專利名稱：附子苷及同系物，其制備方法和以該化合物為活性成分的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種新的化合物及其同系物，該化合物是從烏頭植物中提取得到的新物質，明確地講是附子苷及同系物，同時公開了其制備方法和以該化合物為活性成分的藥物組合物，屬于中藥有效成分提取技術領域。
背景技術：
本發明所述的附子、川烏分別為毛莨科植物烏頭Aconitumcarmichaeli Debx的子根的加工品和干燥母根，具有回陽救逆，補火助陽，逐風寒濕邪.溫經止痛功效，用于亡陽虛脫，肢冷脈微，陽痿，宮寒，心腹冷痛，虛寒吐瀉，陰寒水腫，陽虛外感，寒濕痹痛及關節疼痛，寒疝作痛，麻痹止痛。在我國附子和烏頭品種資源豐富，分布較廣，有著廣闊的應用前景。
發明內容
本發明提供一種具有藥用價值的附子苷及其同系物。
本發明還提供了從附子、烏頭中提取上述物質的制備方法，適用于工業化生產。
本發明進一步提供了以該化合物為活性成分的藥物組合物，用于制備強心、抗心衰的藥物；同時提供了制備具有升高血壓作用的藥物。
本發明從附子、烏頭(Aconitum carmichaeli Debx的子根、母根)中分離得到一個單體化合物及其同系物，屬于多元醇糖苷，經過藥理活性篩選，該化合物具有多種藥物活性，是現有的附子、烏頭的提取物是不具備的。
本發明所說的化合物具有下述結構通式 其中R表示為-H或-CH2OH或-CHOH-CH2OH。
本發明的提取方法包括以下步驟1、將附子包括烏頭(或取其一組分)粉碎加水煎煮得提取液；2、提取液濃縮后進行醇提，回收醇至無醇味，得水母液；3、也可將提取液濃縮后通過有機溶媒萃取，萃取液分別減壓回收并抽提，得到各有機溶劑提取物及水母液；所述的有機溶媒包括乙醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇；4、將水母液蒸干，用醇如甲醇或乙醇溶解，經硅膠色譜分離，以氯仿、二氯甲烷、甲醇或它們的混合物如氯仿/甲醇為洗脫液；5、硅膠柱層析分離，以氯仿/甲醇(10％-30％)為洗脫液，繼以氯仿/甲醇(40％-100％)洗脫得所需產物。
6、將所得物經HPLC，C18柱，15％甲醇洗脫，分別得到丙三醇2-O-β-D-呋喃半乳糖-(1→3)-β-D-呋喃半乳糖苷及其同系物。
所得單體化合物用醇如甲醇或乙醇重結晶可得本發明純品。
上述化合物是從附子包括烏頭中分離的單體化合物，經過光譜分析，分別具有如下理化特性為淡黃色粉末，易溶于水，飛行時間質譜(m/z)439.1(M+Na+)，該化合物的13C-NMR譜中有15個碳信號，該化合物的DEPT譜中出現4個仲碳信號，δppm68.0，69.1，63.9，62.6和11個叔碳信號.該化合物用H2SO4封閉水解可以檢出β-半乳糖，13C-NMR(DMSO)譜δppm108.6(C1′)，82.3(C2′)，85.4(C3′)，83.7(C4′)，74.8(C5′)，63.9(C6′)，109.2(C1″)，82.7(C2′)，78.0(C3″)，83.1(C4″)，73.5(C5″)，62.6(C6′)67.9(C1)，80.6(C2)和67.3(C3)為丙三醇的三個碳，1H-NMR(DMSO)中δppm5.0(dJ＝7.51H C1′-H)和5.05(dJ＝7.51H C2′-H)).在該化合物的HMBC譜中可以看到端基質子(H1，5.00ppm)與C1′(108.6)相關.表明一個呋喃半乳糖連于C2位。另外一個端基質子(H2，5.05ppm)C3′(85.4ppm)有相關；為丙三醇2-O-β-D-呋喃半乳糖-(1→3)-β-D-呋喃半乳糖苷，定名為附子苷。
