制備羧酸的方法

專利名稱：制備羧酸的方法
本申請是申請日為1997年4月4日，申請號為97110275.9，發明名稱為“新的嘧啶并[1,2-a]吲哚類化合物”的發明專利申請的分案申請。
本發明涉及嘧啶并[1,2-a]吲哚類化合物、它們的制法及它們作為藥物、尤其是抗動脈粥樣硬化藥物的應用。
已經知道，甘油三酯的血液水平升高(高甘油三酯血癥)和膽固醇的血液水平升高(高膽固醇血癥)與血管壁的動脈硬化變化和冠狀心臟病的產生有關。
此外，當這兩種危險因素同時發生時，產生冠狀心臟病的危險便明顯增加，而所述的兩種危險因素同時發生又與載脂蛋白B-100的過度產生有關。因此，不斷急需提供有效地控制動脈硬化和冠狀心臟病的藥物。
本發明涉及通式(Ⅰ)的嘧啶并[1,2-a]吲哚類化合物、適當的話其異構形式及其鹽 式中A、D、E、G、L和M相同或不同，代表氫、鹵素、三氟甲基、羧基、羥基、在每種情況下各具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基或具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基又可以被羥基或被具有最多4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基取代，R1和R2相同或不同，代表氫、具有3-8個碳原子的環烷基或具有最多10個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可任選地被具有3-6個碳原子的環烷基取代，或者代表可任選被鹵素或三氟甲基取代的苯基，或R1和R2與碳原子一起形成4-8元環烷基，以及R3代表苯基，它可任選地被下列取代基相同或不同地取代最多三次硝基，羧基，鹵素，氰基，在每種情況下各具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基或烷氧羰基，可任選地被羥基、羧基或被在每種情況下各具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基取代的具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，和/或任選地被式-OR4或NR5R6基團取代，其中R4是氫或在每種情況下各具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或鏈烯基，R5和R6相同或不同，代表苯基、氫或具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，或代表具有最多8個碳原子的直鏈或支鏈酰基，它可任選地被式-NR7R8基團取代，其中R7和R8相同或不同，代表氫或具有最多8個碳原子的直鏈或支鏈酰基。
本發明的嘧啶并[1,2-a]吲哚類化合物也可以以鹽形式存在。通常，這里可提及的是與有機或無機堿或酸形成的鹽。
對于本發明，優選生理上可接受的鹽。本發明化合物的生理上可接受的鹽是本發明的物質與無機酸、羧酸或磺酸形成的鹽。特別優選的鹽是例如與下列酸形成的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸或苯甲酸。
生理上可接受的鹽也可以是具有游離羧基的本發明化合物的金屬鹽或銨鹽。特別優選的鹽是例如鈉、鉀、鎂或鈣鹽，還有由氨或有機胺諸如乙胺、二乙胺、三乙胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環己胺、二甲氨基乙醇、精氨酸、賴氨酸、乙二胺或2-苯基乙胺衍生得到的銨鹽。
本發明化合物可以以立體化學異構形式存在，它們或表現為像和鏡像(對映體)或不表現為像和鏡像(非對映體)。本發明涉及對映體、非對映體以及它們各自的混合物。對映體和非對映體的這些混合物可以用本身已知方法分離成立體化學均一的組分。
優選的通式(Ⅰ)化合物是下列化合物，適當的話其異構形式及其鹽，其中A、D、E、G、L和M相同或不同，代表氫、氟、氯、溴、三氟甲基、羧基、羥基、在每種情況下各具有最多4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基或具有最多4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基又可以被羥基或被具有最多3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基取代，R1和R2相同或不同，代表氫、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基或具有最多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可任選地被環丙基、環戊基或環己基取代，或者代表可任選被氟、氯或溴取代的苯基，或R1和R2與碳原子一起形成4-7元環烷基，以及R3代表苯基，它可任選地被下列取代基相同或不同地取代最多三次硝基，羧基，氟，氯，溴，氰基，在每種情況下各具有最多4個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基或烷氧羰基，可任選地被羥基、羧基或被在每種情況下各具有最多5個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基取代的具有最多5個碳原子的直鏈或支鏈烷基，和/或任選地被式-OR4或NR5R6基團取代，
其中R4是氫或在每種情況下各具有最多4個碳原子的直鏈或支鏈烷基或鏈烯基，R5和R6相同或不同，代表苯基、氫或具有最多5個碳原子的直鏈或支鏈烷基，或代表具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈酰基，它可任選地被式-NR7R8基團取代，其中R7和R8相同或不同，代表氫或具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈酰基。
特別優選的通式(Ⅰ)化合物是下列化合物，適當的話其異構形式及其鹽，其中A、D、E、G、L和M相同或不同，代表氫、氟、氯、溴、三氟甲基、羧基、羥基、在每種情況下各具有最多3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基或具有最多3個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R1和R2相同或不同，代表氫、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基或具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可任選地被環戊基或環己基取代，或者代表可任選被氟、氯或溴取代的苯基，或R1和R2與碳原子一起形成5-7元環烷基，以及R3代表苯基，它可任選地被下列取代基相同或不同地取代最多三次羥基，三氟甲基，三氟甲氧基，羧基或在每種情況下各具有最多3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基、烷基或烷氧羰基。
