環腺苷酸-特異性磷酸二酯酶抑制劑的制作方法

專利名稱：環腺苷酸-特異性磷酸二酯酶抑制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一系列為有效的選擇性環腺苷3’，5’-一磷酸特異性磷酸二酯酶(cAMP特異性PDE)抑制劑的化合物。本發明尤其涉及一系列可用于抑制cAMP特異性PDE功能、尤其是PDE4功能的新型四唑化合物以及制備它們的方法、含有它們的藥用組合物和它們用作例如治療炎性疾病和其它涉及細胞因子和促炎介質水平升高的疾病的治療藥物的用途。
背景技術：
慢性炎癥為一種多因素病癥，其特征為激活多種類型的炎性細胞，尤其是淋巴系細胞(包括T淋巴細胞)和骨髓系細胞(包括粒性白細胞、巨噬細胞和單核細胞)。包括細胞因子例如腫瘤壞死因子(TNF)和白介素-1(IL-1)在內的促炎介質由這些活化細胞產生。因此，抑制這些細胞的激活或抑制它們產生促炎細胞因子的藥物可用于治療性治療炎性疾病和其它涉及細胞因子水平升高的疾病。
環腺苷酸(cAMP)為一種介導細胞對于廣泛的胞外刺激的生物反應的第二信使。當合適的激動劑與特異性細胞表面受體結合時，激活腺苷酸環化酶，使腺苷三磷酸(ATP)轉化為cAMP。理論上在細胞內誘導cAMP作用的激動劑主要由cAMP-依賴性蛋白激酶作用介導。cAMP的細胞內作用因為cAMP轉運到細胞外或環核苷酸磷酸二酯酶(PDE)酶促裂解作用而中止，PDE水解3’-磷酸二酯鍵以形成5’-腺苷酸(5’-AMP)。5’-AMP為一種無活性代謝物。以下圖示說明cAMP和5’-AMP的結構。
在人骨髓系細胞和淋巴系細胞中cAMP水平升高與抑制細胞激活有關。因此，細胞內PDE酶家族調節細胞內cAMP的水平。PDE4為這些細胞中的主要PDE同種型并且主要影響cAMP降解。因此，抑制PDE功能可防止cAMP轉化為無活性代謝物5’-AMP，從而維持較高的cAMP水平，因而抑制細胞激活(參見Beavo等，“CyclicNucleotide PhosphodiesterasesStructure，Regulation and Drug Action”，Wiley and Sons，Chichester，第3-14頁(1990))；Torphy等，Drug Newsand Perspectives，6，第203-214頁(1993)；Giembycz等，Clin.Exp.Allergy，22，第337-344頁(1992))。
具體來說，已證明PDE4抑制劑例如咯利普蘭抑制TNFα產生并且部分抑制單核細胞釋放IL-1β(參見Semmler等，Int.J.Immuopharmacol.，15，第409-413頁，(1993)；Molnar-Kimber等，Mediators of Inflammation，1，第411-417頁，(1992))。還證明了PDE4抑制劑抑制人多形核白細胞產生超氧化物自由基(參見Verghese等，J.Mol.Cell.Cardiol.，21(增刊2)，S61(1989)；Nielson等，J.AllergyImmunol.，86，第801-808頁(1990))；抑制人嗜堿性粒細胞釋放血管活性胺和前列腺素類(參見Peachell等，J.Immunol.，148，第2503-2510頁(1992))；抑制嗜曙紅細胞的呼吸爆發(參見Dent等，J.Pharmacol.，103，第1339-1346頁(1991))；以及抑制人T-淋巴細胞的激活(參見Robicsek等，Biochem.Pharmacol.，42，第869-877頁(1991))。
炎性細胞的激活和過量或非調節性細胞因子(例如TNFα和IL-1β)產生參與與變應性疾病、自身免疫病和炎性疾病，例如類風濕性關節炎、骨關節炎、痛風性關節炎、脊椎炎、甲狀腺相關性眼病、貝切特氏病、膿毒病、敗血癥性休克、內毒素性休克、革蘭氏陰性膿毒病、革蘭氏陽性膿毒病、中毒性休克綜合征、哮喘、慢性支氣管炎、成人呼吸窘迫綜合征、慢性肺部炎性疾病例如慢性阻塞性肺炎、硅肺、肺結節病、心肌、腦和肢端再灌注損傷、纖維變性、囊性纖維變性、瘢痕疙瘩形成、疤痕形成、動脈粥樣硬化、移植排斥病例如移植物抗宿主反應和同種異體移植排斥、慢性腎小球腎炎、狼瘡、炎性腸病例如節段性回腸炎和潰瘍性結腸炎、增生性淋巴細胞疾病例如白血病以及炎性皮膚病例如特應性皮炎、牛皮癬和蕁麻疹。
特征在于細胞因子水平升高的其它疾病包括由于中度外傷引起的腦損傷(參見Dhillon等，J.Neurotrauma，12，第1035-1043頁(1995)；Suttorp等，J.Clin.Invest.，91，第1421-1428頁(1993))、心肌病例如充血性心力衰竭(參見Bristow等，Circulation，97，第1340-1341頁(1998))、惡病質、感染或惡性腫瘤繼發性惡病質、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)繼發性惡病質、ARC(AIDS相關綜合征)繼發的惡病質、由于感染引起的發燒和肌痛、腦型瘧、骨質疏松和骨吸收疾病、瘢痕疙瘩形成、疤痕組織形成和發熱。
具體來說，已經證實TNFα對于人獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)具有作用。AIDS是由于T-淋巴細胞感染人免疫缺陷病毒(HIV)引起的。盡管HIV也感染并存在于骨髓系細胞中，已經證實TNF上調T-淋巴細胞和單核細胞中的HIV感染(參見Poli等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，第782-785頁(1990))。
TNFα的幾種性質例如刺激膠原酶、刺激體內血管生成、刺激骨吸收和能夠增強腫瘤細胞與內皮細胞的附著，與TNF對腫瘤在宿主體內形成和轉移擴散的作用是一致的。最近報道，TNFα直接參與促進腫瘤細胞生長和轉移(參見Orosz等，J.Exp.Med，177，第1391-1398(1993))。
PDE4具有廣泛的組織分布。對于PDE4具有至少4種基因，任一給定基因的PDE4多種轉錄物能夠產生共有相同催化部位的幾種不同的蛋白。4種可能催化部位之間的氨基酸同一性大于85％。它們對抑制劑同樣敏感性及其動力學相似性反映了這個水平氨基酸同一性的功能方面作用。推測這些可變表達的PDE4蛋白的作用在于細胞通過這種作用可以區別性細胞內定位這些酶和/或通過翻譯后修飾調節催化效率。表達PDE4酶的任一給定細胞類型通常表達編碼這些蛋白的4種可能基因中的一種以上基因。
研究者已經表現出對使用PDE4抑制劑作為消炎藥的極大興趣。早期的證據顯示，抑制PDE4對于各種炎性細胞例如單核細胞、巨噬細胞、Th-1系T-細胞和粒性白細胞具有有益的作用。許多促炎介質例如細胞因子、脂質介質、超氧化物和生物胺例如組胺的合成和/或釋放通過PDE4抑制劑的作用在這些細胞中減少。PDE4抑制劑也影響其它細胞功能包括T-細胞增殖、粒性白細胞化學毒性物質作用下的移行和脈管系統內內皮細胞連接的完整性。
已經報告了各種PDE4抑制劑的設計、合成和篩選。甲基黃嘌呤例如咖啡因和茶堿是最初被發現的PDE抑制劑，但是，這些化合物對于抑制PDE是非選擇性的。藥物咯利普蘭(抗抑郁藥)是最初報道的特異性PDE4抑制劑之一。已經報道，具有以下結構式的咯利普蘭抑制重組人PDE4的50％抑制濃度(IC50)為約200nM(納摩爾)的。
咯利普蘭研究者一直在尋找這樣的PIDE4抑制劑抑制PDE4的選擇性更高，IC50比咯利普蘭更低，沒有使用咯利普蘭有關的不需要的中樞神經系統(CNS)副作用，例如干嘔、嘔吐和鎮靜作用。在Feldman等的美國專利號5,665,754中公開了一類化合物。其中所公開的化合物為具有與咯利普蘭結構類似的取代吡咯烷。一種具有結構式(I)的具體化合物對人重組PDE4的IC50為約2nM。由于觀察到催吐副作用與效果顯著分離，這些化合物沒有降低不需要的中樞神經系統作用。

此外，有幾家公司正在對其它PDE4抑制劑進行臨床試驗。然而，效果和副作用方面的問題例如嘔吐和中樞神經系統紊亂仍未解決。
因此，選擇性抑制PDE4并降低或消除與在先的PDE4抑制劑有關的不利的中樞神經系統副作用的化合物可用于治療變應性疾病和炎性疾病以及其它與細胞因子例如TNF過度或非調節性產生有關的疾病。此外，選擇性PDE4抑制劑可用于治療與在具體靶組織中cAMP水平增高或PDE4功能增強有關的疾病。
發明概述本發明涉及可用于治療其中抑制PDE4活性是非常有益的疾病和病癥的有效選擇性PDE4抑制劑。本發明的PDE4抑制劑出人意料地降低或消除與在先的PDE4抑制劑有關的不利的中樞神經系統副作用。
本發明尤其涉及具有結構式(II)的化合物 其中Y為O或NR4；R1選自低級烷基、橋連烷基(例如降冰片基)、芳烷基(例如茚滿基)、環烷基、5-或6-元飽和雜環基(例如3-四氫呋喃基)、C1-3亞烷基環烷基(例如環戊基甲基)、芳基-或雜芳基-取代的炔丙基(例如-CH2C≡C-C6H5)、芳基-或雜芳基-取代的烯丙基(例如-CH2CH＝CH-C6H5)和鹵代環烷基(例如氟代環戊基)；
