溫下保溫10分鐘。加入2ml 75mM磷酸終止反應，并通過2.5cm磷酸纖維素濾膜以結合該肽。用75mM磷酸將濾膜洗5次并放在含5mL閃爍液(Readygel Beckman)的小管中。
表1EGF受體酪氨酸激酶抑制作用



細胞Swiss 3T3小鼠成纖維細胞、A431人表皮樣癌細胞和MCF-(Michigan Cancer Foundation，人乳腺癌細胞)、SK-BR-3(人乳腺癌細胞)、MDA-MB-231和MDA-MB-468(人乳腺癌細胞)均得自American Type Culture Collection，Rockville，Maryland，并作為細胞單層維持于含有10％胎牛血清的dMEM(Dulbecco氏改良的Eagle培養基)/FR(50∶50)(Gibco/BRL)中。為了得到條件培養基，使MDA-MB-231細胞在850cm2旋轉瓶中生長成單層并換成50ML無血清培養基。3天后除去培養基，以等分部分冷凍并用作heregulin源以刺激erbB-2、3、4。
抗體抗PDGF(血小板所需的生長因子)受體或磷酸酪氨酸的單克隆抗體得自Upstate Biotechnology，Inc.，Lake Placid，NY。抗pp39jun(抗轉錄因子C-jun抗體，它為39K道爾頓的磷蛋白)和抗EGF受體抗體得自Oncogene Science，Uniondale，NY。
免疫沉淀和Western印跡分析使細胞在100mm培養皿(Corning)中生長至100％匯合。用EGF(表皮生長因子)、PDGF或bFGF(堿性成纖維細胞生長因子)(20ng/ml)或1ml MDA-MB-231細胞的條件培養基將細胞處理5分鐘后，除去培養基并將細胞刮到1ml冰冷的裂解緩沖液(50mMHepes，pH7.5、150mM NaCl、10％甘油、1％Triton X-100、1mMEDTA、1mM EGTA、10mM焦磷酸鈉、30mM磷酸對硝基苯酯、1mM原釩酸鹽、50mM氟化鈉、1mM苯基甲磺酰氟、10μg/ml抑蛋白酶肽和10μg/ml亮抑蛋白酶肽)中。將細胞裂解物轉移到離心管(1-2ml的小的塑料離心管)，在冰上放置15分鐘并以10,000g離心5分鐘。將上清轉入清潔的離心管中并向指定的樣品內加入5μg抗體。于4℃將管旋轉2小時后加入25μl蛋白A-瓊脂糖，然后繼續旋轉至少2小時。用50mM Hepes(pH7，5)，150mMNaCl、10％甘油和0.02％疊氮鈉將蛋白A-瓊脂糖洗5次。用30μl Laemlli緩沖液(Laemmli，NatureVol，727，pp.680-685，1970)重新懸浮沉淀物，加熱至100℃維持5分鐘并離心得到上清液。將生長于6小孔平板的各小孔內的細胞刮入0.2μl煮沸的Laemlli緩沖液中，制得全細胞提取物。將提取物轉入離心管并于100℃加熱5分鐘。將免疫沉淀得到的整個上清液或35μl全細提取物加樣于聚丙烯酰胺凝膠(4-20％)上并按Laemlli所述的方法(Laemlli，1970)進行電泳。將凝膠中的蛋白質電泳轉移到硝酸纖維素膜上，并將膜在10mM Tris緩沖液(pH7.2)、15mM NaCl、0.01％Azide(TNA)中洗一次，然后在含有5％牛血清白蛋白和1％卵白蛋白的TNA(封閉緩沖液)中封閉過夜。將膜第一抗體(1μg/ml，在封閉緩沖液中)印跡轉移2小時，然后相繼在TNA、含有0.05％Tween-20和0.05％Nonidet P-40(乙基苯基聚乙二醇，一種商品去污劑)和TNA中洗2次。然后在含有0.1μCi/ml〔125I〕蛋白A的封閉緩沖液中將膜保溫2小時，并再次按上述方法清洗。印跡干燥后，將其裝入膠片暗盒內并對X-ARX線膠片曝光1-7天。蛋白A是與某些IgG亞型特異結合的細菌蛋白質，并用于與抗原-抗體復合物結合并分離之。
Northern印跡利用RNAzol-B(Tcl Test lnc.公司使用在用于從組織分離RNA的試劑盒上的商標)并遵從制造者的使用說明，從未處理的對照或已處理過的Swiss 3T3細胞分離總的細胞RNA。將40-50μgRNA加樣于1％瓊脂凝膠上，并于65伏電流3-4小時，通過毛細管作用將凝膠中的RNA轉移至一尼龍膜(Hybond-N，Amer-sham)。利用T4核苷酸激酶(Promega)將40mer c-jun探針的末端用〔32P〕ATP標記，并按供應商Oncogene Seience推薦的方法在G25sephadex柱上純化。于65℃過夜雜交(c-jun為前早期轉錄因子；它是AP-1的組分之一，而FOS是-AP-1的第二組分)。
生長因子介導的細胞分裂在24孔平板(1.7×1.6cm，平底)上培養Swiss 3T3成纖維細胞至90-100％匯合。然后在無血清培養基中抑制生長18小時。向特定孔中加入藥物，2小時后加入生長因子，然后將細胞暴露于20ng/ml EGF、PDGF或bFGF或10％血清24小時。向每孔中加入2μCi〔甲基-3H〕胸腺嘧啶，并于37℃保溫2小時。將細胞用胰蛋白酶水解，并注射至2ml冰冷的15％三氯乙酸中(TCA)。在玻璃纖維濾膜上收集所產生的沉淀，用2ml等份冰冷的15％TCA洗滌五次，干燥，并與10ml Ready凝膠(Beckman，lrvine，CA)一起置于閃爍小瓶中。于Beckman LS 6800閃爍計數器中測定放射活性。
生長抑制試驗將懸浮于2ml培養基內的細胞(2×104個)接種24孔平板(1.7×1.6cm，平底)中，其中沒有 或加有不同濃度的藥物。在含5％CO2的濕環境下將平板37℃保溫3天。用CoulterModel AM電子細胞計數器(Coulter Electronics，Inc.，Hialeah，FL)進行細胞計數以確定細胞生長情況。
本發明的化合物對A431表皮樣癌細胞中EGF誘導的自磷酸化和在SK-BR-3乳腺癌細胞中條件培養基誘導的自磷酸化的抑制作用。


酪氨酸激酶抑制劑的抗增殖性質IC50(nm)

B104-1-1用neu癌基因轉染的NIH-3T3小鼠成纖維細胞stern et al.，Science 234，PP.321-324(1987)；SK-BR-3過表達erb B-2和erb B-3的人乳腺癌；MDA-468過表達EGF受體的人乳腺癌。
培養按實驗部分詳述方法顯色的上述凝膠證明了本發明的化合物在阻斷全細胞中某些EGF刺激的細胞分裂信號發生過程的效力。凝膠左側的數字指出分子量標準品(千道爾頓)的位置。標示對照的泳道顯示在沒有EGF刺激的情況下生長相關信號的表達程度，而標示為EGF(或PDGF或b-FGF)的泳道則顯示生長因子相關信號大小。其他泳道顯示指定量的定名藥物對所檢測之生長因子刺激的活性的影響，證明本發明的化合物在全細胞中具有與其抑制EGF受體之酪氨酸激酶活性的能力相一致的有效作用。
通過與特定針對C-jun放射性標記的RNA探針雜交用實施例40凝膠(附圖7)檢測C-jun的mRNA。該凝膠證實在Swiss 3T3細胞中生長因子EFG、PDGF和b-FGF刺激C-jun的產生，且證實化合物40抑制EGF刺激的細胞產生C-jun，但不抑制PDGF或b-FGF刺激的細胞產生C-jun。實施例40化合物對生長因子介導的p39C-jun表達的作用。
該凝膠顯示了在Swiss 3T3細胞中由生長因子EGF、PDGF和b-FGF誘導的C-jun的量(用抗C-jun專一性單克隆抗體定量)。它證明了當由EGF而不是PDGF或b-FGF刺激時實施例40化合物在Swiss 3T3中抑制C-jun表達的能力。
應理解的是，為提高其活性可將本文所述的化合物與其他成分合用。這些附加成分是阿霉素、紅豆杉醇，順鉑等抗腫瘤劑。
已發現本文所述的化合物可抑制erb-B2和erb-B4受體，因此與上述抗腫瘤劑合用時顯著地增加了其臨床應用活性。
也見附圖1-17所示的結果部分優選的結構式如下
Ex.# Z4 -fluorine6 -NH27 -NHCH38 -N(CH3)2 Ex# Z R222NH2-NO227NH2Br Ex# Z R259-OCH3Br60-NHCH3Br61-N(CH3)2Br
化學實驗下面為本發明的優選實施方案，其中除非另有說明，所有溫度均為攝氏度，所有份均為重量份。
實施例14-苯胺基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶甲磺酸酯3H-吡啶并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮。將6-氯-3-硝基吡啶酰胺(2.00g，9.91mmol)的EtOAc/MeOH(1∶1，100ml)溶液于60psi在5％pd-C上氫化6天，并在第2和第4天后加入新的催化劑。過濾除去催化劑后，濃縮溶液至干燥，得到3-氨基吡啶酰胺的橙色油狀物，將其直接用于下一步驟。將粗產物與原甲酸三乙酯(50ml)一\起回流攪拌42h，在此期間形成褐色沉淀物。冷卻后，過濾固體，用石油醚充分洗脫，真空干燥后得到3H-吡啶并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮(1.27g，87％)，mp 343-345℃〔Price，C.C.and Curtin，D.Y.J.Amer.Chem.Soc.68，914，1946 report mp 346-347℃〕。
4-氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶。將上述嘧啶酮(1.00g，6.80mmol)于POCl3(30ml)中的懸浮液加熱回流4h，然后減壓濃縮干燥。將殘余物在CH2Cl2和飽和NaHCO3溶液間分配，經處理有機層后得到4-氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.97g，86％)的褐色固體，mp335℃(分解)，它不經進一步純化而被直接使用。
4-苯胺基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶甲磺酸酯。將4-氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(84mg，0.5mmol)、苯胺(56mg，0.6mmol)和三乙胺(62mg，0.6mmol)于EtOH(2ml)中的溶液在N2下攪拌回流2h。粗反應混合物在制備性tlc平板(硅膠)上純化，用3％MeOH的CHCl3溶液洗脫一次。提取主要帶，減壓蒸發干燥，并將殘余固體溶于丙酮(5ml)，過濾，并在攪拌下緩慢加入甲磺酸(32μl，0.5mmol)。通過抽濾收集沉淀物，用丙酮浸沒，并于真空爐中干燥，得到4-苯胺基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶甲磺酸酯(91mg，57％)，為暗黃色針狀物。
1H NMR(DMSO)δ11.75(1H，slbrs)，9.11(1H，dd，J＝1.5，4.3Hz)，8.97(1H，s)，8.32(1H，dd，J＝1.5，8.4Hz)，8.12(1H，dd，J＝4.3，8.5Hz)，7.88(2H，d，J＝8.2Hz)，7.49(2H，t，J＝8.0Hz)，7.32(1H，t，J＝7.0Hz)，2.34(3H，s)。
實施例24-芐基氨基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶將新鮮制備的4-氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.10g，0.60mmol)(按前述實驗制得)和芐胺(0.13ml，1.20mmol)于含有微量濃HCl的丙-2-醇(15ml)中的溶液于50℃加熱30分鐘，然后濃縮至干。殘余物在水和EtOAc間分配，提取有機層，在硅膠上層析，EtOAc洗脫初提物，而MeOH/EtOAc(1∶9)則洗脫出4-(芐氨基)吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.11g，77％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.67(1H，s)，6.50(1H，dd，J＝4.3，1.5Hz)，8.10(1H，dd，J＝8.5，1.5Hz)，7.63(1H，dd，J＝8.8，4.3Hz)，7.55(1H，brs)，7.41-7.29(5H，m)，4.86(2H，d，J＝5.9Hz)。
實施例34-(3-溴苯胺基)吡啶并〔3，2-d〕嘧啶將4-氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(按前述實施例制得)和3-溴苯胺在含有微量濃HCl的丙-2-醇中于50℃反應30分鐘，然后硅膠層析產物，得到4-(3-溴苯基)氨基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(產率87％)。
1H NMR(CDCl3)δ9.19(1H，brs)，8.83(1H，s)，8.80(1H，dd，J＝4.3，1.5Hz)，8.29(1H，brs)，8.19(1H，dd，J＝8.5，1.5Hz)，7.83(1H，m)，7.76(1H，dd，J＝8.5，4.3Hz)，7.29-7.27(2H，m)。
實施例44-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶2-氰基-6-氟-3-硝基吡啶。將6-氯-2-氰基-3-硝基吡啶〔Colbry，N.L.；E1slager，E.F.；Werbel，L，M；J.Het.Chem.，1984，21，1521-1525〕(10.0g，0.054mol)和KF(9.48g，0.163mol)于MeCN(200ml)中的混合物在攪拌下加熱回流18h，然后倒入水中，并用EtOAc萃取。水洗萃取物并處理，硅膠層析殘余物(用EtOAc/石油醚(3∶7)洗脫)。在減壓除去溶劑后得到2-氰基-6-氟-3-硝基吡啶(7.2g，79％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.79(1H，dd，J＝9.0，6.0Hz)，7.48(1H，dd，J＝9.0，3.0Hz)。
6-氟-3-硝基吡啶-2-甲酰胺。將2-氰基-6-氟-3-硝基吡啶(1.40g，8.395mmol)的90％H2SO4(30ml)溶液于70℃加熱90分鐘，然后冷卻，倒入冰上并用濃氨水堿化。用EtOAc萃取后得到6-氟-3-硝基吡啶-2-甲酰胺(0.94g，61％)1H NMR(CDCl3)δ8.70(1H，dd，J＝8.9，6.5Hz)，8.30，8.03(1H，1H，brs)，7.62(1H，dd，J＝8.9，2.9Hz)。
6-氟-3H-吡啶并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮。于60psi，將6-氟-3-硝基吡啶-2-甲酰胺(1.50g，8.10mmol)的EtOAc(80ml)溶液在5％pd-C(0.30g)上氫化2h。過濾除去催化劑后，減壓除去溶劑，得到粗3-氨基-6-氟吡啶-2-甲酰胺的殘渣，將其直接用于下一步驟。加入原甲酸三乙酯(60ml)，并將混合物在劇烈攪拌下加熱回流18h。冷卻后用等體積的石油醚稀釋混合物，過濾收集所得沉淀，并用石油醚充分洗滌，得到6-氟-3H-吡啶并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮(1.26g，84％)。
1H NMR(DMSC)δ12.72(1H，brs)，8.31(1H，dd，J＝8.6，7.7Hz)，8.20(1H，s)，7.66(1H，dd，J＝8.6，3.0Hz)。
4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶。將6-氟-3H-吡啶并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮(0.20g，1.21mmol)的POCl3(30ml)懸液在攪拌下回流加熱，直至均勻(2h)，然后繼續進行1h。減壓下除去過量的POCl3，殘余物在CH2Cl2和飽和NaHCO3水溶液間分配，處理有機層后得到粗4-氯-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(100％)，它為不穩定的白色固體，將其直接用于下一步驟。
將4-氯-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.20g，1.1mmol)和3-溴苯胺(0.12ml，2.18mmol)在含有濃HCl(1滴)的丙-2-醇(20ml)中的溶液加熱回流15分鐘，然后冷卻，倒入水中，用EtOAc萃取，處理萃取物，殘余物在硅膠上層析，并用EtOAc/石油醚(1∶2)洗脫。減壓除去溶劑后得到4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.18g，52％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.82(1H，s)，8.65(1H，brs)，8.31(1H，t，J＝7.4Hz)，8.27(1H，brs)，7.77(1H，m)7.41(1H，dd，J＝8.9，2.2Hz)，7.29(2H，brs)。
實施例54-(3-溴苯胺基)-6-氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶6-氯-3-硝基吡啶酰胺。將6-氯-3-硝基吡啶腈(1.00g，5.45mmol)的90％H2SO4(15ml)溶液于70℃加熱3.5小時，然后倒入冰水，用EtOAc萃取混合物四次，合并后的萃取物經處理后得到6-氯-3-硝基吡啶酰胺(0.80g，73％)。
1H NMR(DMSO)δ8.55(1H，d，J＝8.5Hz)，8.31，8.04(1H，1H，2 brs)，7.93(1H，d，J＝8.5Hz)。
6-氯-3H-吡啶并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮。于60psi，將6-氯-3-硝基吡啶酰胺(0.30g，1.49mmol)的EtOAc(30ml)溶液在5％pd-C(0.10g)上氫化20分鐘。過濾除去催化劑后，將溶液濃縮至干，得到3-氨基-6-氯吡啶酰胺。為黃色油狀物，將其直接用于下一步驟。將其溶于原甲酸三乙酯(30ml)，并將混合物加熱回流18小時，向冷卻后的溶液中加入石油醚(30ml)，過濾出所產生的粗6-氯-3H-吡啶并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮的沉淀(0.27g，99％)，并在真空爐中干燥。
4-(3-溴苯胺基)-6-氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶。將上述喹唑酮(0.20g，1.10mmol)于POCl3(30ml)中的懸浮液加熱回流3小時，然后減壓濃縮干燥。將殘余物在CH2Cl2和飽和NaHCO3溶液間分配，處理有機層后得到4，6-二氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.16g，73％)，它為褐色固體，被直接用于下一步驟。將粗二氯吡啶并嘧啶(0.16g，0.80mmol)和3-溴苯胺(0.17ml，1.60mmol)于含有微量濃HCl的丙-2-醇(25ml)中的溶液于50℃加熱30分鐘。將冷卻后的混合物倒入飽和NaHCO3中，并用EtOAc萃取。處理萃取物并在硅膠上層析。用EtOAc/石油醚(1∶4)洗脫后得到3-溴苯胺，而用EtOAc/石油醚(1∶1)則洗脫出4-(3-溴苯胺基)-6-氯吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.17g，63％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.90(1H，brs，)8.84(1H，s)，8.30(1H，dd，J＝2.1，2.0Hz)8.17(1H，d，J＝8.8Hz)，7.82-7.78(1H，m)7.73(1H，d，J＝8.8Hz)，7.32-7.29，(2H，m)。
實施例64-(3-溴苯胺基)-6-氨基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶于100℃壓力容器中將4(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.12g，0.38mmol)(如前面實例所述)與飽和氨水溶液反應18h，得到6-氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(87mg，72％)。1HNMR(CDCl3)δ8.76(1H，brs)，8.64(1H，s)，8.23(1H，brs)，7.93(1H，d，J＝9.0Hz)，7.81(1H，dt，Jd＝7.7Hz，Jt＝1.8Hz)，7.28-7.22(2H，m)，7.00(1H，d，J＝9.0Hz)，4.90(2H，brs)。