也已發現了制備本發明的通式(Ⅰ)化合物的方法，其特征在于在惰性溶劑中，適當時在堿和/或輔助物質存在下用通式(Ⅲ)的苯基甘氨醇對通式(Ⅱ)的外消旋的或已經是對映異構純的羧酸或其活化衍生物進行酰胺化反應 外消旋的或對映異構純的式中A、D、E、G、L、M、R1和R2具有前述的意義，而R9代表羥基或代表活化基團，優選氯， 式中R3具有前述的意義。本發明的方法可以以舉例方式通過下述反應式具體說明
在該種情況下用于酰胺化反應的合適的溶劑是在反應條件下不發生變化的惰性有機溶劑。這些溶劑包括醚類如乙醚或四氫呋喃，鹵代烴類如二氯甲烷、三氨甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烷、四氯乙烷、1,2-二氯乙烯或三氯乙烯，烴類如苯、二甲苯、甲苯、己烷、環己烷，或石油餾分，硝基甲烷，二甲基甲酰胺，丙酮，乙腈或六甲基磷酸三酰胺。也可以使用這些溶劑的混合物。特別優選的是二氯甲烷、四氫呋喃、丙酮或二甲基甲酰胺。
可用于本發明方法的堿一般是無機或有機堿。它們優選包括堿金屬氫氧化物諸如氫氧化鈉或氫氧化鉀，堿土金屬氫氧化物諸如氫氧化鋇、堿金屬碳酸鹽諸如碳酸鈉或碳酸鉀，堿土金屬碳酸鹽諸如碳酸鈣或堿金屬或堿土金屬醇鹽如甲醇鈉或鉀、乙醇鈉或鉀或叔丁醇鉀，或有機胺(三烷基(C1-6)胺)諸如三乙胺或雜環如1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷(DABCO)、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯(DBU)、吡啶、二甲氨基吡啶、甲基哌啶或嗎啉。也可以使用堿金屬如鈉及其氫化物如氫化鈉作為堿。優選碳酸鈉和鉀和三乙胺。
堿的用量基于1摩爾通式(Ⅱ)化合物計為1-5摩爾，優選1-3摩爾。
所述反應通常在0℃-150℃、優選+20℃-+110℃的溫度下進行。
所述反應可以在常壓、加壓或減壓(例如0.5-5巴)下進行。通常使用大氣壓力。
所述反應適當時也可以經過酰鹵的活化階段，所述的酰鹵可以通過相應的酸與亞硫酰氯、三氯化磷、五氯化磷、三溴化磷或草酰氯反應而從相應的酸制備。
上面所列的堿也可以用作為酰胺化反應的酸結合助劑。
同樣適于作為輔助物質的是脫水劑。它們包括例如碳二亞胺類如二異丙基碳二亞胺、二環己基碳二亞胺或N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽或羰基化合物如羰基二咪唑或1,2-噁唑鎓(oxazolium)化合物如2-乙基-5-苯基-1,2-噁唑鎓-3′-磺酸鹽或丙烷膦酸酐或氯甲酸異丁酯或六氟磷酸苯并三唑基氧基(二甲氨基)鏻或二苯基磷酰疊氮或甲磺酰氯，適當的話在堿如三乙胺或N-乙基嗎啉或N-甲基哌啶或二環己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺存在下使用。
所述的輔助物質的用量基于1摩爾適當的羧酸計一般為0.5-3mol，優選1-1.5摩爾。
通式(Ⅱ)的羧酸是新的，可以通過下述方法制備，即，在惰性溶劑中，適當的話在堿存在下，先通過使通式(Ⅳ)化合物與通式(Ⅴ)化合物反應制備通式(Ⅵ)化合物， 式中R1和R2具有所指明的意義，T代表一般的離去基團如氯、溴、碘、甲苯磺酸酯基團或甲磺酸酯基團，優選代表溴，及R10代表(C1-C4)-烷基， 式中A、D、E、G、L和M具有指明的意義， 式中A、D、E、G、L、M、R1、R2和R10具有指明的意義，隨后通過常規方法水解所述酯。
所述的對映異構純的酸即其中R1和R2必須是不同的通式(Ⅱ)化合物也可以通過下述方法制得，即，使通式(Ⅶ)的D-或L-基酯與通式(Ⅷa)和(Ⅷb)化合物反應制備通式(Ⅸa)和(Ⅸb)的對映異構純的酯， R11代表D-或L-基，R1-Z (Ⅷa)R2-Z (Ⅷb)式中R1和R2是不同的，否則具有所指明的意義，以及Z代表鹵素，優選溴， 式中R1、R2和R11具有指明的意義，在下一步中通過鹵化將通式(Ⅸa)和(Ⅸb)的對映異構純的酯轉化成通式(Ⅹa)和(Ⅹb)化合物 式中R1、R2、T和R11具有指明的意義，然后通過與通式(Ⅴ)化合物反應制備通式(Ⅺa)和(Ⅺb)的對映異構純的化合物 式中A、D、E、G、L、M、R1、R2和R11具有指明的意義，再通過水解將后者轉化成通式(Ⅱa)和(Ⅱb)的對映異構純的酸。
也可以通過下述方法制備通式(Ⅱ)的對映異構純的酸，即，通過與(R)-或(S)-苯乙胺在惰性溶劑中反應，接著使苯乙胺鹽環化，再接著使所述鹽水解由此先將通式(Ⅻ)的外消旋羧酸轉化成通式(ⅩⅢa,b)的對映異構純的化合物 在另一步中用異丁烯在惰性溶劑中在酸存在下從后者制備通式(ⅩⅣa,b)的對映異構純的酯 通過鹵化反應將上述后者轉化成通式(ⅩⅤa,b)的對映異構純的化合物 再通過與通式(Ⅴ)化合物反應將后者轉化成通式(ⅩⅥa,b)的對映異構純的酯 在如上所述的最后各步中，制備相應的對映異構純的酸和活化的衍生物。
用于這些方法的合適的溶劑是常規的在反應條件下不發生變化的有機溶劑。它們優選包括醚類如乙醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇二甲醚，或烴類如苯、甲苯、二甲苯、己烷、環己烷或石油餾分，或鹵代烴類如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、二氯乙烯、三氯乙烯或氯苯，或乙酸乙酯、三乙胺、吡啶、二甲亞砜、二甲基甲酰胺、六甲基磷酸三酰胺、乙腈、丙酮或硝基甲烷。也可以使用所述的這些溶劑的混合物。優選二甲基甲酰胺、甲苯和四氫呋喃。
可用于本發明方法的堿一般是無機或有機堿。它們優選包括堿金屬氫氧化物諸如氫氧化鈉或氫氧化鉀，堿土金屬氫氧化物諸如氫氧化鋇、堿金屬碳酸鹽和碳酸氫鹽諸如碳酸鈉、碳酸氫鈉或碳酸鉀，堿土金屬碳酸鹽諸如碳酸鈣或堿金屬或堿土金屬醇鹽如甲醇鈉或鉀、乙醇鈉或鉀或叔丁醇鉀，或有機胺(三烷基(C1-6)胺)諸如三乙胺或雜環如1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷(DABCO)、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯(DBU)、吡啶、二甲氨基吡啶、甲基哌啶或嗎啉。也可以使用堿金屬如鈉及其氫化物如氫化鈉作為堿。優選碳酸氫鈉、碳酸鉀和叔丁醇鉀、DBU或DABCO。
適用于所述水解反應的溶劑是水或常用于水解反應的有機溶劑。它們優選包括醇類如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇或丁醇，或醚類如四氫呋喃或二噁烷，或二甲基甲酰胺，或二甲亞砜。特別優選的是醇類如甲醇、乙醇、丙醇或異丙醇。同樣，也可以使用所述溶劑的混合物。
適當的話，水解也可以用酸諸如三氟乙酸、乙酸、鹽酸、氫溴酸、甲磺酸、硫酸或過氯酸，優選三氟乙酸進行。
所述的水解反應一般在0℃-+100℃、優選+20℃-+80℃的溫度下進行。
所述的水解反應一般在大氣壓力下進行。然而，它也可以在加壓或減壓下(例如0.5-5巴)進行。
當進行所述的水解反應時，堿的用量基于1摩爾所述酯一般為1-3摩爾，優選1-1.5摩爾。特別優選使用等摩爾量的反應物。
