一種利用賴氨酸芽孢桿菌dy2菌株漚麻制備紅麻纖維的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株漚麻制備紅麻纖維的方法，包括：(1)將保存的賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中培養(yǎng)，添加凍存緩沖液；(2)在紅麻麩皮培養(yǎng)基中接入步驟(1)所得的菌一環(huán)，搖瓶培養(yǎng)；(3)將步驟(2)所得的培養(yǎng)基接種入紅麻麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)得到發(fā)酵菌液；(4)制作漚麻池；(5)將步驟(3)中制備的發(fā)酵菌液使用噴淋法送入漚麻池做漚麻處理，漚麻后制得紅麻纖維。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)流程短、適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。CGMCC No.91202014.05.04
【專利說明】一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株漚麻制備紅麻纖維的方 法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于慪麻領(lǐng)域，特別涉及一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻 纖維的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 麻是紡織原料之一，其品種主要有亞麻、苧麻、大麻、紅麻、黃麻、羅布麻、劍麻、蕉 麻、蕁麻和苘麻等。麻纖維是從各種麻植物取得的纖維的統(tǒng)稱，具有吸濕、透氣、散熱和抗菌 等其他天然纖維無法比擬的優(yōu)點(diǎn)。我國作為世界上麻類資源最豐富的國家之一，每年生產(chǎn) 的麻纖維及其制品除滿足國內(nèi)市場(chǎng)的需求，還作為大宗商品出口美國、西歐及東南亞國家， 年均創(chuàng)匯近百億美元。在國家節(jié)能減排政策和消費(fèi)者回歸自然、追求綠色的消費(fèi)觀念推動(dòng) 下，麻類纖維綠色加工技術(shù)已經(jīng)成為紡織領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
[0003] 慪麻利用細(xì)菌和水分對(duì)植物的作用，溶解或腐蝕包圍在韌皮纖維束外面的大部分 蜂窩狀結(jié)締組織和膠質(zhì)，從而促使纖維與麻莖分離的加工過程。在廣泛應(yīng)用的水慪法中，麻 莖浸沒在水中，水滲透到麻莖的中央部分，使內(nèi)部細(xì)胞膨脹，脹破最外層，從而增加對(duì)水分 和細(xì)菌的吸收。慪麻法是生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)纖維的加工工藝，慪麻過程的菌種選擇是慪麻的關(guān)鍵。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備 紅麻纖維的方法，該方法簡(jiǎn)單、生產(chǎn)流程短、適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005] 本發(fā)明的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方法，包括：
[0006] (1)將保存的賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中培養(yǎng)，添加凍存 緩沖液；
[0007] (2)在紅麻麩皮培養(yǎng)基中接入步驟（1)所得的菌一環(huán)，搖瓶培養(yǎng)；菌一環(huán)的加入量 為每1000ml菌液加入200mg ;
[0008] (3)將步驟（2)所得的培養(yǎng)基接種入紅麻麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)得到發(fā)酵菌 液；
[0009] (4)制作慪麻池；
[0010] (5)將步驟（3)中制備的發(fā)酵菌液使用噴淋法送入慪麻池做慪麻處理，慪麻后制 得紅麻纖維。
[0011] 所述步驟⑴中的賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株的16Sr DNA序列如SEQ ID N0:1所 /_J、1 ο
[0012] 所述步驟⑴中的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的組成為：每1000ml培養(yǎng)基包括牛肉膏 3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g和水1000ml。
[0013] 所述步驟（1)中的凍存緩沖液的組成為：每l〇〇ml凍存緩沖液包括甘油50ml和水 50ml ;加入量為每1000ml菌液加入lml。
[0014] 所述步驟（1)中的菌株保存條件為-80°c，pH自然；培養(yǎng)條件為37°C，pH自然，培 養(yǎng)時(shí)間12小時(shí)。