R2為氫、甲基或鹵基取代的甲基，例如CHF2；R3選自C(＝O)OR7、C(＝O)R7、C(＝NH)NR8R9、C(＝O)NR8R9、低級烷基、橋連烷基、環烷基、鹵代烷基、鹵代環烷基、C1-3亞烷基環烷基、5-或6-元飽和雜環基、芳基、雜芳基、雜芳基SO2、芳烷基、烷芳基、雜芳烷基、雜烷芳基、C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C1-3亞烷基雜芳基、C(＝O)C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基NH(C＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基NH2和NHC(＝O)OR7；R4為氫、低級烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基或雜芳基；R7選自環烷基、支鏈或直鏈低級烷基、雜芳基、雜環基、芳烷基和芳基，并且R7可以任選用一個或多個OR8、NR8R9或SR8取代；R8和R9相同或不同，它們選自氫、低級烷基、環烷基、芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、雜烷芳基和芳烷基，或者R8和R9一起形成4-元環至7-元環；R10為氫、烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基、C(＝O)烷基、C(＝O)環烷基、C(＝O)芳基、C(＝O)O烷基、C(＝O)O環烷基、C(＝O)芳基、CH2OH、CH2O烷基、CHO、CN、NO2或SO2R11；R11為烷基、環烷基、三氟甲基、芳基、芳烷基或NR8R9。
本發明也涉及含有一種或多種結構式(II)化合物的藥用組合物、所述化合物和含所述化合物的組合物在治療疾病中的用途以及化合物和參與合成結構式(II)化合物的中間體的制備方法。
本發明也涉及通過給予哺乳動物治療有效量的結構式(II)化合物或含有結構式(II)化合物的組合物，從而治療所述哺乳動物病癥的方法，其中所述哺乳動物患有的病癥如果抑制PDE4，可有益地調節哺乳動物體內的cAMP水平、降低哺乳動物體內的TNFα水平、抑制哺乳動物體內炎性細胞激活和抑制哺乳動物體內的PDE4功能。
優選實施方案的詳述本發明涉及具有結構式(II)的化合物 其中，Y為O或NR4；R1選自低級烷基、橋連烷基(例如降冰片基)、芳烷基(例如茚滿基)、環烷基、5-或6-元飽和雜環基(例如3-四氫呋喃基)、C1-3亞烷基環烷基(例如環戊基甲基)、芳基-或雜芳基-取代的炔丙基(例如-CH2C≡C-C6H5)、芳基-或雜芳基-取代的烯丙基(例如-CH2CH＝CH-C6H5)和鹵代環烷基(例如氟代環戊基)；R2為氫、甲基或鹵基取代的甲基，例如CHF2；R3選自C(＝O)OR7、C(＝O)R7、C(＝NH)NR8R9、C(＝O)NR8R9、低級烷基、橋連烷基、環烷基、鹵代烷基、鹵代環烷基、C1-3亞烷基環烷基、5-或6-元飽和雜環基、芳基、雜芳基、雜芳基SO2、芳烷基、烷芳基、雜芳烷基、雜烷芳基、C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C1-3亞烷基雜芳基、C(＝O)C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基NH(C＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基NH2和NHC(＝O)OR7；R4為氫、低級烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基或雜芳基；R7選自環烷基、支鏈或直鏈的低級烷基、雜芳基、雜環基、芳烷基和芳基，并且R7可以任選用一個或多個OR8、NR8R9或SR8取代；
R8和R9相同或不同，選自氫、低級烷基、環烷基、芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、雜烷芳基和芳烷基，或者R8和R9一起形成4-元環至7-元環；R10為氫、烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基、C(＝O)烷基、C(＝O)環烷基、C(＝O)芳基、C(＝O)O烷基、C(＝O)O環烷基、C(＝O)芳基、CH2OH、CH2O烷基、CHO、CN、NO2或SO2R11；R11為烷基、環烷基、三氟甲基、芳基、芳烷基或NR8R9。
本文單獨或者組合使用的術語“烷基”定義為包括含1-16個碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基。術語“低級烷基”本文定義為具有1-6個碳原子(C1-C6)的烷基。低級烷基的實例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、異丁基、正丁基、新戊基、正己基等。術語“炔基”是指含有碳-碳三鍵的不飽和烷基。
術語“橋連烷基”本文定義為C6-C16的雙環或多環烴基，例如降冰片基、金剛烷基、雙環[2.2.2]辛基、雙環[2.2.1]庚基、雙環[3.2.1]辛基或十氫萘基。
術語“環烷基”本文定義為包括C3-C7環烴基。環烷基的實例包括但不限于環丙基、環丁基、環己基和環戊基。
術語“亞烷基”是指具有一個取代基的烷基。例如術語“C1-3亞烷基環烷基”是指含有1-3個碳原子并用一個環烷基取代的烷基。
術語“鹵代烷基”本文定義為用一個或多個鹵代取代基例如氟代基、氯代基、溴代基、碘代基或者其組合取代的烷基。同樣，“鹵代環烷基”定義為具有一個或多個鹵代取代基的環烷基。
單獨或組合使用的術語“芳基”本文定義為單環或多環的芳族基團，優選單環或雙環的芳族基團，例如苯基或萘基，它們可以為未取代或者取代芳族基團，例如被一個或多個、尤其是一個至三個選自以下的取代基取代鹵代基、烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、鹵代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、酰基氨基、烷硫基、烷基亞磺酰基和烷基磺酰基。示例性芳基包括苯基、萘基、四氫萘基、2-氯代苯基、3-氯代苯基、4-氯代苯基、2-甲基苯基、4-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、4-硝基苯基等。
術語“雜芳基”本文定義為含有一個或兩個芳族環并且在芳環上含有至少一個氮原子、氧原子或硫原子的單環或雙環系，所述環系可以為未取代或者取代環系，例如被一個或多個、尤其是1-3個如下的取代基取代鹵代基、烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、鹵代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、酰基氨基、烷硫基、烷基亞磺酰基和烷基磺酰基。雜芳基的實例包括噻吩基、呋喃基、吡啶基、噁唑基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、三唑基、異噻唑基、異噁唑基、咪唑基、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基和噻二唑基。
術語“芳烷基”本文定義為這樣在先定義的烷基其中所述烷基的一個氫原子本文定義的芳基取代，例如任選具有一個或多個取代基(例如鹵代基、烷基、烷氧基等)的苯基。芳烷基的實例是芐基。
術語“烷芳基”本文定義為這樣在先定義的芳基其中所述芳基的一個氫原子被烷基、環烷基、鹵代烷基或鹵代環烷基取代。
術語“雜芳烷基”和“雜烷芳基”的定義類似術語“芳烷基”和“烷芳基”，然而，所述芳基被在先定義的雜芳基取代。
術語“雜環基”定義為環中含有一個或多個雜原子的5-或6-元非芳族環，所述雜原子選自氧、氮和硫。非限制性實例包括四氫呋喃、哌啶、哌嗪、環丁砜、嗎啉、四氫吡喃、二氧六環等。
術語“鹵素”或“鹵代基”本文定義為包括氟、氯、溴和碘。
術語“烷氧基”、“芳氧基”和“芳烷氧基”為-OR，其中R分別為烷基、芳基和芳烷基。
術語“烷氧基烷基”定義為連接烷基的烷氧基。術語“芳氧基烷基”和“芳烷氧基烷基”類似地定義為連接烷基的芳氧基或芳烷氧基。
術語“羥基”定義為-OH。
術語“羥基烷基”定義為連接烷基的羥基。
術語“氨基”定義為-NH2。
術語“烷基氨基”定義為-NR2，其中至少一個R為烷基，第二個R為烷基或氫。
術語“酰基氨基”定義為RC(＝O)N，其中R為烷基或芳基。
術語“硝基”定義為-NO2。
術語“烷硫基”定義為-SR，其中R為烷基。
術語“烷基亞磺酰基”定義為R-SO2，其中R為烷基。
術語“烷基磺酰基”定義為R-SO3，其中R為烷基。
在優選的實施方案中，Y為NR4，R7為甲基，R2為甲基或二氟甲基，R4選自氫、甲基、三氟甲基、環丙基和苯基。R1選自

和
R3選自

和
在最優選的實施方案中，Y為NH；R1選自環戊基、四氫呋喃基、茚滿基、降冰片基、苯乙基和苯基丁基；R2選自甲基和二氟甲基；R3選自芐基、CO2CH3、C(＝O)CH2OH、C(＝O)CH(CH3)OH、C(＝O)C(CH3)2OH和 R7為甲基；R10為氫。
