專利名稱：制作心肌梗死動物模型的方法
技術領域：
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本發明涉及一種制作心肌梗死動物模型的方法。
在20世紀50～80年代，治療心力衰竭主要使用藥物來糾正其血流動力學的異常；而至90年代，阻斷神經激素，阻斷心肌重構的惡性循環已成為心力衰竭治療的關鍵。但是心肌梗死所并發的心力衰竭，是由于梗死后所產生的疤痕組織無舒縮功能所致，應用藥物僅能阻斷心肌重塑的惡性循環，不能從根本上解決問題。故此，如何促進梗死區內心肌細胞再生，提高心肌細胞數目，防止心室重構，已成為防止梗死后心力衰竭發生及降低心肌梗死后遠期死亡率的關鍵。
許多科研工作者長期以來一直從事于研究治療心肌梗死的方法，包括藥物治療、溶栓、冠脈搭橋術、基因治療以及現在的干細胞組織工程。然而所有這些方法，在應用于臨床實驗之前都必需先經動物實驗證實，而良好動物模型的制作是決定這些實驗能否順利進行以及能否獲得可靠結果的前提和基礎。目前應用的制作心肌梗死動物模型的方法所制作的動物模型死亡率高，大大影響動物實驗的順利進行和影響實驗結果的真實可靠。
目前應用較為廣泛的制作心肌梗死動物模型的方法是冠狀動脈結扎法。此法除了要求術者掌握心臟的解剖結構以及冠狀動脈的走向外，還要求具備熟練而精湛手術操作能力，難度較大。加上動脈結扎過程歷時長，易出血，容易造成動物死亡，所以實驗成功率低。近年來，也有研究者用液氮冷凍法復制心肌梗死模型。冷凍法的機理是在超低溫條件下凍傷心肌細胞，使其壞死，并非是阻斷血管后引起的心肌缺血壞死，與臨床上的心肌梗死自然發病過程有較大差異，所以應用受到限制。
本發明采用電凝類儀器(例如高頻刀、電燒灼器、雙極電凝儀、電磁刀等)電凝燒灼動物的心臟冠狀動脈血管，由于動物模型制作過程時間短，對實驗動物的損傷小，死亡率低，能真實模擬心肌梗死自然發生過程，在電凝后的兩周內，可以觀察到心肌組織從核固縮、破碎和核溶解等典型的凝固性壞死，到肉芽組織長入梗死灶內，直至最后疤痕形成的全動態過程，從而實現了本發明的目的。
本發明的方法有以下幾個步驟(1)麻醉動物；(2)測心電圖；(3)切開胸腔，暴露心臟；(4)阻塞冠狀動脈；(5)測心電圖；(6)縫合胸腔；(7)術后護理，其特征在于所述的步驟(4)中用電凝燒灼法阻塞冠狀動脈，即用電凝類儀器燒灼動物的心臟冠狀動脈血管，直至血管發生阻塞，出現心肌梗死的心電圖。
本發明中所述的動物是小鼠或大鼠或豚鼠或兔或猴子或狗或豬或羊或牛等。
本發明步驟(4)中所述的電凝類儀器是高頻刀或電燒灼器或雙極電凝儀或電磁刀等。
本發明步驟(4)中所述的冠狀動脈最好是左冠狀動脈血管。
本發明步驟(4)中電凝燒灼時間根據實驗動物的不同而有差異，用出現心肌梗死的心電圖作為判斷的標準，在兩個以上肢體導聯出現ST段上抬0.2mV以上并伴對應導聯改變，肉眼觀電凝區域變灰白，即可判斷動物心肌梗死，鼠類等小型動物的一般電凝時間為1～3秒，兔子、猴子等大型動物的電凝時間則可適當延長。
本發明除步驟(4)以外的其余步驟為本領域常用的技術，可以采用一切現有技術。
本發明具有如下優點(1)制作過程簡單易行，能廣泛推廣應用；(2)制作過程時間短，對實驗動物的損傷小，死亡率低；(3)制作的動物模型能真實地模擬心肌梗死自然發生過程，從而為研究心肌梗死治療的動物實驗提供動物模型制作方法。