實施例74-(3-溴苯胺基)-6-甲基氨基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶于100℃壓力容器中，將4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(50mg，0.16mmol)(如前例所述)與甲基胺鹽酸鹽(32mg，0.47mmol)和三乙胺(70μl，0.55mmol)在乙醇(10ml)中反應18h，得到6-甲基氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(43mg，81％)。1HNMR(CDCl3)δ8.81(1H，brs)，8.61(1H，s)，8.19(1H，t，J＝1.8Hz)，7.86(1H，d，J＝9.1Hz，)，7.83(1H，dt，Jd＝7.7Hz，Jt＝1.8Hz)，7.28-7.21(2H，m)，6.92(1H，d，J＝9.1Hz)，4.97(1H，q，J＝5.0Hz)，3.13(3H，d，J＝5.0Hz)。
實施例84-(3-溴苯胺基)-6-二甲基氨基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶于100℃壓力容器中，將4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.15g，0.47mmol)(如前例所述)、二甲基胺鹽酸鹽(0.11g，1.41mmol)和三乙胺(0.23ml，1.64mmol)的混合物于EtOH(15ml)中加熱18h。減壓除去溶劑后，將殘余物在EtOAc和水之間分配。處理有機相，殘余物在硅膠上層析，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脫得到初分物，而用EtOAc則洗脫出4-(3-溴苯胺基)-6-二甲基氨基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(0.14g，86％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.72(1H，brs)，8.56(1H，s)，8.17(1H，t，J＝1.9Hz)，7.85(1H，d，J＝9.3Hz)，7.77(1H，dt，Jd＝7.5Hz，Jt＝1.9Hz)，7.27-7.18(2H，m)，7.08(1H，d，J＝9.3Hz)，3.21(6H，s)。
實施例94-(3-溴苯胺基)-6-甲氧基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶將4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(如前例所述)(0.11g，0.34mmol)加至NaOMe溶液(通過將金屬Na(31mg，1.38mmol)加至無水MeOH(15ml)制得)。于90℃壓力容器中加熱3h后，濃縮溶液至干燥，將殘余物在EtOAc和水之間分配。經處理有機相后，得到4-(3-溴苯基)氨基-6-甲氧基吡啶并〔3，2-d〕嘧啶(92mg，82％)。1H NMR(CDCl3)δ8.73(1H，s)，8.66(1H，brs)，8.18(1H，m)，8.05(1H，d，J＝8.9Hz)，7.83-7.80(1H，m)，7.30-7.24(2H，m)，7.23(1H，d，J＝8.9Hz)，4.12(3H，s)。
實施例104-苯胺基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶4-(N-叔丁氧羰基氨基)吡啶。向位于冰上的4-氨基吡啶(2g，21.24mmol)、氫氧化鉀(3.57g，63.72mmol)、水(10ml)和2-甲基-2-丙醇(4ml)的混合物中加入二-叔丁基二碳酸酯(6.95g，31.87mmol)、將所得的兩相溶液于25℃攪拌1周。然后加入水(20ml)。用1×CH2Cl2和2×EtOAc萃取溶液。有機層經干燥(MgSO4)和減壓濃縮后，產生4-(N-叔丁氧羰基氨基)吡啶(4.08g，99％)。1H NMR(DMSO)δ9.84(1H，s)，8.35(2H，d，J＝6Hz)，7.44(2H，d，J＝7Hz)，1.49(9H，s)。
4-(N-叔丁氧羰基氨基)煙酸。于-78℃、氮氣環境下，將正丁基鋰(2.18M，24ml，52.51mmol)緩縵加至4-(N-叔丁氧羰基氨基)吡啶(4.08g，21mmol)的THF(50ml)溶液中，溶液升溫至0℃，攪拌3h，再次冷卻至-78℃，并倒入含有干冰的乙醚(100ml)中。在連續攪拌下將溶液升至室溫，加水，并用乙酸中和混合物。真空過濾收集產生的固體，并在真空爐中干燥，得到4-(N-叔丁氧羰基氨基)煙酸(2.72g，54％)的棕色固體。
1H NMR(DMSO)δ11.75(1H，brs)，8.95(1H，s)，8.50(1H，d，J＝6.0Hz)，8.20(1H，d，J＝6.0Hz)，1.49(9H，s)。
4-氨基煙酸。于室溫下，將4-(N-叔丁氧羰基氨基)煙酸(2.72g，11.4mmol)、TFA(10ml)和CH2Cl2(20ml)的混合物攪拌12h。減壓除去揮發物，將所得粗4-氨基煙酸直接用于下一步驟。
3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶-4-酮。于170℃，將粗4-氨基煙酸(2.72g，11.4mmol)的甲酰胺(20ml)溶液加熱12h。減壓(0.8mmHg)蒸發掉揮發物。然后將殘余物在中等壓力的硅膠柱上純化(用于CHCl3中的10％MeOH洗脫)，得到3H-吡啶〔4，3-d〕嘧啶-4-酮(780mg，47％)，為黃白色固體。1H NMR(DMSO)δ12.64(1H，brs)，9.28(1H，s)，8.83(1H，d，J＝5.5Hz)，8.30(1H，s)，7.58(1H，d，J＝5.8Hz)。
3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶-4-硫酮。向3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶-4-酮(780mg，5.3mmol)的吡啶(5ml)溶液中加入五硫化二磷(2.59g，5.83mmol)。回流混合物5h。冷卻后形成沉淀，棄去上清液。固體懸浮于水(20ml)中，過濾后得到3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶-4-硫酮(676mg，78％)黑色固體。
1H NMR(DMSO)δ14.53(1H，brs)，9.65(1H，s)，8.84(1H，d，J＝7.0Hz)，8.32(1H，s)，7.64(1H，d，J＝8.0Hz)。
4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。于25℃、N2環境下，將3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶-4-硫酮(676mg，4.14mmol)、三乙胺(1.4ml，10.31mmol)、DMSO(4ml)和碘甲烷(0.48ml，7.72mmol)的混合物攪拌12h。然后將混合物倒入水中，并用EtOAc萃取。干燥有機萃取物(MgSO4)，并減壓除去溶劑，得到4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(1.15g)，為棕色固體。
1H NMR(DMSO)δ9.52(1H，s)，9.16(1H，s)，8.95(1H，d，J＝6Hz)，7.86(1H，d，J＝8Hz)，2.75(1H，s)。
4-苯胺基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。在N2下，將4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(174mg，0.97mmol)、苯胺(187.2mg，1.99mmol)及EtOH(2ml)的混合物回流12h。冷卻至0℃后形成固體，將其過濾，得到4-苯胺基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(34.5mg，16％)。
1H NMR(DMSO)δ10.29(1H，brs)，9.86(1H，s)，8.82(1H，d，J＝5.8Hz)，8.72(1H，s)，7.85(2H，d，J＝7.5Hz)，7.66(1H，d，J＝5.5Hz)，7.45(2H，t，J＝8.0Hz)，7.23(1H，t，J＝7.3Hz)。
實施例114-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶將4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(171mg，0.96mmol)(見前例)和3-溴苯胺(1ml)的混合物于100℃加熱2h。冷卻沉淀出固體，并經真空過濾收集，然后用EtOH重結晶，得到4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(30mg，10％)。
1H NMR(DMSO)δ10.33(1H，s)，9.86(1H，s)，8.84(1H，d，J＝5.8Hz)，8.79(1H，s)，8.22(1H，s)，7.89(1H，d，J＝7.2Hz)，7.69(1H，d，J＝5.8Hz)，7.40(2H，dt，Jd＝8.0Hz，Jt＝1.5Hz)。
實施例124-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔4，3-d〕嘧啶3-氰基-4，6-二氨基吡啶。于20℃、55p.s.i.條件下，將粗2-溴-3-氰基-4，6-二氨基吡啶〔W.J.Middleton，us Patent 2，790，806(April 30，1957)，Du Pont；Chem.Abst.51P14829(1957)，也見下一實施例〕(15.1g，0.071mole)在含有KOAc(7.0g，0.071mole)和5％pd/C(4g)的THF/MeOH(200ml，2∶1)中氫化7天。于硅藻土上過濾，用THF/MeOH洗滌，并除去溶劑，得到一固體，將其溶于稀HCl和水。將溶液的pH調節至10(濃NaOH)并冷卻，得到3-氰基-4，6-二氨基吡啶(6.58g，69％)黃色固體，mp197-198℃〔Metzger，R；Oberdorfer，J.；Schwager，C；Thielecke，W.；Boldt，P.Liebigs Ann.Chem.1980，946-953記載mp(苯)205℃〕。用EtOAc(4×200ml)萃取剩余的液體，進一步得到產物(2.12g，22％)。1H NMR(DMSO)δ7.91(1H，s)，6.26，6.24(2H，2H，brs)，5.63(1H，s)。
4，6-二氨基-3-吡啶基甲酰胺。將3-氰基-4，6-二氨基吡啶(4.30g，0.032mole)加至90％H2SO4(25ml)，然后于60-70℃攪拌3h。所得溶液加至冷的濃NaOH(40％)中，產生4，6-二氨基-3-吡啶基甲酰胺和無機鹽的混合物。通過在氧化鋁上層析(10-50％MeOH/CHCl3)出淺黃色固體后，即得到分析純樣品。
1H NMR(DMSO)δ8.15(1H，s)，6.91(2H，brs)，7.7-6.3(2H，brm)，5.78(2H，brs)，5.56(1H，s)。
7-氨基-4-氧代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。于170℃，將粗4，6-二氨基-3-吡啶基甲酰胺(9.2g)在純(EtO)3CH(自Na中蒸餾，60ml)中加熱1.5d，在除去溶劑后，將殘余物溶于熱的2MNaOH，過濾，中和(濃HCl)并冷卻，得到7-氨基-4-氧代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(3.57g，69％，自腈)，為淺棕色固體。
1H NMR(DMSO)δ11.79(1H，brs)，8.74(1H，s)，7.97(1H，s)，6.76(2H，brs)，6.38(1H，s)。
7-氟-4-氧代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。于0℃，用固體NaNO2(0.85g，12.3mmol，在2h內分批加入)處理7-氨基-4-氧代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(1.00g，6.17mmol)的60％HBF4(25ml)溶液，然后于0℃再攪拌1h，20℃攪拌30分鐘。冰冷所得混合物，用飽和Na2CO3水溶液中和，并用EtOAc(4×100ml)萃取。水洗萃取物，硅膠過濾(EtOAc)，得到7-氟-4-氧代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.48g，47％)，為乳白色固體。
1H NMR(DMSO)δ12.69(1H，brs)，9.01(1H，s)，8.31(1H，s)，7.34(1H，s)
4-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。將7-氟-4-氧代-3H吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.23g，1.39mmol)于POCl3(10ml)中的懸浮回流攪拌3.5h，然后真空濃縮。冰冷新得油狀物，用CH2Cl2(100ml)、飽和Na2CO3水溶液(40ml)和冰稀釋，并于20℃攪拌2h。分離CH2Cl2萃取物，水層進一步用CH2Cl2萃取(2×100ml)，然后合并萃取物，干燥(Na2SO4)并過濾，得到粗4-氯-7-氟吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。加入3-溴苯胺(1.26g，7.35mmole)、3-溴苯胺鹽酸鹽(20mg)和無水異丙醇(5ml)，真空濃縮所得溶液以除去CH2Cl2，并于20℃攪拌1h。在加入稀NaHCO3和水后，產物開始結晶。過濾，水和CH2Cl2洗滌后得到純4-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(297mg，67％)，為乳白色固體。
1H NMR(DMSO)δ10.38(1H，brs)，9.59(1H，s)，8.72(1H，s)，8.17(1H，s)，7.85(1H，m)，7.38(3H，m)。
實施例137-氨基-4-苯胺基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶4，6-二氨基-2-溴-3-氰基吡啶。于0℃，向丙二腈(16.3g，0.247mol)和甲苯(400ml)的混合物中鼓入HBr2h，形成淺黃色沉淀。然后于100℃加熱反應混合物2h，伴隨大量氣體蒸發。冷卻至室溫后，經抽濾分離出黃色固體，甲苯洗滌后，空氣干燥，將固體(25.96g)與水(500ml)混合，用NH4OH(濃，約15ml)調節懸浮液的pH至9-10。于室溫攪拌1h后，過濾混合物。經EtOH重結晶后得到黃色固體，于60℃真空爐中干燥后，得到4，6-二氨基)-2-溴-3-氰基吡啶(12.95g，49％)。
1H NMR(DMSO)δ6.67(2H，brs)，6.55(2H，brs)，5.59(1H，s)。
2，4-二氨基-5-氰基吡啶鎓乙酸鹽。于25℃、18psi條件下，將4，6-二氨基-2-溴-3-氰基吡啶(12.77g，60mmol)在含有KOAc(0.5g，60mmol)和20％pd/C(0.5g)的THF/MeOH(240ml，2∶1)中氫化4h。經硅藻土過濾混合物和減壓汽提溶劑后，得到11.15g固體，將其在室溫下與THF(100ml)攪拌20分鐘。重過濾混合物，將濾液汽提至干，得到所需產物。真空爐中干燥后收集作為黃色固體的2，4-二氨基-5-氰基吡啶鎓乙酸鹽(10.65g，92％)。
1H NMR(DMSO)δ7.90(1H，s)，6.26(4H，brs)，5.62(1H，s)，1.90(3Hs)。
7-氨基-4-硫代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。在N2下，將2，4-二氨基-5-氰基吡啶鎓乙酸鹽(0.199g，1.0mmol)、原甲酸三乙酯(1.95ml)和AC2O(1.95ml)攪拌回流3h。然后汽提溶劑，殘余物溶于含有NaOMe(0.81g，15mmol)的MeOH(10ml)中。向混合物中通入H2S約5分鐘。然后過夜回流。汽提溶劑后，將殘余物溶于熱水，并用活性炭煮沸。過濾后，用乙酸中和濾液，同時加熱以產生黃色固體，冷卻后，抽濾收集固體，并于真空爐中過夜干燥。分離出作為淺黃色固體的7-氨基-4-硫代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(84mg，51％)。1H NMR(DMSO)δ9.82(1H，s)，9.34(1H，s)，8.37(1H，s)，7.80(2H，d，J＝7.5Hz)，7.38(2H，t，J＝7.5Hz)，7.12(1H，t，J＝7.5Hz)，6.61(2H，brs)6.43(1H，s)。
7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。于25℃、N2及攪拌條件下，向7-氨基-4-硫代-3H-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.77g，4.3mmol)的DMSO(7ml)溶液中加入NEt3(6ml，43mmol)。將兩相攪拌20分鐘后加入MeI(0.26ml，4.2mmol)，2h后將反應混合物倒入攪拌的冰水上。固體穩步形成。于0℃進一步冷卻后，經抽濾收集固體并在真空爐中干燥，得到7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.564g，68％)。
1H NMR(DMSO)δ8.98(1H，s)，8.71(1H，s)，6.94(2H，brs)，6.49(1H，s)2.63(3H，s)。
7-氨基-4-苯胺基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。于180℃、N2條件下，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.136g，0.7mmol)和苯胺(0.5ml，5.5mmol)的混合物回流2h。將混合物冷卻至25℃，形成沉淀。抽濾收集固體，用異丙醇重結晶，并于真空爐上過夜干燥。分離出作為淺黃色固體的7-氨基-4-苯胺基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(84mg，51％)。
1H NMR(DMSO)δ9.82(1H，s)，9.34(1H，s)，8.37(1H，s)，7.80(2H，d，J＝7.5Hz)，7.38(2H，t，J＝7.5Hz)，7.12(1H，t，J＝7.5Hz)，6.61(2H，brs)6.43(1H，s)。
實施例147-氨基-4-(3-羥基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于160℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(299mg，1.56mmol)和3-氨基苯酚(1.60g，14.7mmol)的混合物攪拌15分鐘。所得產物經硅膠層析(9％MeOH/CH2Cl2)后，產生7-氨基-4-(3-羥基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(108mg，18％)。為暗橙色固體。1H NMR(DMSO)δ9.69(1H，brs)，9.44(1H，brs)，9.33(1H，s)，8.38(1H，s)，7.37(1H，t，J＝2.1Hz)，7.21(1H，brd，J＝8.4Hz)，7.14(1H，t，J＝8.0Hz)，6.59(2H，brs)，6.53(1H，ddd，J＝7.9，2.2，0.8Hz)，6.43(1H，s)。
實施例157-氨基-4-(3-甲氧基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于190℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(226mg，1.18mmol)和M-茴香胺(1.00ml，8.90mmol)的混合物在N2下攪拌1.5h。所得產物經硅膠層析(5-7％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4-(3-甲氧基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(136mg，43％)，為淺棕色固體。
1H NMR(DMSO)δ9.78(1H，brs)，9.34(1H，s)，8.40(1H，s)，7.50(1H，brs)，7.44(1H，d，J＝8.0Hz)，7.28(1H，t，J＝8.2Hz)，6.71(1H，dd，J＝8.2，2.3Hz)，6.61(2H，brs)，6.45(1H，s)，3.77(3H，s)。
