口服疫苗及其接種方法

專(zhuān)利名稱(chēng)：：口服疫苗及其接種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于制備油包水和水包油包水多重乳狀液組合物和方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及制備可用于許多不同用途的穩(wěn)定的油包水多重乳狀液組合物和方法，所述用途包括但并不局限于輔助劑;疫苗，包括口服的和母體的(perental)免疫;口服的、局部的和非腸道的藥物輸送;以及化妝品。一種乳狀液是至少由兩種不溶混的液體組成的一種非均勻體系，一種液體以液滴的形式分散在另一種液體中。這種體系具有最小的穩(wěn)定性1。乳狀液的穩(wěn)定性問(wèn)題傳統(tǒng)上一直是著眼于加入添加劑如添加乳化劑和細(xì)分的固體。乳狀液由連續(xù)相和非連續(xù)相組成。非連續(xù)相廣義地被稱(chēng)為分散相或內(nèi)相，分散出現(xiàn)于其中的相被稱(chēng)為連續(xù)相或外相。乳狀液的標(biāo)準(zhǔn)的組分是一種油相和一種水相。當(dāng)水是連續(xù)相時(shí)，乳狀液被稱(chēng)為水包油(O/W)，當(dāng)油是連續(xù)相時(shí)，乳狀液被稱(chēng)為油包水(W/O)。最近水包油包水(W/O/W)的多相乳狀液已經(jīng)變得重要。水包油乳狀液是最常用的乳狀液。然而油包水和多重乳狀液對(duì)于許多應(yīng)用場(chǎng)合是所希望的，如果不穩(wěn)定的問(wèn)題可以被克服的話，它們就會(huì)被更廣泛地使用。《乳狀液技術(shù)大全》上說(shuō)“多重(或雙重)乳狀液被用作儲(chǔ)存體系，并可以被認(rèn)為是W/O型的一種變化。它們?cè)谒幬镙斔椭械臐撛趦?yōu)點(diǎn)，可能被劑量形式和最佳配方與可接受的穩(wěn)定性帶來(lái)的問(wèn)題的日益復(fù)雜性抵銷(xiāo)”2。W/O是油包水的縮寫(xiě)?！氨M管很早就說(shuō)可以使用它們，但多重乳狀液體系還沒(méi)有被廣泛地利用……如果需要高產(chǎn)率的多重微滴和良好的穩(wěn)定性，用植物油制備多重乳狀液是特別困難的。乳狀液一般是由三個(gè)組分組成的。油相，水相，和一種乳化劑。每種組分和它們的制備和結(jié)合方法關(guān)系到乳狀液的類(lèi)型和穩(wěn)定性。為了明確表示決定所制備的乳狀液的類(lèi)型的規(guī)律，已經(jīng)進(jìn)行了許多嘗試3。一般來(lái)說(shuō)，表面活性劑在其中最易溶的液體(油或水)，在最終的乳狀液中是連續(xù)相。然而，表面活性劑、油和其它物料的性質(zhì)之間的相互關(guān)系，和乳化作用是非常經(jīng)驗(yàn)性的。即，這個(gè)規(guī)律適用于有限范圍的物料，而且常常有例外4?；旌辖M分的方式對(duì)于確定乳狀液的性質(zhì)是重要的。一般有三種乳化的方法1)機(jī)械的，2)相轉(zhuǎn)化，和3)自然乳化5。利用剪切力將乳狀液組分破碎成小顆粒的機(jī)械乳化是最常用的。相轉(zhuǎn)化指的是用與相反類(lèi)型水包油最穩(wěn)定的組分制備一種油包水類(lèi)型的乳狀液的方法。然后乳狀液自然地改變類(lèi)型。制備這些乳狀液的關(guān)鍵，取決于物料、鹽的濃度、溫度和其它因素。自然乳化指的是乳狀液在最小的攪動(dòng)下形成的情況6。這意味著熱力學(xué)穩(wěn)定性的程度是非常希望的，但幾乎不能實(shí)現(xiàn)。表面活性劑是在同一分子里含有親水部分和疏水部分。它們優(yōu)選定位在油和水之間的界里，并在此降低了表面自由能。然而，在表面活性劑的領(lǐng)域里，化學(xué)結(jié)構(gòu)和功能有很大的差異。人們努力研究親水一親脂平衡原理，以便為制備各種類(lèi)型乳狀液和為其它各種業(yè)務(wù)預(yù)測(cè)表面活性劑的功能。親水-親脂平衡是親水和疏水成分的相對(duì)強(qiáng)度的半經(jīng)驗(yàn)的測(cè)量7。它關(guān)系到與將兩親的分子定位在油水界面處相聯(lián)系的自由能。各種應(yīng)用所需的親水-親脂平衡值表示在下表中表Ⅰ親水-親脂平衡值范圍和應(yīng)用8在文獻(xiàn)中這些值廣泛指導(dǎo)為具體目的選擇乳化劑。它們是為使用非離子乳化劑而設(shè)計(jì)的。雖然已經(jīng)研究了用于陰離子或陽(yáng)離子乳化劑的相似體系，但它們比用于非離子乳化劑的那些較少使用。用于許多非離子表面活性劑的親水-親脂平衡值已經(jīng)公開(kāi)9。另外，戴維思(Davies)設(shè)計(jì)了一種用于表面活性劑計(jì)算親水-親脂平衡值的方法，所述計(jì)算直接由利用經(jīng)驗(yàn)導(dǎo)出值的公式進(jìn)行10。這樣，一組數(shù)被指定給乳化劑中的各種組分基，并且由下述關(guān)系計(jì)算親水-親脂平衡值(HLB)11HLB＝7+Σ(親水基數(shù))-Σ(親脂基數(shù))已經(jīng)證明，HLB值對(duì)于選擇乳化劑是有價(jià)值的指導(dǎo)，因?yàn)槌鏊鎏囟ǚ秶娜榛瘎缀跏菬o(wú)效的。然而，一個(gè)恰當(dāng)?shù)腍LB值并不能保證表明HLB以外的因素的性能也是重要的，而且必須考慮。應(yīng)當(dāng)注意到，對(duì)于表面活性劑的HLB小于3的沒(méi)有列出應(yīng)用。這樣的試劑已經(jīng)被用于將浴油(bathoil)分散到水的表面上，如疫苗輔助劑和用于一些其它場(chǎng)合。然而，它們幾乎不被用作乳化劑。如上所述，大多數(shù)油包水乳狀液使用HLB為3至6范圍內(nèi)的表面活性劑12。細(xì)分離的固體也可以用作乳化劑。文獻(xiàn)已經(jīng)記載油包水乳狀液中的目標(biāo)是產(chǎn)生具有穩(wěn)定性且無(wú)電荷的界面膜13。常?？梢酝ㄟ^(guò)增加乳化劑的濃度來(lái)增加乳狀液的穩(wěn)定性，但是對(duì)于生物學(xué)的應(yīng)用這增加了毒性問(wèn)題，而且對(duì)于其它的應(yīng)用也可能是不太適宜的。當(dāng)HLB和其它性質(zhì)適度不同的表面活性劑混合到一起時(shí)，常常會(huì)提高乳狀液的穩(wěn)定性。然而，如果所述差別太大，所述結(jié)合幾乎不起作用。人們一直企圖通過(guò)將它們的HLB值平均來(lái)預(yù)測(cè)表面活性劑的混合作用，但公知的實(shí)際情況是，混合所產(chǎn)生的結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不同于組分平均的結(jié)果14?；旌系谋砻婊钚詣┛梢栽诜€(wěn)定乳狀液方面產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。這被認(rèn)為是與在油-水界面形成與液晶相似的結(jié)構(gòu)配合體有關(guān)。已經(jīng)將磷脂與Span80混合，以穩(wěn)定植物油包水的乳狀液15。最后，聚氧乙烯鏈長(zhǎng)的不均勻性常常影響狀液的穩(wěn)定性，特別是在表面活性劑極易可溶的情況下。具有增加的鏈長(zhǎng)度的不均勻性的制劑趨于產(chǎn)生具有較大穩(wěn)定性的乳狀液。正如在前面的討論中可以看出的，根據(jù)化合物的物理性質(zhì)很難預(yù)測(cè)化合物的任何結(jié)合的乳化性質(zhì)。各種油與它們可以被其乳化的難易程度和所產(chǎn)生的乳狀液的穩(wěn)定性是明顯不同的。一般來(lái)說(shuō)，礦物油比植物油更易乳化16。對(duì)于制備特定類(lèi)型的乳狀液，每種油具有一種所需的HLB值。這就是如表Ⅰ所示的制備每種類(lèi)型乳狀液的HLB值范圍的原因。為了制備最佳的乳狀液，油相的極性越大，表面活性劑的極性也必須越大。油包水乳狀液遵守與水包油乳狀液相似的規(guī)律，但是HLB值較低。許多常用制備油包水和水包油乳狀液所需的HLB值已經(jīng)公開(kāi)17。為制備油包水乳狀液已經(jīng)設(shè)計(jì)了一些方法。這些方法的大多數(shù)都包括在一個(gè)產(chǎn)生攪動(dòng)或一種強(qiáng)剪切力的機(jī)器中將組分混合。所一直推薦的是在將這些相結(jié)合以前，將油溶性物料放于油相中和將水溶性物料放于水相中18。然而，這樣制備的乳狀液并不令人滿意。這種情況的一個(gè)例外是通過(guò)將一種水溶性表面活性劑放入油相中就可以制備非常好的水包油乳狀液19。對(duì)于油包水乳狀液的這種相反類(lèi)型還沒(méi)有推薦。將疏水的表面活性劑放入乳狀液的水相中，一般導(dǎo)致惡劣的乳化，通過(guò)相轉(zhuǎn)化可以從油包水乳狀液制備好的水包油乳液。通過(guò)改變溫度，許多表面活性劑改變了它們的性質(zhì)，并促進(jìn)了從一種類(lèi)型的乳狀液向另一種的轉(zhuǎn)換20。這種現(xiàn)象可以用于在某些條件下制備乳狀液。用于油包水乳狀液的穩(wěn)定劑現(xiàn)有技術(shù)的油包水乳狀液很難穩(wěn)定。這嚴(yán)重?fù)p害了它們的在本來(lái)會(huì)很希望用的許多場(chǎng)合的應(yīng)用。已經(jīng)通過(guò)增加一個(gè)或多個(gè)相或界面的粘度來(lái)企望穩(wěn)定。這可以通過(guò)加在大部分相或在界面處其它結(jié)構(gòu)中形成膠體的聚合物穩(wěn)定劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。