專利名稱：蛋白酪氨酸磷酸酯酶1b抑制劑對苯醌類化合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及對苯醌類化合物、分離方法及其用途。該類化合物可作為PTP1B抑制劑和胰島素增敏劑，可用于治療各種糖尿病、肥胖癥及其由此引起的并發癥。
背景技術：
糖尿病(diabetes mellitus)是一組由遺傳和環境因素相互作用而引起的臨床綜合癥，因胰島素分泌絕對或相對不足以及靶組織細胞對胰島素敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水、和電解質等一系列代謝紊亂。臨床以高血糖為主要共同標志，久病可引起多個系統損害，病情嚴重和應激時可發生急性代謝紊亂如酮癥酸中毒等。在糖尿病人群中發生冠心病、缺鐵性或出血性腦血管病、失明、肢端壞疽等嚴重并發癥均明顯高于非糖尿病人群。因此，糖尿病及其并發癥已成為嚴重威脅人類健康的世界性公共衛生問題。
目前一般將糖尿病分為兩類，I型糖尿病(胰島素依賴型糖尿病，IDDM)與II型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病，NIDDM)。糖尿病中90％以上是II型糖尿病。WHO預計，由于人口老齡化、肥胖、不健康的飲食以及缺乏運動的生活方式，到2025年，糖尿病患者的數目將由1995年的1.35億上升為3億。
I型糖尿病病人由于第6對染色體短臂上的HLA-D基因決定了遺傳易感性，對環境因素，特別是病毒感染或化學毒性物質刺激的反應異常，直接或間接通過自身免疫反應，引起胰島β細胞破壞，以致胰島素不足。臨床特點是起病急，多食、多尿、多飲、體重減輕等癥狀較明顯，有發生酮癥酸中毒的傾向，必須依賴胰島素治療維持生命。
II型糖尿病也有很強的遺傳性和環境因素，并呈顯著的異質性，發病機制多樣而復雜，各病人間存在較大差異。總的來說可概括為胰島素分泌的相對不足和胰島素抵抗。對II型糖尿病人，尤其是肥胖性糖尿病患者的一系列研究證實，胰島素抵抗是II型糖尿病發生、發展過程中的關鍵因素。在研究脂肪細胞和肌肉細胞內胰島素信號傳導途徑的基礎上，設計開發胰島素增敏劑，以改善胰島素抵抗狀態，是目前II型糖尿病新藥研究的重點，也是其主要方向之一。
II型糖尿病的特征是胰島素敏感組織如骨骼肌、肝、脂肪組織對胰島素作用的抵抗。雖然其具體機制尚不清楚，但胰島素信號在其傳導通路中的減弱甚至阻斷必定是直接因素。胰島素通過與其受體胞外α亞單位結合激活受體胞內β亞單位內在的酪氨酸激酶活性，導致調節結構域中關鍵的酪氨酸殘基自身磷酸化，從而完全激活胰島素受體酪氨酸激酶活性，胰島素受體酪氨酸激酶再通過磷酸化其底物將信號傳遞下去。隨著對細胞內胰島素作用通路中可逆性酪氨酸磷酸化認識的加深，蛋白酪氨酸磷酸酯酶(PTPases)在平衡該通路中相關蛋白酪氨酸磷酸化水平中的作用越來越受到重視。PTPases可能作用于該通路中多個環節，例如將自身磷酸化活化的胰島素受體(IR)去磷酸化，從而降低受體激酶活性；或將諸如胰島素受體底物1(IRS-1)、胰島素受體底物2(IRS-2)、Shc等胰島素受體的底物中蛋白酪氨酸殘基去磷酸化，從而負調控胰島素作用受體后通路。特定PTPases和胰島素通路中酪氨酸激酶間酶活性的不平衡可能是引起II型糖尿病胰島素抵抗的原因。因此，通過尋找選擇性作用于該通路中PTPases的抑制劑抑制其活性，加強和延長胰島素信號，成為越來越受重視的治療II型糖尿病的新途徑。
PTPases包括一大家族跨膜(受體型)和胞內(非受體型)酶，參與調控一系列重要生命過程。雖然多種PTPases在胰島素敏感的組織中有表達，如跨膜的CD45和LAR-PTPase等；胞內的SHPTP-1、SHPTP-2、PTP1B、PTP1C等，但只有幾種PTPases可能在胰島素通路中受體或受體后環節影響正常胰島素作用。目前的研究主要集中在LAR-PTPase、SHPTP-2和PTP1B。
