專利名稱：取代的丙烯?；舅顾匮苌镌谥委熍c高水平谷胱甘肽相關(guān)的腫瘤中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及取代的丙烯?；舅顾?distamycin)衍生物的用途、特別涉及α-溴-和α-氯丙烯?；舅顾匮苌镌谥委熍c高水平谷胱甘肽和/或谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶族相關(guān)的腫瘤中的用途。
更具體地說，本發(fā)明涉及使用上述丙烯?；舅顾匮苌镏委熢\斷為超表達下文稱作GSH/GSTs的谷胱甘肽/谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶族的腫瘤的人體的方法。
GSH對由大量毒性損害產(chǎn)生的細(xì)胞損傷起關(guān)鍵的保護作用。前期臨床和臨床研究已經(jīng)確定了GSH/GSTs超表達與癌癥或?qū)煹陌┌Y反應(yīng)率的相關(guān)性?；贕SH的解毒系統(tǒng)(由GSH和與GSH相關(guān)的酶GSTs組成)的改變也與對幾種抗腫瘤藥的可變反應(yīng)能力有關(guān)。
GSH和GSTs普遍存在于幾種人體組織中，諸如例如血細(xì)胞、血漿、血清、循環(huán)胚細(xì)胞和病理性(腫瘤)組織。就一般涉及GSH和GSTs的情況而言，參見《癌癥研究》(Cancer Res.)5443 13-4320(1994)；《英國癌癥雜志》(Brit.J.Cancer)72(2)324-326(1995)；DDT 3113-121(1998)。
GSTs且最顯著的是GST-π以高水平在大量腫瘤類型中存在。已經(jīng)在幾種腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)GSH/GSTs的活性比正常組織增加，所述的腫瘤組織例如包括胃腸腫瘤(包括食管腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤、肝細(xì)胞腫瘤和胰腺腫瘤)；子宮癌和卵巢癌；頭頸癌；肺癌和NSCL癌以及來源于結(jié)腸、胃和膀胱的轉(zhuǎn)移型肝臟腫瘤[《癌癥研究》(Cancer Res.)495225-5229(1989)；《生化和分子生物學(xué)臨床回顧》(ClinicalReviews in Biochemistry and Molecular Biology)27(4.5)337-386(1992)]。
為了確定GSH/GSTs對腫瘤細(xì)胞對細(xì)胞毒性藥物的失活和/或耐受性的作用，已經(jīng)開發(fā)了兩種主要的實驗手段。它們中的第一種所涉及的GSH/GSTs水平或表達和活性提高與耐藥性水平提高有關(guān)的研究。這種手段還包括通過諸如BSO(buthionine sulphoximine)這樣的GSH抑制劑調(diào)節(jié)GSH/GSTs活性以便避免耐藥性或使其逆轉(zhuǎn)的步驟。在轉(zhuǎn)染研究中所用的第二種手段提供了直接的功能證據(jù)、即GSH/GSTs導(dǎo)致耐藥性。
存在的證據(jù)是GSH/GSTs對耐烷基化劑(例如美法侖、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺氮芥、BCNU)和諸如順鉑、卡鉑和奧沙利鉑這樣的鉑絡(luò)合物中起主要作用[《生化藥理學(xué)》(Biochem.Pharmacol)353405-3409(1986)]。近來，GSH在耐藥性中的作用與多重藥物耐受性相關(guān)的蛋白質(zhì)(MRP)活性的調(diào)節(jié)有關(guān)，所述的蛋白質(zhì)(MRP)產(chǎn)生對不同細(xì)胞毒性劑的耐受性，所述的細(xì)胞毒性劑包括蒽環(huán)類抗生素(例如多柔比星、伊達比星、表柔比星及其衍生物)；表葉毒素(epidophyllotoxins)(例如依托泊苷和替尼泊苷)；長春花生物堿(例如長春堿和長春新堿)；和紫杉烷類(例如帕尼特西(paclitaxel)和多西特西(docetaxel)[《歐洲癌癥雜志》(Eur.J Cancer)32945-957(1996)；《腫瘤學(xué)研討會》(Seminars in Oncol.)24(5)580-591，(1997))。
目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明目的中所列的帶有α-溴-和α-氯丙烯酰基基團的那些化合物與其它眾所周知的細(xì)胞毒性司他霉素衍生物不同，它們令人意外地可有效治療超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤，已知這些腫瘤難以對常用抗腫瘤療法起反應(yīng)和/或一旦給予了治療用的細(xì)胞毒性劑則產(chǎn)生耐受性。
下文稱作司他霉素和司他霉素-樣衍生物的司他霉素A及其類似物在本領(lǐng)域中公知用作用于抗腫瘤療法的細(xì)胞毒性劑。
