水楊酸酰胺衍生物的制作方法

專利名稱：水楊酸酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的水楊酸酰胺衍生物、其制備方法及以該衍生物為有效成分的藥物制劑。更具體涉及具有NF-κB活化抑制作用的可作為抗炎劑、免疫抑制劑使用的新穎的水楊酸酰胺衍生物、該衍生物的制備中間體、它們的制備方法及以前述水楊酸酰胺衍生物或其鹽為有效成分的醫(yī)藥品。
背景技術(shù)：
以往使用類甾醇劑、前列腺素合成抑制劑等作為抗炎劑。此外，使用環(huán)孢子菌素和FK506藤霉素等作為免疫抑制劑。但是，這些藥物制劑在效果和副作用方面都存在一些問題。
特別是以上大多數(shù)藥物都具有較強(qiáng)的副作用，作為抗炎劑和免疫抑制劑使用時(shí)受到很大制約。
因此，希望開發(fā)或研制出副作用較少、且具有新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)或作用機(jī)制的新藥物制劑。為實(shí)現(xiàn)上述目的，進(jìn)行了開發(fā)或研制具有不同于以往所用的藥物制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)及作用機(jī)制、且具備良好抗炎活性和免疫抑制活性的新化合物的研究。
經(jīng)鑒定NF-κB是與免疫球蛋白κ鏈遺傳基因的增強(qiáng)子結(jié)合的核蛋白(Cell 46，705-716，1986)，但最初認(rèn)為它是對(duì)B細(xì)胞有特異性的轉(zhuǎn)錄因子，然后明確它存在于各種細(xì)胞中。NF-κB是由2個(gè)亞基組成的雜二聚體，由具備約300的氨基酸的Rel同源域(RHD)的p50、p52分別與RelA、c-Rel、RelB組合而成(Annu.Rev.Immunol.，14，649-681，1996)。
NF-κB是生物體防御反應(yīng)的中心轉(zhuǎn)錄因子，由NF-κB衍生的遺傳基因中的大多數(shù)除了與免疫球蛋白有聯(lián)系之外，還與細(xì)胞因子(IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、TNF等)、細(xì)胞粘著因子(E-選擇蛋白、ICAM-1、VCAM-1等)、一氧化氮(NO)合成酶、Fas配體等免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)等有很深的聯(lián)系(Cell，87，13-20，1996)。
可引發(fā)NF-κB活化的因子除了TNF-α之外，還包括IL-1、抗原刺激、TPA、UV、活性氧等(Annu.Rev.Immunol.，12，141-179，1994)。因此，如果能夠找到可抑制因細(xì)胞受到TNF-α等刺激而衍生的NF-κB的活化的低分子物質(zhì)，則能夠?qū)⑵浒l(fā)展為抗炎劑或免疫抑制劑。
發(fā)明的揭示本發(fā)明者們對(duì)前述課題進(jìn)行認(rèn)真篩選后發(fā)現(xiàn)具有特定結(jié)構(gòu)的新穎的水楊酸酰胺衍生物，即后述的式(1a)表示的化合物(DHM2EQ)及式(1b)表示的化合物(DHM3EQ)具備NF-κB活化抑制作用，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明提供了以下新穎的水楊酸酰胺衍生物、它們的制備方法及以它們?yōu)橛行С煞值尼t(yī)藥品。 表示的水楊酸酰胺衍生物，式中，R1表示氫原子或C2～4烷酰基，R2表示以下式(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F)或(G)表示的基團(tuán)， 其中R3表示C1～4烷基。
進(jìn)一步限定前述1記載的水楊酸酰胺衍生物，該衍生物為式(1a)或(1b) 表示的化合物。
進(jìn)一步限定前述1記載的水楊酸酰胺衍生物，該衍生物為式(2) 表示的化合物，式中符號(hào)的含義與前述1相同。
進(jìn)一步限定前述1記載的水楊酸酰胺衍生物，該衍生物為式(3) 表示的化合物，式中符號(hào)的含義與前述1相同。
進(jìn)一步限定前述1記載的水楊酸酰胺衍生物，該衍生物為式(4) 表示的化合物，式中符號(hào)的含義與前述1相同。
進(jìn)一步限定前述1記載的水楊酸酰胺衍生物，該衍生物為式(5) 表示的化合物。
進(jìn)一步限定前述1記載的水楊酸酰胺衍生物，該衍生物為式(6) 表示的化合物，式中符號(hào)的含義與前述1相同。
式(2) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使2，5-二甲氧基苯胺與式(7) 表示的O-烷酰基水楊酰鹵反應(yīng)，式中，R1的含義與前述1相同，X表示鹵原子。
式(3) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，在式C6H3I(OAc)2表示的化合物存在下，使式(2) 表示的水楊酸酰胺衍生物與R3OH表示的烷醇反應(yīng)，以上式中的符號(hào)含義與前述1相同，R3表示C1～4烷基，Ac表示乙酰基。