PTP1B是最早被純化和確定生物學特性的PTPase，全長大約50KD。早期研究證明能在體外有效地將胰島素受體去磷酸化；將來源于人胎盤的PTP1B顯微注射入非洲蟾蜍卵母細胞中，將減少胰島素誘導的卵母細胞成熟及S6肽磷酸化水平。隨后發現PTP1B在所有胰島素敏感組織中高表達；用滲透休克的方法給予PTP1B抗體后，小鼠KRC-7肝細胞經胰島素刺激時DNA合成和PI3激酶活性水平顯著升高，IR自身磷酸化水平、IR激酶活性水平和IRS-1酪氨酸磷酸化水平也顯著升高。最近有研究表明，PTP1B直接與激活狀態的IR相互作用；在體外實驗中也對IRS-1顯示最高的選擇性活性；大鼠成纖維細胞中PTP1B的高表達能明顯降低配體誘導的IR磷酸化水平；用腺病毒介導基因轉染的方法，在胰島素靶向組織骨骼肌和肝組織的模型細胞L6肌細胞和Fao細胞中高表達PTP1B，明顯抑制胰島素誘導的IR和IRS-1的酪氨酸磷酸化，并從而顯著抑制IRS-1和PI3激酶P85亞單位復合物的形成以及Akt、MAPK的磷酸化水平，而且胰島素誘導的糖原合成也被抑制[Egawa K.et al.J.Biol.Chem.276(13)，10207-10211.]。用同樣的方法在另一胰島素靶向組織脂肪組織的模型細胞3T3-L1細胞中高表達PTP1B，同樣明顯抑制胰島素誘導的IR、IRS-1和PI3激酶的酪氨酸磷酸化，P42和P44 MAPK磷酸化水平也明顯降低，而Akt磷酸化水平和活性不受影響[Venable C.L.et al.J.Biol.Chem.275(24)，18318-18326.]。PTP1B的高表達對基本的、中等的及最大量胰島素誘導的葡萄糖轉運無影響，對轉運的EC50胰島素濃度無影響。這些研究證明PTP1B能夠負調控胰島素信號轉導通路并主要作用于胰島素受體。更為重要的實驗證據來自PTP1B基因敲除小鼠。Elchebly等報道，運用同源重組的方法產生的PTP1B基因敲除的小鼠生長正常，有生殖力，對胰島素敏感性顯著增強，而且這一增強作用與肝臟和骨骼肌中胰島素受體及胰島素受體底物1磷酸化水平的增強相關[Elchebly M.，et al.Science，283，1544-1548.]。令人驚奇的是，PTP1B基因敲除的小鼠對食物誘導的體重增加和胰島素抵抗也有抵抗作用。Klaman等運用大致相同的方法產生的PTP1B基因敲除的小鼠也得到同樣的結果，而且發現PTP1B基因敲除的小鼠之所以對食物誘導的體重增加有抵抗作用，是由于脂肪細胞體積的減少，而脂肪細胞的數量并不改變。PTP1B基因敲除的小鼠基本代謝水平和總體能量消耗升高[Klaman L.D.，et al.Molecular and Cellular Biology，20(15)，5479-5489]。這些實驗更加有力地證明了PTP1B在胰島素敏感性、能量消耗和脂肪儲存方面的重要作用，從而更加明確了它是治療二型糖尿病和肥胖癥的一個潛在藥物作用靶點。
PTP1B選擇性抑制劑的研究取得了一定的進展，但大多局限于一些肽類或類肽化合物，例如基于PTP1B去磷酸化的底物序列設計的抑制劑EEDE(F2PMP)M(Ki＝7.2nM)、Glu-F2PMP-F2PMP(IC50＝40nM)，雖然這些肽類抑制劑具有較強的抑制活性及較高的選擇性，但它們是肽類磷酸化合物的事實使其很難成為藥物候選化合物。最近，一系列非肽類非磷酸化合物類PTP1B抑制劑被報道，它們具有一定的選擇性，更重要的是，其中一些化合物對降低ob/ob小鼠血漿中葡萄糖和胰島素水平有顯著作用。這是第一例藥理學的直接證據，證明PTP1B抑制劑具有抗糖尿病活性。[Malamas，M.S.，et al.J.Med.Chem.，2000，43，1293-1310]這些無疑為我們尋找新的小分子非肽類有機化合物作為高效、高選擇性PTP1B抑制劑提供了機遇。
