專利名稱：一種連翹酯甙提取工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種從天然藥用植物連翹中提取其有效成分連翹酯甙的提取工藝。
背景技術：
連翹為木犀科連翹落葉灌木，果實入藥，具有清熱解毒、散結消腫、抗菌及抑制真菌等功能。連翹酯甙為其主要成分，它不僅對金黃色葡萄球菌等十一種致病菌有極強的抑制作用，而且具有抑制磷酸二酯酶及抑制真菌作用。最近我們研究又發現它對彈性蛋白酶也有一定的抑制作用。鑒于它具有多種多樣的生物活性功能，連翹酯甙在醫藥和食品領域作為天然藥物、天然防腐劑及天然抗氧化劑有廣泛的應用前景。至目前為止，尚未見有關從藥用植物連翹中大量提取連翹酯甙的報道，基于以上原因，本發明對連翹酯甙的提取工藝進行了詳細研究。
關于連翹酯甙的提取分離方法，國內外均有文獻報道，采用的方法為直接用水提取或水提物再用有機溶劑提取，提取物經硅膠制備薄層析或柱層析分離得到產物。如日本學者Sansel(Chem.Pharm.Bull，1982，32(12)，4548-4553)從連翹中提取連翹酯甙采用的方法是首先用水提取連翹，水提物再用甲醇提取，甲醇提取物用硅膠柱層析分離，以不同比例的甲醇、氯仿進行反復梯度淋洗，分離得連翹酯甙產物。梁文藻等(藥物分析雜志，1986，6(5)，263-266)從連翹中提取連翹酯甙產物是采用化學分離方法，然后用制備性薄層板進行純化，最后得到純品。上述提取方法效率低、大量使用了有毒有機溶劑，并且所用分離材料也不易再生重復使用，因而不能移植放大為工業化生產。
發明內容
本發明的目的是提供一種效率高、無污染且能工業化生產的連翹酯甙的提取工藝。
本發明的提取工藝包括如下步驟(1)將連翹殼或連翹葉粉碎至20～50目，用乙醇回流提取，合并浸取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，制得乙醇提取物浸膏；(2)在提取溫度為75℃以下，用水對乙醇提取物浸膏反復提取，至提取液薄層檢測無連翹酯甙，合并提取液，靜置，過濾；(3)濾液減壓濃縮，濃縮液用非極性、苯乙烯型、孔徑為10～20nm的大孔吸附樹脂進行柱層析分離。首先用水充分淋洗，至淋洗液由混濁變清、變為淡黃色，進而用20～30％乙醇淋洗，采用薄層層析檢測至淋洗液中無連翹酯甙，合并含有連翹酯甙的淋洗液，減壓濃縮、真空干燥即得棕黃色的產物；(4)將棕黃色產物用醇含量大于90％的乙醇溶解，過濾除去殘渣，按產物∶活性炭為1∶0.1～0.3的重量比加入活性炭，攪拌，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇、真空干燥即得淺黃色的連翹酯甙產品。
如上所述的薄層層析檢測使用的展開劑為丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯＝4∶3∶1∶1∶2的上層液。
如上所述的濃縮液的濃度是原濾液濃度的1-1.5倍。
如上所述的大孔吸附樹脂飽和吸附量是每克干樹脂一次分離4-6克藥材。
如上所述的大孔樹脂分離連翹酯甙時的淋洗速度為1-2ml/cm2.min。
如上所述的大孔吸附樹脂進行柱層分離過程可進行1-3次，以滿足連翹酯甙含量的要求。
如上所述的大孔吸附樹脂是D101大孔吸附樹脂。
如上所述的大孔吸附樹脂的再生是用95％乙醇淋洗柱體既可使樹脂再生，使用多次后，樹脂也可用3％氫氧化鈉浸泡淋洗，再用大量水淋洗再生。
本發明具有如下優點(1)本發明使用溶劑安全無毒，價格低廉可回收再用，對環境無污染。
(2)本發明使用分離材料為大孔吸附樹脂。大孔吸附樹脂是近年來發展起來的一類有機高聚物吸附劑，它具有較好的吸附性能。為分離有機化合物尤其是極性大的化合物的有效手段，在天然產物化學成分的提取等方面顯示了獨特作用。它不僅理化性質穩定，不溶于酸，堿及有機溶媒，對有機物選擇性較好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在的影響。并且易于洗脫再生，有益于多次利用。
(3)采用本發明從藥用植物連翹中提取分離連翹酯甙，提取量大，可工業化生產。
(4)采用本發明從藥用植物連翹中提取分離連翹酯甙，連翹酯甙含量大于40％，提取效率高。
具體實施例方式實施例1稱取500g連翹，粉碎過20目篩，用80％的乙醇溶液3升、2升、2升分三次回流提取，首次回流2.5小時，二次、三次分別回流2.0小時。合并提取液。冷藏靜置12小時。過濾，濾液減壓濃縮得乙醇提取物，乙醇提取物用水分別提取四次，每次300ml，提取兩小時，溫度保持在75℃。合并水提取液，靜置過濾、減壓濃縮，濃縮液上柱分離，其柱高為63cm，柱徑為3.3cm，柱填料為D101大孔吸附樹脂。首先用水淋洗至流出液變清后，改用25％乙醇淋洗，淋洗速度為20ml/min，薄層層析檢測流出液，展開劑為丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯(4∶3∶1∶1∶2)的上層液，收集含有連翹酯甙的部分，減壓濃縮、真空干燥即得棕黃色的連翹酯甙產品22.5g，提取率為4.5％。用95％乙醇將上述棕黃色產物熱溶解，過濾除去殘渣，加入2.5g活性炭，溫度控制在60℃，攪拌0.5小時，趁熱過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇、真空干燥即得淺黃色的連翹酯甙產品。經高壓液相分析，連翹酯甙含量為43.1％。