式(4) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(3) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行環(huán)氧化反應(yīng)，以上式中的符號(hào)含義與前述1相同。
式(5) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(4) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行脫二烷基縮酮反應(yīng)，以上式中的符號(hào)含義與前述1相同。
式(6) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(4) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行還原反應(yīng)，以上式中的符號(hào)含義與前述1相同。
式(1a) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(5) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行還原反應(yīng)。
式(1b) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(6) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行脫二烷基縮酮反應(yīng)，以上式中的符號(hào)含義與前述1相同。
以前述2記載的式(1a)或式(1b)表示的水楊酸酰胺衍生物或其鹽為有效成分的藥物制劑。
以前述2記載的式(1a)或式(1b)表示的水楊酸酰胺衍生物或其鹽為有效成分的NF-κB活化抑制劑。
以前述2記載的式(1a)或式(1b)表示的水楊酸酰胺衍生物或其鹽為有效成分的抗炎劑或免疫抑制劑。


圖1(A)及(B)分別表示DHM2EQ及DHM3EQ對(duì)NF-κB活化的抑制作用。
圖2(A)及(B)分別表示DHM2EQ及DHM3EQ對(duì)小鼠的膠原蛋白誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的抑制效果。
對(duì)發(fā)明的詳細(xì)說明前述式(1)的R2中的R3表示的C1～4烷基包括甲基、乙基、丙基、丁基及它們的異構(gòu)體基團(tuán)，其中較好為甲基和乙基。
前述式(2)、(3)中R1表示的C2～4烷酰基包括乙酰基、丙酰基、丁?；八鼈兊漠悩?gòu)體基團(tuán)，其中較好為乙酰基。
前述式(7)中的X表示的鹵原子包括氟原子、氯原子、溴原子及碘原子，其中較好為氯原子、溴原子。
利用Wipf等的合成法(Synthesis，12號(hào)，1549～1561頁(yè)，1995年)可制備本發(fā)明化合物(水楊酸酰胺衍生物)。
以下參照下述反應(yīng)式對(duì)本發(fā)明化合物的制備方法進(jìn)行說明。
以下步驟中，式(1a)及式(1b)表示的化合物及式(2)～(6)表示的制備中間體化合物都是新化合物。
DHM2EQ、DHM3EQ的制備步驟
DHM2EQ、DHM3EQ的制備步驟(續(xù)) 步驟aN-(2-烷?；郊柞；?-2，5-二甲氧基苯胺的制備使2，5-二甲氧基苯胺溶于吡啶等溶劑中。在-78～50℃的溫度下，最好在冰冷卻下，在其中添加式(7)的O-烷酰基水楊酰氯的乙酸乙酯溶液，攪拌下使反應(yīng)進(jìn)行。然后，加水使反應(yīng)停止，再加入乙酸乙酯，反應(yīng)液依次用鹽酸、水、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌后，干燥，減壓濃縮，再真空干燥，獲得式(2)表示的N-(2-烷氧基苯甲?；?-2，5-二甲氧基苯胺化合物。不對(duì)該化合物進(jìn)行精制直接將其用于以下步驟。
步驟b3-(O-烷?；畻铛０被?-4，4-二烷氧基-2，5-環(huán)己二烯酮化合物的制備使以上獲得的式(2)的化合物溶于甲醇等溶劑中，在-20～50℃的溫度下，最好在冰冷卻下，在其中添加二乙酰氧基碘苯，室溫下攪拌使反應(yīng)進(jìn)行。然后減壓濃縮，在其中添加乙酸乙酯，反應(yīng)液分別用碳酸氫鈉水溶液和食鹽水洗滌后，減壓濃縮溶劑，用柱色譜法對(duì)殘?jiān)M(jìn)行精制，獲得式(3)表示的3-(O-烷?；畻铛０被?-4，4-二烷氧基-2，5-環(huán)己二烯酮。
