專利名稱：制備新的刺糖多孢菌素衍生物的方法
技術領域：
本發明涉及制備在C-21位被1-羥基-乙基基團取代的新的刺糖多孢菌素(spinosyn)衍生物的方法，涉及該類型新的刺糖多孢菌素衍生物本身，及其用于制備新的刺糖多孢菌素類化合物的應用。
刺糖多孢菌素類化合物是已知化合物。刺糖多孢菌素類化合物是由放線菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)的培養物產生的發酵產物。天然刺糖多孢菌素類化合物由具有12-元大環內酯環和5，6，5-順式-反式-反式-三環的四環聚酮骨架(苷元)與D-forosamine和2，3，4-三-O-甲基-L-鼠李糖部分組成(Kirst等人，1991，Tetrahedron Letters，324839)。有20種以上不同的天然刺糖多孢菌素，現有技術已經描述了“A83543絡合物”(參見WO 97/00265、WO 94/20518和WO93/09126)。例如，EP-A 375316描述了刺糖多孢菌素A、B、C、D、E、F、G、H和J。WO 93/09126公開了刺糖多孢菌素L、M、N、Q、R、S和T。WO 94/20518描述了刺糖多孢菌素K、O、P、U、V、W和Y及其衍生物。這些化合物的不同之處在于在四環骨架、D-forosamine糖部分或2，3，4-三-O-甲基-L-鼠李糖糖部分上的一個或多個甲基的取代。類似地，從刺糖多孢菌肉湯培養基中也分離出了與D-forosamine糖部分反應的17-假苷元。
由刺糖多孢菌產生的A83543絡合物的主要成分是刺糖多孢菌素A和刺糖多孢菌素D，它們是產物Spinosad的基本成分(參見PesticideManual，British Crop Protection Council，11thEd.，1997，p.1272和Dow Elanco Trade Magazine Down to Earth，Vol.52，NO.1，1997以及其中所引用的文獻)。
如果C-17位的氨基糖部分不存在，則化合物稱為刺糖多孢菌素A、D等17-假苷元；如果C-9位的中性糖不存在，則化合物稱為刺糖多孢菌素A、D等9-假苷元。在C-9和C-17位沒有這兩個糖殘基的刺糖多孢菌素稱為刺糖多孢菌素苷元。
刺糖多孢菌素適于防治蜘蛛綱動物、線蟲綱動物、外寄生物(參見WO 01/11962、WO 01/11963、WO 01/11964)和昆蟲，特別是鱗翅目和雙翅目昆蟲。此外，刺糖多孢菌素的技術應用還有環境健康，這類物質也具有有吸引力的毒理學性質。
然而，預計目前用刺糖多孢菌素防治的動物害蟲，特別是外寄生物，或植物害蟲有可能發展出對這些市售活性物質的耐藥性。因此，生產可替代目前用于防治害蟲的刺糖多孢菌素的新的生物活性刺糖多孢菌素衍生物非常重要。
最近，已經使用多孢菌(LW107129)來產生在大環骨架的C-8位有羥基，并且已知是殺蟲化合物的刺糖多孢菌素的特定天然苷元衍生物(參見WO 01/19840)。雖然已經對刺糖多孢菌素進行了很多修飾(參見WO 97/00265)，但是在大環骨架的C-21位的甲基和乙基上進行衍生化沒有引起多少的注意力。盡管在C-21位的烷基官能化是有利的，特別是對于衍生化反應是有利的，但是已知其取代基在C-21位具有羥基的刺糖多孢菌素衍生物很少。例如，只是在最近才有人描述了在C-21位被3-羥基-1-丁烯基取代的刺糖多孢菌素衍生物，如果適當的話，這些衍生物還在上述C-8位攜帶羥基，并具有殺蟲作用(參見WO01/19840)。
雖然已有人描述了用于制備刺糖多孢菌素衍生物的化學合成方法(參見Martynow，J.G.和Kirst，H.A.，1994，J.Org.Chem.，591548)，但是迄今為止沒有任何關于上述在C-21位具有1-羥基-乙基的刺糖多孢菌素衍生物的化學合成的知識。
本發明的目的是提供可用于選擇性和/或立體有擇性地制備在C-21位具有1-羥基-乙基的新刺糖多孢菌素衍生物的適當方法。
通過提供制備通式(I)化合物的方法，本發明的目的得以實現， 其中
A-B是任一下列基團-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，D是基團 或 R1是氫或氨基糖，且R2是氫或糖，所述方法包括將通式(II)化合物 其中A-B、D和R1如上所定義，與微生物在含水營養培養基中于需氧條件下接觸，或者與由微生物制得的酶提取物或與一種或多種從微生物中分離的酶接觸。
通過使用微生物或其酶的生物轉化，所述原料化合物被選擇性和/或立體有擇性地轉化成在C-21位被1-羥基-乙基取代的刺糖多孢菌素衍生物。
本文所用術語“刺糖多孢菌素衍生物”還包括刺糖多孢菌素苷元化合物，即具有刺糖多孢菌素的大環內酯骨架，但是沒有糖基團的化合物。
優選使用定義如下的通式(II)化合物作為原料化合物，其中，在情形(1)中，A-B是任一下列基團-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，且
D是基團 R1是式1a所示氨基糖 且R2是式2a所示糖 或者其中，在情形(2)中，A-B是基團-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2b、2c、2d、2e或2f所示糖
或者其中，在情形(3)中，A-B是是任一下列基團-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，R1是氫或式1b所示氨基糖， 且R2是氫或上述式2a所示糖，或者其中，在情形(4)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2g、2h、2i、2j或2k所示糖， 或者其中，在情形(5)中，A-B是基團-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，
R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2l或2m所示糖， 或者其中，在情形(6)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D如上所定義，R1是氫或上述式1b所示氨基糖或式1c所示氨基糖， 且R2是上述式2b、2c、2g或2h所示糖或式2n所示糖， 或者其中，在情形(7)中，