這些聚合物包括蛋白質(zhì)、淀粉、樹(shù)脂、纖維素、聚乙烯醇、聚丙烯酸和聚乙烯吡咯烷酮21。這些物料通過(guò)共價(jià)鍵或通過(guò)靜電和疏水部分相互作用結(jié)合到界面上。它們形成一種“界面配合物”，該配合物定義為兩個(gè)或多個(gè)表面活性分子在界面處以一種不存在于任何一個(gè)大部分相中的關(guān)系相連系。位于乳狀液中的水包油界面處的某些配合物可以有效地穩(wěn)定乳狀液。一些低分子量的物料已經(jīng)作為穩(wěn)定劑相似地被使用。這些包括可以與某些非離子乳化劑形成配合物的膽固醇22。另外，二價(jià)陽(yáng)離子的脂肪酸鹽如硬脂酸鋁在穩(wěn)定油包水乳狀液中是非常有效的。帶有一份陽(yáng)離子的相同脂肪酸的鹽如硬脂酸鈉是無(wú)效的。現(xiàn)有技術(shù)中油包水乳狀液的問(wèn)題有礙于增加油包水乳狀液的用途的主要問(wèn)題是制備、高粘度和差的穩(wěn)定性方面的困難。植物油如花生油和豆油，或動(dòng)物油如角鯊烯或角鯊?fù)椋瑢?duì)于許多應(yīng)用來(lái)說(shuō)優(yōu)于礦物油。然而，它們較難乳化，并會(huì)制成較不穩(wěn)定的乳狀液。植物油的油包水乳狀液需要相對(duì)高濃度的一種疏水乳化劑如Span80和一種穩(wěn)定劑。鋁或鎂的硬脂酸鹽已經(jīng)成功地被用作穩(wěn)定劑。然而，它們?cè)黾恿巳闋钜旱膹?fù)雜性和毒性。另一個(gè)問(wèn)題是非離子表面活性劑的溶解度，以及它們制備穩(wěn)定的乳狀液的能力隨溫度而改變。在溫度可能從低于凝固點(diǎn)到高于120°F變化，貯存乳狀液時(shí)，會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題。為解決這些問(wèn)題已經(jīng)進(jìn)行了許多嘗試，包括乳狀液的一些組分的聚合產(chǎn)生了增加的穩(wěn)定性。人們已將聚合物加到水或油相中，然后進(jìn)行化學(xué)聚合或通過(guò)輻射。使用X射線可將一些表面活性在油水界面處聚合。對(duì)于需要疏水表面活性劑的油包水乳狀液這樣做是無(wú)效的，因?yàn)檫@些表面活性劑趨于被X射線降解23。最后，為熔化或溶解乳狀液的某些組分，需要加熱到使蛋白質(zhì)變性的溫度24。這妨礙了將這樣的乳狀液用于需要天然的、未損壞的蛋白質(zhì)的許多生物活性物。最后可能需要非常高濃度的乳化劑。在一個(gè)例子中，乳狀液的油相高達(dá)82%，是由表面活性劑PluronicL121(poloxamer401)構(gòu)成25。在同一專(zhuān)利中的其它例子中的其它例子需要加熱至高溫，以用嵌段共聚物表面活性劑制備油包水乳狀液。所需要的是一種制備油包水乳狀液的改進(jìn)的方法，該方法不需要高溫、有機(jī)溶劑、X射線或化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生交聯(lián)而形成所希望的乳狀液。該法應(yīng)當(dāng)通過(guò)自然乳化最適宜地制備油包水乳狀液。另外，該乳狀液必須提高了穩(wěn)定性。它們?cè)诟叩臏囟确秶鷥?nèi)應(yīng)當(dāng)是穩(wěn)定的。優(yōu)選地，所述乳狀液對(duì)于用于生物學(xué)應(yīng)用應(yīng)當(dāng)具有較低毒性。為此，它們應(yīng)當(dāng)含有較少的組分，而且所存在的這些組分應(yīng)當(dāng)是低毒性的。穩(wěn)定劑應(yīng)當(dāng)減少。油包水乳狀液中的水的濃度應(yīng)增至一較高值，優(yōu)選超過(guò)80%。大部分油包水乳狀液使用少于約50%的水。最后，油包水乳狀液應(yīng)當(dāng)提供一種好的原料以便制備水包油包水的多重乳狀液。多重乳狀液水包油包水多重乳狀液包括三個(gè)不同的相26。最內(nèi)部的相是水相。它在油相中形成囊狀物，該油相又被包封在第二水相內(nèi)。在水包油包水乳狀液中，每一個(gè)分散的油滴形成一種帶有單個(gè)或多個(gè)或含水的小室的有小泡狀物的結(jié)構(gòu)，它們是通過(guò)一層油相組分與含水的懸浮液分開(kāi)。這樣的乳狀液具有油包水乳狀液的大部分優(yōu)點(diǎn)，而且具有低得多的粘度。它們還與脂質(zhì)體有許多相似之處，但具有大的含水室，而且可以不用無(wú)機(jī)溶劑制備。多重乳狀液可以被認(rèn)為是一種在油包水和水包油乳狀液之間的一種相對(duì)不穩(wěn)定性的中間相。分開(kāi)所述的兩個(gè)水相的油層可能變得非常薄，這與油相組分的量無(wú)關(guān)。這些乳狀液的穩(wěn)定性按現(xiàn)象學(xué)可被理解為大約是由油層的穩(wěn)定性決定的27。穩(wěn)定的油層或膜是與增加穩(wěn)定性相聯(lián)的。多重乳狀液可以用于許多技術(shù)中，特別是用于藥品和分離科學(xué)中。它們?cè)跐撛谟猩锼幤窇?yīng)用中作為一種水相在另一種液滴內(nèi)的分散的結(jié)果是獨(dú)一無(wú)二的。這些包括作為疫苗輔助劑、藥物輸送體系、藥物超劑量處理中的吸著劑貯存器和用作酶的固定。它們還可以被用于烴的分離和從廢水中除去有害物料。按照本發(fā)明的多重乳狀液可以被配制成化妝品和日常用品如蠟狀拋光劑。它們已經(jīng)被用于為貯存注射劑固定胰島素和食品中。與多重乳狀液相聯(lián)系的主要問(wèn)題是它們的不穩(wěn)定性，在許多它們表示明顯企望的應(yīng)用場(chǎng)合，所述不穩(wěn)定性嚴(yán)重地限制了它們的使用28。多重乳狀液的制備多重乳狀液已經(jīng)通過(guò)在不同情況下具有優(yōu)點(diǎn)的幾種技術(shù)來(lái)制備。然而，它們中沒(méi)有一個(gè)是最適宜的。一種方法包括制備油包水乳狀液，然后通過(guò)增加水相的量直至超過(guò)油相的乳化能力而轉(zhuǎn)變成多重乳狀液。一種可供選擇的方案是，將溫度改變通過(guò)轉(zhuǎn)換點(diǎn)，某些乳狀液將會(huì)從油包水變?yōu)樗?，產(chǎn)生一過(guò)渡的多重乳狀液相。具有兩個(gè)不同的水相的多重乳狀液必須用兩個(gè)步驟來(lái)制備。這首先通過(guò)用任何標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來(lái)制備一種油包水乳狀液來(lái)實(shí)現(xiàn)。然后將該油包水乳狀液在一般含有表面活性劑的第二水相中再乳化。對(duì)于第二個(gè)步驟，非離子乳化劑通常優(yōu)于離子乳化劑。在第一個(gè)步驟中，Span80一直是一種用于油包乳狀液的成功的乳化劑。“然而，在液體石蠟中取大量的Span80是為開(kāi)發(fā)的多重狀液型分散體的必需的條件之一”29。Span80少于20%產(chǎn)生水包油乳狀液(見(jiàn)表Ⅱ)。對(duì)于石蠟油最適宜的是近似30%。對(duì)于動(dòng)物油或植物油的乳化，甚至需要更大量的Span80，約50%。油包水乳化劑總是加到乳狀液的油相中。在外層水相中的親水乳化劑的濃度也是關(guān)鍵的，因?yàn)樵摑舛缺仨毚蟠笮∮谟拖嘀惺杷娜榛瘎┑臐舛?。例如，為制備穩(wěn)定的乳狀液水相中的Tween80的濃度不能超過(guò)1%，而油相中的Span80必須超過(guò)30%30。表Ⅱ在油相中的Span80對(duì)于由機(jī)械攪動(dòng)制備的水包液體石蠟包水乳狀液的形成的影響;在所有例子中，水相中的SDS濃度固定在0.15M。多重乳狀液指數(shù)是W/O/W的形成的計(jì)量31。在現(xiàn)有技術(shù)中，為了提高多重乳狀液的穩(wěn)定性已經(jīng)使用了多種穩(wěn)定劑和控制。濃度為8%的大豆卵磷脂允許Span80的量降至20%，同時(shí)保持乳狀液的穩(wěn)定性。象油包水乳狀液，油相的體積分?jǐn)?shù)并不是關(guān)鍵的。這被認(rèn)為是由于乳狀液組分是易動(dòng)的，而且穩(wěn)定性取決于當(dāng)脂膜變薄時(shí)保持其完整性32。象油包水乳狀液，植物油和動(dòng)物油用于制造多重乳狀液比礦物油更困難。例如，用橄欖油制備一種多相乳狀液需要60%的Span8033。如果加入17%的大豆卵磷脂，該值減至43%。另外，可以用與表面活性劑用于W/O乳狀液相同的方式，使用成對(duì)的表面活性劑來(lái)穩(wěn)定多重乳狀液?，F(xiàn)有技術(shù)多重乳狀液中的嵌段共聚物表面活性劑用作為疏水乳化劑的共聚物PluronicL101(poloxamer331)與作為親水乳化劑的PluronicP123(poloxamer403)結(jié)合來(lái)制備水包油包水多重乳狀液34，35。在礦物油中的5%的PluronicL101與含有2%牛血清白蛋白的鹽水一起被乳化。一段時(shí)間后，牛血清白蛋白與PluronicL101在油水界面處形成一種配合體。該配合體被認(rèn)為對(duì)于保持乳狀液的油包水組成的穩(wěn)定性是重要的。如果在該界面的配合體有時(shí)間形成以前制備多重乳狀液，所得到的水包油包水乳狀液是穩(wěn)定性較小的。然后該乳狀液在含有0.4%PluronicP123的鹽水中再乳化。在該研究中，評(píng)價(jià)幾種共聚物表面活性劑。發(fā)現(xiàn)PluronicL101和P123是最有效的。沒(méi)有評(píng)價(jià)帶有大于4000的疏水物的共聚物。物理穩(wěn)定劑由于多重乳狀液固有的不穩(wěn)定性，人們已經(jīng)嘗試了幾種通過(guò)制造物理穩(wěn)定性而提高穩(wěn)定性的方法36，37。