專利名稱：標貼式生物切片制作工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種生物切片技術，尤其是一種標貼式生物切片制作工藝。
背景技術：
傳統的生物切片技術于上世紀初期傳入我國，長期以來在生物學科研究與教學等領域發揮著重要作用。我國相繼建立了許多生物切片標本廠，為全國農、醫、生物類有關大專院校及中小學校提供了大量的生物學、醫學等切片標本。但現有的生物切片制作工藝由于受載體的限制，切片標本不能集中處理，每個載玻片只能放一至數個切片標本，由于載玻片的限制，這在一定程度上影響了切片標本染色、封片的一致性，更重要的是每次只能制作一張標本，制作效率低下。再次，制作者較長時間受到二甲苯等有害藥品的毒害，至今無法解決。
發明內容
本發明的目的是提供一種可大規模集中處理，制作效率高的標貼式生物切片制作工藝。
本發明的技術方案是一種標貼式生物切片制作工藝，主要步驟(1)取材動物或植物器官材料；(2)固定將所取材料用甲醛或冰乙酸或乙醇藥液其中一種快速殺死并固定，使其保持原來的生活狀態；(3)水洗材料經殺死固定后，用水或50％乙醇洗滌液洗去材料中的固定液；(4)脫水用乙醇或正丁醇或叔丁醇或丙酮其中一種藥劑把材料中的水分全部替代出來；(5)透明材料脫水后，常用二甲苯作為透明劑，這是因為它既能與脫水劑又能與石蠟混合，便于包埋劑滲入到材料組織中去；(6)浸蠟材料完全透明后，用石蠟替換材料中的二甲苯，并使石蠟滲透到材料組織中去；(7)包埋將材料與石蠟同時倒入一紙盒內并擺放好材料，然后冷卻；(8)切片經分割修整，蠟快材料即可上機切片，切片厚度一般調整為10微米左右；(9)展片切片機所切出的切片有縐折，因此要在盛有溫水的容器內進行展片；(10)移片采用環氧樹脂材料作為切片載體，將展好的切片一一擺放上去，每張載體可放置一百至數百個切片；(11)脫蠟切片擺放好后，經過幾小時的晾干，即可在一個容器內用二甲苯集中脫蠟；(12)染色切片上的蠟被二甲苯完全溶去后，用無水乙醇和從95％至50％濃度梯度的乙醇處理，然后進行集中染色，如此，可保證染色均勻一致；(13)透明切片被染色后，用50％至無水乙醇濃度梯度的乙醇處理，再用二甲苯進行集中透明；(14)封片將通過二甲苯透明的切片，采用高光樹脂噴膜封片，然后經過烘干、分割，并根據需要，象貼標簽一樣將其貼在載玻片的中部，這樣，一次就可制作出一百至數百張切片來。
本發明標貼式生物切片工藝的優點(1)解決了長期以來展好后的切片不能大規模集中擺放的問題。生物切片材料集中排列于某一新型載體上，并在脫蠟、染色、透明封片等過程中進行大規模集中處理，這在生物切片技術領域尚屬首創。
(2)解決了切片不能集中進行脫蠟、染色、透明、封片的問題。
(3)采用此工藝制作的生物切片標本為標貼式產品，此產品新穎、獨特，適合工業化生產，大大提高了切片標本的制作效率。
(4)集約化處理技術降低了二甲苯等藥品對環境和人的污染和危害。
具體實施例方式
現有生物切片技術及其不足(以石蠟切片為例)(1)現有生物切片技術的主要步驟取材因制作目的而定，但無論是動物或植物器官材料，取材時都應本著″小而精″的原則，以利于快速固定。
固定將所取材料用甲醛或冰乙酸、乙醇藥液快速殺死并固定，使其保持原來的生活狀態。
水洗材料經殺死固定后，用水或50％乙醇洗滌液洗去材料中的固定液。
脫水用乙醇、正丁醇、叔丁醇、丙酮其中一種藥劑把材料中的水分全部替代出來。
透明材料脫水后，常用二甲苯作為透明劑，這是因為它既能與脫水劑又能與石蠟混合，便于包埋劑滲入到材料組織中去。
浸蠟材料完全透明后，用石蠟替換材料中的二甲苯，并使石蠟滲透到材料組織中去。
包埋將材料與石蠟同時倒入一紙盒內并擺放好材料，然后冷卻。
切片經分割修整，蠟快材料即可上機切片，切片厚度一般調整為10微米左右。
展片切片機所切出的切片有縐折，因此要在盛有35℃溫水的容器內進行展片。
移片通過展片并冷卻的切片移至載玻片的中部。每個載玻片放1-2個切片。
脫蠟通常用二甲苯將蠟脫去。
染色切片上的蠟被完全溶去后，用無水乙醇和(從95％降至50％)的乙醇處理，然后進行染色。
透明組織被染色后，用不同濃度梯度的乙醇(從50％至無水乙醇)處理，然后再用二甲苯作透明。