步驟c5，6-環(huán)氧-4，4-二烷氧基-3-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮化合物的制備使式(3)表示的3-(O-烷?；畻铛０被?-4，4-二烷氧基-2，5-環(huán)己二烯酮溶于四氫呋喃、甲醇等溶劑中。在-20～50℃的溫度下，最好在冰冷卻下，在其中添加過氧化氫水溶液及氫氧化鈉，攪拌使反應(yīng)進(jìn)行。然后在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯，反應(yīng)液依次用鹽酸溶液、硫代硫酸鈉水溶液和食鹽水洗滌后干燥，再進(jìn)行真空干燥。為了除去殘存的原料化合物，將殘?jiān)苡诒?，然后在其中添加?duì)甲苯磺酸，室溫?cái)嚢枋乖匣衔锓纸?。在減壓蒸去甲醇后的殘?jiān)屑尤胍宜嵋阴?，再用水洗滌。干燥乙酸乙酯層，通過柱色譜法對(duì)所得殘留物進(jìn)行精制，獲得式(4)表示的5，6-環(huán)氧-4，4-二烷氧基-3-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮化合物。
步驟d5，6-環(huán)氧-2-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯-1，4-二酮的制備使式(4)的5，6-環(huán)氧-4，4-二烷氧基-3-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮化合物溶于二氯甲烷中。在冰冷卻下，在其中添加無機(jī)酸或有機(jī)酸(三氟化硼乙醚絡(luò)合物等)，攪拌下使反應(yīng)進(jìn)行。然后在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯之類的溶劑，用水洗滌，將乙酸乙酯層濃縮后，所得殘?jiān)眉状枷礈?，獲得式(5)表示的5，6-環(huán)氧-2-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯-1，4-二酮。
步驟e5，6-環(huán)氧-4-羥基-3-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮(DHM2EQ)的制備使式(5)表示的5，6-環(huán)氧-2-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯-1，4-二酮懸浮于甲醇、乙醇、THF之類的溶劑中。在-78～50℃的溫度下，最好在冰冷卻下，在其中添加硼氫化鈉等還原劑使反應(yīng)進(jìn)行。在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯、二氯甲烷等溶劑后，反應(yīng)液依次用鹽酸和水洗滌。然后對(duì)溶劑層進(jìn)行干燥和減壓濃縮，使?jié)饪s物懸浮于甲醇后攪拌洗滌，獲得式(1a)表示的5，6-環(huán)氧-4-羥基-3-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮(DHM2EQ)。
步驟f3，3-二烷氧基-4，5-環(huán)氧-6-羥基-2-水楊酰氨基環(huán)己烯的制備使式(4)的5，6-環(huán)氧-4，4-二烷氧基-3-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮化合物溶于甲醇之類的溶劑和碳酸氫鈉水溶液的混合溶劑中。在-78～50℃的溫度下，最好在冰冷卻下，在其中添加硼氫化鈉之類的還原劑，攪拌下使反應(yīng)進(jìn)行。然后在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯之類的溶劑，反應(yīng)液依次用鹽酸和水洗滌后使溶劑層干燥，接著減壓濃縮，真空干燥，用柱色譜法等精制，獲得式(6)表示的3，3-二烷氧基-4，5-環(huán)氧-6-羥基-2-水楊酰氨基環(huán)己烯。
步驟g5，6-環(huán)氧-4-羥基-2-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮(DHM3EQ)的制備使式(6)表示的3，3-二烷氧基-4，5-環(huán)氧-6-羥基-2-水楊酰氨基環(huán)己烯溶于丙酮之類的溶劑中。然后在其中添加對(duì)甲苯磺酸，室溫下攪拌使反應(yīng)進(jìn)行。接著在反應(yīng)液中添加乙酸乙酯之類的溶劑，用水洗滌后，干燥溶劑層，再減壓濃縮，并精制，獲得式(1b)的5，6-環(huán)氧-4-羥基-2-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮(DHM3EQ)。
通過以下試驗(yàn)確認(rèn)本發(fā)明化合物DHM2EQ和DHM3EQ的生物學(xué)活性。
A)NF-κB活化的抑制活性通過以下所示熒光素酶報(bào)道基因試驗(yàn)測(cè)定對(duì)NF-κB活化的抑制活性。
使用熒光素酶DNA制作報(bào)道基因，利用啟動(dòng)子/報(bào)道基因試驗(yàn)測(cè)定對(duì)NF-κB活化的抑制活性。
1)質(zhì)粒作為熒光素酶試驗(yàn)的質(zhì)粒，使用來自Igκ遺傳基因的3×κB及HSV-TK啟動(dòng)子與來自螢火蟲的熒光素酶基因結(jié)合而成的3×κBTK-Luc(東京大學(xué)醫(yī)科學(xué)研究所，井上純一郎博士提供)。此外，在β-半乳糖苷酶試驗(yàn)中，使用由β-肌動(dòng)蛋白·啟動(dòng)子與β-半乳糖苷酶基因結(jié)合而成的質(zhì)粒(東京大學(xué)醫(yī)科學(xué)研究所，井上純一郎博士提供)。
