一種姜黃素柔性脂質體霜膏的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種姜黃素柔性脂質體霜膏的制備方法，包括：制備姜黃素柔性脂質體、姜黃素柔性脂質體制成凍干粉、制備姜黃素柔性脂質體霜膏共三個步驟，本發明通過薄膜分散法制作姜黃素脂質體及柔性脂質體，并通過乳化法制作其乳膏，篩選出最佳處方，并進行穩定性評價和感官評價，提高姜黃素的利用度，并讓乳膏更細膩潤滑，在未來的藥妝品使用中提供更多選擇。
【專利說明】一種姜黃素柔性脂質體霜膏的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種姜黃素柔性脂質體霜膏的制備方法，屬于化學領域。
【背景技術】
[0002] 1姜黃素的性質及作用
[0003] 姜黃素是一種從姜科植物等的根莖中提取得到的黃色色素。是一種相對分子質量 小的多酚類物質，通常認為它是姜黃中的最有效成分，其結構如圖1所示。物理性質：橙黃 色粉末，味稍苦，熔點183°。不溶于水及乙醚，溶于乙醇、丙二醇，易溶于冰醋酸和堿溶液， 在堿性時呈紅褐色，在中性、酸性是呈黃色。對還原劑穩定性較強，有著色性，但對光、熱。鐵 離子敏感。
[0004] 姜黃素具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗菌、清除自由基以及對消化系統、心血管系統等 多方面藥理作。本實驗將其抗炎、抗氧化、抗菌作用應用到化妝品乳膏中。
[0005] 2脂質體 [0006] 2. 1脂質體概念
[0007] 也稱微脂粒，是一種具有靶向給藥功能的新型藥物制劑，利用磷脂雙分子層膜所 形成的囊泡包裹藥物分子，在水中磷脂分子親水頭部插入水中，疏水尾部伸向空氣，攪動后 形成雙層分子的球形脂質體，直徑25-1000nm不等。由于生物提質膜的基本結構也是磷脂 雙分子層膜，因此脂質體與生物體細胞具有很好的生物相容性。應用于化妝品中使藥物更 快的透膜吸收，增大藥物利用度。
[0008] 2. I. 1主要特點
[0009] 靶向性和淋巴定向性：肝、脾網狀內皮系統的被動靶向性。
[0010] 緩釋作用：緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間。
[0011] 降低藥物毒性；提高穩定性。
[0012] 2. 1.2相關分類
[0013] 按照不同直徑大小及內囊數目可以分為以下幾種類型：直徑小于IOOnm的小單層 脂質體（small unilamerllar vesicles, SUV);直徑大于 IOOnm 的大單層脂質體（large unilamellar, LUV);多層同心的多層脂質體（multilamellar vesicles，MLV);非同心多囊 泡脂質體（multivescular liposomes, MVL)等。
[0014] 2. 2普通脂質體
[0015] 普通脂質體是指采用天然磷脂和膽固醇制備的、未經任何修飾的脂質體，集中在 內皮網狀系統豐富的部位，同時會在炎癥和腫瘤部位有所狙擊，顯現出被動靶向性。
[0016] 2. 3柔性脂質體
[0017] 2. 3. 1柔性脂質體概念
[0018] 又稱傳遞體，或稱變形脂質體或柔性納米脂質體，是通過改變普通脂質體處方得 到的，即在普通脂質體的磷脂成分中少加或不加膽固醇，同事加入表面活性劑如聚氧乙烯 脫水山梨單油酸酯（吐溫）、山梨醇酐單油酸酯（司盤）、膽酸鈉、去氧膽酸鈉等作為膜軟化 齊IJ，使其脂膜具有高度的形變能力，為大、小分子物的經皮傳遞提供了很好的載體。將其應 用于化妝品中有著很好的前景。
