一種含真菌α-淀粉酶的洗滌復(fù)合酶及其制備方法

一種含真菌α-淀粉酶的洗滌復(fù)合酶及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種含真菌α-淀粉酶的洗滌復(fù)合酶及其制備方法，屬于洗滌酶制備【技術(shù)領(lǐng)域】。以木屑作為載體，以耐高溫真菌α-淀粉酶為主要原料，科學(xué)復(fù)配植物提取物、非離子表面活性劑、堿性蛋白酶、堿性脂肪酶、堿性纖維素酶、激活劑、保護(hù)劑和抗氧化劑等，制備出一種儲(chǔ)存穩(wěn)定性高、酶活力和效力高、酶系全面、去污漬效果優(yōu)的具有防塵、抑菌、抗串色和增香作用的洗滌復(fù)合酶，以其生產(chǎn)的加酶洗衣粉與市售洗滌專(zhuān)用復(fù)合酶相比，去污力強(qiáng)，對(duì)炭黑類(lèi)、蛋白類(lèi)、皮脂類(lèi)污垢的去污力分別提高88％、107％和129％；沉積灰分比值降低36％；衣物表面殘留細(xì)菌數(shù)降低71％；對(duì)皮膚和衣物無(wú)損傷，抗串色能力強(qiáng)，香味持久，使用過(guò)程無(wú)粉塵。CCTCC NO：M 201360220131124
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種含真菌α-淀粉酶的洗滌復(fù)合酶及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及洗滌復(fù)合酶，特別涉及一種含真菌α -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶及其制備 方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 洗滌劑行業(yè)涉及面廣、量大，我國(guó)年消耗量約為300萬(wàn)噸，而世界年消耗量約 為2500萬(wàn)噸。為了提高去污效果，洗滌劑中的表面活性劑和三聚磷酸鈉的含量競(jìng)高達(dá) 30% -40%。這些高含磷物經(jīng)洗滌后流入江湖，引起湖河水的過(guò)肥化，導(dǎo)致微生物、藻類(lèi)等有 害生物的大量繁殖，造成水質(zhì)污染。這嚴(yán)重的現(xiàn)象越來(lái)越引起人們的關(guān)注和重視。因此，在 洗滌劑中添加酶制劑可以降低表面活性劑和三聚磷酸鈉的用量，使洗滌劑朝低磷或無(wú)磷的 方向發(fā)展，減少對(duì)環(huán)境的污染。洗滌劑用酶制劑的研制開(kāi)發(fā)也因此成為酶制劑工業(yè)的一個(gè) 主攻方向。
[0003] 酶可有效地分解蛋白質(zhì)、淀粉、脂肪類(lèi)污垢。因此，在洗滌劑中加入酶可提高去污 力，降低表面活性劑及三聚磷酸鹽的用量，有利于洗滌劑朝低磷、無(wú)磷化的方向發(fā)展，以減 少環(huán)境污染。目前國(guó)外已商品化的洗滌劑用酶有：堿性蛋白酶、淀粉酶、堿性纖維素酶、脂肪 酶以及它們的復(fù)合物。對(duì)于酶來(lái)說(shuō)，除了研宄應(yīng)用新的酶以外，如何抑菌、抗串色，如何避免 粉塵對(duì)人的傷害，適應(yīng)低溫、洗滌穩(wěn)定性好等仍然是面臨的挑戰(zhàn)?，F(xiàn)在洗滌劑用酶已超過(guò)世 界酶產(chǎn)量的40%，開(kāi)發(fā)加酶洗滌劑是當(dāng)前國(guó)際洗滌劑工業(yè)發(fā)展的一大潮流。
[0004] 目前，堿性酶作為新型生物添加劑應(yīng)用于洗滌劑行業(yè)的現(xiàn)象已越來(lái)越普遍，在西 歐、日本和美國(guó)等一些發(fā)達(dá)國(guó)家中，加酶洗滌劑占洗滌劑市場(chǎng)的80% -95%，在國(guó)內(nèi)加酶洗 滌劑所占比例為20%左右，市場(chǎng)上的許多高檔洗衣粉產(chǎn)品都添加了多種酶。從發(fā)展趨勢(shì)上 看，國(guó)內(nèi)加酶洗滌劑要逐漸在市場(chǎng)上占主導(dǎo)地位。洗滌劑用酶已占世界酶制劑產(chǎn)量的1/3。 這些酶作為活性生物催化劑，通過(guò)水解作用可專(zhuān)一有效地清除紡織物上的頑垢污跡，使衣 物洗滌后獲得清爽潔凈效果；而且酶本身無(wú)毒，并能完全被生物降解，對(duì)環(huán)境無(wú)污染。
[0005] 中國(guó)專(zhuān)利CN 101717699 B公開(kāi)了一種含復(fù)合酶的去血漬洗滌粉，其組分包括： 十二烷基硫酸鈉 、α -烯基磺酸鈉、三聚磷酸鈉、羧甲基纖維素鈉、硫酸鈉、硅酸鈉、4Α沸石、 堿性蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶。
[0006] 中國(guó)專(zhuān)利CN 103131557 B公開(kāi)了一種液體洗滌劑用酶制劑復(fù)合穩(wěn)定劑，涉及酶穩(wěn) 定劑，解決現(xiàn)有液體洗滌劑中酶穩(wěn)定性差，且傳統(tǒng)酶穩(wěn)定劑主要使用硼砂，對(duì)人體存在潛在 危害的問(wèn)題。一種液體洗滌劑用酶制劑復(fù)合穩(wěn)定劑，由以下重量份的各組分組成：環(huán)糊精 0. 05?20、氯化鈣0. 05?20、甘油和丙二醇混合物1?10、非離子表面活性劑脂肪醇聚氧 乙烯醚1?60、陰離子表面活性劑烷基苯磺酸鈉1?60 ;其中所述的甘油與丙二醇混合物 中甘油：丙二醇的重量比為2:6?10,本發(fā)明可簡(jiǎn)化液體洗滌劑的生產(chǎn)及配方過(guò)程，顯著 提高和延長(zhǎng)液體洗滌劑中酶制劑的活性，原料安全無(wú)毒，對(duì)人體無(wú)害。
[0007] 中國(guó)專(zhuān)利CN 103773623 A公開(kāi)了一種復(fù)合酶洗滌劑，所述洗滌劑由十六烷基三 甲基溴化銨、月桂醇聚氧乙烯（20)醚、椰油酰胺丙基甜菜堿、二丙二醇單甲醚、三丁基銨對(duì) 甲苯磺酸鹽、二亞乙基三胺五乙酸五鈉、雙鼠李糖脂、甲基葡萄糖苷聚氧乙烯（20)醚、棉子 糖、4-甲基辛酸苯醋、α -淀粉酶、堿性蛋白酶、堿性脂肪酶、薄荷提取物、丙二醇、三乙醇胺 和水構(gòu)成。該種新型復(fù)合酶洗滌劑表現(xiàn)出優(yōu)良的去除蛋白、油脂等污漬的性能，可適用于織 物、面料和餐具的清洗，還可用于醫(yī)療器械的清潔，具有廣泛的工業(yè)化應(yīng)用前景。
[0008] 上述公開(kāi)的專(zhuān)利所涉及的酶制劑種類(lèi)單一，酶活力低、儲(chǔ)存穩(wěn)定性差，在實(shí)際應(yīng)用 時(shí)因受環(huán)境濕度、溫度、光照、酸堿性等環(huán)境影響很難發(fā)揮其真正的效力，嚴(yán)重影響洗滌去 污效果，同時(shí)也沒(méi)有考慮洗滌時(shí)防塵、抑菌和抗串色問(wèn)題，存在一定的缺陷。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有洗滌酶種類(lèi)單一、酶活力低、儲(chǔ)存穩(wěn)定性 差、功能單一等缺陷，以具有防塵、抗串色和增加洗滌效果的木肩作為載體，以耐高溫真菌 淀粉酶為主要原料，科學(xué)復(fù)配具有抑菌和增香作用的植物提取物、具有擴(kuò)散和滲透作 用的非離子表面活性劑、具有降解各類(lèi)污漬的堿性蛋白酶、堿性脂肪酶、堿性纖維素酶、具 有促進(jìn)酶活力充分發(fā)揮的激活劑、具有防止復(fù)合酶因外界條件變化而失活的保護(hù)劑和抗氧 化劑等，制備一種儲(chǔ)存穩(wěn)定性高、酶活力和效力高、酶系全面、去污漬效果優(yōu)的具有防塵、抑 菌、抗串色和增香作用的洗滌復(fù)合酶。