司他霉素A是具有抗病毒和抗原生動物活性、帶有多吡咯結(jié)構(gòu)的抗生素物質(zhì)[《自然》(Nature)2031064(1964)；《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)32774-778(1989)]。所有以申請人本身的名義和引入作為參考的國際專利申請WO 90/11277、WO 98/04524、WO 98/21202、WO 99/50265、WO 99/50266和未審未公開的國際專利申請PCT/EP00/11714(2000年11月23日提交并要求英國專利申請9928703.9的優(yōu)先權(quán))中公開了丙烯?；舅顾匮苌?，其中司他霉素的脒基基團可以任選地被諸如例如氰脒基、N-甲基脒基、胍基、氨基甲?；?、偕胺肟、氰基等這樣的含氮端基取代和/或其中所述的司他霉素的多吡咯結(jié)構(gòu)或其部分被不同的碳環(huán)或雜環(huán)部分取代。
因此，本發(fā)明的第一個目的是通式(I)的α-鹵代丙烯酰基司他霉素衍生物的化合物或其藥物上可接受的鹽在制備用于治療超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤的藥物中的用途 其中R1是溴原子或氯原子；R2是司他霉素或司他霉素樣結(jié)構(gòu)。
按照本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案，上述通式(I)的化合物用于治療超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤且這些腫瘤包括胃腸腫瘤，包括食管腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤、肝細(xì)胞腫瘤和胰腺腫瘤；子宮癌和卵巢癌；頭頸癌；肺癌和NSCL癌以及來源于胃腸癌、子宮癌、卵巢癌和肺癌的轉(zhuǎn)移型肝臟腫瘤。
本發(fā)明的另一個實施方案是通式(I)的化合物在治療超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤中的用途，其中所述的GSH/GSTs系統(tǒng)的超表達是先前使用例如烷基化劑、鉑衍生物或蒽環(huán)類抗生素的一線化療治療這樣的化療療法所導(dǎo)致的。
更具體地說，上述先前的化療療法包括使用下列藥物的步驟烷基化劑，例如美法侖、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺氮芥和BCNU；鉑絡(luò)合物，例如順鉑、卡鉑和奧沙利鉑；蒽環(huán)類抗生素，例如多柔比星、伊達比星、表柔比星及其衍生物；表葉毒素(epidophyllotoxins)，包括依托泊苷和替尼泊苷；長春花生物堿，例如長春減和長春新減；紫杉烷類，例如帕尼特西和多西特西。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括由所考慮的單獨或混合形式的通式(I)化合物以及通式(I)化合物的代謝物和藥物上可接受的生物前體(另外稱作前體藥物)所覆蓋的所有可能的異構(gòu)體的用途。
在通式(I)的化合物中，除非另有說明，我們將術(shù)語司他霉素或司他霉素樣結(jié)構(gòu)R2指例如通過取代司他霉素和/或其多吡咯結(jié)構(gòu)或其部分的末端脒基部分而在結(jié)構(gòu)上與司他霉素本身極為相近的任意部分。
本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案提供了如上所述的通式(I)的化合物的用途，其中R1具有上述報導(dǎo)的含義且R2是下列通式(II)的基團 其中m是0-2的整數(shù)；n是2-5的整數(shù)；r是0或1；X和Y相同或不同且就各雜環(huán)而言獨立為氮原子或CH基團；G是亞苯基、含有1-3個選自N、O或S的雜原子的5或6元飽和或不飽和雜環(huán)或它是下列通式(III)的基團 其中Q是氮原子或CH基且W是氧原子或硫原子或是基團NR3，其中R3是氫或C1-C4烷基；
B選自下列基團組成的組 -CN；-NR5R6；-CONR5R6；-NHCONR5R6其中R4是氰基、氨基、羥基或C1-C4烷氧基；R5、R6和R7相同或不同且是氫或C1-C4烷基。
在本說明書中，除非另有說明，我們將術(shù)語C1-C4烷基或烷氧基指選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基的直鏈或支鏈基團。
本發(fā)明更優(yōu)選的實施方案提供了上述通式(I)的化合物的用途，其中R1是溴或氯；R2是上述通式(II)的基團，其中r是0、m是0或1、n是4且B具有上述報導(dǎo)的含義。
更優(yōu)選的是通式(I)的化合物的用途，其中R1是溴或氯；R2是上述通式(II)的基團，其中r是0、m是0或1、n是4、X和Y均為CH基且B選自下列基團 -CN；-CONR5R6；-NHCONR5R6其中R4是氰基或羥基且R5、R6和R7相同或不同且是氫或C1-C4烷基。
通式(I)的化合物的藥物上可接受的鹽是那些與藥物上可接受的無機酸或有機酸形成的鹽，所述的無機酸或有機酸諸如例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、丙二酸、檸檬酸、酒石酸、甲磺酸、對甲苯磺酸等。
