專利名稱：塔佐泰勒三水合物的制作方法
本申請是申請日為1994年3月18日、申請號為94191548.4、發明名稱為“紫杉化合物的純化方法”這一專利申請的分案申請。
本發明涉及用離心分配色譜法純化紫杉化合物(taxoides)的方法。
更具體地，本發明涉及一種塔佐泰勒(Taxotere)和10-脫乙酰漿果赤霉素III的純化方法。
在例如EP0253738或EP0336841中或在PCT國際申請WO92/09589所描述的條件下，由紫杉葉提取的10-脫乙酰漿果赤霉素III可用于制備塔佐泰勒。
由紫杉葉提取得到的10-脫乙酰漿果赤霉素III，因其來源種類導致所含雜質主要是紫杉化合物類產物，例如，2α-苯甲酸基-4-乙酸基-5β，20-橋氧基-1β，7β，10β，13α，19-五羥基-9-氧代-11-紫杉烯(taxene)，2α-苯甲酸基-4-乙酸基-5β，20-橋氧基-1β、7α、10β、 13α-四羥基-11-紫杉烯或紫杉堿。
由10-脫乙酰漿果赤霉素III半合成法得到的塔佐泰勒含有的主要雜質是10-脫乙酰漿果赤霉素III中的雜質的酯化產物，以及來自例如其側鏈2′位碳的差向異構作用的其他雜質。
10-脫乙酰漿果赤霉素III和塔佐泰勒本身一般都可采用液相色譜柱法，尤其是高效液相色譜(HPLC)二氧化硅柱法純化。然而，如果這些方法特別適合純化幾十克，則它們往工業上延伸會遇到諸如消耗溶劑的量、被有毒殘留物污染的載體(二氧化硅)的操作與銷毀之類的限制，這些限制變得極為重要。
在構成毒性往往很高、很不穩定的產品的紫杉化合物的情況下，特別重要的是提出這樣一些純化方法，它們具有很高的生產率，不需要價格昂貴、使用和銷毀成本高的固體載體，只需要使用少量的溶劑，并且連續生產很容易自動化。
現在已發現，并且正是構成本發明的目的，紫杉化合物的純化，特別是塔佐泰勒和10-脫乙酰漿果赤霉素III的純化，可采用離心分配色譜法(CPC)或高速逆流色譜法實施，其原理例如由A.Foucault和P.Rosset，Analusis，16(3)，157-167(1988)作過描述。
離心分配色譜法是通過以邏輯和自動方式相繼建立平衡，使待分離的混合物組分在兩種不相混溶的液相之間進行分配。
該方法的特點在于高效分配機制、固定相很強的保留性能、移動相的高速度，這些特點導致在幾小時內實現充分分離。
離心分配色譜法需要使用能夠提供兩種部分混溶相的兩種或多種溶劑。盡管具有這種特性的溶劑數量無限，但在工業上尤其重要的是使用不含氯、無毒的工業溶劑。在工業上可使用的危險性最小的溶劑中，可以列舉諸如甲醇之類的醇、甲基異丁基酮之類的酮和正庚烷或異辛烷之類的脂族烴、甲基叔丁基醚之類的醚、乙酸乙酯之類的酯。
為了實現有效純化，必需選擇一種溶劑混合物，該混合物快速完全分離得到兩相，它們的分配系數為0.1-10，優選為0.5-5，更優選為1附近。
分配系數(K)例如是10的產品，在上面相的溶解性比在下面相高10倍。因此，若上面的相是移動相，則很快被洗脫，若下面的相是移動相，則很長時間之后被洗脫，且分辨率低。相反地，當K在1附近時，其溶解度在兩相中實際上是相同的，兩種洗脫方式都能使用，或許能將這兩種洗脫方式結合起來使用，以達到最大的分辨率。
在10-脫乙酰漿果赤霉素III的特殊情況下，脂族烴、酯、醇和水的混合物是特別適合的，如庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(以體積計為1-2-1-2)混合物，特別是脂族酮和水的混合物，如甲基異丁基酮-丙酮-水(以體積計為2-3-2)混合物。
此外，流動相的流量固定時，固定相保留(被待平衡固定相占據的該設備總體積的分數)應盡可能高，至少等于50％是必要的。
另外，為了提高生產率，能在受到轉子所施加的最大壓力制約的高流量下工作是特別有利的。
在塔佐泰勒的特定情況下，使用脂族烴、酯、醇和水的混合物是有利的，例如正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(以體積計為2-4-3-2)體系，它的保留為80％，分配系數為約0.5，這樣得到的峰很窄，可快速洗脫，于是生產率很明顯地提高。
離心分配色譜法可采用任何能達到此效果的已生產的設備如由Yoichiro Ito[CRC crit.Rev.Anal.chem，17 65(1986)]或京都Sanki工程有限公司(日本)生產的設備實施。
當采用本發明方法得到塔佐泰勒和10-脫乙酰漿果赤霉素III時，本發明還涉及純化的塔佐泰勒和10-脫乙酰漿果赤霉素III。
下述實施例表明本發明是如何實施的。
實施例1；塔佐泰勒的純化塔佐泰勒[即(2R，3S)3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羥基丙酸(4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β，20-橋氧基-1α，7β，10β-三羥基-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基)酯，是在EP0336841中描述的條件下，在乙酸存在下用鋅處理下述化合物得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羥基-丙酸[4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β，20-橋氧基-1β-羥基-7β，10β-雙-(2，2，2-三氯-乙氧基羰基氧)-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基]酯。