叔丁基酯的水解一般用酸如鹽酸或三氟乙酸在上述溶劑之一和/或水或其混合物存在下優選用二噁烷或四氫呋喃進行。
本發明的一般方法[A]一般在-30℃-+150℃、優選80℃-150℃的溫度下進行。
合適的和優選的用于制備對映異構純的酸的各步的條件如下通式(Ⅸ)化合物優選在二甲基甲酰胺和叔丁醇鉀中在-10℃-+10℃的溫度下進行制備。
通式(Ⅹ)化合物的鹵化反應在氯苯中用1,3-二溴-5,5-二甲基乙內酰脲在偶氮二異丁腈存在下于0℃-110℃的溫度下進行。
給出通式(Ⅺ)化合物的反應在保護氣體氣氛下在二甲基甲酰胺和叔丁醇鉀中在0℃-30℃的溫度下進行。
通式(Ⅺ)化合物的水解反應可以如上所述那樣進行。特別優選用HBr/甲酸體系進行。所述的水解反應在20℃-100℃的溫度下進行。
通式(Ⅻ)化合物的反應用二氯甲烷在回流下進行。
合適的和優選的活化劑是三氟甲磺酰氯、甲磺酰氯、草酰氯和亞硫酰氯。特別優選亞硫酰氯。
給出通式(ⅩⅣa)化合物的反應在第一步中優選在四氫呋喃和三乙胺中，而在第二步中在水/鹽酸體系中進行。該反應在30℃-70℃的溫度下進行。
特別優選用濃硫酸作為制備本發明通式(ⅩⅤ)化合物的酸。該制備反應用二氯甲烷進行。
在進一步的后處理步驟中，用碳酸鉀作為堿。該反應在0℃-+20℃、特別優選在10℃溫度下進行。
通式(ⅩⅤ)化合物用N-溴代琥珀酰亞胺在二氯甲烷中在偶氮二異丁腈存在下進行。
所述堿的用量在每種情況下基于1摩爾通式(Ⅳ)、(Ⅷ)、(Ⅺ)和(ⅩⅣa)化合物一般為0.05-10摩爾，優選1-2摩爾。
本發明的方法一般在大氣壓力下進行。然而，也可以在加壓或減壓下(例如0.5-5巴)進行所述方法。
通式(Ⅲ)化合物本身是已知的。
通式(Ⅳ)、(Ⅷ)和(Ⅷa)化合物是已知的或可以以相似于已知方法的方法制備。
通式(Ⅴ)化合物有些是已知的，一些是新的，它們可以按照相似于已公開的方法制備。
通式(Ⅶ)化合物是新的，由相應的酸制備。
通式(Ⅸ)的對映異構純的化合物除了其中X為CH-異丙基的情況外都是新的，可以如上所述那樣制備。
通式(Ⅹ)、(Ⅺ)、(Ⅺa)和(Ⅻ)化合物是新的，可以如上所述那樣制備。
通式(ⅩⅣ)和(ⅩⅣa)化合物在一些情況下是已知的，可以通過常規方法制備。
通式(ⅩⅤ)和(ⅩⅥ)的對映異構純的化合物是新的，可以如上所述那樣制備。
通式(Ⅵ)化合物是新的，可以如上所述那樣制備。
本發明的通式(Ⅰ)化合物具有不可預見的藥理作用譜。
它們可以用作為用于減小血管壁變化和用于治療冠狀心臟病、心力衰竭、腦機能障礙、腦局部缺血疾病、中風、血流紊亂、微循環障礙和血栓形成的藥物中的活性化合物。
此外，平滑肌細胞的增生在血管閉塞中起著重要的作用。本發明的化合物適于用來抑制該增生并因此防止動脈硬化過程。
本發明化合的區別特征是降低ApoB 100有關的脂蛋白(VLDL及其分解產物如LDL)和ApoB 100、甘油三酯和膽固醇。因此，它們具有優于先有技術的有價值的藥理學性質。
令人驚奇的是，本發明化合物的作用最初包括降低或完全抑制ApoB 100有關的脂蛋白從肝細胞的形成和/或釋放，這導致了VLDL血漿水平的降低。該VLDL降低必定與ApoB 100、LDL、甘油三酯和膽固醇的血漿水平的降低有關；所以血管壁變化中涉及的許多上述危險因素同時被降低了。
因此，本發明的化合物可用于預防和治療動脈硬化、肥胖、胰腺炎和便秘。1．ApoB 100有關的脂蛋白釋放的抑制檢測ApoB 100有關的脂蛋白從肝細胞釋放的抑制試驗在體外用培養的肝細胞、優選用人細胞系HepG2的細胞進行。將這些細胞在標準條件下在用于培養真核細胞的培養基、優選在具有10％胎牛血清的RPMI1640中進行培養。HepG2細胞合成并分泌ApoB 100有關的脂蛋白顆粒到培養物上清液中，所述顆粒大體上具有與在血漿中發現的VLDL和LDL顆粒相似的結構。
這些顆粒可以用用于人LDL的免疫測定法檢測。該免疫測定法用已在標準條件下在兔體內對人LDL誘導過的抗體進行。在具有人LDL的免疫吸附劑上通過親和層析純化抗LDL抗體(兔抗LDL抗體)。將這些純化后的兔抗LDL抗體吸附到塑料的表面。該吸附有利地是發生在96孔微滴板的塑料表面、優選在MaxiSorp板上。如果ApoB 100有關的顆粒存在在來自HepG2細胞的上清液中，那么這些顆粒可以與不溶解的兔抗LDL抗體結合，產生與所述塑料表面結合的免疫復合物。通過洗滌除去未結合的蛋白質。用已對人LDL誘導的、并已在標準條件下純化過的單克隆抗體檢測存在在塑料表面上的免疫復合物。這些抗體與過氧化物酶結合。過氧化物酶在H2O2存在下轉化無色底物TMB成有色產物。用H2SO4酸化反應混合物后，測定在450nm處的比吸光度，它是由HepG2細胞分泌到培養物上清液中的ApoB 100有關的顆粒的量的一種量度。
令人驚奇的是，本發明的化合物抑制ApoB 100有關的顆粒的釋放。IC50表明的是物質在與對照(不含物質的溶劑對照)相比時抑制50％吸光度時的濃度。
2．在倉鼠體內VLDL分泌的測定用倉鼠研究試驗物質對VLDL在體內分泌的影響。為此，將金色倉鼠先用阿托品(83mg/kg s.c.)進行處理，然后用Ketavet(83mg/kg s.c)和Nembutal(50mg/kgi.p.)進行麻醉。當動物的反射消失后，暴露頸靜脈，進行插管。然后，給予0.25ml/kg 20％的Triton WR-1339在生理鹽水中的溶液。該洗滌劑(detergent)抑制脂蛋白脂酶，因此由于沒有所分泌的VLDL顆粒的分解代謝而導致甘油三酯水平的升高。該甘油三酯增加可以用作為VLDL分泌速率的一種量度。在給予洗滌劑前和給予洗滌劑后1和2小時時通過眼窩后靜脈叢穿刺從動物體內取血。將血在室溫下保溫培養2小時，然后在4℃下培養過夜以完成凝固。然后在10,000g下離心5分鐘。用改進的商業上可用的酶測定法(MerckotestTriglyceride No.14354)測定用這種方法獲得的血清中的甘油三酯濃度。將100μl血清與100μl試驗試劑在96孔板中混合，在室溫下保溫培養10分鐘。然后，在自動讀板儀(SLT Spectra)中測定在492nm波長處的光密度。具有太高的甘油三酯濃度的血清樣本用生理鹽水稀釋。用平行測定的標準曲線測定樣本中存在的甘油三酯的濃度。在該模型中，試驗物質或者在給予洗滌劑前直接通過靜脈給予或者在誘導麻醉前通過口服或皮下給予。3．體內(鼠)腸道甘油三酯吸收的抑制將待研究其對甘油三酯在體內吸收的影響的物質口服給予體重為170-230克之間的雄性Wistar鼠。為此，在給予所述物質前18小時將動物分成數組，每組6只，然后禁食。動物可以任意飲水。對照組動物接受西黃蓍膠水懸浮液或含有橄欖油的西黃蓍膠懸浮液。用Ultra-Turrax制備西黃蓍膠/橄欖油懸浮液。臨在給予所述物質之前，同樣用Ultra-Turrax將待試物質懸浮在相應的西黃蓍膠/橄欖油懸浮液中。
在通過管飼法給藥前通過眼窩后靜脈叢穿刺從各只鼠體內取血以測定基線血清甘油三酯含量。然后，通過管飼法給予禁食動物西黃蓍膠懸浮液、不含物質的西黃蓍膠/橄欖油懸浮液(對照動物)或懸浮在相應的西黃蓍膠/橄欖油懸浮液中的物質。通常在通過管飼法給藥后1、2和3小時再次取血以測定膳食后血清甘油三酯增加。