2)轉(zhuǎn)染及熒光素酶試驗(yàn)轉(zhuǎn)染通過DEAE-葡聚糖法進(jìn)行。1×TBS(Tris-HCl(25mM)、NaCl(137mM)、KCl(5mM)、Na2HPO4(0.5mM))洗滌2×106個(gè)細(xì)胞1次。然后，將其放在含有1μg質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染緩沖液(2×TBS(200μl)、100×Ca2+·Mg2+(CaCl2·2H2O)(78mM，4μl)、MgCl2·6H2O(76mM)、DEAE-葡聚糖(1mg/ml，200μl))中每10分鐘輕拍一次在室溫下孵化30分鐘。接著，1×TBS洗滌，在12孔板(costarN.Y.，U.S.A)中，每孔撒1×106個(gè)細(xì)胞在37℃進(jìn)行孵化。第二天，在其中添加各種濃度的DHM2EQ或DHM3EQ，孵化2小時(shí)后，再添加TNF-α(20ng/ml)，孵化6小時(shí)。然后，以3500rpm對(duì)細(xì)胞離心分離5分鐘，除去上清液后，添加50μl溶胞緩沖液(Tris-HCl(25mM，pH7.8)，DTT(2mM)，1，2-二氨基環(huán)己烷-N，N’，N’，N-四乙酸(2mM)，10％甘油，1％TritonX-100)，在冰中30分鐘使可溶化。然后，以15000rpm離心5分鐘，將上清液作為試樣。
在10μl試樣中加入100μl發(fā)光基質(zhì)溶液(Tricine，20mM)、(MgCO3)·4Mg(OH)2·5H2O(1.07mM)、MgSO4(2.67mM)、EDTA(0.1mM)、DTT(33.3mM)、輔酶A(270μM)、熒光素(470μM)和ATP(530μM)，用LumatLB9501(BertholdBad Wildbad，德國(guó))測(cè)定發(fā)光量。然后，用β-半乳糖苷酶試驗(yàn)法對(duì)測(cè)定值進(jìn)行校正，獲得熒光素酶的活性值。
3)β-半乳糖苷酶試驗(yàn)用β-半乳糖苷酶DNA測(cè)定轉(zhuǎn)染率。
在20μl試樣中加入230μl的Z緩沖液(KCl(10mM)，MgSO4(1mM)、2-巰基乙醇(50mM)、NaPO4(100mM，pH7.5))，再加入50μl的鄰硝基苯基-β-D-半乳糖吡喃糖苷(ONPG；Sigma公司)和NaPO4(100mM，pH7.5)溶液(2mg/ml)，于37℃孵化。在溶液呈黃色后，添加250μl的Na2CO3(1M)，用分光光度計(jì)(日立制作所)測(cè)定420nm的吸收波長(zhǎng)。
B)膠原蛋白誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的抑制作用使II型膠原蛋白與等容量的弗氏佐劑一起乳化，制成1.5mg/ml的藥液。將0.1ml該藥液接種于小鼠尾根部的皮下，使小鼠發(fā)生過敏反應(yīng)(150μg/小鼠)。3周后，將經(jīng)過同樣操作方法乳化的II型膠原蛋白0.1ml注射入小鼠腹腔內(nèi)，進(jìn)行追加免疫，誘發(fā)關(guān)節(jié)炎(150μg/小鼠)。
以2mg/kg或4mg/kg的DHM2EQ及DHM3EQ給藥量，從初次免疫開始每周3次按照0.1ml/10g體重的比例對(duì)6只/組小鼠進(jìn)行腹腔注射，合計(jì)18次/6周。作為對(duì)照組(6只/組)，以同樣程序注射0.5％的CMC溶液。此外，還設(shè)置沒有誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的正常組(4只/組)。對(duì)膠原蛋白誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的抑制效果按照前肢及后肢的發(fā)紅、腫脹及強(qiáng)直程度分為0～4級(jí)(四肢的合計(jì)最高級(jí)為16)來評(píng)估。0級(jí)表示完全無癥狀，1級(jí)表示四肢的指等小關(guān)節(jié)僅有1處發(fā)紅或腫脹，2級(jí)表示有2處以上的小關(guān)節(jié)或前肢腕關(guān)節(jié)、后肢腕關(guān)節(jié)等較大關(guān)節(jié)處發(fā)紅或腫脹，3級(jí)表示有1個(gè)前肢或后肢整個(gè)都發(fā)紅或腫脹，4級(jí)表示有1個(gè)前肢或后肢整個(gè)發(fā)紅或腫脹達(dá)到極限、且伴有關(guān)節(jié)強(qiáng)直。其結(jié)果如圖2(A)和圖2(B)所示。
從圖1(A)及(B)的結(jié)果可看出，本發(fā)明的新化合物DHM2EQ量達(dá)到1μg/ml(圖1(A))開始對(duì)NF-κB的活化具有抑制作用，而DHM3EQ量為10μg/ml(圖1(B))時(shí)對(duì)NF-κB的活化具有抑制作用。