[0019] 2. 3. 2柔性脂質體特點
[0020] ①柔性脂質體膜具有高度變形性，能高效透過比自身小數倍的孔道；②柔性脂質 體透皮吸收的驅動力是滲透壓；③柔性脂質體和水分子具有相同的透皮效率；④柔性脂質 體主要在角質細胞間的孔道轉運；⑤柔性脂質體經過多次形變通過角質層；⑥柔性脂質體 透過皮膚后其組成不變；⑦柔性脂質體經皮轉運沒有種屬間及部位差異。
[0021] 2. 3. 3柔性脂質體透皮機制
[0022] 主要動力主要來源于皮膚兩側的水分梯度。膜彈性形變而擠入角質層增寬的細胞 間隙，從而穿透皮膚。其路徑為剛開始到達真皮，然后是更深的組織，當周邊角質層水合梯 度與柔性脂質體變形作用，角質層吸收外部水分而發生水合，水合力使角質細胞間隙增寬， 變成20-30nm的孔道，在水和梯度而非藥物濃度梯度的驅動下，使柔性脂質體粒子地區達 到飽和后，再經由淋巴系統進入血液，從而發揮藥效。
[0023] 2. 4脂質體制備方法
[0024] 2. 4. 1薄膜分散法
[0025] 又稱薄膜蒸發法，操作較為簡單，適合脂溶性較好的藥物的包封，但較難完全出去 有機殘留，較為耗時，且形成的脂質體粒徑分布范圍也較寬，采用超聲水合分散有利于降低 脂質體的粒徑，且可提商水合的效率和樣品的均一性。
[0026] 2. 4. 2逆向蒸發法
[0027] 基礎在于"反膠束"的形成。適用于包封大多數水溶性物質，藥物的包封率取決于 脂質的化學性質、脂質、有機溶劑、緩沖液的比值、脂質濃度。但此法藥物需與有機溶劑接 觸，不適于多肽、蛋白類藥物，且值得的脂質體粒徑較大。相對于有機溶劑殘留問題，大多采 用超臨界代替有機溶劑，稱超臨界逆向蒸發法。
[0028] 2· 4· 3pH 梯度法
[0029] 通過調節脂質體內外水相的pH值，形成一定的pH梯度差，弱酸或弱堿藥物則順pH 梯度以分子形式跨越磷脂膜最后以離子形式被包封在內水相中。影響包封率的最主要因素 為跨膜pH梯度，通常pH梯度越大，載入脂質體內的藥物越多，包封率越高。
[0030] 2. 4. 4 注入法
[0031] 最常用乙醇注入法和乙醚注入法。乙醇注入法操作簡便，但殘留問題嚴重，而乙 醚注入法很好解決了此問題。采用注入法制備的脂質體通常粒徑較大，不適于靜脈注射給 藥。優點在于脂質在乙醇或乙醚中的濃度不影響脂質體的大小，但不適用于對熱敏感的藥 物。
[0032] 2. 4. 5銨離子梯度法
[0033] 通過游離氨擴散到脂質體外，間接形成pH梯度，使藥物積聚到脂質體內。銨鹽的 種類較大影響脂質體的包封率，最為常用的銨鹽為硫酸銨。同時，影響藥物活性的因素還有 磷脂的種類、不同修飾材料以及PEG的相對分子質量。
[0034] 2. 4. 6表面活性劑去除法
[0035] 將脂質與表面活性劑一起在水溶液中攪拌，得到膠束，再通過透析法將表面活性 劑從膠束中去除。其中，表面活性劑的濃度應高于臨界膠束濃度。此法優點是所制的脂質 體較為均勻，且方法較為溫和，尤其適用于蛋白質、多肽類藥物的載入。缺點為所制的脂質 體濃度較低，不利于疏水性藥物的包封，同時還可能殘留少量表面活性劑，較為費時。
[0036] 2. 4. 7 復乳法
[0037] 將少量的水相加入大量的含磷脂的有機相中形成W/0初乳，再制備成W/0/W乳液， 然后在一定溫度下除去有機溶劑即得。該法制得的脂質體包封容積較大，粒徑也較大。
[0038] 本文采用的是薄膜分散發。
[0039] 3藥妝品
[0040] 藥妝品概念：Kligman給藥妝品所轄的定義是"介于藥物和化妝品之間的制品。藥 妝品的作用超過賦予皮膚以色澤但不及治療的藥物"。也可稱為功能性化妝品或活性化妝 品。