發明內容
本發明目的是提供一類從天然植物紫金牛和小連翹提取分離純化中獲得的對-苯醌類化合物作為蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTP1B抑制劑和胰島素增敏劑，可用于制備治療各種糖尿病、肥胖癥及其并發癥藥物中應用。
本發明的另一目的是提供該類化合物的制備方法。
一類結構如下的對-苯醌化合物及其它的平衡異構體、鹽、水合物、前藥。
其中R1為H、鏈烴或環鏈烴；R2為H、鏈烴或環鏈烴或羥基或烷氧基或酯基；
R3為H、鏈烴或環鏈烴或芳香取代基或取代吲哚基；R4為H、鏈烴或環鏈烴或羥基或烷氧基或酯基。
本發明通過下列步驟實施本發明通過對天然植物紫金牛進行分離提取，采用乙醇提取、濃縮，氯仿提取，氯彷提取物以90％甲醇和石油醚分配，得石油醚提取物，上聚酰胺柱，用不同比例乙醇洗脫，分別取不同濃度乙醇洗脫液，80％乙醇洗脫液流份經硅膠shephadex LH-20和TSK HW-40F柱層柱色譜分離得化合物A1、A3、A4；70％洗脫流份經硅膠shephadex LH-20柱分離得化合物A2。其中A3、A4為新化合物。
從天然植物小連翹草經石油醚提取，提取液濃縮，再用丙酮溶解、攪拌、過濾，濾液濃縮，再經硅谷膠和MIC柱層析分離純化分得化合物A5、A6、A7，將其進行PTPIB抑制活性測試，證明化合物濃度為10ug/ml時對酶活性的百分抑制率、抑制活性高于50％時，按常規篩選得出IC50，陽性對照組為正釩酸鈉的IC50為1μM，證明分離出的化合物具有明顯的PTPIB抑制活性。經化學分析證明它們的結構如下 A1R1＝CH3，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3，R3＝H，R4＝OHA2R1＝H，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3，R3＝H，R4＝OHA3R1＝CH2CH3，R2＝(CH2)7CH＝CH(CH2)3CH3，R3＝H，R4＝OHA4R1＝CH2CH3，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3，R3＝H，R4＝OHA5R1＝H，R2＝OH，R3＝CH2CH＝C(CH3)2，R4＝CH2CH＝CCH3CH2CH2CH＝C(CH3)2A6R1＝COCH(CH3)CH2CH3，R2＝OH，R3＝CH2CH＝C(CH3)2，R4＝CH2CH＝CCH3CH2CH2CH＝C(CH3)2A7R1＝COCH(CH3)CH2CH，R2＝COCH(CH3)2，R3＝CH2CH＝C(CH3)2，R4＝CH2CH＝CCH3CH2CH2CH＝C(CH3)2PTP1B抑制活性測試測試原理利用分子生物學手段在大腸桿菌系統表達人源蛋白質酪氨酸磷酸酯酶1B(hPTP1B)催化結構域，經純化后的hPTP1B重組蛋白能水解底物pNPP的磷脂鍵，得到的產物在410nm處有很強的光吸收，因此可以通過直接檢測410nm處光吸收的變化以觀察酶的活性變化以及化合物對酶活性的抑制情況。標準的測活體系如下10mM Tris.Cl，PH7.6，10mM PNPP，2％DMSO，100nM hPTP1B。
觀察指標動態測定波長為410nm處的光吸收，時間為3分鐘，其動力學曲線一級反應的斜率作為酶的活性指標。
實驗結果的評判與解釋篩選結果是當化合物的濃度為10ug/ml時對酶活性的百分抑制率，抑制活性高于50％時，按常規篩選得出IC50，陽性對照正釩酸鈉的IC50為1uM。
化合物 IC50(uM) 化合物 IC50(uM)A14.56A54.42A219.15 A612.7A33.01A716.0A415.5具體實施方式