一種方法是利用在內(nèi)部水相中的親水聚合物與表面活性劑的相互作用。上述的BSA-L101相互作用就是一個(gè)例子。其它例子使用具有高分子量的聚丙烯酸或聚電解質(zhì)，分子量近似為3百萬(wàn)。另外，在界面處的表面活性劑已經(jīng)由X射線或具有化學(xué)活性劑單體的聚合物交聯(lián)38。這種情況已經(jīng)發(fā)生在內(nèi)部水相中、在油水界面處、在油相中、以及在外部水相中的聚合物料上。已經(jīng)將油滴用凝膠體和其它材料封裝以提供物理屏障。在某些條件下，雖然這些方法的每一種在一定程度提高了穩(wěn)定性，但是這種乳狀液一直是難得穩(wěn)定、無(wú)毒和有促進(jìn)廣泛使用的功能。多重水包油包水乳狀液的問(wèn)題如上所述，水包油包水乳狀液的重要問(wèn)題是穩(wěn)定性。多重乳狀液的固有的不穩(wěn)定性已經(jīng)妨礙了大多數(shù)商業(yè)上使用。然而，已經(jīng)有了一個(gè)些企圖改進(jìn)穩(wěn)定性的報(bào)導(dǎo)。用于提高多重乳狀液的穩(wěn)定性的方法一直是相當(dāng)經(jīng)驗(yàn)性的，因?yàn)槊糠N處理都趨于對(duì)于所評(píng)價(jià)的具體乳狀高度專(zhuān)一的39。然而，某些原理可以被公式化。最重要的問(wèn)題似乎是由在外層中的水乳化劑引起的不穩(wěn)定性，所述外層逐漸溶解油層中的疏水乳化劑，并毀壞內(nèi)部的乳狀液40。帶有初始的界面膜的用于第二乳化步驟中使用自由表面活性劑的幾乎不可避免的相互作用表明，在多重乳狀液中使用自由表面活性劑穩(wěn)定劑的固有的不實(shí)用性。優(yōu)選的是一種不允許穩(wěn)定化組分?jǐn)U散的更持久的界面膜。多重乳狀液的評(píng)價(jià)根據(jù)油滴內(nèi)部的水微滴的大小和數(shù)目，將多重乳狀液分為A、B和C型。A型是在油滴內(nèi)有單個(gè)水微滴，B型有少量的水微滴，和C型有較多的水微滴41。按照這種分類(lèi)，如Freund′s完全的輔助劑制備的乳狀液或本發(fā)明的多重乳狀液甚至比C型乳狀液細(xì)得多。已經(jīng)報(bào)導(dǎo)，在某些條件下，多重乳狀液可以比初始的油包水乳狀液更穩(wěn)定。在一個(gè)例子中，用一油酸甘油酯乳化的豆油在80℃下是穩(wěn)定的42。據(jù)報(bào)導(dǎo)，用Freund′s輔助劑制備的多重乳狀液能在4℃貯存比其前體的油包水乳狀液更穩(wěn)定。限制多重乳狀液的使用的壓倒一切的問(wèn)題是穩(wěn)定性。大多數(shù)報(bào)導(dǎo)關(guān)于穩(wěn)定性的文章表明，甚至對(duì)于更穩(wěn)定的制備也是處于不可接受的水平。對(duì)于生物產(chǎn)品，相對(duì)于裝在冷藏室或冷凍室中的藥物來(lái)說(shuō)，乳狀液應(yīng)具有其貨架壽命。另外，用于提高穩(wěn)定性的許多組分也會(huì)增加毒性。多重乳狀液通常使用高濃度的疏水表面活性劑和穩(wěn)定劑，它們具有固有的毒性。另外，在內(nèi)部水相中的小于50%的低濃度的水，使得用于輸送內(nèi)部水相的油的量增加。這之所以重要，是因?yàn)閮?nèi)部水相對(duì)于大多數(shù)活性成分來(lái)說(shuō)是所選場(chǎng)所。最后，極其希望的是使用植物油如花生油或動(dòng)物油(角鯊烯或角鯊?fù)?代替不可代謝的礦物油。然而，使用植物油的多重乳狀液一直比使用礦物油的更難制備和保持穩(wěn)定。本發(fā)明包括油包水和水包油包水多重乳狀液和制備方法，本發(fā)明克服了先前的乳狀液的許多局限，而且本發(fā)明的乳狀液是可用于多種用途包括，但不局限于疫苗輔助劑，口服的，局部的和非腸道的藥物輸送，藥物，化妝品，食品和各種日用和工業(yè)用途的優(yōu)越的制劑。本發(fā)明是一種穩(wěn)定的油包水乳狀液，該乳狀液包括在一連續(xù)油相內(nèi)的分散的水相，該水相有一有效量的第一種表面活性劑;親水-親脂平衡值近似小于2，和連續(xù)的油相有一第二種表面活性劑。本發(fā)明還包括一種穩(wěn)定的水包油包水多重乳狀液，該乳狀液包括一在一油相內(nèi)的分散的內(nèi)部水相，所述油相在一連續(xù)的外部水相中，內(nèi)部水相有親水-親脂平衡值近似小于2的有效量的第一種表面活性劑，和有一第二種表面活性劑的油相。最適宜地，表面活性劑可以加到連續(xù)的外部水相中。加到內(nèi)部水相中優(yōu)選的化合物是一種有下述通式的有效量的表面活性共聚物其中a是一個(gè)整數(shù)，使得由(C3H6O)表示的疏水部分具有平均分子量近似3000至15000，優(yōu)選范圍在3000和9000之間，而且最優(yōu)選的在近似5000至6000之間，b是一個(gè)整數(shù)，使得由(C2H4O)表示的親水部分構(gòu)成化合物重量的約2%至19%。共聚物Pluronic180.5是優(yōu)選的表面活性劑。Pluronic180.5的分子式如下其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為5200，而親水部分(C2H4O)的重量百分比為近似在5%。另一種優(yōu)選的表面活性劑是PluronicL141，其分子式如下其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為4600，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為10%。乳狀液典型地是通過(guò)將內(nèi)部水相、油和外部水相混合來(lái)制備。如果嵌段共聚物表面活性劑被包含在內(nèi)部水相中，在乳化前，它應(yīng)通過(guò)冷凍和允許通過(guò)溫?zé)嵛龀鰜?lái)溶解。用任何方便的方法制備油包水(W/O)乳狀液。然后將其在外部的水相中再乳化以制備一種多重(W/O/W)乳狀液。W/O乳狀液可以通過(guò)將一樣品放入水中來(lái)測(cè)試。W/O/W乳狀液通過(guò)幾種方法來(lái)評(píng)價(jià)。最簡(jiǎn)單的是顯微鏡法。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供用于制備油包水和水包油包水乳狀液的組合物和方法，所述乳狀液是穩(wěn)定的，并且可用于廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備優(yōu)良的疫苗輔助劑的組合物和方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于制備可以被用作非腸胃的，局部的，粘膜的或口服的藥物輸送賦形劑的乳狀液的組合物和方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供可以用于制備在配制化妝品制劑中有用的乳狀液的組合物和方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供可以用于制備在制備食品中有用的乳狀液的組合物和方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供可以用于制備在分離科學(xué)中有用的乳狀液的組合物和方法。本發(fā)明的這些和其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)在重看下面所公開(kāi)的實(shí)施例的詳細(xì)說(shuō)明和附帶的權(quán)利要求后會(huì)顯得更清楚。圖1是表示各種poloxamer化合物之間的關(guān)系的方塊(grid)圖。圖2表示口服了在水包油包水乳狀液中的TNP-HEA免疫劑后在腸液中分泌的IgA的滴定度。圖3表示在口服水包油包水乳狀液中的TNP-HEA免疫劑后IgG和IgA的血清滴定度。本發(fā)明的新穎的乳狀液包括將一種親水-親脂平衡值近似小于2的不可溶的表面活性劑放入內(nèi)部水相中。這與現(xiàn)有技術(shù)教導(dǎo)的疏水乳化劑應(yīng)放入油相中相矛盾。以最終分散的形式放入水相中的非常疏水的乳化劑提供了優(yōu)越的乳狀液穩(wěn)定性，這可能是由于在油/水界面形成了一種穩(wěn)定的界面屏障的緣故。加入到內(nèi)部水相中的優(yōu)選的化合物是具有下列通式的有效量的表面活性共聚物其中a是一個(gè)整數(shù)，使得由(C3H6O)代表的疏水部分具有近似3000至15，000的平均分子量，優(yōu)選5000和10，000，以及b是一個(gè)整數(shù)，使得由(C2H4O)表示的親水部分構(gòu)成化合物重量的約2%至19%。通過(guò)PluronicL180.5的凝膠滲透分離制備共聚物L(fēng)310。計(jì)算L310的式如下其中疏水部分(C3H5O)的平均分子量為近似10，000，而親水部分(C2H4O)的重量百分比為近似為4%。共聚物PluronicL180.5是優(yōu)選的表面活性劑。PluronicL180.5的分子式如下其中疏水部分(C3H5O)的平均分子量近似為5200，以及親水部分(C2H4O)的重量百分比為近似5%。另一種優(yōu)選的表面活性劑是PluronicL141，它具有下述分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量為近似4600，而親水部分(C2H4O)的重量百分比為近似10%。Pluronic或poloxamer共聚物嵌段是在堿性催化劑的存在下，在升高的溫度和壓力下，通過(guò)環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷縮合生成的。