[0041] 藥妝品是新發展起來的一類抗皮膚老化制品，中藥是藥妝品開發的最豐富資源之 一。現代藥妝品常用的活性成分主要有：抗氧化劑、生長因子、肽類、抗炎劑、植物劑、多糖 類、增白劑等。本論文是將有抗氧化、抗炎作用的姜黃素制作成納米脂質體顆粒應用于化 妝品中，增大化妝品活性的同時增加藥物的藥物活性。中藥納米顆粒應用于化妝品有著廣 闊的發展前景。
【發明內容】
[0042] 本發明所要解決的技術問題是提供一種姜黃素柔性脂質體霜膏的制備方法，本發 明通過薄膜分散法制作姜黃素脂質體及柔性脂質體，并通過乳化法制作其乳膏，篩選出最 佳處方，并進行穩定性評價和感官評價，提高姜黃素的利用度，并讓乳膏更細膩潤滑，在未 來的藥妝品使用中提供更多選擇。
[0043] 本發明解決上述技術問題的技術方案如下：一種姜黃素柔性脂質體霜膏的制備方 法，包括：
[0044] 1)制備姜黃素柔性脂質體
[0045] 在爺形瓶中稱取卵磷脂400mg和吐溫80 80mg，稱取膽固醇50mg,加入8ml氯仿與 甲醇的混合溶液溶解，得溶液1，稱取姜黃素 2. 7mg，用2ml氯仿與甲醇的混合溶液溶解后， 得溶液2,將溶液1和溶液1混勻，在旋轉蒸發儀上蒸干成膜，加入pH = 7. 0的磷酸緩沖溶 液10ml，水合20min，水浴超聲5min，得到姜黃素柔性脂質體；
[0046] 2)姜黃素柔性脂質體制備成凍干粉
[0047] 向1)制備的姜黃素柔性脂質體中加入甘露醇，在_75°C預凍24h，放入凍干機24h， 得到凍干粉；
[0048] 3)制備姜黃素柔性脂質體霜膏
[0049] 分別稱量液體石蠟2. 2ml，硬脂酸4. 5ml、橄欖油8. 9ml和氫化蓖麻油I. 4ml，在不 斷攪拌下加熱，直至各組分物質溶解混勻，形成透明液體，當溫度達到80°C時，在不斷攪拌 下，緩慢且均勻的加入三乙醇胺〇. 8ml、甘油I. 8ml、丙二醇13. 3ml和水66. 9ml，水浴加熱 15min，使三乙醇胺與硬脂酸乳化反應充分，得到混勻液體，然后將混勻液體倒入已預熱好 的組織搗碎機中進行攪勻，
[0050] 稱取姜黃素柔性脂質體20mg，當上述混勻液體溫度降為50°C時，加入姜黃素柔性 脂質體緩慢攪拌，攪勻后加入香精Img繼續攪拌，直至形成均勻細膩的乳化體時，停止攪 拌，待其冷卻至室溫，得到姜黃素柔性脂質體霜膏。
[0051] 在上述技術方案的基礎上，本發明還可以做如下改進。
[0052] 進一步，在1)中，所述氯仿與甲醇按體積比1:1混合。
[0053] 進一步，在2)中，所述姜黃素柔性脂質體與甘露醇的質量比為9:1。
[0054] 本發明的有益效果是：
[0055] 本發明將中藥納米脂質體應用到化妝品種，提高藥效和化妝品抗氧化功能，進一 步改善化妝品作用，根據文獻，目前還有姜黃素脂質體及柔性脂質體乳膏的研究報告，因 此，開發此產品有著更大的空間和發展前景。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0056] 圖1為本發明姜黃素最大吸收波長圖；
[0057] 圖2為本發明姜黃素脂質體圖；
[0058] 圖3為本發明姜黃素柔性脂質體霜膏制備流程圖；
[0059] 圖4為本發明所制備的姜黃素柔性脂質體霜膏圖；
【具體實施方式】
[0060] 以下對本發明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發明，并非用于限 定本發明的范圍。
[0061] 1實驗儀器與試劑
[0062] I. 1 儀器
