N-酰基氨基酸作為人皮膚真皮的衰老復制性成纖維細胞的遺傳特性的調節活性劑的用途

N-酰基氨基酸作為人皮膚真皮的衰老復制性成纖維細胞的遺傳特性的調節活性劑的用途
【專利摘要】本發明涉及N-酰基氨基酸作為人皮膚真皮的衰老復制性成纖維細胞的遺傳特性的調節活性劑的用途、包含其的抗老化美容用組合物以及意欲延緩皺紋出現和/或減緩人體皮膚細胞老化的治療方法的實施，其中N-酰基氨基酸選自N-棕櫚酰基丙氨酸、N-棕櫚酰基甘氨酸和N-棕櫚酰基異亮氨酸。
【專利說明】N-酰基氨基酸作為人皮膚真皮的衰老復制性成纖維細胞的遺傳特性的調節活性劑的用途
[0001]本申請是申請號為200980133503.3的中國專利申請的分案申請。
發明領域
[0002]本發明涉及美容用和藥用活性成分領域，并且還涉及包含其的局部用組合物。
【背景技術】
[0003]在發達國家中對生命期望的增加已經持續地伴隨著無法抑制的對“恢復青春”的渴望，這在過去30年左右變得更加明顯并且這導致了嘗試延緩(如果看不見消失)皮膚老化跡象如特別是皺紋的出現。這種行為變化已經伴隨著致力于皮膚的科學研究的發展，并且在約10年中也伴隨著“抗老化”美容用產品市場的快速增長。
[0004]本發明屬于研究如下新分子或組合物的內容:所述新分子或組合物當應用于皮膚時通過其自身活性產生這種“抗老化”作用。
[0005]皮膚老化·機制可以以以下方式來解釋:
[0006]皮膚由兩種主要的組織組成:真皮和表皮(其更加淺表)，位于兩者之間的是交界區一真皮表皮界。
[0007]-真皮是致密和纖維彈件的結締組織，其產牛和仟何重塑基本上由成纖維細胞講行，其由細胞外基質(ECM)組成，細胞外基質由負責皮膚美觀性質的纖維性(膠原和彈性)分子組成，并且其還由基質組成。膠原占真皮干重的98%。基質由如下組成:
[0008]-填充細胞和纖維之間空間的大分子；
[0009]-結構糖蛋白，其允許細胞與ECM連接并且基本位于真皮表皮界以下；
[0010]-蛋白聚糖，包括糖胺聚糖(GAGs)，它是與蛋白質結合的形式(共價鍵合)，或者雙糖鏈蛋白聚糖。
[0011]-表皮基本上由角質形成細胞組成。這些細胞在基層增殖，然后逐漸分化形成表皮的各層，同時從底部遷移至表面，在表面處脫落。
[0012]-真皮表皮界(DEJ)是位于表皮的基底角質形成細胞和真皮之間的交界區。其特征是存在基膜，在基膜中ECM形成薄的和固體的網格。其由五種主要組分組成，即IV型膠原、層粘連蛋白、硫酸乙酰肝素、巢蛋白(或觸覺蛋白)和纖連蛋白。
[0013]ECM和DEJ的完整性以及表皮分化特別取決于負責眾多ECM組分的降解的酶MMP(基質金屬蛋白酶)的存在。
[0014]許多外源性和內源性因素(包括氧化應激)造成強調老化過程中的炎性過程，例如白細胞介素 _6 (IL-6)的產生(Ramasamy 等人，2005 ;Papanicolaou 等人，2006 ;Vaeto 等人，2007)。在皮膚老化期間，上文所列的一種或其它或數種DEJ分子被自由基改變。
[0015]目前有許多“抗老化”或“抗皺”活性成分。其中一些能夠調節正常人成纖維細胞的表型和/或性質。例如，許多美容用活性成分刺激通過成纖維細胞進行的膠原生成。因此，在美容應用中所用的LAAs中，有一些具有抗老化生物學性質，例如二棕櫚酰基羥脯氨酸(Sepilift? DPHP)。
[0016]作為US2006/024375公開的美國專利申請公開:向粉底化妝品中摻入N-棕櫚酰基脯氨酸、N-棕櫚酰基谷氨酸和N-棕櫚酰基肌氨酸的混合物產生了皮膚保護作用和抗老化作用，這些作用由于其對皮膚的抗炎性質和作為P物質拮抗劑起作用因而是特別較高的。
[0017]作為US2007/0048396公開的美國專利申請公開了 N-椰油酰基氨基酸、天冬氨酸鎂和天冬氨酸鉀的混合物對皮膚的抗炎性質。
