一種菌肥及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種農用生物菌肥，屬于微生物培養領域，具體的說是一種菌肥及其制備方法。
【背景技術】
[0002]中國化學肥料的大量施用不僅致使土壤板結、土壤微生物區系發生變化、帶來食品安全等問題，還造成大量的經濟損失和嚴重的環境污染。在當前農業可持續發展形勢下，開辟微生物肥料部分替代化肥日益受到重視。因此有必要對生物菌肥的發展現狀與展望作一闡述。所謂生物菌肥，是指一類含有活的微生物，并通過微生物的特定作用給植物提供營養、調節植物生長的特定制品。用于農業生產中能夠獲得特定的肥料效應，可作為化學肥料的有益補充。
[0003]目前，中國生產應用的生物菌肥可分為固氮菌類、解磷菌類、解鉀菌類、光合細菌類、菌根菌類、抗生菌類、復合菌類等。生物菌肥作為一種生物制劑與化學肥料相比具有以下特點:不破壞土壤結構、保護生態、不污染環境，對人、畜和植物無毒無害；肥效持久；提高作物產量和改進作物產品品質；成本低廉；有些種類的生物肥料對作物具有選擇性；其效果往往受到土壤條件如養分、有機質、水分、酸堿度等和環境因素如溫度、通氣、光照等的制約；一般不能與殺蟲劑、殺菌劑殺真菌或殺細菌混用；易受紫外線的影響，不能長期暴露于陽光下照射生物菌肥能改善土壤肥力各種自生、聯合或共生的固氮生物肥料，都可以增加土壤中氮素的來源；有溶解磷鉀作用的微生物，可分泌多種有機酸，有機酸通過螯合作用促使難溶性磷及封閉態鉀的釋放；根際微生物還可以分泌一些誘導物提高土壤酶活性，有利于根際土壤養分的轉化便于植物對營養物質的吸收利用。生物菌肥中含有多種非病原微生物菌群，在微生物的生長繁殖過程中，具有競爭性抑制作用，并能分泌出多種抗生素、殺蟲物質及植物生長激素，不但能抑制植物病原微生物的活動，起到防治植物病害的作用，而且能刺激作物生長，使其根系發達，促進葉綠素、蛋白質和核酸的合成，提高作物的抗逆性。有些微生物肥料如菌根真菌施入土壤后，在作物根部大量繁殖的菌絲除了有益于作物對營養元素的吸收外，還可增加對水分的吸收，從而提高作物的抗旱能力。目前已有的菌肥很多，在提高作物的產量上也都有一定的效果，但都不同程度的存在提高作物產量效果不夠顯著等缺陷。
【發明內容】
[0004]本發明旨在提供一種菌肥及其制備方法，克服現有技術的不足，進行固體和液體發酵生產嗜熱乳桿菌菌劑的方法。
[0005]本發明所述的一種菌肥及其制備方法，其特征在于:將動物內臟加入水中粉碎，得內臟浸出液，并加入蛋白胨和氯化鈉制的培養基，將嗜熱乳桿菌菌劑菌株復蘇、增菌后，制成種子液，發酵后得到嗜熱乳桿菌菌劑純化產品。
[0006]本發明所述的一種菌肥及其制備方法，其制備方法包括以下步驟:
[0007]—、將原料動物內臟加入I?2倍水中粉碎、過濾、得第一濾液和濾渣；
[0008]二、向所述的濾渣中加入I?2倍水，于90?95°C浸泡，過濾，得第二濾液和濾渣；
合并第一濾液和第二濾液得第三濾液；
[0009]三、將按照液體總重量計算的，向第三濾液中加入0.025?0.5g%蛋白胨，以及0.3?0.9g%氯化鈉加入第三濾液，并向該濾液中加入0.5%的活性炭，將其pH調至7.2左右得一培養基；
[0010]四、將嗜熱乳桿菌菌劑菌株復蘇，增菌后制成種子液，使其細菌濃度達到15?17后經行接種，其接種量為0.02?0.2mL% ；
[0011]五、發酵時溫度保持在28?38°C,pH為4.5?9.8,發酵約15?20小時后，得一培養物；
[0012]六、提取:將得到的培養物先用5?10倍量的0.1?0.15M的氯化鈉液在4?10°C下攪拌抽提I?2小時后先粗預濾，除去大顆粒發酵基質，壓濾或離心去除菌體，得到一提取物；
[0013]七、純化:將得到的提取物經75%酒精沉淀或固體硫酸銨沉淀出來的沉淀物0.05MPH7.6磷酸緩沖液溶解，加入固體硫酸銨逐漸達80%飽和度，高速離心，收集沉淀物，沉淀物用0.05M pH6.5磷酸緩沖液溶解并透析，在離子交換柱上層析，收集活性組分，經超濾濃縮后經行冷凍干燥，得到嗜熱乳桿菌菌劑的純化產品。