制備用于治療超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤的藥物的通式(I)的優(yōu)選化合物、其任選地可以是藥物上可接受的鹽的形式、優(yōu)選與鹽酸形成的鹽的形式的實例為1.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}乙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽；2.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽；3.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽；4.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺鹽酸鹽；5.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-3-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺鹽酸鹽；6.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-3-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺；7.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}乙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-氯丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽；8.N-(5-{[(5-{[(3-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽；9.N-(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽；和10.N-{5-[({5-[({5-[({3-[(氨基羰基)氨基]丙基}氨基)羰基]-1-甲基-1H-吡咯-3-基}氨基)羰基]-1-甲基-1H-吡咯-3-基}氨基)羰基]-1-甲基-1H-吡咯-3-基}-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺。
上述特別如此或通過-般通式鑒定的通式(I)的化合物是公知的或易于按照例如上述提到的國際專利申請WO 90/11277、WO 98/04524、WO 98/21202、WO 99/50265和WO 99/50266以及未審的國際專利申請PCT/EP00/11714中的已知方法制備。
藥理學(xué)本發(fā)明通式(I)的化合物可非常有效地治療與高水平GSH/GSTs相關(guān)的腫瘤且用于治療難以對常用化療劑起反應(yīng)乃至對其不敏感的幾種腫瘤。
已經(jīng)通過測試通式(I)的化合物對顯示的GSH/GSTs水平高于親代細(xì)胞系顯示水平的化學(xué)抗性腫瘤細(xì)胞亞系的作用而研究了GSH對通式(I)的化合物的細(xì)胞毒性活性的作用。所用的模型是顯示比正常L1210(7.7nmole/106個細(xì)胞)細(xì)胞系增加3倍量GSH(25.8nmole/106個細(xì)胞)的美法侖(L-PAM)抗性鼠白血病模型(L1210/L-PAM)(表I).
測試的通式(I)的化合物是N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}乙基)氨基]羰基-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽-內(nèi)部編碼PNU 166196；和N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽-內(nèi)部編碼PNU 151807。
將更常稱作他莫司汀的司他霉素衍生物3-[1-甲基-4-[1-甲基-4-[1-甲基-4-[1-甲基-4-[N，N-雙(2-氯乙基)氨基]苯甲酰胺基]吡咯-2-甲酰胺基]吡咯-2-甲酰胺基]吡咯-2-甲酰胺基]丙酰脒(propionamidine)和L-PAM作為相同實驗條件下的對照品測試。
表I中報導(dǎo)的數(shù)據(jù)清楚地表明通式(I)的化合物對L1210/L-PAM細(xì)胞的細(xì)胞毒性比對L1210細(xì)胞增加了3倍(PNU 166196分別＝IC500.49和1.62ng/ml；PNU 151807分別＝IC500.26和0.86ng/ml)。他莫司汀對兩種細(xì)胞系的細(xì)胞毒性相差無幾；相反，L-PAM對L1210/L-PAM細(xì)胞的細(xì)胞毒性低于對L1210細(xì)胞的細(xì)胞毒性。表I
a)與所述化合物一起保溫48小時的細(xì)胞。通過對存活細(xì)胞計數(shù)來確定生長抑制率。
已經(jīng)通過測定使用BSO(L-S.R buthionine sulphoximine)的前期治療對于A2780人卵巢細(xì)胞對其細(xì)胞毒性和編程性細(xì)胞死亡作用的敏感性的影響而獲得了GSH水平對通式(I)化合物細(xì)胞毒性的相關(guān)性的進一步證據(jù)。
