作為crf受體拮抗劑的三-與四-氮雜苊衍生物的制作方法

專利名稱：作為crf受體拮抗劑的三-與四-氮雜苊衍生物的制作方法
技術領域：
本發明一般涉及CRF受體拮抗劑和通過對需要的溫血動物給藥這類拮抗劑治療病癥的方法。
背景技術：
第一種促腎上腺皮質激素釋放因子(CRF)是從羊下丘腦中分離的，被鑒別為一種41個氨基酸的肽(Vale等，Science 2131394-1397，1981)。隨后，分離了人和大鼠的CRF序列，經測定是相同的，但是在41個氨基酸殘基中有7個不同于羊的CRF(Rivier等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 804851，1983；Shibahara等，EMBO J.2775，1983)。
已經發現CRF引起內分泌、神經和免疫系統功能發生意義深遠的改變。據信CRF是垂體前葉基礎性與應激性釋放促腎上腺皮質激素(ACTH)、β-內啡肽和其他源自阿黑皮素原(POMC)的肽的主要生理調節劑(Vale等，Science 2131394-1397，1981)。簡而言之，據信CRF通過與一種血漿膜受體結合引發它的生物學效應，已經發現該受體遍布腦(DeSouza等，Science 2241449-1451，1984)、垂體(DeSouza等，Methods Enzymol.124560，1986；Wynn等，Biochem.Biophys.Res.Comm.110602-608，1983)、腎上腺(Udelsman等，Nature 319147-150，1986)和脾(Webster，E.L.，and E.B.DeSouza，Endocrinology 122609-617，1988)。CRF受體與一種GTP-結合性蛋白質偶聯(Perrin等，Endocrinology 1181171-1179，1986)，后者介導CRF-刺激的細胞內cAMP產生的增加(Bilezikjian，L.M.，and W.W.Vale，Endocrinology 113657-662，1983)。現已從大鼠(Perrin等，Endol 33(6)3058-3061，1993)和人腦(Chen等，PNAS 90(19)8967-8971，1993；Vita等，FEBS 335(1)1-5，1993)克隆了CRF的受體。這種受體是一種415個氨基酸的蛋白質，包含七個跨膜結構域。大鼠與人序列之間的同一性比較顯示在氨基酸水平上具有高度的同源性(97％)。
除了在刺激ACTH和POMC產生中的作用以外，據信CRF也協調很多對應激的內分泌、自主與行為反應，可能參與情感性精神病癥的病理生理學。而且，據信CRF在免疫、中樞神經、內分泌與心血管系統之間的通訊上是一種關鍵的媒介(Crofford等，J.Clin.Invest.902555-2564，1992；Sapolsky等，Science 238522-524，1987；Tilders等，Regul.Peptides577-84，1982)。總之，CRF似乎是關鍵性的中樞神經系統神經遞質之一，在整合機體對應激的總體反應上起到決定性作用。
CRF直接對腦給藥所引起的行為、生理與內分泌反應等同于對暴露于應激性環境中的動物所觀察到的那些。例如，CRF的腦室內注射導致行為活化(Sutton等，Nature 297331，1982)、腦電圖的持續性活化(Ehlers等，Brain Res.278332，1983)、交感腎上腺髓質途徑的刺激(Brown等，Endocrinology 110928，1982)、心率與血壓的增加(Fisher等，Endocrinology 1102222，1982)、耗氧量的增加(Brown等，Life Sciences 30207，1982)、胃腸活動的改變(Williams等，Am.J.Physiol.253G582，1987)、食物消耗的抑制(Levine等，Neurophannacology 22337，1983)、性行為的變化(Sirinathsinghji等，Nature 305232，1983)和免疫功能喪失(Irwin等，Am.J.Physiol.255R744，1988)。
此外，臨床數據提示在抑郁、焦慮相關性精神病癥和神經性食欲缺乏中，CRF可能在腦中被過度分泌(DeSouza，Ann.Reports in Med.Chem.，25215-223，1990)。因此，臨床數據提示CRF受體拮抗劑可能代表新穎的抗抑郁和/或抗焦慮藥物，可以用于治療表現為CRF過度分泌的神經精神病樣病癥。
第一代CRF受體拮抗劑是肽類(例如參見Rivier等，美國專利No.4,605,642；Rivier等，Science 224889，1984)。盡管這些肽類CRF受體拮抗劑確實能夠削弱對CRF的藥理反應，不過肽類CRF受體拮抗劑具有肽治療劑的普遍缺點，包括缺乏穩定性和有限的口服活性。最近，已經報道了小分子CRF受體拮抗劑。例如，取代的4-硫代-5-氧代-3-吡唑啉衍生物(Abreu等，美國專利No.5,063,245)和取代的2-氨基噻唑衍生物(Courtemanche等，澳大利亞專利No.AU-A-41399/93)已被報道作為CRF受體拮抗劑。發現這些特定的衍生物分別在1-10μM范圍和0.1-10μM范圍內有效抑制CRF與其受體的結合。
由于CRF的生理學意義，具有顯著的CRF受體結合活性并且能夠拮抗CRF受體的生物活性小分子仍然是期望的目標。這類CRF受體拮抗劑將可用于治療內分泌、精神病樣與神經病樣病癥或疾病，一般包括應激相關病癥。
盡管通過CRF受體拮抗劑的給藥已經在實現CRF調節上取得了顯著的進步，不過本領域仍然需要有效的小分子CRF受體拮抗劑。也需要含有這類CRF受體拮抗劑的藥物組合物，以及涉及其使用的方法，例如治療應激相關的病癥。本發明滿足了這些需要，提供了其他有關的優點。
發明概述簡而言之，本發明一般涉及CRF受體拮抗劑，更具體涉及具有下列一般結構(I)的CRF受體拮抗劑 包括其立體異構體、前體藥物和藥學上可接受的鹽，其中R1、R2、R4、R5、R6、A、X和Y是如下所定義的。
本發明的CRF受體拮抗劑具有廣泛的治療應用，可以用于治療各種病癥或疾病，包括應激相關病癥。這類方法包括對需要的動物給藥有效量的本發明CRF受體拮抗劑，優選為藥物組合物的形式。因此，在另一種實施方案中，公開了藥物組合物，含有一種或多種本發明CRF受體拮抗劑與藥學上可接受的載體和/或稀釋劑。
參照下列詳細說明，本發明的這些和其他方面將更加清楚。為此，本說明書列舉多份參考文獻，它們更詳細地描述某些方法、化合物和/或組合物，在此全文引用作為參考。
發明的詳細說明本發明一般涉及可用作促腎上腺皮質激素釋放因子(CRF)受體拮抗劑的化合物。
在第一實施方案中，本發明的CRF受體拮抗劑具有下列結構(I)
包括其立體異構體、前體藥物和藥學上可接受的鹽，其中A是鍵或C＝(Z)；X是氮或CR3；Y是-N＝、-N(R7)-、-C(R8)＝或-O-；Z是O、S或NR9；R1是烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R2是氫、烴基、取代的烴基、烴氧基、烴硫基、鹵素、氰基、鹵代烴基；R3是氫、烴基、取代的烴基、鹵素或鹵代烴基；R4是氫、烴基、取代的烴基、C(O)R1、芳基、取代的芳基、雜環或取代的雜環；R5是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)R1、NR10R11或氰基；R6是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)R1、NR10R11或氰基；R7是氫、烴基、取代的烴基、C(O)R1、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R8是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)烴基、NR10R11或氰基；R9是氫、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R10、R11是相同或不同的，獨立地是氫、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基。
本文所用的上述術語具有下列含義。
“烴基”(“alkyl”)表示含有1至10個碳原子的直鏈或支鏈、無環或環狀、不飽和或飽和的脂族烴基，而術語“低級烴基”具有與烴基相同的含義，但是含有1至6個碳原子。代表性飽和直鏈烴基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基等；飽和支鏈烴基包括異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基、異戊基等。代表性飽和環狀烴基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、-CH2環丙基、-CH2環丁基、-CH2環戊基、-CH2環己基等；不飽和環狀烴基包括環戊烯基和環己烯基等。環狀烴基也被稱為“碳環”，包括二-與多-碳環，例如十氫萘和金剛烷基。不飽和的烴基在相鄰的碳原子之間含有至少一條雙鍵或叁鍵(分別被稱為“烯基”或“炔基”)。代表性直鏈與支鏈烯基包括乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基等；代表性直鏈與支鏈炔基包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基等。
“芳基”表示芳族碳環部分，例如苯基或萘基。
“芳基烴基”(“arylalkyl”)表示這樣一種烴基，至少一個烴基氫原子被芳基部分代替，例如芐基、-CH2-(1-或2-萘基)、-(CH2)2苯基、-(CH2)3苯基、-CH(苯基)2等。
“雜芳基”表示5至10元的芳族雜環，具有至少一個選自氮、氧和硫的雜原子，含有至少1個碳原子，包括單環的和二環的環系。代表性雜芳基包括(但不限于)呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、吡咯基、吲哚基、異吲哚基、吖吲哚基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、噁唑基、異噁唑基、苯并噁唑基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、酞嗪基和喹唑啉基。