實施例167-氨基-4-(2-甲氧基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于180℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(227mg，1.18mmol)和O-茴香胺(1.00ml，8.87mmol)的混合物在N2下攪拌2.5g。所得產物經硅膠層析(5％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4-(2-甲氧基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(147mg，47％)，為黃色固體。1H NMR(DMSO)δ9.44(1H，brs)，9.25(1H，s)，8.22(1H，s)，7.54(1H，dd，J＝7.7，1.4Hz)，7.24(1H，ddd，J＝8.1，7.4，1.5Hz)，7.10(1H，dd，J＝8.2，1.2Hz)，6.98(1H，dt，Jd＝1.3Hz，Jt＝7.5Hz)，6.52(2H，brs)，6.41(1H，s)，3.79(3H，s)。
實施例177-氨基-4-(3-氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(307mg，1.60mmol)(見前例所述)和3-硝基苯胺(2.00g，14.5mmol)的混合物于200℃攪拌1.5h，所得粗產物懸浮在MeOH/THF(4∶1，250ml)中，于60psi、20℃條件下在5％pd/c(2g)上氫化24h。經硅藻土過濾溶液，充分洗滌(熱MeOH)，吸附至氧化鋁上，并在其中層析(4-8％EtOH/CHCl3)、得到7-氨基-4-(3-氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(66mg，16％)，為綠色固體。
1H NMR(DMSO)δ9.57(1H，brs)，9.30(1H，s)，8.33(1H，s)，7.04(1H，t，J＝2.0Hz)，6.99(1H，t，J＝8.0Hz)，6.88(1H，brd，J＝8.0Hz)，6.55(2H，brs)，6.40(1H，s)，6.34(1H，dd，J＝7.9，1.3Hz)，5.10(2H，brs)。
實施例187-氨基-4-(4-氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶7-氨基-4-(4-乙酰胺基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于200℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(138mg，0.72mmol)和4-乙酰苯胺(1.50g，10.0mmol)的混合物在N2下攪拌1h。所得產物經氧化鋁層析(8-10％MeOH/CH2Cl2)后，產生7-氨基-4-(4-乙酰胺基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(110mg，52％)，為淺黃色固體。1HNMR(DMSO)δ9.94，9.79(1H，1H，2brs)，9.31(1H，s)，8.34(1H，s)，7.69(2H，d，J＝8.9Hz)，7.57(2H，d，J＝8.9Hz)，6.57(2H，brs)，6.43(1H，s)，2.05(3H，s)。
7-氨基-4-(4-氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。于100℃，將7-氨基-4-(4-乙酰胺基苯胺基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.30g，1.02mmol)于NaOH水溶液(2M，10ml)和MeOH(10ml)中的溶液攪拌7h。所得產物經氧化鋁層析(3-4％EtOH/CHCl3)后，產生7-氨基-4-(4-氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(86mg，33％)，為橙色固體。1H NMR(DMSO)δ 9.58(1H，brs)，9.24(1H，s)，8.25(1H，s)，7.31(2H d，J＝8.6Hz)，6.58(2H，d，J＝8.6Hz)，6.48(2H，brs)，6.39(1H，s)，5.00(2H，brs)。
實施例197-氨基-4-(3-二甲基氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于190℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(245mg，1.28mmol)和N，N-二甲基-1，3-苯二胺(1.60g，11.8mmol)的混合物在N2下攪拌1h。所得產物經氧化鋁層析兩次(3％EtOH/CHCl3)后，產生7-氨基-4-(3-二甲基氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(113mg，32％)，為淺黃色固體。1HNMR(DMSO)δ9.66(1H，brs)，9.33(1H，s)，8.36(1H，s)，7.22(1H，brd，J＝7.8Hz)，7.16(2H，m)，6.57(2H，brs)，6.51(1H，ddd，J＝8.0，2.3，1.2Hz)，6.42(1H，s)，2.91(6H，s)。
實施例207-氨基-4-(4-二甲基氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于190℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(256mg，1.33mmol)和N，N-二甲基-1.4-苯二胺(1.95g，14.4mmol)的混合物在N2下攪拌20分鐘。所得產物經氧化鋁層析(3-7％EtOH/CHCl3)后，產生7-氨基-4-(4-二甲基氨基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(198mg，53％)，為橙色固體。1H NMR(DMSO)δ9.67(1H，brs)，9.27(1H，s)，8.27(1H，s)，7.51(2H，d，J＝8.9Hz)，6.75(2H，d，J＝8.9Hz)，6.51(2H，brs)，6.39(1H，s)，2.89(6H，s)。
實施例217-氨基-4-(2-硝基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(220mg，1.15mmol)和2-硝基苯胺(2.00g，14.5mmol的混合物加熱至100℃，然后向熱攪拌的該溶液中加入過量的無水HCl氣體，并將混合物于160℃攪拌20分鐘。所得產物用過量的NaHCO3中和后溶于MeOH/CHCl3，于硅膠上干燥并層析(2-4％MeOH/CH2Cl2)，得到7-氨基-4-(2-硝基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(108mg，33％)為黃棕色固體。1H NMR(DMSO)δ10.40(1H，brs)，9.24(1H，brs)，8.20(1H，brs)，8.12(1H，brs)，8.01(2H，brs)，7.75(1H，brs)，6.70(2H，brs)，6.43(1H，brs)。
實施例227-氨基-4-(3-硝基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于200℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(127mg，0.66mmol)和3-硝基苯胺(1.70g，12.3mmol)的混合物在N2下攪拌1.5h。所得產物經氧化鋁層析(5-20％EtOH/CHCl3)后，產生7-氨基-4-(3-硝基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(81mg，39％)，為棕色固體。
1H NMR(DMSO)δ10.17(1H，brs)，9.37(1H，s)，8.87(1H，brs)，8.48(1H，s)，8.33(1H，brd，J＝7.5Hz)，7.95(1H，ddd，J＝8.2，2.1，1.0Hz)，7.67(1H，t，J＝8.2Hz)，6.70(2H，brs)，6.47(1H，s)。
實施例237-氨基-4-(3-氟苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于160℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(215mg，1.12mmol)和3-氟苯胺(1.16g，10.4mmol)的混合物攪拌30分鐘。所得產物經硅膠層析(6-7％MeOH/CH2Cl2)后，產生7-氨基-4-(3-氟苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(185mg，65％)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ9.94(1H，brs)，9.36(1H，s)，8.46(1H，s)，7.91(1H，brd，J＝11.9Hz)，7.63(1H，brd，J＝8.1Hz)，7.41(1H，dd，J＝15.7，7.7Hz)，6.93(1H，dt，Jt＝8.5Hz，Jd＝2.4Hz)，6.68(2H，brs)，6.38(1H，s)。
實施例247-氨基-4-(3-氯苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于150℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(208mg，1.08mmol)和3-氯苯胺(1.21g，9.48mmol)的混合物攪拌20分鐘。所得產物經氧化鋁層析(5-10％MeOH/CH2Cl2)后，產生7-氨基-4-(3-氯苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(177mg，60％)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ9.92(1H，brs)，9.35(1H，s)，8.45(1H，s)，8.08(1H，brs)，7.79(1H，brd，J＝8.0Hz)，7.40(1H，t，J＝8.1Hz)，7.16(1H，dd，J＝7.9，1.3Hz)，6.68(2H，brs)，6.46(1H，s)。
實施例257-氨基-4-(3，4-二氯苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于165℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(247mg，1.29mmol)和3，4-二氯苯胺(1.50g，9.26mmol)的混合物攪拌30分鐘。所得產物經硅膠層析(7-8MeOh/CH2Cl2)后，產生了7-氨基-4-(3，4-二氯苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(252mg，64％)，為暗黃色固體。1HNMR(DMSO)δ9.97(1H，brs)，9.34(1H，s)，8.47(1H，s)，8.29(1H，brs)，7.86(1H，brd，J＝8.6Hz)，7.62(1H，d，J＝8.8Hz)，6.70(2H，brs)，6.46(1H，s)。
實施例267-氨基-4-(2-溴苯胺基)吡嘧并〔4，3-d〕嘧啶于180℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(198mg，1.03mmol)和2-溴苯胺(1.00ml，9.18mmol)的混合物在N2下攪拌2.5h。所得產物經氧化鉛層析(1％EtOH/CHCl3)后，產生7-氨基-4-(2-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(108mg，33％)，為暗黃色固體。1H NMR(DMSO)δ9.91(1H，brs)，9.27(1H，s)，8.20(1H，s)，7.73(1H，d，J＝7.9Hz)，7.50(1H，m)，7.44(1H，t，J＝6.9Hz)，7.25(1H，m)，6.59(2H，brs)，6.42(1H，s)。
實施例277-氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于190℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(167mg，0.87mmol)和3-溴苯胺(0.75ml，7.8mmol)的混合物在N2下攪拌2.5h。冷卻后形成沉淀，用PriOH重結晶。
1H NMR(DMSO)δ9.91(1H，brs)，9.34(1H，s)，8.45(1H，s)，8.19(1H，s)，7.84(1H，d，J＝8.0Hz)，7.34(1H，t，J＝8.0Hz)，7.29(1H，d，J＝8.2Hz)，6.68(2H，brs)，6.45(1H，s)。
實施例287-氨基-4-(4-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于200℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(261mg，1.36mmol)和4-溴苯胺(1.00g，5.81mmol)的混合物在N2下攪拌15分鐘。所得產物經硅膠層析(10-15％EtOH/EtoAc)后，產生7-氨基-4-(4-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(200mg，46％)，為淺黃色固體。1H NMR(DMSO)δ9.88(1H，brs)，9.34(1H，s)，8.40(1H，s)，7.83(2H，d，J＝8.8Hz)，7.55(2H，d，J＝8.8Hz)，6.64(2H，brs)，6.44(1H，s)。
實施例297-氨基-4-(3-碘苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于160℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶( 72mg，0.37mmol)和3-碘苯胺(1.25g，5.71mmol)的混合物攪拌30分鐘。所得產物經硅膠層析(5-7％MeOH/CH2Cl2)后，產生7-氨基-4-(3-碘苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(83mg，61％)，為淺棕色瓣狀體。1H NMR(DMSO)δ9.84(1H，brs)，9.34(1H，s)，8.44(1H，s)，8.30(1H，brs)，7.90(1H，dd，J＝7.9，0.8Hz)，7.47(1H，d，J＝7.7Hz)，7.18(1H，t，J＝8.0Hz)，6.66(2H，brs)，6.46(1H，s)。
實施例307-氨基-4-(2-三氟甲基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于160℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(300mg，1.56％mmol)、2-氨基苯并三氟化鹽酸(1.00g，5.06mmol)和2-氨基苯并三氟化物(2.00g，12.4mmol)的混合物攪拌10分鐘。所得產物用過量NaHCO3中和，溶于MeOH/CHCl3，于硅膠上干燥并層析(6-7％MeOH/CH2Cl2)，所得7-氨基-4-(2-三氟甲基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(194mg，41％)，為乳色固體，mp(MeOH/CHCl3/輕石油)126-130℃(分鐘)。
1H NMR(DMSO)δ10.60(1H，brs)，9.17(1H，brs)，8.13(1H，brs)，7.76，7.69(1H，1H，m，m)，7.45(2H，m)，6.66(2H，brs)，6.36(1H，s)。
實施例317-氨基-4-(3-三氟甲基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于190-200℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(234mg，1.22mmol)和3-氨基苯并三氟化物(2.00ml，16.0mmol)的混合物在N2下攪拌2h。所得產物經硅膠層析(5-10％EtOH/E-tOAc)和氧化鉛層析(5-7％EtOH/CHCl3)4-(3-三氟甲基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(157mg，42％)，為乳白色固體。1H NMR(DMSO)δ10.04(1H，s)，9.37(1H，s)，8.46(1H，s)，8.31(1H，s)，8.19(1H，d，J＝8.2Hz)，7.62(1H，t，J＝8.0Hz)，7.45(1H，d，J＝7.7Hz)，6.69(2H，brs)，6.47(1H，s)。
實施例327-氨基-4-(4-三氟甲基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于180℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(390mg，2.03mmol)、4-氨基苯并三氟化鹽酸(0.40g，2.02mmol)和4-氨基苯并三氟化物(1.61g，10.0mmol)的混合物攪拌2分鐘，所得產物經用過量NaHCO3中和后溶于MeOH/CHCl3，于氧化鋁上干燥并層析(4-7％MeOH/CH2Cl2)，得到7-氨基-4-(4-三氟甲基舉胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(390mg，63％)，為乳白色固體，經進一步硅膠層析(5％MeOH/CH2Cl2)以產生淺黃色針狀物而得到分析純物質。1H NMR(DMSO)δ10.09(1H，brs)，9.40(1H，s)，8.48(1H，s)，8.13(2H，d，J＝8.2Hz)，7.74(2H，d，J＝8.7Hz)，6.72(2H，brs)，6.40(1H，s)。
實施例334-(3-溴苯胺基)-7-甲基氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于95℃(油浴)，將7-氟-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(74mg，0.23mmol)、三乙胺(7ml，50mmol)和鹽酸甲胺(3.0g，44mmol)的混合物與異丙醇(30ml)在鋼制反應釜中攪拌5h。真空濃縮所得混合物，用Na2CO3水溶液堿化，用水稀釋并用EtOAc(3×100ml)萃取。萃取物于硅膠上層析(3％MeOH/CH2Cl2)，得到4-(3-溴苯胺基)-7-甲氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(50mg，65％)，為淺黃色固體。1H NMR(DMSO)δ9.93(1H，brs)，9.37(1H，s)，8.47(1H，s)，8.18(1H，s)，7.84(1H，d，J＝7.8Hz)，7.34(1H，t，J＝7.9Hz)，7.30(1H，brd，J＝8.1Hz)，7.19(1H，q，J＝4.7Hz)，6.35(1H，s)，2.85(3H，d，J＝4.8Hz)。
實施例344-(3-溴苯胺基)-7-二甲基氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于100℃(油浴)，將7-氟-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(101mg，0.32mmol)、三乙胺(4.4ml，32mmol)和鹽酸二甲胺(2.58g，32mmol)的混合物與異丙醇(30)在鋼制反應釜中攪拌4h。所得溶液于真空下濃縮，用Na2CO3水溶液堿化，并用水稀釋，得到一固體。將其過濾并從MeOH/CHCl3中重結晶，得到7-二甲氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(102mg，94％)，為淺黃色固體。1HNMR(DMSO)δ9.93(1H，brs)，9.42(1H，s)，8.48(1H，s)，8.19(1H，s)，7.85(1H，d，J＝7.7Hz)，7.35(1H，t，J＝7.9Hz)，7.30(1H，brd，J＝7.8Hz)，6.53(1H，s)，3.16(6H，s)。
