專利名稱：環氧合酶－2活性的抑制的制作方法
本申請要求2000年3月21日提交的美國臨時申請60/193,981，發明名稱為“環氧合酶-2活性的抑制”這一申請的優先權，該申請以引用方式并入本申請。
在天然存在的內源性刺激物和血管生成抑制劑之間的平衡中抑制作用占有優勢，見Rastinejad等，1989，Cell，56345-355。在新的血管形成是在正常的生理狀態下完成的那些情況下，例如外傷愈合、器官再生、胚胎發育和女性的生殖過程，血管生成被精確的調整，并且被限制在一定的空間和時間。如在以實體瘤生長為特征的病理性血管生成的條件下，對血管生成的調節控制作用就會失敗。
身體中的各類細胞可以轉化成良性或惡性腫瘤細胞。最常見的腫瘤部位是肺，然后是結腸、乳房、前列腺、膀胱、胰臟和卵巢。其他常見的癌癥包括白血病、中樞神經系統癌癥，包括腦癌、黑素瘤、淋巴癌、紅白血病、子宮癌以及頭部和頸部癌癥。
無調節的血管生成造成許多贅生性和非贅生性疾病的發展，這些疾病包括實體瘤生長和腫瘤轉移，例如參見Moses等，1991，Biotech.，9630-634；Folkman等，1995，N.Engl.J.Med.，3331757-1763；Auerbach等，1985，J.Microvasc.Res.，29401-411；Folkman，1985，Advancesin Cancer Research，Klein和Weinhouse編輯，Academic Press，NewYork，p175-203；Patz，1982，J.Opthalmol.，94715-743；Folkman等，1983，Science，221719-725；Folkman和Klagsbrun，1987，Science，235442-447。
發明的詳細描述環氧合酶-2，是前列腺素生物合成中的限速酶，在與腫瘤有關的巨噬細胞中表達。因為稱為PEG2的前列腺素是炎癥響應和血管生成的重要介質，因此，對其生物合成的抑制作用可用來抵消它們的作用。試驗化合物對環氧合酶-2蛋白的抑制作用可很方便地在細胞中觀測到，在所述細胞中環氧合酶-2蛋白的生成被脂多糖(LPS)誘導。已知LPS可增強環氧合酶-2的轉錄，并且可把此作用作為評價環氧合酶-2抑制作用的便捷模型。
現已發現環氧合酶-2的活性可被某些酰胺或酰亞胺抑制，此作用導致前列腺素生物合成的減少，特別是進而產生抗炎癥響應、抗血管生成和抗贅生性疾病的作用。
可被用于本發明的酰胺和酰亞胺包括在下列專利中所公開的全部酰胺和酰亞胺USP2,830,991、5,385,901、5,635，517、5,798,368和5,874,448，以及序號為PCT WO98/54170和1999年3月16申請的09/270,411，上述各專利公開均以引用方式并入本文。
具體地說，酰胺和酰亞胺包括下式化合物 其中R是氫，1-6個碳原子的烷基，2-6個碳原子的鏈烯基，嗎啉代甲基，苯基或芐基；和R′是 或 在一試驗中，LPS介導的環氧合酶-2的誘導作用以及RAW 246.7細胞中的巨噬細胞的PEG2生物合成被低至50μM的3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶所阻斷。但是，看起來LPS提高環氧合酶-2的轉錄，其本身不受酰胺或酰亞胺的影響。這就是說，酰胺或酰亞胺對LPS引起的環氧合酶-2的誘導作用沒有影響。另一方面，酰胺或酰亞胺增強環氧合酶-2信使RNA的降解，其結果是盡管不希望局限于某種理論，但酰胺或酰亞胺對環氧合酶-2活性所產生的抑制作用很可能是通過某些轉錄后機制來實現的。
術語“烷基”是指具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的一價飽和烴基。這類烷基中有代表性的例如是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、己基和異己基。
術語“鏈烯基”是指具有2-6個碳原子和烯烴雙鍵的直鏈或支鏈的一價烴基。這類鏈烯基中有代表性的例如是乙烯基、烯丙基、丁-2-烯基、丁-3-烯基等。
有代表性的上述化合物包括3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶、1-烯丙基-3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶、1-乙基-3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶、1-苯基-3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶、1-芐基-3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶、3-琥珀酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶和1-烯丙基-3-琥珀酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶。優選的化合物是3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶，也稱為thalidomide。
用于本發明的酰胺或酰亞胺是已知的，并可由常規方法制備，例如在上文提到的作為參考的專利和專利申請中所說明的那些。
優選將酰胺或酰亞胺口服給藥。口服劑量形式可以是片劑、膠囊、糖衣丸和類似形狀的壓制藥物形式，每單位劑量含有1-100mg藥物。含有20-100mg/ml的混合物可制備成腸胃外給藥的形式，包括肌內、鞘內、靜脈內和動脈內給藥形式。直腸內給藥可通過例如使用可可脂的常規載體制成栓劑使用。