本發明包括結構式(II)化合物的所有可能的立體異構體和幾何異構體，并且不僅包括外消旋化合物而且也包括旋光異構體。當需要結構式(II)化合物的單一對映體時，通過拆分終產物或者通過由異構體純原料或者使用手性輔助劑立體有擇合成可以得到單一對映體(例如參見Z.Ma等，TetrahedronAsymmetry，8(6)，第883-888頁(1997))。終產物、中間體或者原料的拆分可以通過本領域已知的任何合適方法完成。此外，在其中結構式(II)化合物的互變異構體可能存在的情況下，本發明包括所述化合物的所有互變異構形式。如此后所證明的，特定的立體異構體顯示抑制PDE4的優越能力，而沒有通常與PDE4抑制劑有關的不利中樞神經系統副作用。
具體來說，普遍認為生物系統對絕對立體化學性化合物具有非常敏感的活性。(參見E.J.Ariens，Medicinal Research Reviews，6451-466(1986)；E.J.Ariens，Medicinal Research Reviews，7367-387(1987)；K.M.Fowler，Handbook of StereoisomersTherapeutic Drugs，CRC Press，Donald P.Smith主編，第35-63頁(1989)；S.C.Stinson，Chemical and Engineering News，7538-70(1997))。
例如，咯利普蘭為含有一個手性中心的立體有擇PDE4抑制劑。咯利普蘭的(-)-對映體比其(+)-對映體在涉及其潛在的抗抑郁作用方面具有更強的藥理作用。Schultz等，Naunyn-Schmiedeberg′s ArchPharmacol，33323-30(1986)。此外，咯利普蘭的代謝作用似乎是立體特異性的，(+)-對映體顯示比(-)-對映體更快的清除率。Krause等，Xenobiotica，18561-571(1988)。最后，最新的觀察顯示，咯利普蘭的(-)-對映體(R-咯利普蘭)比其(+)-對映體(S-咯利普蘭)的催吐作用強大約十倍。A.Robichaud等，Neuropharmacology，38289-297(1999)。這個觀察結果與試驗動物對咯利普蘭異構體的處理和咯利普蘭抑制PDE4酶的能力方面的差異非常不一致。本發明化合物可以具有三個手性中心。特定立體化學取向的化合物能夠顯示類似的PDE4抑制活性和藥理學活性，但是改變了中樞神經系統毒性和催吐潛能。
因此，本發明的優選的化合物具有結構式(III) 結構式(III)的化合物為有效選擇性PDE4抑制劑并且沒有結構式(III)化合物的立體異構體所顯示的不利的中樞神經系統作用和催吐潛能。
含有酸性部分的結構式(II)化合物可以與合適的陽離子形成藥學上可接受的鹽。合適的藥學上可接受的陽離子包括堿金屬(例如鈉或鉀)和堿土金屬(例如鈣或鎂)陽離子。含有堿性中心的結構式(II)化合物的藥學上可接受的鹽為與藥學上可接受的酸形成的酸加成鹽。實例包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽或硫酸氫鹽、磷酸鹽或磷酸氫鹽、乙酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、葡糖酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽。根據前文所述，任何本文中提到的本發明化合物包括結構式(II)化合物以及其藥學上可接受的鹽和溶劑合物。
本發明的化合物可以以純化學品治療性給藥，但是優選以藥用組合物或制劑給予結構式(II)化合物。因此，本發明還提供含有結構式(II)化合物以及一種或多種藥學上可接受的載體并任選其它治療和/或預防成分的藥用制劑。所述載體在與所述制劑中的其它成分相容并且對其接受者無害的意義上為“可接受的”。
具體來說，本發明的選擇性PDE4抑制劑可以單獨使用或與第二種抗炎治療藥組合使用，例如所述第二種抗炎藥物為用于治療類風濕性關節炎的靶向TNFα的治療藥，如ENBREL或REMICADE。同樣，IL-1拮抗作用的治療用途在類風濕性關節炎的動物模型中也已經得到證明。因此，設想IL-1的拮抗作用與減弱TNFα的PDE4抑制作用結合將是有效的。
本發明的PDE4抑制劑可用于治療各種變應性疾病、自身免疫病和炎性疾病。
術語“治療”包括預防、緩解、阻止或逆轉所治療疾病或癥狀發展進程。因此術語“治療”包括適當的醫學治療和/或預防給藥。
具體來說，炎癥一種局限化保護性反應，它是由組織損傷或破壞引起的，它可以破壞、稀釋或隔絕(即隔離)損傷因子和受損的組織。本文所用的術語“炎性疾病”，是指任何其中過量或非調節性炎癥反應導致過度炎性癥狀、宿主組織損傷或組織功能喪失的疾病。此外，本文所用的術語“自身免疫病”是指任何種類的其中組織損傷與對于身體自身成分的體液或細胞介導應答有關的疾病。本文所用的術語“變應性疾病”是指由變態反應引起的任何癥狀、組織損傷或組織功能喪失。本文所用的術語“關節疾病”是指特征在于各種病因引起的關節炎性損傷的一大類任何疾病。本文所用的術語“皮炎”是指特征在于各種病因引起的皮膚炎癥的一大類任何皮膚疾病。本文所用的術語“移植排斥”是指特征在于移植組織和周圍組織功能喪失、疼痛、腫脹、白細胞增多和血小板減少的直接針對移植組織(包括器官和細胞(例如骨髓))的任何免疫反應。
本發明也提供調節哺乳動物體內cAMP水平的方法以及治療特征為細胞因子水平升高的疾病的方法。
本文所用的術語“細胞因子”是指任何分泌型多肽，該多肽影響其它細胞的功能并調節所述免疫或炎癥反應中細胞之間的相互作用。細胞因子包括但不限于單核因子、淋巴因子和趨化因子，而不管是哪些細胞產生的。例如，單核因子通常指由單核細胞產生并分泌的因子，然而，許多其它細胞子產生單核因子，例如天然殺傷細胞、成纖維細胞、嗜堿性粒細胞、嗜中性粒細胞、內皮細胞、腦星形膠質細胞、骨髓基質細胞、表皮角質細胞和B-淋巴細胞。淋巴因子通常指由淋巴細胞產生的因子。細胞因子實例包括但不限于白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNFα)和腫瘤壞死因子β(TNFβ)。
本發明還提供降低哺乳動物體內TNF水平的方法，該方法包括給予所述哺乳動物有效量的結構式(II)的化合物。本文所用的術語“降低TNF水平”是指以下情況之一a)通過抑制所有細胞(包括但不限于單核細胞或巨噬細胞)體內釋放TNF，使哺乳動物體內過量的TNF水平降低至正常水平或者正常水平以下；或b)在翻譯或轉錄水平上誘導哺乳動物體內過量的TNF水平下調至正常水平或者正常水平以下；或c)通過抑制作為翻譯后事件的直接合成TNF誘導負調節。
此外，本發明化合物可用于抑制炎性細胞激活。本文所用的術語“炎性細胞激活”是指刺激(包括但不限于細胞因子、抗原或自身抗體)誘導的增殖性細胞反應，產生可溶性介質(包括但不限于細胞因子、氧自由基、酶、前列腺素類或血管活性胺)或者炎性細胞(包括但不限于單核細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞、粒性白細胞、多形核白細胞、肥大細胞、嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞、樹突細胞和內皮細胞)細胞表面表達新的或數量增加的介質(包括但不限于主要組織相容性抗原或細胞粘著分子)。本領域技術人員知道，這些細胞表型中的一種或其組合的激活可引起炎癥的發生、持續或惡化。
本發明化合物也可用于引起氣道平滑肌松弛、支氣管擴張和防止支氣管收縮。
因此，本發明化合物可用于治療以下疾病例如關節疾病(如類風濕性關節炎)、骨關節炎、痛風性關節炎、脊椎炎、甲狀腺相關性眼病、貝切特氏病、膿毒病、敗血癥性休克、內毒素性休克、革蘭氏陰性膿毒病、革蘭氏陽性膿毒病、中毒性休克綜合征、哮喘、慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、春季結膜炎、嗜曙紅細胞肉芽腫、成人(急性)呼吸窘迫綜合征(ARDS)、慢性肺部炎性疾病(例如慢性阻塞性肺炎)、硅肺、肺結節病、心肌、腦或肢端再灌注損傷、由于輕度外傷引起的腦或脊髓損傷、包括囊性纖維變性的纖維變性、瘢痕疙瘩形成、疤痕組織形成、動脈粥樣硬化、自身免疫病例如系統性紅斑狼瘡(SLE)和移植排斥反應(例如移植物抗宿主(GvH)反應和同種異體移植排斥)、慢性腎小球腎炎、炎性腸病例如節段性回腸炎和潰瘍性結腸炎、增生性淋巴細胞疾病如白血病(例如慢性淋巴細胞白血病；CLL)(參見Mentz等，Blood 88，第2172-2182(1996))以及炎性皮膚病例如特應性皮炎、牛皮癬或蕁麻疹。
這類疾病或有關病癥的其它實例包括心肌病例如充血性心力衰竭、發熱、惡病質、感染或惡性腫瘤繼發性惡病質、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)繼發性惡病質、ARC(AIDS相關綜合征)、腦型瘧、骨質疏松和骨吸收疾病以及由于感染引起的發燒和肌痛。此外本發明化合物可用于治療尿崩癥和中樞神經系統疾病例如抑郁癥和多發梗塞性癡呆。
本發明化合物也具有通常稱作治療藥物以外的用途。例如，本發明化合物也可以用作器官移植的保存劑(參見Pinsky等，J.Clin.Invest.，92，第2994-3002頁(1993))。