A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2o所示糖， 或者其中，在情形(8)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是上述式1b所示氨基糖，且R2是上述式2d、2i或2j所示糖或式2p所示糖， 或者其中，在情形(9)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是氫或上述式1c所示氨基糖，且R2是上述式2i或2p所示糖，或者其中，在情形(10)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1d、1e或1f所示氨基糖，
且R2是上述2a所示糖，或者其中，在情形(11)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D是基團 R1是氫或上述式1a所示氨基糖。
特別優選使用定義如下的通式(II)化合物作為原料化合物，其中，在情形(12)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團
R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a、2g或2h所示糖，或者其中，在情形(13)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2d、2e、2l、2m或2o所示糖，或者其中，在情形(14)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D如上所定義，R1是氫或式1b所示氨基糖，且R2是氫或式2a所示糖，或者，其中A-B、D和R1如情形(11)中所定義。
非常特別優選使用定義如下的通式(II)化合物作為原料化合物，其中，在情形(15)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a所示糖，或者其中，在情形(16)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2d、2l或2m所示糖，
或者，其中A-B、D和R1如情形(11)中所定義。
最優選使用定義如下的通式(II)化合物作為原料化合物，其中，在情形(17)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a所示糖，或者其中，在情形(18)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是氫，且R2是氫。
本發明還涉及通式(I)化合物，其中A-B、D和R1如上所定義。
本文所用所寫“Me”代表甲基；縮寫“Et”代表乙基。
本發明方法可用于形成旋光性、立體異構體形式以及非對映體形式的通式(I)化合物。
本發明式(I)化合物可以呈立體異構體形式，它們可以相互是像和鏡像(對映體)，或者相互不是像和鏡像(非對映體)。本發明涉及對映體和非對映體及其各自的混合物。可通過已知方法將外消旋形式以及非對映體拆分成立體異構一致的組分。如果適當的話，可使用自身已知的方法來相互轉化所述異構體。
其中R1是式1a-1e所示氨基糖的本發明化合物可形成鹽。可依據標準成鹽方法來形成鹽。例如，用合適的酸將本發明化合物中和來形成酸加成鹽。可使用的代表性酸加成鹽是例如通過與下列酸反應而形成的鹽其他無機酸例如硫酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸，或有機羧酸例如乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、琥珀酸、乳酸、甲酸、馬來酸、樟腦酸、鄰苯二甲酸、乙醇酸、戊二酸、硬脂酸、水楊酸、山梨酸、肉桂酸、苦味酸、苯甲酸，或有機磺酸例如甲磺酸和對甲苯磺酸，或堿性氨基酸例如天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸等。
可用作本發明方法的原料化合物的通式(II)化合物已描述過(參見Creemer L.C.等人，1998，J.Antibiotics 51(8)795-800；Sparks T.C.等人，1998，J.Econ.Entomol.91(6)1277-1283；Sparks T.C.等人，2000，Pestic.Biochem.Physiol.67(3)187-197；Paquette L.A.等人，1998，J.Am.Chem.Soc.120(11)2553-2563；Evans D.A.等人，1993，J.Am.Chem.Soc.115(11)4497-4513；Crouse G.D.等人，2001，Pest.Manag.Sci.57(2)177-185；Creemer L.C.等人，2000，J.Antibiotics 53(2)171-178；Sparks T.C.等人，2000，Proc.-Beltwide Cotton Conf.Vol.21225-1229)，或者可依據WO 01/16303中描述的方法制得。類似地，可用于本發明方法的原料化合物可由適當的天然刺糖多孢菌素類化合物獲得。
當使用例如式(IIa)所示刺糖多孢菌素A苷元時，本發明方法可用下列反應方案1表示
反應方案1 文獻中已描述過通過使用微生物或其酶的生物轉化來將天然產物和合成化合物選擇性和/或立體有擇地羥基化。特別是用革蘭氏陽性菌例如鏈霉菌屬(Streptomycete)或革蘭氏陰性菌例如假單胞菌屬(Pseudomonas)或真菌例如鐮孢屬(Fusarium)的細胞和/或酶。下表中列出了含有適當酶類別，例如P-450單加氧酶類的微生物的實例
依據本發明和上述反應方案1，可將其中A-B、D和R1如上所定義的通式(II)化合物與合適的微生物在含水營養培養基中于需氧條件下接觸，然后分離出所需的通式(I)化合物。
也可以使用可通過常規方法由所述微生物獲得的酶提取物和純化的酶，如果適當的話在加入所需輔因子之后或用輔因子再生之后使用它們代替所述微生物。
特別是，還可以克隆決定這樣的酶的生物合成的基因，并將它們在外來宿主例如大腸桿菌(Escherichia coli)中表達。這類重組細菌可立即用于生物轉化。此外，還可以使用用于生物轉化的、這樣的重組細胞的酶提取物或純化的蛋白，如果適當的話在加入所需輔因子或用輔因子再生之后使用它們。
對于本發明方法，優選使用放線菌，特別是鏈霉菌屬微生物。