下面結合具體實施實例對本發明作進一步闡述，但不限制本發明。
1H-NMR用Varian MercuryAMX300型儀測定；MS用VG ZAB-HS或VG-7070型儀測定，除注明外均為EI源(70ev)；所使用的硅膠，包括200-300目和GF254為青島海洋化工廠或煙臺緣博硅膠公司生產；所使用的聚酰胺(80-100目)為浙江省臺州市路橋四青生化材料廠生產；所使用的TSK HW-40F為日本TOSOH公司生產；所使用的Shephadex LH-20為E.Merck公司生產；所使用的MCI GEL CHP 20P(75-150um)為日本Mitsubishi Chemical Corporation生產。
實例1取紫金牛全草2kg，粉碎后用95％乙醇冷浸提取3次，提取液合并，減壓濃縮至無醇味，加水混懸，用CHCl3萃取。CHCl3部位再以90％甲醇和石油醚分配，得到的石油醚部位上聚酰胺柱以70％、80％、90％和95％乙醇洗脫。80％乙醇洗脫流份再經硅膠、Shephadex LH-20和TSK HW-40F柱層析色譜分離，純化得到化合物A1，A3，A4，70％洗脫部位經硅膠、Shephadex LH-20柱色譜分離，純化得到化合物A2。
A1R1＝OCH3，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3A2R1＝OH，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3A3R1＝OCH2CH3，R2＝(CH2)7CH＝CH(CH2)3CH3A4R1＝OCH2CH3，R2＝(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3其中A3，A4為新化合物，它們的解析及光譜數據如下化合物A3黃色油狀物，紅外光譜顯示締合羥基的伸縮振動峰(3349cm-1)，酮羰基的伸縮振動峰(1708cm-1)，雙鍵的伸縮振動峰(1604cm-1)；1HNMR譜數據表明分子中有一個雙取代烯鍵[δ5.32(2H，m)]，一個乙氧基[δ4.03(2H，q，J＝7.2Hz)，δ1.41(3H，t，J＝7.2Hz)]和一個長的脂肪鏈[δ2.41(2H，t，J＝7.5Hz)，δ1.99(4H，m)，δ1.20(18H，m，CH2)和δ0.86(3H，t，CH3)]。
13CNMR和DEPT譜也表明化合物A3分子中有一個醌環[δ182.0(s)，δ160.6(s)，δ119.4(s)，δ183.2(s)，δ151.7(s)，δ102.6(d)]，一個雙取代烯鍵[δ130.1(d)，δ130.0(d)]，一個乙氧基[δ65.9(t)，δ14.1(q)]和一個長的脂肪邊鏈[δ32.0～δ22.5(t)，δ13.9(q)]；EIMS(m/z)348[M]+，結合NMR數據給出分子式C21H32O4；以上的數據提示化合物A3為一個對苯醌類化合物，具有3個取代基即一個OH、一個OEt和一個13碳邊鏈，邊鏈上有一個雙取代烯鍵，EI-MS中m/z182的碎片離子峰為基峰，也證實了這一點。
在A3的NOESY譜中可觀察到OEt的信號[δ4.03]與醌環上的單氫信號[δ5.78]相關，從而確定OH與13碳邊鏈取代在醌環的同側，由此可以推斷出A和B2種可能的取代模式。
根據文獻(Wehrli F W，Writhlin T.In international of carbon-13 NMR spectra。Heyden，London，1978)，在取代模式A中，兩個羰基之間的化學位移差值將大于10ppm，而在取代模式B中，兩個羰基之間的化學位移差值比較小，約為2ppm。在化合物A3中，兩個羰基之間的化學位移差值為1.2ppm，故確定化合物A3的取代模式如B所示，即OH取代在C-5，13碳邊鏈取代在C-6，OEt取代在C-2。