實施例354-〔N-(3-溴苯基)-N-甲氨基〕-7-甲氨基-吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于100℃(油浴)，將7-氟-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(100mg，0.31mmol)、三乙胺(4.4ml，32mmol)和鹽酸甲胺(2.12g，32mmol)的混合物與異丙醇(30ml)在鋼制反應釜中攪拌5h。真空濃縮所得混合物，用Na2CO3水溶液堿化，用水稀釋并用EtOAc(3×100ml)萃取。硅膠層析萃取物(1-2％MeOH/CH2Cl2)，得到4-〔N-(3-溴苯基)-N-甲基氨基〕-7-甲氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(23mg，21％)，為淺黃色固體。
1H NMR(DMSO)δ8.14(1H，s)，7.79(1H，s)，7.30(1H，t，J＝8.0Hz)，7.20(1H，ddd，J＝7.9，1.8，0.8Hz)，7.03(1H，brq，J＝4.9Hz)，7.01(1H，t，J＝1.9Hz)，6.82(1H，ddd，J＝7.8，1.8，0.9Hz)，6.25(1H，s)，3.40(3H，s)，2.73(3H，d，J＝4.9Hz)。
實施例367-乙酰氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于室溫、氮氣條件下，將7-氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.154g，0.49mmol)、乙酸酐(0.14ml，1.5mmol)、三乙胺(0.14ml，1.0mmol)和催化量的4-(N，N-二甲氨基)吡啶的混合物攪拌18h。然后加入冰水以終止反應，通過Buchner過濾收集黑色沉淀物，并通過制備性tlc(Rf＝0.25，7％MeOH/CHCl3)純化，自EtOH中重結晶，得到7-乙酰氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(13.5mg，7.7％)。
1H NMR(DMSO)δ10.92(1H，s)，10.22(1H，s)，9.64(1H，s)，8.70(1H，s)，8.28(1H，s)，8.21(1H，s)，7.88(1H，d，J＝7.7Hz)7.41-7.34(3H，m)，2.16(3H，s)。
實施例374-(3-溴苯胺基)-7-甲氧基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶將7-氟-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(100mg，0.31mmol)的1M甲醇鈉-甲醇(30ml)溶液回流攪拌42h。減壓濃縮所得到混合物，用水稀釋并用稀HCl中和，得到7-甲氧基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧吡(92mg，89％)，為白色固體。
1H NMR(DMSO)δ10.22(1H，brs)，9.57(1H，s)，8.63(1H，s)，8.19(1H，s)，7.86(1H，brd，J＝7.9Hz)，7.39(1H，t，J＝7.9Hz)，7.35(1H，dd，J＝7.9，1.5Hz)，6.96(1H，s)，4.00(3H，s)。
實施例384-苯甲氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶將4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(160.4mg，0.902mmol)和芐基胺(106.3mg，0.992mmol)于EtOH(2ml)中的溶液于80℃加熱12h，然后減壓除去溶劑。將所得固體懸浮于CH2Cl2，過濾，所得固體在硅膠上通過制備性tlc純化(用5％MeOH于CHCl3洗脫)。減壓除去溶劑后，得到4-芐氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(36mg，17％)。
1HNMR(DMSO)δ9.60(1H，s)，9.37(1H，t，J＝5.8Hz)，8.72(1H，d，J＝5.8Hz)，8.57(1H，s)，7.54(1H，d，J＝5.8Hz)，7.37(2H，d，J＝7.0Hz)，7.33(2H，t，J＝7.3Hz)，7.25(1H，t，J＝7.2Hz)，4.81(2H，d，J＝5.8Hz)。
實施例394-(〔R〕-1-苯乙基氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶向4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(85mg，0.48mmol)和EtOH(2.5ml)的混合物中滴加R-甲基芐基胺(0.13ml，1.0mmol)。所得混合物于80℃回流20h。減壓除去溶劑后得到一油狀物，將其以MeOH中重結晶，得到4-(〔R〕-1-苯乙基氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(41.6mg，35％)。1H NMR(DMSO)δ9.77(1H，d，J＝0.7Hz)，9.00(1H，d，J＝7.7Hz)，8.73(1H，d，J＝5.8Hz)，8.54(1H，s)，7.53(1H，dd，J＝5.8，0.5Hz)，7.45(2H，d，J＝7.2Hz)，7.33(2H，t，J＝7.6Hz)，7.23(1H，tt，J＝7.5，1.2Hz)，5.63(1H，p，J＝7.2 Hz)，1.61(3H，t，J＝7.0Hz)。
實施例407-氨基-4-芐氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于200℃、N2條件下，將2，4-二氨基-5-氰基乙酸吡啶鎓(8.78g，45mmol)、甲酸(10.66g，0.204mmol)和芐基胺(45ml，0.41mmol)的混合物加熱2h。冷卻后固化。加水，并將膠狀固體/水混合物于0℃攪拌約20分鐘。棄去液體，固體經水洗后從異丙醇(25ml)中重結晶。于真空爐中過夜干燥后得到7-氨基-2-芐氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(8.29g，73％)，為淺黃色固體。
1H NMR(DMSO)δ9.10(1H，s)，8.85(1H，t，J＝5.8Hz)，8.25(1H，s)，7.21-7.36(5H，m)，6.46(2H，brs)，6.35(1H，s)，4.74(2H，d，J＝6.0Hz)。
實施例417-氨基-4-(〔R〕-1-苯乙基氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于180℃及N2條件下，將〔R〕-1-苯基乙胺(0.072ml，0.55mmol)和7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(97mg，0.5mmol)(如前例所述)的混合物加熱1.5h。然后冷卻至室溫，產生沉淀。將混合物加至水和CHCl3中，過濾，分離兩相，并用CHCl3萃取水相。合并萃取物，用水、飽和鹽水洗滌，并干燥(MgSo4)。減壓除去溶劑，通過制備性tlc(5％MeOH/CHCl3)純化殘余物，并用CHCl3重結晶，得到7-氨基-4-(〔R〕-1-苯乙氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(14.5mg，11％)。
mp 231.8-232.1℃.1H NMR(DMSO)δ9.23(1H，s)，8.50(1H，d，J＝8.0Hz)，8.19(1H，s)，7.41(2H，d，J＝7.0Hz)，7.31(2H，t，J＝8.0Hz，7.21(1H，tt，J＝7.4，1.2Hz)，6.45(2H，s)，6.33(1H，s)，5.56(1H，p，J＝7.2Hz)，1.55(3H，d，J＝7.0Hz)。
實施例427-氨基-4-(2-氨基芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(136mg，0.71mmol)(如前例所述)和2-氨基芐胺(1.70g，13.8mmol)于異丙醇(5ml)中的混合物回流攪拌1h，并將所得產物在硅膠(7-20％E-tOH/EtOAc)和氧化鉛(6-10％EtOH/CHCl3)上層析，得到7-氨基-4-(2-氨基芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(89mg，47％)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ9.08(1H，s)，8.68(1H，t，J＝5.8Hz)，8.26(1H，s)，7.05(1H，d，J＝7.4Hz)，6.96(1H，t，J＝7.6Hz)，6.63(1H，d，J＝7.9Hz)，6.51(1H，t，J＝7.4Hz)，6.46(2H，brs)，6.35(1H，s)，5.20(2H，brs)，4.56(2H，d，J＝5.8Hz)。
實施例437-氨基-4-(3-二甲氨基芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于N2及回流條件下，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(236mg，1.23mmol)和3-二甲氨基芐基胺(1.36g，9.07mmol)于異丙醇(5ml)中的混合物攪拌1h。所得產物分別于硅膠(10-15％EtOH/EtOAc)和氧化鉛(1％EtOH/CHCl3)上層析，得到7-氨基-4-(3-二甲氨基芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(145mg，40％)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ9.11(1H，s)，8.79(1H，t，J＝5.9Hz)，8.26(1H，s)，7.11(1H，dd，J＝8.0，7.7Hz)，6.73(1H，brs)，6.63(1H，d，J＝7.6Hz)，6.60(1H，dd，J＝8.1，2.2Hz)，6.44(2H，brs)，6.35(1H，s)，4.67(2H，d，J＝5.8Hz)，2.86(6H，s)。
實施例447-氨基-4-(3-硝基苯氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于N2及150-160℃條件下，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(228mg，1.19mmol)(如前例所述)和3-硝基芐胺(0.81g，5.33mmol)的混合物攪拌1.5h。所得產物經硅膠層析(5-10％EtOH/EtOAc)后產生7-氨基-4-(3-硝基芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(151mg，43％)，為黃色固體。
1H NMR(DMSO)δ9.11(1H，s)，8.98(1H，t，J＝5.5Hz)，8.26(1H，s)，8.22(1H，brs)，8.12(1H，dd，J＝8.0，1.8Hz)，7.83(1H，d，J＝7.7Hz)，7.63(1H，t，J＝7.9Hz)，6.50(2H，brs)，6.38(1H，s)，4.85(2H，d，J＝5.8Hz)。
實施例457-氨基-4-(3-甲氧芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于N2及回流下，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(136mg，0.71mmol)和3-甲氧芐胺(1.37g，10.0mmol)于異丙醇(3ml)中的混合物攪拌3h。給蒸發溶劑和硅膠層析(5-10％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4-(3-甲氧芐氨)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(153mg，77％)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ9.11(1H，s)，8.83(1H，t，J＝5.7Hz)，8.26(1H，s)，7.24(1H，dt，Jd＝0.8Hz，Jt＝8.1Hz)，6.92(2H，m)，6.81(1H，dt，Jd＝8.2Hz，Jt＝1.2Hz)，6.46(2H，brs)，6.37(1H，s)，4.71(2H，d，J＝5.8Hz)，3.73(3H，s)。
實施例467-氨基-4-(4-氯芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶甲磺酸鹽利用甲磺酸(105μl，0.23mmol)從丙酮溶液中沉淀出游離堿(56mg，0.20mmol)(如前例所述，于200℃由2，4-二氨基，5-氰基乙酸吡啶鎓、甲酸和4-氯芐胺制得)，得到聚甲磺酸鹽。
1H NMR(DMSO)δ10.59(1H，t，J＝5.6Hz)，9.24(1H，s)，8.69(1H，s)，7.42(4H，s)，6.42(1H，s)，5.8(-6H，vbrs)，4.89(2H，d，J＝5.8Hz)，2.41(-7.5H，s)。
實施例477-氨基-4-(2-溴芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于N2及160℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(225mg，1.17mmol)和2-溴芐胺(0.84g，4.52mmol)的混合物攪拌1h，所得產物經硅膠層析(1-5％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4-(2-溴芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(175mg，45％)，為淺棕色固體。1HNMR(DMSO)δ9.16(1H，s)，8.85(1H，t，J＝5.7Hz)，8.24(1H，s)，7.64(1H，d，J＝7.8Hz)，7.34(1H，dd，J＝7.7，7.1Hz)，7.31(1H，dd，J＝7.7，2.4Hz)，7.21(1H，ddd，J＝7.8，6.9，2.4Hz)，6.50(2H，brs)，6.39(1H，s)，4.74(2H，d，J＝5.7Hz)。
實施例487-氨基-4-(3-溴芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于N2及140℃下，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(228mg，1.19mmol)和3-溴芐胺(0.84g，4.52mmol)的混合物攪拌1h。所得產物經硅膠層析(1-10％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4-〔(3-溴苯基)甲氨基〕吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(203mg，52％)，為淺棕色固體。1H NMR(DMSO)δ9.09(1H，s)，8.86(1H，t，J＝5.8Hz)，8.26(1H，s)，7.54(1H，s)，7.44(1H，d，J＝7.8Hz，)，7.36(1H，d，J＝7.6Hz)，7.29(1H，t，J＝7.7Hz)，6.48(2H，s)，6.37(1H，s)，4.73(2H，d，J＝5.8Hz)。
實施例497-氨基-4-(4-溴芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于160℃及N2條件下，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(234mg，1.22mmol)和4-溴芐胺(0.84g，4.52mmol)的混合物攪拌1h。所得產物經硅膠層析(10％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4-(4-溴芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(192mg，48％)，為乳白色固體。1H NMR(DMSO)δ9.09(1H，s)，8.87(1H，t，J＝5.7Hz)，8.25(1H，s)，7.51(2H，d，J＝8.3Hz)，7.31(2H，d，J＝8.3Hz)，6.46(2H，brs)，6.37(1H，s)，4.70(2H，d，J＝5.8Hz)。
實施例507-氨基-4-(2-三氟甲基芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于N2及160℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(225mg，1.17mmol)和2-(三氟甲基)芐胺(0.90g，6.42mmol)的混合物攪拌1h。所得產物經硅膠層析(5％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4-(2-三氧甲基芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.22g，59％)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ9.16(1H，s)，8.88(1H，t，J＝5.7Hz)，8.23(1H，s)，7.75(1H，d，J＝7.7Hz)，7.62(1H，t，J＝7.5Hz)，7.50(1H，d，J＝7.4Hz)，7.47(1H，t，J＝7.6Hz)，6.51(2H，brs)，6.39(1H，s)，4.92(2H，d，J＝5.5Hz)。
實施例517-氨基-4-(3-三氟甲基芐胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于N2及160℃，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(225mg，1.17mmol)和3-(三氟甲基)芐胺(0.63ml，4.40mmol)的混合物攪拌1h。所得產物經硅膠層析(3-5％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4〔(3-三氟甲基苯基)甲氨基〕吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.24g，63％)，為淺棕色固體。1HNMR(DMSO)δ9.10(1H，s)，8.92(1H，t，J＝5.7Hz)，8.26(1H，s)，7.71(1H，s)，7.66(1H，d，J＝7.4Hz)，7.62(1H，d，J＝7.8Hz)，7.57(1H，t，J＝7.6Hz)，6.49(2H，brs)，6.38(1H，s)，4.82(2H，d，J＝5.8Hz)。
實施例527-氨基-4-(4-三氟甲基芐氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶于160℃及N2下，將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(225mg，1.17mmol)和4-(三氟甲基)芐胺(0.63ml，4.42mmol)的混合物攪拌1h。所得產物經氧化鋁層析(5-10％EtOH/CHCl3)和硅膠層析(2-10％EtOH/EtOAc)后，產生7-氨基-4-〔(4-三氟甲基苯基)甲氨基〕吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.21g，56％)，為淺棕色固體。1HNMR(DMSO)δ9.12(1H，s)，8.94(1H，t，J＝5.8Hz)，8.24(1H，s)，7.69(2H，d，J＝8.1Hz)，7.56(2H，d，J＝8.1Hz)，6.48(2H，brs)，6.38(1H，s)，4.82(2H，d，J＝5.8Hz)。
實施例537-氨基-4-(噻吩-2-基甲氨基)〔4，3-d〕嘧啶二甲磺酸鹽如前例所述，該化合物得自2，4-二氨基，5-氰基乙酸吡啶鎓(190mg，0.98mmol)，甲酸(0.23g，4.4mmol)和噻吩基甲胺(1.07ml，10mmol)，按前側所述將粗產物轉化為二甲磺酸鹽，并自PrOH中重結晶，得到7-氨基-4-(噻吩-2-基甲氨基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶二甲碘酸鹽，產率為1.9％。1H NMR(DMSOδ10.67(1H，t，J＝5.8Hz)，9.21(1H，s)，8.77(1H，s，7.48(1H，dd，J＝5.1，1.2Hz)7.16(1H，dd，J＝3.4，0.7Hz)，7.02(1H，dd，J＝4.8，3.4Hz)，6.42(1H，s5.06(2H，d，J＝5.7Hz)，2.41(6H，s).