將血樣離心，得到血清后，通過用BPOS分析儀5060的光度測定法(Eppendorf Gertebau,Netheler&Hinz GmbH,Hamburg)測定甘油三酯。用商業上可得到的UV檢測法全酶促地測定甘油三酯。
對每只動物從其相應的膳食后甘油三酯濃度(給藥后1、2和3小時)減去初始甘油三酯濃度來計算膳食后血清甘油三酯增加。
對每組動物平均各時間時(1、2和3小時)的差別(用mmol/l表示)，將用試驗物質處理過的動物的血清甘油三酯增加的平均值(ΔTG)與只接受了西黃蓍膠/油懸浮液的動物進行比較。
以同樣的方法計算只接受了西黃蓍膠的對照動物的血清甘油三酯的變化。如下計算試驗物質在各時間點(1、2或3小時)時的效果并以接受油的對照的Δ％報告。
在禁食鼠的血清中甘油三酯吸收后2小時時口服1、3或10mg試驗物質/kg體重對甘油三酯增加(Δ％)的影響。相對于西黃蓍膠對照動物的血清甘油三酯水平的脂肪吸收后對照動物中的血清甘油三酯增加相應于100％。n=6只動物/組
在預先檢查同種性的變化之后用Student′st試驗進行統計學分析。
與未處理的對照組相比較在一個時間時減小膳食后血清甘油三酯的增加至少30％的統計學上顯著(p＜0.05)的物質被認為是藥理學上活性的。4．VLDL體內(鼠)分泌抑制同樣對鼠研究試驗物質對VLDL分泌的作用。為此，將溶在生理鹽水中的500mg/kg體重(2.5mg/kg)的Triton WR-1339靜脈給予鼠尾靜脈。Triton WR-1339抑制脂蛋白脂酶，并因此通過抑制VLDL分解代謝導致了甘油三酯和膽固醇水平的增加。這些增加可作為VLDL分泌速度的一個量度。
在給予洗滌劑之前和之后2小時通過眼窩后靜脈叢穿刺從動物體內取血。將血液在室溫下保溫培養1小時以凝固，通過在10,000g下離心20秒鐘得到血清。隨后在540nm濃長下通過光度測定法用商業上偶聯的酶測定法(Sigma Diagnostics,No.339)測定甘油三酯。借助于同樣的偶聯酶測定法(Boehringer Mannheim,No.1442350)在546nm波長進行測定。具有甘油三酯和膽固醇濃度超過方法測量范圍的樣品用生理鹽水稀釋。在每種情況下用平行測定的標準系列得到血清濃度。試驗物質在注射Triton后立即通過口服、靜脈或皮下給予。
本發明還涉及用于治療家族的高脂血、肥胖(脂肪過多)和糖尿病的通式(Ⅰ)的新的嘧啶并[1,2-a]吲哚類化合物與葡糖苷酶和/或淀粉酶抑制劑的結合物。用于本發明此目的葡糖苷酶和/或淀粉酶抑制劑是，例如，阿卡波糖、脂解素、voglibose、miglitol、emiglitate、MDL-25637、camiglibose(MDL-73945)、tendamistat、AL-3688、trestatin、pradimicin-Q和salbostatin。
阿卡波糖、miglitol、emiglitate或voglibose與上述的本發明的通式(Ⅰ)化合物之一的結合物是優選的。
本發明的新的活性化合物可以按已知方法用惰性的、無毒的、藥物學上適用的賦形劑或溶劑轉化成常規制劑，諸如，片劑、包衣片劑、丸劑、粒劑、氣霧劑、糖漿、乳液、混懸劑和溶液。在該種情況下，治療活性化合物應該在每種情況下以最終混合物的大約0.5-90％重量的濃度存在，即，其存在的量足以達到所指明的劑量范圍。
所述的制劑通過例如用溶劑和/或賦形劑，適當的話用乳化劑和/或分散劑，其中，例如，如果水用作稀釋劑，適當的話可用有機溶劑作輔助溶劑，來擴充活性化合物進行制備。
給藥按常規的方法進行，優選口服或非經胃腸，特別是經舌或靜脈給藥。
在非經胃腸給藥的情況下，可以使用用合適的液體載體的活性化合物溶液。
通常，已證明有利的是，在靜脈給藥的情況下給予大約0.001-1mg/kg、優選大約0.01-0.5mg/kg體重的量以實現有效的結果，而在口服給藥的情況下，劑量為大約0.01-20mg/kg、優選0.1-10mg/kg體重。
盡管如此，適當的話，可能必需偏離上述用量，這具體取決于體重或給藥途徑的類型，取決于個體對藥物的反應、制劑性質以及給藥的時間或間隔。這樣，在一些情況下，可能少于上述最低用量的量已足夠，而在另一些情況下，必須使用超出上述上限的量。在給予較大量的情況下，建議將其分成數個分劑量在全天內給藥。
縮寫Ac=乙酰基AIBN=偶氮二異丁腈Bn=芐基Bz=苯甲酰基cDec=環癸基CDI=N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亞胺鹽酸鹽cDodec=環十二烷基cHept=環庚基cHex=環己基cNon=環壬基cOct=環辛基cPent=環戊基
cPr=環丙基18-crown-6=1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷cUndec=環十一烷基DCC=二環己基碳二亞胺DDQ=2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌dia=非對映體diaA=有較大Rf的非對映體diaB=有較小Rf的非對映體DMAP=4-(N,N-二甲氨基)吡啶DME=1,2-二甲氧基乙烷DMF=N,N-二甲基甲酰胺DMSO=二甲基亞砜ent=對映體Et=乙基HOBT=1-羥基-1H-苯并三唑iBu=異丁基iPent=異戊基ipr=異丙基Me=甲基Ment=(L)-基Mes=甲磺酰基NBS=N-溴代琥珀酰亞胺nBu=正丁基nHex=正己基nPent=正戊基nPr=正丙基Ph=苯基PPA=多磷酸
pTol=對甲苯基pTos=對甲苯磺酰基rac=外消旋體sbu=仲丁基tBu=叔丁基TFA=三氟乙酸THF=四氫呋喃TMS=四甲基硅烷制備移動相BABA的方法將87.9md 0.06667M的磷酸二氫鉀水溶液和12.1ml 0.06667M的磷酸氫二鈉水溶液混合。將由此制得的60ml溶液與200ml乙酸正丁酯、36ml正丁醇和100ml冰乙酸一起振搖，分出水相。有機相是移動相BABA。所用的溶劑混合物溶劑代號石油醚∶乙酸乙酯=20∶1A石油醚∶乙酸乙酯=2∶1 B石油醚∶乙酸乙酯=5∶1 C二氯甲烷∶乙醇=20∶1 D石油醚∶乙酸乙酯=1∶1 E二氯甲烷∶乙醇=50∶1 F二氯甲烷 G石油醚∶乙酸乙酯=9∶1 H二氯甲烷∶甲醇=19∶1 I石油醚∶乙酸乙酯=4∶1 J二氯甲烷∶甲醇=100∶1 K二氯甲烷∶甲醇=100∶3 L甲苯 M甲苯∶乙酸乙酯=9∶1 N甲苯∶乙酸乙酯=2∶1 O石油醚∶乙酸乙酯=10∶1P石油醚∶乙酸乙酯=20∶1Q石油醚R石油醚∶乙酸乙酯=6∶1 XA起始化合物實施例Ⅰ4-甲苯基乙酸甲酯 將300g(1.998mol)4-甲苯基乙酸溶于2.5升甲醇中，與100ml濃硫酸一起攪拌并煮沸回流2.5h。然后將總量430g(5.1mol)碳酸氫鈉逐漸地攪拌加入(放出CO2)，真空下大體上蒸掉甲醇，殘留物在水和二氯甲烷之間分配，用二氯甲烷回洗水相。合并有機相，用硫酸鈉干燥，真空下除去溶劑。殘留物在高真空下蒸餾。收率336g沸點65℃(0.5mbar)Rf=0.81(甲苯∶乙酸乙酯=2∶1)實施例Ⅱ4-甲苯基乙酸乙酯 按照相似于實施例Ⅰ的方法從4-甲苯基乙酸開始制備4-甲苯基乙酸乙酯。Rf=0.43(A)。