在單體單元的數(shù)目上有一些統(tǒng)計(jì)上的變化，所述單體單元結(jié)合形成每個(gè)共聚物的聚合物鏈。給出的平均分子量是每種制劑中共聚物分子的平均重量的近似值。應(yīng)當(dāng)理解，環(huán)氧丙烷和環(huán)氧乙烷的嵌段不必是純的。只要總的物理化學(xué)性質(zhì)基本上不改變，可以摻入少量的其它物料。制備這些產(chǎn)品的更詳細(xì)的討論可在U.S.2，674，619中找到，該專(zhuān)利在此結(jié)合參考。poloxamer化合物的命名法是基于一種poloxamer方塊(圖1)。這種poloxamer方塊是命名和各種聚合物節(jié)的組成之間的關(guān)系。所給出的疏水(聚氧丙烯)平均分子量是其范圍的近似中點(diǎn)。方塊上的poloxamer數(shù)的前兩位數(shù)乘以100，就是所述疏水部分的近似平均分子量。后面的數(shù)字乘以10就是表面活性劑的親水部分(聚氧乙烯)含量的近似重量百分比44。例如，poloxamer407，示于方塊(圖1)的右上四分之一中，導(dǎo)自一種具有平均分子量為4000的疏水部分和占共聚物總平均分子量70%的親水部分。另一個(gè)例子是poloxamer760.5，它具有一個(gè)平均分子量為7600道爾頓的疏水部分和具有一個(gè)占共聚物總的平均分子量5%的親水部分。本發(fā)明的乳狀液具有高度的穩(wěn)定性，而且可以被制備成在內(nèi)部水相中有高達(dá)近似90%至95%水。所述乳狀液隨著油滴的部分凝聚結(jié)成乳化的奶油狀物而不破壞內(nèi)部的油包水乳狀液。親水的乳化劑使疏水的乳化劑加溶，在很大程度上消除了。多重乳狀液的共同問(wèn)題是在外部水相中的親水的表面活性劑將疏水的表面活性劑吸出油相并在外部水相中使之加溶，這損害了油相的乳化能力。通過(guò)將一種疏水的表面活性劑放入內(nèi)部水相中，使它與外部水相保持分開(kāi)。油相的乳化能力并沒(méi)有被接觸外部水相表面活性劑損害。即使本發(fā)明的乳狀液的油相微滴可能結(jié)合和熔合，內(nèi)部和外部水相有很少或沒(méi)有混合。其結(jié)果是，僅通過(guò)搖動(dòng)該制劑，所述多層乳狀液可以被重新形成。油包水乳狀液可以自然地形成帶有高達(dá)90%的水。通過(guò)適當(dāng)?shù)臄噭?dòng)，新的乳狀液在完全毀壞后可以重新形成。這與大多數(shù)普通的具有大比例水的油包水乳狀液不同，它不能在毀壞后再形成，除非將所述組分分開(kāi)并且重新開(kāi)始所有步驟。本發(fā)明的乳狀液除了礦物油外，還可以容易地用各種植物或動(dòng)物油特別是花生油和角鯊烯制備，而且是穩(wěn)定的。它們可以被制成在內(nèi)部水相中有10%至95%的水，然而，對(duì)于大多數(shù)目的，最適宜的水濃度在60%和80%(體積/體積)之間。內(nèi)部水相很有特點(diǎn)地具有非常細(xì)小的微滴尺寸。該制劑與現(xiàn)有技術(shù)的制劑相比可在大得多的程度下穩(wěn)定地冷凍、冷藏，在室溫和升高溫度下也是穩(wěn)定的。它們具有異常低的毒性。本發(fā)明的乳狀液可以用各種不同類(lèi)型的油，油相中的疏水表面活性劑，和外部水相中的親水表面活性劑形成。本發(fā)明可以使用的油包括但并不局限于，動(dòng)物油，如角鯊烯或角鯊?fù)?，植物油，例如花生油，礦物油，例如drakeol，和合成油如十四酸異丙酯。這些油以及表面活性劑的結(jié)合對(duì)于本領(lǐng)域中的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是公知的。乳狀液還可利用其它穩(wěn)定劑如硅石，硬脂酸鋁，牛血清白蛋白，其它蛋白質(zhì)，以及其它本領(lǐng)域的技術(shù)人員知道的聚合劑和穩(wěn)定劑。重要的是避免使用去乳化劑。本發(fā)明的多重乳狀液的一般制備包括，首先用親水-親脂平衡值近似小于2的表面活性劑的混合或均化，將形成乳狀液的內(nèi)部水相的物料。其它物料可以被混合或溶于內(nèi)部水相中。例如，如果該乳狀液要被用作輔助劑，可以將抗原放入水相中。優(yōu)選的表面活性劑是這里討論的嵌段共聚物，但要理解，可以使用其它表面活性劑，只要這些其它表面活性劑親水-親脂平衡值小于2。然后將混合物與一種油一起均化形成油包水混合物?？梢酝ㄟ^(guò)迅速將流體在兩個(gè)注射器間轉(zhuǎn)移來(lái)進(jìn)行均化。還可以在一小型摻合機(jī)中通過(guò)聲波處理或通過(guò)本領(lǐng)域中普通技術(shù)人員公知的許多方法中的任何一種方法來(lái)進(jìn)行均化。為制備水包油包水多重乳狀液，將油包水乳狀液用一第二種水相均化。本發(fā)明的一種應(yīng)用是制備有效的抗感染疫苗，該疫苗可以用于任何種類(lèi)的動(dòng)物。油包水乳狀液如Freund的完全輔助劑和輔助劑65已知是在產(chǎn)生抗許多種抗原的強(qiáng)的免疫感應(yīng)中非常有效。輔助劑65是一種花生油包水的乳狀液，它使用二縮甘露醇-油酸酯作為乳化劑和硬脂酸鋁作為穩(wěn)定劑。輔助劑65已經(jīng)在許多動(dòng)物和人體的研究中被評(píng)價(jià)45，46。按照本發(fā)明制備的乳狀液是優(yōu)良的，因?yàn)樗鼈兙哂休^低的毒性，可以使用低劑量的油和表面活性劑，并且產(chǎn)生等效的或較高的免疫感應(yīng)。對(duì)制備單一劑量的抗破傷風(fēng)和B型肝炎的疫苗，它們是特別有效的。復(fù)合劑量的疫苗向單一劑量的疫苗的轉(zhuǎn)化是世界衛(wèi)生組織的重點(diǎn)目標(biāo)。所述配方還用作疫苗輔助劑，用于各種其它情況包括瘧疾、愛(ài)滋病(AIDS)、流行性感冒和雙球菌肺炎。作為疫苗，所述配方具有允許降低抗原劑量的優(yōu)點(diǎn)，抗原以更有效的方式使用。相對(duì)于礦物油乳狀液來(lái)說(shuō)，它們較少發(fā)生對(duì)抗原的變性。這樣制備較高比例的有效抗體，抵抗正在感染的生物體的天然定子。按本發(fā)明制備的乳狀液除了利用嵌段共聚物的乳化性質(zhì)外，還利用了它們的輔助效果。(見(jiàn)U.S.App.NO.07/544，831，該專(zhuān)利在此作為參考)。當(dāng)與抗原一起使用時(shí)，所述乳狀液鼓勵(lì)對(duì)在寄生抗原上的較大數(shù)目的抗原目標(biāo)或抗原決定基的抗體的制備。這些乳狀液是相對(duì)無(wú)毒的，因?yàn)橛?、表面活性劑和穩(wěn)定物料減少了劑量。它們可以與脂多糖、胞壁酰基二肽衍生物或其它免疫調(diào)節(jié)劑混合，以調(diào)節(jié)適應(yīng)不同地區(qū)生活的動(dòng)、植物或抗體和細(xì)胞免疫之間的平衡。這樣，疫苗可以被調(diào)節(jié)以產(chǎn)生特殊類(lèi)型的免疫響應(yīng)，該響應(yīng)對(duì)于抵抗特殊的疾病是特別有效的。由于免疫調(diào)節(jié)劑被含于乳狀液的內(nèi)部相中，它們可以使用較低的劑量而具有較小的體系毒性。當(dāng)按本發(fā)明制備的乳狀液用作輔助劑時(shí)，它們可以通過(guò)任何方便途徑靜脈、肌肉或皮下注射，口服或通過(guò)粘膜或鼻的途徑施用。該乳狀液在冷凍室中是無(wú)限期穩(wěn)定的，這對(duì)于必須被冷藏的明礬輔助疫苗是一個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)。在世界的許多地方需要冷藏，“經(jīng)受寒冷”，是使用疫苗的主要障礙。按照本發(fā)明的油包水或多重乳狀液，可以被用作口服的、局部的或粘膜的使用的藥物輸送載體。它們具有含有容易變性的物料，如鹽水或其它在經(jīng)過(guò)胃和上部胃腸道的轉(zhuǎn)移期間不變性的流體中的蛋白質(zhì)的不尋常的性質(zhì)。所述物料未受損傷地并具有高效能地輸送到下部胃腸道里。尋找保護(hù)物料在經(jīng)過(guò)上部胃腸道期間不被消化的方法長(zhǎng)期以來(lái)一直是藥物輸送研究的容易被忘記的目標(biāo)。按照本發(fā)明的多重乳狀液可以被用于非腸道注射，以產(chǎn)生藥物的持久釋放或把藥物作為目標(biāo)輸送至身體的具體部位，特別是具有高濃度的巨噬細(xì)胞的部位。由于多重乳狀液有許多脂質(zhì)體的性質(zhì)，它們可以被用作于任何使用或考慮用脂質(zhì)體的場(chǎng)合。它們具有有大的水相內(nèi)部室的附加優(yōu)點(diǎn)，并且可以不用有機(jī)溶劑制備47。這樣的乳狀液可以用于藥物的口服咽下以促進(jìn)持久釋放和/或保護(hù)藥物在胃中不會(huì)由于酸和分解蛋白酶而消化。按本發(fā)明的乳狀液也可以促進(jìn)吸收。另外，使用共聚物抑制脂肪酶并保持乳狀液完整和藥物輸送到胃腸道的較低部分。多重乳狀液還可以用于通過(guò)鼻、直腸、陰道或其它粘液膜輸送藥物。多重乳狀液的擴(kuò)散到相容表面的趨勢(shì)促進(jìn)藥物的通過(guò)任何外部的或內(nèi)部的人體表面的輸送和吸收。一種現(xiàn)有技術(shù)的油包水乳狀液，F(xiàn)reund的完全輔助劑，一直是最廣泛使用的用于使動(dòng)物免疫的免疫輔助劑。然而對(duì)用于人類(lèi)是很毒的。一種沒(méi)有分枝菌的變體，F(xiàn)reund的不完全輔助劑，被用于臨床疫苗中，但由于毒性原因被放棄了48.49.50.51。