實施例547-乙酰氨基-4-芐氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶7-乙酰氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。于0℃向7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.20g，1.04mmol)(如前例所述)和Et3N(1.51ml，10.8mmol)的THF溶液中加入乙酰氯(0.70ml，9.84mmol)，然后將混合物于20℃攪拌4h，加水(50ml)，用E-tOAc(3×50ml)萃取溶液。蒸發并在氧化鋁上層析(1％EtOH/CHCl3)，得到7-乙酰氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.12g，49％)，為黃色固體。1H NMR(DMSO)δ11.05(1H，s)，9.30(1H，s)，9.02(1H，s)，8.38(1H，s)，2.71(3H，s)，2.18(3H，s)。
7-乙酰氨基-4-芐氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶。于140℃、N2條件下，將7-乙酰氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.40g，1.71mmol)和芐胺(3.0ml，9.15mmol)的混合物攪拌1h，然后將所得混合物進行硅膠層析(EtOAc)，得到7-乙酰氨基-4-芐氨基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(0.31g，62％)，為白色固體。
1HNMR(DMSO)δ10.79(1H，s)，9.42(1H，s)，9.23(1H，t，J＝5.8Hz)，8.49(1H，s)，8.18(1H，s)，7.39(1H，dt，Jd＝6.9Hz，Jt＝1.7Hz)，7.34(1H，tt，J＝7.3，1.7Hz)，7.25(1H，tt，J＝7.1，1.7Hz)，4.80(2H，d，J＝5.8Hz)，2.15(3H，s)。
實施例554-苯胺基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶4-羧酰胺基煙酸。于0℃，向濃NH4OH(12ml)的H2O(60ml)溶液中加入3，4-吡啶二羧酸酐(8.3g，55.6mmol)，并攪拌5分鐘。加入后形成漿狀物，將其于室溫下攪拌1h。用N2噴射該白色漿狀物30分鐘，并用H2O(10ml)稀釋以形成清晰溶液。然后用SO2吹過溶液15分鐘以降低其pH至2。冷卻后過濾所得固體，用H2O浸泡并烘干，得到4-羧酰胺基煙酸(7g，76％)。為白色固體。
1H NMR(DMSO)δ8.93(1H，s)，8.76(1H，d，J＝5.0Hz)，8.08(1H，s)，7.62(1H，s)，7.45(1H，d，J＝5.0Hz)。
異喹啉酰亞胺。將4-羧酰胺基煙酸(180mg，1.68mmol)于200℃加熱5h，產生白色固體狀異喹啉酰亞胺(177.2mg，71％)。
1H NMR(DMSO)δ11.68(1H，s)，9.12-9.03(2H，m)，7.80(1H，d，J＝5.1Hz)。
3-氨基異煙酸。于冰上的10％KOH(30ml)中加入鹽水(1.71g)。將所得的溶液加至細粉狀異喹啉酰亞胺(1.46g，9.86mmol)，加入后混合物開始起泡，當所有固體溶解后加入KOH水溶液(15％，7ml)并將混合物于80℃加熱1分鐘，然后冷卻。用SO2中和混合物，冷卻至0℃，直至產生沉淀。抽濾收集固體，H2O水并在真空爐中干燥，得到3-氨基異煙酸(485mg，36％)，為白色固體。
1H NMR(DMSO)δ9.5-8.8(2H，brs)，8.20(1H，s)，7.70(1H，d，J＝5Hz)，7.46(1H，d，J＝5Hz)。
3H-吡啶并〔3，4-d〕嘧啶-4-酮。于160℃將3-氨基異煙酸(485mg，3.51mmol)于甲酰胺(3ml)中的混合物加熱12h。冷卻后，過濾出產生的固體，水洗并真空干燥，得到3H-吡啶并〔3，4-d〕嘧啶-4-酮(373mg，72％)。1H NMR(DMSO)δ12.60(1H，brs)，9.06(1H，s)，8.68(1H，d，J＝5.3Hz)，8.23(1H，s)，7.96(1H，d，J＝5.1Hz)。
4-硫代吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。向3H-吡啶并〔3，4-d〕嘧啶-4-酮(366mg，2.49mmol)的吡啶(4ml)溶液中加入五硫化二磷(1.25g 2.74mmol)，在N2下回流混合物4h。將所得黑色焦油溶于水，形成固體。過濾固體，水洗，并真空干燥，得到4-硫代吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(369.8mg，91％)，為黃色固體。
1H NMR(DMSO)δ14.48(1H，brs)，9.13(1H，s)，8.70(1H，d，J＝5.4Hz)，8.29(1H，s)，8.27(1H，d，J＝5.4Hz)。
4-甲硫基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。將4-硫代吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(369.8gm，2.26mmol)、三乙胺(0.6ml，4.5mmol)、DMSO(2ml)和碘甲烷(0.24ml，3.96mmol)的混合物于N2、25℃下攪拌12h，將混合物倒入H2O中，并將所得固體過濾，真空干燥，得到4-甲硫基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(222mg，55％)，為棕色固體。1H NMR(DMSO)δ9.51(1H，s)，9.18(1H，s)，8.79(1H，d，J＝8Hz)，7.97(1H，d，J＝8Hz)
4-苯胺基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。將4-甲硫基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(75mg，0.42mmol)和苯胺的混合物于100℃、N2下加熱2h。利用MPLC對反應混合物進行硅膠層析，并用梯度系統(CHCl3至5％MeOH/CHCl3)洗脫。減壓濃縮各級分，并將所得固體從Et2O中重結晶，得到4-苯胺基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(21.2mg，23％)，為黃色固體。1H NMR(DMSO)δ10.09(1H，s)，9.18(1H，s)，8.74(1H，d，J＝5.3Hz)，8.46(1H，d，J＝5.8Hz)，7.89(2H，d，J＝8.5Hz)，7.45(2H，t，J＝7.9Hz)，7.21(1H，t，J＝7.4Hz)。
實施例564-(3-溴苯胺基)吡啶并〔3，4-d〕嘧啶將4-甲硫基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(75mg，0.42mmol)(見前例)和3-溴苯胺(1ml)的混合物于100℃、N2下加熱2h，利用MPLC，對反應混合物進行硅膠層析，并進行梯度洗脫(CHCl3至5％MeOH/CHCl3)。減壓濃縮各級分，并將所得固體的Et2O中重結晶，得到4-(3-溴苯胺基吡啶〔3，4-d〕嘧啶(66mg，52.7％)，為淺棕色固體。
1H NMR(DMSO)δ10.15(1H，s)，9.21(1H，s)，8.80(1H，s)，8.76(1H，d，J＝5.8Hz)，8.44(1H，d，J＝5.6Hz)，8.25(1H，s)，7.93(1H，d，J＝7.7Hz)，7.45-7.37(2H，m)。
實施例574-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，4-d〕嘧啶5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氟吡啶。5-氨基-2-氟吡啶是通過氫化(Pd/C)2-氟-5-硝基吡啶(通過將2-氯-5-硝基吡啶與KF和Ph4PBr在MeCN中反應制得〔J.H.Clark and D.J.Macyuarrie，Tetrahedron Lett.，1987，28，111-114〕，將該粗胺與叔Boc酐反應，得到5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氟吡啶。
1H NMR(CDCl3δ8.07(1H，s)，8.05(1H，m)，6.89(1H，dd，J＝9.2，3.3Hz)，6.66(1H，m)，1.52(9H，s)。
5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氟吡啶-4-羧酸。按下列所述，將5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氟吡啶(5.3g，25mmol)依次與n-BuLi和CO2反應，得到5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氟吡啶-4-羥酸(1.60g，25％)。
1H NMR(DMSO)δ9.83(1H，brs)，8.84(1H，s)，7.49(1H，d，J＝2.9Hz)，1.47(9H，s)。
5-氨基-2-氟吡啶-4-羧酸。如上例所述，將5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氟吡啶-4-羧酸(1.0g，3.9mmol)與TFA反應，得到5-氨基-2-氟吡啶-4-羧酸(0.46g，74％)。
1H NMR(DMSO)δ7.85(1H，d，J＝1.5Hz)，7.23(1H，d，J＝2.5Hz)。
6-氟-3H-吡啶〔3，4-d〕嘧啶-4-酮。將5-氨基-2-氟吡啶-4-羧酸與甲酰胺在140℃反應，得到6-氟-3H-吡啶并〔3，4-d〕嘧啶-4-酮(～20％)。1H NMR(DMSO)δ12.48(1H，m)，8.74(1H，s)，8.16(1H，s)，7.63(1H，d，J＝3Hz)。
4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶〔3，4-d〕嘧啶。將6-氟-3H-吡啶〔3，4-d〕嘧啶-4-酮(0.60g，3.6mmol)與POCl3反應，然后將粗4，6-二鹵化合物與3-溴苯胺反應，得到4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶〔3，4-d〕嘧啶(0.73g，63％)。1H NMR(DMSO)δ10.09(1H，brs)，8.96(1H，s)，8.75(1H，s)，8.25(2H，m)，7.90(1H，brd，J＝6.5Hz)，7.44-7.34(2H，m)。
實施例584-(3-溴苯胺基)-6-氯吡啶并〔3，4-d〕嘧啶5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氯吡啶。將5-氨基-2-氯吡啶(12.86g，0.1mol)、二叔丁基二碳酸酯(24.0g，0.11mol)和Et3N(12.1g，1.12mol)于CH2Cl2(150ml)中的混合物回流加熱12h，冷卻，并過濾出沉淀，水洗有機層，干燥(CaCl2)并通過氧化鋁短柱過濾，除去溶劑后得到5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氯吡啶(11.9g，52％)。1H NMR(CDCl3)δ8.31(1H，d，J＝2.9Hz)，7.94(1H，dd，J＝8.6，2.6Hz)，7.24(1H，d，J＝8.7Hz)，7.15(1H，m)，1.51(9H，s)。
5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氯吡啶-4-羧酸。將5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氯吡啶(22.87g，0.1mol)和TMEDA(47ml，0.31mol)于無水Et2O(600ml)中的混合物冷卻至-78℃，并向其中滴加n-BuLi(10M于己烷，30ml，0.3mol)。加熱溶液至-10℃，并于該溫度下保持2h，再冷卻至-78℃。吹入無水CO2，將所得混合物加熱至20℃，然后用含少量NH4OH的水(300ml)退火。用EtOAc，洗滌所得水相，用稀HCl緩慢酸化以沉淀5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氯吡啶-4-羧酸(15.5g，57％)。
1H NMR(DMSO)δ10.00(1H，s)，9.13(1H，s)，7.74(1H，s)，1.47(9H，s)。
5-氨基-2-氯吡啶-4-羧酸。將5-〔N-(叔丁氧羰基)氨基〕-2-氯吡啶-4-羧酸(1.91g，7mmol)于CH2Cl2(200ml)中的攪拌懸液用三氟乙酸緩慢處理，直至均勻(約12ml)。過夜攪拌溶液，并用稀NH4OH萃取，然后用稀HCl酸化水層，得到5-氨基-2-氯吡啶-4-羧酸沉淀(1.05g，87％)。
1H NNR(DMSO)δ9.01(2H，m)，8.03(1H，s)，7.48(1H，s)。
6-氯-3H-吡啶并〔3，4-d〕嘧啶-4-酮。將5-氨基-2-氯吡啶-4-羧酸(8.1g，4.7mmol)的甲酰胺(100ml)溶液于140℃攪拌12h。用水稀釋冷卻的混合物，得到6-氯-3H-吡啶并〔3，4-d〕嘧啶-4-酮(7.3g，86％)沉淀。1H NNR(DMSO)δ12.73(1H，m)，8.90(1H，d，J＝0.7Hz)，8.23(1H，s)，7.97(1H，d，J＝0.7Hz)。
4，6-二氯吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。將6-氯吡啶并〔3，4-d〕嘧啶-4-酮(1.82g，10mmol)于POCl3(10ml)中的攪拌懸浮液加熱回流，直至其溶解(約2h)，然后繼續加熱30分鐘。減壓除去過量試劑，用CH2Cl2和冰冷卻的Na2CO3水溶液混合物處理殘余物。干燥(Na2SO4)并蒸發產生的有機層，得到一定量不穩定的4，6-二氯吡啶并〔3，4-d〕嘧啶粗品，將其直接用于下一步驟。
1H NMR(CDCl3)δ9.38(1H，d，J＝0.5Hz)，9.19(1H，s)，8.09(1H，d，J＝0，5Hz)。
4-(3-溴苯胺基)-6-氯吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。將上述二氯嘧啶粗品和3-溴苯胺(3.8g，22mmol)的混合物溶于i-PrOH(100ml)。加入1滴濃HCl從引發反應，然后將混合物回流加熱30分鐘，冷卻，并用水稀釋以沉淀4-(3-溴苯胺基)-6-氯吡啶〔3，4-d〕嘧啶(1.26g，38％)。1HNMR(DMSO)δ10.12(1H，s)，9.03(1H，s)，8.77(1H，s)，8.63(1H，s)，8.21(1H，s)，7.89(1H，d，J＝8.1Hz)，7.43-7.32(2H，m)。
實施例594-(3-溴苯胺基)-6-甲氧基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶于100℃壓力容器中，用甲醇鈉的甲醇溶液處理4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(見前例)，得到4-(3-溴苯胺基)-6-甲氧基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。1H NMR(DMSO)δ9.93(1H，s)，8.94(1H，s)，8.61(1H，s)，8.26(1H，brs)，7.94(1H，brd，J＝7.6Hz)，7.88(1H，s)，7.43-7.32(2H，m)，4.01(3H，s)。
實施例604-(3-溴苯胺基)-6-甲氨基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶在100℃壓力容器中，用甲胺在乙醇中處理4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(0.20g，0.63mmol)(見前例)，然后在氧化鋁上層析(CH2Cl2/MeOH，99∶1)，得到4-(3-溴苯胺基)-6-甲氨基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(0.07g，34％)。
1H NMR(DMSO)δ9.69(1H，s)，8.75(1H，s)，8.41(1H，s)，8.21(1H，brs)，7.93(1H，brd，J＝7.6Hz)，7.41-7.28(2H，m)，7.06(1H，s)，6.82(1H，q，J＝5.0Hz)，4.95(3H，d，J＝5.0Hz)。