選擇性PDE4抑制劑也可以用于治療勃起機能障礙尤其是血管原性陽萎(Doherty，Jr.等，美國專利第6,127,363號)、尿崩癥(KidneyInt.，37，第362頁，(1990)；Kidney Int.，35，第494頁，(1989))和中樞神經系統疾病例如多發梗塞性癡呆(Nicholson，Psychopharmacology，101，第147頁(1990))、抑郁癥(Eckman等，Curr.Ther.Res.，43，第291頁(1988))、焦慮癥和應激反應(Neuropharmacology，38，第1831頁(1991))、腦缺血(Eur.J.Pharmacol.，272，第107頁(1995))、遲發性運動障礙(J.Clin.Pharmacol.，16，第304頁(1976))、帕金森氏病(參見Neurology，25，第722頁(1975)；Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.，26，第421頁(1999))和經前綜合征。對于抑郁癥而言，PDE4選擇性抑制劑在各種抑郁癥的動物模型例如“行為絕望”或Porsolt試驗(Eur.J.Pharmacol.，47，第379頁(1978)；Eur.J.Pharmacol.，57，第431頁(1979)；Antidepressantsneurochemical，behavioral and clinicalprospectives，Enna，Malick，and Richelson主編，Raven Press，第121頁(1981))和“尾懸浮試驗”(Psychopharmacology，85，第367頁(1985))中顯示有效。最新的研究成果顯示，各種抗抑郁藥長期體內治療增加PDE4的腦性表達(J.Neuroscience，19，第610頁(1999))。因此，治療中選擇性PDE4抑制劑可以單獨使用或者與第二種治療方法聯合使用，四種主要抗抑郁治療為電驚厥方法、單胺氧化酶抑制劑和5-羥色胺或去甲腎上腺素的選擇性重攝取抑制劑。選擇性PDE4抑制劑也可以用于借助直接作用于支氣管平滑肌細胞來調節支氣管擴張活動，從而用于治療哮喘。
適用于本發明中的化合物和藥用組合物包括其中以有效量給予哺乳動物所述有效成分以便達到其預定治療目的的化合物和藥用組合物。更準確地說，“治療有效量”是指有效防止所治療患者已有癥狀發展或者緩解該癥狀的劑量。特別是參照本發明所公開的細節，有效劑量的確定完全在本領域技術人員的知識范圍內。
本文所用的術語“哺乳動物”包括雄性和雌性，并且包括人、家養動物(例如貓、狗)、家畜(例如牛、馬、豬)和野生生物(例如靈長類、大型貓科動物、動物園動物)。
“治療有效劑量”是指達到所需作用的所述化合物量。這類化合物的毒性和治療效果可以通過細胞培養或者實驗動物標準藥學方法測定，例如測定LD50(50％群體致死的劑量)和ED50(50％群體有效治療的劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比率為治療指數，它表示為LD50和ED50的比值。優選高治療指數的化合物。由這類數據得出的資料可以用于計算用于人的劑量范圍。這類化合物的劑量優選在包括幾乎沒有或者沒有毒性的ED50的循環濃度范圍內。根據所使用的劑型和所用的給藥途徑，所述劑量可以在該范圍內變化。
每個醫生可以根據患者的病情選擇準確的制劑、給藥途徑和劑量由。可以個別調整劑量和間隔時間以便提供足以維持治療效果的活性部分的血漿濃度。
本領域技術人員知道，本文所述的治療可以延伸為預防以及治療確診的疾病或者癥狀。進而還知道，所需用于治療的本發明化合物劑量根據所治療病癥的性質、患者的年齡和狀況而變化，并且最終由主治醫生或獸醫決定。然而，一般來說用于成人治療的常用劑量在每日0.001mg/kg至約100mg/kg的范圍內。所需劑量可以方便地以單一劑量給予或以合適的間隔時間，以多劑量給予，例如每日兩個、三個、四個或更多個亞劑量給予。在實踐中，醫生決定最適合于每個患者的實際給藥方案，所述劑量根據具體患者的年齡、體重和反應而改變。以上劑量為一般情況下的典型實例，但個別情況可能需要較高或較低的劑量，這也在本發明的范圍內。
本發明的制劑可以以標準方式給藥，以用于治療所指定疾病，例如口服、胃腸外、粘膜(例如舌下或者口腔含化給藥)、局部、經皮、直腸、吸入(例如鼻或者肺深部吸入)。胃腸外給藥包括但不限于靜脈內、動脈內、腹膜內、皮下、肌內、鞘內和關節內。胃腸外給藥也可以使用高壓技術象POWDERJECTTM完成。
對于口腔含化給藥而言，所述組合物可以是以常規方式配制的片劑或者錠劑形式。例如，用于口服給予的片劑和膠囊劑可以含有常規的賦形劑例如粘合劑(例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、西黃蓍膠、淀粉漿或者聚乙烯吡咯烷酮)、填充劑(例如乳糖、蔗糖、微晶纖維素、纖維素、玉米淀粉、磷酸鈣或者山梨糖醇)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、聚乙二醇或者二氧化硅)、崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或者羥基乙酸淀粉鈉)或者潤濕劑(例如月桂基硫酸鈉)。可以根據本領域熟知的方法將所述片劑包衣。
或者，本發明的化合物可以摻入口服液體制劑例如水性或者油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿或者酏劑中。而且，含有這些化合物的制劑可以以干燥產品提供，使用前用水或者其它合適的溶媒配制。這類液體制劑可以含有常規的添加劑，例如懸浮劑，如山梨糖醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠和氫化食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨糖醇單油酸酯或者阿拉伯膠；非水性溶媒(可以包括食用油)，例如杏仁油、分級分離的椰子油、油性酯、丙二醇和乙醇；和防腐劑，例如對羥基苯甲酸甲酯或者丙酯和山梨酸。
這類制劑也可以配制為栓劑，例如含有常規的栓劑基質如可可脂或者其它甘油酯。用于吸入的組合物一般可以以溶液、懸浮液或者乳液形式提供，它們可以以干粉或者以使用常規拋射劑(例如二氯二氟甲烷或者三氯氟甲烷)的氣霧劑形式給予。典型的局部和經皮制劑含有常規含水性或者非水性介質，例如滴眼劑、乳油、軟膏、洗劑和糊劑或者為加藥的膏藥、貼劑或者膜劑形式。
此外，本發明的組合物可以配制用于經注射或者連續輸注胃腸外給藥。注射劑可以是在油性或者水性溶媒中的懸浮劑、溶液劑或者乳劑形式并且可以含有組方劑，例如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑。或者，所述有效成分可以是粉末形式，使用前用合適的溶媒(例如無菌、無熱原水)配制。
本發明的組合物也可以配制為儲庫型制劑。這類長效制劑可以植入給予(例如皮下或肌內)或者通過肌內注射給予。因此，本發明的化合物可以用合適的聚合物或者疏水物質(例如在可接受的油中的乳劑)、離子交換樹脂或者微溶衍生物(例如微溶性鹽)配制。
對于獸用而言，式(II)化合物或其無毒性鹽根據常規獸醫實踐以合適的可接受制劑給予。獸醫可以容易地確定最適合具體動物的給藥方案和給藥途徑。
因此，另一方面本發明提供含有式(II)化合物以及藥學上可接受的稀釋劑或其載體的藥用組合物。本發明進一步提供制備含有式(II)化合物的藥用組合物的方法，該方法包括將式(II)化合物與其藥學上可接受的稀釋劑或載體混合。
以下提供結構式(II)化合物的具體非限制性實施例，其合成根據以下給出的方法進行。
一般而言，結構式(II)的化合物可以根據以下合成方案制備。在下述方案中，本領域內知道，當需要時根據合成化學的一般原理可以使用保護基。這些保護基在合成的最終步驟中可以在本領域技術人員顯而易見的堿性、酸性或者氫解條件下去除。通過對任何化學官能團使用合適的處理和保護，未在本文中專門提到的結構式(II)化合物的合成可以通過與以下給出方案的類似方法完成。
除非另有說明，所有的原料均得自商業供應商，并且無需進一步純化就可使用。所有反應物和層析流分通過在250mm硅膠板上的薄層層析分析，用UV(紫外)光或者I2(碘)染色顯現。產物和中間體經快速層析或者反相用PLC純化。
如以下所提出的合成方案可以制備通用結構式(II)的化合物。其它的合成途徑對于本領域技術人員也是已知的。以下反應方案提供結構式(II)化合物，其中R1和R2即甲基和環戊基由原料所決定。適當選擇其它原料或者對中間體和實例進行轉化反應可提供具有其它所述R1-R11取代基的通用結構式(II)的化合物。
以下說明結構式(II)的不同中間體和化合物的合成方法。提供下列說明性的實施例，不應該解釋為對本發明的限制。
四唑系列化合的通用合成方法
中間體1(E)-3-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙烯酸的制備 首先如下制備(E)-3-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙烯酸乙酯在氮氣氛下，通過注射器向冷卻(0℃)的膦酸丙酸三乙酯(50.6ml，236mmol，1.05當量)的無水四氫呋喃(500ml)的攪拌溶液中加入六甲基二甲硅烷氨基化鋰的四氫呋喃(247ml 1.0M，1.1當量)溶液。讓所形成的黃色溶液于0℃攪拌1.5小時，然后，在0.5小時內，通過加液漏斗滴加3-環戊氧基-4-甲氧基-苯甲醛(49.4g，225mmol)的無水四氫呋喃(150ml)溶液。讓所形成的橙色溶液于0℃攪拌2小時，然后將其溫至室溫并攪拌過夜。然后所述反應用加入的水(400ml)猝滅，用乙醚(2×300ml)萃取。合并的有機層用1N鹽酸水溶液(250ml)、飽和碳酸氫鹽水溶液(250ml)和鹽水(250ml)洗滌，然后經MgSO4干燥，過濾并真空濃縮，得到為棕色液體的不飽和酯(68.4g，100％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.64(s，1H)，7.01-6.96(c，2H)，6.87(m，1H)，4.77(m，1H)，4.26(q，2H)。LRMS(電噴霧，陽離子)Da/e 305.3(m+1)。
