專利名稱：體液細胞塊石蠟切片制作的制作方法
技術領域：
本發明是臨床醫學檢測腫瘤細胞及細胞分子標記檢測方法之一。
背景技術：
人體的細胞在致癌因素的作用下，細胞的性質會逐漸發生質的改變而成為癌細胞，其細胞在長期致癌因素的影響下，細胞所形成的腫瘤細胞增加到一定數量時就發展成惡性腫瘤，為了確診病情，以便對癥下藥，爭取最佳的治療，時間和效果，目前醫療部門對患者采用的方法之一，是體液內查找癌細胞，一般使用離心機制作離心沉定涂片，或使用瓊脂包埋細胞塊石蠟切片，使用涂片離心機簡單快捷，但設備較貴，不能用于免疫組織化學染色檢查、不能進行細胞分子標記物檢測、不能對腫瘤病人進行更加準確的檢測，有時遇到疑難涂片，很難對腫瘤類型進行分類，有時難以區分是退變的腫瘤細胞還是增生退變的間皮細胞，使用瓊脂細胞塊石蠟包埋切片程序較多，又需要事先制作瓊脂較為麻煩，故需改進。
發明內容
本發明的目的是提供一種方法簡單，不易出差錯，結果穩定的體液細胞塊石蠟切片制作。
本發明的制作步驟如下1)離心沉淀前處理將體液加入40％的甲醛其比例為體液40％的甲醛等于9∶1，靜止5分鐘至5小時后，加入NaCl使體液內NaCl濃度達到0.9％，沉淀30分鐘至72小時；2)離心沉淀將上述沉淀物搖勻后注入到5ml-20ml離心管進行離心處理，離心機轉速為3000-5000轉/分，每次時間為5-15分鐘，每次離心處理后棄去上部清液，再注入沉淀物，反復進行2-8次，直到獲得較多的細胞數量；3)固定將上述離心沉淀的產物棄去上部清液注入10％中性福爾馬林，固定2小時。使組織細胞的結構保持，保持細胞塊中細胞與生活時的形態相似，防止細胞自溶；4)脫水、透明、浸蠟將上述固定處理后的沉淀物用雙層紗布包裹，在生物組織自動脫水進行脫水，或采用人工脫水，脫水時酒精溫度為攝氏45度，75％酒精脫水60min，85％酒精脫水120min，95％酒精脫水120min，無水乙醇I脫水90min，無水乙醇II脫水90min，無水乙醇III脫水90min，采用有親水性又有親脂性的二甲苯或TO透明試劑進行透明、浸蠟，達到石蠟浸入細胞的目的；5)包埋將浸蠟后的細胞塊冷卻、粉碎，粉碎后混勻、放入石蠟包埋框底部，聚合在一起，緩緩沿著包埋框邊緣加入溶化石蠟這樣使細胞成份在細胞塊內部更均勻，容易包埋好；6)切片脫蠟切片厚度為3-5微米。進行脫蠟具體步驟如下①切片在恒溫干燥箱內脫蠟50min，溫度為攝氏60度；②二甲苯I脫蠟10min；③二甲苯II脫蠟5min；④無水乙醇洗去二甲苯1min×2；⑤95％酒精1min⑥90％酒精1min⑦85％酒精1min；7)HE染色先將脫蠟切片里流水或靜水中沖洗1-3分鐘，按常規進行染色，對部分細胞塊切片可根據需要進行免疫組織的化學染色，其方法與普通免疫組織化學染色相同，才可以進行細胞分子標記物檢測；最后將采用中性樹脂膠封片完成制作過程。
本發明與其他制作切片相比較，方法簡單，操作步驟少、不易出差錯，結果穩定，不需要特殊的材料和設備，可與平常的日常工作一起進行，切片背景清晰，顯色良好，效果滿意，沒有瓊脂包埋的那種模糊背景，可以進行分子病理方面的工作，進行細胞分子標記物檢測，提高了體液細胞學病理診斷的準確率，提高了應用范圍，特別是對耐藥基因表達物的檢測，對臨床病人的治療效果提供更加準確的治療指導性意見。
實施例本發明對50例胸腹水檢測與普通離心涂片結果相比，查見癌細胞5例，在腫瘤細胞檢出方面沒有顯著差異，但本發明獲得的腫瘤細胞更多，可以進行免疫組織化學染色，免疫組織化學染色的背景清晰，顯色良好，特別是可以進行耐藥基因表達產物的檢測，對腫瘤化療具有重要的幫助，并可以通過免疫組織化學染色進行腫瘤細胞分類提高診斷質量，進行細胞標記物檢測，對于退變的間皮細胞和退變的腫瘤細胞有時難以區分別，使用免疫組織化學染色標記細胞的類型，可以提高診斷的準確性，可以進行腫瘤分類及提供更加準確的治療指導性意見。
權利要求
1.一種體液細胞塊石蠟切片制作其步驟如下1)離心沉淀前處理將體液加入40％的甲醛靜止5分鐘至5小時后，加入NaCl使體液內NaCl濃度達到0.9％，沉淀30分鐘至72小時；2)離心沉淀將上述沉淀物搖勻后注入到5ml-20ml離心管進行離心處理，離心機轉速為3000-5000轉/分，每次時間為5-15分鐘，每次離心處理后棄去上清液，再注入沉淀物，反復進行2-8次，直到獲得較多的細胞數量；3)固定將上述離心沉淀的產物棄去上部清液注入10％中性福爾馬林，固定2小時；4)脫水、透明、浸蠟將上述固定處理后的沉淀物用雙層紗布包裹，在生物組織自動脫水進行脫水，或采用人工脫水，采用有親水性又有親脂性的二甲苯或TO透明試劑進行透明、浸蠟；5)包埋將浸蠟后的細胞塊冷卻、粉碎，粉碎后混勻、放入石蠟包埋框底部，聚合在一起，緩緩沿著包埋框邊緣加入溶化石蠟均勻的包埋好；6)切片脫蠟切片厚度為3-5微米，切片置流水或靜水沖洗1～3分鐘，主要是將甲醛和氯化鈉去除；7)HE染色按常規進行染色部分細胞塊可根據需要進行免疫組織的化學染色；最后將采用中性樹膠封片，完成制片過程。
全文摘要
一種體液細胞塊石蠟切片制作，是通過前處理、離心沉定、固定、脫水透明浸蠟、包埋、切片、HE染色，封片等工序而完成；本發明方法簡單，操作步驟少，不易出差錯，結果穩定，不需要特殊的材料和設備，可與平常的日常工作一起進行，HE和免疫組織化染色背景清晰，效果滿意，沒有瓊脂包埋的那種模糊背景、對進行分子病理方面的工作，提高了體液細胞學病理診斷的準確率。
文檔編號G09B23/00GK1737526SQ20051002129
公開日2006年2月22日 申請日期2005年7月20日 優先權日2005年7月20日
發明者徐華 申請人:徐華