實施例Ⅲ4-甲基苯乙酸叔丁酯 將450g(3mol)4-甲基苯乙酸、1.13l(12mol)叔丁醇和90g(0.74mol)二甲氨基吡啶溶于2l二氯甲烷中。加入680g(3.3mol)溶解在400ml二氯甲烷中的二環己基碳二亞胺，然后在25℃下攪拌20小時，吸濾出沉淀的脲，用200ml二氯甲烷洗，有機相用500ml 2M鹽酸和水各洗兩次，然后用硫酸鈉干燥，濃縮，蒸餾。收率408(66％)。沸點73-78℃(0.2torr)。實施例Ⅳ(2R/2S)-2-環戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸叔丁酯 在0℃和排濕條件下將33.5g(0.3mol)叔丁醇鉀引入到100ml DMF中，滴加溶在250ml DMF中的51.6g(0.25mol)得自實施例Ⅲ的化合物。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，在5-15℃下滴加在150ml DMF中的32.2ml(0.3mol)環戊基溴，并將混合物在25℃攪拌20小時。濃縮后，殘留物在水和乙醚之間分配，醚相用硫酸鈉干燥，濃縮。產物結晶析出。收率67g(97.5％)。固化點51-53℃。表Ⅰ中的外消旋化合物按照相似于實施例Ⅳ中的方法制備表Ⅰ
表Ⅰ續 表Ⅰ續 表Ⅱ中的化合物按照相似于實施例Ⅳ中的方法制備；只是使用2.5當量的堿和2.5當量的鹵代烴(在環烷基情況下使用1.2當量α,ω-二鹵代烷)。表Ⅱ 表Ⅱ續 實施例ⅩⅩⅫ(2R/2S)-2-(4-溴甲基苯基)-2-環戊基乙酸叔丁酯 將27.4g(0.1mol)得自實施例Ⅳ的化合物溶于200ml四氯甲烷中，加熱至沸。加入0.82g偶氮二異丁腈后，分批加入18.7g(0.105mol)N-溴代琥珀酰亞胺，再將混合物回流1h，冷卻至0℃，過濾除去琥珀酰胺。濃縮濾液后產物沉出。用石油醚(40/60)洗后，干燥。收率20g(57％)。沸點73-76℃表Ⅲ中所列的外消旋化合物按相似于實施例ⅩⅩⅫ的方法制備表Ⅲ
表Ⅲ續 表Ⅳ中的化合物按照相似于實施例ⅩⅩⅫ中的方法制備表Ⅳ 表Ⅳ續 實施例LⅫ(2R/2S)-2-(2-硝基苯基)-2-氰基乙酸乙酯 在大約20℃將93.4g(832mmol)叔丁醇鉀和92.4ml(868mmol)氰乙酸乙酯與680ml叔丁醇一起攪拌[比較C.A.Grob和O.Weissbach,Helv.Chim.Acta44,1748(1961)]。30分鐘后，加入已預熱至大約60℃的63g(400mmol)2-氯硝基苯在150ml叔丁醇中的溶液，并將混合物煮沸回流10小時。將反應液冷卻至大約20℃，用2M鹽酸將pH調至3，然后在40℃的水浴中蒸發(30mbar)。殘留物倒入1l乙醚和500ml水中，分出有機相，用碳酸氫鈉水溶液洗數次后用水洗。溶液用硫酸鎂干燥，蒸發，粗產物在硅膠60上層析純化(Merck/40-63μm/石油醚∶乙酸乙酯=3∶1)。收率67.7g(289mmol)，理論量的72％。TLC:Rf=0.46(B)1H-NMR(CDCl3,250MHz,TMS):δ=1.33(t,3H)；4.31(q,2H)；5.68(s,1H)；7.65(m,1H)；7.73-7.81(m,2H)；8.23(m,1H)ppm。
表Ⅴ中的外消旋化合物按相似于實施例LⅫ的方法制備表Ⅴ
實施例LⅩⅥ2-氨基-3-乙氧羰基吲哚
將20g(85.4mmol)得自實施例LⅫ的化合物在300ml乙酸中加熱至100℃，在劇烈攪拌下分批加入總量15g(268mmol)的鐵粉，將混合物煮沸回流45分鐘[比較C.A.Grob和O.Weissbach,Helv.Chem.Acta,44,1748(1961)]。冷卻至大約20℃后，通過Seitz濾器吸濾混合物，用100ml乙酸洗滌。大體蒸發濾液，再加入乙醚和水，有機相用碳酸氫鉀水溶液提取。合并水相，用2M鹽酸調至pH3-4，用乙醚一起振搖提取。最后，合并有機相，用硫酸鎂干燥，蒸發。粗產物通過在硅膠60上層析純化(Merck/40-63μm/石油醚∶乙酸乙酯=2∶1→1∶1)。收率9.9g(48.5mmol)，理論量的57％。TLC:Rf=0.35(E)1H-NMR(d6-DMSO,200MHz,TMS):δ=1.32(t,3H)；4.21(q,2H)；6.68(s,br,2H)；6.82-6.92(m,2H)；7.10(m,1H)；7.54(m,1H)；10.64(s,br,1H)ppm。
實施例LⅩⅦ2-氨基吲哚鹽酸鹽 在100℃將30g(147mmol)得自實施例LⅩⅥ的化合物在350ml濃鹽酸中攪拌2小時(放出CO2)[比較R.A.Glennon和M.von Strandtmann,J.Heterocycl.Chem.12,135(1975)]。將混合物蒸發至干，通過與混合溶劑乙醇∶乙醚=1∶1一起攪拌進行提取。吸濾出第一批沉淀物，如前那樣通過攪拌提取濾液，但現在用少量的溶劑，再次吸濾(第二批沉淀)。在高真空下干燥(P2O5)各批產物。收率第一批沉淀19.96g(118mmol)，理論量的81％，第二批沉淀2.28g(14mmol)，理論量的9％，TLC:Rf=0.33(BABA)1H-NMR(d6-DMSO,300MHz,TMS):δ=4.19(s,2H)；7.13(m,1H)；7.2(m,1H)；7.31(m,1H)；7.42(m,1H)；9.95(s,br,1H)；10.17(s,br,1H)；12.39(s,br,1H)ppm。
實施例LⅩⅧ2-硝基-5-氯苯乙腈 攪拌下將在125ml乙醚中的20g(0.13mol)對氯硝基苯和25g(0.65mol)氫氧化鈉粉末加到300ml液氨中。在大約-35℃攪拌大約10分鐘后，在該溫度下用40分鐘時間向該懸浮液中滴加在25ml乙醚中的10.5(0.14mol)氯乙腈。2.5h后，加入25g固體氯化銨停止反應，蒸發掉氨，加入四氯甲烷保持體積基本恒定。然后通過蒸餾基本上除去醚，趁熱過濾反應混合物。殘留物用各300ml熱四氯甲烷提取兩次，合并濾液，濃縮。殘留物用各125ml熱的環己烷提取三次，殘留物在硅膠上層析純化。收率5g(20％,Lit.75％)Rf=0.32(石油醚∶乙酸乙酯10∶1)1H-NMR(250MHz,CDCl3):δ=4.22(s,2H)；7.56(dd,1H)；7.76(d,1H)；8.19(d,1H)ppm。MS(CI,NH3):214([M+NH4]+,100％)實施例LⅩⅨ2-硝基-5-甲氧基苯乙腈 在50℃將44.0g(0.167mol)得自實施例LⅩⅣ的化合物在450ml 1N碳酸鈉溶液中攪拌18小時。冷卻至室溫后，吸濾出沉淀，在50℃真空干燥(0.1torr)。收率21.6g(67％)溶點78℃1H-NMR(200MHz,CDCl3):δ=3.95(s,3H)；4.26(s,2H)；6.98(dd,1H)；7.18(d,1H)；8.27(d,1H)ppm。MS(CI,NH3):210([M+NH4]+,100％)表Ⅵ中的化合物按相似于實施例LⅩⅨ的方法制備表Ⅵ
實施例LⅩⅫ2-氨基-5-氯苯乙腈
