專利名稱：皮膚護(hù)理組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療酶性皮膚炎所用的組合物。
背景人體中或皮膚上存在各種類型的酶類，包括來自細(xì)菌的酶類、來自飲食中的酶類以及機(jī)體產(chǎn)生的酶類。
已知這些酶類中一部分具有不希望存在的副反應(yīng)。例如，機(jī)體排出物中存在脂酶，已知這些脂酶可引起皮膚炎或皮疹，這是如尿布、失禁用品、衛(wèi)生巾、運動褲等一次性吸濕用品的使用者經(jīng)常遇到的問題。當(dāng)皮膚接觸如機(jī)體排出物中的脂酶時，皮膚的含脂質(zhì)的成分可被這些酶類損傷。因此而削弱了皮膚最表層(角質(zhì)層)的保護(hù)或屏障作用。這有可能影響皮膚健康和／或使皮膚易于感染。因此能導(dǎo)致皮膚疹或尿布疹。
過去數(shù)十年來尿布和皮膚護(hù)理產(chǎn)品的生產(chǎn)商們已經(jīng)開發(fā)出各種各樣的有助于減少尿布疹(或皮疹)產(chǎn)生的產(chǎn)品。目前注意力已主要集中在減少皮膚與機(jī)體排出物的接觸。這可以通過如在尿布中引入有吸濕能力或有較強(qiáng)吸濕能力的物質(zhì)而實現(xiàn)。因此而減少了與皮膚接觸的水量。
EP 0117632-B涉及含有脂酶抑制劑和載體物質(zhì)的一次性用品，其中脂酶抑制劑優(yōu)選為含鋅組分。US 3，091，241涉及甘油三醋酸酯在陰道塞中抑制脂酶酶活性的應(yīng)用。US 3，961，486指示可用己二酸降低脂酶酶活性并減少皮疹。
本發(fā)明的發(fā)明者們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，酶類如與皮膚接觸的脂酶的酶活性可因特異性抗體而有效地降低。因此，當(dāng)抗體應(yīng)用于皮膚時，皮膚上的酶類能被有效地抑制或失活，從而減少或避免酶性皮膚炎的形成。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了抗體在制備治療外皮的酶性皮膚炎的組合物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及吸濕用品，該吸濕用品包括含有抗體的組合物。
發(fā)明詳述本文中抗體用于制備一種組合物，該組合物用于治療因排出物中存在的酶類如酯酶類(包括脂酶)的酶活性所致的外皮酶性皮膚炎。
脂酶、脂酶酶或脂溶酶是用于代表屬于酯酶類的一組酶的常用或通用術(shù)語。它們的主要活性是水解以酯形式存在的脂肪(如人體皮膚中發(fā)現(xiàn)的甘油酯)，并由此產(chǎn)生脂肪酸和甘油。由于這組酶類在植物、霉菌、細(xì)菌、奶、奶制品以及幾乎所有動物組織中廣泛存在，并且因為人類脂酶存在于胰排出物中，因而它們幾乎總是出現(xiàn)在機(jī)體排出物中。
脂酶的活性可引起幾乎所有皮疹或者尤其是尿布疹，通過這些酶對皮膚自身的消化變性作用以及通過破壞脂質(zhì)-皮膚組分而產(chǎn)生刺激，破壞了感染部位的皮膚屏障功能。這種對皮膚整體性的破壞使機(jī)體排出物(尤其是尿和糞便)中可能本身不具有刺激性的其它組分穿過受損的皮膚。此時通常無害的組分就可能變得具有刺激性。
“治療”在本文中指改善人體或動物體中由酶活性所引起的感染狀況。因此，這包括，使酶引起的酶性皮膚炎或皮膚疹減少或至少是穩(wěn)定。
本發(fā)明中用于降低酶活性或在治療中應(yīng)用的組合物的量，根據(jù)待處理狀況的具體部位、待處理狀況的嚴(yán)重程度、治療預(yù)計所需時間、具體使用者對每種組合物的特異性敏感性、使用者的狀況、同時進(jìn)行的治療、使用者出現(xiàn)的其它情況而不同。
本發(fā)明中，優(yōu)選含抗體組合物的最小抑制濃度優(yōu)選在局部應(yīng)用時為能抑制所存在的酶類的活性的量和形式。
抗體本發(fā)明的一個基本成分是針對酶的抗體，本文稱之為抗體。