“雜芳基烴基”表示這樣一種烴基，至少一個烴基氫原子被雜芳基部分代替，例如-CH2吡啶基、-CH2嘧啶基等。
“雜環”(本文也稱為“雜環的環”)表示5至7元單環的或7至14元多環的雜環，它是飽和的、不飽和的或芳族的，含有1至4個獨立選自氮、氧和硫的雜原子，其中氮和硫雜原子可以是任選被氧化的，氮雜原子可以是任選被季銨化的，也包括二環的環，其中任意上述雜環是與苯環稠合的，以及三環的(和更高級的)雜環的環。雜環可以是經由任意雜原子或碳原子連接的。雜環包括如上所定義的雜芳基。因而，除了上面列舉的芳族雜芳基以外，雜環還包括(但不限于)嗎啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、乙內酰脲基、戊內酰胺基、氧雜環丙烷基、氧雜環丁烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、四氫吡啶基、四氫嘧啶基、四氫噻吩基、四氫噻喃基等。
“雜環烴基”表示這樣一種烴基，至少一個烴基氫原子被雜環代替，例如-CH2嗎啉基等。
“環烴基”(“cycloalkyl”)表示含有3-8個碳原子的飽和或不飽和(但不是芳族)碳環，例如環戊烷、環己烷、環庚烷、環己烯等。
“環烴基環烴基”表示與環烴基環稠合的環烴基環，例如十氫萘。
“環烴基芳基”表示與芳基稠合的環烴基環，例如四氫萘。
“環烴基雜環”表示與雜環的環稠合的環烴基環。
本文所用的術語“取代”表示任意上述基團(例如烴基、芳基、芳基烴基、雜芳基、雜芳基烴基、雜環、雜環烴基等)，其中至少一個氫原子被取代基代替。在酮基取代基(-C(＝O)-)的情況下，兩個氫原子被代替。當被取代時，本發明上下文中的“取代基”包括鹵素、羥基、氰基、硝基、氨基、烴基氨基、二烴基氨基、烴基、烴氧基、烴硫基、鹵代烴基、芳基、取代的芳基、芳基烴基、取代的芳基烴基、雜芳基、取代的雜芳基、雜芳基烴基、取代的雜芳基烴基、雜環、取代的雜環、雜環烴基、取代的雜環烴基、-NRaRb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)NRaRb、-NRaC(＝O)ORb、-NRaSO2Rb、-ORa、-C(＝O)Ra、-C(＝O)ORa、-C(＝O)NRaRb、-OC(＝O)NRaRb、-SH、-SRa、-SORa、-S(＝O)2Ra、-OS(＝O)2Ra、-S(＝O)2ORa，其中Ra和Rb是相同或不同的，獨立地是氫、烴基、鹵代烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、芳基烴基、取代的芳基烴基、雜芳基、取代的雜芳基、雜芳基烴基、取代的雜芳基烴基、雜環、取代的雜環、雜環烴基或取代的雜環烴基。
“鹵素”表示氟、氯、溴和碘。
“鹵代烴基”(“haloalkyl”)表示這樣一種烴基，至少一個氫原子被鹵素代替，例如三氟甲基等。
“烴氧基”表示通過氧橋連接的烴基部分(即-O-烴基)，例如甲氧基、乙氧基等。
“烴硫基”表示通過硫橋連接的烴基部分(即-S-烴基)，例如甲硫基、乙硫基等。
“烴基磺酰基”(“alkylsulfonyl”)表示通過磺酰基橋連接的烴基部分(即-SO2-烴基)，例如甲磺酰基、乙磺酰基等。
“烴基氨基”和“二烴基氨基”表示通過氮橋連接的一個或兩個烴基部分(即-N-烴基)，例如甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基等。
“羥基烴基”表示被至少一個羥基取代的烴基。“單-或二-(環烴基)甲基”代表被一個或兩個環烴基取代的甲基，例如環丙基甲基、二環丙基甲基等。
“烴基羰基烴基”代表被-C(＝O)烴基取代的烴基。
“烴基碳酰氧基烴基”代表被-C(＝O)O烴基或-OC(＝O)烴基取代的烴基。
“烴氧基烴基”代表被-O-烴基取代的烴基。
“烴硫基烴基”代表被-S-烴基取代的烴基。
“單-或二-(烴基)氨基”分別代表被一個烴基或兩個烴基取代的氨基。
“單-或二-(烴基)氨基烴基”代表被單-或二-(烴基)氨基取代的烴基。
根據A、X、Y取代基，本發明的代表性化合物包括下列結構(II)至(XII)
在本發明更具體的實施方案中，本發明的代表性R1基團包括(但不限于)2，4-二氯苯基、2，4-二甲基苯基、2-氯-4-甲基苯基、2-甲基-4-氯苯基、2，4，6-三甲基苯基、2-氯-4-甲氧基苯基、2-甲基-4-甲氧基苯基、2，4-二甲氧基苯基、2-三氟甲基-4-氯苯基、3-甲氧基-4-氯苯基、2，5-二甲氧基-4-氯苯基、2-甲氧基-4-三氯甲基苯基、2-甲氧基-4-異丙基苯基、2-甲氧基-4-三氟甲基苯基、2-甲氧基-4-異丙基苯基、2-甲氧基-4-甲基苯基、4-甲基-6-二甲氨基吡啶-3-基、4-二甲氨基-6-甲基吡啶-3-基、6-二甲氨基吡啶-3-基和4-二甲氨基吡啶-3-基。
類似地，代表性R2基團包括氫和烴基(例如甲基和乙基)，代表性R3基團包括氫、鹵素(例如氯、氟和溴)、烴基(例如甲基和乙基)或鹵素烴基(例如三氟甲基)。
根據本發明的優選化合物是7-甲基-1-(1-丙基丁基)-5-[4-(1，1，2-三氟乙基)-2-三氟甲基苯基]-1，2，2a，3，4，5-六氫-1，5，6，8-四氮雜苊(5-1-1)；3-甲基-4-[7-甲基-1-(1-丙基丁基)-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈(5-1-2)；4-[1-(1-乙基丙基)-7-甲基-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]-3-甲基芐腈(5-1-3)；3-氯-4-[7-甲基-1-(1-丙基丁基)-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈(5-1-4)；3-氯-4-[1-(1-乙基丙基)-7-甲基-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈(5-1-5)；5-(2，4-雙三氟甲基苯基)-1-(1-乙基丙基)-7-甲基-1，3，4，5-四氫-1，5，6，8-四氮雜苊(5-1-6)；5-(2，4-雙三氟甲基苯基)-7-甲基-1-(1-丙基丁基)-7-甲基-1，3，4，5-四氫-1，5，6-三氮雜苊(6-1-1)。
本發明的化合物一般可以其游離堿形式使用。作為替代選擇，本發明的化合物可以酸加成鹽的形式使用。本發明游離堿氨基化合物的酸加成鹽可以通過本領域熟知的方法制備，可以從有機酸和無機酸生成。
適合的有機酸包括馬來酸、蘋果酸、富馬酸、苯甲酸、抗壞血酸、琥珀酸、甲磺酸、對-甲苯磺酸、乙酸、草酸、丙酸、酒石酸、水楊酸、枸櫞酸、葡糖酸、乳酸、扁桃酸、肉桂酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、乙醇酸、谷氨酸和苯磺酸。適合的無機酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。因而，結構(I)的“藥學上可接受的鹽”用于涵蓋任何和所有可接受的鹽形式。
一般而言，結構(I)化合物可以按照本領域技術人員已知的有機合成方法以及實施例所述代表性方法加以制備。
確切而言，式(XIa)化合物可以按照下列方案1制備，從化合物(XIII)開始，其中羥基適宜被適合的保護基團(Pg)保護起來，它的制備如下實施例所述。
方案1 其中步驟a代表雙鍵的氧化性裂解，例如通過臭氧化；繼之以還原性處理；步驟b代表羥基向離去基團的轉化，例如甲磺酸酯；步驟c代表在強堿性條件下被適合的苯胺衍生物R1NH2烷基化，繼之以“就地”分子內環化；步驟d代表羥基保護基團的去保護(例如Et3N-3HF，在DMF中，在室溫下，過夜)；步驟e代表羥基向離去基團的轉化，例如甲磺酸酯；步驟f代表通過加熱與適合的胺R4NH2反應；步驟g代表通過被適合的氧化劑(例如DDQ)氧化脫氫。
起始化合物(XIII)可以按照下列方案2方便地制備。
方案2
其中步驟a’代表在堿性條件下(即MeONa，回流的甲苯)與適合的脒反應和分子內環化；步驟b’代表氯化(方法類似于Wayne G.C.等，J.Prakt.Chem.，(2000)，342(5)，504-7所述方法)；步驟c’代表在0℃堿性條件下(例如LiHMDS)用烯丙基碘烯丙基化；步驟d’代表在通常的條件下(CH2Cl2，0℃至室溫)酯基用適合的還原劑，例如DIBAl-H還原；步驟e’代表羥基的保護，優選用t-BuPh2SiCl(TBP)，在DMF中，以DMAP作為催化劑(0℃至室溫)。
式(XIb)化合物可以按照下列方案3方便地制備，從式(XXV)化合物開始。
方案3 其中步驟a”代表碳原子通過，在適合的有機堿如n-BuLi的存在下與適合的內鎓鹽進行Wittig反應而同系化。該反應是在質子惰性溶劑中進行的，例如在乙腈或醚，例如四氫呋喃中進行；步驟b”代表烯醇醚(XXVI)在酸性條件下(例如HCl，在THF中)的普通水解；步驟c”代表醛基被適合的還原劑(例如NaBH4)還原；步驟d”代表羥基的保護，優選用t-BuMe2SiCl(TBS)，在DMF中，以咪唑和DMAP作為催化劑(0℃至室溫)；步驟e”代表在微波的幫助下與適合的苯胺衍生物R1NH2的Buchwald反應；步驟f”代表脫去羥基保護基(例如Et3N-3HF，在DMF中，在室溫下，過夜)；步驟g”代表羥基向離去基團的轉化，例如甲磺酸酯；步驟h”代表在堿性條件下的分子內環化。
作為替代選擇，最終的化合物(XIb)可以通過分子內環化而從化合物(XXXI)得到，例如通過在堿性條件(即Et3N)下羥基的甲磺酰化，繼之以就地環化(步驟i”)。
在關于化合物(XIa)和(XIb)的本發明優選實施方案中，R3、R5、R6和R8是氫。
適合的羥基保護基團的實例包括三烴基甲硅烷基醚，例如三甲基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基醚。羥基保護基團可以通過熟知的標準方法除去(例如Protective Groups in Organic Chemistry，p.46-119，J F WMcOmie編輯(Plenum Press，1973)所述那些)。例如，當Rb是叔丁基二甲基甲硅烷基時，用三乙胺三氫氟酸鹽處理可以除去之。