此外，從圖2(A)及(B)的結(jié)果可看出，DHM2EQ及DHM3EQ，特別是DHM2EQ在患有慢性關(guān)節(jié)炎的小鼠動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，?duì)膠原蛋白誘發(fā)關(guān)節(jié)炎具有抑制作用，這就證明它具備體內(nèi)有效性。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性如前所述，本發(fā)明化合物DHM2EQ和DHM3EQ顯現(xiàn)出對(duì)NF-κB活化的抑制活性及對(duì)體內(nèi)膠原蛋白誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的抑制作用。因此，式(1a)及(1b)表示的化合物可作為抗炎劑、免疫抑制劑使用。
前述式(1a)及(1b)表示的化合物是弱酸性物質(zhì)，其鹽包括季銨鹽等與有機(jī)堿形成的鹽或與各種金屬形成的鹽，例如，與鈉等堿金屬形成的鹽。上述化合物也可以各自的鹽的形式被使用。
式(1a)及(1b)表示的化合物或其鹽可通過經(jīng)口給藥的固體組合物及液體組合物或非經(jīng)口給藥的注射劑、外用制劑、栓劑等形式使用。給藥量由年齡、體重、癥狀、治療效果、給藥方法及處理時(shí)間等決定，一般成人一天約1mg～100mg，一次給藥或分?jǐn)?shù)次給藥。
經(jīng)口給藥的固體組合物包括片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑等。按照常規(guī)方法，除了惰性稀釋劑之外還可使組合物中包含潤(rùn)滑劑、崩解劑、助溶劑等添加劑。片劑或丸劑還可根據(jù)需要在外面包裹胃溶性或腸溶性膜。
經(jīng)口給藥的液體組合物包括藥劑學(xué)上允許的乳濁劑、溶液劑、糖漿劑、酏劑等。該組合物中除了惰性稀釋劑之外還可包含濕潤(rùn)劑、懸浮劑等助劑、甜味劑、矯味劑、芳香劑和防腐劑。
本發(fā)明的非經(jīng)口給藥的注射劑包括無菌水性或非水性溶液劑、懸浮劑、乳濁劑。注射劑中還可包含防腐劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、分散劑、穩(wěn)定劑、助溶劑(例如，谷氨酸、天冬氨酸)等助劑。
非經(jīng)口給藥的其他組合物包括外用溶液劑、軟膏、涂劑、直腸內(nèi)給藥的栓劑等。
具體實(shí)施例方式
以下，通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的說明，但本發(fā)明并不僅限于此。
實(shí)施例1N-(2-乙酰氧基苯甲?；?-2，5-二甲氧基苯胺的合成使2，5-二甲氧基苯胺(10.0g，65.3mmol)溶于吡啶(100ml)中。在冰冷卻下，在其中添加O-乙?；畻铛Ｂ?13.0g，65.3mmol)的乙酸乙酯(50ml)溶液，歷時(shí)15分鐘，然后在相同溫度下攪拌15分鐘。在反應(yīng)液中加入水(10ml)使反應(yīng)停止后，添加乙酸乙酯(500ml)，再依次用3當(dāng)量鹽酸(500ml)、水(500ml)、2％碳酸氫鈉水溶液(500ml)和水(500ml)洗滌。乙酸乙酯層用芒硝干燥后，減壓濃縮并真空干燥，獲得呈淡黃色糖漿狀的標(biāo)題化合物(19.8g)。不對(duì)該化合物進(jìn)行精制直接用于以下步驟。經(jīng)過分離用薄層色譜法精制的標(biāo)題化合物的物性如下所述。
紅外吸收光譜νmax(KBr)3409，1773，1671，1603，1535，1478，1283，1221，1179cm-1紫外吸收光譜λmax(MeOH)nm(ε)224(18100)，309(7890)FAB質(zhì)譜譜(m/z)316(M+H)+1H-NMR光譜(CDCl3，400MHz)δ2.37(3H，s)，3.82(3H，s)，3.87(3H，s)，6.62(1H，dd，J＝2.8和8.8Hz)，6.84(1H，d，J＝8.8Hz)，7.17(1H，d，J＝7.2Hz)，7.37(1H，t，J＝8.0Hz)，7.52(1H，dt，J＝2.0和7.2Hz)，7.99(1H，dd，J＝2.0和8.0Hz)，8.31(1H，d，J＝2.8Hz)，8.93(1H，br s)。
實(shí)施例23-O-乙?；畻铛０被?4，4-二甲氧基-2，5-環(huán)己二烯酮的合成使實(shí)施例1獲得的N-(2-乙酰氧基苯甲?；?-2，5-二甲氧基苯胺(19.8g)溶于甲醇(400ml)中。在冰冷卻下，在其中添加二乙酰氧基碘苯(27.3g，84.9mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。在減壓濃縮反應(yīng)液而獲得的茶色糖漿狀殘?jiān)刑砑右宜嵋阴?1L)，反應(yīng)液依次用5％碳酸氫鈉水溶液(1L)、10％食鹽水(1L)洗滌。然后將乙酸乙酯層減壓濃縮，用硅膠柱色譜法(1kg，己烷/乙酸乙酯＝2/1)對(duì)所得茶色糖漿狀殘?jiān)M(jìn)行精制，獲得12.8g固狀物。將其懸浮于30ml甲醇中，攪拌洗滌，獲得10.9g為白色固體的標(biāo)題化合物(收率50％，2個(gè)步驟)。