將5.0g(0.025mol)實施例LⅩⅧ化合物和4.6g(0.039mol)錫懸浮在40ml異丙醇中，并在10℃于氬氣下緩慢地加入21ml濃鹽酸。加完后，撤去冷浴使內溫達到35-40℃。錫實際上在大約1.5h后溶解，向反應液的樣品中加入1N氫氧化鈉溶液至蘭色不變。將反應混合物濃縮至大約15ml，過濾，殘留物溶于50ml水中，再次過濾。用大約20ml30％氫氧化鈉溶液在5℃下將濾液調至pH8.0，然后濾出沉淀，用各25ml水洗兩次。濾餅用各25ml沸異丙醇提取三次，真空下濃縮濾液，干燥。收率2.5g(60％)1H-NMR(200MHz,CDCl3):δ=3.55(s,2H)；3.70(s，寬，2H)；6.69(d,1H)；7.14(dd,1H)；7.21(d,1H)ppm。MS(EI):166([M+,74％)表Ⅶ中化合物按相似于實施例LⅩⅫ中的方法制備表Ⅶ
實施例LⅩⅩⅥ2-氨基-5-氯吲哚鹽酸鹽
將1.2g(0.053mol)鈉溶于30ml異丙醇中。在大約80℃向此溶液中加入在15ml異丙醇中的2.5g(0.015mol)實施例LⅩⅫ化合物，然后將混合物煮沸回流1.5h。在60℃向反應液中加入15ml水，真空下基本上除去異丙醇，濾出沉淀。然后將沉淀溶于12ml異丙醇中，加入1ml水，用鹽酸乙醇溶液將pH調到2.0。重新濃縮后，用水/丙酮重結晶，真空干燥。收率1.6g(53％)1H-NMR(200MHz,CDCl3):δ=4.22(s,2H)；7.24(d,1H)；7.37(d,1H)；7.51(d,1H)；10.18(s,1H)；10,40(s,1H)；12.58(s,1H)ppm。MS(EI):166([M+,100％)表Ⅷ中的化合物按相似于實施例LⅩⅩⅥ的方法制備表Ⅷ
實施例LⅩⅩⅩ2,4-二甲基嘧啶并[1,2-d]吲哚 使22g(131mmol)實施例LⅩⅦ化合物在200ml吡啶中與16.7ml(196mmol)2,4-戊二酮在大約20℃反應[比較A.N.Kost,R.S.SagitullinV.I.Gorbunov和N.N.Modyanov,Khim.Geterosid.Soedin 6,359-363(1970)；英文譯文334-337]。20小時后，將反應混合物倒入1.2l水中，吸濾出產生的沉淀。固體粗品用水洗數次，吸干，在高真空下用P2O5干燥。收率22.5g(115mmol)，理論量的88％TLC:Rf=0.31(B)1H-NMR(CDCl3,300MHz,TMS):δ=2.51(s,3H)；2.93(s,3H)；6.19(s,1H)；6.77(s,1H)；7.25(m,1H)；7.38(m,1H)；7.83(m,1H)；8.05(m,1H)ppm。
表Ⅸ中化合物按相似于實施例LⅩⅩⅩ中的方法制備表Ⅸ
實施例XCⅡ2(R/S)-環戊基-2-[4-(2,4-二甲基嘧啶并[1,2-a]吲哚-9-基甲基)苯基]乙酸叔丁酯 將6.57g(33.5mmol)實施例LⅩⅩⅩ化合物、26.1g(50.2mmol)實施例ⅩⅩⅫ化合物和10.9g(33.46mmol)碳酸銫在氬氣下于大約20℃混合在70ml無水N,N-二甲基甲酰胺中并在120℃于油浴中攪拌45分鐘。將冷卻后的反應混合物倒入冷水中，用乙醚提取。有機相用硫酸鎂干燥，蒸發。由此得到的初產物通過與甲醇一起攪拌進行提取，吸濾，用甲醇洗滌，在高真空下用P2O5干燥。第一批收率8.02g(17.1mmol)，理論量的51％蒸發濾液，在硅膠60上層析純化(Merck/40-63μm/石油醚∶乙酸乙酯=10∶1→5∶1)。第二批收率1.40g(3.0mmol)，理論量的9％。TLC:Rf=0.44(C)。1H-NMR(CDCl3,200MHz,TMS):δ=0.93(m,1H)；1.36(s,9H)；1.14-1.71(m,6H)；1.85(m,1H)；2.38(m,1H)；2.51(s,3H)；2.92(s,3H)；3.06(d,1H)；4.46(s,2H)；6.15(s,1H)；7.12-7.34(m,6H)；7.63(m,1H),8.05(m,1H)ppm。
表Ⅹ中的外消旋化合物按相似于實施例XCⅡ中的方法制備表Ⅹ
表Ⅹ續 表Ⅹ續
實施例CⅩⅪ2(R/S)-2-環戊基-2-[4-(2,4-二甲基嘧啶并[1,2-a]吲哚-9-基甲基)苯基]乙酸 在70℃的浴溫下使8.00g(17.1mmol)實施例XCⅡ化合物與14ml濃鹽酸在60ml二噁烷中反應1.5h。冷卻反應液，用600ml水稀釋，用2M氫氧化鈉水溶液調pH到2.5。吸濾由此產生的沉淀，用水洗數次，在高真空下用P2O5干燥。收率6.89g(16.7mmol)，理論量的98％TLC:Rf=0.41(D)1H-NMR(D6-DMSO,200MHz,TMS):δ=0.89(m,1H)；1.08-1.61(m,6H)；1.78(m,1H)；2.37(m,1H)；2.46(s,3H)；2.96(s,3H)；4.32(s,2H)；6.46(s,1H)；7.11-7.37(m,6H)；7.70(m,1H)；8.19(m,1H)；12.15(s,br,1H)ppm。
表Ⅺ中的外消旋化合物按相似于實施例CⅩⅪ中的方法制備表Ⅺ
表Ⅺ續
實施例CXLⅤ2-(S)-2-環戊基-2-[4-{(2,4-二甲基-3-乙基嘧啶并[1,2-a]吲哚-9-基)甲基}苯基乙酸 將445mg(0.769mmol)實施例CⅩⅣ化合物在6ml甲酸和3ml 48％氫溴酸中煮沸回流4h，然后倒入水中，用碳酸氫鈉調至pH2。吸濾出產生的沉淀，用水洗滌，吸干，用石油醚洗滌后再次吸干。真空下用P2O5干燥后的粗收率為242mg。將從此后處理得到的母液吸收到乙醚和水中，水相用乙醚回洗，合并有機相，用無水硫酸鎂干燥，在真空下-最后在高真空下除去溶劑。粗收率50mg合并各批產物，在硅膠60上層析純化(Merck/二氯甲烷∶乙醇=100∶1)收率259mgRf=0.30(B)表Ⅻ中的化合物按相似于實施例CXLⅤ中的方法制備表Ⅻ
實施例CXLⅧ2(R/S)-2-環戊基-2-[4-{(2,4-二甲基嘧啶并[1,2-a]吲哚-9-基)甲基}苯基]乙酸 在60℃使4.16g(9.45mmol)實施例CⅤ化合物在132ml 1M氫氫化鈉水溶液和200ml 1,4-二噁烷中反應72h。將反應混合物蒸發至大約150ml，加入400ml水，用2M鹽酸水溶液在0℃將pH調至2.5。吸濾由此產生的沉淀，用水洗滌，吸干，真空下用P2O5干燥。收率3.5gRf=0.20(B)表ⅩⅢ中的外消旋化合物按相似于實施例CXLⅧ的方法制備表ⅩⅢ 表ⅩⅣ中的化合物按相似于實施例XCⅡ中的方法制備表ⅩⅣ 表ⅩⅣ續 表ⅩⅤ中的化合物按照相似于實施例CⅩⅪ中的方法制備表ⅩⅤ 表ⅩⅤ續 實施例CLⅩⅣ2(R/S)-2-環戊基-2-(3-甲苯基)乙酸甲酯 按照相似于實施例Ⅳ中的方法從2-(3-甲苯基)乙酸甲酯制備標題化合物。Rf=0.56(P)。實施例CLⅩⅤ2(R/S)-2-(3-溴甲基苯基)-2-環戊基乙酸甲酯 按照相似于實施例ⅩⅩⅫ的方法從實施例CLⅩⅣ化合物制備標題化合物。Rf=0.40(P)。實施例CLⅩⅥ2(R/S)-2-環戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸 在帶有攪拌器和連有洗滌塔的40l反應器中將2.0kg(7.2mol)實施例Ⅳ化合物溶于4l二噁烷中。加入4.5l濃鹽酸，在50℃下攪拌直至轉化完全(3h)。