本發明還包括同位素標記的化合物，若非一個或多個原子被原子質量或質量數不同于自然界常見的原子質量或質量數的原子代替，它們等同于式I和下文所引用的那些。可以結合在本發明化合物中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、磷、氟、碘和氯的同位素，例如3H、11C、14C、18F、123I和125I。含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本發明化合物和所述化合物的藥學上可接受的鹽都屬于本發明的范圍。同位素標記的本發明化合物，例如結合有放射性同位素(例如3H和14C)的那些可用于藥物和/或底物組織分布測定法。氚、即3H和碳-14、即14C同位素是特別優選的，因為它們容易制備和檢測。11C和8F同位素特別可用于PET(正電子發射斷層顯象法)，125I特別可用于SPECT(單光子發射計算機化斷層顯象法)，這都可用于腦部造影。進而，被更重的同位素，例如氘、即2H取代，由于代謝穩定性可以提供一些治療上的益處，例如延長體內半衰期或減少劑量需求，因而在有些情況下可能是優選的。同位素標記的本發明式I及下列化合物一般可以這樣制備，實行下述方案和/或實施例所公開的方法，用容易得到的同位素標記的試劑代替非同位素標記的試劑。
化合物作為CRF受體拮抗劑的有效性可以通過各種測定方法加以測定。適合的本發明CRF拮抗劑能夠抑制CRF與其受體的特異性結合，拮抗與CRF有關的活性。通過一種或多種公認用于此目的的測定法，可以評估結構(I)化合物作為CRF拮抗劑的活性，包括(但不限于)由DeSouza等(J.Neuroscience 788，1987)和Battaglia等(Synapse 1572，1987)所公開的測定法。如上所述，適合的CRF拮抗劑包括證實有CRF受體親合性的化合物。CRF受體親合性可以通過結合性研究測定，測量化合物抑制放射性標記的CRF(例如[125I]酪氨酸-CRF)與其受體(例如從大鼠腦皮質膜制備的受體)結合的能力。DeSouza等(出處同上，1987)所述放射性配體結合測定法提供了用于測定化合物對CRF受體的親合性的測定法。這種活性通常是從IC50計算的，后者是化合物從受體中代替50％放射性標記的配體所需的濃度，以“Ki”值表示，利用下列方程計算Ki=IC501+L/KD]]>其中L＝放射性配體，KD＝放射性配體對受體的親合性(Cheng and Prusoff，Biochem.Pharmacol.223099，1973)。
除了抑制CRF受體結合以外，化合物的CRF受體拮抗劑活性可以通過化合物拮抗與CRF有關的活性的能力加以確定。例如，已知CRF刺激各種生物化學過程，包括腺苷酸環化酶活性。因此，化合物可以因它們拮抗CRF-刺激的腺苷酸環化酶活性的能力而被評價為CRF拮抗劑，例如通過測量cAMP水平。Battaglia等(出處同上，1987)所述CRF-刺激的腺苷酸環化酶活性測定法提供了用于測定化合物拮抗CRF活性的能力的測定法。因此，CRF受體拮抗劑活性可以通過這樣的測定方法加以測定，一般包括最初的結合測定法(例如由DeSouza(出處同上，1987)所公開的)，繼之以cAMP篩選方案(例如由Battaglia(出處同上，1987)所公開的)。
關于CRF受體結合親合性，本發明的CRF受體拮抗劑的Ki小于10μM。在本發明的優選實施方案中，CRF受體拮抗劑的Ki小于1μM，更優選小于0.25μM(即250nM)。正如下文詳細描述的，本發明的代表性化合物的Ki值可以通過實施例7所述方法測定。
本發明的CRF受體拮抗劑證實有對CRF受體部位的活性，可以用作治療劑，治療多種病癥或疾病，包括內分泌、精神病樣和神經病樣病癥或疾病。更具體而言，本發明的CRF受體拮抗劑可以用于治療由CRF的過度分泌引起的生理學疾病或病癥。因為據信CRF是一種關鍵性的神經遞質，激活和協調對應激的內分泌、行為與自主反應，所以本發明的CRF受體拮抗劑能夠用于治療神經精神病樣病癥。可以被本發明的CRF受體拮抗劑治療的神經精神病樣病癥包括情感性精神病癥，例如抑郁；焦慮相關性精神病癥，例如泛化性焦慮癥、恐慌癥、強迫觀念與行為癥、異常的攻擊、心血管異常(例如不穩定的絞痛和反應性高血壓)；和進食病癥，李芮神經性食欲缺乏、食欲過盛和腸應激綜合征(IBS)。CRF拮抗劑也可以用于治療應激-誘發的與各種疾病狀態有關的免疫抑制，以及中風。本發明CRF拮抗劑的其他用途包括治療炎癥(例如類風濕性關節炎、眼色素層炎、氣喘、炎性腸疾病(IBD)和G.I.能動性)、庫興氏病、嬰兒痙攣、癲癇與其他見于嬰兒和成人的癲癇發作、和各種物質濫用與脫癮(包括酗酒)。
在本發明的另一種實施方案中，公開了含有一種或多種CRF受體拮抗劑的藥物組合物。出于給藥的目的，本發明的化合物可以被配制成藥物組合物。本發明的藥物組合物包含本發明的CRF受體拮抗劑(即結構(I)化合物)和藥學上可接受的載體和/或稀釋劑。CRF受體拮抗劑在組合物中的含量可有效治療特定的病癥——也就是說，足以達到CRF受體拮抗劑的活性，并且優選地對患者的毒性是可接受的。優選地，本發明的藥物組合物可以包括每劑0.1mg至250mg CRF受體拮抗劑，這取決于給藥的途徑，更優選為1mg至60mg。本領域技術人員容易確定適當的濃度和劑量。
藥學上可接受的載體和/或稀釋劑是本領域技術人員所熟悉的。就配制成液體溶液的組合物而言，可接受的載體和/或稀釋劑包括鹽水和無菌水，并且可以任選地包括抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和其他公共添加劑。組合物也可以被配制成丸劑、膠囊劑、顆粒劑或片劑，除了CRF受體拮抗劑以外還含有稀釋劑、分散劑與表面活性劑、粘合劑和潤滑劑。本領域技術人員可以進一步按適當方法配制CRF受體拮抗劑，按照公認的慣例，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，Gennaro，Ed.，MackPublishing Co.，Easton，PA 1990所公開的那些。
另外，前體藥物也包括在本發明的范圍內。前體藥物是任何共價鍵合的載體，在將這類前體藥物對患者給藥時，它們體內釋放結構(I)化合物。前體藥物一般通過以這樣一種方式修飾官能團加以制備，以便該修飾被常規操作或體內裂解，生成母體化合物。
關于立體異構體，結構(I)化合物可以具有手性中心，因此可以存在外消旋物、外消旋混合物和個別的對映體或非對映體。所有這類異構體都包括在本發明內，包括它們的混合物。此外，有些結晶形式的結構(I)化合物可以存在多晶型，它們也包括在本發明中。另外，有些結構(I)化合物還可以與水或其他有機溶劑生成溶劑化物。這類溶劑化物同樣包括在本發明的范圍內。
在另一種實施方案中，本發明提供治療多種病癥或疾病的方法，包括內分泌、精神病樣和神經病樣病癥或疾病。這類方法包括將本發明的化合物對溫血動物給藥，給藥量足以治療該病癥或疾病。這類方法包括本發明CRF受體拮抗劑的全身給藥，優選為藥物組合物的形式。本文所用的全身給藥包括口服和腸胃外給藥方法。就口服給藥而言，適合的CRF受體拮抗劑藥物組合物包括粉劑、顆粒劑、丸劑、片劑和膠囊劑，以及液體、糖漿劑、混懸劑和乳劑。這些組合物還可以包括矯味劑、防腐劑、懸浮劑、增稠劑和乳化劑，和其他藥學上可接受的添加劑。就腸胃外給藥而言，本發明的化合物可以被制成含水注射溶液，除了CRF受體拮抗劑以外還可以含有緩沖劑、抗氧化劑、抗菌劑和其他常用于這類溶液的添加劑。
如上所述，本發明化合物的給藥能夠用于治療多種病癥或疾病。確切而言，可以將本發明的化合物對溫血動物給藥，用于治療抑郁、焦慮癥、恐慌癥、強迫觀念與行為癥、異常的攻擊、不穩定的絞痛、反應性高血壓、神經性食欲缺乏、食欲過盛、腸應激綜合征(IBS)、炎性腸疾病(IBD)、應激-誘發的免疫抑制、中風、炎癥、庫興氏病、嬰兒痙攣、癲癇和物質濫用或脫癮。
出于闡述而非限制的目的，提供下列實施例。
實施例本發明的CRF受體拮抗劑可以通過實施例1至6所公開的方法制備。實施例7提供用于測定受體結合活性(Ki)的方法，實施例8公開用于就CRF-刺激的腺苷酸環化酶活性篩選本發明化合物的測定法。
在中間體和實施例中，除非另有規定熔點(m.p.)是在Gallenkamp熔點儀上測定的，是未經校正的。所有的溫度均以表示。紅外光譜是在FT-IR儀上測量的。核磁共振(1H-NMR)譜是在400MHz下記錄的，化學位移是按照從用作內標的Me4Si低磁場的ppm數報告的(δ)，指定為單峰(s)、雙峰(d)、雙重雙峰(dd)、三重峰(t)、四重峰(q)或多重峰(m)。柱色譜是在硅膠(Merck AG Darmstaadt，Germany)上進行的。文中使用下列縮寫EtOAc＝乙酸乙酯，cHex＝環己烷，CH2Cl2＝二氯甲烷，Et2O＝二乙醚，DDQ＝2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌，DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，DIPEA＝N，N-二異丙基乙胺，MeOH＝甲醇，Et3N＝三乙胺，TBS＝叔丁基二甲基甲硅烷基，TBP＝叔丁基二苯基甲硅烷基，TFA＝三氟乙酸，THF＝四氫呋喃，DIBAL-H＝氫化二異丁基鋁，DMAP＝二甲氨基吡啶，LHMDS＝六甲基二硅氮烷基鋰，TLC表示在二氧化硅板上的薄層色譜，干燥表示溶液經無水硫酸鈉干燥，r.t.(RT)表示室溫。
實施例1代表性吡啶中間體的合成 化合物2將氯代吡啶1溶于THF，在-78℃下加入到攪拌著的LAH的THF懸液中。將混合物在該溫度下攪拌64小時，在-30℃下攪拌1小時。然后將混合物小心地用水、15％含水NaOH和水處理，并劇烈攪拌。使混合物溫熱至室溫，過濾。白色沉淀用乙酸乙酯充分洗滌。合并有機部分，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮。經由快速色譜純化，得到所需產物2。
化合物3
在-70℃下，向攪拌著的草酰氯(3當量)的二氯甲烷溶液加入DMSO(6當量)，15分鐘后，加入醇2(1當量)的二氯甲烷溶液，然后加入三乙胺。使混合物溫熱至室溫，攪拌1小時。將混合物用含水碳酸氫鈉(75ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮。經由快速色譜純化，得到所需產物3。
化合物4在-78℃下，向攪拌著的醛3(1當量)的THF溶液加入溴化烯基鎂的THF溶液(1當量)。將混合物在該溫度下攪拌30分鐘，溫熱至室溫，用含水碳酸氫鈉猝滅。混合物用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮。經由快速色譜純化，得到所需產物4。