[0010] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0011] 一種含真菌α -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，由以下重量組分的原料制備：
[0012] 木肩45-55份，真菌α -淀粉酶25-35份，堿性蛋白酶20-30份，堿性脂肪酶20-30 份，植物提取物15-25份，堿性纖維素酶3-10份，非離子表面活性劑2-8份，激活劑2-6份， 保護(hù)劑1-3份，抗氧化劑0. 3-0. 5份；
[0013] 所述木肩質(zhì)地蓬松、柔軟，硬度適中，具有豐富的纖維網(wǎng)狀和多孔結(jié)構(gòu)，比表面積 大，將其作為復(fù)合酶的復(fù)配載體具有如下作用：1)可有效將復(fù)合酶中酶制劑及其它微粉成 分暫時(shí)包裹和吸附，防止在使用過(guò)程產(chǎn)生粉塵，減少對(duì)人的傷害和環(huán)境的污染，提高原料利 用率；2)適中的硬度在洗滌過(guò)程中既可增加摩擦強(qiáng)度，快速清洗污物，尤其對(duì)油污效果更 佳，又不會(huì)傷及皮膚、織物及清洗物品；3)因?yàn)榫哂辛己玫睦w維結(jié)構(gòu)和難溶性，顆粒完整性 強(qiáng)，不會(huì)殘留至清洗物品表面，容易沖洗、去除；4)可有效吸附污水中的污物及色素，防止 織物串色；5)與纖維素酶科學(xué)復(fù)配，減緩對(duì)織物的酶解傷害；6)原料來(lái)源廣泛，成本低，實(shí) 現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展；
[0014] 優(yōu)選地，所述木肩的制備方法包括如下步驟：將無(wú)發(fā)霉、無(wú)病蟲(chóng)鋸木末或廢木肩除 去雜物，置盛有1-2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、30KHz清洗15-25min，沖洗、 瀝干，然后置微波干燥機(jī)于3000W、120°C進(jìn)行微波干燥5-10min，使之水分達(dá)到8-10%，最 后粉碎至粒度0. 5-3_，密封包裝即得木肩；
[0015] 更優(yōu)選地，所述微波干燥為間歇式干燥，即微波輻照8s，間隔20s。
[0016] 所述真菌α -淀粉酶是由里氏木霉（Trichoderma reesei)901_18經(jīng)培養(yǎng)基和發(fā) 酵工藝優(yōu)化液體深層發(fā)酵而制備，該菌株已于2013年11月24日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保 藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武漢大學(xué)，保藏號(hào)為CCTCC Ν0:Μ 2013602,分類(lèi)命名為： 里氏木霉 901_18Trichoderma reesei 901-18;
[0017] 所述里氏木霉901-18是由一株分離自湖南省津市市河堤食用菌培植基地土壤樣 本的里氏木霉菌株經(jīng)紫外線(xiàn)-氯化鋰-硫酸二乙酯復(fù)合誘變篩選獲得，所述菌株特點(diǎn)如下： 該菌株在PDA固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，形成的菌落特征為菌落呈棉絮狀，菌落呈淡綠色，菌落 扁平，高0. 2-0. 8mm，菌落邊緣白色，整齊；生長(zhǎng)速度快，48h菌落直徑達(dá)I. 5-8. 5mm，72h達(dá) 30-55mm ;菌絲白色，有隔膜，菌絲壁光滑，直徑在2-5 μ m。分生孢子梗從菌絲的短側(cè)枝發(fā) 生，側(cè)枝上對(duì)生。該菌株產(chǎn)α -淀粉酶的最適pH 3. 0-6. 5 ;最適溫度為27_30°C ;
[0018] 優(yōu)選地，所述真菌α-淀粉酶的制備方法包括以下步驟：保存完好的里氏木 霉CCTCCNO:M 2013602的菌種經(jīng)斜面菌種活化、一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)液體種子擴(kuò)大培養(yǎng)至 種子罐，將種子罐液體種子以6 %接種量接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度27-30°C，攪拌速 度120-180r/m，通風(fēng)量l-3vvm培養(yǎng)時(shí)間10-15h ;然后以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至 10-15°C，攪拌速度250-300r/m，通風(fēng)量l-2vvm，恒溫培養(yǎng)15-20h ;繼續(xù)以1-2°C /h降溫 速率緩慢降溫至2-5°C，此時(shí)，將種子罐液體種子以4%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培 養(yǎng)20-30h ;最后以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫至10-15°C，攪拌速度200-400r/m，通風(fēng) 量l-2vvm，恒溫培養(yǎng)15-20h ;繼續(xù)以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫至27-30°C，恒溫培養(yǎng) 15-20h ;發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、濃縮、調(diào)配、精濾、干燥得固體真菌α -淀粉酶；
[0019] 所述真菌α -淀粉酶制備過(guò)程中發(fā)酵液酶活力高達(dá)12000-15000u/ml ;酶溫度適 應(yīng)范圍較寬，為50-75°C之間，最適作用溫度在65°C，70°C下保存3h仍具有80%以上酶活， 具有較好的熱穩(wěn)定性和保存活性；該酶最適反應(yīng)pH值為5. 5,在pH值4. 5-7. 0之間酶活保 持在70 %以上，比現(xiàn)有的真菌α-淀粉酶酶活力高，酶作用最適pH值范圍寬泛，耐溫度高；