上述工藝提取物包括附子苷的同系物，即在附子苷C1或C3位上由-H或-CH2OH或-CHOH-CH2OH取代的同系物，由于也具備了其藥理活性主架結構，在不改變本發明實質內容的情況下，仍屬于本發明的保護范圍。
經過藥理學實驗篩選，上述化合物具有強心，抗心衰及升高血壓的藥理活性。
本發明的藥物組合物含有治療有效量的上述通式的化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學上可以接受的載體。
本發明的化合物和組合物可用于制備治療強心、抗心衰的藥物。
同時還可制備具有升高血壓作用的藥物。
上文的載體是指藥學領域常規的藥物載體，包括稀釋劑、賦形劑，填充劑，粘合劑，濕潤劑，崩解劑，吸收促進劑，表面活性劑，吸附載體。
本發明可以組合物的形式通過口服、直腸、靜脈、肌肉注射或胃腸外給藥方式施用于這種治療的患者。按照藥學領域的常規生產方法制備各種劑型如片劑、顆粒劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑、緩釋劑和注射劑。也可使其活性成分與一種或多種載體或藥物混合，制成所需劑型。
本發明的藥物組合物優選重量比為0.1％～99.5％活性成分，優選含有10-90％，更優選20-80％，最好為70％的本發明化合物。
本發明的施藥量可根據用藥途徑、患者年齡、體重、疾病類型和嚴重程度等變化，日劑量為0.01～10mg/kg。
附子苷及其同系物成分的提取分離和鑒定，闡明了它們功能主治的物質基礎，具有強心，抗心衰，升高血壓的活性。
圖1為附子苷對心室肌細胞動作電位的影響圖。
圖2為附子苷對鈣通道電流的影響(左上)正常對照組(中)3×10-5μg/ml組，(下)30×10-5μg/ml組，(右下)為電流-電壓關系曲線。
圖3附子苷對正常大鼠收縮壓的影響曲線。
圖4附子苷對正常大鼠舒張壓的影響曲線。
圖5附子苷對休克大鼠收縮壓的影響曲線。
圖6附子苷對休克大鼠舒張壓的影響曲線。
下述的藥理實驗證實了本發明化合物的強心，抗心衰及升高血壓藥理活性。
實驗例1附子苷對豚鼠離體工作心的作用1.材料和方法1.1 Langendoff離體心臟灌流法取豚鼠18只，隨機分為三組，每組6只，即對照組，給藥高、中劑量組。將豚鼠猛擊頭部致死后，迅速開胸、取心，按常規生理技術，做肺靜脈及左心室插管并順向罐流心臟。保持灌充95％O2和5％的CO2混合氣體，保持心臟前負荷在1.17kPa，后負荷在5.38kPa。多導生理計錄儀(RM-6000，日本)同步記錄左室內壓(LVSP)、左室內壓最大上升下降速率(±dp/dtmax)、左室舒末壓(LVEDP)，記錄儀紙速為100mm/s。實驗中灌流液為Kerbs-Henselaf液(mmol/L)NaCl 140，KCl 5.4，MgCl2·5H2O 1.0，CaCl2·2H2O 1.8，Glucose 5.0，丙酮酸鈉4.0，Tris 10，用HCl調pH為7.2-7.4(室溫29℃)。
1.2 心室肌細胞動作電位的記錄在離體灌流的豚鼠心臟上，使用懸浮玻璃微電極，按微電極電生理常規技術，胞內引導心室肌細胞的動作電位，經微機(power-leb，ssss)分析以下電生理參數動作電位時程(APD50)、動作電位幅值(APA)、超射(OS)和最大除極速度(Vmax)。
1.3 數據的統計學處理本文中數據用平均數±標準差表示(X±S)，各組之間的數值比較采用樣本均數t-檢驗進行統計學分析