BSO是一種GSH生物合成中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶限速步驟的有效和特異性抑制劑。用BSO使胞內(nèi)GSH缺失這一過程顯著提高了許多抗腫瘤藥物的細(xì)胞毒性，所述的抗腫瘤藥物主要是諸如美法侖和苯丁酸氮芥這樣的烷基化劑和諸如順鉑、卡鉑和奧沙利鉑這樣的鉑化合物[《化學(xué)與生物相互作用》(Chemico-Biological Interactions)111239-254(1998)]。
正如表II中所示，作為通式(I)的有代表性的化合物的PNU 166196的細(xì)胞毒性(生長抑制百分比)和編程性細(xì)胞死亡作用(具有編程性細(xì)胞死亡形態(tài)的細(xì)胞百分比)在使用BSO預(yù)治療的A2780細(xì)胞中比未用BSO治療的A2780細(xì)胞中顯著降低。
表II
(a)與所述化合物一起保溫48小時的細(xì)胞。通過對存活細(xì)胞計數(shù)測定生長抑制率且通過形態(tài)檢查來估計編程性細(xì)胞死亡率。
(b)在PNU 166196治療前和治療過程中與BSO接觸24小時的細(xì)胞。
PNU 166196在用BSO預(yù)治療的A2780細(xì)胞中表現(xiàn)出的細(xì)胞毒性比在未治療的細(xì)胞中表現(xiàn)出的細(xì)胞毒性降低(在3000ng/ml下的生長抑制率分別為38％和77.5％)。另外通過測試具有編程性細(xì)胞死亡形態(tài)+/-BSO的細(xì)胞的百分比證實了PNU 166196在用BSO預(yù)治療的腫瘤細(xì)胞中的功效降低(在3000ng/ml下的生長抑制率分別為11.5％和74.5％)。
上述結(jié)果支持了下列證據(jù)即高水平GSH的存在顯著影響了通式(I)的α-溴-和α-氯丙烯?；舅顾匮苌锏捏w外活性且由此這些化合物特別用于治療超表達GSH/GSTs的腫瘤。
可以通過例如非腸道這樣的常規(guī)途徑、例如通過靜脈內(nèi)注射或輸注、肌內(nèi)、皮下、局部或口服給予本發(fā)明的化合物。
劑量取決于患者的年齡、體重和疾病情況并取決于給藥途徑。例如，對成年人給予的合適劑量可以在約0.05-約100mg前劑量的范圍、每天1-4次。
藥物組合物可以含有有效量的通式(I)的化合物作為活性物質(zhì)與一種或多種藥物上可接受的賦形劑且通常按照下列常規(guī)方法制備。
例如，靜脈內(nèi)注射或輸注用溶液可以含有無菌水作為載體或優(yōu)選它們可以是無菌等滲鹽水溶液的形式。肌內(nèi)注射用的混懸液或溶液可以與活性化合物一起含有藥物上可接受的載體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、例如丙二醇這樣的乙二醇類且如果需要可以含有適量的鹽酸利多卡因鹽。在例如霜劑、洗劑或糊劑這樣用于皮膚科治療的局部用劑型中，可以將活性組分與常用的油脂性或乳化賦形劑混合。
例如片劑和膠囊這樣的固體口服劑型可以與活性化合物一起含有例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉和馬鈴薯淀粉這樣的稀釋劑；例如硅膠、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇類這樣的潤滑劑；例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮這樣的粘合劑；例如淀粉、藻酸、藻酸鹽、羥基乙酸淀粉鈉這樣的解聚劑；泡騰混合物；染料；增甜劑；例如卵磷脂、多乙氧基醚、月桂基硫酸鹽這樣的濕潤劑；和一般用于藥物制劑中的無毒性和藥物上無活性的物質(zhì)。可以通過例如混合、制粒、壓片、包糖衣或包薄膜衣工藝這樣的已知方式來制備所述的藥物制劑。
此外，本發(fā)明提供了一種治療需要這種治療的患者體內(nèi)超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤的方法，該方法包括對所述患者給予本發(fā)明組合物的步驟。
下列實施例用來更好地解釋本發(fā)明而不具有任何對本發(fā)明進行限定的含義。
實施例1通式(I)的化合物對與高水平GSH相關(guān)的腫瘤的細(xì)胞毒性活性將分別如WO 98/04254和WO 90/11277中所述制備的化合物N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}乙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽(PNU 166196)和N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽(PNU 151807)溶于無菌水并立即用于本實驗。
測定對L1210鼠淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系和對L-PAM抗性細(xì)胞亞系L1210/L-PAM的細(xì)胞毒性活性。使細(xì)胞作為穩(wěn)定的混懸液培養(yǎng)物在體外生長。將L1210細(xì)胞維持在含有β-巰基乙醇(10μM)的RPMI 1640培養(yǎng)基中。將L1210/L-PAM細(xì)胞維持在含有β-巰基乙醇(50μM)的RPMI1640培養(yǎng)基中。給所有的培養(yǎng)基(Biowhittaker，UK)補充10％胎牛血清(Biological Industries，Israel)和2mM L-谷胺酰胺(Biowhittaker，UK)。