一種花生油的油包水乳狀液含有ArlacelA(-油酸二縮甘露醇酯)和硬脂酸鋁，這種乳狀液在本世紀(jì)六十年代被評(píng)作輔助劑用于人類(lèi)疫苗52，53，54。它顯示出了一線希望，但后來(lái)被拋棄了。這些油包水乳狀液疫苗的問(wèn)題之一是1/4至1/2ml劑量導(dǎo)致了過(guò)分多的油的注射，該油一直與嚴(yán)重的局部和偶爾全身的毒性反應(yīng)相關(guān)。具有高含量的水和適當(dāng)穩(wěn)定性的多重乳狀液具有在食品、化妝品、分離科學(xué)、化學(xué)反應(yīng)的催化和許多其它領(lǐng)域中有潛在的用途。具有非常高含量的水乳狀液以及沒(méi)有刺激性的穩(wěn)定劑的多重乳狀液的制劑用在化妝品中是特別有利的。已經(jīng)建議多重乳狀液用于多種食品和調(diào)味汁中。共聚物的低毒性和含有食用油的組成為食品提供了良好的機(jī)會(huì)。由本發(fā)明制備的多重乳狀液可以被用于已經(jīng)制備其它油包水或水包油包水乳狀液的分離科學(xué)的任何場(chǎng)合。該多重乳狀液為物料通過(guò)半透膜(油層)擴(kuò)散提供了一種方便的載體。在適當(dāng)?shù)膱?chǎng)合，這可以被用于促進(jìn)物料的分離。已經(jīng)建議這樣的乳狀液可以被用于溶劑萃取和用作一種處理用藥過(guò)量的方法。多重乳狀液縮寫(xiě)以及所得代碼31R1Meroxapol(PluronicR31R1)AlSt硬脂酸鋁ALSt-110mg/ml硬脂酸鋁ALSt-440mg/ml硬脂酸鋁Arlacel186一和二脂酰甘油酯的非離子表面活性劑混合物BSA-33mg/ml含牛血清白蛋白的鹽水BSA-1010mg/ml含牛血清白蛋白的鹽水DDA二甲基二(十八烷基)溴化銨Drakeol6VR輕礦物油egglec蛋卵磷脂F(xiàn)68poloxamer188(PuronicF68)isomyris十四酸異丙酯CEF雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞和流體L101poloxamer331(PluronicL101)L121poloxamer401(PluronicL121)L141poloxamer461(PluronicL141)L180.5poloxamer520.5(PluronicL180.5)nd未做Octadecyl十八烷基胺O/W水包油乳狀液P123poloxamer403(PluronicP123)Palmiacid十八(烷)酸Plurocol2010聚氧化丙烯(MW∽2000)(ⅸ)特征(A)名稱(chēng)/鍵CDS(B)位置889..1410(ⅹⅰ)序列描述SEQIDNO8由下面的實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，實(shí)施例并不以任何方式解釋成對(duì)本發(fā)明的范圍施加限制。相反，應(yīng)當(dāng)清楚地理解，在閱讀本說(shuō)明書(shū)后，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以采取各種其它實(shí)例、改進(jìn)和等同物，都不脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和/或附帶的權(quán)利要求的范圍。實(shí)施例1使用表示在表1至8中的物料和比例制備油包水和多重乳狀液(水包油包水)。首先，通過(guò)按所示比例混合組分來(lái)制備三相(內(nèi)部水相、油相和外部水相)。例如，在表1的第35行，通過(guò)將共聚物L(fēng)180.5以20%(V/V)與含3mg/mlBSA的生理鹽水溶液混合來(lái)制備內(nèi)部水相。將該混合物放入4℃的冷藏室中以允許共聚物進(jìn)入溶液。然后在使用前，將其變熱以使聚合物析出。由角鯊烯與含20%(體積)的Span80的混合物制備油相。不使用穩(wěn)定劑。如果使用硅石作為穩(wěn)定劑，它就會(huì)在與油結(jié)合以前，與油相表面活性劑混合。如果使用硬脂酸鋁作穩(wěn)定劑，為溶解它油相得加熱至50℃到80℃。外部水相是含0.5%的Tween80和0.5%的F68的生理鹽水的混合物。首先，通過(guò)使用本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟習(xí)的任何適合的均化裝置均化制備油包水乳狀液。在該例中，1份(1ml)油相與1ml內(nèi)部水相均化來(lái)制備油包水乳狀液?？梢酝ㄟ^(guò)將一液滴乳狀液放在水的表面上來(lái)進(jìn)行測(cè)試。該液滴應(yīng)保持它的形狀并不分散。然后，油包水乳狀液在6份(6ml)外部水相中二級(jí)乳化以制備水包油包水乳狀液。已發(fā)現(xiàn)該乳狀液(表1的35行)在室溫下24小時(shí)高度穩(wěn)定。表示在表1至8中的每種其它乳狀液用相似的步驟來(lái)制備。Florence建議了一種將多重乳狀液分為A、B和C型的方案。C型是最好的。內(nèi)部水相有許多小的水微滴。B型是一種較不令人滿意的乳狀液，其中內(nèi)部水相有幾個(gè)不連續(xù)的水微滴。A型，是最差的一種，它的內(nèi)部水相有一單個(gè)的大液滴。本實(shí)施例的乳狀液比Florence所描述的任何一種都好55。內(nèi)部水微滴小得用光顯微鏡不能看到單獨(dú)液微滴。而且，由于內(nèi)部水相的無(wú)數(shù)的非常細(xì)小的水微滴，該乳狀液呈現(xiàn)出磨過(guò)的玻璃的外觀。實(shí)施例2含10%至20%Span80的角鯊烯能制備穩(wěn)定的油包水乳狀液，但不能制備穩(wěn)定的水包油包水多重乳狀液(表1，25-26行)。實(shí)施例3將共聚物L(fēng)121、L141或L180.5加入到含10%Span80的角鯊烯中，減少了形成穩(wěn)定的油包水乳狀液的能力(表1，1-12行)。需要20%的L141時(shí)，共聚物L(fēng)121和L180.5使乳狀液在含8%濃度的角鯊烯情況下不穩(wěn)定。實(shí)施例4將Span80的濃度增至油相的20%，克服了L141的去穩(wěn)定能力，并促進(jìn)穩(wěn)定的油包水乳狀液的制備。而且，在這種情況下的L141促進(jìn)了形成穩(wěn)定的多重乳狀液(表1，26和27行)。實(shí)施例51或4%的硬脂酸鋁作為一種在油相中的穩(wěn)定劑，克服了共聚物L(fēng)141的去穩(wěn)定性能力，而且還促進(jìn)了穩(wěn)定的多重乳狀液(表1，28-31行)的形成。實(shí)施例6加入到乳狀液內(nèi)部水相中的共聚物L(fēng)141或L180.5，促進(jìn)了形成穩(wěn)定的多重乳狀液。由于文獻(xiàn)教導(dǎo)說(shuō)，疏水的表面活性劑應(yīng)放入油相中，這是令人驚奇的。而且，這些共聚物的HLB低于報(bào)導(dǎo)的用于有效的油包水乳化劑的那些(表1，32-35行和25-26行)。實(shí)施例7F68是比Tween80更有效的用于制備多重乳狀液的外部水相的表面活性劑(表2，1-9行)。實(shí)施例8如果Span80和共聚物L(fēng)180.5在油相中結(jié)合，Span80的濃度從10%增加到40%，所得到的多重乳狀液的穩(wěn)定性就會(huì)降低，這與文獻(xiàn)所說(shuō)的多重乳狀液需要高濃度的Span80相矛盾(表2，20-27行)。實(shí)施例9內(nèi)部水相中的共聚物L(fēng)180.5對(duì)于穩(wěn)定多重乳狀液來(lái)說(shuō)優(yōu)于L141或更小的共聚物。當(dāng)內(nèi)部水相中的水的濃度升至油包水乳狀液中的水的80%時(shí)，這一點(diǎn)可以清楚地表明(表3，1-6行)。實(shí)施例10共聚物L(fēng)180.5有效地穩(wěn)定了在內(nèi)部水相中有80%水的多重乳狀液。正如貯存在37℃，4℃，冷凍成-20℃以及在幾周的期間融化用光學(xué)顯微鏡看到的，這些乳狀液保持穩(wěn)定。(表3，1-6行)。實(shí)施例11在內(nèi)部水相中含80%水的多重乳狀液可以用大量的外部水相制備，而沒(méi)有危及穩(wěn)定性，這與文獻(xiàn)所教導(dǎo)的限制外部水相的量的重要性相反(表3，1-3行和19-21行)。實(shí)施例12含有角鯊烯的油包水乳狀液的內(nèi)部水相中的共聚物L(fēng)180.5，增加了油包水乳狀液的穩(wěn)定性，而且非常顯著地增加了多重乳狀液的穩(wěn)定性。多重乳狀液的穩(wěn)定性取決于外部水相中的表面活性劑的類(lèi)型。在內(nèi)部水相中含有共聚物L(fēng)180.5的制劑中，可以在外部水相中使用非常廣泛的表面活性劑(表4，7-12行和19-24行)。實(shí)施例13一種在內(nèi)部水相中含有10%共聚物L(fēng)180.5和0.25%的P123作為外部水相表面活性劑的多重乳狀液由在內(nèi)部的油包水乳狀液中的80%的水所構(gòu)成，而且外部水相占總體積的80%，使油相只構(gòu)成總?cè)闋钜旱?%。這樣制備了高穩(wěn)定的多重乳狀液，它能在17天的期間內(nèi)，經(jīng)受冷凍和融化4次，貯藏在冷藏室、室溫或37℃，另外一段時(shí)間，甚至沒(méi)有微小的變壞跡象(表4，24行)。實(shí)施例14聚合物L(fēng)180.5促進(jìn)油包水和水包油包水多重乳狀液的穩(wěn)定性的能力，用幾種油，疏水的油相表面活性劑和穩(wěn)定劑來(lái)測(cè)試。內(nèi)部水相中的L180.5共聚物增加了油包水和多重乳狀液的穩(wěn)定性，所述乳狀液是用Span80、Arlacel186或Span80加上硬脂酸鋁制備的花生油乳狀液(表5，11-20行)。