實施例614-(3-溴苯胺基)-6-二甲氨基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶于100℃壓力容器中，用二乙胺在乙醇中處理4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(見前例)，產生4-(3-溴苯胺基)-6-二甲氨基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。1H NMR(DMSO)δ9.71(1H，s)，8.83(1H，s)，8.43(1H，s)，8.21(1H，brs)，7.94(1H，brd，J＝7.5Hz)，7.42-7.29(2H，m)，7.26(1H，s)，3.17(6H，s)。
實施例624-(芐氨基)吡啶并〔3，4-d〕嘧啶將4-甲硫基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(74mg，0.41mmol)(見前例)和芐胺(1ml)的混合物于100℃加熱2h。冷卻后減壓濃縮混合物，通過制備性tlc在硅膠上直接純化(用CH2Cl2洗脫)，得到4-芐氨基)吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(21.2mg，20％)。
1H NMR(DMSO)δ9.21(1H，t，J＝5.8Hz)，9.19(1H，s)，8.63(1H，d，J＝5.8Hz)，8.58(1H，s)，8.20(1H，d，J＝5.1Hz)，7.41-7.30(4H，m)，7.26(1H，t，J＝7.1Hz)。
實施例634-(3-溴苯胺基)吡啶并〔2，3-d〕嘧啶3H-吡啶并〔2，3-d〕嘧啶-4-酮。將2-氨基煙酸(15g，108.6mmol)的甲酰胺溶液(35ml)于165℃加熱3.5h。冷卻后固體沉淀。過濾固體，水洗并真空干燥，得到3H-吡啶并〔2，3-d〕嘧啶-4-酮(7.87g，49.4％)。 1H NMR(DMSO)δ12.50(1H，s)，8.97(1H，dd，J＝1.9，4.5Hz)，8.53(1H，dd，J＝2.1，7.9Hz)，8.34(1H，s)，7.57(1H，dd，J＝4.6，8.0Hz)。
4-硫代吡啶并〔2，3-d〕嘧啶。將五硫化二磷(6g，13.5mmol)加至3H-吡啶并〔2，3-d〕嘧啶-4-酮(2g，13.5mmol)的吡啶(50ml)溶液中。回流混合物3h。冷卻后形成固體，棄去吡啶。將固體懸浮于H2O(20ml)中，過濾并真空干燥，得到4-硫代吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(1.72g，78％)。1H NMR(DMSO)δ9.06(1H，dd，J＝1.9，4.3Hz)，8.90(1H，dd，J＝1.9，8.2Hz)，8.36(1H，s)，7.65(1H，dd，J＝4.3，8.2Hz)。
4-甲硫基吡啶并〔2，3-d〕嘧啶。將4-硫代吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(100mg，0.76mmol)、三乙胺(154mg，1.52mmol)、DMSO(2ml，和碘甲烷(161mg，1.14mmol)的混合物于25℃攪拌12h。將混合物倒入H2O中，并用EtOAc萃取。合并萃取物，用水和飽和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)，減壓除去溶劑，得到4-甲硫基吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(134mg，定量)。
1H NMR(DMSO)δ9.25(1H，dd，J＝1.8，4.2Hz)，9.17(1H，s)，8.59(1H，dd，J＝1.9，8.2Hz)，7.75(1H，dd，J＝4.3，8.2Hz)，2.73(3H，s)。
將4-甲硫基吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(157mg，0.89mmol)和3-溴苯胺(1ml)的混合物于100℃加熱2h。冷卻后，形成沉淀，過濾，用EtOH洗滌后風干，得到4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(55.5mg，20％)。1HNMR(DMSO)δ10.13(1H，s)，9.11(1H，dd，J＝1.7，4.3Hz)，9.01(1H，dd，J＝1.7，8.2Hz)，8.81(1H，s)，8.22(1H，s)，7.90(1H，d，J＝7.7Hz)，7.71(1H，dd，J＝4.3，8.0Hz)，7.40(2H，m)。
實施例644-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶2，6-二氟煙酸。在N2及78℃下，向二異丙基氨化鋰(于環己烷中的59.0ml溶液，0.089mmol)的THF(250ml)溶液中滴加2，6-二氟吡啶(7.89ml，0.087mmol)。78℃2h后，用無水CO2氣流通過溶液，用水稀釋混合物，并用EtOAc洗滌。用3N HCl中和水相，用EtOAc萃取并處理，得到2，6-二氟煙酸(13.4g，97％)。
1H NMR(DMSO)δ8.59(1H，dd，J＝9.2，8.2Hz)，7.30(1H，dd，J＝8.2，2.1Hz)，4.03(1H，brs)。
2，6-二氟煙酰胺。將2，6-二氟煙酸(7.4g，0.046mmol)和SOCl2(20ml)在含有DMF(1滴)的1，2-二氯乙烷中的溶液回流加熱4h，然后減壓濃縮至干。將殘余物溶于Et2O(100ml)，冷卻至0℃，滴加濃氨水(10.0ml，0.17mmol)處理。10分鐘后，用NaHCO3水溶液洗滌溶液并處理，得到2，6-二氟煙酰胺(5.61g，76％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.70(1H，dd，J＝9.6，8.3Hz)，7.00(1H，ddd，J＝8.3，2.9，1.1Hz)，6.71，6.55(1H，1H，2brs)。
2-氨基-6-氟煙酰胺。用氨水飽和2，6-二氟煙酰胺(4.68g，0.029mmol)的無水甲酰胺(30ml)溶液，并于室溫下封置24h。加水(50ml)，濾出所產生的沉淀，用水充分洗滌，得到6-氨基-2-氟煙酰胺(1.41g，31％)。mp 236-237℃。
1H NMR(DMSO)δ7.89(1H，dd，J＝10.4，8.4Hz)，7.31，7.16(1H，1H，2 brs，)，6.93(2H，brs)，6.36(1H，dd，J＝8.4，2.4Hz)。
合并濾液和洗滌物，用EtOAc充分萃取，并將萃取物進行硅膠層析。用EtOAc/石油醚洗脫初餾物，而用EtOAc/石油醚(2∶1)得EtOAc則洗脫出2-氨基-6-氟煙酰胺(1.57g，35％)，mp(EtOAc/石油醚)199-200℃〔Rogers R.B.et al.，U.S.patent no.4,383,851，reeord mp 198-200℃〕。1H NMR(DMSO)δ8.13(1H，dd，J＝10.4，8.4Hz)，7.90，7.30(1H，1H，2brs)，7.65(2H，brs)，6.23(1H，dd，J＝8.4，2.6Hz)。
將2-氨基-6-氟煙酰胺(0.74g，4.77mmol)于原甲酸三乙酯(25ml)中的懸浮液回流加熱8h。冷卻至室溫后，過濾出沉淀，用石油醚充分洗滌，得到7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶-4(3H)-酮)0.76g，96％。1H NMR(DMSO)δ12.75(1H，brs)，8.66(1H，dd，J＝10.4，8.4Hz)，8.38(1H，s)，7.33(1H，dd，J＝8.4，2.6Hz)。
4-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶。將7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶-4(3H)-酮(0.20g，1.21mmol)于POCl3(10ml)中的懸浮液回流加熱2h，然后減壓除去揮發物，殘余物在NaHCO3水溶液和EtOAc之間分配。處理有機萃取物后得到粗4-氯-7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶，將其直接用于下一步反應。將該產物(0.20g，1.09mmol)和3-溴苯胺(0.23ml，2.18mmol)于含有微量濃HCl的丙-2-醇(1.0ml)和THF(10ml)中的溶液于20℃攪拌1h，然后濃縮干燥。殘余物溶于EtOAc，用NaCHO3水溶液洗滌，處理后得到一油狀物，將其硅膠層析。用EtOAc/石油醚(1∶5)洗脫得到3-溴苯胺，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脫得到4-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(0.18g，47％)。
mp(MeOH)211-213℃.1HNMR(DMSO)δ10.18(1H，brs)，9.17(1H，t，J＝8.6Hz)，8.80(1H，s)，8.17(1H，t，J＝1.8Hz)，7.85(1H，dt，Jd＝7.6Hz，Jt＝1.8Hz)，7.53(1H，dd，J＝8.6，2.7Hz)，7.41-7.34(2H，m)。
實施例657-氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔2，3-d〕嘧啶將4-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(0.20g，0.63mmol)的EtOH(20ml)溶液用氨水飽和，并在壓力容器中于100℃加熱30h。減壓除去溶劑，得到7-氨基-4-(3-溴苯胺基)吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(0.18g，90％)。
1HNMR(DMSO)δ3.97(1H，brs)，8.59(1H，s)，8.51(1H，d，J＝9.3Hz)，8.11(1H，sl brs)，7.77(1H，brd，J＝6.3Hz)，7.44(2H，brs)，7.37-7.30(2H，m)，6.81(1H，d，J＝9.3Hz)。
實施例664-(3-溴苯胺基)-7-甲氨基吡啶并〔2，3-d〕嘧啶于100℃壓力容器中，將4-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(見前例)(0.20g，0.63mmol)、鹽酸甲胺(0.13g，1.88mmol)和Et3N(0.30ml，2.19mmol)于EtOH(15ml)中的溶液加熱18h。減壓除去溶劑，殘余物在EtOAc和水之間分配。處理有機層，得到4-(3-溴苯胺基)-7-(甲氨基)吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(0.16g，77％)1H NMR(DMSO)δ9.53(1H，s)，8.54(1H，s)，8.41(1H，d，J＝8.1Hz)，8.17(1H，t，J＝1.8Hz)，7.83(1H，dd，J＝8.0，1.9Hz)，7.66(1H，brs)，7.32(1H，t，J＝8.0Hz)，7.24(1H，dd，J＝8.0，1.8Hz)，6.77(1H，d，J＝8.1Hz)，2.92(3H，d，J＝4.8Hz)。
實施例674-(3-溴苯胺基)-7-二甲氨基吡啶并〔2，3-d〕嘧啶于100℃壓力容器中，將4-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(前例)(0.12g，0.38mmol)與鹽酸二甲胺(92mg，1.13mmol)和Et3N(0.18ml，1.32mmol)在EtOH(15ml)中反應18h，然后蒸發溶劑并處理，得到4-(3-溴苯胺基)-7-(二甲氨基)吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(0.11g，84％)1H NMR(DMSO)δ9.58(1H，brs)，8.56(1H，d，J＝9.3Hz)，8.54(1H，s)，8.18(1H，t，J＝1.9Hz)，7.84(dt，Jd＝8.0，Hz，Jt＝1.9Hz)，7.33(1H，dd，J＝8.1，8.0Hz)7.25(1H，dt，Jd＝9.3，Hz，Jt＝1.9Hz)，7.10(1H，d，J＝9.3Hz)，3.18(6H，s)。
實施例684-(3-溴苯胺基)-7-甲氧基吡啶并〔2，3-d〕嘧啶于90℃壓力容器中，將4-(3-溴苯胺基)-7-氟吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(0.26g，0.81mmol)和甲醇鈉(由75mg鈉制得，3.26mmol)于無水MeOH(15ml)中的溶液加熱18h。將混合物倒入水中，用E-tOAc萃取，得到4-(3-溴苯胺基)-7-甲氧基吡啶并〔2，3-d〕嘧啶(0.23g，86％)1H NMR(DMSO)δ9.88(1H，brs)，8.82(1H，d，J＝8.9Hz)，8.71(1H，s)，8.18(1H，dd，J＝8.0，1，9Hz)，7.36(1H，dd，J＝8.1，8.0Hz)，7.29(1H，ddd，J＝8.1，1.9，1，9Hz)7.15(1H，d，J＝8.9Hz)，4.01(3H，s)。
實施例694-芐氨基-7-甲氨基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶S-乙基異硫脲鎓碘化物。將硫脲(3.80g，50mmol)和碘乙烷(4ml，50mmol)的MeOH(100ml)回流24h。減壓汽提溶劑，并真空干燥殘余的淺色油狀物，自然固化。得到定量的所需化合物(13.98g)。
4-氨基-5-氰基-2-乙硫基嘧啶。于25℃，向S-乙基異硫脲氫碘化合物(11.58g，50mmol)、乙氧基亞甲基丙二腈(6.1g，50mmol)和乙醇(250ml)的混合物中加入NaOMe(2.7g，50mmol)的EtOH(200ml)懸液。將混合物在N2下回流2h。然后將溶液在熱平板上濃縮，直至觀察到沉淀。冷卻后，通過抽濾收集固體，并于25℃在水中攪拌。過濾并直空干燥后得到4-氨基-5-氰基-2-乙硫基嘧啶(4.02g，45％)，為棕色固體。1H NMRδ(DMSO)8.45(1H，s)，7.90(2H，brs)，3.00(2H，q，J＝7.3Hz)，1.27(3H，t，J＝7.3Hz)。
4-氨基-2-乙硫基嘧啶-5-羧酰胺。將4-氨基-5-氰基-2-乙硫基嘧啶(4.0g，22.3mmol)分小批加至硫酸(濃，4.3ml)。在N2下將混合物于40℃攪拌1.5h。用冰-水終止反應，加入NH4OH以調節pH至29。通過抽濾收集固體，并過夜真空干燥。得到4-氨基-2-乙硫基嘧啶-5-羧酰胺(0.58g，58％)，為淺棕色固體。 1H NMR(DMSO)δ8.52(1H，s)，7.98(2H，brs)，7.42(2H，brs)，3.04(2H，q，J＝7.3Hz)，1.27(3H，t，J＝7.3Hz)。
4-氧代-7-乙硫基-3H-嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶。將4-氨基-2-乙硫基嘧啶-5-羧酰胺(4.66g，23.5mmol)和原甲酸三乙酯(150ml)的混合物在N2下回流24h，然后冷卻至25℃。通過抽濾分離棕色固體，并真空干燥，得到4-氧代-7-乙硫基-3H-嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶〔3.54g，72％〕。1H NMR(DMSO)δ12.80(1H，s)，9.20(1H，s)，8.45(1H，s)，3.18(2H，q，J＝7.4Hz)，1.35(3H，t，J＝7.4Hz)。
4-硫代-7-乙硫基-3H-嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶。將4-氧代-7-乙硫基-3H-嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶(1.33g，6.7mmol)、P2S5(1.48g，6.6mmol)和吡啶(15ml)的混合物回流3h。然后減壓汽提吡啶，并將殘余物溶于NaOH溶液(0.5M，75ml)用炭煮沸。過濾后，用乙酸中和濾液，產生金棕色固體。Buchher過濾并真空干燥，得到4-硫代-7-乙硫基-3H-嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶(1.42g，95％)。
1H NMR(DMSO)δ9.47(1H，s)，8.46(1H，s)，3.20(2H，q，J＝7.3Hz)，1.35(3H，t，J＝7.3Hz)。
7-乙硫基-4-甲硫基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶。使用與實施例21中7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶相同的步驟。
1H NMR(DMSO)δ9.52(1H，s)，9.15(1H，s)，3.23(2H，q，J＝7.3Hz)，2.72(3H，s)，1.38(3H，t，J＝7.3Hz)。
4-芐氨基-7-乙硫基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶。使用與實施例21中7-氨基-4-苯胺基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶相同的步驟。