對于本發明方法，特別優選使用雅加達鏈霉菌(Streptomycesdjakartensis)、灰褐鏈霉菌(Streptomyces griseofuscus)、天青鏈霉菌(Streptomyces caelestis)、抗生鏈霉菌(Streptomyces antibioticus)、灰色鏈霉菌(Streptomyces griseus)或金霉素鏈霉菌(Streptomycesaureofaciens)的菌株。
對于本發明方法，非常特別優選使用具有下列菌株的特征的菌株
上表中列出的菌株已再次被Deutschen Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，MascheroderWeg 1b，D-38124 Brunswick，Germany依據布達佩斯條約的要求保藏
實施例16中更詳細地描述了這些菌株。不僅可以使用保藏的菌株自身，而且也可以使用其突變體，只要這些突變體具有所保藏的菌株的特征即可，也就是說，突變體必須還能夠進行本發明的生物轉化。
含水營養培養基優選含有可同化的碳源和可同化的氮源。
式(I)化合物可例如這樣制得，在式(II)化合物存在下，將雅加達鏈霉菌、灰褐鏈霉菌、天青鏈霉菌、抗生鏈霉菌、灰色鏈霉菌或金霉素鏈霉菌的菌株在含水營養培養基中于需氧條件下發酵。一般將微生物在含有碳源和如果適當的話蛋白質材料的營養培養基中發酵。優選的碳源包括葡萄糖、紅糖、蔗糖、甘油、淀粉、玉米淀粉、乳糖、糊精、糖蜜等。優選的氮源包括棉籽粉、酵母、自溶面包酵母、固體乳成分、大豆粉、玉米粉、胰腺或木瓜蛋白酶酪蛋白水解產物、固體蒸餾組分、動物胨的肉湯、肉和骨片段等。優選聯合使用這些碳源和氮源。只要使用自來水和未純化的成分作為培養基的組分，就無需向培養基中加入微量元素例如鋅、鎂、錳、鈷、鐵等。
通式(I)化合物的制備可在能保證微生物充分生長的任何溫度下誘導。溫度優選為21℃-32℃，特別優選為約28℃。式(I)化合物的最佳生成通常是在將式(II)化合物加到培養物中之后的2-4天內達到的。本發明化合物可在搖瓶和攪拌的發酵器中制備。
實施例2-9描述了用于在搖瓶中生長的優選生長條件和培養基。
可通過常規方法將作為生物轉化產物的本發明化合物從培養基中分離出來。
可使用多種不同方法將本發明化合物從發酵肉湯中分離出來和純化，例如制備凝膠色譜法、制備反相色譜法或制備吸附色譜法。可通過例如UV吸收或質譜進行檢測。
本發明化合物可用于制備具有生物活性，特別是具有殺蟲和殺螨活性的刺糖多孢菌素。最近有人描述了在大環內酯骨架的C-8位具有羥基的刺糖多孢菌素的特定天然苷元衍生物的生物效力(參見WO01/19840)。可提及的其它實例是在C-21位具有3-羥基-1-丁烯基的刺糖多孢菌素衍生物，它們同樣在最近被描述過。如果適當的話，這些刺糖多孢菌素衍生物還可以在任何上述C-8位攜帶羥基，并同樣具有殺蟲活性(參見WO 01/19840)。
當由其中R1是氫，D是基團C＝O或C-O-R2，且R2是氫的本發明通式(I)化合物制備另外的刺糖多孢菌素衍生物時，使用合適的保護基(PG)是有利的。用于羥基的保護基(PG)的已知實例是取代的甲基醚和醚、取代的乙基醚、取代的芐基醚、甲硅烷基醚、酯、碳酸酯或磺酸酯(參見Greene T.W.，Wuts P.G.W.in Protective Groups inOrganic Synthesis；John Wiley & Sohns，Inc.1999，羥基的保護，包括1，2-和1，3-二醇)。
可提及的取代的甲基醚型保護基(PG)的實例是甲氧基甲基(MOM)醚、甲硫基甲基(MTM)醚、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基(SMOM-OR)醚、芐氧基甲基(BOM-OR)醚、對甲氧基芐氧基甲基(PMBM-OR)醚、對硝基芐氧基甲基醚、鄰硝基芐氧基甲基(NBOM-OR)醚、(4-甲氧基苯氧基)-甲基(p-AOM-OR)醚、愈創木酚甲基(GUM-OR)醚、叔丁氧基甲基醚、4-戊烯氧基甲基(POM-OR)醚、甲硅烷氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基-甲基(MEM-OR)醚、2，2，2-三氯乙氧基甲基醚、二(2-氯乙氧基)-甲基醚、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM-OR)醚、甲氧基甲基(MM-OR)醚。
可提及的取代的乙基醚型保護基(PG)的實例是1-乙氧基乙基(EE-OR)醚、1-(2-氯乙氧基)乙基(Cee-OR)醚、1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]乙基(SEE-OR)醚、1-甲基-1-甲氧基乙基(MIP-OR)醚、1-甲基-1-芐氧基乙基(MBE-OR)醚、1-甲基-1-芐氧基-2-氟乙基醚、1-甲基-1-苯氧基-乙基醚、2，2，2-三氯乙基醚、1，1-二茴香基-2，2，2-三氮乙基(DATE-OR)醚、1，1，1，3，3，3-六氟-2-苯基異丙基(HIP-OR)醚、2-三甲基甲硅烷基乙基醚、2-(芐硫基)乙基醚、2-(苯基-硒基)乙基醚。可提及的醚型保護基(PG)其它實例是四氫吡喃基(THP-OR)醚、3-溴-四氫吡喃基(3-BrTHP-OR)醚、四氫噻喃基醚、1-甲氧基-環己基醚、2-和4-吡啶甲基醚、3-甲基-2-吡啶甲基-N-氧化-醚、2-喹啉基甲基(Qm-OR)醚、1-芘基甲基醚、二苯基甲基(DPM-OR)醚、對，對′-二硝基二苯甲基(RO-DNB)醚、5-二苯并環庚基醚、三苯基甲基(Tr-OR)醚、α-萘基二苯基甲基醚、對甲氧基-苯基二苯基甲基(MMTr-OR)醚、二(對甲氧基-苯基)苯基甲基(DMTr-OR)醚、三(對甲氧基苯基)甲基(TMTr-OR)醚、4-(4′-溴-苯甲酰甲氧基)苯基二苯基甲基醚、4，4′，4″-三(4，5-二氯鄰苯二甲酰亞氨基-苯基)甲基(CPTr-OR)醚、4，4′，4″-三(乙酰丙酰氧基-苯基)甲基(TLTr-OR)醚、4，4′，4″-三(苯甲酰氧基苯基)甲基(TBTr-OR)醚、4，4′-二甲氧基-3″-[N-(咪唑基甲基)]-三苯甲基(IDTr-OR)醚、4，4′-二甲氧基-3″-[N-(咪唑基-乙基)氨基甲酰基]三苯甲基(IETr-OR)醚、1，1-二(4-甲氧基-苯基)-1′-芘基甲基(Bmpm-OR)醚、9-蒽基醚、9-(9-苯基)夾氧蒽基(pixyl-OR)醚、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基(Tritylon-醚)、4-甲氧基-四氫吡喃基(MTHP-OR)醚、4-甲氧基-四氫噻喃基醚、4-甲氧基-四氫噻喃基醚-S，S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP-OR)醚、1-(2-氟苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基(Fpmp-OR)醚、1，4-二氧雜環己烷-2-基醚、四氫呋喃基醚、四氫噻吩基醚、2，3，3a，4，5，6，7，7a-八氫-7，8，8-三甲基-4，7-甲烷苯并呋喃-2-基(RO-MBF)醚、叔丁基醚、烯丙基醚、炔丙基醚、對氯苯基醚、對甲氧基苯基醚、對硝基苯基醚、2，4-二硝基-苯基(RO-DNP)醚、2，3，5，6-四氟-4-(三氟甲基)苯基醚、芐基(Bn-OR)醚。