實施例2代表性嘧啶中間體的合成 化合物2將氯代嘧啶1溶于THF，在-78℃下加入到攪拌著的LAH在THF中的懸液中。將混合物在該溫度下攪拌6小時，在-30℃下攪拌1小時。然后將混合物小心地用水、15％NaOH水溶液和水處理，并劇烈攪拌。使混合物溫熱至室溫，過濾。白色沉淀用乙酸乙酯充分洗滌。合并有機部分，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮。經由快速色譜純化，得到所需產物2。
化合物3在-70℃下，向攪拌著的草酰氯(3當量)的二氯甲烷溶液加入DMSO(6當量)。15分鐘后，加入醇2(1當量)的二氯甲烷溶液，然后加入三乙胺。使混合物溫熱至室溫，攪拌1小時。將混合物用碳酸氫鈉水溶液(75ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮。經由快速色譜純化，得到所需產物3。
化合物4在-78℃下，向攪拌著的醛3(1當量)的THF溶液加入溴化烯基鎂的THF溶液(1當量)。將混合物在該溫度下攪拌30分鐘，溫熱至室溫，用碳酸氫鈉水溶液猝滅。混合物用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮。經由快速色譜純化，得到所需產物4。
實施例3代表性結構(I)化合物的合成 化合物2將烯酮1(來自上例1和2的化合物4，4.26mmol)、R1NH2(4.3mmol)與甲苯磺酸一水合物(4.3mmol)的乙醇(20ml)溶液在60℃下加熱16小時。將混合物濃縮，溶于乙酸乙酯(50ml)，用NaHCO3水溶液(20ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮。殘余物經過硅膠柱色譜純化(用含25％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫)，得到2。
化合物3在-25℃下，向攪拌著的氧化膦(66mg，0.27mmol)的THF(2ml)溶液加入LDA的THF溶液(0.325M，0.83ml，0.27mmol)。15分鐘后，加入化合物2(11mg，0.034mmol)的THF(1ml)溶液，將混合物攪拌15分鐘。加入NaH(30mg)，使混合物溫熱至室溫，攪拌16小時。將混合物用水(15ml)稀釋，用EtOAc萃取(4×10ml)。合并萃取液，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，殘余物經過制備型TLC純化(用30％EtOAc/己烷洗脫)，得到一種油，然后在130℃下用TsOH.H2O(4.2mg，0.022mmol)和R4NH2(0.085mmol)處理16小時。將混合物冷卻至室溫，用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用EtOAc萃取(4×2ml)。合并萃取液，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，殘余物經過制備型TLC純化，得到化合物4。
化合物4將化合物2(68mg，0.23mmol)和R4HNNH2(0.35mmol)在140℃下加熱5小時。將混合物冷卻至室溫，用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用EtOAc萃取(4×2ml)。合并萃取液，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，殘余物經過制備型TLC純化(用30％EtOAc/己烷洗脫)，得到化合物3。
實施例4代表性結構(I)化合物的合成 化合物2將烯酮1(來自上例1和2的化合物4，4.26mmol)、R1NH2(4.3mmol)與甲苯磺酸一水合物(4.3mmol)的乙醇(20ml)溶液在60℃下加熱16小時。將混合物濃縮，溶于乙酸乙酯(50ml)，用NaHCO3水溶液(20ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮。殘余物經過硅膠柱純化(用25％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫)，得到2。
化合物3將酮2(0.16mmol)、對-甲苯磺酸一水合物(30mg，0.16mmol)和R4NH2(0.18mmol)溶于乙醇(0.5ml)，在80℃密封的試管內加熱20小時。將混合物冷卻至室溫，用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(4×2ml)。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮，殘余物經過制備型TLC純化，得到3。
化合物4a(Z＝O，Y＝O)將酮3(0.095mmol)溶于甲醇(1ml)，用硼氫化鈉(25mg，0.66mmol)處理。將混合物攪拌4小時，用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(4×2ml)。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮，將殘余物溶于甲苯(1ml)，用光氣的甲苯溶液(20％，0.1ml)處理。1.6小時后，在真空下濃縮溶液，殘余物經過制備型TLC純化，得到32mg(75％)碳酸酯4，為黃色的油。
化合物4b(Z＝S，Y＝O)將酮3(0.095mmol)溶于甲醇(1ml)，用硼氫化鈉(25mg，0.66mmol)處理。將混合物攪拌4小時，用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(4×2ml)。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮，將殘余物溶于甲苯(1ml)，用硫代光氣的甲苯溶液(20％，0.1ml)處理。16小時后，在真空下濃縮溶液，殘余物經過制備型TLC純化，得到25mg(55％)4b，為黃色的油。
化合物4c(Z＝O，Y＝NR7)將酮3(0.095mmol)和胺(0.20ml)溶于乙腈(1ml)，用氰基硼氫化鈉(25mg)處理。加入乙酸(1滴)，將混合物攪拌4小時，用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(4×2ml)。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮，將殘余物溶于甲苯(1ml)，用光氣的甲苯溶液(20％，0.1ml)處理。18小時后，在真空下濃縮溶液，殘余物經過制備型TLC純化，得到脲4c。
化合物4d(Z＝S，Y＝NR7)將酮3(0.095mmol)和胺(0.20ml)溶于乙腈(1ml)，用氰基硼氫化鈉(25mg)處理。加入乙酸(1滴)，將混合物攪拌4小時，用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(4×2ml)。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮，將殘余物溶于甲苯(1ml)，用硫代光氣的甲苯溶液(20％，0.1ml)處理。18小時后，在真空下濃縮溶液，殘余物經過制備型TLC純化，得到硫脲4d。
化合物5a(Z＝O)將酮3(0.16mmol)、脲(30mg)和ZnCl2(25mg)在200℃下加熱5小時。將混合物冷卻至室溫，用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(4×2ml)。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮，殘余物經過制備型TLC純化，得到脲5a。
化合物5b(Z＝NR9)將來自上述工藝的脲(5a，0.070mmol)和PCl5(15mg，0.070mmol)在90℃甲苯中加熱3小時，在此期間有白色固體生成。將混合物冷卻至室溫，用胺(0.10ml)處理。繼續攪拌30分鐘。將混合物用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(4×2ml)。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮，殘余物經過制備型TLC純化，得到胍5b。
化合物5c(Z＝S)將來自上述工藝的脲(5a，0.070mmol)和P4S10(50mg)在90℃甲苯中加熱20小時。將混合物用NaHCO3水溶液(2ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(4×2ml)。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)，在真空下濃縮，殘余物經過制備型TLC純化，得到硫脲5c。
實施例5代表性結構(XIa)化合物的合成 中間體1(4，6-二氯-2-甲基嘧啶-5-基)乙酸甲基酯在0℃ N2下，向無水MeOH(60ml)分批加入鈉(1.74g，3eq)。金屬鈉耗盡后，加入鹽酸乙脒(7.06g，3eq)。攪拌20分鐘后，濾出所沉淀的NaCl。向游離乙脒的溶液加入2-乙氧羰基琥珀酸二乙酯(6.04g，24.5mmol)的無水MeOH(20ml)溶液，將混合物在室溫下攪拌2天。將反應混合物在真空中濃縮至干，然后將所得黃色泡沫(8.69g)與POCl3(70ml)混合，在回流下加熱3.5小時。將所得溶液冷卻至室溫，緩慢倒入冰/水(600ml)和NH4OH(50ml)中，并劇烈攪拌。產物用EtOAc(3×50ml)和Et2O(3×20ml)萃取。合并有機萃取液，用H2O(60ml)和鹽水(40ml)洗滌，經Na2SO4干燥，過濾，在真空中濃縮。粗油經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 9∶1)。得到中間體1，為黃色固體(4.27g，73％)。
NMR(1H，CDCl3)δ5.85(m，1H)，5.15(dq，1H)，5.11(dq，1H)，3.61(dt，2H)，2.67(s，3H).