實施例用氯胺酮100mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，用BL-420生物機能實驗系統記錄心電圖。口腔插管連通動物呼吸機，呼吸比1∶1，頻率80/min，潮氣量14～16mL/kg。沿左側胸骨旁斜行切口，依次切開皮膚、淺筋膜和深筋膜，并用止血鉗鈍性分離胸大肌和前鋸肌交界處，在靠胸骨緣處用止血鉗鈍性分離第3、4肋間隙進胸，撐開肋間隙暴露心臟。用鑷子提起心包壁層，然后用小剪刀小心剪開心包，棉簽棒向上推開胸腺，在左心耳下緣與肺動脈圓椎間距主動脈根部約3mm處找到左冠狀靜脈，以此為標志，把小高頻刀的電灼電極置于左冠狀動脈前降支深部，電凝2秒。用BL-420生物機能實驗系統觀察心電圖動態變化，在兩個以上肢體導聯出現ST段上抬0.2mV以上并伴對應導聯改變，肉眼觀電凝區域變灰白，即可判斷心肌梗死動物模型制作成功。仔細檢查心臟，如無出血即可關胸。
權利要求
1.一種制作心肌梗死動物模型的方法包括以下幾個步驟(1)麻醉動物；(2)測心電圖；(3)切開胸腔，暴露心臟；(4)阻塞冠狀動脈；(5)測心電圖；(6)縫合胸腔；(7)術后護理，其特征在于所述的步驟(4)中用電凝燒灼法阻塞冠狀動脈，即用電凝類儀器燒灼動物心臟的冠狀動脈血管，直至血管發生阻塞，出現心肌梗死的心電圖。
2.根據權利要求1所述的一種制作心肌梗死動物模型的方法，其特征在于所述的步驟(4)中所述的電凝類儀器是高頻刀或電燒灼器或雙極電凝儀或電磁刀，所述的動物心臟的冠狀動脈血管是動物心臟的左冠狀動脈血管。
3.根據權利要求1、2所述的一種制作心肌梗死動物模型的方法，其特征在于所述的動物是小鼠或大鼠或豚鼠或兔或猴子或狗或豬或羊或牛。
4.根據權利要求1所述的一種制作心肌梗死動物模型的方法，其特征在于所述的動物是大鼠，所述的步驟(1)是用氯胺酮100mg/kg腹腔注射麻醉大鼠；所述的步驟(2)是用BL-420生物機能實驗系統記錄心電圖；所述的步驟(3)是口腔插管連通動物呼吸機，呼吸比1∶1，頻率80/min，潮氣量14～16mL/kg，沿左側胸骨旁斜行切口，依次切開皮膚、淺筋膜和深筋膜，并用止血鉗鈍性分離胸大肌和前鋸肌交界處，在靠胸骨緣處用止血鉗鈍性分離第3、4肋間隙進胸，撐開肋間隙暴露心臟，用鑷子提起心包壁層，然后用小剪刀小心剪開心包，棉簽棒向上推開胸腺，在左心耳下緣與肺動脈圓椎間距主動脈根部約3mm處找到左冠狀靜脈，以此為標志；所述的步驟(4)是把小高頻刀的電灼電極置于左冠狀動脈前降支深部，電凝2秒；所述的步驟(5)是用BL-420生物機能實驗系統觀察心電圖動態變化，在兩個以上肢體導聯出現ST段上抬0.2mV以上并伴對應導聯改變，肉眼觀電凝區域變灰白，即可判斷心肌梗死動物模型制作成功；所述的步驟(6)是仔細檢查心臟，如無出血即可關胸。
全文摘要
本發明涉及一種制作心肌梗死動物模型的方法，其特征在于采用電凝類儀器電凝燒灼動物的心臟冠狀動脈血管，在電凝后的兩周內可以觀察到心肌組織從核固縮、破碎和核溶解等典型的凝固性壞死到肉芽組織長入梗死灶內，直至最后疤痕形成的全動態過程。由于動物模型制作過程時間短，所以對實驗動物的損傷小，死亡率低。本發明簡單易行，能真實模擬心肌梗死自然發生過程，為研究心肌梗死治療的動物實驗提供動物模型的制作方法。
文檔編號G09B23/36GK1472714SQ031269
公開日2004年2月4日 申請日期2003年6月18日 優先權日2003年6月18日
發明者陳運賢, 趙洪云, 鐘雪云, 管慧紅, 陸英, 歐瑞明 申請人:中山大學