A3的紅外光譜中沒有960cm-1的吸收峰，從而確定邊鏈上的雙鍵為順式；查閱大量的文獻后發現，在這一類簡單的取代苯醌類化合物中，當邊鏈為13碳時，雙鍵大部分都是取代在8′位和9′位，A3的15碳邊鏈的13CNMR譜數據與化合物ardisianone B(Fukuyama Y，Kiriyama Y，Okino J，et al..ChemPharm Bull，1993，41(3)561)的13CNMR譜數據基本一致，故確定化合物A3的雙鍵位于邊鏈的8′位和9′位。因此化合物A3被確定為5-hydroxy-2-ethoxy-6-[(Z)-8′-tridecenyl]-1，4-benzoquinone，為一個新化合物，命名為ardisianone C。
ardisianone Bn＝7maesaninn＝9化合物A4黃色油狀物，紅外光譜顯示締合羥基的伸縮振動峰(3351cm-1)，酮羰基的伸縮振動峰(1733cm-1)，雙鍵的伸縮振動峰(1602cm-1)；由于其1HNMR譜、13CNMR譜和NOESY譜數據與A3極其相似，故最初我們懷疑A3與A4為同一個化合物，因此對這兩個化合物進行GC-MS分析，發現在同樣的檢測條件下，化合物A3與A4的保留時間及兩峰所相對應的質量數不同(A3，tR＝9.058min，348[M]+；A4，tR＝10.217min，376[M]+)，從而確定A3與A4為兩個具有相似結構的化合物。
A4的GC-MS譜中，m/z372的分子離子峰，說明A4具有一個15碳邊鏈，m/z182的碎片離子峰說明A4的取代模式與J1相同，IR譜證實邊鏈上的雙鍵為順式，以上的數據表明A4也為一個對苯醌化合物，具有3個取代基即一個OH、一個OEt和一個15碳邊鏈，邊鏈上有一個順式雙取代烯鍵；查閱大量的文獻后，發現這一類鏈烯基取代的苯醌類化合物中，當邊鏈為15碳時，雙鍵大部分都是位于在10′位和11′位；A4的15碳邊鏈的13CNMR譜數據與模型化合物maesanin(Isato K et al.Tetrahedron Lett.，1983，243825)的13CNMR譜數據基本一致，故確定化合物A4的雙鍵位于邊鏈的10′位和11′位。因此化合物A4被確定為5-hydroxy-2-ethoxy-6-[(Z)-10′-pentadecenyl]-1，4-benzoquinone，為一個新化合物，命名為ardisianone D。
化合物A3黃色油狀物，C21H32O4；UV(MeOH)λmax(logε)296(4.17)nm；EI-MS(m/z)348[M]+，182；IR(KBr)ν3349(OH)，1708(C＝O)，1604(C＝C)，1504，1392，1213；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ5.78(1H，s，H-3)，δ5.32(2H，m，-CH＝CH-)，δ4.03(2H，q，J＝7.2Hz，-OCH2CH3)，δ1.43(3H，t，J＝7.2Hz，-OCH2CH3)，δ2.41(2H，t，J＝7.5Hz，Ar-CH2-)，δ1.50(4H，m，C＝C-CH2-)，δ1.20(18H，m，CH2)，δ0.82(3H，t，CH3)；13CNMR(75.0MHz，CDCl3)C-1→C-6δ182.0(s)，δ102.6(d)，δ151.7(s)，δ183.2(s)，δ119.4(s)，δ160.6(s)，δ129.9(d，C-8′)，δ130.0(d，C-9′)，δ56.8(t，-OCH2CH3)，δ14.3(q，-OCH2CH3)，δ32.0～δ13.9(C-1′～C-7′，C-10′～C-13′)。