[0063] 萬分之一電子天平AR1140 奧豪斯國際貿易有限公司 旋轉蒸發儀RE-3000A 上海亞榮生化儀器廠
[0064] 超聲儀SK250 HP 上海科導超聲以有限公司 紫外分光光度計UV-9000 日本島津公司 循環水時多用真空泵SHB-B95 鄭州長城科工貿有限公司 低速離心機LD5-2A 北京醫用離心機廠 冷凍千燥機 SIM International group 高速組織搗碎機DS-I 上海標本模型廠 電熱恒溫水浴鍋 龍口先科儀器公司 生物顯微鏡XSP-BM-2CA 煙臺大學藥學院提供 微孔濾膜過濾器 上海醫藥工業研究院 0. 8μιη有機系濾膜 上海市新亞凈化器件廠
[0065] 1. 2試劑及配制
[0066] 姜黃素 分析純 上海展云化工有限公司 卵磷脂 化學純 煙大藥學院提供 膽固醇 化學純 煙大藥學院提供 吐溫80 天津市博迪化工有限公司 無水乙醇 分析純 氯仿 分析純 煙臺大學藥學院提供 曱醇 分析純 北京化工廠 液體石蠟 化學純 益林化工廠 硬脂酸 化學純 煙臺大學藥學院提供 原生橄欖油 煙臺大學藥學院提供 丙三醇 分析純 濟南天橋精細化學品公司 1，2-丙二醇 分析純 天津市天大化工實驗廠 三乙醇胺 分析純 上海森尼精細化工有限公司 十二酸氫水磷二鈉 分析純 國藥集團化學試劑有限公司 二水磷酸二氫鈉 分析純 天津市副晨化學試劑廠
[0067] 香精 廣州百花香料股份有限公司
[0068] 1.2.1試劑的配制
[0069] 磷酸鹽緩沖液（pH = 7. 0)的配制：取十二酸氫水磷二鈉 I. 09g，二水磷酸二氫鈉 0.23g于IOOml容量瓶中，用去離子水溶解，搖勻，定容即得。
[0070] 2實驗方法的建立
[0071] 2. 1脂質體中姜黃素含量測定方法
[0072] 由姜黃素的結構式可知其分子內存在共軛結構，所以本實驗采用紫外分光光度法 檢測含量。
[0073] 2. 2檢測波長的確定
[0074] 以甲醇溶液作為空白對照，姜黃素甲醇溶液作為待測液進行700_200nm全波長掃 描，得到姜黃素的紫外吸收曲線，如圖1所示，姜黃素在423nm處具有最大波長，且甲醇在 423nm處無紫外吸收，對姜黃素測定不造成干擾，故選423nm為姜黃素的最大波長。
[0075] 2. 3包封率的檢測
[0076] 在考察姜黃素脂質體的制備工藝時，選用姜黃素脂質體的包封率為評價指標，其 中，包封率越高，制備工藝越好。
[0077] 2. 3. 1包封率的概念
[0078] 包封率（ER)是指脂質體中包進去的藥量與投入總藥量之比，ER越高，表示脂質體 中所包藥量越多，游離藥物越少，制備工藝越好，反之則越差。包封率是衡量脂質體內在性 質的重要指標之一。
[0079] 2. 3. 2包封率計算公式
[0080] 包封率=(A2V(A1) · 100%
[0081] A1 :投入總藥量
[0082] A2:脂質體中包入的藥量
[0083] 3脂質體的制備與評價
[0084] 3. 1姜黃素脂質體的制備與評價
[0085] 3. I. 1姜黃素脂質體的制備
[0086] 磷脂和膽固醇質量比為3:1，稱取磷脂150g，膽固醇50g于茄形瓶中，量取IOml氯 仿溶解，稱取姜黃素〇. OOlOg于西林瓶中，量取2ml無水乙醇溶解，加入到磷脂膽固醇氯仿 溶液中搖勻，于旋轉蒸發儀上35°C旋轉蒸發，于瓶壁均勻成膜。加入IOml磷酸鹽緩沖溶液 充分水合20min，于超聲儀中超聲5min，得到姜黃素脂質體，如圖2所示。
[0087] 3. 1. 2姜黃素脂質體包封率的測定