封片在透明好的組織上面滴一滴樹膠，蓋上潔凈的蓋玻片，如此一張動植物切片標本即制作完畢。
2.本發明標貼式生物切片的方法與步驟(以石蠟切片為例)本發明標貼式生物切片工藝從取材固定到展片等步驟與現有生物切片技術相同。而從移片到封片等步驟采用特有的方法，其具體方法如下移片采用551 A B-3環氧樹脂材料(市場有售)作為切片載體，將展好的切片一一擺放上去，每張載體可放置一百至數百個切片。
脫蠟切片擺放好后，經過幾小時的晾干，即可在一個容器內用二甲苯集中脫蠟。
染色切片上的蠟被二甲苯完全溶去后，用無水乙醇和不同濃度梯度(從95％至50％)的乙醇處理，然后進行集中染色。如此，可保證染色均勻一致。
透明切片被染色后，用不同濃度梯度的乙醇(由50％至無水乙醇)處理，再用二甲苯進行集中透明。
封片將通過二甲苯透明的切片，采用高光樹脂噴膜封片。然后經過烘干、分割，并根據需要，象貼標簽一樣將其貼在載玻片的中部。這樣，一次就可制作出一百至數百張切片來。
本發明標貼式生物切片技術是在現有生物切片技術的基礎上發明和發展起來的。該制作工藝運用超常思維方式，用樹脂材料作為載體，并采用集約排列、集中處理等技術，使切片標本的制作質量和效率大幅度提高。本發明是生物切片技術的一個飛躍。
權利要求
1.一種標貼式生物切片制作工藝，其特征是主要步驟(1)取材動物或植物器官材料；(2)固定將所取材料用甲醛或冰乙酸或乙醇藥液其中一種快速殺死并固定，使其保持原來的生活狀態；(3)水洗材料經殺死固定后，用水或50％乙醇洗滌液洗去材料中的固定液；(4)脫水用乙醇或正丁醇或叔丁醇或丙酮其中一種藥劑把材料中的水分全部替代出來；(5)透明材料脫水后，常用二甲苯作為透明劑，這是因為它既能與脫水劑又能與石蠟混合，便于包埋劑滲入到材料組織中去；(6)浸蠟材料完全透明后，用石蠟替換材料中的二甲苯，并使石蠟滲透到材料組織中去；(7)包埋將材料與石蠟同時倒入一紙盒內并擺放好材料，然后冷卻；(8)切片經分割修整，蠟快材料即可上機切片，切片厚度一般調整為10微米左右；(9)展片切片機所切出的切片有縐折，因此要在盛有溫水的容器內進行展片；(10)移片采用環氧樹脂材料作為切片載體，將展好的切片一一擺放上去，每張載體可放置一百至數百個切片；(11)脫蠟切片擺放好后，經過幾小時的晾干，即可在一個容器內用二甲苯集中脫蠟；(12)染色切片上的蠟被二甲苯完全溶去后，用無水乙醇和從95％至50％濃度梯度的乙醇處理，然后進行集中染色，如此，可保證染色均勻一致；(13)透明切片被染色后，用50％至無水乙醇濃度梯度的乙醇處理，再用二甲苯進行集中透明；(14)封片將通過二甲苯透明的切片，采用高光樹脂噴膜封片，然后經過烘干、分割，并根據需要，象貼標簽一樣將其貼在載玻片的中部，這樣，一次就可制作出一百至數百張切片來。
2.根據權利要求1所述的標貼式生物切片制作工藝，其特征是第(9)展片步驟中的溫水溫度為30℃-40℃。
3.根據權利要求1所述的標貼式生物切片制作工藝，其特征是第(10)移片步驟中環氧樹脂為551A B-3。
全文摘要
本發明公開了一種標貼式生物切片制作工藝，其特征是主要步驟(1)取材，(2)固定，(3)水洗，(4)脫水，(5)透明，(6)浸蠟，(7)包埋，(8)切片經分割修整，蠟快材料即可上機切片，切片厚度一般調整為10微米左右；(9)展片，本發明從取材、固定到展片等步驟與現有生物切片技術相同；而從移片到封片等步驟采用特有的方法，其具體方法如下(10)移片采用環氧樹脂材料作為切片載體，每張載體可放置一百至數百個切片；(11)脫蠟，(12)染色切片上的蠟被二甲苯完全溶去后，用無水乙醇和從95％至50％濃度梯度的乙醇處理，(13)透明切片被染色后，用50％至無水乙醇濃度梯度的乙醇處理，再用二甲苯進行集中透明；(14)封片將通過二甲苯透明的切片，采用高光樹脂噴膜封片，然后經過烘干、分割。本發明是生物切片技術的一個飛躍，一次就可制作出一百至數百張切片來。
文檔編號G09B23/00GK1916590SQ20051001788
公開日2007年2月21日 申請日期2005年8月15日 優先權日2005年8月15日
發明者段增強, 高致明, 賀德先, 田朝陽 申請人:段增強