熔點(diǎn)150～152℃紅外吸收光譜νmax(KBr)3451，1769，1694，1520，1198cm-1紫外吸收光譜λmax(MeOH)nm(ε)238(14200)，313(13800)FAB質(zhì)譜(m/z)332(M+H)+1H-NMR光譜(CDCl3，400MHz)δ2.47(3H，s)，3.31(6H，s)，6.48(1H，dd，J＝2.0和10.8Hz)，6.61(1H，d，J＝10.8Hz)，7.20(1H，d，J＝7.2Hz)，7.39(1H，t，J＝7.6Hz)，7.57(2H，重疊)，8.05(1H，dd，J＝1.6和7.6Hz)，8.89(1H，br s)。
實(shí)施例35，6-環(huán)氧-4，4-二甲氧基-3-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮的合成使3-O-乙?；畻铛０被?4，4-二甲氧基-2，5-環(huán)己二烯酮(10.9g，33.0mmol)溶于四氫呋喃(200ml)中。在冰冷卻下，在其中添加30％過氧化氫水溶液(60ml)及1當(dāng)量的氫氧化鈉(165ml)，在相同溫度下攪拌2小時(shí)。原料化合物有殘留，如果反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行會(huì)使目的產(chǎn)物分解，所以需進(jìn)行反應(yīng)處理。在反應(yīng)液中添加乙酸乙酯(500ml)，依次用1當(dāng)量的鹽酸(300ml)、10％硫代硫酸鈉水溶液(300ml×2)、10％食鹽水(300ml)洗滌后，乙酸乙酯層用芒硝干燥，然后真空干燥，獲得呈淡黃色糖漿狀的殘?jiān)?。為使在TLC上與目的產(chǎn)物的點(diǎn)接近的原料化合物點(diǎn)能夠容易地被除去，將殘?jiān)苡诒?100ml)中，在其中加入對(duì)甲苯磺酸(100mg)，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)使原料化合物分解。減壓蒸去甲醇，在所得殘?jiān)屑尤胍宜嵋阴?200ml)，用水(200ml)洗滌。乙酸乙酯層用芒硝干燥后，用硅膠柱色譜法(400g，甲苯/乙酸乙酯＝1/1)對(duì)所得褐色糖漿進(jìn)行精制，獲得6.58g黃色固狀物。使該固體懸浮于20ml甲醇中，攪拌洗滌，獲得5.34g呈白色固狀的標(biāo)題化合物(收率53％)。
熔點(diǎn)147～149℃紅外吸收光譜νmax(KBr)3264，1674，1651，1530，1236，1119，1053，1053cm-1紫外吸收光譜λmax(MeOH)nm(ε)242(5100)，314(19600)FAB質(zhì)譜(m/z)306(M+H)+1H-NMR光譜(CDCl3，400MHz)δ3.35(3H，s)，3.58(1H，dd，J＝2.4和4.4Hz)，3.75(3H，s)，3.89(1H，d，J＝4.4Hz)，6.94(1H，t，J＝8.4Hz)，7.04(1H，dd，J＝0.8和8.4Hz)，7.24(1H，d，J＝2.4Hz)，7.38(1H，dd，J＝1.2和8.4Hz)，7.49(1H，br，t，J＝8.4Hz)，8.65(1H，br s)，11.37(1H，s)。
實(shí)施例4；5，6-環(huán)氧-2-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯-1，4-二酮的合成使5，6-環(huán)氧-4，4-二甲氧基-3-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯酮(1.0g，3.27mmol)溶于25ml二氯甲烷中。在冰冷卻下，在其中添加三氟化硼乙醚絡(luò)合物(1ml)，于相同溫度下攪拌30分鐘。然后，在反應(yīng)液中添加乙酸乙酯(300ml)，用水(200ml)洗滌。乙酸乙酯層用芒硝干燥后，真空干燥，用甲醇(5ml)對(duì)所得茶色固狀物進(jìn)行洗滌，獲得呈淡茶色固體的標(biāo)題化合物(399mg)(收率47％)。
熔點(diǎn)210℃(分解)紅外吸收光譜νmax(KBr)3453，3202，1713，1667，1642，1611，1537，1231cm-1紫外吸收光譜λmax(MeOH)nm(ε)250(11900)，326(15000)FAB質(zhì)譜(m/z)259(M-)1H-NMR光譜(丙酮-d6，400MHz)δ3.91(1H，dd，J＝2.4和4.0Hz)，4.11(1H，d，J＝4.0Hz)，7.07(1H，t，J＝8.4Hz)，7.13(1H，d，J＝8.4Hz)，7.51(1H，dt，J＝1.6和8.4Hz)，7.61(1H，d，J＝2.4Hz)，8.06(1H，dd，J＝1.6和8.4Hz)，10.83(1H，br s)，10.88(1H，br s)。