MS(m/z)202[M]+.2Cl；167[MH-Cl]+，1Cl.
中間體2
2-(4，6-二氯-2-甲基嘧啶-5-基)戊-4-烯酸甲基酯在-78℃ N2下，向中間體1(3g，1eq)的THF(60ml)溶液滴加LiHMDS(1M THF溶液)(16.03ml，1.25eq)。將反應混合物冷卻至0℃，攪拌30分鐘。將反應混合物冷卻至-78℃，在1.5小時內滴加烯丙基碘(1.58ml，1.35eq)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。然后加入水(30ml)，反應混合物用EtOAc萃取(3×60ml)。收集有機層，用飽和NaCl水溶液(1×20ml)洗滌，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，5％EtOAc/環己烷)。得到中間體2，為白色固體(2.4g，8.76mmol，68％)。
NMR(1H，CDCl3)δ5.77(m，1H)，5.03(m，2H)，4.43(dd，1H)，3.76(s，3H)，3.12(m，1H)，2.78(m，1H)，2.73(s，3H).
MS(m/z)275[MH]+中間體32-(4，6-二氯-2-甲基嘧啶-5-基)戊-4-烯-1-醇在-78℃ N2下，向中間體2(257mg，0.937mmol)的無水CH2Cl2(9.3ml)溶液加入DIBAl-H(1M己烷溶液，5.6ml，6eq)。加入DIBAl-H后，將反應混合物在-78℃下攪拌1小時，在0℃下攪拌2小時。將反應混合物倒入0.5N HCl的冰溶液(20ml)，用CH2Cl2萃取(3×10ml)。合并有機萃取液，經Na2SO4干燥，過濾，在真空中濃縮。得到200mg中間體3，為無色的油(收率86％)。
NMR(1H，CDCl3)δ5.76(m，1H)，5.12(m，1H) 5.01(m，1H)，4.16(m，1H)，4.06(m，1H)，3.91(m，1H)，2.8-2.6(m，2H)，2.70(s，3H)，1.50(t，1H).
MS(m/z)247[M]+，2Cl中間體45-[1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)丁-3-烯基]-4，6-二氯-2-甲基嘧啶在0℃ N2下，向中間體3(152mg，0.61mmol)的無水DMF(4ml)溶液加入4-DMAP(3.8mg，0.05eq)、咪唑(420mg，10eq)和Ph2tBuSiCl(0.32ml，2eq)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。向該溶液加入5ml飽和NH4Cl的水溶液，混合物用Et2O萃取(2×15ml)。合并有機萃取液，用水洗滌一次、用鹽水洗滌一次，經Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，粗的黃色的油經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 95∶5)。得到中間體4，為無
0mg，0.55mmol，90％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.65(dd，2H)，7.56(dd，2H)，7.49-7.36(m，6H)，5.67(m，1H)，5.03(dd，1H)，4.94(dd，1H)，4.17(m，1H)，4.00(m，2H)，2.70(s，3H)，2.69(m，1H)，2.55(m，1H)，0.98(s，9H).
MS(m/z)485[MH]+，2Cl.
中間體54-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)-3-(4，6-二氯-2-甲基嘧啶-5-基)-1-醇在-78℃下，向中間體4(1.52g，3.14mmol)的無水CH2Cl2/MeOH(4/1v/v，50ml)溶液通入O3達15分鐘，同時攪拌。反應混合物用無水MeOH(10ml)稀釋，在-78℃下加入NaBH4(475mg，4eq)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，然后用飽和NH4Cl水溶液(15ml)猝滅，產物用EtOAc萃取(3×60ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 8∶2)。得到中間體5，為黃色的油(1.14g，2.34mmol，74％)。
NMR(1H，DMSO)δ7.55-7.33(m，10H)，4.46(t，1H)，4.09，397，2.92(m，3H)，3.40-3.20(m，2H)，2.00-1.76(m，2H)，2.56(s，3H)，0.84(s，9H).
MS(m/z)489[MH]+.
中間體6甲磺酸4-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)-3-(4，6-二氯-2-甲基嘧啶-5-基)丁基酯在0℃下，向中間體5(1.14g，2.33mmol)的無水CH2Cl2(46ml)溶液加入Et3N(1.6ml，5eq)和MsCl(378μl，2.1eq)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。然后加入水(15ml)，反應混合物用CH2Cl2萃取(3×60ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc8∶2)。得到中間體6，為黃色的油(1.28g，2.26mmol，97％)。
NMR(1H，DMSO)δ7.60-7.30(m，10H)，4.20，4.10-3.90(m，m，5H)，3.07(s，3H)，2.57(s，3H)，2.34-2.06(m，2H)，0.84(s，9H).
MS(m/z)567[MH]+.
中間體75-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-4-氯-2-甲基-8-[4-(1，1，2-三氟乙基)-2-三氟甲基苯基]-5，6，7，8-四氫吡啶并[2，3-d]嘧啶在0℃下，向2，4-雙(三氟甲基)苯胺(15.6mg，1eq)的無水DMF(1ml)溶液加入80％NaH/油(4.5mg，2.2eq)。將反應混合物在0℃下攪拌15分鐘，然后在室溫下攪拌15分鐘。將反應混合物冷卻至0℃，加入中間體6(38.7mg，0.068mmol)的無水DMF(0.3ml)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌1.5小時。然后加入水(2ml)，反應混合物用EtOAc萃取(3×7ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×10ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc9∶1)。得到中間體7，為黃色的油(19.4mg，0.029mmol，43％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.98，7.94(d，d，1H)，7.88，7.80(dd，dd，1H)，7.77-7.58，7.44-7.32(m，m，3H)，7.35，7.14(d，d，1H)，3.98，3.94(dd，dd，1H)，3.73，3.55(t，m，1H)，3.63，3.59(m，m，1H)，3.44-3.36(m，2H)，3.38-3.30(m，2H)，2.55，2.40(m，m，1H)，2.17，2.15(s，s 1H)，2.04，1.90(m，m，1H)，0.98(s，9H).
MS(m/z)664[MH]+.
中間體8{4-氯-2-甲基-8-[4-(1，1，2-三氟乙基)-2-三氟甲基苯基]-5，6，7，8-四氫吡啶并[2，3-d]嘧啶-5-基}甲醇在室溫N2下，向中間體7(52mg，0.078mmol)的無水DMF(1ml)溶液加入Et3N.3HF(102μl，8eq)，將反應混合物在室溫下攪拌過夜。然后用水(2ml)稀釋，用Et2O萃取(3×5ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×7ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 6∶4)。得到中間體8，為澄清的油(27mg，0.063mmol，81％)。
NMR(1H，DMSO)δ8.26-8.12(m，2H)，7.90-7.80(d，1H)，5.08-4.98(t，1H)，3.90-3.60(2H)，3.70-3.30(2H)，3.24-3.10(1H)，2.30(m，1H)，2.09(s，3H)，2.00-1.80(m，1H).
MS(m/z)425[MH]+.