2.實驗結果2.1 附子苷對豚鼠離體心功能的影響分組與給藥同1.1。在離體豚鼠心臟灌流模型穩定后，分別記錄LVSP、±dp/dtmax和HR。然后灌入不同劑量附子苷(3μg·mL-1、30μg·mL-1)，10分鐘后分別記錄上述各項指標，可以看出，附子苷可使心臟收縮性能各項指標明顯增加，左室內壓(LVSP)和左室內壓最大上升下降速率(±dp/dtMAX)呈現劑量依賴性升高，說明在一定范圍內，不同劑量的附子苷對心室肌有正性肌力作用。其結果見表1表1附子苷對離體工作心功能的影響(Table 1 Effects of Fuzigan)on isolated working heart in guinea-pig)LVSP -dp/dtMAX+dp/dtMAXHR(p/kPa)(p/kPa·S-1)(p/kPa·S-1) (beat/min)Control 9.87±1.48 496.544±19.08707.42±35.73189.24±26.72Fuzigan(3μg·mL-1) 12.48±1.77*513.84±21.11748.14±34.57*175.37±23.13Fuzigan(30μg·mL-1) 14.76±1.91***525.63±24.59*792.28±37.41***163.52±31.42n＝6，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 VS control group.
2.2 附子苷(3μg/mL、30μg/mL)對心室肌細胞動作電位的影響分組與給藥同1.1。在離體豚鼠心臟灌流模型穩定后，使用懸浮玻璃微電極方法，引導心室肌細胞動作電位，并記錄APD50、APA、OS和Vmax。在灌流液中加入附子苷后(3μg·mL-1、30μg·mL-1)，與正常對照組相比，附子苷使APD50明顯增加，并具有劑量依賴性。而大劑量的附子苷(30μg·mL-1)可使心室肌細胞的動作電位的APA和OS的參數增加，心率不變。其結果見表2和圖1。
表2附子苷對心室肌細胞動作電位的影響
(Table 1 Effects of Fuzigan on isolated working heart in guinea-pig)APD50APA OS Vmax(t·mS-1)(V·mV-1) (V·mV-1) (V·S-1)Control 311.28±23.78 98.76±10.23 24.54±3.63143.54±26.12Fuzigan(3μg·mL-1)341.71±25.12*101.23±17.89 25.22±4.86151.21±29.70***Fuzigan(30μg·mL-1) 376.76±26.27***115.73±18.23*29.45±4.57*157.52±31.42n＝6，*P＜0.03，**P＜0.01，***P＜0.001 VS control group.
3討論實驗結果表明在離體器官灌流模型的標本上，附子苷可使豚鼠離體心臟的LVSP、±dp/dtMAX明顯增加，并呈現出一定的劑量依賴性，而心率沒有改變，表明附子苷可導致心肌的收縮能力的增加，產生正性肌力的效應。這一結果初步揭示附子苷對心肌功能的基本作用。
一般認為，心室肌細胞動作電位復極達50％時的時程，即為APD50來表示平臺期。而平臺期的長短，主要取決于鈣離子經L型鈣通道內流和鉀離子經延遲外向鉀通道的外流。豚鼠心肌細胞動作電位的平臺期十分明顯，是闡述藥物對生物電作用的主要依據，在豚鼠心室肌細胞動作電位實驗的結果表明，附子苷具有明顯的延長APD50的作用，并呈現出一定的劑量依賴性。同時，附子苷除使APD50延長外，還可使APA和OS等參數增加，表明附子苷激活與心肌細胞除極化有關的內向離子流，即鈉電流或鈣電流有關。