[0020] 所述斜面培養(yǎng)基組成為：葡萄糖20g，瓊脂20g，中草藥提取物5-10g，酵母膏4g， 磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0· 6g，氯化鉀0· 8g，蒸餾水1000mL，pH值5. 8,121°C滅菌20min。
[0021] 所述一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)基組成為：麩皮60_80g，玉米粉50_60g，豆餅粉 35-40g，海藻糖10-15g，魚(yú)粉6-10g，氯化銨10-12g，氯化鈣5-10g，中草藥提取物5-10g，硫 酸鎂2-4g，磷酸氫二鉀l-3g，純凈水1000mL，pH值5-7,121°C滅菌20min ;
[0022] 所述種子罐培養(yǎng)基組成為：麩皮60-80g，玉米粉50-60g，豆餅粉35-40g，海藻糖 l〇-15g，中草藥提取物10-15g，魚(yú)粉6-10g，氯化銨10-12g，氯化鈣5-10g，硫酸鎂2-4g，磷酸 氫二鉀 l-3g，純凈水 lOOOmL，pH 值 5-7,121°C 滅菌 20min ;
[0023] 所述種子罐發(fā)酵液菌體濃度為7. Ox 108-8. Ox IO8個(gè)/ml ;
[0024] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成為：麩皮60-80g，玉米粉50-60g，豆餅粉35-40g，中草藥提 取物20-30g，海藻糖10-30g，魚(yú)粉6-10g，氯化銨10-12g，氯化鈣5-10g，硫酸鎂2-4g，磷酸 氫二鉀 l-3g，硝酸鉀 l-2g，硫酸鋅 0· 1-0. 2g，純凈水 1000mL，pH 值 5-7,121°C 滅菌 20min ;
[0025] 所述中草藥提取物的制備方法如下：
[0026] 按重量份數(shù)計(jì)，稱(chēng)取黃芪50-60份，當(dāng)歸40-50份，黨參35-45份，甘草35-45份，魚(yú) 腥草25-35份，神曲20-30份，柴胡10-15份，黃芩10-15份；將上述中草藥粉碎至粒徑為2 毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C -90°C保持2-4h， 然后降溫至45-60°C，加入混合物料總重量5-10%的混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH 值為5. 5-6. 8,酶解2-4h，最后添加混合物料0. 5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙 醇混合的質(zhì)量比為1:1. 5,控制溫度至60°C -78°C保持3-4h，過(guò)濾，得第一濾液；添加濾渣 1-3倍重量的水，控制溫度85°C -95°C保持l_3h，然后降溫至25-35°C，過(guò)濾，得第二濾液； 將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比2-4:1-3合并，濾液真空濃縮后冷凍干燥、粉碎即得中 草藥提取物；
[0027] 所述混合酶為葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果膠酶按質(zhì)量比4:4:2:1均勻混 合。
[0028] 所述植物提取物是以對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌等致病菌和青霉、黑 曲霉、交鏈孢霉、高大毛霉等真菌具有顯著殺滅或抑制作用并且具有抗輻射、抗氧化、消除 自由基、驅(qū)蟲(chóng)、抗病毒等效果的天然香味植物為原料，采用微波輔助超聲提取和高壓脈沖電 場(chǎng)提取、常溫密閉自然發(fā)酵、超濾濃縮、冷凍干燥和低溫粉碎等低溫提取技術(shù)，最大限度地 獲取了天然植物的有效成分和香味，顯著提高了原料利用率和活性成分產(chǎn)率；
[0029] 優(yōu)選地，所述植物提取物的制備方法包括如下步驟：將丁香、苦丁茶、薰衣草、金 銀花、苦參按質(zhì)量比10-15:7-11:6-9:5-8:1-3均勻混合，置盛有0. 1-0. 3 %碳酸氫鈉溶 液的超聲波清洗機(jī)中于200W、30KHz清洗10-15min，瀝干，加入混合原料質(zhì)量0. 2-0. 8倍 的水潤(rùn)濕4-7h，于-18 --22°C冷凍l_2h后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度3-5cm，粉碎粒 度0. 5-3mm，接著加入粉碎原料質(zhì)量0. 5-2倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3. 0-3. 5,在功率 200-300W、頻率2000Hz條件下進(jìn)行微波提取，其中，每次微波輻照總時(shí)間100-120S，進(jìn)行 間隔式輻照：輻照l(shuí)〇s，間隔10s，控制溫度20-35°C，如此輻照10次，同時(shí)在功率200-300W， 頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提?。槐豯-3h，然后，在功率200-400W、頻率 2000Hz條件下進(jìn)行微波提取，其中，每次微波輻照總時(shí)間120-135S，進(jìn)行間隔式輻照：輻 照15s，間隔10s，控制溫度40-50°C，如此輻照10次，同時(shí)在功率300-500W，頻率40-50KHZ 條件下進(jìn)行超聲波輔助提取，最后自然降溫至室溫，于電場(chǎng)強(qiáng)度15-25kV/cm，脈沖時(shí)間 300-500 μ s，脈沖頻率200-300HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)（PEF)提取15-20min ;充分?jǐn)?拌提取液，密封，自然發(fā)酵3-5d，發(fā)酵液過(guò)濾得第一濾液，加濾渣2倍的水漂洗、過(guò)濾得第二 濾液，將第一濾液和第二濾液按質(zhì)量比1:2-5均勻混合，混合液超濾濃縮、冷凍干燥、30°C 低溫粉碎至粒度0. 1-0. 3mm即得植物提取物。
[0030] 所述非離子表面活性劑可在洗滌過(guò)程中幫助滲透、脫脂和除垢，促進(jìn)和延長(zhǎng)真菌 淀粉酶等酶制劑與織物不同部位作用污物（淀粉粒、脂肪粒、蛋白等細(xì)胞）的接觸和反 應(yīng)時(shí)間，充分、有效降解污物，提高去污效果；
[0031] 優(yōu)選地，所述非離子表面活性劑為環(huán)保型非離子表面活性劑，容易生物降解，無(wú)殘 留，對(duì)人體、生物及環(huán)境無(wú)任何毒副作用；
[0032] 更優(yōu)選地，所述非離子表面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷（APG) 30-40份，烷基 葡萄糖酰胺（AGA) 20-30份，N-十二烷基乙二胺三乙酸鈉（ED3A) 8-12份，異構(gòu)醇醚羧酸鹽 AEC-11078-12份，月桂酰胺醚羧酸鹽（LAEC) 5-8份，平平加 c-1250-3份，JFC 0-3份；上述 原料均為市購(gòu)固體粉狀商品。