[0015] 所述步驟（2)中的紅麻麩皮培養(yǎng)基的組成為：每1000ml培養(yǎng)基包括紅麻皮200g， 麩皮50g，麥芽汁50ml和水950ml ;步驟（3)中的紅麻麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：每1000ml 培養(yǎng)基包括紅麻皮l〇〇g，麩皮l〇〇g，麥芽汁200ml和水800ml，接種量為每1000ml菌液接種 入30L紅麻麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0016] 所述步驟⑵和（3)中的培養(yǎng)條件為37°C，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)。
[0017] 所述步驟（4)中的慪麻池的麻趟間距為15-20厘米，麻層厚度為2-2. 5厘米。
[0018] 所述步驟（5)中的慪麻條件為自然溫度（約20-30攝氏度），pH自然，慪麻時(shí)間 10-20天；噴淋法的工藝具體為每48小時(shí)向慪麻區(qū)域噴灑菌液6?10ml。
[0019] 所述步驟（5)中的制得的紅麻纖維應(yīng)用于制作麻袋、麻布、地毯、繩索、紙張、纖維 板或建筑材料。
[0020] 本發(fā)明所采用的賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株的保藏號(hào)為CGMCC No. 9120,保藏日為 2014年5月4日，建議分類命名為：賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus sp.)，保藏單位名 稱：CGMCC中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰 西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所。
[0021] 根據(jù)16sR DNA測(cè)序Blast及聚類分析結(jié)果，該菌與賴氨酸芽孢桿菌相似性為 99%，結(jié)合鏡檢分析，命名此菌株為賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus sp.)DY2菌株。16S rDNA測(cè)序中，所采用的正向引物27F，反向引物1492R，均為國際通用引物，由上海生工生物 工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。
[0022] 該菌株培養(yǎng)條件粗放，耐熱性好，生長(zhǎng)繁殖快，可以有效去除紅麻纖維中的非纖維 素膠質(zhì)，且酶活穩(wěn)定，菌、酶均無毒性。該菌株及培養(yǎng)系統(tǒng)能夠直接用于紅麻慪麻。
[0023] 有益效果
[0024] (1)本發(fā)明所采用的菌株及培養(yǎng)系統(tǒng)，經(jīng)檢測(cè)能夠直接用于紅麻慪麻，具有慪麻周 期短，慪麻效果良好等特點(diǎn)，菌種不易被污染，處理成本低，纖維質(zhì)量好，慪麻條件溫和，抗 污染能力強(qiáng)，耐熱性能好，無環(huán)境污染等優(yōu)點(diǎn)；
[0025] (2)本發(fā)明的制備方法具有工藝簡(jiǎn)單、適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)等特點(diǎn)；利用該體 系進(jìn)行亞麻脫膠具有慪麻時(shí)間短視天氣情況，一般可縮短2-3天（正常收獲季節(jié)）等特點(diǎn)。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明所用菌株顯微鏡染色照片（油鏡）；
[0027] 圖2a_j為本發(fā)明采用引物27F產(chǎn)生的細(xì)菌DNA圖譜；
[0028] 圖3a_j為本發(fā)明采用引物1492R產(chǎn)生的細(xì)菌DNA圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。
[0030] 實(shí)施例1
[0031] 慪麻時(shí)間據(jù)紅麻收獲時(shí)間定，一般為9月中下旬至10月中下旬。
[0032] 慪麻方法：
[0033] (1)將保存的賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（每1000ml培養(yǎng)基 包括牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g和水1000ml)中培養(yǎng)，添加凍存緩沖液（每100ml凍 存緩沖液包括甘油50ml和水50ml)，培養(yǎng)條件為37°C，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間12小時(shí)；
[0034] (2)在紅麻麩皮培養(yǎng)基（每1000ml培養(yǎng)基包括紅麻皮200g，麩皮50g，麥芽汁50ml 和水950ml) 1000ml中接入菌一環(huán)，搖瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37°C，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；
[0035] (3)將培養(yǎng)基接種入紅麻麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基（每1000ml培養(yǎng)基包括紅麻皮100g，麩 皮l〇〇g，麥芽汁200ml和水800ml)，搖瓶培養(yǎng)得到發(fā)酵菌液，培養(yǎng)條件為37°C，pH自然，培 養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；