上述結果還提示，附子苷可能激活L型鈣通道，使大量細胞外鈣離子進入細胞內，產生心肌收縮能力的增強。也可能激活心室肌細胞膜上的鈉通道，通過鈉-鈣交換機制，產生的正性肌力作用。本課題組應用膜片鉗技術，觀察了附子苷對鈣離子通道的作用，其結果與本實驗以報道相一致。
實驗例2附子苷對豚鼠心室肌細胞鈣通道的影響1.材料和方法1.1 成年豚鼠心室肌細胞的分離取雌性成年豚鼠，用酚巴比妥鈉(30mg/kg i.p)麻醉后做氣管插管并進行人工呼吸后，開胸做冠狀動脈插管，然后取心臟并固定于langendorff灌流架上，從主動脈逆向灌流2min后，換無Ca2+臺式液再灌5min，最后換膠源酶(15mg/100ml，Japan)的無Ca2+臺式液灌流10min，將心臟從房室溝處剪下心室部分，放入含細胞貯存液的小燒杯中，用眼科剪將心室剪成1mm3小碎塊，在37℃的水浴箱中輕輕振蕩10min，收集已分離的單個心室肌細胞，用儲存液離心沖洗兩次在放入4℃冰箱中保存，以便記錄時使用。灌流過程中持續通O2，灌流液溫度控制在37℃，灌流速度8ml/min(室溫29℃)。
1.2 分離細胞所用溶液含Ca2+臺式液成分為(mmol/ml)NaCl 143，KCl 5.4，CaCl-2H2O 1.8，MgCl2-6H2O 0.5，NaH2PO4-2H2O 0.25，HEPES 5。用NaOH調ph值至7.4。無Ca2+臺式液去掉上述臺式液配方中的Ca2+成分即可，其余成分均相同。
細胞貯存液(mmol/ml)KOH 70，L-谷氨酸50，KCl 40，Taurine 20，KH2PO420，MgCl2-6H2O 3，Glucose 10，HEPES 10，EGTA0.5。用KOH調ph值至7.4。
1.3 全細胞通道電流的記錄方法用兩次拉制法將毛坯(上海腦研所生產)拉成微電極，其尖端真徑范圍為0.85-1μm。拋光、沖灌電極液后，電阻范圍為1-3MΩ。將微電極經微電極夾持器的側管與注射器相連。邊用注射器向微電極加正壓，邊將微電極緩緩插入浴液，直至接觸心肌細胞，去掉正壓，轉而用注射器抽吸，形成10-20cmH2O的負壓。當電極尖端與細胞膜表面形成1-5GΩ封接電阻時，用力吸破電極尖端上的膜片，形成全細胞記錄。
1.4 全細胞鈣通道電流的測定所用溶液鈣通道電極液(mmol/ml)CsCl 130，ATP 2，EGTA 5，HEPES 5，ETCsOH調PH值至7.3。細胞外液(mmol/ml)CaCl22H2O 2，MgCl2，1；T etraethyammopnium-Cl(TMA-Cl)135，Glucose 10，4-Aminopyridine(4-AP)5，HEPES 10，ET TMA-OH調PH至7.41.5 數據的采集及分析由計算機軟件控制產生數字脈沖，經數/模(D/A)轉換成模擬脈沖電壓信號，控制細胞的膜電位。電流信號通過0.1GΩ探頭經膜片鉗放大器的電流一電壓轉換輸入到模/數(A/D)轉換卡變成數字化信號，其頻率為10KHz，低通濾波器濾波頻率為3KHz。
1.6 數據的統計學處理本文中數據用平均數±標準差表示(X±S)，各組之間的數值比較采用樣本均數t—檢驗進行統計學分析。