[0033] 所述激活劑是由如下質(zhì)量組份的無(wú)機(jī)鹽均勻混合而成：硫酸鈉15-25份，氯化鈣 10-15份，氯化鋅5-7份，氯化鎂3-5份。
[0034] 所述保護(hù)劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖30-40份，甘油15-25份， (NH 4)2S046-10 份，丙二醇 2-4 份。
[0035] 所述抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物中的任一一種或幾 種組合；
[0036] 優(yōu)選地，所述抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比 10-15:4-9:2-6 均勻混合；
[0037] 所述葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物均為市購(gòu)商品。
[0038] 上述洗滌復(fù)合酶的制備方法，包括如下步驟：
[0039] 首先將所述保護(hù)劑、激活劑分別超微粉碎，均勻混合，隨后立即依次加入堿性蛋 白酶、木肩、非離子表面活性劑均勻混合10-15min，然后依次加入真菌α-淀粉酶、堿性脂 肪酶、堿性纖維素酶均勻混合15-20min，最后依次加入植物提取物和抗氧化劑，均勻混合 3-5min后密封包裝即得洗滌復(fù)合酶。
[0040] 本發(fā)明另一目的是所述洗滌復(fù)合酶在洗滌劑生產(chǎn)中的應(yīng)用。
[0041] 使用方法：
[0042] 1.復(fù)合酶作用條件：適應(yīng)pH值4-12,最適pH值8.0 ;適應(yīng)溫度20-60°C，最適反應(yīng) 溫度40°C ;
[0043] 2.使用方法：固體粉狀洗滌劑中的添加量為洗滌劑質(zhì)量的0. 5-2. 5% ;液體洗滌 劑每升添加復(fù)合酶10_30g(洗滌劑水分含量應(yīng)小于40% )。
[0044] 有益效果：
[0045] 本發(fā)明含真菌α -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，以具有防塵、抗串色和增加洗滌效果的 木肩作為載體，以耐高溫真菌α -淀粉酶為主要原料，科學(xué)復(fù)配具有抑菌和增香作用的植 物提取物、具有擴(kuò)散和滲透作用的非離子表面活性劑、具有降解各類(lèi)污漬的堿性蛋白酶、堿 性脂肪酶、堿性纖維素酶、具有促進(jìn)酶活力充分發(fā)揮的激活劑、具有防止復(fù)合酶因外界條件 變化而失活的保護(hù)劑和抗氧化劑等，制備一種儲(chǔ)存穩(wěn)定性高、酶活力和效力高、酶系全面、 去污漬效果優(yōu)的具有防塵、抑菌、抗串色和增香作用的洗滌復(fù)合酶，避免和減少了化學(xué)用品 的使用，保護(hù)了環(huán)境。經(jīng)試驗(yàn)：采用本發(fā)明洗滌復(fù)合酶生產(chǎn)的加酶洗衣粉與市售洗滌專(zhuān)用復(fù) 合酶生產(chǎn)的加酶洗衣粉相比，去污力強(qiáng)，對(duì)炭黑類(lèi)、蛋白類(lèi)、皮脂類(lèi)污垢的去污力分別提高 88%、107%和129%;雜質(zhì)少，沉積灰分比值降低36%;抑菌性能強(qiáng)，衣物表面殘留細(xì)菌數(shù)降 低71% ;對(duì)皮膚和衣物無(wú)損傷，抗串色能力強(qiáng)，香味持久，使用過(guò)程無(wú)粉塵。
[0046] 具體表現(xiàn)在：
[0047] 1.本發(fā)明真菌α -淀粉酶和霉菌培養(yǎng)物是由里氏木霉（Trichoderma reesei)901-18經(jīng)培養(yǎng)基和發(fā)酵工藝優(yōu)化液體深層發(fā)酵而制備，保藏編號(hào)為CCTCC Ν0:Μ 2013602,真菌α -淀粉酶發(fā)酵液酶活力高達(dá)12000-15000u/ml ;酶溫度適應(yīng)范圍較寬，為 50-75°C之間，最適作用溫度在65°C，70°C下保存3h仍具有80%以上酶活，具有較好的熱穩(wěn) 定性和保存活性；該酶最適反應(yīng)pH值為5. 5,在pH值4. 5-7. 0之間酶活保持在70%以上， 比現(xiàn)有的真菌α -淀粉酶酶活力高，酶作用最適pH值范圍寬泛，耐溫度高，更加適合洗滌工 -H- 〇
[0048] 2.本發(fā)明制備的木肩經(jīng)超聲浸泡、清洗和微波干燥、殺菌，質(zhì)地更加蓬松、柔軟，硬 度適中，纖維網(wǎng)狀和多孔結(jié)構(gòu)更加豐富，比表面積大，將其作為復(fù)合酶的復(fù)配載體具有如下 作用：1)可有效將復(fù)合酶中酶制劑及其它微粉成分暫時(shí)包裹和吸附，防止在使用過(guò)程產(chǎn)生 粉塵，減少對(duì)人的傷害和環(huán)境的污染，提高原料利用率；2)適中的硬度在洗滌過(guò)程中既可 增加摩擦強(qiáng)度，快速清洗污物，尤其對(duì)油污效果更佳，又不會(huì)傷及皮膚、織物及清洗物品； 3)因?yàn)榫哂辛己玫睦w維結(jié)構(gòu)和難溶性，顆粒完整性強(qiáng)，不會(huì)殘留至清洗物品表面，容易沖 洗、去除；4)可有效吸附污水中的污物及色素，防止織物串色；5)與纖維素酶科學(xué)復(fù)配，減 緩對(duì)織物酶解傷害；6)原料來(lái)源廣泛，成本低，實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展；
[0049] 3.本發(fā)明植物提取物是以對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌等致病菌和青 霉、黑曲霉、交鏈孢霉、高大毛霉等真菌具有顯著殺滅或抑制作用并且具有抗輻射、抗氧化、 消除自由基、驅(qū)蟲(chóng)、抗病毒等效果的天然植物丁香、苦丁茶、薰衣草、金銀花、苦參為原料，采 用微波輔助超聲提取和高壓脈沖電場(chǎng)提取、常溫密閉自然發(fā)酵、超濾濃縮、冷凍干燥和低溫 粉碎等低溫提取技術(shù)，最大限度地獲取了天然植物的有效成分和香味，顯著提高了原料利 用率和活性成分產(chǎn)率；
[0050] 4.本發(fā)明非離子表面活性劑主要科學(xué)復(fù)配環(huán)保型非離子表面活性劑，容易生物降 解，無(wú)殘留，對(duì)人體、生物及環(huán)境無(wú)任何毒副作用；可在洗滌過(guò)程中幫助滲透、脫脂和除垢， 促進(jìn)和延長(zhǎng)真菌α-淀粉酶等酶制劑與織物不同部位作用污物（淀粉粒、脂肪粒、蛋白等細(xì) 胞）的接觸和反應(yīng)時(shí)間，充分、有效降解污物，提高去污效力。