化合物A4黃色油狀物，C23H36O4；UV(MeOH)λmax(logε)223(4.06)，227(3.61)nm；EIMS(m/z)376[M]+，182；IR(KBr)ν3351(OH)，1733(C＝O)，1645，1602(C＝C)，1369，1211；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ5.78(1H，s，H-6)，δ5.30(2H，m，-CH＝CH-)，δ4.03(2H，q，J＝7.2Hz，-OCH2CH3)，δ1.48(3H，t，J＝7.2Hz，-OCH2CH3)，δ2.64(2H，t，J＝7.5Hz，Ar-CH2-)，δ1.99(4H，m，C＝C-CH2-)，δ1.20(18H，m，CH2)，δ0.85(3H，t，CH3)；13CNMR(75.0MHz，CDCl3)C-1→C-6δ182.0(s)，δ102.6(d)，δ151.7(s)，δ183.2(s)，δ119.4(s)，δ160.6(s)，δ129.9(d，C-10′)，δ130.0(d，C-11′)，δ56.8(t，-OCH2CH3)，δ14.3(q，-OCH2CH3)，δ32.0～δ14.0(C-1′～C-9′，C-10′～C-15′)。
實例2取小連翹全草4kg，粉碎后用8.0升石油醚冷浸提取3次，提取液合并，減壓濃縮至無石油醚味，再溶于200毫升丙酮，攪拌、過濾。濾液濃縮后得32克棕色浸膏。再經硅膠和MCI柱層析色譜分離，純化得到化合物A5，A6，A7。
A5R1＝R2＝OHA6R1＝2-methyl-butyryl，R2＝HA7R1＝2-methyl-butyryl，R2＝isobutyryl
化合物A5，紅色油狀物。高分辨HREIMS為344.1968，對應分子式為C21H28O4。UV(273，214nm)和IR(1699，1654，1625，1560cm-1)最大吸收表明該化合物含α，β-不飽和羰基。IR譜在3340cm-1和3324cm-1處給出兩個羥基吸收峰。1H NMR、13C NMR(數據見表1)數據顯示該化合物有一個異戊二烯基側鏈(H2-17～H3-21)，一個3，7-二甲基-2，6-辛二烯基側鏈(H2-7～H3-16)。13C-NMR中給出的δ180.2(C-1)、δ147.9×2(C-2和C-6，兩個氧代烯碳)、δ121.7×2(C-3，C-5)及δ186.7(C-4)這些信息，說明該化合物是由兩個對稱烯鍵和兩個不同羰基組成的六碳對稱共軛體系，為1，4-二羰基-2，5-環己二烯體系。該化合物的結構近似對稱性及NMR數據要求C-2和C-6被羥基化。那么，3，7-二甲基-2，6-辛二烯基側鏈和異戊二烯基側鏈分別位于C-3和C-5。綜上所述，化合物A5的結構被確定為2，6-二羥基-3-(3，7-二甲基-2，6-辛二烯基)-5-異戊二烯基-1，4-二羰基-2，5-環己二烯。
化合物A6為紅色油狀物。HREIMS給出分子離子峰為428.2560，對應分子式C26H36O5(計算值428.2563)，不飽和度為9。該化合物的紫外光譜在273nm和214nm處有很強的吸收，與化合物A5的UV數據都相同，所以應該也存在1，4-二羰基-2，5-環己二烯骨架。在IR光譜中則給出1770、1668和1643cm-1三個很尖銳的強吸收峰，表明該化合物中有一個孤立羰基和兩個共軛羰基。另外IR在3392cm-1處還給出游離羥基的吸收峰。其1H NMR給出了香葉基各質子信號(C10H17，H2-7 to H3-16)和異戊二烯基側鏈各質子峰(C5H9，H2-17 to H3-21)以及甲基丁酰氧基側鏈(C-2’to C-5’)以及羥基信號(δ6.77，s)。對該化合物我們進行了2D NMR分析。HMBC譜顯示異戊二烯基側鏈亞甲基質子(H2-17)和香葉基側鏈亞甲基質子(H2-7)與位于δ149.8，δ120.8，δ185.8，δ137.7，δ145.8處的五個碳有很好的遠程相關，表明香葉基側鏈和異戊二烯基側鏈分別連在C-3和C-5位，而羥基和甲基丁酰氧基側鏈則應該連于C-2/C-6位。NOE顯示甲基丁酰氧基與香葉基在同側，由此可以確定化合物A6為6-異戊酰氧基-2-羥基-3-(3，7-二甲基-2，6-辛二烯基)-5-異戊二烯基-1，4-二羰基-2，5-環己二烯。