[0036] (4)慪麻池的準(zhǔn)備：用4HB-800型紅麻剝皮機(jī)將鮮皮從紅麻全桿中分離出來（韌 皮部因機(jī)械擠壓、打板擊打已造成許多傷口，利于脫膠菌入侵，但不破壞纖維）；尾部端齊 (以洗麻時(shí)能甩得動(dòng)為度，20根左右為一把），稍部攏齊、直，順折成三至四層（慪麻池深度 相仿，浸水時(shí)正好淹沒麻把）或?qū)φ?，每把麻中部靠尾處用鮮皮扎把，把與把之間用扎把的 鮮皮連接，按順序排列、排緊；一般每個(gè)慪麻池均分批投放，便于分批洗麻；投放好麻把后 然后將麻把全部壓入水中，基本上不露出水面為宜。最后用厚型塑料薄膜（透明）將全部 麻把蓋住，再壓緊塑料薄膜，以防麻皮離水。麻趟間距15-20厘米。麻層厚度一般在2-2. 5 厘米為宜。
[0037] (5)將制備的發(fā)酵菌液使用噴淋法入慪麻池做慪麻處理，慪麻后制得可供紡織制 品用紅麻纖維，慪麻條件為自然溫度，pH自然；噴淋法的工藝具體為每48小時(shí)向慪麻區(qū)域 噴灑菌液8ml。
[0038] 完成慪制時(shí)間：視氣溫定，一般9月中下旬至10月中下旬，慪制時(shí)間逐漸延長(zhǎng)，若 氣溫變化不大，則慪制時(shí)間基本相同。在紅麻正常收獲季節(jié)約為10-20天。
【權(quán)利要求】
1. 一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方法，包括： (1) 將保存的賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中培養(yǎng)，添加凍存緩沖 液； (2) 在紅麻麩皮培養(yǎng)基中接入步驟（1)所得的菌一環(huán)，搖瓶培養(yǎng)； (3) 將步驟（2)所得的培養(yǎng)基接種入紅麻麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)得到發(fā)酵菌液； (4) 制作慪麻池； (5) 將步驟（3)中制備的發(fā)酵菌液使用噴淋法送入慪麻池做慪麻處理，慪麻后制得紅 麻纖維。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（1)中的賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株的16Sr DNA序列如SEQ ID NO: 1所示。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（1)中的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的組成為：每1000ml培養(yǎng)基包括 牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g和水1000ml。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（1)中的凍存緩沖液的組成為：每l〇〇ml凍存緩沖液包括甘油 50ml和水50ml ;加入量為每1000ml菌液加入lml。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（1)中的菌株保存條件為-80°C，pH自然；培養(yǎng)條件為37°C，pH 自然，培養(yǎng)時(shí)間12小時(shí)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（2)中的紅麻麩皮培養(yǎng)基的組成為：每1000ml培養(yǎng)基包括紅麻 皮200g，麩皮50g，麥芽汁50ml和水950ml ;步驟（3)中的紅麻麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為： 每1000ml培養(yǎng)基包括紅麻皮100g，麩皮100g，麥芽汁200ml和水800ml，接種量為每1000ml 菌液接種入30L紅麻麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（2)和（3)中的培養(yǎng)條件為37°C，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（4)中的慪麻池的麻趟間距為15-20厘米，麻層厚度為2-2. 5厘 米。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（5)中的慪麻條件為自然溫度，pH自然，慪麻時(shí)間10-20天；噴淋 法的工藝具體為每48小時(shí)向慪麻區(qū)域噴灑菌液6?10ml。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用賴氨酸芽孢桿菌DY2菌株慪麻制備紅麻纖維的方 法，其特征在于：所述步驟（5)中的制得的紅麻纖維應(yīng)用于制作麻袋、麻布、地毯、繩索、紙 張、纖維板或建筑材料。
【文檔編號(hào)】D01C1/04GK104250856SQ201410334135
【公開日】2014年12月31日 申請(qǐng)日期:2014年7月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月14日
【發(fā)明者】丁若垚, 孔德枝, 郁崇文, 張興群, 金關(guān)榮, 駱霞虹, 陳常理, 張家強(qiáng), 朱關(guān)林 申請(qǐng)人:東華大學(xué), 浙江省蕭山棉麻研究所