專利名稱：以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法
技術領域：
本發明是以大孔吸附樹脂法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法。
沙棘是胡頹子科沙棘屬的灌木或亞喬木，其莖、葉、果中均含有大量的黃酮(苷)類成份，如槲皮素、異鼠李素、山奈酚、楊梅素及其甙類等[1-6][1.CA 65(11):17361C,1966；2.CA62(7):7587a,1965；3.CA 67(9):41015k,1967；4.CA 104:85268q；5.CA 93:41502d；6.CA86:136310j]，共約三十多種[7][7．高錦明，張鞍靈等，沙棘黃酮化學研究的進展，沙棘，1998,11(2):34-40]。這些黃酮類成分可以用于治療心腦血管類疾病，且有較好的療效[8-9][8．沂偉鈞，陳萍等，醋柳黃酮治療高脂血癥和高粘血癥，新藥與臨床，1997,16(1):17-18；9．包文芳，李銳等，沙棘屬植物藥理作用研究進展，1997,14(4):303-307]。
長期以來，對于沙棘黃酮(苷)的研究多集中于其藥理藥效上[8-12][10．劉鳳鳴等，沙棘總黃酮對培養大鼠心肌細胞和心室肌內cAMP及腺苷酸環化酶的影響，中國藥理學報1988,9(6):539-542；11．吳英等，沙棘總黃酮對兔老化紅細胞膜的影響，中藥藥理與臨床 ，1997,13(2):24-25；12.WU Jie etc,Electrophysio-logic effects of totalflavones of Hippophae rhamnoides L on guineapig papillary muscles and culturedrat myocardial cells,Acta Pharmacoligica Sinica,1994,15(4):341-343]，對于其提取分離方法的研究報道很少。近年來，關于從沙棘果中提取沙棘油和以異鼠李素為主的沙棘總黃酮(苷)的報道較多，且已有工業化生產。提取方法有溶劑萃取法和超臨界二氧化碳萃取法。目前已生產的含沙棘黃酮(苷)類產品，如咳樂沖劑、沙棘口服液等多是用溶劑萃取法從沙棘果中提取的沙棘總黃酮(苷)制得的。而據文獻報道，沙棘葉中總黃酮(苷)的含量明顯高于沙棘果[13][13．葛效炎等，沙棘化學成分的研究概況，中草藥，1986,17(8):42-44]，且其生物量很大，是一種豐富的、極有價值的藥用資源。
對于天然產物的提取分離，樹脂吸附法是一種非常有效的方法。利用吸附樹脂從沙棘葉中提取分離黃酮(苷)類成分的研究目前尚未見國內外有關文獻和專利報道。
本發明的目的是提供一種以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法，利用具有高選擇性的大孔吸附樹脂的選擇性吸附作用，通過簡單、安全、易于工業化的工藝從沙棘葉中分離出黃酮(苷)類成分。
本發明的內容主要為樹脂吸附法分離提取沙棘黃酮(苷)。首先用乙醇水溶液提取沙棘葉，得到沙棘葉提取液，沙棘葉與乙醇水溶液的重量比為1∶10-15；使用中極性或強極性大孔吸附樹脂，使沙棘葉提取液以0.5-3 BV/h的流速緩慢流過裝有上述予處理好的吸附樹脂的樹脂柱。然后用1-5倍樹脂體積的水緩慢清洗樹脂柱，用50-90％的乙醇溶液(最好70％)以0.5-2BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到淺棕色提取物，其沙棘總黃酮(苷)的含量為20-40％。
本發明的具體操作步驟敘述如下沙棘葉提取液的制備稱取沙棘葉粉末，用總量10-15倍50-90％的乙醇水溶液在70℃回流提取三次，依次遞減用量，過濾，回收乙醇，并向體系加適量的水，得混濁液，加甲殼素絮凝劑微量，以滑石粉助濾，得澄清溶液備用。
沙棘黃酮(苷)的提取制備稱取一定量的吸附樹脂用適量的乙醇溶脹過夜，然后逐漸過渡到水相，準確量取一定體積的濕樹脂并將其轉入內徑為0.8-100cm，樹脂層徑高比為1∶1.5-20的樹脂柱中，以0.5-3BV/h(最好1BV/h,1BV為1個床體積)的流速使沙棘葉提取液緩慢流過樹脂床。然后用一定量的水緩慢清洗樹脂柱。用50-90％的乙醇溶液以0.5BV-2BV/h的流速緩慢洗脫，收集洗脫液，濃縮至干。