可提及的取代的芐基醚型保護基的實例是對甲氧基芐基(MPM-OR)醚、3，4-二甲氧基-芐基(DMPM-OR)醚、鄰硝基芐基醚、對硝基芐基醚、對鹵代芐基醚、2，6-二氯-芐基醚、對氰基芐基醚、對苯基-芐基醚、2，6-二氟芐基醚、對氨基酰基芐基(PAB-OR)醚、對疊氮基芐基(Azb-OR)醚、4-疊氮基-3-氯芐基醚、2-三氟甲基芐基醚、對(甲基亞磺酰基)芐基(Msib-OR)醚。可提及的甲硅烷基醚型保護基(PG)的實例是三甲基甲硅烷基(TMS-OR)醚、三乙基甲硅烷基(TES-OR)醚、三異丙基甲硅烷基(TIPS-OR)醚、二甲基異丙基甲硅烷基(IPDMS-OR)醚、二乙基異丙基甲硅烷基(DEIPS-OR)醚、二甲基己基甲硅烷基(TDS-OR)醚、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS-OR)醚、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS-OR)醚、三芐基甲硅烷基醚、三-對二甲苯基甲硅烷基醚、三苯基甲硅烷基(TPS-OR)醚、二苯基甲基甲硅烷基(DPMS-OR)醚、二-叔丁基甲基甲硅烷基(DTBMS-OR)醚、三(三甲基甲硅烷基)甲硅烷基醚(Sisyl醚)、(2-羥基苯乙烯基)-二甲基甲硅烷基(HSDMS-OR)醚、(2-羥基苯乙烯基)二異丙基甲硅烷基(HSDIS-OR)醚、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基(TBMPS-OR)醚、叔丁氧基二苯基甲硅烷基(DPTBOS-OR)醚。可提及的酯型保護基(PG)的實例是甲酸酯、苯甲酰基甲酸酯、乙酸酯(RO-Ac)、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯(RO-TFA)、甲氧基-乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、對氯苯氧基-乙酸酯、苯基乙酸酯、二苯基乙酸酯(DPA-OR)、煙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-戊烯酸酯、4-氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)(Lev-OR)、4，4-(亞乙二硫基)-戊酸酯(RO-LevS)、5-[3-二(4-甲氧基苯基)羥基-甲基苯氧基]-乙酰丙酸酯、新戊酸酯(Pv-OR)、1-金剛烷羧酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯(Bz-OR)、對苯基-苯甲酸酯、2，4，6-三甲基苯甲酸酯(2，4，6-三甲基苯甲酸酯)、4-(甲硫基甲氧基)-丁酸酯(MTMB-OR)、2-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯(MTMT-OR)。可提及的碳酸酯型保護基(PG)的實例是碳酸甲基酯、甲氧基甲基碳酸酯、9-芴基甲基碳酸酯(Fmoc-OR)、乙基碳酸酯、2，2，2-三氯乙基碳酸酯(Troc-OR)、1，1-二甲基-2，2，2-三氯-乙基碳酸酯(TCBOC-OR)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基碳酸酯(TMSEC-OR)、2-(苯基磺酰基)-乙基碳酸酯(Psec-OR)、2-(三苯基磷鎓基)-乙基碳酸酯(Peoc-OR)、叔丁基碳酸酯(Boc-OR)、異丁基碳酸酯、乙烯基碳酸酯、烯丙基碳酸酯(Alloc-OR)、對硝基苯基碳酸酯、芐基碳酸酯(Z-OR)、對甲氧基芐基碳酸酯、3，4-二甲氧基芐基碳酸酯、鄰硝基芐基碳酸酯、對硝基芐基碳酸酯、2-丹磺酰基乙基碳酸酯(Dnseoc-OR)、2-(4-硝基苯基)-乙基碳酸酯(Npeoc-OR)、2-(2，4-二硝基苯基)乙基碳酸酯(Dnpeoc-OR)。可提及的磺酸酯型保護基(PG)的實例是烯丙基磺酸酯(Als-OR)、甲磺酸酯(Ms-OR)、芐基磺酸酯、甲苯磺酸酯(Ts-OR)、2-[(4-硝基苯基)乙基]磺酸酯(Npes-OR)。
當由上述通式(I)化合物制備另外的刺糖多孢菌素衍生物時，首先用合適的保護基，例如一種上述保護基(PG)將在C-21位的1-羥基乙基保護，以及如果適當的話，將在C-9位的羥基(其中R2＝H)保護是特別有利的。本發明推薦使用兩種不同的保護基(分別是PG1和PG2)，并且這些保護基應當是適當相容的，即彼此可選擇性且獨立地除去。然后，通過化學合成或通過微生物的生物轉化(參見US 5539089；引入基團R或R′)在C-17位的羥基上可以進行衍生化例如苷化，以生成刺糖多孢菌素衍生物(Ia-2或Ib-2)(見反應方案2和3)。
反應方案2-保護基策略(DC-OH) (i)引入-保護基(PG1、PG2)(ii)衍生化-例如苷化(分別引入R和R′)(iii)脫保護-保護基(PG)/或選擇性地脫保護-保護基(例如PG1)
反應方案3-保護基策略(DC＝O)
(i)引入-保護基(PG)(ii)衍生化-例如苷化(R)(iii)脫保護-保護基(PG)在C-9位和分別C-17(見Ia-4)或C-17(見Ib-2)位成功地衍生化之后，可除去剩余保護基(PG)，以獲得通式(I)刺糖多孢菌素衍生物。
實施例實施例1所用菌株表能夠將化合物(IIa)生物轉化以生成在C-21位具有1-羥基-乙基的相應衍生物(化合物(Ia))的菌株