測定對呈指數(shù)生長的細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性。以50,000個細(xì)胞/ml的濃度將L1210和1210/L-PAM細(xì)胞接種在24孔平板上并立即用所述藥物治療48小時。
通過用Coulter計數(shù)器對存活細(xì)胞進行計數(shù)來評估細(xì)胞生長抑制率。根據(jù)劑量反應(yīng)曲線來計算藥物的抗增殖活性并表示為IC50(與未治療的對照組相比在治療的培養(yǎng)物中抑制50％細(xì)胞生長的濃度)。將全部實驗進行兩次。
結(jié)果如每次在附帶的表I中及其注解所報導(dǎo)的。
實施例2PNU 166196對用BSO預(yù)治療的A2780細(xì)胞的細(xì)胞毒性和編程性細(xì)胞死亡作用將化合物PNU 166196(參見上述實施例1)溶于無菌水并立即用于本實驗。將BSO溶于無菌水并用0.2μ濾膜過濾。
測定對A2780人卵巢癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒性活性。使細(xì)胞作為單層培養(yǎng)物在體外的補充了10％胎牛血清(Biological Industries，Israel)和2mM L-谷胺酰胺(Biowhittaker，UK)的RPMI 1640培養(yǎng)基(Biowhittaker，UK)中生長。
測定對呈指數(shù)生長的細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性。以2ml的100,000個細(xì)胞/ml的濃度將A2780細(xì)胞接種在6孔平板上并與GSH抑制劑BSO一起保溫24小時且最終與不同濃度的PNU 166196接觸(將未治療的細(xì)胞僅與所述培養(yǎng)基一起保溫)。
在用所述藥物治療24小時后，評估單層細(xì)胞上的細(xì)胞生長抑制率，同時將流動的細(xì)胞用于形態(tài)評價。
通過熒光顯微鏡檢查評價編程性細(xì)胞死亡的情況。在治療結(jié)束時，收集流動的細(xì)胞、將其用PBS洗滌、固定在70％冰冷乙醇中并儲存在-20℃下至分析為止(最長5天)。然后將細(xì)胞離心并將沉淀用50μg/ml碘化丙錠、0.001％Nonidet P40和60 U/ml RNA酶染色并儲存在37℃下的黑暗中30分鐘。將細(xì)胞離心并將沉淀重新懸浮于50μM PBS中。使用熒光顯微鏡對隨機選自獨立制備的2個涂片的至少600個細(xì)胞的核形態(tài)改變進行檢查(染色質(zhì)濃集和DNA片段化)[參見《國際癌癥雜志》(Int.J.Cancer)65491-497(1996)]。將全部實驗進行兩次。結(jié)果如每次在附帶的表II中及其注解所報導(dǎo)的。
權(quán)利要求
1.通式(I)的α-鹵代丙烯酰基司他霉素衍生物的化合物或其藥物上可接受的鹽在制備用于治療超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤的藥物中的用途 其中R1是溴原子或氯原子；且R2是司他霉素或司他霉素樣結(jié)構(gòu)。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述的超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤選自胃腸腫瘤，包括食管腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤、肝細(xì)胞腫瘤和胰腺腫瘤；子宮癌和卵巢癌；頭頸癌；肺癌和NSCL癌；以及來源于胃腸癌、子宮癌、卵巢癌和肺癌的轉(zhuǎn)移型肝臟腫瘤。
3.權(quán)利要求1的用途，其中所述的GSH/GSTs系統(tǒng)的超表達是預(yù)先使用細(xì)胞毒性劑的一線化療所導(dǎo)致的。
4.權(quán)利要求3的用途，其中所述的細(xì)胞毒性劑選自烷基化劑，包括美法侖、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺氮芥和BCNU；鉑絡(luò)合物，包括順鉑、卡鉑和奧沙利鉑；蒽環(huán)類抗生素，包括多柔比星、伊達比星、表柔比星及其衍生物；表葉毒素，包括依托泊苷和替尼泊苷；長春花生物堿，包括長春堿和長春新堿；以及紫杉烷類，包括帕尼特西和多西特西。
5.權(quán)利要求1的用途，其中在通式(I)的α-鹵代丙烯?；舅顾匮苌镏?，R2是通式(II)的基團 其中m是0-2的整數(shù)；n是2-5的整數(shù)；r是0或1；X和Y相同或不同且就各雜環(huán)而言獨立為氮原子或CH基團；G是亞苯基、含有1-3個選自N、O或S的雜原子的5或6元飽和或不飽和雜環(huán)或它是下列通式(III)的基團 其中Q是氮原子或CH基且W是氧原子或硫原子或是基團NR3，其中R3是氫或C1-C4烷基；B選自下列基團組成的組 -CN；-NR5R6；-CONR5R6；-NHCONR5R6其中R4是氰基、氨基、羥基或C1-C4烷氧基；R5、R6和R7相同或不同且是氫或C1-C4烷基。