向反應混合物中加入冰，用濃氫氧化鈉溶液將pH調至12。加入水使固體完全溶解，然后用乙酸洗滌，有機相用稀的氫氧化鈉溶液洗滌，合并水相，冷卻下用濃鹽酸調至pH1。用乙酸乙酯洗滌兩次，然后用Na2SO4干燥，濃縮。收率1.27kg，理論量的81％熔點92℃。Rf=0.20(石油醚∶乙酸乙酯=4∶1)1H-NMR(CDCl3,200MHz,TMS):δ=0.98(m,1H)；1.20-1.71(m,6H)；1.82-2.05(m,1H)；2.31(s,3H)；2.52(m,1H)；321(d,1H)；7.10(m,2H)；7.21(m,2H)；11.90(br,s,1H)ppm。實施例CLⅩⅦ(S)-(+)-2-環戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸 將2.4l THF和129.7g(1.28mol)三乙胺在攪拌下加到560g(2.57mol)實施例CLⅩⅥ化合物在4.8l水中的懸浮液中。所得溶液加熱至60℃，加入155.4g(1.28mol)(S)-(-)-苯乙胺，所得懸浮液在60℃攪拌2小時。將反應混合物冷卻到20℃，吸濾出沉淀，用2.4l水/THF(2∶1)洗滌，真空干燥。收率360g苯乙銨鹽；基于實施例CLⅩⅥ的外消旋體計占理論量的41.3％。
將745g(2.2ml)苯乙銨鹽懸浮在3l水中，用稀鹽酸(1∶1)酸化(pH=1)，攪拌30分鐘，油狀懸浮液用各1l二氯甲烷洗三次，合并有機相，用水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮，殘留物結晶。收率475g；基于實施例CLⅩⅥ的外消旋體計占理論量的37.3％。ee:96.3％(HPLC)熔點66℃。通過用THF對苯乙銨鹽進行結晶并如上所述那樣釋放實施例CLⅩⅦ，得到了純的對映體ee:＞99.5％(HPLC)旋光度[α]20D=+59.55(乙醇/c=0.85)測定ee的HPLC方法如下(得自實施例CLⅩⅥ的外消旋化合物用作比較)柱 Chiracel OJ(Daicel)粒度 10μ填料 250×2mm(得自Grom)移動相 正庚烷∶2-丙醇=97∶3流速 0.2ml/min入口壓力 22bar實施例CLⅩⅧ(S)-(+)-2-環戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸叔丁酯 將溫度設置在大約10℃，將6ml濃硫酸加到465g(2.13mol)實施例CLXⅦ化合物在1.4l二氯甲烷中的溶液中。將550ml(5mol)異丁烯冷凝到Dewar容器中，一次性地加到前體溶液中。將反應混合物攪拌過夜。轉化完全后，再次加入6ml濃硫酸和500ml異丁烯，攪拌過夜。加入40ml碳酸鉀，攪拌3小時，然后加入2l水，加入時最初冒出大量氣體。用各2l二氯甲烷洗滌三次后，合并有機相，用5l氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，濃縮得到油狀物，油狀物緩慢結晶。收率480g，理論量的82％熔點45℃Rf=0.90(甲苯∶乙酸乙酯=8∶2)。實施例CLⅩⅨ(S)-(+)-2-(4-溴甲基苯基)-2-環戊基乙酸叔丁酯 在回流下在10l燒瓶中將480g(1.75mol)實施例CLⅩⅧ化合物溶于3.4l四氯甲烷中，加入總量311g(1.75mol)NBS中的70g和14g(0.085mol)AIBN。在回流大約1h后反應開始；平息后，再按每份50g加入NBS。回流5小時后，在室溫下放置過夜，為了后處理，將混合物冷卻到0℃，吸濾出琥珀酰亞胺，用600ml四氯甲烷洗滌。合并濾液，濃縮，真空下除去殘留溶劑至恒量。粗收率570g；占理論量的大約100％HPLC:68.8％(15.5％前體，10.1％二溴化合物)。通過柱層析得到純物質。Rf=0.42(Q)1H-NMR(CDCl3,200MHz,TMS)∶δ=0.98(m,1H)；1.22-1.71(m,6H)；1.40(s,9H)；1.90(m,1H)；2.47(m,1H)；3.16(d,1H)；4.49(s,2H)；7.32(m,4H)ppm。實施例CLⅩⅩ2-(4-甲基苯基)乙酸(L)-酯 將3.15kg對甲苯基乙酸引入到9.45l甲苯中，攪拌和冷卻下，加入3.115kgL-醇和21.4ml甲磺酸。然后將混合物加熱到回流溫度，在16-20小時時間內用脫水器除去適量的水。冷卻至室溫，通過與4.41l飽和碳酸氫鈉溶液攪拌一次和與各4.41l水攪拌兩次進行提取。從有機相中除去溶劑，得到5.725kg所需化合物(GC99.9％，保留時間19.49min)。1H-NMR(CDCl3,ppm):7.05-7.15(4H,m)；4.55(1H,txd)；3.5(2H,s)；2.8(3H,s)；0.65(3H,s)。實施例CLⅩⅪ2-(S)-2-環戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸(L)-酯 在室溫下將1.575kg叔丁醇鉀溶于3.75l DMF中。將溶液冷卻到10℃，在此溫度下，用45分鐘加入2.678kg實施例CLⅩⅩ化合物，用0.375l DMF洗滌，然后，充分冷卻，用1-2小時時間泵入1.658kg環戊基溴。在無冷卻下將懸浮液再攪拌1小時，然后冷卻到-7℃。達到-10℃時，用正確的非對映體接種，繼續在-7℃冷卻。達到-7℃后，將混合物在此溫度下攪拌3-4小時。將反應懸浮液引入到1.5kg冰和6kg水的混合物中進行后處理。然后將混合物在0℃-2℃攪拌過夜。吸濾懸浮液并用總量2.5l水洗滌結晶進行后處理，在真空爐中于45℃真空干燥結晶物。得到3.289kg 85∶15非對映體混合物。
將4.345kg上面制得的混合物在30-35℃下溶于21.75l甲醇中。用正確的非對映體接種并冷卻到室溫后，將混合物攪拌過夜，次日早上冷卻到0-5℃。在該溫度下1-2小時后，吸濾出結晶，干燥，或者再次重結晶。重復甲醇結晶一到兩次，制備非對映體純度≥99.5％的物質(GC保留時間22.61min)。
非對映異構純的標題化合物的收率在環戊烷基化和通過數個結晶階段純化后是65-70％，通過重結晶或在DMF中用叔丁醇鉀使母液差向異構化以及非對映異構體混合物粗品重新結晶可以增加到75-80％。13C-NMR(CDCl3,CH信號，ppm)128.90；128.92；73.96；57.85；46.92；43.13；31.28；25.96ppm。實施例CLⅩⅫ2-(S)-2-(4-溴甲基苯基)-2-環戊基乙酸(L)-酯 將1.40kg實施例CLⅩⅪ化合物在13.74l氯苯中加熱到80℃。然后加入0.618kg 1,3-溴-5,5-二甲基乙內酰脲，再將混合物加熱到85℃。然后在該溫度下，加入20.4gAIBN開始反應。反應開始后，溫度升到90-105℃，然后回落到大約85℃。反應繼續大約2小時。將容器中的內容物冷卻到室溫，攪拌1小時。吸濾出沉淀的結晶，從濾液中除去溶劑。根據HPLC分析剩余的油狀物純度為61.2％(保留時間16.48min)。得到1.69kg。將混合物粗品用于下列烷基化反應中。層析和隨后的結晶提供了具有正確CH分析的熔點57-58℃的白色粉末。1H-NMR(CDCl3,ppm):7.3(4H,s)；4.65(1H,txd)；4.45(2H,s)；3.35(1H,d)；0.65(3H,d)。實施例CLⅩⅩⅢ2-(R/S)-2-苯基-2-(4-甲基苯基)乙酸甲酯