將10克(2R，3S)3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羥基-丙酸[4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β、20-橋氧基-1β-羥基-7β，10β-雙-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氧)-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基]酯溶入到150厘米3甲基叔丁基醚中，然后加10克鋅。在蒸發至干后，得到灰色粉末，將該粉末放入反應器中。
然后攪拌，加入6厘米3乙酸和50厘米3乙腈的混合物，歷時5分鐘。在反應器外面用45℃水浴加熱1小時。在冰浴中冷卻后，在劇烈攪拌下加入850厘米3甲基叔丁基醚，然后用孔隙度為4的燒結玻璃器皿過濾鋅鹽和過量的鋅。
將濾液濃縮至干這樣得到沫狀物(meringue)(12克)，立刻將它放到20厘米3乙酸乙酯、15厘米3甲醇、10厘米3正庚烷和10厘米3水中。
在Sanki LLI-07設備上進行離心分配色譜。使用各自配備有能夠將壓力限制到55巴的節流閥的兩臺活塞泵給離心機供料。一臺泵借助選擇閥輸送兩相中的一相或另一相；另一泵留給注入用。
在低旋轉(200轉/分)和高流量(110厘米3/分)下固定相填滿該設備之后，立即進行注入。
由水相開始注入兩相，并且用水相以流量60厘米3/分洗脫正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(以體積計2-4-3-2)體系。回收1.9升固定相，即保留為71％，然后回收餾分，每個餾分為15厘米3。將第72-110個餾分合并，濃縮到體積140厘米3。過濾分離所生成的沉淀。這樣得到5.2克塔佐泰勒三水合物，以內標歸一化法測定達99.7％，產率為80.5％。
實施例2塔佐泰勒的純化如實施例1那樣操作，但使用82克(2R，3S)3-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基-2-羥基丙酸[4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β，20-橋氧基-1β-羥基-7β，10β-雙-(2，2，2-三氯-乙氧基羰基氧)-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基]酯、82克鋅和150厘米3由49.2厘米3乙酸和328厘米3乙腈組成的混合物，得到115克粗產物，該產物在理論上含有49.69克塔佐泰勒，即53克塔佐泰勒三水合物。
用450厘米3甲基叔丁基醚再提取上述粗產物，然后用總量450厘米3含15克氯化鈉的水洗滌3次。合并的水相2次用200厘米3甲基叔丁基醚提取。將三次醚化提取物合并，濃縮至干。這樣得到72克沫狀物，它再用120厘米3甲醇溶解。
在得到的淺黃色溶液里，依次加入160厘米3乙酸乙酯、80厘米3水和80厘米3正庚烷。
于是得到總體積為460厘米3的二個透明液相，其上層只是總體積的約1/4而不是在無塔佐秦勒的情況下的35％。
離心分配色譜設備是以流量110厘米3/分和旋轉速度為200轉/分用有機相充滿的。設備被充滿后，將旋轉速度提高到800轉/分。加入水相，然后在注入有機相之后，用200厘米3有機相洗滌；再用水相以流量60厘米3/分洗脫。
回收2.5升過量固定相，即保留為67.7％。
在通過200厘米3移動水相后，回收360個餾分，每個餾分為12-13厘米3。第25-110個餾分濃縮至體積200厘米3，得到46.5克塔佐泰勒三水合物沉淀，其純度為99.1％，產率為87.7％。
實施例310-脫乙酰漿果赤霉素III的純化在總體積245厘米3的Sanki HPCPC系列1000色譜儀上進行離心分配色譜分離。
通過將甲基異丁基酮-丙酮-水(按體積計為2-3-2)混合物以有機相流量6厘米3/分和水相流量3厘米3/分同時泵送，以下行方式使轉子以100轉/分旋轉。
然后將旋轉速度增加到1200轉/分，再加入1.5克已結晶粗10-脫乙酰漿果赤霉素III，其含有83.3％10-脫乙酰漿果赤霉素III和3.4％10-脫乙酰-19-羥基漿果赤霉素III。
其后以下行方式用水相、流量為3厘米3/分洗脫，每隔2分鐘回收餾分，每個餾分為6厘米3。
在第39-52個餾分中含有10-脫乙酰-19-羥基漿果赤霉素III。
在第61個餾分，反轉洗脫方向，這時以上行方式使用有機相作為流動相，流量為5厘米3/分，并且每隔2分鐘回收餾分，每個餾分為10厘米3。
第70-84個餾分含有10-脫乙酰漿果赤霉素III，將這些餾分減壓濃縮。于15厘米3乙腈中重結晶之后，得到1.25克白色晶體狀的、乙腈溶劑化的10-脫乙酰漿果赤霉素III(1摩爾/摩爾)采用內標歸一化法由HPLC測定其純度為98％。
產率(修正)是91.2％。
權利要求
1.(2R，3S)3-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-2-羥基丙酸(4-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β，20-橋氧基-1β，7β，10β-三羥基-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基)酯的三水合物或塔佐泰勒的三水合物。
全文摘要
用離心分配色譜法純化紫杉化合物(塔佐泰勒、10－脫乙酰－將果赤霉素III)的方法。
文檔編號C07D305/14GK1504465SQ03120639
公開日2004年6月16日 申請日期1994年3月18日 優先權日1993年3月22日
發明者A·度蘭德, A·格鮑德, R·馬格拉夫, A 度蘭德, 窶 申請人:阿文蒂斯藥物股份有限公司