化合物A7為黃色油狀物，高分辨確定分子式為C30H42O6。其UV吸收峰和化合物A5，A6相同，所以該化合物也應該和前面幾個化合物有著相同的骨架，即1，4-二羰基-2，5-環己二烯。其IR還顯示該化合物中有兩個孤立羰基峰(1772cm-1，1737cm-1)和兩個共軛羰基(1684cm-1，1664cm-1)。化合物A7的1H NMR和13C NMR與化合物A6都很相似，顯示該化合物也有香葉基側鏈(C10H17，H2-7 to H3-16)、異戊二烯基側鏈(C5H9，H2-17 to H3-21)的結構片斷，同時NMR也給出了異丁酰氧基團和異戊酰氧基信號，NOE顯示甲基丁酰氧基與香葉基在同側。由此可以確定化合物A7為2-異丁酰氧基-6-異戊酰氧基-3-異戊二烯基-5-香葉基-1，4-二羰基-2，5-環己二烯(A7)
表1.化合物A5，A6，A7的NMR(CDCl3)數據.
位置 A5 A6 A7δH(ppm，Hz) δCδH(ppm，Hz) δCδH(ppm，Hz) δC1 180.2177.5174.12 147.9149.8147.83 121.7120.8136.14 186.7185.8185.55 121.7137.7136.16 147.9145.8147.87 3.13，m22.3 3.16，m22.4 3.04，m 23.48 5.02，m119.6 4.99，m119.44.95，m 118.39 137.3137.4138.410 1.94，m39.6 1.97，m39.8 1.85，m 39.711 2.01，m26.5 2.04，m26.6 1.89，m 26.612 5.08，m124.1 5.05，m124.34.98，m 124.013131.3131.5131.714 1.79，s25.6 1.66，s25.7 1.60，s 25.815 1.59，s17.6 1.58，s17.7 1.51，s 17.716 1.51，s16.1 1.70，s16.2 1.60，s 16.417 3.13，m22.3 3.13，m23.5 3.04，m 23.418 5.08，m119.4 5.12，s118.64.95，m 118.519133.8134.71.60，s 134.720 1.66，s25.6 1.66，s25.7 1.51，s 25.721 1.63，s17.7 1.73，s18.0 18.01 173.72.77，m 173.92 2.66，m41.0 1.24，d，6.334.03 1.82，m26.7 1.24，d，6.318.94 1.04，t，6.5 11.6 18.95 1.31，d，7.0 16.6 2.58，m 173.56 1.80，m；1.55，m41.07 0.95，t，7.426.58 1.22，d，6.211.69 16.6OH 6.77，s化合物A5紅色油狀，UV(甲醇)λmax(logε)214(3.91)，273(4.04)nm；IR(film)νmax3340，3324，1699，1654，1625，1560cm-1；1H NMR and13C NMR數據見表1；EIMS m/z(rel.Int)344[M]+(27)，301(24)，261(67)，204(100)，HREIMS m/z 344.1968(calcd.for C21H28O4，344.1988)。