中間體9甲磺酸4-氯-2-甲基-8-[4-(1，1，2-三氟乙基)-2-三氟甲基苯基]-5，6，7，8-四氫吡啶并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基酯在0℃下，向中間體8(130mg，0.306mmol)的無水CH2Cl2(4ml)溶液加入Et3N(213μl，5eq)和MsCl(50μl，2.1eq)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。然后加入水(8ml)，反應混合物用CH2Cl2萃取(3×20ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×10ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc65/35)。得到中間體9，為澄清的油(138mg，0.274mmol，90％)。
NMR(1H，DMSO)δ8.30-8.14(m，2H)，7.95-7.80(d，d，1H)，4.56-4.20(2H)，3.9-3.4(m，3H)，3.25(s，3H)，2.11(s，3H)，2.2-1.9(m，2H).
MS(m/z)425[MH]+.
中間體107-甲基-1-(1-丙基丁基)-5-[4-(1，1，2-三氟乙基)-2-三氟甲基苯基]-1，2，2a，3，4，5-六氫-1，5，6，8-四氮雜苊將中間體9(135mg，0.27mmol)與庚-4-胺(0.5ml，12eq)的混合物在130℃下(螺帽小瓶，沙浴)加熱3小時。然后將反應混合物冷卻至室溫，用CH2Cl2(3ml)稀釋。蒸發溶劑，粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 9∶1)。得到中間體10，為黃色固體(29.4mg，0.06mmol，23％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.99(s，1H)，7.83(d，1H)，7.48(d，1H)，4.06-3.24(bm，5H)，2.23-2.2(bm，4H)，1.74-1.1(bm，10H)，0.97(t，3H)，0.91(t，3H).
MS(m/z)487[MH]+.
中間體114-[5-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-4-氯-2-甲基-6，7-二氫-5H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-8-基]-3-甲基芐腈在0℃ N2下，向4-氨基-3-甲基芐腈(14mg，0.106mmol)的DMF(3.5ml)溶液加入80％NaH/油(4.5mg，0.112mmol)，30分鐘后加入中間體6(60mg，0.106mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌2小時。然后冷卻至室溫，用水(20ml)稀釋。產物用EtOAc萃取(3×25ml)。合并有機萃取液，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 80％)。得到中間體11，為澄清的油(28mg，0.52mmol，y＝47％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.65(s，1H)，7.55(m，4H)，7.35(m，6H)，7.10(d，1H)，6.95(d，1H)，3.92(m，1H)，3.8(m，2H)，3.5-3.3(m，2H)，2.21(m，1H)，2.44(s，3H)，2.10(s，3H)，1.61(m，1H)，1.10(s，9H).
MS(m/z)567[MH]+.
中間體124-(4-氯-5-羥甲基-2-甲基-6，7-二氫-5H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-8-基)-3-甲基芐腈在室溫N2下，向中間體11(28mg，0.05mmol)的無水DMF(2.5ml)溶液加入Et3N.3HF(44μl，0.290mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌12小時。用水(20ml)稀釋，產物用EtOAc萃取(3×25ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 6∶4)。得到中間體11，為澄清的油(22mg，0.08mmol，75％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.61-7.58(m，2H)，7.27(m，1H)，3.92-3.81(m，3H)，3.50-3.35(m，2H)，2.4(m，1H)，2.26(s，3H)，2.19(s，3H)，1.8(m，1H).
MS(m/z)329[MH]+.
中間體134-[1-(1-乙基丙基)-7-甲基-2，2a，3，4-四氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]-3-甲基芐腈在0℃ N2下，向中間體12(43mg，0.131mmol)的無水CH2Cl2(2.5ml)溶液加入MsCl(13μl，0.328mmol)和Et3N(87μl，0.655mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后用水(20ml)稀釋。產物用EtOAc萃取(3×25ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。將粗產物溶于3-氨基戊烷(143μl，1.23mmol)，將反應混合物在100℃下(螺帽小瓶，沙浴)加熱16小時。然后冷卻至室溫，反應混合物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 75∶25)。得到中間體13，為白色固體(23mg，0.074mmol，50％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.50(d，1H)，7.30(dd，1H)，7.55(d，1H)3.86(m，1H)，3.70-3.23(t+t，2H)，3.43(m，1H)，3.63(m，2H)，2.27(s，3H)，2.24(s，3H)，2.18(m，1H)，1.74(m，1H)，1.59-1.45(m，4H)，0.99-0.78(t+t，6H).
MS(m/z)362[MH]+.
中間體143-甲基-4-[7-甲基-1-(1-丙基丁基)-2，2a，3，4-四氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈在0℃ N2下，向中間體12(12mg，0.043mmol)的無水CH2Cl2(1.5ml)溶液加入MsCl(4μl，0.109mmol)和Et3N(28μl，0.216mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后用水(20ml)稀釋。產物用EtOAc萃取(3×25ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。將粗產物溶于4-庚基胺(50μl，0.349mmol)，將反應混合物在100℃下(螺帽小瓶，沙浴)加熱16小時。然后冷卻至室溫，反應混合物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 75∶25)。得到中間體14，為白色固體(5.0mg，0.020mmol，40％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.73(s，1H)，7.65(dd，1H)，7.41(d，1H)3.95(m，1H)，3.78-3.6(m，2H)，3.5-3.24(t，2H)，2.27(m，1H)，2.18(s，3H)，2.10(s，3H)，1.65(m，1H)，1.55-1.40(m，4H)，1.38-1.10(m，4H)，0.95-0.88(t+t，6H).
MS(m/z)389[MH]+.
中間體154-[5-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-4-氯-2-甲基-6，7-二氫-5H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-8-基]-3-氯芐腈在0℃ N2下，向4-氨基-3-甲基芐腈(86mg，0.566mmol)的DMF(3.5ml)溶液加入80％NaH/油(17mg，0.566mmol)，30分鐘后加入中間體6(308mg，0.546mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌2小時。然后冷卻至室溫，用水(30ml)稀釋。產物用EtOAc萃取(3×45ml)。合并有機萃取液，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 8∶2)。得到中間體15，為澄清的油(110mg，0.184mmol，35％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.65(s，1H)，7.55(m，4H)，7.35(m，6H)，7.10(d，1H)，6.95(d，1H)，3.92(m，1H)，3.8(m，2H)，3.5-3.3(m，2H)，2.21(m，1H)，2.10(s，3H)，1.61(m，1H)，1.10(s，9H).
MS(m/z)587[MH]+.
中間體163-氯-4-(4-氯-5-羥甲基-2-甲基-6，7-二氫-5H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-8-基)芐腈在室溫N2下，向中間體15(110mg，0.19mmol)的無水DMF(2.5ml)溶液加入Et3N.3HF(260μl，1.91mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌12小時。用水(20ml)稀釋，產物用EtOAc萃取(3×20ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 6∶4)。得到中間體16，為澄清的油(53mg，0.15mmol，81％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.95-8.8(m，2H)，7.3(d，1H)，3.9(m，1H)，3.(m，2H)，3.5-3.3(m，2H)，2.2(m，1H)，2.15(s，3H)，1.8(m，1H).
MS(m/z)349[MH]+.
中間體173-氯-4-[7-甲基-1-(1-丙基丁基)-2，2a，3，4-四氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈在0℃ N2下，向中間體16(52mg，0.149mmol)的無水CH2Cl2(1.5ml)溶液加入MsCl(16μl，0.373mmol)和Et3N(90μl，0.745mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后用水(20ml)稀釋。產物用EtOAc萃取(3×25ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。將粗產物溶于4-庚基胺(188μl，1.49mmol)，將反應混合物在100℃下(螺帽小瓶，沙浴)加熱16小時。然后冷卻至室溫，反應混合物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 8∶2)。得到中間體17，為白色固體(36.0mg，0.084mmol，60％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.74(d，1H)，7.56(dd，1H)，7.49(d，1H)4.05(m，1H)，3.78-3.6(m，2H)，3.5-3.24(t，2H)，2.27(s，3H)，2.18(m，1H)，1.55-1.40(m，4H)，1.38-1.10(m，4H)，0.95-0.88(t+t，6H).
MS(m/z)410[MH]+.
中間體183-氯-4-[1-(1-乙基丙基)-7-甲基-2，2a，3，4-四氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈在0℃ N2下，向中間體16(35mg，0.112mmol)的無水CH2Cl2(1.5ml)溶液加入MsCl(12μl，0.277mmol)和Et3N(68μl，0.560mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后用水(20ml)稀釋。產物用EtOAc萃取(3×25ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。將粗產物溶于3-氨基戊烷(158μl，1.12mmol)，將反應混合物在100℃下(螺帽小瓶，沙浴)加熱16小時。然后冷卻至室溫，反應混合物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 75∶25)。得到中間體18，為白色固體(18.0mg，0.084mmol，53％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.74(d，1H)，7.55(dd，1H)，7.50(d，1H)3.95(m，1H)，3.78-3.65(m，2H)，3.45(m，1H)，3.69-3.23(t+t，2H)，2.28(s，3H)，2.18(m，1H)，1.55-1.46(m，4H)，0.97-0.78(t+t，6H).
MS(m/z)382[MH]+.