4-芐氨基-7-甲氨基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶。在不銹鋼反應釜中，將4-芐氨基-7-乙硫基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶于含有過量甲胺的EtOH中的溶液于150℃加熱5h。過濾出固體并干燥，得到4-芐氨基-7-甲氨基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶。
實施例704-芐氨基-7-肼基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶于不銹鋼反應釜中，將4-芐氨基-7-乙硫基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶于含過量肼的EtOH中的溶液于150℃加熱5h。過濾出固體并干燥，得到4-芐氨基-7-肼基嘧啶并〔4，5-d〕嘧啶。

實施例714-(3-溴苯胺基)噻吩并〔3，2-d〕嘧啶鹽酸鹽3H-噻吩并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮。將3-氨基硫酚-2-羧酸甲酯(1g，6.3mmol)和甲酰胺(2g)的混合物于240℃加熱10分鐘。冷卻后出現沉淀。將其溶于EtOH并過濾。減壓濃縮濾液，并將殘余物通過硅酸層析純化(用10％MeOH/CH2Cl2洗脫)，得到3H-噻吩并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮(249mg，26％)，為一固體。
1H NMR(DMSO)δ12.61(1H，brs)，8.20(1H，s)，8.17(1H，d，J＝5Hz)，7.42(1H，d，J＝5Hz)。
4-氯噻吩并〔3，2-d〕嘧啶。于0℃及N2下，向DMF(170.3μl，2.2mmol)和二氯乙烷(1.2ml)的溶液中緩慢加入草酰氯(279.2mg，3.2mmol)并攪拌10分鐘。加入3H-噻吩并〔3，2-d〕嘧啶-4-酮(152.2mg，1.0mmol)，回流5h。將反應混合物倒入水，用CH2Cl2萃取。減壓汽提有機層，得到4-氯噻吩并〔3，2-d〕嘧啶(140mg，82％)，為黃色固體。1H NMR(DMSO)δ9.05(1H，s)，8.62(1H，d，J＝5Hz)，7.79(1H，d，J＝5Hz)。
4-(3-溴苯胺基)噻吩并〔3，2-d〕嘧啶鹽酸鹽。將4-氯噻吩并〔3，2-d〕嘧啶(135mg，0.79mmol)和3-溴苯胺(95μl，0.89mmol)于2-甲氧基乙醇(2ml)中的混合物于79℃加熱30分鐘。過濾所得沉淀，用CH2Cl2洗滌，得到4-(3-溴苯胺基)噻吩并〔3，2-d〕嘧啶鹽酸鹽(195.5mg，72％)，為淺黃色固體。1H NMR(DMSO)δ11.33(1H，s)，8.94(1H，s)，8.23(1H，s)，8.53(1H，d，J＝5.3Hz)，8.07(1H，s)，7.77(1H，d，J＝7.9Hz)，7.6(1H，d，J＝5.3Hz)，7.48(2H，m)。
實施例724-芐氨基噻吩并〔3，2-d〕嘧啶如前例所述，由4-氯噻吩并〔3，2-d〕嘧啶(100mg，0.586mmol)和芐胺(710μl，0.645mmol)的2-甲氧基乙醇(2ml)溶液產生4-芐氨基噻吩并〔3，2-d〕嘧啶(37mg，26％)。
1H NMR(DMSO)δ8.42(1H，s)，8.12(1H，d，J＝5.5Hz)，7.39(1H，d，J＝5.3Hz)，7.40-7.30(4H，m)，7.24(1H，t，J＝6.8Hz)。
實施例734-(3-溴苯胺基)噻吩并〔2，3-d〕嘧啶2-氨基噻吩-3-羧酸甲酯。將氰基乙酸甲酯(3.25g，32.3mmol)、1，4-二噻烷-2，5-二醇(5g，32.8mmol)、三乙胺(1ml，7.71mmol)于EtOH(50ml)中的混合物于40℃攪拌1h。冷卻后將溶液通過硅膠塞用CH2Cl2洗脫。將濾液汽提干燥，得到2-氨基噻吩-3-羧酸甲酯粗品，將其用于下一步反應。
1H NMR(DMSO)δ7.26(1H，s)，6.82(1H，d，J＝5.8Hz)，6.28(1H，d，J＝5.8Hz)，3.69(3H，s)。
3H-噻吩并〔2，3-d〕嘧啶-4-酮。將2-氨基噻吩-3-羧酸甲酯(602.1mg，3.83mmol)的甲酰胺(5ml)溶液于200℃加熱12h。將所得焦油溶于CH2Cl2(10ml)，置于硅膠塞上，用10％MeOH/CH2Cl2洗脫。減壓汽提濾液，并用EtOH洗滌固體，得到3H-噻吩并〔2，3-d〕嘧啶-4-酮(231.4mg，40％)，為橙色固體。
1H NMR(DMSO)δ12.50(1H，brs)，8.13(1H，s)，7.60(1H，d，J＝5.8Hz)，7.41(1H，d，J＝6.0Hz)。
4-氯噻吩并〔2，3-d〕嘧啶。于N2及0℃下，向DMF(90μl)和CH2Cl2(2ml)的溶液中緩慢加入草酰氯(148mg，1.2mmol)，并攪拌10分鐘。將3H-噻吩并〔2，3-d〕嘧啶-4-酮(81mg，0.52mmol)固體加至該溶液中，并用加熱槍加熱至固體溶解。于25℃及N2下攪拌反應12h。所得反應混合物倒入水中，并用CH2Cl2萃取。分相，有機層干燥(Na2SO4)并減壓汽提，得到4-氯噻吩并〔2，3-d〕嘧啶(87.6mg，97％)，為一固體。1H NMR(DMSO)δ8.96(1H，s)，8.17(1H，d，J＝6.0Hz)，7.62(1H，d，J＝6.0Hz)。
4-(3-溴苯胺基)噻吩并〔2，3-d〕嘧啶鹽酸鹽。將4-氯噻吩并〔2，3-d〕嘧啶(135mg，0.79mmol)和3-溴苯胺(95μl，0.89mmol)于2-甲氧基乙醇(2ml)中的混合物在攪拌下于79℃加熱30分鐘，過濾出所得固體，并用CH2Cl2洗滌，得到4-(3-溴苯胺基)噻吩并〔2，3-d〕嘧啶鹽酸鹽(197mg，73％)。1H NMR(DMSO)δ9.99(1H，s)，8.60(1H，s)，8.23(1H，s)，7.98(1H，d，J＝6.0Hz)，7.88(1H，d，J＝8.0Hz)，7.79(1H，d，J＝6.0Hz)，7.37(1H，t，J＝8.0Hz)，7.30(1H，d，J＝8.0Hz)。
實施例744-芐氨基吡咯并〔2，3-d〕嘧啶。
按前例所述制備4-芐氨基吡咯并〔2，3-d〕嘧啶G.H.Hitchings，K.W.Ledig and R.A.West，U.S.Patent No.3,037,980，1962；Chemical Abstracts1962，57，15130C。
實施例75N6-(3-溴苯基)腺嘌呤將6-氯嘌呤(1.0g，6.47mmol)、3-溴苯胺(0.78ml，7.12mmol)和濃HCl(4滴)于異丙醇(10ml)中的混合物于80℃攪拌5h。冷卻后產生沉淀。過濾出固體，用異丙醇洗滌，并風干，得到N6-(3-溴苯基)腺嘌呤(1.93g，91％)，為淺黃色固體。
1H NMR(DMSO)δ11.38(1H，s)，8.78(1H，s)，8.75(1H，s)，7.90(1H，d，J＝8.0Hz)，7.38-7.34(2H，m)。
實施例76N6-芐基腺嘌呤N6-芐基腺嘌呤可自Aldrich Chemical Company公司(1001West Saint Paul Avenue，Milwaukee，Wisconsin 53233)購得。
實施例777-氨基-4-(3-甲基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(217mg，1.13mmol)和間-甲苯胺(1.50g，14.mmol)的混合物于155℃攪拌30分鐘。所得產物經硅膠層析(5％MeOH/CH2Cl2)后，得到7-氨基-4-(3-甲基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(190mg，67％)，為淺黃色固體。1H NMR(DMSO)δ9.81(1H，brs)，9.34(1H，s)，8.38(1H，s)，7.60(2H，s)，7.26(1H，dd，J＝8.5，7.6Hz)，6.95(1H，d，J＝7.4Hz)，6.63(2H，brs)，6.44(1H，s)，2.33(3H，s).
實施例787-氨基-4-(4-甲氧基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶將7-氨基-4-甲硫基吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(129mg，0.62mmol)和4-甲氧基苯胺(0.15g，1.2mmol)及乙醇(5ml)的混合物于40℃加熱16h，然后回流3h。將反應混合物冷卻至0℃并過夜。通過真空過濾收集固體，并用異丙醇重結晶，得到7-氨基-4-(4-甲氧基苯胺基)吡啶并〔4，3-d〕嘧啶(42mg，25％)，為黃色固體。1H NMR(DMSO)δ10.00(1H，brs)，9.31(1H，s)，8.35(1H，s)，7.62(2H，d，J＝9.2Hz)，6.96(2H，d，J＝9.2Hz)，6.70(2H，slbrs)，6.41(1H，s)，3.77(3H，s)。
實施例794-(3-溴苯胺基)-6-(哌啶-1-基)吡啶并〔3，4-d〕嘧啶于100℃壓力容器中，用哌啶(于乙醇中)處理4-(3-溴苯胺基)-6-氟吡啶并〔3，4-d〕嘧啶(見前例)，得到4-(3-溴苯胺基)-6-二甲氨基吡啶并〔3，4-d〕嘧啶。
可以以多種不同的口服和腎腸道外給藥劑型使用本發明的藥物組合物。這些劑型中含有作為活性成分的上文限定之抑制劑。
為了制備藥物組合物，可以使用固體或液體的藥學上可接受的惰性載體。固體形式的制劑包括粉末、片劑、可分散的顆粒、膠囊、扁囊劑和栓劑。固體載體可以是一種或多種物質，其也可以作為稀釋劑、香味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、或片劑崩解劑；其也可以是膠囊包裹材料。在粉末劑中，載體被細分成可與細篩分的活性成分混合的固體物。在片劑中，活性化合物以適當的比例與具有必要粘結性質的載體混合，并被壓制成所需的形狀和大小。粉末和片劑較好含有5％或10％至大約70％的活性成分。適當的固體載體是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素納、低熔點蠟、可可脂等。術語“制劑”可包括與作為載體的膠囊包裹材料一起配制的活性成分，借以提供其中由載體包圍活性成分(加有或沒有其他載體)，從而與結合的膠囊。同樣還包括扁囊劑。可以使用片劑、粉末劑、偏 劑和膠囊劑作為適于口服給藥的固體劑型。
液體劑型包括溶液、懸浮液和乳劑。例如可以是適于胃腸道外注射的水或水-丙二醇溶液。也可以在聚乙二醇水溶液中以溶液的形式配制液體制劑。可以將活性化合物溶解于水中，并根據需要加入適當著色劑、香味劑、穩定劑和增稠劑來制備適于口服使用的液體溶液。可以將精細粉碎的活性化合物分數于含粘性材料如天然或合成樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及其他已知懸浮劑的水中制成適于口服使用的水懸浮液。
藥物制劑較好制成單位劑量形式。在這樣的劑型中，可將制劑再分成含有適當量抑制劑及其他個別地，或以混合物形式結合之抗腫瘤材料的單位劑量。單位劑量形式可以是包裝制劑，該包裝含有分立量的制劑，例如可以是包裝的片劑、膠囊劑、及加在小瓶或安瓶中的粉末劑。單位劑量形式也可以是膠囊劑、扁囊劑或片劑本身，或者可以是呈包裝形式的適當數量的這些劑型的任何一種。另外，單位劑量形式可以是一部分中有抑制劑并在其他部分中有其他抗腫瘤材料的可分形式的例如可分的膠囊、可分的包裝或兩部分的安瓶、小瓶等。
可以改變或調整單位劑量制劑中之抑制劑的量，例如抑制劑的量可以從0.01mg/kg至100.0mg/kg，較好從0.03mg/mg至小于1.0mg/kg。
較好將藥物組合物配制成可以經胃腸道外或口服給藥形式的。可以在與表面活性劑如羥丙基纖維素適當混合物的水中制備作為游離堿和游離酸或藥學上可接受之鹽的活性化合物的溶液。可以在甘油、液體聚乙二醇及其混合物中或油中制備分散劑。在常規貯存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑以阻止微生物生長。
適于注射使用的藥物劑型包括無菌水溶液或分散劑，以及臨時制備無菌可注射溶液或分散劑的無菌粉末。在這些情況下，這些藥物形式必須是無菌的，并且必須是達到易于用注射器注射程度的液體。其在制造和貯存條件下必須穩定的，并且必須保持能對抗細菌和真菌等微生物的污染作用。載體可以是含有例如水、乙醇多羥基化合物(如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇等)、其適當的混合物、及植物油的溶劑或分散介質。可以使用例如卵磷脂包被、在分散劑的情況下維持所需的顆粒大小、以及使用表面活性劑等來保持適當的流動性。可用多種不同的抗細菌和抗真菌劑，例如paragens、三氯叔丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞等阻止微生物的作用。在許多情況下，其較好包含等滲劑，例如糖或氯化鈉。可加用延遲吸收的材料如明膠來延長可注射組合物的吸收時間。
可將活性化合物以所需的量摻入含上文列出之各種其他成分的適當溶劑中，然后根據需要過濾除菌以制備適當的可注射溶劑。一般說來，可將各種滅菌的活性成分摻入到含有基本分散介質及上述所需其他成分的無菌載體中來制備分散劑。在用無菌粉末制備無菌可注射溶液的情況下，優選的制備方法是使用真空干燥和冷凍干燥技術制得活性成分的粉末，加上從其以前除菌過濾的溶液中得到的其他所需成分。
本文使用的術語“藥學上可接受的載體”包括任何的和所有的溶劑、分散介質、涂敷劑、抗細菌和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。在藥學活性物質中使用這些介質和制劑是本領域已知的。除非任何常規介質或添加劑與活性成分不相容，其均可用于本發明治療組合物中。還可以在組合物中摻入其他附加活性成分。
特別有利的是以容易給藥和有良好劑量均勻性的劑量單位形式配制胃腸道外給藥的組合物。本文所說的劑量單位形式是指適于作為被治療的哺乳動物對象之單一劑量的物理上分立的單位；每個單位均含有與必要藥物載體合用的，經計算可產生預期治療效果的定量的活性化合物。本發明的新的劑量單位形式的技術規格決定并直接取決于(a)活性材料的獨特性質和將達到的特定的治療效果，及(b)配制這些用于治療患有本文詳述之病理損傷狀態之活個體的活性材料技術中的固有限制。
為了方便和有效地給藥，以本文中所述的劑量單位形式，按有效劑量加適當的藥用載體摻合基本活性成份。例如胃腸道外給藥的單位劑量形式可含有大約0.5至100mg，較好的0.1至50mg量的基本活性化合物，即抑制劑。哺乳動物治療對象的每日胃腸道外給藥的抑制劑劑量范圍為0.01mg/kg至10mg/kg，較好的每日劑量范圍為0.1mg/kg至1.0mg/kg。
對于口服劑量，哺乳動物對象的每日劑量范圍為0.01-100mg活性化合物/kg，較好為0.1-10mg/kg上文描述的抑制劑可形成普遍已知的，藥學上可接受的鹽，例如堿金屬鹽，和其他堿性鹽或酸加成鹽等。因此所指堿性物質傾向于包括那些已知實質上與母體化合物及其水合物等同的常用鹽。
本文所述的活性化合物能夠進一步形成藥學上可接受的酸加成鹽和/或堿性鹽。所有這些形式的鹽均包括于本發明范圍內。
活性化合物的藥學上可接受的酸加成鹽包括衍生于非毒性無機酸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫硼酸、氫碘酸、氫氟酸、磷酸等的鹽，以及衍生于非毒性有機酸如脂族單或二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸、鏈烷雙酸、芳香酸、脂族和芳香磺酸等的鹽。因此這樣的鹽包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、雙硫酸鹽、亞硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、辛酸鹽、異丁酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、苯乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽等。另外還將包括氨基酸鹽，如精氨酸鹽等，以及葡糖酸鹽、米乳糖醛酸鹽(如參見Berge，S.M.et al.，”Pharmaceutical Salts”，Journal of Pharmaceutical Science pp 1-19(1977))。
按常規方法使游離堿形式的化合物與足夠量的所需酸接觸以產生鹽，從而制得所說堿性化合物的酸加成鹽。較好用所需酸的水溶液處理，以使所得pH小于4而將活性化合物轉化成酸性鹽。可使溶液通過C18柱體以吸附化合物，用大量的水洗柱，并用甲醇、乙腈等極性有機溶劑洗脫化合物，并在減壓下濃縮，然后冷干分離的化合物。可使鹽形式的化合物與堿接觸并按常規方式分離游離堿而再生游離堿形式的化合物。游離堿形式在某些物理性質如在極性溶劑中的溶解度方面稍不同于其各自的鹽形式但就本發明的應用目的來說鹽等同于它們各自的游離堿。