2.實驗結果2.1 附子苷(30μg/ml)和(300μg/ml)對心室肌細胞鈣通道的影響對照組將保持電壓控制在-50mV，鈣通道在去極化至-40mV時被激活，最大內向峰值鈣電流在0mV(-0.28±0.03，nA)，當加入附子苷7分鐘后，其峰值鈉電流分別增加到(-0.35±0.15、-0.39±0.16，nA)(6例)，鈣電流峰值分別增加了48％、50％，分別高于對照組(P＜0.01)。翻轉電位約在50-60mV，無統計學意義。見圖2。
實驗觀察期間未見電流出現自然衰減現象(Run down)。
上述實驗結果提示附子苷在一定范圍內對豚鼠心室肌細胞鈣通道有激動作用。
3.討論細胞外Ca2+離子進入細胞內，使細胞內游離Ca2+離子濃度增加，是細胞生理功能的重要物質基礎，細胞外V進入細胞內受多條途徑的控制，其中細胞膜上的電壓依賴性鈣離子通道(voltage-dependentcalcium channel，VDC)對細胞內的Ca2+離子濃度增加起著非常重要的作用。在其正常的電壓范圍內，鈣通道的開放與關閉呈現出一定規律性，調控Ca2+離子進入細胞。當鈣離子通道受某些因素影響時，通道蛋白發生改變，使其在正常的電壓范圍內，鈣通道的開放與關閉發生變化，導致細胞內Ca2+離子濃度的增加。另外受體操從性鈣通道，通過興奮性G蛋白偶聯的信號，在細胞內通過多條途徑，調控著鈣離子通道，并對細胞外Ca2+離子進入細胞內也有重要作用。
我們的實驗結果顯示在一定范圍內，單次大計量應用附子苷(5μg/mL)可使鈣電流幅值明顯增加(P＜0.01＝。而累計增加劑量(50μg/mL)時，對鈣通道電流的增加并不顯著，其結果說明附子苷對鈣通道的作用，是在(5-50μg/mL)濃度范圍內，附子苷通過鈣通道，使細胞外Ca2+離子流入細胞內，并使心室肌細胞產生生理學效應。
4.結論附子苷對鈣通道有激動作用，其作用機制是激活鈣通道，增加細胞內鈣離子濃度，產生生理學效應。
實驗例3附子苷對正常及休克大鼠血壓等的作用1.實驗材料動物Wistar大鼠，雌雄各半，體重200±16g，由吉林大學實驗動物部提供。
藥物 附子苷由吉林省中醫中藥研究院提供。
儀器 LBS-2B型二道生理記錄儀，成都儀器廠產。
2.實驗方法取大鼠18只，隨機分為3組，每組6只，將大鼠腹腔注射水合氯醛(0.3g/kg)麻醉后，背位固定于蛙板，剪頸部毛后，切開頸部皮膚，分離氣管，行氣管插管。于大鼠腹股溝部，分離股動脈、股靜脈。股動脈插管，連接壓力換能器以記錄血壓，連接肢體導聯，記錄II導心電圖，同步記錄心率。各項指標均記錄于二導記錄儀。各項指標穩定15分鐘后，給藥高、低劑量組靜脈注射給藥，空白對照組靜注等量容積生理鹽水。
休克大鼠模型制備實驗分組及給藥同上所示，各組動物血壓穩定后，按上述方法給藥，觀察其對失血性休克血壓、心電及心率的變化。由頸動脈插管用注射器緩慢取血至血壓降至5.3kPa，在確保維持血壓穩定25分鐘無血壓回升時，認定模型成立。
數據分析所有數據均采用組間t-檢驗法，均值(x)±標準差(SD)表示。
3.結果3.1對正常大鼠收縮壓的影響(見表3)表3.附子苷對正常大鼠收縮壓的影響(x±S，n＝6)
組別 給藥前 給藥后min(kPa)kPa 5 1015 2030給藥組(0.05g/kg) 14.04±3.8815.96±4.1315.36±3.4615.0±3.39 14.28±3.8114.16±3.51*給藥組(0.1g/kg) 13.44±3.1015.12±3.2415.36±3.3214.64±3.1013.44±2.7413.2±2.40生理鹽水組12.68±1.2013.90±0.9012.70±1.0 12.50±1.2013.40±0.5011.21±0.90各組給藥前后對比，*p＜0.05(與鹽水組比較)。參見圖3。