它與礦物油(Drakeol6VR)有相似的效果(表5，21-30行)。在這些有很大的外部水相體積條件下，內(nèi)部水相中的共聚物L(fēng)180.5并沒(méi)有增加含有十四酸異丙酯或Plurocol的乳狀液的穩(wěn)定性。實(shí)施例15一直常常報(bào)導(dǎo)，用植物油制備穩(wěn)定的油包水或水包油包水多重乳狀液是困難的。內(nèi)部水相中的L180.5共聚物顯示了促進(jìn)這樣的乳狀液的穩(wěn)定的能力。含有花生油的Span80制備了一種甚至僅含50%水的水包油乳狀液(表16A，16行)。如果將共聚物L(fēng)180.5加入內(nèi)部水相，制得含50%、70%或90%水的高度穩(wěn)定的油包水乳狀液。然后，該油包乳狀液形成一穩(wěn)定的多重乳狀液(表6，10-12行)。將該乳狀液貯存在冷凍或4℃的條件下進(jìn)一步測(cè)試，發(fā)現(xiàn)在這些條件下也是穩(wěn)定的。其它的穩(wěn)定劑，如硬脂酸鋁單獨(dú)使用時(shí)是很少有效的，但當(dāng)與共聚物L(fēng)180.5結(jié)合使用時(shí)，可制備非常穩(wěn)定的乳狀液(表6A，22-24行，28-30行和31-36行)。當(dāng)內(nèi)部水相含有在一用于疫苗的制劑的雞胚成纖維細(xì)胞和它們的培養(yǎng)基時(shí)可觀察到相似的結(jié)果(表6B，37-72行)。實(shí)施例16將幾種疏水的表面活性劑加到角鯊烯、花生油、礦物油和十四酸異丙酯的油包水和多重乳狀液的內(nèi)部水相中。共聚物L(fēng)180.5顯著地增加了有這些油的每一種的油包水和多重乳狀液的穩(wěn)定性(表7，1-2行，13-14行，25-26行和37-38行)。共聚物T1501具有相似的組較小的效果(表7，4行，16行，28行和40行)。DDA、大豆卵磷脂、硬脂酸鋁和十八烷基胺加入到內(nèi)部水相時(shí)都增加了一種或多種油包水乳狀液的穩(wěn)定性。(表7)實(shí)施例17內(nèi)部水相中的蛋白質(zhì)的效果和共聚物L(fēng)180.5的濃度的研究評(píng)價(jià)表示在表8中。共聚物L(fēng)180.5在穩(wěn)定多重乳狀液中的最大效果需要濃度為5%或更大(1-2行，11-12行;表8)。然而，在使用0.01%這一最低濃度時(shí)，觀察到了影響(表8，9行，19行)。內(nèi)部水相中蛋白質(zhì)的存在對(duì)結(jié)果沒(méi)有影響。這些制劑都是在室溫和4℃下測(cè)試的，且具有相似的結(jié)果。進(jìn)行了進(jìn)一步的研究以評(píng)價(jià)鹽濃度對(duì)乳狀液的穩(wěn)定性的影響。內(nèi)部水相中用蒸餾水制成的乳狀液比那些用普通狀態(tài)的鹽水制成的較不穩(wěn)定。相似地，兩倍于生理鹽水的濃度的鹽濃度制成較低穩(wěn)定性的乳狀液。這與先前的其它情況的結(jié)果一致，所述結(jié)果表明，鹽濃度的類(lèi)型和量對(duì)于決定油包水和多重乳狀液的穩(wěn)定性是重要的。實(shí)施例18以5%(V/V)加入到十四酸異丙酯的油相中的L101不能與含BSA的鹽水形成一種80%的油包水乳狀液(表5，6行)。它還不能與含有P123作為外部水相的鹽水形成一種多重乳狀液(表5，6行)。這與Law等人的報(bào)導(dǎo)相反，他們用這些物料制備油包水和W/O/W兩種乳狀液56。然而，他們的工作和本發(fā)明有幾個(gè)基本的不同。首先，Law等人只描述了一種含50%油的油包水乳狀液。本發(fā)明可以用各種油包括十四酸異丙酯制備超過(guò)70%的乳狀液(表7，3行)。第二，他們的乳化是在一機(jī)械攪拌中以1200±200RPM的速度乳化30分鐘來(lái)形成一種油包水乳狀液。本發(fā)明的乳化一般是使用結(jié)合的注射器以一般用于制備免疫學(xué)的輔助劑乳狀液的方式進(jìn)行5分鐘或更短時(shí)間來(lái)完成的57.58.59。這表明本發(fā)明的優(yōu)越之處在于油包水乳狀液的制備容易得多。第三，Law等人教導(dǎo)表面活性劑如Span80加入到他們的乳狀液的油中會(huì)引起大量的凝聚。在本發(fā)明的許多實(shí)施例中對(duì)于各種油包括十四酸異丙酯，Span80是一種有效的油相乳化劑。(表7，37-38行)第四，Law等人教導(dǎo)，使用這些物料的多重乳狀液的形成，需要在制備W/O/W乳狀液之前，將油包水乳狀液放置過(guò)夜老化。這使得蛋白質(zhì)和共聚物L(fēng)101相互作用。他們的論文“由大分子和非離子表面活性劑的界面復(fù)合作用穩(wěn)定W/O/W多重乳狀液”，表明他們的乳狀液的穩(wěn)定性需要這一現(xiàn)象60。Law等人清楚地表明，保持表面活性劑分開(kāi)的穿過(guò)油層是穩(wěn)定W/O/W乳狀液的一個(gè)重要因素，但他們所針對(duì)的溶液是與本發(fā)明完全不同的。本發(fā)明的乳狀液是在溫和得多的攪拌條件下制備的，含有較高比例的水，是更穩(wěn)定的，而且在制備油包水乳狀液后不需等待一段時(shí)間。實(shí)施例19目前的用于B型肝炎感染的疫苗是安全和有效的，但對(duì)大多數(shù)人來(lái)說(shuō)，在幾個(gè)月的期間內(nèi)需要至少三次注射以實(shí)現(xiàn)10mlU/ml的保護(hù)抗體滴定度61。制備并測(cè)試一種作為疫苗用于B型肝炎病毒的表面抗原的多重乳狀液。由共聚物L(fēng)180.5(10mg)與含于0.1ml鹽水中的130μg的由B型肝炎表面抗原取得的血漿混合構(gòu)成內(nèi)部水相并冷卻以溶解所述共聚物。油相是由0.08ml的含有90%角鯊烯和10%Span80的一種混合物構(gòu)成。將內(nèi)部水相和油相放入一個(gè)1ml園錐形塑料管中，并重復(fù)地吸取該混合物經(jīng)過(guò)一個(gè)鈍的18號(hào)標(biāo)準(zhǔn)針進(jìn)入一個(gè)1ml的塑料注射器。在少于30秒內(nèi)形成了稠的油包水乳狀液。加入含0.25%PluronicP103(poloxamer404)的鹽水0.22ml作為外部水相，所述乳狀液轉(zhuǎn)化為油包水多重乳狀液。該混合物經(jīng)18號(hào)標(biāo)準(zhǔn)針吸入。將油包水乳狀液分散成一種多重乳狀液。所得到的多重乳狀液由具有平均大小為10微米左右的油包水乳狀液微滴組成，而且內(nèi)部水滴到要用光學(xué)顯微鏡分辨。在室溫下穩(wěn)定期超過(guò)4個(gè)月。相似的制劑經(jīng)過(guò)五個(gè)冷凍-融化循環(huán)仍然穩(wěn)定的。將該乳狀液通過(guò)皮下注射到ICR遠(yuǎn)系繁殖的老鼠的脅肉內(nèi)，注射量為0.05ml，其中含有1.23mg共聚物L(fēng)180.5、1.03mgSpan80、16μg抗原和9.25mg角鯊烯。所有老鼠在14天內(nèi)產(chǎn)生的滴定大于10mlU/ml。在28天時(shí)，平均滴定度為20，815mlU/ml。局部炎癥響應(yīng)是最小的。實(shí)施例20實(shí)施例23至25表明按照本發(fā)明的一種油包水乳狀液如何可以被用于輸送作為一局部治療的活性組分。用一種油包水乳狀液(75%水)處理一個(gè)40歲的白人婦女，所述乳狀液使用在水相中的PluronicL180.5和作為油相的角鯊烯和10%的Span80，帶有最后濃度為5%的硫酸皮膚素(科學(xué)蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)室，Waunakee，WS)以用于頭部的嚴(yán)重輻射燒傷。該病人接受了15劑量的全腦輻射，用于在她的左太陽(yáng)穴腦葉中一個(gè)轉(zhuǎn)移的腺癌。該病人失去了她的全部頭發(fā)。對(duì)她進(jìn)行了傳統(tǒng)療法，該療法包括用蘆薈凝膠和羊毛脂局部處理她頭部燒傷。在她前額上的燒傷是特別嚴(yán)重的。該病人遭受了極度痛和癢。該病人的頭頂皮被紅的發(fā)炎的條狀物蓋滿。該病人的耳朵后面的腫塊受到大劑量的輻射，此處皮膚破裂、發(fā)紅、腫脹而且非常干燥。油包水乳狀液施加到她的整個(gè)頭頂和前額。病人立即解除了發(fā)癢。首次處理后12小時(shí)，在她頭部的所有的紅的發(fā)炎的條狀物完全消失了。她前額的皮膚變軟且柔和。使用該油包水乳狀液，病人基本上12小時(shí)不癢。數(shù)周內(nèi)病人能睡眠而不用第一次藥物處理。實(shí)施例21將50ml含5%硫酸皮膚素的70%的油包水乳狀液施加到一位61歲的白人男子身上，該人患嚴(yán)重的“接觸性”皮炎已5年以上。該病人的最嚴(yán)重問(wèn)題是他的手而且特別是在冷天。病人的手指間，皮膚破裂出血而且他的整個(gè)手具有鱗狀的燙傷外觀。該病人的癢得他在睡眠時(shí)將手抓傷直到流血。病人一天兩次施用W/O乳狀液，早晚各一次。第一次處理后幾個(gè)小時(shí)內(nèi)，解除了痛和癢。病人使用該乳狀液一周后，皮膚變?nèi)彳浂矣姓５钠つw外觀。實(shí)施例22處理一位有嚴(yán)重的覆蓋整個(gè)背部的曬斑的30歲的白人男子。該病人將其背部暴露于太陽(yáng)下達(dá)近似7小時(shí)，有最少的遮陽(yáng)物。第二天，痛苦嚴(yán)重得使病人作嘔。該病人在遭受目炙后用在實(shí)施例23中所用的油包水乳狀液處理48小時(shí)。在近似30分鐘內(nèi)，解除了痛和癢。該制劑一天施用兩次。第一次施用后24小時(shí)，所有發(fā)紅、發(fā)炎全部消失。他繼續(xù)使用該制劑三天，皮膚完全治愈。