實施例2稱取1Kg連翹，粉碎過20目篩，用85％的乙醇溶液5升、4升、4升分三次回流提取，首次回流2.5小時，二次、三次分別回流2.0小時。合并提取液。冷藏靜置12小時。過濾，濾液減壓濃縮得乙醇提取物，乙醇提取物用水分別提取四次，每次500ml，提取兩小時，溫度保持在75℃。合并水提取液，靜置過濾、減壓濃縮，濃縮液上柱分離，其柱高為60cm，柱徑為5.4cm，柱填料為D101大孔吸附樹脂。首先用水淋洗至流出液變清后，改用30％乙醇淋洗，淋洗速度為25ml/min薄層層析檢測流出液，展開劑為丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯(4∶3∶1∶1∶2)的上層液，收集含有連翹酯甙的部分，減壓濃縮、真空干燥即得棕黃色的連翹酯甙產品51g，提取率為5.1％。用95％乙醇將上述棕黃色產物熱溶解，過濾除去殘渣，加入5.5g活性炭，溫度控制在60℃，攪拌0.5小時，趁熱過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇、真空干燥即得淺黃色的連翹酯甙產品。經高壓液相分析，連翹酯甙含量為41％。
實施例3稱取1.5Kg連翹，粉碎過20目篩，用82％的乙醇溶液6升、5升、5升分三次回流提取，首次回流2.5小時，二次、三次分別回流2.0小時。合并提取液。冷藏靜置12小時。過濾，濾液減壓濃縮得乙醇提取物，乙醇提取物用水分別提取四次，每次800ml，提取兩小時，溫度保持在75℃。合并水提取液，靜置過濾、減壓濃縮，濃縮液上柱分離，其柱高為75cm，柱徑為5.4cm，柱填料為D101大孔吸附樹脂。首先用水淋洗至流出液變清后，改用30％乙醇淋洗，淋洗速度為25ml/min薄層層析檢測流出液，展開劑為丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯(4∶3∶1∶1∶2)的上層液，收集含有連翹酯甙的部分，減壓濃縮、真空干燥即得棕黃色的連翹酯甙產品79g，提取率為5.3％。用95％乙醇將上述棕黃色產物熱溶解，過濾除去殘渣，加入16g活性炭，溫度控制在60℃，攪拌0.5小時，趁熱過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇、真空干燥即得淺黃色的連翹酯甙產品。經高壓液相分析，連翹酯甙含量為42.5％。取上述產物20克用水熱溶，二次上柱分離得產物12克，連翹酯甙含量為66％。
權利要求
1.一種連翹酯甙提取工藝，其特征在于提取工藝包括如下步驟(1)將連翹殼或連翹葉粉碎至20～50目，用乙醇回流提取，合并浸取液，靜置，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，制得乙醇提取物浸膏；(2)在提取溫度為75℃以下，用水對乙醇提取物浸膏反復提取，至提取液薄層檢測無連翹酯甙，合并提取液，靜置，過濾；(3)濾液減壓濃縮，濃縮液用非極性、苯乙烯型、孔徑為10～20nm的大孔吸附樹脂進行柱層析分離。首先用水充分淋洗，至淋洗液由混濁變清、變為淡黃色，進而用20～30％乙醇淋洗，采用薄層層析檢測至淋洗液中無連翹酯甙，合并含有連翹酯甙的淋洗液，減壓濃縮、真空干燥即得棕黃色的產物；(4)將棕黃色產物用醇含量大于90％的乙醇溶解，過濾除去殘渣，按產物∶活性炭為1∶0.1～0.3的重量比加入活性炭，攪拌，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇、真空干燥即得淺黃色的連翹酯甙產品。
2.如權利要求1所述的一種連翹酯甙提取工藝，其特征在于所述的薄層層析檢測使用的展開劑為丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯＝4∶3∶1∶1∶2的上層液。
3.如權利要求1所述的一種連翹酯甙提取工藝，其特征在于所述濃縮液的濃度是原濾液濃度的1-1.5倍。
4.如權利要求1所述的一種連翹酯甙提取工藝，其特征在于所述大孔吸附樹脂飽和吸附量是每克干樹脂一次分離4-6克藥材。
5.如權利要求1所述的一種連翹酯甙提取工藝，其特征在于所述的大孔樹脂分離連翹酯甙時的淋洗速度為1-2ml/cm2.min。
6.如權利要求1所述的一種連翹酯甙提取工藝，其特征在于所述的大孔吸附樹脂進行柱層分離過程可進行1-3次。
7.如權利要求1所述的一種連翹酯甙提取工藝，其特征在于所述的大孔吸附樹脂是D101大孔吸附樹脂。
全文摘要
一種連翹酯甙提取工藝，采用連翹殼或連翹葉粉為原料，用乙醇和水作為溶劑和洗脫劑，大孔吸附樹脂為分離材料，活性碳為脫色劑進行提取連翹酯甙，提取后的連翹酯甙含量大于40％。本發明具有使用溶劑安全無毒，價格低廉可回收再用，對環境無污染，提取量大，可工業化生產，提取效率高的優點。
文檔編號C07H1/08GK1398868SQ01122779
公開日2003年2月26日 申請日期2001年7月24日 優先權日2001年7月24日
發明者張立偉, 楊頻, 王進東 申請人:山西大學