3.2 附子苷對正常大鼠舒張壓的影響(見表4)表4附子苷對正常大鼠舒張壓的影響(x±S，n＝6)給藥后組別 給藥前5min 10min 15min 20min 30min給藥組(0.05g/kg) 11.04±4.1012.24±4.1711.64±4.01 11.04±4.0111.15±4.4110.08±4.23給藥組(0.1g/kg) 10.56±3.6411.76±3.5412.0±3.3911.28±3.0110.32±2.7610.32±2.76生理鹽水組 12.68±1.2013.90±0.9012.70±1.012.50±1.2013.40±0.5011.21±0.90各組給藥前后對比，p＞0.05.。參見圖4。
3.3 附子苷對休克大鼠收縮壓的影響(見表5)表5附子苷對休克大鼠收縮壓的影響(x±S，n＝6)組別 給藥前 給藥后min(kPa)kPa 51015 20 30給藥組(0.05g/kg) 14.14±3.88 9.12±2.38*9.60±2.65* 9.92±2.83** 10.08±2.85** 9.84±2.56**給藥組(0.1g/kg) 13.58±3.10 8.88±2.17*9.12±1.82* 10.32±1.82** 10.32±1.82** 10.32±1.82**生理鹽水組13.68±1.20 6.70±1.37 6.53±1.0 5.82±1.245.65±0.97 5.60±0.90給藥組與鹽水組比較*p＜0.05 **p＜0.01。參見圖5。
3.4 附子苷對休克大鼠舒張壓的影響(見表6)表6附子苷對休克大鼠舒張壓的影響(x±S，n＝6)
組別 給藥前給藥后min(kPa)kPa5 10152030給藥組(0.05g/kg) 11.05±3.885.40±1.85 5.40±1.855.88±1.556.12±1.556.12±1.76給藥組(0.1g/kg)10.56±3.645.68±1.18 5.92±0.816.88±1.186.88±1.186.88±1.18生理鹽水組 13.68±1.206.70±1.37 6.53±1.0 5.82±1.245.65±0.975.60±0.90參見圖6。
3.5 對心電圖的影響、對正常及失血性休克大鼠，心電圖各波及P-Q間期、P-P間期無明顯影響(p＞0.05)3.6 對心率的影響給藥各組及對照組對心率無明顯影響，但失血性休克，血液有增加趨勢，但與生理鹽水對照組比較無明顯差異。
4.討論前期研究工作發現，從附子中分離得到的附子苷對離體工作心臟具有正性肌力作用。對豚鼠心肌細胞單鈣具有激活作用。僅從整體心肌和細胞水平尚難以表達附子苷的作用。本實驗以失血性休克大鼠為模型，觀察了附子苷對血壓等的作用，結果表明，附子苷高低劑量組可使收縮壓明顯升高(p＜0.05，p＜0.01)，對舒張壓無明顯影響，具有起效快，持續時間較長，量效關系較明顯的特點。特別是僅收縮壓增加而舒張壓不變，可表現為脈壓差增大，對休克狀態下的微循環灌注更為有利。另外，本實驗也觀察到對正常大鼠也有一定的升壓作用，在給藥后30分鐘時間點具有統計學意義(p＜0.05)。本實驗結果支持細胞水平的實驗結論。