實(shí)施例23制備一種水包油包水多重乳狀液，它包括50%(V/V)的含0.25%的共聚物P123的鹽水的外部水相。另外50%(V/V)是由72%鹽水，18%角鯊烯，2%Span80和32mg共聚物L(fēng)310和每0.5ml乳狀液0.5mgTNP-HEA組成的分散的油包水相。該乳狀液給OCR遠(yuǎn)系繁殖的老鼠口服，劑量為每支老鼠0.5ml。在一個(gè)放大200倍的顯微鏡下檢查該多重乳狀液。乳狀液在顯微鏡下表示出油包水乳狀液的粒子直徑為1.0至20μ。透射顯示了老鼠的回腸末端，胃服乳狀液后6小時(shí)，顯示乳狀液粒子與一種PeyersPatch(P)的圓頂狀物結(jié)合。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)抗原懸浮在乳狀液的鹽水中，該實(shí)驗(yàn)暗示油包水乳狀液能夠?qū)⑻烊豢乖斔偷脚c腸聯(lián)合的淋巴腺組織。該乳狀液肉眼可見(jiàn)的，而且是由完整的油包水顯微粒子組成。一個(gè)內(nèi)含物試樣在口服后六小時(shí)被取出，由Ouchterlony分析測(cè)試發(fā)現(xiàn)含有抗原性的完整的TNP-HEA。在口服含有抗原的油包水乳狀液后測(cè)試出分泌的IgA值。內(nèi)部水相中含有TNP-HEA的油包水乳狀液(0.5ml)在0，14，34天注入6個(gè)一組的遠(yuǎn)系繁殖ICR老鼠的胃中。其它組接受同樣的乳狀液試驗(yàn)，所述乳狀液含有100μg已解毒的RaLPS，皂草苷或硅石作為輔助劑?？诜?，IgG和IgA抗體循環(huán)，測(cè)量滴定度。在收集老鼠的腸液的同時(shí)收集血樣。結(jié)果表示在圖2和3中。在大多數(shù)情況下，單獨(dú)服用TNP-HEA抗原乳狀液在腸液和血漿中都得到了最高的滴定值。當(dāng)口服含有TNP-HEA的鹽水，在腸液或血漿中都沒(méi)有免疫響應(yīng)。當(dāng)然，應(yīng)當(dāng)理解，前面所述只與本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例有關(guān)，而且許多可以做出的改進(jìn)和選擇都不脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍表示在附帶的權(quán)利要求中。相關(guān)文獻(xiàn)1BecherP.Macroemulsions.NonionicSurfactantsPhysicalChemistry.EditedbyMartinJ.Schick.MarcelDecker，1987.pp435-4922Becher，P.MedicalandPharmaceuticalApplicationsofEmulsions.Chapter3ofEncyclopediaofEmulsionTechnology，volume2.MarcelDekker，NY.1985.ISBN0-8247-1877-1(v.2)atpage1603MyersD.Surfaces，InterfacesandColloids.VCHPublishers，Inc.1990.atpage2324Myers，D.Supraatpage2325Myers，D.Supraatpage222.6SchulmanJHandCockbainEG.Molecularinteractionsatoil/waterinterfaces.PartI.Molecularcomplexformationandthestabilityofoilinwateremulsions.Trans.FaradaySoc.，36651-661，661-668，1940.7MarszallL.HLBofnonionicsurfactantsPITandEIPmethods.NonionicSurfactantsPhysicalChemistry.EditedbyMartinJ.Schick.MarcelDecker，1987.pp493-548.8BecherP.Macroemulsions.NonionicSurfactantsPhysicalChemistry.EditedbyMartinJ.Schick.MarcelDecker，1987.pp435-492，atpage4409BecherP.Supraatpg44310BecherP.Supraatpg44111BecherP.Supraatpg44112BecherP.Supraatpg44013SchulmanJHetal.Molecularinteractionsatoil/waterinterfaces.PartI.Molecularcomplexformationandthestabilityofoilinwateremulsions.Trans.FaradaySoc.，36651-661，661-668，1940.14MatsumotoS.W/O/W-typemultipleemulsions.NonionicSurfactantsPhysicalChemistry.EditedbyMartinJ.Schick.MarcelDecker，1987.pp549-600，atpage53515MatsumotoS.，Supraatpage56916BecherP.Supraatpg46217MyersD.Surfaces，InterfacesandColloids.VCHPublishers，Inc.199018GuthauserB.Stablewater-in-oilemulsions.UnitedStatesPatentNo.4，384，974.May24，1983.19Guthouser，U.S.PatentNo.4，384，97420BecherP.Supraatpg47621MyersD.，Supraat22SchulmanJHetal.Supra23FlorenceATandWhitehillD.Multiplew/o/wemulsionsstabilizedwithpoloxamerandacrylamidegels.J.Pharm.Pharmacol3264P，24Guthouser，U.S.PatentNo.4，384，97425Guthouser，U.S.PatentNo.4，384，97426MatsumotoS.，Supra27MatsumotoS.，Supra28FlorenceAT，etal.Theformulationandstabiulityofmultipleemulsions.InternationalJournalofPharmaceutics，11277-308，198229MatsumotoS.，Supra，atpage55530MatsumotoS.，Supra31MatsumotoS.，Supra，atpage55632MatsumotoS.，Supra，atpage56333MatsumotoS.，Supra，atpage59334LawTK，etal.Releasefrommultiplew/o/wemulsionsstabilizedbyinterfacialcomplexation.J.Pharm.Pharmacol.3650P，198435LawTK，etal.Stabilizationofw/o/wmultipleemulsionsbyinterfacialcomplexationofmacromoleculesandnonionicsurfactants.J.ofControlledRelease3279-290，198636FlorenceAT，etal.Supra37LawTK，etal.，J.ofControlledRelease，Supra38LawTK，etal.，J.ofControlledRelease，Supra39MyersD.，Supraatpage40MatsumotoS.，Supra41FlorenceATandWhitehillD.Somefeaturesofbreakdowninwater-in-oil-in-watermultipleemulsions.J.ofColloidandInterfaceScience，79243-256，198142MatsumotoS.，Supra，atpage57343HerbertWJ.Multipleemulsionadjuvants.InternationalSymposiumonAdjuvantsofImmunity.689-92，1967.44Henry，R.L.，etal.