實(shí)施例5DHM2EQ的合成使5，6-環(huán)氧-2-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯-1，4-二酮(81.8mg，0.316mmol)懸浮于甲醇(10ml)中。在冰冷卻下，在其中添加硼氫化鈉(11.9mg，0.316mmol)，相同溫度下攪拌10分鐘。然后，在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯(50ml)，反應(yīng)液依次用1當(dāng)量的鹽酸(50ml)和水(50ml)洗滌。乙酸乙酯層用芒硝干燥后，減壓濃縮，使所得淡茶色固體懸浮于甲醇(1ml)中，攪拌洗滌。獲得呈白色固體的DHM2EQ(45.3mg)(收率72％)。
外觀及性質(zhì)白色粉末，弱酸性物質(zhì)熔點(diǎn)185℃(分解)TLC的Rf值0.45(硅膠(Art，1.05715，メルク株式會(huì)社制)的薄層色譜法，展開溶劑為氯仿-甲醇(10∶1))紅外吸收光譜νmax(KBr)3360，1663，1634，1609，1526，1204，1071cm-1紫外吸收光譜λmax(MeOH)nm(ε)242(5950)，314(20400)
FAB質(zhì)譜(m/z)262(M+H)+分子式C13H11NO51H-NMR光譜(DMSO-d6，400MHz)δ3.43(1H，dd，J＝2.4和4.4Hz)，3.85(1H，dd，J＝2.4和4.0Hz)，4.83(1H，br s)，6.70(1H，br s)，6.99(2H，重疊)，7.45(1H，t，J＝8.8Hz)，7.93(1H，dd，J＝2.0和8.8Hz)，10.83(1H，br s)，10.88(1H，br s)。
實(shí)施例63，3-二甲氧基-4，5-環(huán)氧-6-羥基-2-水楊酰氨基環(huán)己烯的合成使5，6-環(huán)氧-2-水楊酰氨基-2-環(huán)己烯-1，4-二酮(200mg，0.655mmol)溶于甲醇(5ml)和5％碳酸氫鈉水溶液(5ml)的混合溶劑中。在冰冷卻下，在其中添加硼氫化鈉(24.8mg，0.655mmol)，相同溫度下攪拌30分鐘。在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯(50ml)，反應(yīng)液依次用1當(dāng)量的鹽酸(50ml)和水(50ml)洗滌。乙酸乙酯層用芒硝干燥后，減壓濃縮，用分離用薄層色譜法(甲苯/丙酮＝1/1作為展開溶劑)展開真空干燥后獲得的糖漿(206mg)，獲得為無色透明糖漿的標(biāo)題化合物(97mg)(收率48％)。
熔點(diǎn)170～172℃紅外吸收光譜νmax(KBr)3366，3285，1657，1537，1236，1128，1063，1046cm-1紫外吸收光譜λmax(MeOH)nm(ε)242(8180)，262(9190)，300(7610)FAB質(zhì)譜(m/z)308(M+H)+分子式C13H11NO51H-NMR光譜(CDCl3，400MHz)δ2.13(1H，d，J＝10.0Hz)，3.27(3H，s)，3.49(1H，s)，3.63(1H，s)，3.64(3H，s)，3.64(1H，重疊)，4.76(1H，dd，J＝2.0和10.0Hz)，6.68(1H，d，J＝2.0Hz)，6.89(1H，t，J＝7.6Hz)，7.01(1H，dt，J＝7.6Hz)，7.34(1H，dd，J＝1.5和8.3Hz)，7.43(1H，t，J＝7.6Hz)，8.23(1H，s)，11.87(1H，s)。
1H-NMR光譜(CD3OD，500MHz)δ3.28(3H，s)，3.51(1H，dt，J＝2.4和4.8Hz)，3.57(3H，s)，3.63(1H，d，J＝4.8Hz)，4.68(1H，t，J＝2.4Hz)，6.68(1H，t，J＝2.4Hz)，6.91(1H，dd，J＝0.4和8.4Hz)，6.93(1H，dt，J＝0.4和7.8Hz)，7.36(1H，dt，J＝2.0和7.8Hz)，7.94(1H，dd，J＝2.0和7.8Hz)。
實(shí)施例7DHM3EQ的合成使3，3-二甲氧基-4，5-環(huán)氧-6-羥基-2-水楊酰氨基環(huán)己烯(87.0mg，0.283mmol)溶于丙酮(2ml)中。在其中添加對(duì)甲苯磺酸(5mg)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯(20ml)，用水(15ml)洗滌。乙酸乙酯層用芒硝干燥后，減壓濃縮，將所得白色固體懸浮于乙酸乙酯(1ml)中，攪拌洗滌，獲得為白色固體的DHM3EQ(55.1mg)(收率74％)。
外觀及性質(zhì)白色粉末，弱酸性物質(zhì)熔點(diǎn)178～182℃TLC的Rf值0.36(硅膠(Art，1.05715，メルク株式會(huì)社制)的薄層色譜法測(cè)得，展開溶劑為氯仿-甲醇(10∶1))紅外吸收光譜νmax(KBr)3457，3102，1696，1620，1559，1381，1233cm-1紫外吸收光譜λmax(MeOH)nm(ε)248(12000)，301(9360)FAB質(zhì)譜(m/z)262(M+H)+分子式C13H11NO51H-NMR光譜(DMSO-d6，400MHz)δ3.63(1H，d，J＝3.9Hz)，3.84(1H，br)，4.87(1H，br s)，6.97(2H，重疊)，7.42(2H，重疊)，7.94(1H，d，J＝8.0Hz)，10.60(1H，br s)，11.71(1H，br s)。