具體實施例方式實施例1取附子5kg去除雜質粉碎成粗粉，加水30升，加熱煮沸條件下提取3次每次1小時，合并各次的提取液，濃縮至藥材的2倍，加乙醇使醇濃度達到60％，放置，濾過，回收乙醇至無醇味得水母液，將水母液蒸干，用甲醇溶解，經硅膠柱層析分離，以氯仿/甲醇(10％-30％)洗脫，繼以氯仿/甲醇(40％-100％)洗脫得提取物，經HPLC C18色譜柱分離15％甲醇洗脫得附子苷丙三醇2-O-β-D-呋喃半乳糖-(1→3)-β-D-呋喃半乳糖苷(0.5克)。
實施例2取附子5kg、烏頭5kg，混合后粉碎成粗粉，加水10倍量，加熱(室溫至所用液體沸點)條件下提取4次每次1.5小時，合并各次的提取液，濃縮適當體積，依次用乙醚、醋酸己酯、四氯甲烷萃取后，萃取液分別減壓回收并抽提的乙醚提取物，醋酸乙酯提取物、四氯甲烷提取物及水母液，將水母液蒸干，用甲醇溶解，經硅膠柱層析分離，以氯仿/甲醇(10％-30％)洗脫，繼以氯仿/甲醇(40％-100％)洗脫得提取物，經HPLC C18色譜柱分離25％甲醇洗脫得附子苷同系物丁四醇2-O-β-D-呋喃半乳糖-(1→3)-β-D-呋喃半乳糖苷(0.3克)。
實施例3制備強心片劑取實施例1或實施例2制備的化合物附子苷提取物20克，加人賦形劑藥用淀粉20克，混合均勻，造粒整粒壓片，制得片劑，每片含化合物附子苷提取物200毫克。
實施例4制備本發明抗心衰膠囊取實施例1或實施例2制備的化合物附子苷提取物20克，加人賦形劑藥用淀粉30克，充分混合均勻，裝入膠囊，每粒含化合物附子苷提取物200毫克。
實施例5制備強心注射劑取實施例1或實施例2所得產物用甲醇重結晶得本發明純品附子苷10克，加入注射用水50ml溶解，加入活性炭0.5g，100℃加熱15分鐘，濾過，濾液加注射用生理鹽水1950ml溶解，微孔濾膜(φ0.2μm)濾過，經高壓滅菌后，無菌分裝安瓶中，每瓶2ml，即得。
權利要求
1.一種化合物附子苷，具有以下通式
2.根據權利要求1的化合物，其中R為-H或-CH2OH或-CHOH-CH2OH。
3.根據權利要求2化合物的制備方法，包括以下步驟1)將附子包括烏頭(或取其一組分)粉碎加水煎煮得提取液；2)提取液濃縮后進行醇提，回收醇至無醇味，得水母液；3)也可將提取液濃縮后通過有機溶媒萃取，萃取液分別減壓回收并抽提，得到各有機溶劑提取物及水母液；所述的有機溶媒包括乙醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇；4)將水母液蒸干，用醇如甲醇或乙醇溶解，經硅膠色譜分離，以氯仿、二氯甲烷、甲醇或它們的混合物如氯仿/甲醇為洗脫液；5)硅膠柱層析分離，以氯仿/甲醇(10％-30％)為洗脫液，繼以氯仿/甲醇(40％-100％)洗脫得所需產物。6)將所得物經HPLC，C18色譜柱用25％甲醇洗脫，分別得到丙三醇2-O-β-D-呋喃半乳糖-(1→3)-β-D-呋喃半乳糖苷及其同系物。
4.根據權利要求1、2中任意一項的化合物在制備治療強心、抗心衰、升高血壓作用的藥物中的應用。
5.用于制備治療強心、抗心衰的藥物組合物，其中含有治療有效活性成分的權利要求1化合物和藥學上可接受的載體。
6.用于制備具有升高血壓作用的藥物組合物，其中含有治療有效活性成分的權利要求1化合物和藥學上可接受的載體。
7.根據權利要求5、6所述的藥物組合物，優選重量比為0.1％～99.5％活性成分，優選含有10-90％，更優選20-80％，最好為70％。
全文摘要
本發明公開一種新化合物附子苷，具有以下通式，其中R為－H或－CH
文檔編號C07H15/04GK1488636SQ0213309
公開日2004年4月14日 申請日期2002年10月8日 優先權日2002年10月8日
發明者徐東銘, 徐雅娟, 楊世杰, 趙宏峰 申請人:吉林省中醫中藥研究院