免疫球蛋白分為5類，分別是IgM、IgG、IgA、IgD和IgE。免疫球蛋白的優(yōu)選類型為IgG和IgA。在人體分泌物如乳汁、唾液、呼吸道和腸道液體中發(fā)現(xiàn)的分泌型sIgA均特別地可在這些分泌物中存活，它們具有較強(qiáng)的結(jié)合特性，并且抗蛋白水解作用。
單克隆抗體或多克隆抗體或抗體片段可通過本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生，例如，通過應(yīng)用重組DNA技術(shù)，產(chǎn)生具有新特性的抗體變體，新特性包括免疫原性降低、親和性提高、大小改變。也可應(yīng)用特異性結(jié)合。為本發(fā)明的目的，優(yōu)選單克隆抗體，更優(yōu)選其片段。這些片段可類似地通過常規(guī)技術(shù)如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化而產(chǎn)生，或用重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。抗體片段也可通過常規(guī)的重組DNA技術(shù)產(chǎn)生?？贵w以及抗體的片段可以是人源化的，如Meded．-Fac．Landbouwkd．Toegepast Biol．Wet．(Univ．Gent)(1995)，60(4a，F(xiàn)orum for Applied Biotechnology，1995，Part 1)，2057-63所述。
重鏈和輕鏈均由恒定區(qū)和可變區(qū)組成。在能產(chǎn)生天然狀態(tài)的免疫球蛋白的生物體中，恒定區(qū)對于許多功能而言非常重要，但對于很多工業(yè)加工中及產(chǎn)品中的應(yīng)用，它們的可變區(qū)已足夠。因此已描述了很多產(chǎn)生抗體片段的方法。
在本文中能夠優(yōu)選抗體片段。通常，它們是Fab、Fv、scFv或具有類似結(jié)合特性的任何其它片段。產(chǎn)生抗體片段的優(yōu)選途徑是通過重組DNA技術(shù)，因此片段由遺傳轉(zhuǎn)化的生物體表達(dá)。
重組DNA技術(shù)產(chǎn)生的抗體和抗體片段不必與脊椎動物中產(chǎn)生的抗體片段相同，但通過它們的Km、Ki和Kcat評估，它們具有相同的結(jié)合特性。例如，它們可以包括與其它途徑所產(chǎn)生的抗體中發(fā)現(xiàn)的那些相區(qū)別的氨基酸序列和／或糖基化作用，特別是片段末端的序列。多少有些類似地，重組DNA技術(shù)產(chǎn)生的抗體片段可能在它們的末端包括外源氨基酸序列，這些外源序列在其它途徑產(chǎn)生的抗體中沒有對應(yīng)部分。
與此相關(guān)的一個可能性是，本文所用的結(jié)合劑是模仿天然抗體的互補(bǔ)區(qū)的特異性結(jié)合活性的天然或人工合成聚合物。這類聚合物例如是多肽或聚合物印記(Angew．Chem．Int．Ed．Engl．1995，34，1812-1832)。
產(chǎn)生抗體的常用方法可在用相應(yīng)抗原免疫哺乳動物或家禽時應(yīng)用。作為哺乳動物而被免疫的可以是小鼠、兔子、山羊、綿羊、馬、奶牛等?？贵w(免疫球蛋白部分)可從抗血清、牛奶或蛋類中，根據(jù)普通的抗體純化方法分離，這些純化方法包括脫鹽法、Polson提取法、凝膠過濾層析法、離子交換層析法、親和層析法等，脫鹽法用硫酸銨產(chǎn)生沉淀，然后將沉淀物對生理鹽水透析，以獲得純化的沉淀物作為抗體。
植物也能合成并裝配各種類型的抗體分子，并且可以大量產(chǎn)生抗體，如Tibtech．Dec 1995，13卷，522-527頁；Plant Mol．Biol．，26，1701-1710頁，1994和Biotechnol．Proi．1991，7，455-461頁以及US 5，202，422所述?？贵w也可在微生物如大腸桿菌或釀酒酵母中通過如EP 667394所述的生物發(fā)酵過程產(chǎn)生。