[0051] 5.本發(fā)明洗滌復(fù)合酶抗氧化劑的科學(xué)復(fù)配，可有效防止復(fù)合酶酶分子結(jié)構(gòu)氧化而 造成酶活性損失，提高酶活力穩(wěn)定性。在〇°C和40°C條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，復(fù)合酶中單酶酶活 損失分別為〇. 40%和0. 53%，比對(duì)比例分別降低20. 0%和66. 9%，有效防止在包裝、儲(chǔ)存、 運(yùn)輸、使用等環(huán)節(jié)因環(huán)境改變、操作方法不當(dāng)而造成酶的失活，尤其可防止高溫造成的酶失 活。
[0052] 6.本發(fā)明洗滌復(fù)合酶中保護(hù)劑科學(xué)復(fù)配，有效減緩了復(fù)合酶制劑的回潮和穩(wěn)定、 維持酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)；增強(qiáng)了復(fù)合酶的耐凍、耐熱性能，保持相同的酶活力，其耐熱溫度 可提高20_30°C，耐冷凍溫度可降低10-15攝氏度，有效防止了復(fù)合酶在運(yùn)輸、保存和使用 過(guò)程中酶活力的損失，延長(zhǎng)了復(fù)合酶的保質(zhì)期，達(dá)到同樣的酶活力，比同類(lèi)產(chǎn)品保質(zhì)期可延 長(zhǎng)2-3年。
[0053] 7.本發(fā)明洗滌復(fù)合酶添加無(wú)機(jī)鹽作為激活劑，尤其科學(xué)復(fù)配了 α-淀粉酶酶活力 充分發(fā)揮所必須的鈣離子，創(chuàng)造了酶催化作用的最佳條件，充分發(fā)揮了組份中各酶制劑的 活力，提高了復(fù)合酶作用效力。

【具體實(shí)施方式】
[0054] 下面通過(guò)具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段 均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說(shuō)明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書(shū)所限定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本 發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也 屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0055] 實(shí)施例1原料制備
[0056] 1.真菌α -淀粉酶的制備：
[0057] 所述真菌α -淀粉酶的制備方法包括如下步驟：
[0058] (1)菌種活化
[0059] 將保存完好的里氏木霉CCTCC ΝΟ:Μ 2013602的斜面菌種接種于斜面培養(yǎng)基，30°C 培養(yǎng)40h進(jìn)行菌種活化，如此活化3次；
[0060] (2)液體種子擴(kuò)大培養(yǎng)
[0061] ①一級(jí)種子培養(yǎng)：將步驟（1)活化后斜面菌種以無(wú)菌水洗下孢子，接入500毫升搖 瓶中，液體種子培養(yǎng)基裝量100毫升，30°C、IOOrpm搖床培養(yǎng)40h ;
[0062] ②二級(jí)種子培養(yǎng)：將一級(jí)種子按照10%的接種量接入500毫升二級(jí)種子搖瓶中， 培養(yǎng)條件與一級(jí)種子相同；
[0063] ③三級(jí)種子培養(yǎng)：將二級(jí)種子以8%接種量接入5000暈升三級(jí)種子搖瓶中，液體 培養(yǎng)基裝量1000毫升，30°C、IOOrpm搖床培養(yǎng)40h ;
[0064] ④種子罐培養(yǎng)：將三級(jí)種子以8 %接種量接入總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，種子 罐培養(yǎng)基裝量100L，控制pH值為6,培養(yǎng)溫度29°C，攪拌速度300rpm，通風(fēng)量（V/V) 1: 1，培 養(yǎng)時(shí)間40h ;
[0065] 所述種子罐發(fā)酵液菌體濃度為8. Ox IO8個(gè)/ml ;
[0066] (3)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0067] 將步驟（2)中種子罐液體種子以6%接種量接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度28°C，攪 拌速度150r/m，通風(fēng)量2vvm，培養(yǎng)時(shí)間12h ;然后以2°C /h降溫速率緩慢降溫至12°C，攪拌 速度280r/m，通風(fēng)量I. 5vvm，恒溫培養(yǎng)18h ;繼續(xù)以2°C /h降溫速率緩慢降溫至4°C，此時(shí)， 將種子罐液體種子以4%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)25h ;最后以2°C /h升溫速率緩 慢升溫至12°C，攪拌速度300r/m，通風(fēng)量I. 5vvm，恒溫培養(yǎng)18h ;繼續(xù)以2°C /h升溫速率緩 慢升溫至28°C，恒溫培養(yǎng)18h;
[0068] (4)發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、濃縮、調(diào)配、精濾、干燥得固體真菌α -淀粉酶。
[0069] 經(jīng)上述方法制備的真菌α -淀粉酶在室溫下保存12個(gè)月后酶活損失為1. 6%，發(fā) 酵液α -淀粉酶酶活力可達(dá)15000U/mL。
[0070] 所述斜面培養(yǎng)基組成為：葡萄糖20g，瓊脂20g，中草藥提取物7g，酵母膏4g，磷酸 氫二鉀2g，氯化鎂0· 6g，氯化鉀0· 8g，蒸餾水1000mL，pH值5. 8,121°C滅菌20min。
[0071] 所述一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)基組成為：麩皮70g，玉米粉55g，豆餅粉38g，海藻 糖12g，魚(yú)粉8g，氯化銨I lg，氯化鈣8g，中草藥提取物8g，硫酸鎂3g，磷酸氫二鉀2g，純凈水 lOOOmL，pH 值 6,121°C滅菌 20min ;
[0072] 所述種子罐培養(yǎng)基組成為：麩皮70g，玉米粉55g，豆餅粉38g，海藻糖12g，中草藥 提取物12g，魚(yú)粉8g，氯化銨llg，氯化鈣8g，硫酸鎂3g，磷酸氫二鉀2g，純凈水1000mL，pH 值 6,121°C滅菌 20min ;
[0073] 所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成為：麩皮70g，玉米粉55g，豆餅粉38g，中草藥提取物25g， 海藻糖20g，魚(yú)粉8g，氯化銨I lg，氯化鈣8g，硫酸鎂3g，磷酸氫二鉀2g，硝酸鉀2g，硫酸鋅 0· 2g,純凈水 lOOOmL，pH 值 6,121°C滅菌 20min ;