將(E)-3-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基-丙烯酸乙酯(30g，98.6mmol)和LiOH·H2O(氫氧化鋰水合物)(5.0g，119.2mmol，1.2當量)的甲醇-水(4∶1，100ml)的懸浮液在室溫下攪拌24小時。減壓去除甲醇，將所得的殘余物溶于水(100ml)中，用三份100ml乙酸乙酯洗滌，用1.0N HCl(鹽酸)(100ml)中和，用兩份150ml乙酸乙酯萃取。萃取液用鹽水洗滌，經無水Na2SO4(硫酸鈉)干燥，減壓濃縮，得到為淺黃色粉末的所需產物(18.2g，得率66％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)12.4(br.s，1H，COOH)，7.56(s，1H，烯)，7.04(m，3H，芳族)，4.81(m，1H)，3.78(s，3H，OCH3)，2.06(s，3H，CH3)，1.91-1.57(m，8H，環戊基)。
用一種替代方法如下制備中間體1于室溫、氮氣氛下，向乙酯(68.4g，225mmol)的二氧六環(400ml)的攪拌溶液中加入氫氧化鋰一水合物(14.0g，332mmol，1.5當量)的水(200ml)溶液。觀察到輕微放熱。將所形成的混濁黃色溶液加熱至80℃(油浴)達1.5小時。加熱0.5小時后，所述反應物變得澄清，但還需要1.5小時以完成所述反應，用TLC證實。讓所形成的溶液溫至室溫，用乙醚(500ml)稀釋，然后用1M磷酸(H3PO4)水溶液洗滌。然后該水層用乙酸乙酯(2×200ml)萃取，合并的乙酸乙酯和乙醚層用鹽水(250ml)洗滌，經MgSO4干燥，過濾并真空濃縮，得到為橙色固體的中間體1(55g，88％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.76(s，1H)，7.06-7.00(c，2H)，6.89(m，1H)，4.78(m，1H)，3.88(s，3H)，2.17(s，3H)，1.97-1.83(c，6H)，1.64-1.61(c，2H)。LRMS(電噴霧，陰離子)Da/e 275.3(M-1)。
中間體23-[(2E)-3-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基丙-2-烯酰基]-(4R)-4-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮的制備
在氯化鈣-干燥氣氛下，在10分鐘內，通過注射器，向冷卻(0℃)的中間體1(55g，199mmol)的無水二氯甲烷(400ml)的攪拌勻漿中加入草酰氯的二氯甲烷(109ml 2.0M，218mmol，1.1當量)溶液。觀察到劇烈鼓泡。讓所形成的黑色溶液于0℃攪拌15分鐘，然后通過注射器加入催化量的二甲基甲酰胺(0.3ml)。讓所形成的溶液于0℃繼續攪拌0.5小時，鼓泡逐漸停止，然后讓其溫至室溫并攪拌過夜(17小時)。反應物用乙酸乙酯(500ml)稀釋，用水(250ml)小心猝滅。將該混合物劇烈攪拌1小時后，分離各層，有機層再用水(400ml)和鹽水(400ml)洗滌，然后經MgSO4干燥，過濾并真空濃縮，得到為棕色固體的酰基氯(57.5g，98％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.98(s，1H)，7.11-7.02(c，2H)，6.92(m，1H)，4.79(m，1H)，3.90(s，3H)，2.22(s，3H)，2.01-1.82(c，6H)，1.68-1.62(c，2H)。
在氮氣氛下，通過注射器，向冷卻(-78℃)的R-苯基噁唑烷酮(10.0g，61.3mmol)的無水四氫呋喃(400ml)的機械攪拌溶液中加入正丁基鋰的己烷(27ml 2.5M，1.1當量)溶液。讓所形成的溶液于-78℃攪拌0.8小時，然后通過插管加入酰基氯(19.9g，67.4mmol，1.1當量)的四氫呋喃(100ml)溶液。于-78℃攪拌15分鐘后，讓反應混合物在40分鐘內緩慢溫至0℃，在此期間，反應物變成粘稠的漿狀物。于0℃攪拌2.5小時后，所述反應用飽和氯化銨水溶液(300ml)猝滅，在減壓下去除大量的四氫呋喃。然后殘余物用氯仿(3×700ml)萃取，合并的有機層用水(300ml)和鹽水(300ml)洗滌，然后經MgSO4干燥，過濾并真空濃縮，得到約33g淡橙色固體。將該物質懸浮于10％乙酸乙酯的己烷(1.2L)中，劇烈攪拌過夜。在瓷漏斗上抽吸收集所形成的精細粉狀固體，然后真空干燥，得到為褐色粉末的中間體2(21.8g，88％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.41-7.37(c，5H)，7.06(s，1H)，7.01-6.97(c，2H)，6.86(m，1H)，5.54(t，1H)，4.77-4.73(c，2H)，4.29(t，1H)，3.87(s，3H)，2.17(s，3H)，1.97-1.82(c，6H)，1.62-1.56(c，2H)。
同樣，使用S-(-)-4-苯基噁唑烷酮，可以制備中間體2的對映體。
中間體3(4R)-3-{[(3S，4S)-4-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯基)-3-甲基-1-芐基吡咯烷-3-基]羰基}-4-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮的制備 在氮氣氛下，通過注射器，向冷卻(-4℃)的中間體2(9.30g，22.8mmol)和N-(甲氧基-甲基)-N-(三甲基甲硅烷基甲基)芐胺(11.7ml，45.6mmol，2當量)的氯仿(65ml)的攪拌勻漿中加入三氟乙酸的氯仿(4.6ml 1.0M，4.6mmol，0.2當量)溶液。讓所形成的勻漿于約0℃攪拌4小時，然后于約15℃(水浴)攪拌過夜。將所形成的混濁溶液再冷卻至-4℃，然后用通過注射器加入的N-(甲氧基甲基)-N-(三甲基甲硅烷基甲基)芐胺(5.9ml，22.8mmol，1當量)處理，將其攪拌5小時，在此期間，所述反應物變得均勻。TLC(5％Et2O的CH2Cl2)顯示所述反應完全。在減壓下去除大量的氯仿，殘余物用乙酸乙酯(250ml)稀釋，然后依次用1N鹽酸水溶液(2×50ml)、1N氫氧化鈉水溶液(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。然后將有機層經MgSO4干燥，過濾并真空濃縮，得到橙色半固體(13.9g)。通過硅膠(2％乙醚的二氯甲烷)上的快速色譜純化，得到為白色泡沫的主要非對映體吡咯烷(8.25g，65％)。非對映體的選擇性約10∶1(HPLC)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.42-7.21(c，10H)，6.95(s，1H)，6.81(s，2H)，5.55(dd，1H)，4.74(t，1H)，4.68(m，1H)，4.10(dd，1H)，3.93(t，1H)，3.70(d，1H)，3.68(s，3H)，3.56(d，1H)，3.42(d，1H)，2.72(m，2H)，2.64(d，1H)，2.48(m，1H)，1.85-1.78(c，2H)，1.75-1.61(c，4H)，1.57-1.53(c，2H)，0.96(s，3H)。LRMS(電噴霧，陽離子)Da/e 555.2(m+1)。
中間體4(3S，4S)-4-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯基)-3-甲基-1-芐基吡咯烷-3-甲醛的制備還原/氧化步驟在氮氣氛下，通過注射器，向冷卻(-78℃)的酰基噁唑烷酮-吡咯烷(15.09g，27.2mmol)的甲苯(250ml)的攪拌溶液中加入氫化鋁鋰的四氫呋喃(16.3ml，1.0M，16.3mmol，0.6當量)的溶液。觀察到劇烈鼓泡。讓所形成的溶液于-78℃攪拌2小時，然后取出冷卻浴，用依次加入的水(0.62ml)、15％氫氧化鈉水溶液(0.62ml)和水(1.9ml)將其猝滅。讓所形成的混合物溫至室溫，攪拌30分鐘，然后用乙醚(500ml)稀釋，經MgSO4干燥。過濾并真空濃縮，得到為半固體的醇(存在少量甲醛)(14.8g)。該物質無需進一步純化可立即使用。