產(chǎn)生抗體片段的技術(shù)在本領(lǐng)域中是公知的Saiki等人的Science 2301350-54(1985)；Orlandi等人的PNAS USA 86 3833-7(1989)；WO 89／09825；EP 368 684；WO 91／08482和WO 94／25591。
酶的延長的活性所帶來的缺點可通過導(dǎo)入特異性對應(yīng)抗體有效地控制酶活性而避免。這類抗體既可以是直接針對整個酶結(jié)構(gòu)的多克隆抗體，也可以是直接針對酶結(jié)構(gòu)中控制酶活性的特異性表位的單克隆抗體。針對具體酶產(chǎn)生的抗體可通過在活性位點上或非常接近活性位點處的抗體-抗原結(jié)合而有效使酶去活性。這類復(fù)合體的形成導(dǎo)致酶去活并可用三維結(jié)構(gòu)的變形和／或底物裂口處的空間障礙來解釋。
通常，組合物中抗體的用量為使應(yīng)用時抗體與酶的分子比率為100∶1或更低，優(yōu)選50∶1或更低的量。對于單克隆抗體或其片段而言，抗體與酶的分子比率通常為50∶1或更低，優(yōu)選20∶1或更低。
制備組合物的方法組合物可用本領(lǐng)域制備美容組合物或藥物的任何已知方法制備。具體方法取決于組合物的特性?？贵w可加入組合物中，與美容組合物或藥物中常用的其它組分組合，或先分散在或溶于水或油或油包水乳劑中，然后再加入組合物中。
應(yīng)用組合物的方法本發(fā)明的組合物可以應(yīng)用于與酶接觸或與酶接近的皮膚上。
組合物優(yōu)選(首先)應(yīng)用于吸濕用品如尿布擦拭物或薄頁紙上，這些用品然后再應(yīng)用于皮膚。
吸濕用品本發(fā)明的組合物可包含在一種吸濕用品、優(yōu)選一次性吸濕用品中。為此特別優(yōu)選的吸濕用品是擦拭物或尿布。
如本文所用，“吸濕用品”指吸收和容納機(jī)體排出物的用品，更具體地，指緊貼或靠近穿戴者的身體放置，以吸收和容納機(jī)體排出的各種排出物的用品。術(shù)語“一次性”在本文中用以描述不打算洗滌或以其它方式恢復(fù)或再用作吸濕用品的吸濕用品(即它們將在使用一次后丟棄，優(yōu)選以環(huán)保的方式回收、混合制肥或處理)。
一次性吸濕用品的結(jié)構(gòu)對實施本發(fā)明并不是關(guān)鍵的。
通常，將組合物摻入吸濕用品或尿布中，具體的組合物的用量為帶來所需的治療或降低或抑制酶活性的量，優(yōu)選通過頻繁使用達(dá)到上述目的。
所述一次性吸濕用品優(yōu)選包含本發(fā)明的組合物，且組合物的量使得其中的抗體占該用品重量的(以活性抗體物質(zhì)為準(zhǔn))0．00001％-5％，更優(yōu)選0．0001％-1％，最優(yōu)選0．001％-0．5％。
附加組分本發(fā)明的組合物可包含附加組分。包括何種組分以及其含量為多少取決于組合物的特點及其應(yīng)用。
優(yōu)選組合物中包含一或多種可減少皮膚炎的其它組分，或有助于醫(yī)治皮膚的化合物如維生素類(維生素E)和可的松，以及能軟化皮膚的化合物如凡士林、甘油、三甘醇、羊毛脂、石蠟和制藥以及美容品生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的別的類的聚合物，它們本文中也有描述。
一種有助于降低脂酶活性并適用于制備本發(fā)明的組合物或適于在組合物中應(yīng)用的優(yōu)選化合物可以是具有下式的酯化合物 其中，R1、R2和R3獨立地是具有1-22個碳原子的烷基或鏈烯基或羥烷基基團(tuán)，而R4、R5、R6、R7和R8獨立地選自C1-C10的直鏈或支鏈的烷基、鏈烯基或羥烷基基團(tuán)、羥基、氯化物、溴化物、胺或氫。
高度優(yōu)選的上述化合物是其中所述化合物的R4、R5、R6、R7和R8為氫，并優(yōu)選其中的R1、R2和R3獨立地為C1-C4烷基基團(tuán)的化合物。
這類優(yōu)選化合物可以是甘油三醋酸酯。
已發(fā)現(xiàn)用于制備本發(fā)明組合物或用于本發(fā)明組合物中的另一高度優(yōu)選的附加組分為某些陽離子化合物。