[0074] 所述中草藥提取物的制備方法如下：按重量份數(shù)計(jì)，稱(chēng)取黃芪55份，當(dāng)歸45份，黨 參40份，甘草40份，魚(yú)腥草30份，神曲25份，柴胡12份，黃芩12份；將上述中草藥粉碎至 粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然 后降溫至52°C，加入混合物料總重量8%的混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6. 2， 酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為 1:1. 5,控制溫度至70°C保持4h，過(guò)濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度90°C 保持2h，然后降溫至30°C，過(guò)濾，得第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比2. 5:1. 5 合并，濾液真空濃縮后冷凍干燥、粉碎即得中草藥提取物；
[0075] 所述混合酶為葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果膠酶按質(zhì)量比4:4:2:1均勻混 合。
[0076] 2.木肩的制備
[0077] 所述木肩的制備方法包括如下步驟：將無(wú)發(fā)霉、無(wú)病蟲(chóng)廢木肩除去雜物，置盛有 1. 5%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、30KHz清洗20min，沖洗、瀝干，然后置微波 干燥機(jī)于3000W、120°C進(jìn)行間歇式微波干燥8min，即微波輻照8s，間隔20s，使之水分達(dá)到 9%，最后粉碎至粒度1. 2_，密封包裝即得木肩；
[0078] 3.植物提取物的制備
[0079] 所述植物提取物的制備方法包括如下步驟：將丁香、苦丁茶、薰衣草、金銀花、苦 參按質(zhì)量比12:9:8:6:2均勻混合，置盛有0. 2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、 30KHz清洗12min，瀝干，加入混合原料質(zhì)量0. 5倍的水潤(rùn)濕6h，于-20°C冷凍I. 5h后立即 進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度4cm，粉碎粒度I. 5mm，接著加入粉碎原料質(zhì)量1. 2倍的水，用乳酸 調(diào)節(jié)pH值為3. 2,在功率250W、頻率2000Hz條件下進(jìn)行微波提取，其中，每次微波輻照總時(shí) 間110s，進(jìn)行間隔式輻照：輻照10s，間隔10s，控制溫度30°C，如此輻照10次，同時(shí)在功率 250W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提?。槐?h，然后，在功率300W、頻率2000Hz條 件下進(jìn)行微波提取，其中，每次微波輻照總時(shí)間125s，進(jìn)行間隔式輻照：輻照15s，間隔10s， 控制溫度45°C，如此輻照10次，同時(shí)在功率400W，頻率45KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提 取，最后自然降溫至室溫，于電場(chǎng)強(qiáng)度20kV/cm，脈沖時(shí)間400 μ s，脈沖頻率250Hz條件下進(jìn) 行高壓脈沖電場(chǎng)（PEF)提取ISmin ;充分?jǐn)嚢杼崛∫海芊猓匀话l(fā)酵4d，發(fā)酵液過(guò)濾得第一 濾液，加濾渣2倍的水漂洗、過(guò)濾得第二濾液，將第一濾液和第二濾液按質(zhì)量比1:4均勻混 合，混合液超濾濃縮、冷凍干燥、30°C低溫粉碎至粒度0. 2_即得植物提取物。
[0080] 實(shí)施例2
[0081] -種含真菌α -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，由以下重量組分的原料制備：
[0082] 木肩50份，真菌α -淀粉酶30份，堿性蛋白酶25份，堿性脂肪酶25份，植物提取 物20份，堿性纖維素酶6份，非離子表面活性劑5份，激活劑4份，保護(hù)劑2份，抗氧化劑 0· 4 份；
[0083] 所述木肩、真菌α -淀粉酶、植物提取物均為實(shí)施例1制備；
[0084] 所述非離子表面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷（APG)35份，烷基葡萄糖酰胺 (AGA) 25份，N-十二烷基乙二胺三乙酸鈉（ED3A) 10份，異構(gòu)醇醚羧酸鹽AEC-110710份，月 桂酰胺醚羧酸鹽（LAEC) 7份，平平加 c-1251份，JFC 1份；
[0085] 所述激活劑是由如下質(zhì)量組份的無(wú)機(jī)鹽均勻混合而成：硫酸鈉20份，氯化鈣12 份，氯化鋅6份，氯化鎂4份；
[0086] 所述保護(hù)劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖35份，甘油20份，（NH4) 2S048份， 丙二醇3份；
[0087] 所述抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比12:6:4 均勻混合；
[0088] 所述洗滌復(fù)合酶的制備方法，包括如下步驟：首先將所述保護(hù)劑、激活劑分別超微 粉碎，均勻混合，隨后立即依次加入堿性蛋白酶、木肩、非離子表面活性劑均勻混合12min， 然后依次加入真菌α -淀粉酶、堿性脂肪酶、堿性纖維素酶均勻混合18min，最后依次加入 植物提取物和抗氧化劑，均勻混合4min后密封包裝即得洗滌復(fù)合酶。
[0089] 實(shí)施例3
[0090] 一種含真菌α -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，由以下重量組分的原料制備：
[0091] 木肩45份，真菌α -淀粉酶25份，堿性蛋白酶20份，堿性脂肪酶20份，植物提取 物15份，堿性纖維素酶3份，非離子表面活性劑2份，激活劑2份，保護(hù)劑1份，抗氧化劑 〇· 3 份；
[0092] 所述木肩、真菌α -淀粉酶、植物提取物均為實(shí)施例1制備；
[0093] 所述非離子表面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷（APG)30份，烷基葡萄糖酰胺 (AGA)20份，N-十二烷基乙二胺三乙酸鈉（ED3A)8份，異構(gòu)醇醚羧酸鹽AEC-11078 份，月桂 酰胺醚羧酸鹽（LAEC)5份；
[0094] 所述激活劑是由如下質(zhì)量組份的無(wú)機(jī)鹽均勻混合而成：硫酸鈉15份，氯化鈣10 份，氯化鋅5份，氯化鎂3份；