中間體195-(2，4-雙三氟甲基苯基)-1-(1-乙基丙基)-7-甲基-1，2，2a，3，4，5-六氫-1，5，6，8-四氮雜苊在0℃ N2下，向中間體8(45mg，0.106mmol)的無水CH2Cl2(2.5ml)溶液加入MsCl(10μl，0.265mmol)和Et3N(70μl，0.530mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后用水(20ml)稀釋。產物用EtOAc萃取(3×25ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(2×20ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑。將粗產物溶于3-氨基戊烷(184μl，0.992mmol)，將反應混合物在100℃下(螺帽小瓶，沙浴)加熱16小時。然后冷卻至室溫，反應混合物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 75∶25)。得到中間體19，為白色固體(28.0mg，0.064mmol，60％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.98(d，1H)，7.83(dd，1H)，7.49(d，1H)3.87(m，1H)，3.70-3.23(t+t，2H)，3.44(m，1H)，3.63(m，2H)，2.23(s，3H)，2.18(m，1H)，1.55-1.47(m，4H)，0.99-0.88(t+t，6H).
MS(m/z)458[MH]+。
實施例5-1-17-甲基-1-(1-丙基丁基)-5-[4-(1，1，2-三氟乙基)-2-三氟甲基苯基]-1，2，2a，3，4，5-六氫-1，5，6，8-四氮雜苊向中間體10(21mg，0.043mmol)的無水CH2Cl2(1.0ml)溶液加入DDQ(9.7mg，1eq)。將反應混合物在室溫下攪拌3.5小時。蒸發溶劑，粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 9∶1)。得到實施例5-1-1化合物，為澄清的油(14mg，0.028mmol，67％)。
實施例5-1-23-甲基-4-[7-甲基-1-(1-丙基丁基)-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈向中間體14(15mg，0.038mmol)的CH2Cl2(1.5ml)溶液加入DDQ(9.6mg，0.042mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。蒸發溶劑，粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 7∶3)。得到實施例5-1-2化合物，為白色固體(8mg，0.021mmol，56％)。
實施例5-1-34-[1-(1-乙基丙基)-7-甲基-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]-3-甲基芐腈向中間體13(18mg，0.049mmol)的CH2Cl2(1.5ml)溶液加入DDQ(14.5mg，0.064mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。蒸發溶劑，粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 7∶3)。得到實施例5-1-3化合物，為白色固體(10mg，0.029mmol，60％)。
實施例5-1-43-氯-4-[7-甲基-1-(1-丙基丁基)-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈向中間體17(15mg，0.04mmol)的無水CH2Cl2(1.0ml)溶液加入DDQ(14.5mg，0.064mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。蒸發溶劑，粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 7∶3)。得到實施例5-1-4化合物，為白色固體(8.1mg，0.02mmol，56％)。
實施例5-1-53-氯-4-[1-(1-乙基丙基)-7-甲基-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈向中間體18(12mg，0.032mmol)的無水CH2Cl2(1.0ml)溶液加入DDQ(10.5mg，0.042mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。蒸發溶劑，粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 7∶3)。得到實施例5-1-5化合物，為白色固體(8.0mg，0.02mmol，60％)。
實施例5-1-65-(2，4-雙三氟甲基苯基)-1-(1-乙基丙基)-7-甲基-1，3，4，5-四氫-1，5，6，8-四氮雜苊向中間體19(20mg，0.044mmol)的無水CH2Cl2(1.5ml)溶液加入DDQ(12.5mg，0.053mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。蒸發溶劑，粗產物經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 7∶3)。得到實施例5-1-6化合物，為白色固體(11mg，0.024mmol，60％)。
所有分析數據列在下表1中.

表1 實施例6代表性結構(XIb)化合物的合成
中間體204-氯-3-(2-甲氧基乙烯基)-6-甲基-1-(1-丙基丁基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶在0℃ N2下，向氯化(甲氧基甲基)三苯基鏻(70mg，3eq)的無水THF(1ml)溶液滴加1.6M BuLi的THF溶液(128μl，3eq)。將所得紅色反應混合物在0℃下攪拌10分鐘，進一步在室溫下攪拌20分鐘。然后將反應混合物冷卻至0℃，滴加4-氯-6-甲基-1-(1-丙基丁基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-醛(按照文獻所報道的方法制備J.Heterocyclic Chem.；1996，33，303；J.Hetereocyclic Chem.；1992，29，359；Heterocycles；2000，53，11，2415；Tetrahedron；1985，41，10，1945。分析數據NMR(1H，DMSO)δ8.49(s，1H)，7.70(s，1H)，10.4(s，1H)，2.53(s，3H)，4.57(m，1H)，1.92/1.79(m/m，4H)，1.70/0.90(m/m，4H)，0.77(t，6H)；MS(m/z)293[MH]+)(20mg，0.068mmol)的無水THF(1ml)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。然后加入水(3ml)，產物用EtOAc萃取(3×5ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×5ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 95∶5)。得到中間體20，為黃色的油(15mg，0.046mmol，70％)。
NMR(1H，CDCl3)δ(反式)6.98(s，1H)，2.59(s，3H)，6.69(s，1H)，6.81(d，1H)，6.40(d，1H)，4.21(m，1H)，1.82(m，4H)，1.53(m，4H)，0.85(dt，6H)，3.83(s，3H)；(順式)6.94(s，1H)，2.59(s，3H)，7.62(s，1H)，4.21(m，1H)，1.82(m，4H)，1.53(m，4H)，0.85(dt，6H)，6.19(d，1H)，6.30(d，1H)，3.72(s，3H)。
MS(m/z)321[MH]+。
中間體21[4-氯-6-甲基-1-(1-丙基丁基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基]乙醛在0℃ N2下，向中間體20(85mg，0.26mmol)的無水THF(2ml)溶液滴加2N HCl(2ml)。將所得黃色反應混合物在70℃下攪拌1.5小時。然后加入飽和NaHCO3水溶液(1ml)，產物用EtOAc萃取(3×5ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×5ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 8∶ 2)。
得到中間體21，為黃色的油(55mg，0.179mmol，70％)。
NMR(1H，CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.07(s，1H)，7.01(s，1H)，4.21(m，1H)，4.04(s，2H)，2.60(s，3H)，1.82(m，4H)，1.16(m，4H)，0.85(dt，6H)。
MS(m/z)307[MH]+。
中間體22[4-氯-6-甲基-1-(1-丙基丁基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基]乙醇在0℃ N2下，向中間體21(53mg，0.173mmol)的無水MeOH(4ml)溶液加入NaBH4(13.1mg，2eq)。將反應混合物在0℃下攪拌1小時。然后加入水(1ml)，產物用EtOAc萃取(3×5ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×5ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 7∶3)。得到中間體22，為黃色的油(49.8mg，0.161mmol，93％)。
NMR(1H，CDCl3)δ7.37(s，1H)，7.33(s，1H)，4.63(t，1H)，3.64(t，2H)，3.01(t，2H)，2.44(s，3H)，1.77(m，4H)，0.89-1.79(m，4H)，0.77(t，6H)。
MS(m/z)309[MH]+。
中間體233-[2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]-4-氯-6-甲基-1-(1-丙基丁基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶在0℃ N2下，向中間體22(49.8mg，0.173mmol)的無水DMF(2ml)溶液加入咪唑(110mg，10eq)、TBSCl(67mg，2.8eq)、DMAP(2mg，0.1eq)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。然后加入水(1ml)，產物用Et2O萃取(3×5ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×5ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 9∶1)。得到中間體23，為黃色的油(65mg，0.154mmol，95％)。
NMR(1H，DMSO)δ6.95(s/s，1/1H)，4.17(m，1H)，3.91(t，2H)，3.16(t，2H)，2.58(s，3H)，1.80(m，4H)，1.14-1.05(m/m，4H)，0.88(s，9H)，0.85(t，6H)，0.00(s，6H).
MS(m/z)423[MH]+.
中間體24(2，4-雙三氟甲基苯基)-[3-[2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]-6-甲基-1-(1-丙基丁基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-基]胺在室溫N2下，向三(二亞芐基丙酮)鈀(O)(3.7mg，0.1eq)、2-(二環己基膦基)-2’-甲基聯苯(4.4mg，0.3eq)、K3PO4(23mg，2.8eq)的混合物加入中間體23(17mg，0.04mmol)與2，4-雙(三氟甲基)苯胺(18mg，2eq)的無水DME(1ml)溶液(卷帽微波小瓶)。在100℃、150W、60psi下將反應混合物在CEM聚焦微波合成系統(Discovery型)中照射20分鐘(冷卻)。然后加入水(1ml)，產物用Et2O萃取(3×5ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×5ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 95∶5)。得到中間體24，為黃色的油(21.5mg，0.035mmol，88％)。
NMR(1H，DMSO)δ7.83(d，1H)，7.79(dd，1H)，8.16(d，1H)，8.23(s，1)，7.22(s，1H)，7.16(s，1H)，2.43(s，3H)，4.35(m，1H)，3.77(t，2H)，2.94(t，2H)，1.8(m，4H)，1.15，0.95(m/m，4H)，0.79(t；6H)，0.68(s，9H)，-0.31(s，6H).
MS(m/z)616[MH]+.