權(quán)利要求
1.式(1) 表示的水楊酸酰胺衍生物，式中，R1表示氫原子或C2～4烷?；琑2表示以下式(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F)或(G)表示的基團(tuán)， 其中R3表示C1～4烷基。
2.如權(quán)利要求1所述的水楊酸酰胺衍生物，所述衍生物為式(1a)或(1b) 表示的化合物。
3.如權(quán)利要求1所述的水楊酸酰胺衍生物，所述衍生物為式(2) 表示的化合物，式中符號(hào)的含義與權(quán)利要求1所述相同。
4.如權(quán)利要求1所述的水楊酸酰胺衍生物，所述衍生物為式(3) 表示的化合物，式中符號(hào)的含義與權(quán)利要求1所述相同。
5.如權(quán)利要求1所述的水楊酸酰胺衍生物，所述衍生物為式(4) 表示的化合物，式中符號(hào)的含義與權(quán)利要求1所述相同。
6.如權(quán)利要求1所述的水楊酸酰胺衍生物，所述衍生物為式(5) 表示的化合物。
7.如權(quán)利要求1所述的水楊酸酰胺衍生物，所述衍生物為式(6) 表示的化合物，式中符號(hào)的含義與權(quán)利要求1所述相同。
8.式(2) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使2，5-二甲氧基苯胺與式(7) 表示的O-烷?；畻铛｛u反應(yīng)，式中，R1的含義與權(quán)利要求1所述相同，X表示鹵原子。
9.式(3) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，在式C6H3I(OAc)2表示的化合物存在下，使式(2) 表示的水楊酸酰胺衍生物與R3OH表示的烷醇反應(yīng)，式中，R1的含義與 1所述相同，R3表示C1～4烷基，Ac表示乙酰基。
10.式(4) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(3) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行環(huán)氧化反應(yīng)，式中符號(hào)的含義與權(quán)利要求1所述相同。
11.式(5) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(4) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行脫二烷基縮酮反應(yīng)，式中的符號(hào)含義與 1所述相同。
12.式(6) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(4) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行還原反應(yīng)，式中的符號(hào)含義與權(quán)利要求1所述相同。
13.式(1a) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(5) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行還原反應(yīng)。
14.式(1b) 表示的水楊酸酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，使式(6) 表示的水楊酸酰胺衍生物進(jìn)行脫二烷基縮酮反應(yīng)，式中的符號(hào)含義與 1所述相同。
15.藥物制劑，所述藥物制劑以權(quán)利要求2所述的式(1a)或式(1b)表示的水楊酸酰胺衍生物或其鹽為有效成分。
16.NF-κB活化抑制劑，所述抑制劑以權(quán)利要求2所述的式(1a)或式(1b)表示的水楊酸酰胺衍生物或其鹽為有效成分。
17.抗炎劑或免疫抑制劑，所述抗炎劑或免疫抑制劑以權(quán)利要求2所述的式(1a)或式(1b)表示的水楊酸酰胺衍生物或其鹽為有效成分。
全文摘要
式(1a)及式(1b)表示的水楊酸酰胺衍生物、其制備中間體、它們的制備方法及以它們?yōu)橛行С煞值尼t(yī)藥品。式(1a)及式(1b)表示的水楊酸酰胺衍生物具有NF－кB活化抑制作用,可作為副作用較少的抗炎劑、免疫抑制劑使用。
文檔編號(hào)C07C237/40GK1368954SQ00811487
公開日2002年9月11日 申請(qǐng)日期2000年8月9日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月11日
發(fā)明者竹內(nèi)富雄, 梅澤一夫, 東江咲乃, 松本直樹, 澤力, 吉岡武男, 縣直樹, 平野伸一, 一色邦夫 申請(qǐng)人:美而香株式會(huì)社, 財(cái)團(tuán)法人微生物化學(xué)研究會(huì)