在氮氣氛下，通過注射器，向冷卻(-78℃)的草酰氯的二氯甲烷(10.9ml，2.0M，21.8mmol，0.8當量)在二氯甲烷(75ml)的攪拌溶液中加入二甲亞砜(3.1ml，43.5mmol，1.6當量)。觀察到劇烈鼓泡。于-78℃攪拌20分鐘后，通過插管加入粗品醇的二氯甲烷(75ml)溶液。讓所形成的黃色溶液于-78℃攪拌20分鐘，然后通過注射器加入三乙胺(15.2ml，109mmol，4當量)。讓反應物于-78℃攪拌20分鐘，然后溫至室溫，再攪拌1小時。反應物用加入的鹽水(150ml)猝滅，然后用二氯甲烷(2×100ml)萃取。合并的有機部分經MgSO4干燥，過濾，然后真空濃縮，得到粗品醛。經硅膠快速層析(25％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到為澄清無色油狀的所述醛(9.8g，92％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.64(s，1H)，7.37-7.26(c，5H)，6.78-6.76(c，2H)，6.70(m，1H)，4.74(m，1H)，3.82(s，3H)，3.70(m，1H)，3.64-3.62(c，2H)，3.18-3.13(c，2H)，2.84(t，1H)，2.41(d，1H)，1.94-1.83(c，6H)，1.63-1.59(c，2H)，0.74(s，3H)。LRMS(電噴霧，陽離子)Da/e 394.3(m+1)。
中間體5 向中間體4(230mg，0.59mmol)的乙醇(2.0ml)溶液中加入羥基胺鹽酸鹽(203mg，2.9mmol)的水(0.5ml)溶液。將懸浮液在蒸汽浴上攪拌1小時。將反應混合物減壓濃縮，然后加入乙酸酐(2.35ml，24.9mmol)，將所形成的混合物加熱至110℃，回流過夜。然后將反應混合物真空濃縮，然后將其溶于乙腈-水(CH3CN-H2O)(1ml)溶液中，在C18柱(Luma 10μ，C18，250×10mm)上經HPLC純化。50-100％乙腈-水(0.05％TFA)的梯度洗脫后，得到凍干后為白色粉末的題述產物(90mg，39％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.48-7.46(m，5H，芳族)，6.83(d，1H，J＝8.2Hz，芳族)，6.82(s，1H，芳族)，6.73(d，1H，J＝8.2Hz，芳族)，4.80-4.77(br.m，1H)，4.42(d，1H，J＝12.8Hz)，4.36(d，1h，J＝12.8Hz)，3.99-3.94(m，2H，CH2)，3.84(s，3H，OCH3)，3.80-3.65(m，3H)，1.95-1.59(m，8H，環戊基)，1.18(s，3H，CH3)。
實施例1 向中間體5(270mg，0.69mmol)的無水DMF(4ml)的攪拌溶液中加入疊氮化鈉(49.5mg，0.76mmol)和精細NH4Cl粉末(83mg，1.54mmol)。將懸浮液加熱至135℃，回流2天。將溶液傾至水(20ml)中，用乙酸乙酯(2×50ml)萃取，用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，然后真空濃縮，得到題述產物。在C18柱(Luna 10μ，C18，250×10mm)上通過反相HPLC完成純化。50-100％乙腈-水(0.05％TFA)的梯度洗脫后，得到凍干后為白色粉末的產物(59.8mg，得率20％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.6-7.35(m，5H，芳族)，6.72-6.70(m，1H)，6.54-6.25(m，2H)，6.06(br.s，1H)，4.51-4.46(m，2H)，4.37-4.33(m，1H)，4.22-4.0(m，1H)，3.94-3.82(m，1H)，3.77(s，3H，OCH3)，3.7-3.5(m，1H)，3.40-3.25(m，1H)，1.9-1.42(m，8H，環戊基)，1.38(br.s，3H，CH3)。
測試了結構式(II)化合物抑制PDE4的能力。一種化合物抑制PDE4活性的能力與該化合物的IC50值即抑制50％酶活性所需的抑制劑濃度有關。使用重組人PDE4測定結構式(II)化合物的IC50值。
本發明化合物一般抑制重組人PDE4的IC50值為低于約100μM，優選低于約50μM，更優選低于約約25μM。本發明化合物一般顯示抑制重組人PDE4的IC50值為低于約10μM，通常低于約1μM。為充分體現本發明的優點，本發明的PDE4抑制劑的IC50為約0.1μM-約25μM。
由一般使用在濃度范圍0.1pM-500μM的濃度-反應曲線，確定所述化合物的IC50值。使用如Loughney等，J.Biol.Chem.，271，第796-806頁(1996)中所述的標準方法，針對其它PDE酶的試驗也表明本發明的化合物對于cAMP特異性PDE4酶具有高度選擇性。
通過本領域眾所周知的方法可以完成重組人PDE的制備和IC50的測定。典型方法介紹如下人PDE的表達在桿狀病毒感染的草地貪夜蛾(Spodoptera fugiperda)(Sf9)細胞中的表達使用pBlueBacIII(Invitrogen)或者pFasBac(BRL-Gibco)構建桿狀病毒轉移質粒。通過跨越所述載體接點進行測序并且通過對經PCR產生的所有區進行完全測序，證實所有質粒的結構。質粒pBB-PDE1A3/6在pBlueBacIII中含有PDE1A3的完整可讀框(Loughney等，J.Biol.Chem.，27l，第796-806頁(1996))。質粒Hcam3aBB在pBlueBacIII中含有PDE1C3的完整可讀框(Loughney等(1996))。質粒pBB-PDE3A在pBlueBacIII中含有PDE3A的完整可讀框(Meacci等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，89，第3721-3725頁(1992))。
按照生產商的方案，使用MaxBac系統(Invitrogen)或者FastBac系統(Gibco-BRL)生產重組病毒原液。在這兩種情況下，重組人PDE在所得病毒中的表達由病毒多角體啟動子驅動。當使用MaxBac系統時，為了確保野生型(occ+)病毒不污染制劑，將病毒噬斑純化兩次。如下進行蛋白表達。讓Sf9細胞在補充如下成分的Grace’s昆蟲培養基(Gibco-BRL)中于27℃生長10％胎牛血清、0.33％TC yeastolate、0.33％水解乳白蛋白、4.2mM碳酸氫鈉、10μg/ml慶大霉素、100單位/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。以每個細胞大約2-3個病毒顆粒的感染復數感染指數生長細胞，然后孵育48小時。通過離心收集細胞，用無補充組分的Grace’s培養基洗滌并且快速冷凍保存。在釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(酵母)中的表達人PDE1B、PDE2、PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE4D、PDE5和PDE7的重組產生類似于美國專利第5,702,936號的實施例7中所述進行(該專利通過引用結合到本文中)，只是使用酵母轉化載體，該酵母轉化載體衍生自Price等，Methods in Enzymology，185，第308-318頁(1990)介紹的基礎ADH2質粒，該質粒中加入酵母ADH2啟動子和終止子序列，所述釀酒酵母宿主為蛋白酶缺陷型菌株BJ2-54，BJ2-54于1998年8月31日保藏在美國典型培養物保藏中心(Manassas，Virginia)，保藏號為ATCC 74465。使轉化宿主細胞在2×SC-leu培養基(pH 6.2，含有微量金屬和維生素)中生長。24小時后，加入含有甘油的YEP培養基至終濃度為2×YET/3％甘油。約24小時后，收獲細胞，洗滌并且于-70℃保存。
人磷酸二酯酶制劑磷酸二酯酶活性的測定如下測定所述制劑的磷酸二酯酶活性。利用活性炭分離技術的PDE測定基本如Loughney等(1996)所述進行。在該測定中，PDE活性將[32P]cAMP或者[32P]cGMP轉化為相應的[32P]5’-AMP或者[32P]5’-GMP與存在的PDE活性量成正比。然后，在蛇毒5’-核苷酸酶的作用下，[32P]5’-AMP或者[32P]5’-GMP被定量轉化為游離的[32P]磷酸和未標記的腺苷或鳥苷。因此，釋放的[32P]磷酸的量與酶活性成正比。該測定在100μl含有(終濃度)以下組分的反應混合物中于30℃下進行40mM Tris HCl(pH8.0)、1μM硫酸鋅、5mM氯化鎂和0.1mg/ml牛血清白蛋白(BSA)。或者，在評估PDE1比活的測定中，孵育混合物還包括使用0.1mM氯化鈣和10μg/ml鈣調蛋白。PDE酶以產率＜30％總底物水解的量存在(線性測試條件)。通過加入底物(1mM[32P]cAMP或cGMP)，并將該混合物孵育12分鐘，開始所述測試。然后加入75μg大響尾蛇(Crotalus atrox)毒液，繼續孵育3分鐘(總共15分鐘)。通過加入200μl活性炭(在0.1M磷酸二氫鈉pH4中的25mg/ml懸浮液)終止反應。離心(750Xg，3分鐘)沉淀所述活性炭后，取出上清液樣品，在閃爍計數器中測定放射性，然后計算PDE活性。