化合物A6紅色油狀(25mg)，UV(甲醇)λmax(logε)214(4.02)，273(4.01)nm；IR(film)νmax3392，，1770，1668，1643cm-1；1H NMR and13C NMR數據見表1；EIMS m/z(rel.Int)428[M]+(9)，344(87)，329(43)，275(48)，261(100)，HREIMS m/z 428.2560(calcd.for C26H36O5，428.2563)。
化合物A7紅色油狀(18mg)，UV(甲醇)λmax(logε)214(3.08)，273(4.01)nm；IR(film)νmax1772，1737，1684，1664，cm-1；1H NMR and13C NMR數據見表1；EIMS m/z(rel.Int)498[M]+(15)，415(62)，344(96)，331(100)，261(94)；HREIMS m/z 498.2978(calcd.for C30H42O6，498.2981)。
權利要求
1.一類結構如下的對-苯醌化合物及其它的平衡異構體、鹽、水合物、前藥 其中R1為H、鏈烴或環鏈烴；R2為H、鏈烴或環鏈烴或羥基或烷氧基或酯基；R3為H、鏈烴或環鏈烴或芳香取代基或取代吲哚基；R4為H、鏈烴或環鏈烴或羥基或烷氧基或酯基。
2.如權利要求1所述的對苯醌類化合物其特征在于當R3為-H、R4為-OH時，R1為-CH2CH3，R2為-(CH2)7CH＝CH(CH2)3CH3
3.如權利要求1所述的對苯醌類化合物其特征在于當R3為-H、R4為-OH時R1為-CH2CH3，R2為-(CH2)9CH＝CH(CH2)3CH3
4.如權利要求1所述的對苯醌類化合物其特征在于當R3為-CH2-CH＝C(CH3)2、R4為-CH2-CH＝C(CH3)-CH2CH＝C(CH3)2時R1為-H，R2為-OH。
5.如權利要求1所述的對苯醌類化合物其特征在于當R3為-CH2-CH＝C(CH3)2、R48為-CH2-CH＝C(CH3)-CH2CH＝C(CH3)2時R1為-CO-CH(CH3)-CH2CH3，R2為-OH。
6.如權利要求1所述的對苯醌類化合物其特征在于當R3為-CH2-CH＝C(CH3)2、R4為-CH2-CH＝C(CH3)-CH2CH＝C(CH3)2時R1為-CO-CH(CH3)-CH2CH3，R2為-OCOCH(CH3)2。
7.如權利要求1所述的對苯醌類化合物的制備方法，其特征在于通過植物紫金牛全草經粉碎后，用乙醇和石油醚提取，提取液濃縮，加水混懸，用氯仿提取。氯仿提取物以90％甲醇和石油醚分配，得到的石油醚提取物，該提取物上聚酰胺柱，用不同比例的乙醇洗脫。取80％乙醇洗脫液的流份減壓濃縮，再將濃縮液經硅膠、Shephadex LH-20和TSK HW-40柱層析色譜分離，分別得到化合物A1，A3，A4，70％洗脫流份經硅膠Shephadex LH-20柱色譜分離，分得到化合物A2。
8.如權利要求1所述的對苯醌類化合物的制備方法，其特征在于通過植物小連翹全草，經粉碎后，用石油醚提取、濃縮，濃縮物溶于丙酮，攪拌、過濾。濾液濃縮。再經硅膠和MCI柱層析色譜分離，得化合物A5，A6，A7。
9.如權利要求1所述的對苯醌類化合物具有抑制PTPIB活性在制備治療糖尿病或肥胖癥藥物中應用。
10.如權利要求1所述的對苯醌類化合物作為胰島素增敏劑。
全文摘要
本發明涉及從植物紫金牛和小連翹中進行提取、分離獲得結構如下的一類對－苯醌化合物。其中R
文檔編號C07C50/00GK1521157SQ0311541
公開日2004年8月18日 申請日期2003年2月14日 優先權日2003年2月14日
發明者胡立宏, 李佳, 葉其壯, 李延芳, 安天英, 胡梁言 申請人:中國科學院上海藥物研究所