ATCC＝Amefican Type Culture Collection，Manassas，VA，U.S.A.
DSM＝Deutschen Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen，Brunswick，GermanyNRRL＝Agricultural Research Service Culture Collection，Peoria，IL，U.S.A.
實施例2使用雅加達鏈霉菌NRRL B-12103的生物轉化用于由化合物(IIa)制備化合物(Ia)的生物轉化方案的實例如下所述制備生產培養物在100mL錐形瓶內，給20ml R5A培養基各自接種50μl雅加達鏈霉菌NRRL B-12103孢子懸浮液(每升R5A培養基含有103g蔗糖；0.25g K2SO4；10.12g MgCl2；10g葡萄糖；5g酵母提取物；0.1g酪蛋白氨基酸，21g MOPS緩沖液pH6.8(KOH)，2ml微量元素溶液；微量元素溶液(每升)40mg ZnCl2，200mg FeCl3×6H2O，10mg CuCl2×2H2O，10mg MnCl2×4H2O，10mgNa2B4O7×10H2O，10mg(NH4)6Mo7O24×4H2O；(Fernandez等人，1998，J.Bacteriol.1804929；Hopwood等人，1985，Geneticmanipulation of Streptomyces.A laboratory manual.The John InnesFoundation，Norwich，England))。在接種之前，將培養基在121℃和1.1的過壓下滅菌20分鐘。將培養物在28℃和200rpm下培養。培養24小時和72小時后，分別加入1mg化合物(IIa)(100μl 10mg/ml在甲醇中的貯備液)。120小時后，停止該生物轉化。通過離心(4000rpm，10分鐘)除去培養基，將上清液與相同體積的甲醇混和。
實施例3使用灰褐鏈霉菌的生物轉化用于由化合物(IIa)制備化合物(Ia)的生物轉化方案的實例通過實施例2的方法，使用50μl菌株灰褐鏈霉菌的孢子懸浮液代替菌株雅加達鏈霉菌NRRL B-12103來制備生產培養物。
實施例4使用天青鏈霉菌的生物轉化用于由化合物(IIa)制備化合物(Ia)的生物轉化方案的實例通過實施例2的方法，使用50μl菌株天青鏈霉菌的孢子懸浮液代替菌株雅加達鏈霉菌NRRL B-12103來制備生產培養物。
實施例5使用抗生鏈霉菌的生物轉化用于由化合物(IIa)制備化合物(Ia)的生物轉化方案的實例通過實施例2的方法，使用50μl菌株抗生鏈霉菌的孢子懸浮液代替菌株雅加達鏈霉菌NRRL B-12103來制備生產培養物。
實施例6使用灰色鏈霉菌的生物轉化用于由化合物(IIa)制備化合物(Ia)的生物轉化方案的實例通過實施例2的方法，使用50μl菌株灰色鏈霉菌的孢子懸浮液代替菌株雅加達鏈霉菌NRRL B-12103來制備生產培養物。
實施例7使用金霉素鏈霉菌的生物轉化用于由化合物(IIa)制備化合物(Ia)的生物轉化方案的實例通過實施例2的方法，使用50μl菌株金霉素鏈霉菌的孢子懸浮液代替菌株雅加達鏈霉菌NRRL B-12103來制備生產培養物。
實施例8使用雅加達鏈霉菌的生物轉化用于制備在C-21位具有1-羥基-乙基的刺糖多孢菌素A[定義如下的通式(I)化合物其中R1是式1a所示氨基糖，A-B是基團-HC＝CH-，且D是基團-CO-R2，其中R2是式2a所示糖]的生物轉化方案的實例。
在100mL錐形瓶內，通過給20ml R5A培養基(R5A培養基見實施例2)各自接種50μl雅加達鏈霉菌NRRL B-12103孢子懸浮液來制備生產培養物。在接種之前，將培養基在121℃和1.1巴的過壓下滅菌20分鐘。將培養物在28℃和200rpm下培養。培養48小時后，加入2mg刺糖多孢菌素A(100μl 10mg/ml在甲醇中的貯備液)。96小時后，停止該生物轉化。通過離心(4000rpm，10分鐘)除去培養基，將上清液與相同體積的甲醇混和。
實施例9使用雅加達鏈霉菌的生物轉化用于制備在C-21位具有1-羥基-乙基的17-假-刺糖多孢菌素苷元A[定義如下的通式(I)化合物其中R1是氫，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團-CO-R2，其中R2是式2a所示糖]的生物轉化方案的實例在100mL錐形瓶內，通過給20ml R5A培養基(R5A培養基見實施例2)各自接種50μl雅加達鏈霉菌NRRL B-12103孢子懸浮液來制備生產培養物。在接種之前，將培養基在121℃和1.1巴的過壓下滅菌20分鐘。將培養物在28℃和200rpm下培養。培養48小時后，加入2mg 17-假-刺糖多孢菌素苷元A或D(100μl 10mg/ml在甲醇中的貯備液)。96小時后，停止該生物轉化。通過離心(4000rpm，10分鐘)除去培養基，將上清液與相同體積的甲醇混和。
實施例10分離通過用雅加達鏈霉菌NRRL B-12103進行生物轉化而制得的化合物(Ia)用于后處理培養物上清液和濃縮化合物(Ia)的方案的實例將35ml已加入甲醇的實施例2的培養物上清液減少至約20ml，與10ml水混和。然后用每次為10ml的乙酸乙酯萃取2次，將合并的有機相濃縮至干，把殘余物重懸在400μl甲醇中。經由HPLC/MS(實施例11)分析等份試樣的該溶液。
實施例11分析HPLC/UV/MS用于通過HPLC/UV/MS分析后處理的培養物上清液的方案的實例將等份試樣的、后處理的用雅加達鏈霉菌生物轉化的培養物上清液(實施例2)在反相HPLC柱(2.1×250mm)上進行色譜處理，用已加入乙酸銨(25mmol/l)的水與已加入乙酸銨(25mmol/l)的甲醇以250μl/分鐘的流速進行梯度洗脫。使用UV(245nm)和在四極質譜儀上進行的電子噴霧(正)質譜進行檢測。
化合物(Ia)的分子量為418道爾頓，并且是在這些條件下作為m/z＝436的[M+NH4]+離子檢測的。約32.5分鐘的保留時間短于約為37.5分鐘的化合物(IIa)的保留時間。
實施例12從用雅加達鏈霉菌NRRL B-12103生物轉化的搖動器培養物中提取和制備性地制備純形式的化合物(Ia)依據實施例2中描述的方法，讓15份20ml菌株(雅加達鏈霉菌)培養物在100ml錐形瓶中生長，將培養物上清液合并以提取化合物(Ia)。如實施例11所述將合并的培養物上清液后處理。把殘余物重懸在約3ml甲醇中。在分析反相HPLC柱(4.6×250mm)上色譜分離化合物(Ia)，用25mmol/l乙酸銨水溶液與25mmol/l乙酸銨的甲醇溶液進行梯度洗脫。每次洗脫注射100μl等份試樣。在245nm進行UV-檢測。手工收集級份，合并，蒸發至干。產量約為1mg。