中間體252-[4-(2，4-雙三氟甲基苯基)-6-甲基-1-(1-丙基丁基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基]乙醇在室溫下，向中間體24(60mg，0.097mmol)的無水DMF(5ml)溶液加入Et3N.3HF(133.6μl，8.4eq)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。然后加入水(2ml)，產物用EtOAc萃取(3×5ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×5ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 9∶1)。得到中間體25，為白色固體(24.4mg，0.048mmol，50％)。
NMR(1H，DMSO)δ9.01(sa，1H)，8.07(d，1H)，7.81(s，1H)，7.76(dd，1H)，7.19(s，1H)，7.10(s，1H)，5.19(sa，1H)，4.35(m，1H)，3.63(m，2H)，2.88(m，2H)，2.38(s，3H)，1.85-1.65(m，4H)，1.20，0.90(m，4H)，0.80(m，6H).
MS(m/z)502[MH]+.
實施例6-1-15-(2，4-雙三氟甲基苯基)-7-甲基-1-(1-丙基丁基)-1，3，4，5-四氫-1，5，6-三氮雜苊在室溫下，向中間體25(23.4mg，0.04mmol)的無水CH2Cl2(2ml)溶液加入Et3N(13.5μl，2eq)和MsCl(6.16μl，2eq)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。然后加入水(2ml)，產物用CH2Cl2萃取(3×5ml)。合并有機層，用飽和NaCl水溶液洗滌(1×5ml)，經無水Na2SO4干燥。過濾固體，蒸發溶劑，得到粗產物，經過快速色譜純化(硅膠，環己烷/EtOAc 9∶1)。得到實施例6-1-1化合物，為黃色的油(6mg，0.012mmol，31％)。
所有分析數據列在下表1中.
表1 實施例7CRF受體結合活性通過標準的放射性配體結合測定法可以評價本發明化合物對CRF受體的結合活性，如DeSouza等所述(J.Neurosci.788-100，1987)。利用各種放射性標記的CRF配體，該測定法可以用于評價本發明化合物對任何CRF受體亞型的結合活性。簡而言之，結合測定法涉及從CRF受體置換放射性標記的CRF配體。
更具體而言，結合測定是這樣進行的，在1.5ml Eppendorf試管內，每管使用大約1×106個細胞，這些細胞被人CRF受體穩定地轉染。每管接受約0.1ml測定緩沖液(例如Dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水，10mM氯化鎂，20μM桿菌肽)，其中含有或不含未標記的蛙皮降壓肽、硬骨魚緊張肽I或CRF(最終濃度1μM)以測定特異性結合，0.1ml[125I]酪氨酸-羊CRF(最終濃度～200pM或根據Scatchard分析法測定的大約KD)和0.1ml含有CRF受體的細胞膜懸液。將混合物在22℃下培養2小時，然后離心分離所結合的與游離的放射性配體。洗滌兩次粒狀沉淀后，拿去粒狀沉淀上面的試管，在γ計數器中監測放射性，效率大約80％。可以利用Munson和Rodbard的非線性最小平方曲線擬合程序LIGAND分析所有放射性配體結合數據(Anal.Biochem.107220，1990)。
實施例8CRF-刺激的腺苷酸環化酶活性也可以通過各種功能測試評價本發明的化合物。例如，可以根據CRF-刺激的腺苷酸環化酶活性篩選本發明的化合物。用于測定CRF-刺激的腺苷酸環化酶活性的測定法可以Battaglia等所述進行(Synapse 1572，1987)，并作修飾使該測定法適用于全細胞制備物。
更具體而言，標準的測定混合物可以含有下列組分，最終體積為0.5ml2mM L-谷氨酰胺、20mM HEPES和1mM IMBX的DMEM緩沖液。在刺激研究中，將轉染有CRF受體的全細胞平板接種在24孔平板內，在37℃下培養1小時，其中各種濃度的CRF相關性和不相關性肽，目的是建立特定受體亞型的藥理級別-順序曲線。培養后，抽吸培養基，將小孔用新鮮培養基小心地沖洗一次，抽吸培養基。為了測定細胞內cAMP的量，向每孔加入300μl 95％乙醇與20mM鹽酸水溶液，將所得懸液在-20℃下培養16至18小時。將溶液移至1.5ml Eppendorf試管內，將小孔用另外200μl乙醇/鹽酸水溶液洗滌，匯集第一部分。將樣本冷凍干燥，然后重新懸浮在500μl乙酸鈉緩沖液中。利用來自Biomedical Technologies Inc.(Stoughton，MA)的單抗體試劑盒進行樣本中cAMP的測量。關于化合物的功能評估，將導致cAMP產生的80％刺激的單一濃度CRF或相關性肽與各種濃度的競爭性化合物(10-12至10-6M)一起培養。
不言而喻，盡管出于說明的目的本說明書已經描述了本發明的具體實施方案，在不背離發明的精神和范圍情況下可以進行各種修改。
因此，本發明僅受權利要求書的限制。
權利要求
1.具有下列結構的化合物 或其立體異構體、前體藥物或藥學上可接受的鹽，其中A是鍵或C＝(Z)；X是氮或CR3；Y是-N＝、-N(R7)-、-C(R8)＝或-O-；Z是O、S或NR9；R1是烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R2是氫、烴基、取代的烴基、烴氧基、烴硫基、鹵素、氰基、鹵代烴基；R3是氫、烴基、取代的烴基、鹵素或鹵代烴基；R4是氫、烴基、取代的烴基、C(O)R1、芳基、取代的芳基、雜環或取代的雜環；R5是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)R1、NR10R11或氰基；R6是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)R1、NR10R11或氰基；R7是氫、烴基、取代的烴基、C(O)R1、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R8是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)烴基、NR10R11或氰基；R9是氫、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R10、R11是相同或不同的，獨立地是氫、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基。
2.權利要求1的化合物，其中X是CR3。
3.權利要求1的化合物，其中X是氮。
4.權利要求1的化合物，具有下列結構 其中R1是烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R2是氫、烴基、取代的烴基、烴氧基、烴硫基、鹵素、氰基、鹵代烴基；R3是氫、烴基、取代的烴基、鹵素或鹵代烴基；R4是氫、烴基、取代的烴基、C(O)R1、芳基、取代的芳基、雜環或取代的雜環；R5是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)R1、NR10R11或氰基；R6是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)R1、NR10R11或氰基；R7是氫、烴基、取代的烴基、C(O)R1、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R8是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)烴基、NR10R11或氰基；R10、R11是相同或不同的，獨立地是氫、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基。
5.權利要求1的化合物，具有下列結構 其中R1是烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；R2是氫、烴基、取代的烴基、烴氧基、烴硫基、鹵素、氰基、鹵代烴基；R3是氫、烴基、取代的烴基、鹵素或鹵代烴基；R4是氫、烴基、取代的烴基、C(O)R1、芳基、取代的芳基、雜環或取代的雜環；R5是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)R1、NR10R11或氰基；R6是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)R1、NR10R11或氰基；R8是氫、鹵素、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、烴氧基、烴硫基、C(O)烴基、NR10R11或氰基；R10、R11是相同或不同的，獨立地是氫、烴基、取代的烴基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基。
6.權利要求1的化合物，選自由下列化合物組成的組7-甲基-1-(1-丙基丁基)-5-[4-(1，1，2-三氟乙基)-2-三氟甲基苯基]-1，2，2a，3，4，5-六氫-1，5，6，8-四氮雜苊；3-甲基-4-[7-甲基-1-(1-丙基丁基)-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈；4-[1-(1-乙基丙基)-7-甲基-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]-3-甲基芐腈；3-氯-4-[7-甲基-1-(1-丙基丁基)-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈；3-氯-4-[1-(1-乙基丙基)-7-甲基-3，4-二氫-1H-1，5，6，8-四氮雜苊-5-基]芐腈；5-(2，4-雙三氟甲基苯基)-1-(1-乙基丙基)-7-甲基-1，3，4，5-四氫-1，5，6，8-四氮雜苊；5-(2，4-雙三氟甲基苯基)-7-甲基-1-(1-丙基丁基)-7-甲基-1，3，4，5-四氫-1，5，6-三氮雜苊。
7.組合物，包含權利要求1的化合物與藥學上可接受的載體或稀釋劑。
8.治療溫血動物表現為CRF過度分泌的病癥的方法，包含對該動物給藥有效量的權利要求4的藥物組合物。
9.權利要求5的方法，其中該病癥是中風。
10.權利要求5的方法，其中該病癥是抑郁。
11.權利要求5的方法，其中該病癥是焦慮。
12.權利要求5的方法，其中該病癥是腸應激綜合征(IBS)。
13.權利要求5的方法，其中該病癥是炎性腸疾病(IBD)。
全文摘要
本發明公開了CRF受體拮抗劑，它們具有治療各種病癥的應用，包括治療溫血動物表現為CRF過度分泌的病癥，例如中風。本發明的CRF受體拮抗劑具有下列式(I)結構包括其立體異構體、前體藥物和藥學上可接受的鹽，其中R
文檔編號C07D487/16GK1529705SQ02813591
公開日2004年9月15日 申請日期2002年5月21日 優先權日2001年5月21日
發明者羅馬諾·迪法比奧, 加布里埃拉·金泰爾, 穆斯塔法·哈達克, 伊維斯·圣丹尼斯, 約翰·P·威廉斯, 圣丹尼斯, P 威廉斯, 埃拉 金泰爾, 法 哈達克, 羅馬諾 迪法比奧 申請人:紐羅克里恩生物科學公司, Sb藥物波多黎各公司