用于本發(fā)明組合物中或用于制備本發(fā)明組合物的另一優(yōu)選的酯化合物具有下式 或 其中R1和每個R2獨立地為具有2-22個碳原子的酰基，或具有1-24個碳原子的烷基、鏈烯基、芳烷基、羥烷基基團(tuán)或氫，其中R1和R2中至少一個是這類?；鶊F(tuán)，R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9獨立地為具有1-24個碳原子的烷基、鏈烯基、芳烷基、羥烷基、烷氧基，羥基或氫；R10和R11獨立地為具有2-24個碳原子的烷基、鏈烯基、芳烷基、羥烷基、烷氧基，羥基或氫；A和B獨立地為C1-C6直鏈或支鏈亞烷基、亞鏈烯基、亞烷氧基、羥基亞烷基基團(tuán)；x值獨立地為0-15；y值獨立地為0或1，條件是當(dāng)x=2和y=0時，至少一個R2為具有1-24個碳原子的烷基、鏈烯基、芳烷基、羥烷基基團(tuán)或氫。
優(yōu)選的上述酯化合物中x為1或2，y為0；R1和一個R2為C2-C16?；?，R10和一個或多個R11為C2-C16烷基；R3、R4、R5、R6、R7和R8為氫。
高度優(yōu)選所述附加酯化合物為式(Ⅴ)的單酯或二酯，最優(yōu)選為檸檬酸或酒石酸的單酯或二酯(或它們的鹽類)，或檸檬酸的三酯。
某些陽離子化合物也可作為本發(fā)明組合物的附加組分使用，優(yōu)選具有下式 或
或一種兩性化合物，并優(yōu)選為酸性來源，所述兩性化合物在其等電點時具有下式 其中R1、R2、R3和R4獨立地為C1-C22烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、酰氨烷基、(聚)烷氧基、羥烷基、或酰基基團(tuán)，或R1、R2、R3和R4中的兩個或多個基團(tuán)共同形成一或多個環(huán)狀結(jié)構(gòu)；R5、R6和A獨立地為C1-C22亞烷基、亞鏈烯基、(聚)亞烷氧基、亞羥烷基、亞芳烷基或酰氨亞烷基基團(tuán)；R7和R8獨立地為C1-C4烷基、鏈烯基、烷氧基基團(tuán)或羥基基團(tuán)或氫；R9和R10獨立地為C1-C22直鏈或支鏈烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、酰氨烷基、(聚)烷氧基、羥烷基、或?；鶊F(tuán)，或R1、R9和R10中的兩個或多個基團(tuán)共同形成一或多個環(huán)狀結(jié)構(gòu)；BH是提供質(zhì)子的基團(tuán)；x為2-4；M-是抗衡離子。
應(yīng)理解，對于本發(fā)明的目的，R1-R10的基團(tuán)可由任何適當(dāng)?shù)娜〈鶊F(tuán)取代。
R1、R2、R3和R9獨立地優(yōu)選為C1-C8，更優(yōu)選C1-C4鏈烯基或烷氧基，更優(yōu)選烷基，最優(yōu)選甲基或乙基。
優(yōu)選R4、R5和R10獨立地為C8-C18，更優(yōu)選C12-C16鏈烯基或烷氧基，更優(yōu)選烷基或芳烷基，其中能夠優(yōu)選R4、R5和R9取代基中的一個是芐基。
或者，可優(yōu)選所述陽離子化合物包含至少一個為聚烷氧基的R1、R2或R3或R9。
因此，R1、R2、R3和R9優(yōu)選獨立地為含有C2-C6，優(yōu)選C2-C3烷氧基單元并且烷氧基化數(shù)為2-50，優(yōu)選5-18的聚烷氧基。然后，R3、R4和R10獨立地優(yōu)選為C1-C8、更優(yōu)選C1-C4鏈烯基或烷氧基，更優(yōu)選烷基基團(tuán)，最優(yōu)選甲基或乙基基團(tuán)。
A、R5和R6獨立地優(yōu)選為C1-C6亞鏈烯基或更優(yōu)選亞烷基基團(tuán)，最優(yōu)選亞甲基或亞乙基。
優(yōu)選的化合物可以是氯芐烷銨或Merquat 2200(商品名，為N，N-二甲基-N-2-丙烯基-1-氯化銨的2-丙烯酰胺聚合物)。
優(yōu)選的上述式的陽離子化合物包括一或多個取代的R1、R2、R3、R4、R9或R10基團(tuán)和／或取代的R5和／或取代的R6基團(tuán)，其中取代基選自硅、葡萄糖、果糖和蔗糖的衍生物。