[0088] 精密量取姜黃素脂質體0. 2ml，加入5ml去離子水稀釋，精密量取5ml甲醇破乳，超 聲2min，過0. 8 μ m濾膜，取續濾液于西林瓶中，進行紫外測定，測得A1 = 0. 6674。
[0089] 將姜黃素脂質體過0. 8 μ m濾膜后，精密量取0. 2ml，加入5ml去離子水稀釋，精密 量取5ml甲醇破乳，超聲2min，過0. 8 μ m濾膜，取續濾液于西林瓶中，進行紫外測定，測得A2 =0. 5213,通過公式求得包封率78%。
[0090] 3. 2柔性脂質體的單因素考察
[0091] 本發明采用薄膜分散法制備姜黃素柔性脂質體，以卵磷脂400mg為定量，以吐溫 80為表面活性劑，以包封率為主要指標考察了卵磷脂與膽固醇比、氯仿與甲醇比、載藥量、 卵磷脂與吐溫80的比等因素的影響。
[0092] 3. 2. 1卵磷脂與膽固醇的用量比對包封率的影響
[0093] 在三個茄形瓶中稱取相同量的卵磷脂400mg和吐溫80 80mg，分別稱取卵磷脂與 膽固醇按照重量比為16:1,8:1,5 :1的膽固醇，加入總量為8ml的氯仿：甲醇體積比為1:1 的溶液溶解，稱取姜黃素2. 7mg，用2ml上述溶液（氯仿：甲醇體積比為1:1的溶液）溶 解后，兩溶液混勻，在旋轉蒸發儀上蒸干成膜，加入pH = 7. 0的磷酸緩沖溶液IOml水合 20min，水浴超聲5min。用3. 1.2測定包封率。由表1可知，卵磷脂：膽固醇質量比=8:1 時，包封率最高。
[0094] 表1不同卵磷脂與膽固醇質量比下姜黃素柔性脂質體包封率
[0095]
【權利要求】
1. 一種姜黃素柔性脂質體霜膏的制備方法，其特征在于，包括： 1) 制備姜黃素柔性脂質體 在爺形瓶中稱取卵磷脂400mg和吐溫80 80mg，稱取膽固醇50mg,加入8ml氯仿與甲 醇的混合溶液溶解，得溶液1，稱取姜黃素2. 7mg，用2ml氯仿與甲醇的混合溶液溶解后，得 溶液2,將溶液1和溶液1混勻，在旋轉蒸發儀上蒸干成膜，加入pH = 7. 0的磷酸緩沖溶液 10ml，水合20min，水浴超聲5min，得到姜黃素柔性脂質體； 2) 姜黃素柔性脂質體制備成凍干粉 向1)制備的姜黃素柔性脂質體中加入甘露醇，在_75°C預凍24h，放入凍干機24h，得到 凍干粉； 3) 制備姜黃素柔性脂質體霜膏 分別稱量液體石蠟2. 2ml，硬脂酸4. 5ml、橄欖油8. 9ml和氫化蓖麻油1. 4ml，在不斷攪 拌下加熱，直至各組分物質溶解混勻，形成透明液體，當溫度達到80°C時，在不斷攪拌下，緩 慢且均勻的加入三乙醇胺0. 8ml、甘油1. 8ml、丙二醇13. 3ml和水66. 9ml，水浴加熱15min， 使三乙醇胺與硬脂酸乳化反應充分，得到混勻液體，然后將混勻液體倒入已預熱好的組織 搗碎機中進行攪勻， 稱取姜黃素柔性脂質體20mg，當上述混勻液體溫度降為50°C時，加入姜黃素柔性脂質 體緩慢攪拌，攪勻后加入香精lmg繼續攪拌，直至形成均勻細膩的乳化體時，停止攪拌，待 其冷卻至室溫，得到姜黃素柔性脂質體霜膏。
2. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，在1)中，所述氯仿與甲醇按體積比 1:1混合。
3. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，在2)中，所述姜黃素柔性脂質體與甘 露醇的質量比為9:1。
【文檔編號】A61Q19/08GK104434551SQ201410620720
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月6日 優先權日:2014年11月6日
【發明者】陳大全 申請人:煙臺大學