[0095] 所述保護(hù)劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖30份，甘油15份，（NH4) 2S046份， 丙二醇2-4份；
[0096] 所述抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比10:4:2 均勻混合；
[0097] 所述洗滌復(fù)合酶的制備方法同實(shí)施例2。
[0098] 實(shí)施例4
[0099] -種含真菌α -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，由以下重量組分的原料制備：
[0100] 木肩55份，真菌α -淀粉酶35份，堿性蛋白酶30份，堿性脂肪酶30份，植物提取 物25份，堿性纖維素酶10份，非離子表面活性劑8份，激活劑6份，保護(hù)劑3份，抗氧化劑 〇· 5 份；
[0101] 所述木肩、真菌α -淀粉酶、植物提取物均為實(shí)施例1制備；
[0102] 所述非離子表面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷（APG)40份，烷基葡萄糖酰胺 (AGA)30份，N-十二烷基乙二胺三乙酸鈉（ED3A)12份，異構(gòu)醇醚羧酸鹽AEC-110712份，月 桂酰胺醚羧酸鹽（LAEC) 8份，平平加 c-1253份，JFC 3份；
[0103] 所述激活劑是由如下質(zhì)量組份的無(wú)機(jī)鹽均勻混合而成：硫酸鈉25份，氯化鈣15 份，氯化鋅7份，氯化鎂5份；
[0104] 所述保護(hù)劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖40份，甘油25份，（NH4) 2SO4IO 份，丙二醇4份；
[0105] 所述抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比15:9:6 均勻混合；
[0106] 所述洗滌復(fù)合酶的制備方法同實(shí)施例2。
[0107] 實(shí)施例5
[0108] -種含真菌α -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，由以下重量組分的原料制備：
[0109] 木肩55份，真菌α -淀粉酶25份，堿性蛋白酶30份，堿性脂肪酶20份，植物提取 物25份，堿性纖維素酶3份，非離子表面活性劑8份，激活劑2份，保護(hù)劑3份，葡萄籽原花 青素〇. 3份；
[0110] 所述木肩、真菌α -淀粉酶、植物提取物均為實(shí)施例1制備；
[0111] 所述非離子表面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷（APG)40份，烷基葡萄糖酰胺 (AGA) 20份，N-十二烷基乙二胺三乙酸鈉（ED3A) 12份，異構(gòu)醇醚羧酸鹽AEC-11078份，月桂 酰胺醚羧酸鹽（LAEC)S份；
[0112] 所述激活劑是由如下質(zhì)量組份的無(wú)機(jī)鹽均勻混合而成：硫酸鈉25份，氯化鈣10 份，氯化鋅7份，氯化鎂3份；
[0113] 所述保護(hù)劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖40份，甘油15份，（NH4) 2SO4IO 份，丙二醇2份；
[0114] 所述洗滌復(fù)合酶的制備方法同實(shí)施例2。
[0115] 實(shí)施例6真菌α -淀粉酶酶學(xué)性質(zhì)的測(cè)定
[0116] (1)溫度對(duì)酶活性的影響以及酶的熱穩(wěn)定性
[0117] 將實(shí)施例1真菌α -淀粉酶發(fā)酵粗酶液于40-80°C下分別測(cè)定該淀粉酶酶活力，結(jié) 果表明該酶在50-75?之間具有82%以上的酶活性，說(shuō)明該酶的溫度適應(yīng)范圍較寬。且熱 穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)表明，該酶在70°C保溫3h后，于60°C，pH值5. 5條件下仍然具有80%以上酶活， 溫度高于75°C，酶活損失嚴(yán)重。
[0118] (2) pH對(duì)酶活性的影響
[0119] 將實(shí)施例1真菌α -淀粉酶發(fā)酵粗酶液在pH值3-8. 5下分別測(cè)該酶酶活，結(jié)果表 明該酶在pH值4. 5-7時(shí)酶活性保持在70%以上，且pH值5. 5時(shí)達(dá)到最大值。
[0120] 實(shí)施例7抗氧化劑對(duì)洗滌復(fù)合酶酶活力的影響
[0121] 采用本發(fā)明實(shí)施例2制備的含真菌α-淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，其它原料、原料 組份、制備方法完全相同，唯一區(qū)別是原料組分不含抗氧化劑，形成對(duì)比例，分別于o°c和 40°C條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，采用《GB/T 23535-2009脂肪酶制劑》中檢測(cè)方法測(cè)定堿性脂肪酶 的酶活力，計(jì)算酶活損失率，酶活損失率是指實(shí)際檢測(cè)的酶活力與產(chǎn)品標(biāo)注酶活力的差值 占標(biāo)注酶活力的百分率，結(jié)果如表1
[0122] 表1儲(chǔ)存期復(fù)合酶中堿性脂肪酶酶活力損失率
[0123]

【權(quán)利要求】
1. 一種含真菌a -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，由以下重量組分的原料制備：木肩45-55份， 真菌a -淀粉酶25-35份，堿性蛋白酶20-30份，堿性脂肪酶20-30份，植物提取物15-25 份，堿性纖維素酶3-10份，非離子表面活性劑2-8份，激活劑2-6份，保護(hù)劑1-3份，抗氧化 劑0. 3-0. 5份；所述植物提取物是以丁香、苦丁茶、薰衣草、金銀花、苦參為原料而制備的。
2. 如權(quán)利要求1所述的含真菌a -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，其特征在于，所述木肩的制 備方法包括如下步驟：將無(wú)發(fā)霉、無(wú)病蟲(chóng)鋸木末或廢木肩除去雜物，置盛有1-2%碳酸氫 鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、30KHz清洗15-25min，沖洗、瀝干，然后置微波干燥機(jī)于 3000W、120°C進(jìn)行微波干燥5-10min，使之水分達(dá)到8-10%，最后粉碎至粒度0. 5-3mm，密封 包裝即得木肩。
3. 如權(quán)利要求2所述的含真菌a -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，其特征在于，所述微波干燥為 間歇式干燥，即微波輻照8s，間隔20s。