，“BurnWoundCoveringsandtheUseofpoloxamerPreparations”，CRITICALREVIEWSINBIOCOMPATIBILITY，Vol.5，No.3，pp.207-220(1989).45HillemanMR，WoodhourA，F(xiàn)riedmanA，WeibelREandStokesJ.Theclininicalapplicationofadjuvant65.AnnalsofAllergy，30152-158，197246HillemanMR.Considerationsforsafetyandapplicationofemulsifiedoiladjuvantstoviralvaccines.InternationalSymposiumonAdjuvantsofemmunity.613-26，196747LinT，andLinS.Encapsulationandprolongedreleasebehaviorofw/o/wtypemultipleemulsions.J.oftheChineseChemicalSociety，35463-470，198848StoneHD，BrughMandBeardCW.Influenceofformulationontheefficacyofexperimentaloil-emulsionnewcastlediseasevaccines.AvianDiseases，27688-697，198349HerbertWJ.Someinvestigationsintothemodeofactionofthewater-in-mineral-oilemulsionantigenadjuvants.IntemationalSymposiumonAdjuvantsofImmunity.6213-230，196750HoltLB.Oilyadjuvants.InternationalSymposiumonAdjuvantsofImmunity.6131-136，196751HerbertWJ.Someobservationsofpracticalinterestintheuseofwater-in-mineral-oilemulsionantigenadjuvant.InternationalSymposiumonAdjuvantsofImmunity.6251-256，196752HillemanMR，WoodhourA，F(xiàn)riedmanA，WeibelREandStokesJ.Theclinicalapplicationofadjuvant65.AnnalsofAllergy，30152-158，197253WoodhourAF，MetzgarDP，StimTB，TytellAAandHillemanMR.Newmetabolizableimmunologicadjuvantforhumanuse.I.Developmentandanimalimmuneresponse.NewAdjuvantDevelopment.PSAM116516-523，196454HillemanMR.Considerationsforsafetyandapplicationofemulsifiedoiladjuvantstoviralvaccines.InternationalSymposiumonAdjuvantsofImmumity.613-26，196755FlorenceATandWhitehillD.Somefeaturesofbreakdowninwater-in-oil-in-watermultipleemulsions.J.ofColloidandInterfaceScience，79243-256，198156LawTK，WhateleyTLandFlorenceAT.Stabilizationofw/o/wmultipleemulsionsbyinterfacialcomplexationofmacromoleculesandnonionicsurfactants.J.ofControlledRelease3279-290，198657HerbertWJ.Someinvestigationsintothemodeofactionofthewater-in-mineral-oilemulsionantigenadjuvants.InternationalSymposiumonAdjuvantsofImmunity.6213-230，196758HoltLB.Oilyadjuvants.InternationalSymposiumonAdjuvantsofImmunity.6131-136，1967.59HerbertWJ.Someobservationsofpracticalinterestintheuseofwater-in-mineral-oilemulsionantigenadjuvant.InternationalSymposiumonAdjuvantsofImmunity.6251-256，196760LawTK，WhateleyTLandFlorenceAT.Stabilizationofw/o/wmultipleemulsionsbyinterfacialcomplexationofmacromoleculesandnonionicsurfactants.J.ofControlledRelease3279-290，198661FrancisDP，HadlerSC，ThompsonSEetal.AnnInternMed1982;97362-6權(quán)利要求1.一種口服疫苗，包括一種穩(wěn)定的油包水乳狀液，含有在一連續(xù)的油相內(nèi)的分散的水相，水相含有一種有效量的抗原、一種親水一親脂平衡值近似小于2的有效量的第一種表面活性劑，及含有第二種表面活性劑的連續(xù)的油相。2.按權(quán)利要求1所述的口服疫苗，還含有一種無(wú)菌藥物可接受的載體。3.按權(quán)利要求1的口服疫苗，其中第一種表面活性劑具有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量在近似3000至15000之間，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似在2%和15%之間。4.按權(quán)利要求1的口服疫苗，其中第一種表面活性劑具有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似10，000，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為4%。5.按權(quán)利要求1的口服疫苗，其中第一種表面活性劑具有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為5200，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為5%。6.按權(quán)利要求1的口服疫苗，其中油選自由植物油、動(dòng)物油和礦物油組成的組。7.按權(quán)利要求6的口服疫苗，其中植物油是花生油。8.按權(quán)利要求5的口服疫苗，其中礦物油選自drakeol6VR、十四酸異丙酯和聚氧丙烯組成的組。9.按權(quán)利要求6的口服疫苗，其中動(dòng)物油選自角鯊烯和角鯊?fù)榻M成的組。10.按權(quán)利要求1的口服疫苗，其中第二種表面活性劑選自由poloxamer331、poloxamer461、poloxamer520.5、Span80、一油酸脫水山梨(糖)醇酯、三硬脂酸脫水山梨(糖)醇酯和Arlacel186組成的組。11.一種給哺乳動(dòng)物接種疫苗的方法，包括口服有效量權(quán)利要求1的疫苗。12.一種口服疫苗，包括一種穩(wěn)定的水包油包水多重乳狀液，含有在一油相內(nèi)的分散的內(nèi)部水相，所述油相在一連續(xù)的外部水相中，內(nèi)部水相含有一種有效量的抗原和親水一親脂平衡值近似小于2的有效量的第一種表面活性劑，而油相含有第二種表面活性劑。13.按權(quán)利要求12的口服疫苗，其中外部水相含有第三種表面活性劑。14.按權(quán)利要求13的口服疫苗，其中第三種表面活性劑選自由poloxamer403，Tween80，poloxamer188或其混合物組成的組。15.按權(quán)利要求14的口服疫苗，其中第三種表面活性劑是poloxamer403。16.按權(quán)利要求12的口服疫苗，其中第一種表面活性劑有下列分子式其中疏水部分(C2H6O)的平均分子量近似在3000至15000之間，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似在2%和15%之間。17.按權(quán)利要求12的口服疫苗，其中第一表面活性劑有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為10，000，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為4%。18.按權(quán)利要求12的口服疫苗，其中第一種表面活性劑有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為5200，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為5%。19.按權(quán)利要求12的口服疫苗，其中油選自由植物油、動(dòng)物油和礦物油組成的組。20.按權(quán)利要求19的口服疫苗，其中植物油是花生油。21.按權(quán)利要求19的口服疫苗，其中礦物油選自由drakeol6VR、十四酸異丙酯和聚氧丙烯組成的組。22.按權(quán)利要求19的口服疫苗，其中動(dòng)物油選自由角鯊烯和角鯊?fù)榻M成的組。23.按權(quán)利要求12的口服疫苗，其中第二種表面活性劑選自由poloxamer331、poloxamer461、poloxamer520.5、Span80、一油酸脫水山梨(糖)醇酯、三硬脂酸脫水山梨(糖)醇酯和Ar-lacel186組成的組。24.按權(quán)利要求12的口服疫苗，還含有一種無(wú)菌藥物可接受的載體。25.一種給哺乳動(dòng)物接種疫苗的方法，包括口服一種有效量的權(quán)利要求12的疫苗。全文摘要公開(kāi)了一種口服疫苗及其口服接種方法。該疫苗包括一種穩(wěn)定的油包水乳狀液或多重乳狀液，含有在一連續(xù)的油相內(nèi)的分散的水相，水相含有一種有效量的抗原、一種親水-親脂平衡值近似小于2的有效量的第一種表面活性劑，及含有第二種表面活性劑的連續(xù)的油相。文檔編號(hào)A61Q19/00GK1096224SQ9311723公開(kāi)日1994年12月14日申請(qǐng)日期1993年8月20日優(yōu)先權(quán)日1991年6月27日發(fā)明者R·L·亨特,C·E·萊尼特申請(qǐng)人:埃默里大學(xué)