藥物組合物包括與至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑結合的酰胺或酰亞胺。在制備該組合物時，通常將thalidomide與賦形劑混合或用賦形劑稀釋，或者將其封裝在制成膠囊或小袋形式的載體中。當賦形劑用作稀釋劑時，它可也是固體、半固體或液體材料，其作用是活性成分的媒體、載體或活性成分的介質。因此，該組合物可以是片劑、丸劑、粉劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液、糖漿、軟和硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射溶液和無菌填充粉劑。適當的賦形劑的實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素，制劑中還可加入潤滑劑如滑石、硬脂酸鎂和礦物油，濕潤劑，乳化劑和懸浮劑，防腐劑如甲基-或丙基-羥基苯甲酸酯，甜味劑和矯味劑。
優選將酰胺或亞酰胺組合物制成單位劑量形式，即物理上分離的單位，其適合作為給人或其它哺乳動物以單劑或多劑給藥的單一劑量或單一劑量的預定部分，每個單位含有預定量的活性物質以及適當的藥物賦型劑，所述活性物質的量可產生所需的治療效果。可將組合物制成制劑，以便在按本領域熟知的步驟對患者給藥后使活性成分即釋、持續釋放或緩釋。
酰胺或酰亞胺可有手性中心，在此情況下可具有光學異構體。手性純的(R)-和(S)-異構體以及這些異構體的混合物(包括但不限于外消旋混合物)均在本發明的范圍之內。混合物可以其本身使用，也可以使用手性吸附劑通過色譜法將混合物物理地分離成單個的異構體。另外，單個異構體可以手性的形式制備，或用化學方法分離。
使用的劑量必須根據患者的性別、體重、疾病的嚴重程度和臨床治療方案認真考慮。典型的給藥劑量應該足以能夠產生至少為0.01μg/ml的血濃度，優選至少為0.1μg/ml的血濃度。平均體重(70kg)人體的總血量體積是大約5升，因此，有效劑量的最小量應是大約0.5mg，但也可以高達約500mg。當內臟被感染時，甚至需要更大的劑量，實際中在器官移植對宿主疾病和HIV感染的情況就是如此。已經知道對某些患者很容易患誘導神經病，因此可能需要較低的劑量。臨床經驗告訴我們劑量可從50mg(每周3次)直至高達每天數克，但應該注意的是，最后的實際劑量必須由主治醫師決定。
下面的實施例對本發明的性質進一步典型的加以說明，但不構成對所附權利要求書定義的本發明保護范圍的限制。
聚乙二醇6000 5.0g滑石 5.0g硬脂酸鎂 1.8g純凈水 適量首先迫使固體成分通過0.6mm篩孔寬的篩25，然后將活性成分酰亞胺、乳糖、滑石、硬脂酸鎂和一半的淀粉混合，另一半淀粉懸浮于40ml水，將該懸浮液加入聚乙二醇于100ml水的沸騰溶液中，將得到的糊狀物加入上述粉末狀物質，使混合物成粒，如果需要可加水。將顆粒物在35℃干燥過夜，然后迫使其通過1.2mm篩孔寬的篩子，壓制成直徑大約為6mm的片劑形式，兩面都是凹形。
片劑，每片含有10mg 3-琥珀酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶，可按下述方式制備成分(1000片)3-琥珀酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶 10.0g乳糖 328.5g玉米淀粉 17.5g3-琥珀酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶 10.0g乳糖 328.5g玉米淀粉 17.5g聚乙二醇6000 5.0g滑石 25.0g硬脂酸鎂 4.0g純凈水 適量首先迫使固體成分通過0.6mm篩孔寬的篩，然后將3-琥珀酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶、乳糖、滑石、硬脂酸鎂和一半的淀粉充分混合，另一半淀粉懸浮于65ml水，將該懸浮液加入聚乙二醇于260ml水的沸騰溶液中，將得到的糊狀物加入上述粉末狀物質，使所得物混合并成粒，如果需要可加水。將顆粒物在35℃干燥過夜，然后迫使其通過1.2mm篩孔寬的篩子，壓制成直徑大約為10mm的片劑，兩面都是凹形，并且在一面上有可分開的凹槽。
通過0.2mm至0.9mm篩孔篩將十二烷基硫酸鈉篩入3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶，將它們一起充分混合10分鐘。最后，通過0.8mm的篩加入硬脂酸鎂，再進一步混合3分鐘，將混合物等分成140mg一份，各自加入0號(拉長的)大小的干填充明膠膠囊。
權利要求
1.抑制哺乳動物環氧合酶-2活性以減少前列腺素生物合成的方法，該方法包括給哺乳動物施用有效量的下式酰胺或酰亞胺 其中R是氫，1-6個碳原子的烷基，2-6個碳原子的鏈烯基，嗎啉代甲基，苯基或芐基；和R′是 或
2.按照權利要求1的方法，其中所說的酰胺或酰亞胺是3-苯二甲酰亞氨基-2，6-二氧代哌啶。
全文摘要
本發明提供了抑制環氧合酶－2(或COX－2)酶活性的新方法。已知COX－2的抑制劑可以被用作抗炎癥、止痛與抗血管生成的藥劑。在本發明情況下所述的化合物是雜環取代的4－氨基戊二酰亞胺。本發明要求保護用該化合物抑制前列腺素合成的方法。
文檔編號C07D401/04GK1420776SQ01807481
公開日2003年5月28日 申請日期2001年3月30日 優先權日2000年3月31日
發明者喬治·馬勒, 安德魯·J·丹嫩貝格 申請人:塞爾基因公司