4. 如權(quán)利要求1所述的含真菌a-淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，其特征在于，所述真菌a-淀 粉酶的制備方法包括以下步驟：保存完好的里氏木霉CCTCC NO:M 2013602的菌種經(jīng)斜 面菌種活化、一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)液體種子擴(kuò)大培養(yǎng)至種子罐，將種子罐液體種子以6%接種 量接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度27-30°C，攪拌速度120-180r/m，通風(fēng)量l-3vvm，培養(yǎng)時(shí) 間10-15h ;然后以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至10-15°C，攪拌速度250-300r/m，通風(fēng)量 l-2vvm，恒溫培養(yǎng)15-20h ;繼續(xù)以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至2-5°C，此時(shí)，將種子罐液 體種子以4%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)20-30h ;最后以1-2°C /h升溫速率緩慢升 溫至10-15°C，攪拌速度200-400r/m，通風(fēng)量l-2vvm，恒溫培養(yǎng)15-20h ;繼續(xù)以1-2°C /h升 溫速率緩慢升溫至27-30°C，恒溫培養(yǎng)15-20h ;發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、濃縮、調(diào)配、精濾、干燥得固 體真菌a-淀粉酶。
5. 如權(quán)利要求1所述的含真菌a-淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，其特征在于，所述植 物提取物的制備方法包括如下步驟：將丁香、苦丁茶、薰衣草、金銀花、苦參按質(zhì)量比 10-15:7-11:6-9:5-8:1-3均勻混合，置盛有0. 1-0. 3%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于 200W、30KHz清洗10-15min，瀝干，加入混合原料質(zhì)量0. 2-0. 8倍的水潤(rùn)濕4-7h，于-18- -22°C冷凍l_2h后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度3-5cm，粉碎粒度0. 5-3mm，接著加入粉碎原 料質(zhì)量〇. 5-2倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3. 0-3. 5,在功率200-300W、頻率2000Hz條件下 進(jìn)行微波提取，其中，每次微波輻照總時(shí)間100-120S，進(jìn)行間隔式輻照：輻照10s，間隔10s， 控制溫度20-35°C，如此輻照10次，同時(shí)在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲 波輔助提??；保溫l_3h，然后，在功率200-400W、頻率2000Hz條件下進(jìn)行微波提取，其中， 每次微波輻照總時(shí)間120-135S，進(jìn)行間隔式輻照：輻照15s，間隔10s，控制溫度40-50°C， 如此輻照10次，同時(shí)在功率300-500W，頻率40-50KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取，最后自 然降溫至室溫，于電場(chǎng)強(qiáng)度15-25kV/cm，脈沖時(shí)間300-500 y s，脈沖頻率200-300HZ條件下 進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)提取15_20min ;充分?jǐn)嚢杼崛∫?，密封，自然發(fā)酵3-5d，發(fā)酵液過(guò)濾得第 一濾液，加濾渣2倍的水漂洗、過(guò)濾得第二濾液，將第一濾液和第二濾液按質(zhì)量比1:2-5均 勻混合，混合液超濾濃縮、冷凍干燥、30°C低溫粉碎至粒度0. 1-0. 3_即得植物提取物。
6. 如權(quán)利要求1所述的含真菌a -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，其特征在于，所述非離子表 面活性劑的質(zhì)量組份為：烷基多苷30-40份，烷基葡萄糖酰胺20-30份，N-十二烷基乙二胺 三乙酸鈉8-12份，異構(gòu)醇醚羧酸鹽AEC-1107 8-12份，月桂酰胺醚羧酸鹽5-8份，平平加 c-125 0-3 份，JFC 0-3 份。
7. 如權(quán)利要求1所述的含真菌a -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶，其特征在于，所述激活劑是 由如下質(zhì)量組份的無(wú)機(jī)鹽均勻混合而成：硫酸鈉15-25份，氯化鈣10-15份，氯化鋅5-7份， 氯化鎂3-5份；所述保護(hù)劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖30-40份，甘油15-25份， (NH4)2S046-10 份，丙二醇 2-4 份。
8. 如權(quán)利要求1所述含真菌a -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，包括 如下步驟：首先將所述保護(hù)劑、激活劑分別超微粉碎，均勻混合，隨后立即依次加入堿性蛋 白酶、木肩、非離子表面活性劑均勻混合10-15min，然后依次加入真菌a-淀粉酶、堿性脂 肪酶、堿性纖維素酶均勻混合15-20min，最后依次加入植物提取物和抗氧化劑，均勻混合 3-5min后密封包裝即得洗滌復(fù)合酶。
9. 如權(quán)利要求8所述含真菌a -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，所述 抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比10-15:4-9:2-6均勻混 合。
10. 如權(quán)利要求1所述含真菌a -淀粉酶的洗滌復(fù)合酶在洗滌劑生產(chǎn)中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C11D1/825GK104479909SQ201410717535
【公開(kāi)日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月1日
【發(fā)明者】李洪兵, 張錦杰, 李海清, 胡永明, 朱永明, 辛鋼 申請(qǐng)人:湖南新鴻鷹生物工程有限公司