類似于Loughney等，J.Biol.Chem.，271，第796-806頁(1996)所述的方法進行抑制劑的分析，只是同時使用cGMP和cAMP，底物濃度保持在低于32nM，該值遠低于被測PDE的Km。
人PDE4A、4B、4C、4D制劑用釀酒酵母制備PDE4A通過與50ml裂解緩沖液(50mM MOPS pH 7.5，10μM硫酸鋅，2mM氯化鎂，14.2mM 2-巰基乙醇，各5μg/ml的抑胃酶肽、亮抑蛋白酶肽、抑蛋白酶肽，各20μg/ml的鈣蛋白酶抑制劑I和II和2mM苯甲脒鹽酸鹽)混合，在室溫下，解凍酵母細胞(50g帶有HDUN1.46的酵母菌株YI26)。將細胞在弗氏(French)壓碎器(SLM-Aminco，Spectronic Instruments)中于10℃裂解。用Beckman JA-10轉子，將所述提取物于4℃以9,000rpm離心22分鐘。取出上清液，用BeckmanTI45轉子，于4℃以36,000rpm離心45分鐘。
通過加入固體硫酸銨(0.26g/ml上清液)，同時在冰浴中攪拌并且維持pH在7.0-7.5之間，從高速上清液沉淀PDE4A。通過用BeckmanJA-10轉子以9,000rpm離心22分鐘，收集含有PDE4A的沉淀蛋白。將所述沉淀物重懸于50ml緩沖液G(50mM MOPS pH7.5，10μM硫酸鋅，5mM氯化鎂，100mM氯化鈉，14.2mM 2-巰基乙醇，2mM苯甲脒鹽酸鹽，各5μg/ml的亮抑蛋白酶肽、抑胃酶肽、抑蛋白酶肽和各20μg/ml的鈣蛋白酶抑制劑I和II)中，然后通過0.45μm濾膜。
將所述重懸浮樣品(50-100ml)上樣到緩沖液G平衡的5×100cmPharmacia SEPHACRYLS-300柱中。以流速2ml/min洗脫酶活性并將其合并，以供稍后的分級分離用。
將經凝膠過濾層析分離的PDE4A上樣到緩沖液A(50mM MOPSpH7.5，10μM硫酸鋅，5mM氯化鎂，14.2mM 2-巰基乙醇和100mM苯甲脒鹽酸鹽)平衡的1.6×20cm Sigma Cibacron Blue Agarose-300型柱(10ml)中。依次用50-100ml緩沖液A、20-30ml含有20mM 5’-AMP的緩沖液A、50-100ml含有1.5M氯化鈉的緩沖液A和10-20ml緩沖液C(50mM Tris HCl pH8，10μM硫酸鋅、14.2mM 2-巰基乙醇和2mM苯甲脒鹽酸鹽)洗滌所述柱子。用20-30ml含有20mM cAMP的緩沖液C洗脫所述酶。
合并PDE活性峰，用硫酸銨沉淀(0.33g/ml酶合并液)，以便去除過量的環核苷酸。將沉淀蛋白重懸于緩沖液X(25mM MOPS pH7.5，5μM硫酸鋅，50mM氯化鈉，1mM DTT和1mM苯甲脒鹽酸鹽)中，按照生產商的說明，通過在Pharmacia PD-10柱上凝膠過濾將其脫鹽。將所述酶在干冰/乙醇浴中快速冷凍，然后于-70℃保存。
所得制劑的SDS-PAGE純度約＞80％。這些制劑水解cAMP的比活約10-40μmolcAMP/每分鐘/毫克蛋白。
用釀酒酵母制備PDE4B在室溫下，通過與100ml玻璃珠(0.5mM，酸洗)和150ml裂解緩沖液(50mM MOPS pH7.2，2mM EDTA，2mM EGTA，1mMDTT，2mM苯甲脒鹽酸鹽、各5μg/ml的抑胃酶肽、亮抑蛋白酶肽、抑蛋白酶肽、鈣蛋白酶抑制劑I和II)混合，解凍酵母細胞(150g帶有HDUN2.32的酵母菌株YI23)。將所述混合物冷卻至4℃，轉移到Bead-Beater中，快速混合6個循環(每個循環30秒)使所述細胞裂解。在Beckman J2-21M離心機中，使用JA-10轉子，將所述勻漿于4℃以9,000rpm離心22分鐘。回收上清液，并且在Beckman XL-80超速離心機中，使用TI45轉子，將其于4℃以36,000rpm離心45分鐘。回收上清液并且通過加入固體硫酸銨(0.26g/ml上清液)，同時在冰浴中攪拌并且維持pH在7.0-7.5的范圍內，沉淀PDE4B。然后，在Beckman J2離心機中，使用JA-10轉子，將該混合物以9,000rpm(12,000Xg)離心22分鐘。棄去上清液，將沉淀溶于200ml緩沖液A(50mM MOPS pH7.5，5mM氯化鎂，1mM DTT，2mM苯甲脒鹽酸鹽，以及各5μg/ml的亮抑蛋白酶肽、抑胃酶肽和抑蛋白酶肽)中。將pH和電導率分別校正為7.5和15-20mS。
將所述重懸浮樣品上樣到在緩沖液A中平衡的1.6×200cmSigma Cibacron Blue Agarose-300型柱(25ml)中。將所述樣品在12個小時內循環通過所述柱4-6次。依次用125-250ml緩沖液A、125-250ml含有1.5M氯化鈉的緩沖液A和25-50ml緩沖液A洗滌所述柱子。用50-75ml緩沖液E(50mM Tris HCl pH8，2mM EDTA，2mMEGTA，1mM DTT，2mM苯甲脒鹽酸鹽和20mM cAMP)和50-75ml含有1M氯化鈉的緩沖液E洗脫所述酶。合并PDE活性峰，用硫酸銨(0.4g/ml酶合并液)沉淀，以便去除過量的環核苷酸。將沉淀蛋白重懸于緩沖液X(25mM MOPS pH7.5，5μM硫酸鋅，50mM氯化鈉，1mM DTT和1mM苯甲脒鹽酸鹽)中，并且按照生產商的說明，通過在Pharmacia PD-10柱上凝膠過濾將其脫鹽。將該酶合并液對含有50％甘油的緩沖液X透析過夜。將所述酶在干冰/乙醇浴中快速冷凍，然后于-70℃保存。
所得制劑的SDS-PAGE純度約＞90％。這些制劑水解cAMP的比活約10-50μmolcAMP/每分鐘/毫克蛋白。
用釀酒酵母制備PDE4C在室溫下，通過與100ml玻璃珠(0.5mM，酸洗)和150ml裂解緩沖液(50mM MOPS pH 7.2，2mM EDTA，2mM EGTA，1mMDTT，2mM苯甲脒鹽酸鹽，各5μg/ml的抑胃酶肽、亮抑蛋白酶肽、抑蛋白酶肽、鈣蛋白酶抑制劑I和II)混合，解凍酵母細胞(150g帶有HDUN3.48的酵母菌株YI30)。將所述混合物冷卻至4℃，轉移到BEAD-BEATER中并且快速混合6個循環(每個循環30秒)使所述細胞裂解。在Beckman J2-21M離心機中，使用JA-10轉子，將所述勻漿于4℃以9,000rpm離心22分鐘。回收上清液，并且在BeckmanXL-80超速離心機中，使用TI45轉子，將其于4℃以36,000rpm離心45分鐘。
回收上清液，通過加入固體硫酸銨(0.26g/ml上清液)，同時在冰浴中攪拌并且維持pH在7.0-7.5的范圍內，沉淀PDE4C。30分鐘后，在Beckman J2離心機中，使用JA-10轉子，將該混合物以9,000rpm(12,000Xg)離心22分鐘。棄去上清液，將沉淀溶于200ml緩沖液A(50mM MOPS pH7.5，5mM氯化鎂，1mM DTT，2mM苯甲脒鹽酸鹽，以及各5μg/ml的亮抑蛋白酶肽、抑胃酶肽和抑蛋白酶肽)中。將pH和電導率分別校正為7.5和15-20mS。
將所述重懸浮樣品上樣到在緩沖液A中平衡的1.6×20cm SigmaCibacron Blue Agarose-300型柱(25ml)中。將所述樣品在12個小時內循環通過所述柱4-6次。依次用125-250ml緩沖液A、125-250ml含有1.5M氯化鈉的緩沖液A和25-50ml緩沖液A洗滌所述柱子。用50-75ml緩沖液E(50mM Tris HCl pH8，2mM EDTA，2mM EGTA，1mM DTT，2mM苯甲脒鹽酸鹽和20mM cAMP)和50-75ml含有1M氯化鈉的緩沖液E洗脫所述酶。合并PDE4C活性峰，用硫酸銨(0.4g/ml酶合并液)沉淀，以便去除過量的環核苷酸。將沉淀蛋白重懸于緩沖液X(25mM MOPS pH7.2，5μM硫酸鋅，50mM氯化鈉，1mM DTT和1mM苯甲脒鹽酸鹽)中，并且按照生產商的說明，經在PharmaciaPD-10柱上凝膠過濾將其脫鹽。將該酶合并液對含有50％甘油的緩沖液X透析過夜。將所述酶在干冰/乙醇浴中快速冷凍，然后于-70℃保存。
所得制劑的SDS-PAGE純度約＞80％。這些制劑水解cAMP的比活約10-20μmol cAMP/每分鐘/毫克蛋白。
用釀酒酵母制備PDE4D在室溫下，通過與150ml玻璃珠(0.5mM，酸洗)和150ml裂解緩沖液(50mM MOPS pH7.2，10μM硫酸鋅，2mM氯化鎂，14.2mM2-巰基乙醇，2mM苯甲脒鹽酸鹽，各5μg/ml的抑胃酶肽、亮抑蛋白酶肽、抑蛋白酶肽、鈣蛋白酶抑制劑I和II)混合，解凍酵母細胞(100g帶有HDUN4.11的酵母菌株YI29)。將所述混合物冷卻至4℃，轉移到Bead-Beater中并且快速混合6個循環(每個循環30秒)使所述細胞裂解。在Beckman J2-21M離心機中，使用JA-10轉子，將所述勻漿于4℃以9,000rpm離心22分鐘。回收上清液，在Beckman XL-80超速離心機中，使用TI45轉子，將其于4℃以36,000rpm離心45分鐘。回收上清液，通過加入固體硫酸銨(0.33g/ml上清液)，同時在冰浴中攪拌并且維持pH在7.0-7.5的范圍內，沉淀PDE4D。30分鐘后，在Beckman J2離心機中，使用JA-10轉子，將該混合物以9,000rpm(12,000Xg)離心22分鐘。棄去上清液，將沉淀溶于100ml緩沖液A(50mM MOPS pH7.5，10μM硫酸鋅，5mM氯化鎂，14.2mM 2-巰基乙醇，100mM苯甲脒鹽酸鹽，以及各5μg/ml的亮抑蛋白酶肽、抑胃酶肽、抑蛋白酶肽、鈣蛋白酶抑制劑I和II)中。將pH和電導率分別校正為7.5和15-20mS。