將21.0g(100mmol)2-苯基-1-(4-甲基苯基)-1-氧乙烷和38.8g(120mmol)碘苯二乙酸酯溶于300ml原甲酸三甲酯中。向該溶液中加入19.6g濃硫酸，然后在60℃攪拌6小時。將溶液冷卻到室溫，用水稀釋，用乙醚提取。合并有機相，用硫酸鈉干燥，在旋轉蒸發器上蒸發。殘留物通過柱層析純化。收率13.1g(55％)Rf=0.33(Q)MS(FAB):241(25％),181(100％)。1H-NMR(200MHz,CDCl3,TMS):δ=7.3-7.10(m,9H)；4.99(s,1H)；3.73(s,3H)；2.31(s,3H)ppm。實施例CLⅩⅩⅣ2-(R/S)-2-(4-氯苯基)-2-(4-甲基苯基)乙酸甲酯 按照相似于實施例CLⅩⅩⅢ中的方法制備標題化合物。Rf=0.41(Q)。
表ⅩⅥ中的外消旋化合物按相似于實施例ⅩⅩⅫ的方法制備表ⅩⅥ
制備實施例實施例1N-{2-(R)-和2(S)-2-環戊基-2-[4-(2,4-二甲基嘧啶并[1,2-a]吲哚-9-基-甲基)苯基]乙酰基}-(R)-苯基甘氨醇
在大約20℃下使1.88g(4.56mmol)實施例CⅩⅫ化合物在20ml二氯甲烷中與0.63g(4.56mmol)(R)-苯基甘氨醇、0.68g(5.00mmol)1-羥基-1H-苯并三唑、1.01g(5.02mmol)N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和1.27g(9.12mmol)三乙胺反應20小時。然后將反應液先用pH=2的緩沖液洗滌，再用MgSO4干燥，蒸發。非對映體混合物粗品在硅膠60上純化(Merck/40-63μm/二氯甲烷∶乙醇=20∶1)。收率2.20g(4.14mmol)，理論量的91％。
通過層析分離異構體(實施例2和3)。
將452mg實施例1中所述的產物溶于10ml乙腈、13ml甲醇和2ml水中，經數個注射步驟將所得溶液加到HPLC柱上。固定相Kromasil 100 C185μm溫度 50℃流速 20ml/mim移動相乙腈∶水∶甲醇=37.5∶25∶37.5在UV檢測(230nm)后收集洗脫液，先真空蒸發，然后冷凍干燥除去殘留溶劑。非對映異構體A(實施例2)176mg非對映異構體B(實施例3)160mg實施例2N-{2(S)-2-環戊基-2-[4-(2,4-二甲基嘧啶并[1,2-a]吲哚-9-基甲基)苯基]乙酰基}-(R)-苯基甘氨醇 TLC:Rf=0.19(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)熔點208℃(未校正)1H-NMR(CDCl3,300MHz,TMS):δ=0.97(m1,1H)；1.26(m,1H)；1.38-2.02(m,6H)；2.28(m,1H)；2.51(s,3H)；2.55(m,1H)；2.94(s,3H)；3.03(d,1H)；3.77-3.89(m,2H)；4.48(s,2H)；4.94(m,1H)；5.99(d,1H)；6.17(s,1H)；6.96-7.00(m,2H)；7.10-7.34(m,9H)；7.67(m,1H)；8.07(m,1H)ppm。實施例3N-{2(R)-2-環戊基-2-[4-(2,4-二甲基嘧啶并[1,2-a]吲哚-9-基甲基)苯基]乙酰基}-(R)-苯基甘氨醇 TLC:Rf=0.19(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)熔點191℃(未校正)1H-NMR(CDCl3,200MHz,TMS):δ=0.97(m,1H)；1.22(m,1H)；1.36-1.68(m,6H)；1.86(m,1H)；2.49(m,1H)；2.52(s,3H)；2.94(s,3H)；3.01(d,1H)；3.66-3.81(m,2H)；4.48(s,2H)；4.93(m,1H)；6.07(d,1H)；6.18(s,1H)；7.13-7.37(m,11H)；7.66(m,1H)；8.06(m,1H)ppm。
對映異構純的羧酸2-(S)-和2-(R)-2-{4-(2-喹啉基甲氧基)苯基}-2-環戊基乙酸的絕對構型[比較EP509359]是已知的，所以按相似于實施例1和2中的方法制備的實施例C1和實施例C2的酰胺的絕對構型可以推出。兩個非對映異構的產物的1H-NMR譜(200Mz,d6-DMSO,TMS(實施例C1)和250MHz,d6-DMSO,TMS(實施例C2)/

圖1)表明了其芳族區的明顯不同實施例C1中的苯基上的氫的信號在大約7.1ppm(3H)和7.3ppm(2H)，而實施例C2中的氫信號在大約7.3ppm(5H)。該發現已經應用到了實施例2和3的化合物(圖2)和該類型的其它衍生物，以這種方式發現了所指明的絕對和相對構型。
表1中的化合物按相似于實施例1、2和3的方法制備表1
表1續
表1續 表1續 表2中的化合物按照相似于實施例1,2和3中的方法制備表2
表3中的化合物按相似于實施例1中的方法制備表3 表3續
權利要求
1．制備通式(Ⅱ)的羧酸的方法 式中A、D、E、G、L和M相同或不同，代表氫、鹵素、三氟甲基、羧基、羥基、在每種情況下各具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基或具有最多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基又可以被羥基或被具有最多4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基取代，R1和R2相同或不同，代表氫、具有3-8個碳原子的環烷基或具有最多10個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可任選地被具有3-6個碳原子的環烷基取代，或者代表可任選被鹵素或三氟甲基取代的苯基，或R1和R2與碳原子一起形成4-8元環烷基，以及R9代表羥基或代表活化基團；所述方法的特征在于，在惰性溶劑中，適當的話在堿存在下，先通過使通式(Ⅳ)化合物與通式(Ⅴ)化合物反應制備通式(Ⅵ)化合物， 式中R1和R2具有所指明的意義，T代表一般的離去基團如氯、溴、碘、甲苯磺酸酯或甲磺酸酯，優選代表溴，及R10代表(C1-C4)-烷基， 式中A、D、E、G、L和M具有指明的意義， 式中A、D、E、G、L、M、R1、R2和R10具有指明的意義，隨后通過常規方法水解所述酯。
全文摘要
本發明的嘧啶并[1,2－a]吲哚類化合物通過使適當取代的苯乙酸衍生物與苯基甘氨醇反應制備。所述的嘧啶并[1,2－a]吲哚類化合物可以用作藥物、尤其是具有抗動脈硬化活性的藥物中的活性化合物。
文檔編號C07D487/04GK1312246SQ0012709
公開日2001年9月12日 申請日期2000年9月12日 優先權日1996年4月4日
發明者U·穆勒, P·埃肯伯格, R·格魯茲曼, H·比肖夫, D·頓澤, S·沃爾費爾, S·洛馬, U·尼爾徹, P·科克夫 申請人:拜爾公司