實施例13驗證化合物(Ia)的結構將制備分離的化合物(Ia)重懸在CD3OD中，通過核磁共振(NMR)來研究。記錄1H-NMR、COSY、TOCSY、HSQC和HMBC光譜。
下表中總結了這些結果。
在CD3OD中的化合物(Ia)的NMR數據(500MHz)
實施例14分析檢測所生成的羥基化刺糖多孢菌素A用0.01N NaOH溶液將20ml已加入甲醇的實施例8的生物轉化培養物上清液調節至pH5，濃縮至約5ml含水殘余物，然后用每次為5ml的乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機相在氮氣流氣氛下濃縮至干，重懸在200μl甲醇中。通過在具有電子噴霧正離子化的串接質譜儀上進行的LC/MS和LC/MS/MS來研究該等份試樣的提取物。
在提取物的LC/MS色譜圖中，在低濃度下，峰在40.0分鐘出現，具有[M+H]+m/z＝748.5。該離子的子離子的光譜具有m/z＝142的片段，其是Forosamine單元被除去的特征反映。
實施例15分析檢測所生成的羥基化17-假-刺糖多孢菌素苷元用0.01N NaOH溶液將20ml已加入甲醇的實施例9的生物轉化培養物上清液調節至pH5，濃縮至約5ml含水殘余物，然后用每次為5ml的乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機相在氮氣流氣氛下濃縮至干，重懸在200μl甲醇中。通過在具有電子噴霧正離子化的串接質譜儀上進行的LC/MS和LC/MS/MS來研究該等份試樣的提取物。
在提取物的LC/MS色譜圖中，在低濃度下，峰在38.8分鐘出現，具有[M+NH4]+m/z＝624.4。這相應于17-假-刺糖多孢菌素苷元的羥基化的產物。該離子的子離子的光譜具有m/z＝189的片段，其是三甲基鼠李糖單元被除去的特征反映。
實施例16所有菌株的特征描述a)雅加達鏈霉菌NRRL B-12103該菌株是作為尼達霉素的生產者，以登記號NRRL B-12103得自Agricultural Research Service Culture Collection(1815 N.UniversityStreet，Illinois 61604，U.S.A.)。US 3646194中描述了該菌株。其培養物再次被Deutschen Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany依據布達佩斯條約(2001年6月6日)的要求以保藏號DSM 14327保藏。
b)灰褐鏈霉菌DSM 40191該菌株是作為束菌素A、B，祛霉菌素A和噴他霉素的生產者，以登記號40191得自Deutschen Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen(Mascheroder Weg 1b，D-38124 Brunswick，Germany)。其培養物再次被Deutschen Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany依據布達佩斯條約(2001年6月6日)的要求以保藏號DSM 14330保藏。
c)天青鏈霉菌DSM 40084該菌株是作為天青菌素的生產者，以登記號40084得自DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(Mascheroder Weg1b，D-38124 Brunswick，Germany)。其培養物再次被DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124 Brunswick，Germany依據布達佩斯條約(2001年6月6日)的要求以保藏號DSM 14328保藏。
d)抗生鏈霉菌ATCC 11891該菌株是作為天青菌素的生產者，以登記號ATCC 11891得自American Type Culture Collection(10801 University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209，USA)。其培養物再次被DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124 Brunswick，Germany依據布達佩斯條約(2001年6月6日)的要求以保藏號DSM 14329保藏。
e)灰色鏈霉菌DSM 40937該菌株以登記號40937得自Deutschen Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen(Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany)。其培養物再次被Deutschen Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，MascheroderWeg 1b，D-38124 Brunswick，Germany依據布達佩斯條約(2001年6月6日)的要求以保藏號DSM 14331保藏。
f)金霉素鏈霉菌DSM 46447該菌株是作為四環素的生產者，以登記號40084得自DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(Mascheroder Weg1b，D-38124 Brunswick，Germany)。其培養物再次被DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124 Brunswick，Germany依據布達佩斯條約(2001年6月6日)的要求以保藏號DSM 14332保藏。
實施例17制備原料化合物刺糖多孢菌素A苷元(IIa)按照WO 01/16303中描述的方法由Tracer制備刺糖多孢菌素A苷元(IIa)[其中R1是氫，A-B是基團-HC＝CH-，且D是基團C-OH的通式(II)化合物]。
9-酮基-刺糖多孢菌素A苷元(IIb)