可優(yōu)選Glucquat 125(商品名，為月桂基二甲基glucet-10-羥基二甲基氯化銨)。
附加的陽離子化合物或附加的三酯化合物均優(yōu)選存在于本發(fā)明組合物中，占組合物重量的0．01％-20％，更優(yōu)選0．05％-10％，最優(yōu)選0．1％-5％。
乳液(lotion)、乳膏、油劑、泡沫劑、軟膏劑、凝膠劑、粉劑、片劑等本發(fā)明可應(yīng)用于任何適當(dāng)?shù)哪康摹Ｓ绕涫?，本組合物適于局部應(yīng)用于皮膚或毛發(fā)上。具體的是，皮膚護(hù)理組合物可以是乳膏、噴灑劑、乳液、凝膠劑等形式。優(yōu)選本文中的美容組合物為在連續(xù)水相中的一或多種油相的水包油乳液形式，每種油相包含單一油性組分或為混溶或均勻形式的多種油性組分的混合物，但所述不同的油相包含相互區(qū)別的不同物質(zhì)或物質(zhì)的組合。本發(fā)明組合物中油相組分的總量優(yōu)選為約0．1％至約60％，優(yōu)選約1％至約30％，更優(yōu)選約1％至約10％(重量)。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選為可應(yīng)用于皮膚為免洗產(chǎn)品的增濕乳膏或乳液形式。
評估抗體活性的方法脂酶的活性用SIGMA的試劑盒(產(chǎn)品目錄號805A)測定。所述檢驗用稀釋的糞便標(biāo)本(1／10 w／v)進(jìn)行。單甘油酯水解釋放的甘油轉(zhuǎn)化為甘油-3-磷酸酯，然后經(jīng)氧化成為二羥丙酮磷酸酯和過氧化氫。所形成的過氧化物與4-氨基安替比林及鈉-N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-間甲苯胺在有過氧化物酶存在時反應(yīng)形成醌二亞胺染料。該染料吸收550nm的光。吸收值增加的速率與樣品中的脂溶活性成正比。
檢驗在缺乏(對照物)和存在特異性抗體的情況下進(jìn)行。將0．5ml抗體溶液(5％的水溶液)加入10ml對照物中并進(jìn)一步在37℃溫育。5分鐘和120分鐘后分別取樣以測定酶活性。
脂酶(活性表示為酶單位／克)
權(quán)利要求
1．抗體在制備用于治療外皮的酶性皮膚炎的組合物中的應(yīng)用。
2．權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述組合物用于預(yù)防或治療尿布疹。
3．權(quán)利要求1或2的組合物，其中所述抗體為單克隆抗體，優(yōu)選為其片段。
4．包括含有抗體的組合物的一次性吸濕用品。
5．權(quán)利要求4的一次性吸濕用品，其中抗體的存在量為所述用品的0．00001％-5％，優(yōu)選0．0001-1％。
6．權(quán)利要求4至5的一次性吸濕用品，為尿布形式。
7．權(quán)利要求4至6的一次性尿布，其包括其中包含所述組合物的頂片。
8．權(quán)利要求1-3中任一項的組合物，為美容性乳膏、乳液、凝膠劑、油劑、軟膏劑或粉劑的形式，用于局部施用于外皮或施用于一次性吸濕用品。
9．一種降低外皮上存在的酶類的活性的方法，包括將權(quán)利要求1-3中任一項的組合物(局部)施用于外皮的步驟。
10．一種降低外皮上存在的酶類的酶活性的方法，包括將包括權(quán)利要求1-3中任一項組合物的吸濕用品施用于外皮的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗體在制備治療酶性皮膚炎的組合物中的應(yīng)用,尤其是在制備在吸濕用品如尿布中的組合物中的應(yīng)用。
文檔編號A61Q19/00GK1291107SQ99803112
公開日2001年4月11日 申請日期1999年2月3日 優(yōu)先權(quán)日1998年2月18日
發(fā)明者伊凡·M·A·J·赫博茨, 瓊·韋弗斯, 蒂姆·J·范豪沃邁倫 申請人:寶潔公司