以流速0.67ml/min，將所述重懸浮樣品上樣到在緩沖液A中平衡的1.6×20cm Sigma Cibacron Blue Agarose-300型柱(10ml)中。依次用50-100ml緩沖液A、20-30ml含有20mM 5’-AMP的緩沖液A、50-100ml含有1.5M氯化鈉的緩沖液A和10-20ml緩沖液C(50mMTris HCl pH8，10μM硫酸鋅，14.2mM 2-巰基乙醇，2mM苯甲脒鹽酸鹽)洗滌所述柱子。用20-30ml含有20mM cAMP的緩沖液C洗脫所述酶。
合并PDE4D活性峰，用硫酸銨(0.4g/ml酶合并液)沉淀，以便去除過量的環核苷酸。將沉淀蛋白重懸于緩沖液X(25mM MOPS pH7.2，5μM硫酸鋅，50mM氯化鈉，1mM DTT和1mM苯甲脒鹽酸鹽)中，并且按照生產商的說明，通過在Pharmacia PD-10柱上凝膠過濾將其脫鹽。將該酶合并液對含有50％甘油的緩沖液X透析過夜。將所述酶制劑在干冰/乙醇浴中快速冷凍，然后于-70℃保存。
所得制劑的SDS-PAGE純度約＞80％。該制劑水解cAMP的比活約20-50μmol cAMP/每分鐘/毫克蛋白。
實例1對人重組PDE4的IC50值為7.9μM。所述數據說明，本發明的化合物為有效的PDE4抑制劑，例如所述化合物對人重組PDE4的IC50為約0.1μM至約25μM。優選化合物的IC50約為100μM或以下，特別優選化合物的IC50約為50μM或以下。
本發明的化合物可用于選擇性地抑制哺乳動物體內PDE4活性，而沒有與在先PDE4抑制劑有關的不利的中樞神經系統作用和催吐作用。
顯然，在不偏離本發明的精神和范圍的情況下，可以對本文以上提出的本發明內容作各種修改和變化，因此，本發明只受所附權利要求書的限制。
權利要求
1.一種具有以下結構式的化合物 其中Y為O或NR4；R1選自低級烷基、橋連烷基、芳烷基、環烷基、5-或6-元飽和雜環基、C1-3亞烷基環烷基、芳基-或雜芳基-取代的炔丙基、芳基-或雜芳基-取代的烯丙基和鹵代環烷基；R2為氫、甲基或鹵基-取代的甲基；R3選自C(＝O)OR7、C(＝O)R7、C(＝NH)NR8R9、C(＝O)NR8R9、低級烷基、橋連烷基、環烷基、鹵代烷基、鹵代環烷基、C1-3亞烷基環烷基、5-或6-元飽和雜環基、芳基、雜芳基、雜芳基SO2、芳烷基、烷芳基、雜芳烷基、雜烷芳基、C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C1-3亞烷基雜芳基、C(＝O)C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基NH(C＝O)OR7、C(＝O)C1-3亞烷基NH2和NHC(＝O)OR7；R4為氫、低級烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基或雜芳基；R7選自環烷基、支鏈或直鏈低級烷基、雜芳基、雜環基、芳烷基和芳基，并且R7可以任選用一個或多個OR8、NR8R9或SR8取代；R8和R9相同或不同，它們選自氫、低級烷基、環烷基、芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、雜烷芳基和芳烷基，或者R8和R9一起形成4-元至7-元環；R10為氫、烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基、C(＝O)烷基、C(＝O)環烷基、C(＝O)芳基、C(＝O)O烷基、C(＝O)O環烷基、C(＝O)芳基、CH2OH、CH2O烷基、CHO、CN、NO2或SO2R11；R11為烷基、環烷基、三氟甲基、芳基、芳烷基或NR8R9。
2.權利要求1的化合物，所述化合物具有以下結構
3.權利要求1的化合物，其中R1選自 和
4.權利要求1的化合物，其中R2為甲基或二氟甲基。
5.權利要求1的化合物，其中R3選自芳烷基、烷芳基、雜芳烷基、雜烷芳基、低級烷基、環烷基、雜芳基、雜環基和芳基。
6.權利要求1的化合物，其中R3選自 和
7.權利要求1的化合物，其中R4選自氫、甲基、三氟甲基、環丙基和苯基。
8.權利要求1的化合物，其中R7為低級烷基。
9.權利要求1的化合物，其中R8和R9獨立地為氫或低級烷基，或者R8和R9一起形成5-元或6-元環。
10.權利要求1的化合物，其中Y為NH；R1選自環戊基、四氫呋喃基、茚滿基、降冰片基、苯乙基和苯基丁基；R2選自甲基和二氟甲基；R3選自芐基、CO2CH3、C(＝O)CH2OH、C(＝O)CH(CH3)OH、C(＝O)C(CH3)2OH和 R7為甲基；R10為氫。
11.權利要求1的化合物，所述化合物具有以下結構式
12.權利要求1的化合物，所述化合物對人重組PDE4的IC50為約0.1μM至約25μM。
13.權利要求1的化合物，所述化合物對人重組PDE4的IC50為約100×10-6M或100×10-6M以下。
14.權利要求1的化合物，所述化合物對人重組PDE4的IC50為約50×10-6M或50×10-6M以下。
15.一種藥用組合物，它包含權利要求1的化合物、藥學上可接受的載體和任選的第二種抗炎治療藥物。
16.權利要求15的組合物，其中所述第二種抗炎治療藥物能夠靶向TNFα。
17.一種治療患有抑制cAMP特異性PDE具有治療益處的病癥的哺乳動物的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的權利要求1化合物。
18.一種調節哺乳動物體內cAMP水平的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物有效量的權利要求1化合物。
19.一種治療患有抑制cAMP特異性PDE具有治療益處的病癥的哺乳動物的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物有效量的包含權利要求1化合物和藥學上可接受的載體的藥用組合物。
20.權利要求19的方法，其中所述病癥是變應性疾病、自身免疫病、炎性疾病、關節疾病或皮炎。
21.權利要求19的方法，其中所述病癥是類風濕性關節炎、骨關節炎、痛風性關節炎或脊椎炎。
22.權利要求19的方法，其中所述病癥是甲狀腺相關性眼病、貝切特氏病、膿毒病、敗血癥性休克、內毒素性休克、革蘭氏陰性膿毒病、革蘭氏陽性膿毒病、中毒性休克綜合征、過敏性結膜炎、春季結膜炎或嗜曙紅細胞肉芽腫。
23.權利要求19的方法，其中所述病癥是哮喘、慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、成人呼吸窘迫綜合征、慢性肺部炎性疾病、慢性阻塞性肺部疾病、硅肺或肺結節病。
24.權利要求19的方法，其中所述病癥是心肌、腦或肢端的再灌注損傷、由于外傷引起的腦或脊髓損傷。
25.權利要求19的方法，其中所述病癥是纖維變性、瘢痕疙瘩形成或疤痕組織形成。
26.權利要求19的方法，其中所述病癥是系統性紅斑狼瘡、移植排斥性病癥、移植物抗宿主反應或同種異體移植排斥。
27.權利要求19的方法，其中所述病癥是慢性腎小球腎炎、炎性腸病、節段性回腸炎或潰瘍性結腸炎。
28.權利要求19的方法，其中所述病癥是增生性淋巴細胞疾病或白血病。
29.權利要求19的方法，其中所述病癥是炎性皮膚病、特應性皮炎、牛皮癬或蕁麻疹。
30.權利要求19的方法，其中所述病癥是心肌病、充血性心力衰竭、動脈粥樣硬化、發熱、惡病質、感染或惡性腫瘤繼發性惡病質、獲得性免疫缺陷綜合征繼發性惡病質、ARC、腦型瘧、骨質疏松、骨吸收疾病、由于感染引起的發燒和肌痛、勃起機能障礙、尿崩癥、中樞神經系統疾病、抑郁癥、多發梗塞性癡呆、焦慮癥或應激反應、腦缺血、遲發性運動障礙、帕金森氏病或經前綜合征。
31.權利要求19的方法，其中所述哺乳動物表現出最小催吐反應。
32.權利要求19的方法，其中所述哺乳動物沒有催吐反應。
33.權利要求19的方法，其中所述哺乳動物表現出最小不利的中樞神經系統副作用。
34.權利要求19的方法，其中所述哺乳動物沒有不利的中樞神經系統副作用。
35.一種降低哺乳動物體內TNF水平的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的權利要求1化合物。
36.一種抑制哺乳動物體內炎性細胞激活的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的權利要求1化合物。
37.一種抑制哺乳動物體內PDE4功能的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的權利要求1化合物。
全文摘要
公開了PDE4的有效選擇性抑制劑的新型化合物以及制備所述化合物的方法。還公開了應用所述化合物治療炎性疾病和其它涉及細胞因子水平升高的疾病以及中樞神經系統(CNS)疾病。
文檔編號C07D249/08GK1505627SQ00819092
公開日2004年6月16日 申請日期2000年11月17日 優先權日1999年12月23日
發明者K·W·福勒, J·奧丁戈, 「, K W 福勒 申請人:艾科斯有限公司