通過用吡啶鎓重鉻酸鹽氧化來由化合物(IIa)制備9-酮基-刺糖多孢菌素A苷元(IIb)[其中R1是氫，A-B是基團-HC＝CH-，且D是基團C＝O的通式(II)化合物]在惰性氣氛下，將46.55g(115.6mmol)刺糖多孢菌素A苷元(IIa)溶解在1100ml無水二氯甲烷中，與43.51g(115.6mmol)吡啶鎓重鉻酸鹽混和。在25℃攪拌4小時后，加入900ml乙醚，過濾出所形成的鉻鹽沉淀，將濾液減壓濃縮。通過硅膠柱色譜純化(洗脫劑環己烷/乙酸乙酯1∶1，然后是100％乙酸乙酯)，獲得了3.68g 9，17-二酮基刺糖多孢菌素苷元，23.40g刺糖多孢菌素A苷元(IIa)與17-酮基-刺糖多孢菌素苷元(IIb)的約9∶1混合物，以及11.74g回收的刺糖多孢菌素A苷元(IIa)。將所述混合物從環己烷/乙酸乙酯中重結晶，將9-酮基-刺糖多孢菌素A苷元(IIb)濃縮至＞98％。獲得了20.78g 9-酮基-刺糖多孢菌素A苷元(IIb)，為無色晶體形式。
TLCRf(SiO2，乙酸乙酯＝0.44-1H-NMRCDCl3，δ＝6.77(s，13-H)；5.97(d，6-H)；5.88(m，5-H)；4.72(m，21-H)；3.69(m，17-H)特別是-LC/ESI-MSm/z＝401(25％)[M]+，289(100％).
二酮基刺糖多孢菌素苷元TLCRf(SiO2，乙酸乙酯)＝0.64.-1H-NMRCDCl3，δ＝6.92(s，13-H)；5.97(d，6-H)；5.87(m，5-H)；4.85(m，21-H)；4.25(q，16-H)特別是-LC/ESI-MSm/z＝399(100％)[M+H]+.
刺糖多孢菌素A首先按照WO 01/16303中描述的方法制備刺糖多孢菌素A。在制備反相柱(250×8mm)上通過色譜法分級所獲得的刺糖多孢菌素A/D混合物。所用的洗脫劑是含有25mmol/l乙酸銨的水(A)和含有25mmol/l乙酸銨的甲醇(B)。在35分鐘內用60％B至100％B的梯度進行洗脫。流速為3ml/分鐘。通過UV檢測器在242nm檢測所分離出的物質，并將它們自動分級。刺糖多孢菌素A在約31分鐘被洗脫下來，刺糖多孢菌素D在約33分鐘被洗脫下來。在旋轉蒸發儀中將合并的得自幾次注射的刺糖多孢菌素A級份減壓蒸發，獲得了含水殘余物。將所述含水殘余物冷凍干燥，獲得了刺糖多孢菌素A，為白色固體。
17-假-刺糖多孢菌素A/D苷元按照WO 01/16303中描述的方法制備17-假-刺糖多孢菌素A/D苷元。
權利要求
1.制備通式(I)化合物的方法， 其中A-B是任一下列基團-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，D是基團 或 R1是氫或氨基糖，且R2是氫或糖，其特征在于，將通式(II)化合物 其中A-B、D和R1如上所定義，與微生物在含水營養培養基中于需氧條件下接觸，或者與由微生物制得的酶提取物或與一種或多種從微生物中分離的酶接觸。
2.權利要求1的方法，其特征在于，使用定義如下的通式(II)化合物，在式中，在情形(1)中，A-B是任一下列基團-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖， 且R2是式2a所示糖 或者其中，在情形(2)中，A-B是基團-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2b、2c、2d、2e或2f所示糖 或者其中，在情形(3)中，A-B是是任一下列基團-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，R1是氫或式1b所示氨基糖， 且R2是氫或上述式2a所示糖，或者其中，在情形(4)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2g、2h、2i、2j或2k所示糖， 或者其中，在情形(5)中，A-B是基團-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2l或2m所示糖， 或者其中，在情形(6)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D如上所定義，R1是氫或上述式1b所示氨基糖或式1c所示氨基糖， 且R2是上述式2b、2c、2g或2h所示糖或式2n所示糖， 或者其中，在情形(7)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2o所示糖， 或者其中，在情形(8)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是上述式1b所示氨基糖，且R2是上述式2d、2i或2j所示糖或式2p所示糖， 或者其中，在情形(9)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是氫或上述式1c所示氨基糖，且R2是上述式2i或2p所示糖，或者其中，在情形(10)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1d、1e或1f所示氨基糖， 且R2是上述2a所示糖，或者其中，在情形(11)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D是基團 R1是氫或上述式1a所示氨基糖。
3.權利要求1或2的方法，其特征在于，使用定義如下的通式(II)化合物，在式中，在情形(12)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a、2g或2h所示糖，或者其中，在情形(13)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2d、2e、2l、2m或2o所示糖，或者其中，在情形(14)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D如上所定義，R1是氫或式1b所示氨基糖，且R2是氫或式2a所示糖，或者，其中A-B、D和R1如情形(11)中所定義。
4.權利要求1-3任一項的方法，其特征在于，使用定義如下的通式(II)化合物，其中，在情形(15)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a所示糖，或者其中，在情形(16)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2d、2l或2m所示糖，或者，其中A-B、D和R1如情形(11)中所定義。