圖1是樹脂吸附法提取物沙棘黃酮產品的HPLC圖。
本發明提供了簡單易行的從沙棘葉中提取黃酮(苷)類成分的方法-大孔樹脂吸附法，用此方法可以得到含量為20-40％的產品。
實施例1稱取50g的沙棘葉粉末，用650m185％的乙醇水溶液在70℃回流提取三次，每次用量分別為300ml,200ml,150ml，濾過，回收乙醇，并向體系加適量的水，得混濁液200ml，加0.25％甲殼素絮凝劑4ml，過濾，得澄清溶液250ml備用。
稱取一定量的中極性ADS-17吸附樹脂，用適量的乙醇溶脹過夜，然后逐漸過渡到水相。準確量取10ml的濕樹脂并將其轉入內徑為0.8cm樹脂柱中，以1BV/h的流速使50ml沙棘葉提取液緩慢流過樹脂床。然后用10ml水緩慢清洗樹脂柱。用10ml 70％的乙醇溶液以0.5BV/h的流速緩慢洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到棕色提取物，其沙棘總黃酮(苷)的含量大于20％。
實施例2稱取50g的沙棘葉粉末，用650m185％的乙醇水溶液在70℃回流提取三次，每次用量分別為300ml,200ml,150ml，濾過，回收乙醇，并向體系加適量的水，得混濁液200ml，加0.25％甲殼素絮凝劑4ml，過濾，得澄清溶液250ml備用。
稱取一定量的強極性ADS-7吸附樹脂，用適量的乙醇溶脹過夜，然后逐漸過渡到水相，準確量取10ml的濕樹脂并將其轉入內徑為1.0cm樹脂柱中。用50m15％的稀鹽酸溶液通過樹脂柱，然后用水洗至中性，再用50m15％的NaOH溶液通過樹脂柱，用水洗滌至中性。以1BV/h的流速使50ml沙棘葉提取液緩慢流過樹脂床。然后用10ml水緩慢清洗樹脂柱。用30m170％的乙醇溶液以0.5BV/h的流速緩慢洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到淺棕色提取物，其沙棘總黃酮(苷)的含量大于22％。
權利要求
1.一種以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法，其特征在于它包括下述步驟(1)首先依次遞減用量50-90％的乙醇水溶液在70℃下回流提取沙棘葉三次，沙棘葉與乙醇水溶液的總重量比為1∶10-15，加入微量甲殼素絮凝劑，過濾，得澄清溶液，回收乙醇，得到沙棘葉提取液；(2)使沙棘葉提取液以0.5-3 BV/h的流速緩慢流過裝有予處理好的中極性或強極性大孔吸附樹脂的樹脂柱；(3)用1-5倍樹脂體積的水緩慢清洗樹脂柱，用50-90％的乙醇溶液以0.5-2 BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到淺棕色提取物，即可。
2.按照權利要求1所述的以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法，其特征在于過濾時加入助濾劑滑石粉。
3.按照權利要求1所述的以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法，其特征在于所述的樹脂柱內徑為0.8-100cm，樹脂層徑高比為1∶1.5-20。
4.權利要求1所述的以樹脂吸附法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)方法得到的淺棕色提取物產品，其沙棘總黃酮(苷)的含量為20-40％。
全文摘要
本發明是以大孔吸附樹脂法從沙棘葉中制備沙棘黃酮(苷)的方法。首先用乙醇水溶液提取沙棘葉,沙棘葉與乙醇水溶液的重量比為1∶10－15;提取液以0.5－3BV/h的流速流過裝有中極性或強極性大孔吸附樹脂的樹脂柱;然后用水清洗樹脂柱,用50－90%的乙醇溶液以0.5－2BV/h的流速洗脫,濃縮脫洗液至干,得到淺棕色提取物,其沙棘總黃酮(苷)的含量為20－40%。本發明簡單易行、易于工業化。
文檔編號C07H1/00GK1308084SQ0110373
公開日2001年8月15日 申請日期2001年2月13日 優先權日2001年2月13日
發明者孫江曉, 黃瑞川 申請人:天津市陽成高科技天然制品有限公司