6.權(quán)利要求5的用途，其中在通式(I)的α-鹵代丙烯?；舅顾匮苌镏校琑1是溴或氯；且R2是通式(II)的基團，其中r是0、m是0或1、n是4且B如權(quán)利要求5中所定義。
7.權(quán)利要求6的用途，其中在通式(I)的α-鹵代丙烯酰基司他霉素衍生物中，R1是溴或氯；R2是如權(quán)利要求5中所定義的通式(II)的基團且其中r是0、m是0或1、n是4、X和Y均為CH基且B選自下列基團 -CN；-CONR5R6；-NHCONR5R6其中R4是氰基或羥基且R5、R6和R7相同或不同且是氫或C1-C4烷基。
8.權(quán)利要求1的用途，其中可以任選地是藥物上可接受的鹽的形式的通式(I)的α-鹵代丙烯?；舅顾匮苌镞x自下列化合物1.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}乙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；2.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}丙基)氨基]羰基]-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-I-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；3.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；4.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺；5.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-3-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺；6.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-3-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺；7.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}乙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-氯丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；8.N-(5-{[(5-{[(3-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基}-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；9.N-(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亞氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；和10.N-{5-[({5-[({5-[({3-[(氨基羰基)氨基]丙基}氨基)羰基]-1-甲基-1H-吡咯-3-基}氨基)羰基]-1-甲基-1H-吡咯-3-基}氨基)羰基]-1-甲基-1H-吡咯-3-基}-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述的通式(I)的α-鹵代丙烯?；舅顾匮苌锸荖-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亞氨基)甲基]氨基}乙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯?；?氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺鹽酸鹽。
10.一種超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤的治療方法，該方法包括給予需要治療的患者權(quán)利要求1的化合物的步驟。
11.一種權(quán)利要求10的方法，其中所述的超表達GSH/GSTs系統(tǒng)的腫瘤包括胃腸腫瘤，包括食管腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤、肝細(xì)胞腫瘤和胰腺腫瘤；子宮癌和卵巢癌；頭頸癌；肺癌和NSCL癌；以及來源于胃腸癌、子宮癌、卵巢癌和肺癌的轉(zhuǎn)移型肝臟腫瘤。
全文摘要
屬于通式(I)的α－鹵代丙烯?；舅顾匮苌锏幕衔锘蚱渌幬锷峡山邮艿柠}是特別有效治療超表達GSH/GSTs系統(tǒng)且難以對常用的抗腫瘤療法起反應(yīng)乃至耐常用的抗腫瘤療法的腫瘤的細(xì)胞毒性劑，在通式(I)中，R
文檔編號C07D207/34GK1427719SQ01809203
公開日2003年7月2日 申請日期2001年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月8日
發(fā)明者M·C·R·格羅尼, P·柯茲, I·比里亞 申請人:法瑪西雅意大利公司