[0014]本發明所述的一種菌肥及其制備方法，其有益效果在于:采用本發明所述的菌株明顯地縮短了約1/5的發酵時間，種子培養液時間縮短了 2/3，減少了原料的使用量，工藝簡單，容易控制，大大提高了產品的質量，降低了成本。
【具體實施方式】
[0015]實施例1
[0016]1.取動物內臟10kg，用清水洗凈后，采用絞肉機，進行鉸碎處理，加入15kg注射用水于90°C浸泡I小時，然后過濾出濾渣，得豬心濾液備用；
[0017]2.向上述的濾渣中加入注射用水10kg，90°C浸泡I小時，然后過濾，濾渣棄之，得濾液；
[0018]3.將得到的所有濾液合并；取合并后的豬心濾液200ml，加入蛋白胨10g，氯化鈉120g，攪拌煮沸后使加入的物質使其完全溶解，再加入清水，并將其pH保持為8.5，然后4°C下放置過夜；向該濾液中加入活性碳lg，將所述濾液pH值從8.5逐步調整為7.2 ；
[0019]4.將得到的經過上述處理后的濾液后，分裝載50ml的密封瓶瓶內，0.1Mpa的壓力下，滅菌消毒20min,制得培養基40kg,總體積約為40000mL ；
[0020]5.將嗜熱乳桿菌菌劑菌種在35V溫度復蘇24小時，然后在血平皿上增菌8小時，增菌溫度為35°C，得種子液，該種子液的細菌濃度為15 ；
[0021]6.嗜熱乳桿菌菌劑的純化:經75%酒精沉淀或固體硫酸銨沉淀出來的沉淀物0.05M pH7.6磷酸緩沖液溶解，加入固體硫酸銨逐漸達80%飽和度；高速離心，收集沉淀物；沉淀物用0.05M pH6.5磷酸緩沖液溶解并透析，在離子交換柱上層析，收集活性組分，經超濾濃縮后經行冷凍干燥，得到嗜熱乳桿菌菌劑的純化產品。
【主權項】
1.一種菌肥及其制備方法，其特征在于:將動物內臟加入水中粉碎，得內臟浸出液，并加入蛋白胨和氯化鈉制的培養基，將嗜熱乳桿菌菌劑菌株復蘇、增菌后，制成種子液，發酵后得到嗜熱乳桿菌菌劑純化產品。
2.—種菌肥及其制備方法，其制備方法包括以下步驟: ①將原料動物內臟加入I?2倍水中粉碎、過濾、得第一濾液和濾渣；向所述的濾渣中加入I?2倍水，于90?95°C浸泡,過濾,得第二濾液和濾洛；合并第一濾液和第二濾液得第三濾液； ②將按照液體總重量計算的，向第三濾液中加入0.025?0.5g%蛋白胨，以及0.3?.0.9g%氯化鈉加入第三濾液，并向該濾液中加入0.5%的活性炭，將其pH調至7.2左右得一培養基； ③將嗜熱乳桿菌菌劑菌株復蘇，增菌后制成種子液，使其細菌濃度達到15?17后經行接種，其接種量為0.02?0.2mL% ； ④發酵時溫度保持在28?38°C，pH為4.5?9.8，發酵約15?20小時后，得一培養物； ⑤將得到的培養物先用5?10倍量的0.1?0.15M的氯化鈉液在4?10°C下攪拌抽提I?2小時后先粗預濾，除去大顆粒發酵基質，壓濾或離心去除菌體，得到一提取物； ⑥將得到的提取物經75%酒精沉淀或固體硫酸銨沉淀出來的沉淀物0.05M pH7.6磷酸緩沖液溶解，加入固體硫酸銨逐漸達80%飽和度，高速離心，收集沉淀物，沉淀物用0.05MPH6.5磷酸緩沖液溶解并透析，在離子交換柱上層析，收集活性組分，經超濾濃縮后經行冷凍干燥，得到嗜熱乳桿菌菌劑的純化產品。
【專利摘要】本發明公開一種菌肥及其制備方法，涉及一種農用生物菌肥，屬于微生物培養領域。其特征在于：將動物內臟加入水中粉碎，得內臟浸出液，并加入蛋白胨和氯化鈉制的培養基，將嗜熱乳桿菌菌劑菌株復蘇、增菌后，制成種子液，發酵后得到嗜熱乳桿菌菌劑純化產品。其有益效果在于：采用本發明所述的菌株明顯地縮短了約1/5的發酵時間，種子培養液時間縮短了2/3,減少了原料的使用量，工藝簡單，容易控制，大大提高了產品的質量，降低了成本。
【IPC分類】C05F11-08
【公開號】CN104557164
【申請號】CN201310521828
【發明人】魏波
【申請人】魏波
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2013年10月29日