5.權利要求1-4任一項的方法，其特征在于，使用定義如下的通式(II)化合物，在式中，在情形(17)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a所示糖，或者其中，在情形(18)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是氫，且R2是氫。
6.權利要求1-5任一項的方法，其特征在于，所用的微生物是放線菌類微生物。
7.權利要求6的方法，其特征在于，所用的放線菌類微生物是鏈霉菌屬微生物。
8.權利要求7的方法，其特征在于，所用的鏈霉菌屬微生物是雅加達鏈霉菌、灰褐鏈霉菌、天青鏈霉菌、抗生鏈霉菌、灰色鏈霉菌或金霉素鏈霉菌的菌株。
9.權利要求8的方法，其特征在于，所用菌株具有下列菌株的特征雅加達鏈霉菌DSM 14327、灰褐鏈霉菌DSM 14330、天青鏈霉菌DSM 14328、抗生鏈霉菌DSM 14329、灰色鏈霉菌DSM 14331或金霉素鏈霉菌DSM 14332。
10.權利要求1-9任一項的方法，其特征在于，將通式(I)化合物分離出來。
11.通式(I)化合物， 其中A-B是任一下列基團-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，D是基團 或 R1是氨基糖，且R2是糖。
12.權利要求11的化合物，其特征在于，在情形(1)中，A-B是任一下列基團-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖 且R2是式2a所示糖 或者，在情形(2)中，A-B是基團-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2b、2c、2d、2e或2f所示糖 或者，在情形(3)中，A-B是下列基團之一-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，R1是氫或式1b所示氨基糖， 且R2是氫或上述式2a所示糖，或者，在情形(4)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2g、2h、2i、2j或2k所示糖， 或者，在情形(5)中，A-B是基團-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2l或2m所示糖， 或者，在情形(6)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D如上所定義，R1是氫或上述式1b所示氨基糖或式1c所示氨基糖， 且R2是上述式2b、2c、2g或2h所示糖或式2n所示糖， 或者，在情形(7)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是上述式1a所示氨基糖，且R2是式2o所示糖， 或者，在情形(8)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是上述式1b所示氨基糖，且R2是上述式2d、2i或2j所示糖或式2p所示糖， 或者，在情形(9)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是氫或上述式1c所示氨基糖，且R2是上述式2i或2p所示糖，或者，在情形(10)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1d、1e所示氨基糖或式1f所示氨基糖， 且R2是上述2a所示糖，或者，在情形(11)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D是基團 R1是氫或上述式1a所示氨基糖。
13.權利要求12的化合物，其特征在于，在情形(12)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a、2g或2h所示糖，或者，在情形(13)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2d、2e、2l、2m或2o所示糖，或者，在情形(14)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D如上所定義，R1是氫或式1b所示氨基糖，且R2是氫或式2a所示糖，或者，A-B、D和R1如情形(11)中所定義。
14.權利要求12的化合物，其特征在于，在情形(15)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a所示糖，或者，在情形(16)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是式1a所示氨基糖，且R2是氫或式2d、2l或2m所示糖，或者，A-B、D和R1如情形(11)中所定義。
15.權利要求12的化合物，其特征在于，在情形(17)中，A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a所示糖，或者，在情形(18)中，A-B是基團-HC＝CH-，且D如上所定義，R1是氫，且R2是氫。
16.權利要求12的化合物，其特征在于，A-B是基團-HC＝CH-，D是基團 R1是式1a所示氨基糖，且R2是式2a所示糖，或者A-B是基團-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，D如上所定義，R1是氫，且R2是式2a所示糖，或者其中A-B是基團-HC＝CH-，D如上所定義，R1是氫，且R2是氫。
17.權利要求11-16任一項的化合物用于制備新的刺糖多孢菌素衍生物的應用。
全文摘要
本發明涉及制備在C－21位被1－羥基－乙基基團取代的新的刺糖多孢菌素衍生物的方法，涉及該類型新的刺糖多孢菌素衍生物本身，及其在制備新的刺糖多孢菌素類化合物中的應用。
文檔編號C07H5/06GK1556802SQ02818515
公開日2004年12月22日 申請日期2002年7月8日 優先權日2001年7月20日
發明者P·耶施克, G·埃伯茨, R·弗魯德, V·默爾勒, R·維爾藤, P 耶施克, 車 申請人:拜爾農作物科學股份公司