與金屬或胺，例如堿金屬和堿土金屬或有機胺一起形成藥學上可接受的堿加成鹽。用作陽離子的金屬包括鈉、鉀、鎂、鈣等。適當的胺例如可以是N，N′-二苯基乙二胺、氯代普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、二環己胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺及普魯卡因(例如參見Berge，S.M.et al.，”Pharmaceutical Salts”，Journal of PharmaceuticalScience，66，pp，1-19(1977))。
按常規方法使游離酸形式的化合物與足夠量的所需堿接觸以產生鹽，從而制得所說酸性化合物的堿加成鹽。較好用所需堿的水溶液處理，以使所得pH大于9而將活性化合物轉化成堿性鹽。可使溶液通過一個C18柱體的吸附化合物，用大量的水洗柱，并用甲醇、乙腈等極性有機溶劑洗脫化合物，然后經在減壓下濃縮并凍干而分離之。可以使鹽形式的產物與酸接觸并按常規方法分離游離酸而再生游離酸形式的化合物。游離酸形式例如在極性溶劑中的溶解度等物理性質方面稍不同于它們各自的鹽，但就本發明的應用目的來說鹽等同于它們各自的游離酸。
本發明的某些化合物可以包括水合形式在內的非溶劑化或溶劑化形式存在。一般來說，溶劑化形式(包括水合形式)等同于非溶劑化形式，并且包括在本發明的范圍內。
本發明的某些化合物具有一個或多個手性中心，且這些中心可以R(D)或S(L)構型存在。本發明包括所有對映體和差向異構體形式及其合適的混合物。
盡管給出了本發明的優選實施方案，但在不背離本發明精神的情況下，可對本發明作出各種改動。所有使用的術語均用于說明而不是限制本發明。
流程1.優選組1-5R4＝H的合成 流程2.優選組1-5R3＝H的合成 流程3.優選組6和8-10R4＝RO的合成
流程4.優選組7的合成 流程5.優選組8與9的合成R3＝OR 流程6.優選組11的合成 流程7.優選組12-16的合成
流程8.優選組17-21的合成 流程9.優選組22-26R4＝H的合成 流程10.優選組22-26R3＝H的合成
流程11.優選組27與29-31的合成R3＝RO 流程12.優選組28的合成 流程13.優選組29與30R4＝OR的合成
流程14.優選組32的合成 流程15.優選組33-36的合成 流程16.優選組37-40的合成 流程17.優選組41〔3，2-d〕環稠合的合成
流程18.優選組41〔3，2-d〕環稠合的合成 流程19.優選組42〔3，2-d〕環稠合的合成 流程20.優選組42〔3，2-d〕環稠合的合成
流程21.優選組43〔3，2-d〕環稠合的合成 流程22.優選組43〔3，2-d〕環稠合的合成 流程23.優選組44〔5，4-d〕環稠合的合成 流程24.優選組44〔4，5-d〕環稠合的合成
流程25.優選組45〔5，4-d〕環稠合的合成 流程26.優選組45〔4，5-d〕環稠合的合成 流程27.優選組46的合成 流程28.優選組47〔5，4-d〕環稠合的合成
流程29.優選組47〔4，5-d〕環稠合的合成 流程30.優選組48〔5，4-d〕環稠合的合成 流程31.優選組48〔4，5-d〕環稠合的合成
流程32.優選組49〔3，4-d〕環稠合的合成 流程33.優選組49〔4，3-d〕環稠合的合成
權利要求
1.下式I化合物或其藥用鹽或水合物用于制備抑制表皮生長因子受體酪氨酸激酶的藥物的用途 式I其中包含A-E的環是一個五元環，在A-E中任何兩個相鄰的位置結合在一起，為一單個雜原子N、O或S，兩個剩余原子中的一個必須為碳原子，另一個可為碳原子或氮原子；x＝O，S，NH或NR7，R7為C1-4低級烷基，OH，NH2，C1-4低級烷氧基，或C1-4低級單烷基氨基；n＝0，1，2；R1＝H或C1-4低級烷基；若n＝2，則R1可在任一相連碳原子上獨立為H或C1-4低級烷基；R2為C1-4低級烷基，C3-8環烷基，C1-4低級烷氧基，C3-8環烷氧基，硝基，鹵素，全氟化C1-4低級烷基，羥基，C1-4低級酰氧基，氨基，一或二-C1-4低級烷基氨基，一或二-C3-8低級環烷基氨基，羥甲基，C1-4低級酰基，氰基，硫代低級烷基，亞硫酰基C1-4低級烷基，磺酰基C1-4低級烷基，C3-8硫代環烷基，C3-8亞硫酰基環烷基，C3-8磺酰基環烷基，磺酰氨基，一或二-C1-4低級烷基磺酰氨基，一或二-C3-8環烷基磺酰氨基，巰基，羧基，甲酰氨基，一或二-C1-4低級烷基羧酰氨基，一或二-C3-8環烷基羧酰氨基，C1-4低級烷氧羰基，C3-8環烷氧羰基，C2-4低級鏈烯基，C4-8環烯基，C2-4低級炔基，或者相鄰碳原子上的兩個R2結合在一起，共同形成5-7元碳環或單不飽和的1，3-二氧戊環基、1，4-二氧雜環己基、1，4-二氧雜基、吡喃基、呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、四氫噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、二唑烷基、哌嗪基、嗎啉代或硫代嗎啉代環；m＝0-3，其中Ar為苯基，噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡啶基，嘧啶基，咪唑基，吡嗪基，噁唑基，噻唑基，萘基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，吲哚基，喹啉基，異喹啉基和喹唑啉基；R3、R4、R5和R6各自獨立地不存在，或為H，C1-4低級烷基，C3-8環烷基，C1-4低級烷氧基，C3-8環烷氧基，羥基，C1-4低級酰氧基，氨基，一或二-C1-4低級烷基氨基，一或二-C3-8低級環烷基氨基，C1-4低級烷基或C3-8環烷基，碳酸酯基，即-OC(O)OR，其中R為C1-4低級烷基或C3-8環烷基；或脲基或硫脲基或N-或O-連接的尿烷，它們均可選擇性地被一或二-C1-4低級烷基或C3-8環烷基取代；C1-4低級硫代烷基，C3-8硫代環烷基，巰基，C2-4低級鏈烯基，肼基，N1-C1-4低級烷基肼基，C1-4低級酰氨基，羥氨基，C1-4低級O-烷基羥氨基；或相鄰碳原子上的R3-R6中的任何兩個共同形成5-7元碳環或單不飽和1，3-二氧戊環基、1，4-二氧雜環己基、1，4-二氧雜基、吡喃基、呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、四氫噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、二唑烷基、哌嗪基、嗎啉代或硫代嗎啉代環；在R3-R6中任何取代基上的任何低級烷基取代基可選擇性地被一個或多個下列基團取代羥基氨基，單低級烷基氨基，二低級烷基氨基，N-吡咯烷基，N-哌啶基，N-吡啶鎓，N-嗎啉代，N-硫代嗎啉代或N-哌嗪基；如果A至E中的一個或多個為N，則與N原子相鄰的碳原子上的R3-R6中的任何一個不為OH或SH；且如果取代基R1、R2、R3、R4、R5或R6中的任何一個含有手性中心，或R1在相連原子上產生手性中心時，則其所有單獨存在的和作為外消旋和/或非對映異構體混合物形式存在的立體異構體均包括在內。
2.根據權利要求1的用途，其中X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫、氮或氧原子，D和E為碳原子，或A和B為碳原子，而D和E共同為硫、氮或氧原子，R4或R3為H、C1-4低級烷基、C1-4低級烷氧基、氨基或一或二-C1-4低級烷基氨基。
3.根據權利要求1的用途，其中X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫、氮或氧原子，D為碳原子，E為氮原子，或D和E一起為硫、氮或氧原子，并且A為氮原子而B為碳原子，R3、R4或R6為H、C1-4低級烷基、C1-4低級烷氧基、氨基或一或二-C1-4低級烷基氨基。
4.根據權利要求1的用途，其中X＝NH，n＝0或1，在此情況下R1＝H，芳香環苯基可選擇性地被取代，A和B共同為硫、氮或氧原子，D為氮原子，E為碳原子，或者A和B共同為-碳原子，D為氮原子而E為硫、氮或氧原子，R3或R6為H、C1-4低級烷基、C1-4低級烷氧基、氨基或一或二-C1-4低級烷基氨基。
5.根據權利要求1的用途，其中R1、R2、R3或R4含有手性中心，或者當R1在相連原子上產生手性中心時，則單獨地或作為外消旋混合物或非對映異構體混合物的所有立體異構體均包括在內。
6.根據權利要求1的用途，其中所述的化合物具有下示環結構 或 其中Z＝氮、氧或硫。
7.根據權利要求1的用途，其中所述的化合物選自4-(3-溴苯胺基)噻吩〔3，2-d〕嘧啶；4-芐氨基噻吩并〔3，2-d〕嘧啶；4-(3-溴苯胺基)噻吩并〔2，3-d〕嘧啶；和N6-(3-溴苯基)腺嘌呤。
8.下式I化合物或其藥用鹽或水合物 其中包含A-E的環是一個五元環，其具有1或2個氮原子作為雜原子；x＝O，S，NH或NR7，R7為C1-4低級烷基，OH，NH2，C1-4低級烷氧基，或C1-4低級單烷基氨基；n＝0，1，2；R1＝H或C1-4低級烷基；若n＝2，則R1可在任一相連碳原子上獨立為H或C1-4低級烷基；R2為C1-4低級烷基，C3-8環烷基，C1-4低級烷氧基，C3-8環烷氧基，硝基，鹵素，全氟化C1-4低級烷基，羥基，C1-4低級酰氧基，氨基，一或二-C1-4低級烷基氨基，一或二-C3-8低級環烷基氨基，羥甲基，C1-4低級酰基，氰基，硫代低級烷基，亞硫酰基C1-4低級烷基，磺酰基C1-4低級烷基，C3-8硫代環烷基，C3-8亞硫酰基環烷基，C3-8磺酰基環烷基，磺酰氨基，一或二-C1-4低級烷基磺酰氨基，一或二-C3-8環烷基磺酰氨基，巰基，羧基，甲酰氨基，一或二-C1-4低級烷基羧酰氨基，一或二-C3-8環烷基羧酰氨基，C1-4低級烷氧羰基，C3-8環烷氧羰基，C2-4低級鏈烯基，C4-8環烯基，C2-4低級炔基，或者相鄰碳原子上的兩個R2結合在一起，共同形成5-7元碳環或單不飽和的1，3-二氧戊環基、1，4-二氧雜環己基、1，4-二氧雜基、吡喃基、呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、四氫噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、二唑烷基、哌嗪基、嗎啉代或硫代嗎啉代環；m＝0-3，其中Ar為苯基，噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡啶基，嘧啶基，咪唑基，吡嗪基，噁唑基，噻唑基，萘基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，吲哚基，喹啉基，異喹啉基和喹唑啉基；R3、R4、R5和R6各自獨立地不存在，或為H，C1-4低級烷基，C3-8環烷基，C1-4低級烷氧基，C3-8環烷氧基，羥基，C1-4低級酰氧基，氨基，一或二-C1-4低級烷基氨基，一或二-C3-8低級環烷基氨基，C1-4低級烷基或C3-8環烷基，碳酸酯基，即-OC(O)OR，其中R為C1-4低級烷基或C3-8環烷基；或脲基或硫脲基或N-或O-連接的尿烷，它們均可選擇性地被一或二-C1-4低級烷基或C3-8環烷基取代；C1-4低級硫代烷基，C3-8硫代環烷基，巰基，C2-4低級鏈烯基，肼基，N1-C1-4低級烷基肼基，C1-4低級酰氨基，羥氨基，C1-4低級O-烷基羥氨基；或相鄰碳原子上的R3-R6中的任何兩個共同形成5-7元碳環或單不飽和1，3-二氧戊環基、1，4-二氧雜環己基、1，4-二氧雜基、吡喃基、呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、四氫噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、二唑烷基、哌嗪基、嗎啉代或硫代嗎啉代環；在R3-R6中任何取代基上的任何低級烷基取代基可選擇性地被一個或多個下列基團取代羥基氨基，單低級烷基氨基，二低級烷基氨基，N-吡咯烷基，N-哌啶基，N-吡啶鎓，N-嗎啉代，N-硫代嗎啉代或N-哌嗪基；如果A至E中的一個或多個為N，則與N原子相鄰的碳原子上的R3-R6中的任何一個不為OH或SH；且如果取代基R1、R2、R3、R4、R5或R6中的任何一個含有手性中心，或R1在相連原子上產生手性中心時，則其所有單獨存在的和作為外消旋和/或非對映異構體混合物形式存在的立體異構體均包括在內；條件是R3-R6取代基中至少一個必須是除氫、鹵素、C1-4低級烷基或C1-4低級烷氧基之外的基團；
9.式I或式II化合物或其藥物鹽或水合物用于制備抑制Erb-B2或Erb-B3或Erb-B4受體酪氨酸激酶的藥物或治療癌癥、牛皮癬、腎病胰腺炎的藥物或防止胚細胞植入的藥物的用途 式I 式II其中包含A-E的環是一個五元環，在A-E中任何兩個相鄰的位置結合在一起，為一單個雜原子N、O或S，兩個剩余原子中的一個必須為碳原子，另一個可為碳原子或氮原子；x＝O，S，NH或NR7，R7為C1-4低級烷基，OH，NH2，C1-4低級烷氧基，或C1-4低級單烷基氨基；n＝0，1，2；R1＝H或C1-4低級烷基；若n＝2，則R1可在任一相連碳原子上獨立為H或C1-4低級烷基；R2為C1-4低級烷基，C3-8環烷基，C1-4低級烷氧基，C3-8環烷氧基，硝基，鹵素，全氟化C1-4低級烷基，羥基，C1-4低級酰氧基，氨基，一或二-C1-4低級烷基氨基，一或-C3-8低級環烷基氨基，羥甲基，C1-4低級酰基，氰基，硫代低級烷基，亞硫酰基C1-4低級烷基，磺酰基C1-4低級烷基，C3-8硫代環烷基，C3-8亞硫酰基環烷基，C3-8磺酰基環烷基，磺酰氨基，一或二-C1-4低級烷基磺酰氨基，一或二-C3-8環烷基磺酰氨基，巰基，羧基，甲酰氨基，一或二-C1-4低級烷基羧酰氨基，一或二-C3-8環烷基羧酰氨基，C1-4低級烷氧羰基，C3-8環烷氧羰基，C2-4低級鏈烯基，C4-8環烯基，C2-4低級炔基，或者相鄰碳原子上的兩個R2結合在一起，共同形成5-7元碳環或單不飽和的1，3-二氧戊環基、1，4-二氧雜環己基、1，4-二氧雜基、吡喃基、呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、四氫噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、二唑烷基、哌嗪基、嗎啉代或硫代嗎啉代環；m＝0-3，其中Ar為苯基，噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡啶基，嘧啶基，咪唑基，吡嗪基，噁唑基，噻唑基，萘基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，吲哚基，喹啉基，異喹啉基和喹唑啉基；R3、R4、R5和R6各自獨立地不存在，或為H，C1-4低級烷基，C3-8環烷基，C1-4低級烷氧基，C3-8環烷氧基，羥基，C1-4低級酰氧基，氨基，一或二-C1-4低級烷基氨基，一或二-C3-8低級環烷基氨基，C1-4低級烷基或C3-8環烷基，碳酸酯基，即-OC(O)OR，其中R為C1-4低級烷基或C3-8環烷基；或脲基或硫脲基或N-或O-連接的尿烷，它們均可選擇性地被一或二-C1-4低級烷基或C3-8環烷基取代；C1-4低級硫代烷基，C3-8硫代環烷基，巰基，C2-4低級鏈烯基，肼基，N1-C1-4低級烷基肼基，C1-4低級酰氨基，羥氨基，C1-4低級O-烷基羥氨基；或相鄰碳原子上的R3-R6中的任何兩個共同形成5-7元碳環或單不飽和1，3-二氧戊環基、1，4-二氧雜環己基、1，4-二氧雜基、吡喃基、呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、四氫噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、二唑烷基、哌嗪基、嗎啉代或硫代嗎啉代環；在R3-R6中任何取代基上的任何低級烷基取代基可選擇性地被一個或多個下列基團取代羥基氨基，單低級烷基氨基，二低級烷基氨基，N-吡咯烷基，N-哌啶基，N-吡啶鎓，N-嗎啉代，N-硫代嗎啉代或N-哌嗪基；如果A至E中的一個或多個為N，則與N原子相鄰的碳原子上的R3-R6中的任何一個不為OH或SH；且如果取代基R1、R2、R3、R4、R5或R6中的任何一個含有手性中心，或R1在相連原子上產生手性中心時，則其所有單獨存在的和作為外消旋和/或非對映異構體混合物形式存在的立體異構體均包括在內；R8為C1-4低級烷基，氨基，單或二-低級烷基(C1-C4)氨基。
10.作為酪氨酸激酶族表皮生長因子受體抑制劑的適于給藥的藥物組合物，它包含治療有效量的根據權利要求9的式I或式II化合物或其藥用鹽或其水合物及與其混合的藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體。
11.權利要求9中所述式II化合物用于制備抑制表皮生長因子受體酪氨酸激酶的藥物的用途。
12.一種避孕組合物，包含避孕有效量的根據權利要求9的式I或式II化合物及與其混合的避孕可接受的賦形劑、稀釋劑或載體。
全文摘要
式(I)所示的表皮生長因子抑制劑，其中在A－E中任何兩個相鄰的位置結合在一起，為一單個雜原子N、O或S，兩個剩余原子中的一個必須為碳原子，另一個可為碳原子或氮原子；x＝O，S，NH或NR
文檔編號C07D487/02GK1493291SQ0312203
公開日2004年5月5日 申請日期1995年1月23日 優先權日1994年1月25日
發明者A·J·布里吉斯, W·A·迪尼, D·佛里, A·克拉克, R·梅爾, G·W·里卡斯特勒, A·M·索姆普森, A J 布里吉斯, 索姆普森, 迪尼, 里卡斯特勒 申請人:沃尼爾·朗伯公司, 沃尼爾 朗伯公司