[0018]另一方面，幾乎沒有“抗老化”活性成分已知能夠引起炎性組分減少、特別是IL-6表達水平降低。具體而言，雖然某些抗氧化劑能夠減少與老化相關的IL-6產生(Walston等人，2006 ；Omoigui, 2007)，但是這類作用不一定與調節ECM產生或對其進行保護的能力相關。相反，一些活性成分如視黃醇被描述為引起發炎(Kim等人，2003)。另外，一些抗炎藥用分子導致ECM組分如膠原纖維的產生減少(Miltyk等人，1996)。因此，在一方面活性成分的抗炎性質和另一方面其抗老化效力之間沒有明顯的相關性。
[0019]為了使皮膚老化作用可見和然后改正它們，已經描述了各種實驗模型。因此，在單層成纖維細胞培養的情況下，各種刺激在體外可導致老化加速。
[0020]-例如，為了模擬光老化和/或氧化應激，能夠使這些細胞接受紫外輻射的照射(Ma 等人,2001 ；Kawanishi 和 Oikawa, 2004 ；Chen 等人,2007)。
[0021]-通過培養和研究來自老年供體的細胞也可以在體外復制老化[Albini等人，(1988) ；Miyoshi 等人，(2006)]。
[0022]-最后，按照Hayflick’ s模型，通過以使得它們進行大量群體倍增的方式培養成纖維細胞可以復制衰老(Bradley、Hayflick和Schimke, 1976 ；Albini等人,1988)。該過程通常被稱為“復制衰老”。
[0023]因此，這些原代培養物的實驗性老化模型可用于評價美容用活性成分改正皮膚老化引起的缺陷和/或表型或生物學功能擴大的能力。因此，很多活性成分限制了 UV-照射的成纖維細胞中的MMP蛋白生成。其它活性成分能夠部分地恢復晚傳代成纖維細胞中的基因或蛋白質的活性。
[0024]但是，一些研究在細胞系上進行，而不是在原代培養物上進行。
[0025]現在，以它們以事實上不受限的方式使群體翻倍的能力表征細胞系。該過程相應于無限增殖化(Goldstein, 1990 ；Rhim, 1991 ；Macieira-Coelho, 2000)。因此，通常認為:與對等的原代培養物相比，細胞系顯示出某些差異。因此，它們不反映生理現實，特別是對于老化而言。而且，在人成纖維細胞的原代培養物的情況下，大多數研究采用來源于包皮的細胞進行。但是，與來源于成人真皮的人成纖維細胞相比，這些包皮表現出特定的性質(Jelaska 和 Korn, 1998 ；Khorramizadeh 等人,1999 ；Saguet 等人,2006)。具體而言，通常認為這些成纖維細胞表現出增加的增殖能力。它們對氧化應激的敏感性也表現出不同(Saguet等人，2006)。因此，使用與最終將被抗老化活性成分所靶向的那些細胞相同來源的細胞、即成人真皮的細胞更具有相關性。現在，據我們所知，沒有N-酰基氨基酸已經被描述為能夠以減少炎癥并同時促進ECM生成或保護的方式調節來源于成人真皮的復制衰老性成纖維細胞(replicative senescent fibroblasts)的遺傳特性。

【發明內容】
[0026]根據第一方面，本發明的主題是作為調節人皮膚真皮的復制衰老性成纖維細胞的遺傳特性的活性劑的N-酰基氨基酸，所述N-酰基氨基酸選自N-棕櫚酰基丙氨酸、N-棕櫚酰基甘氨酸、N-棕櫚酰基異亮氨酸和N-椰油酰基丙氨酸。
[0027]根據第二方面，本發明的主題還有N-酰基氨基酸在實施意欲延緩皺紋出現和/或減緩人體皮膚細胞老化的治療方法中的用途，所述N-酰基氨基酸選自N-棕櫚酰基丙氨酸、N-棕櫚酰基甘氨酸、N-棕櫚酰基異亮氨酸和N-椰油酰基丙氨酸。
[0028]表述“調節人皮膚真皮的復制衰老性成纖維細胞的遺傳特性”更特別地指如上文定義的N-酰基氨基酸具有下述性質中的一種或其它、數種或全部:
[0029]-其引起編碼促炎細胞因子IL-6的基因的表達水平降低；
[0030]-其引起編碼MMP-1的基因的表達水平降低，MMP-1是參與細胞外基質降解的金屬蛋白酶；
[0031 ]-其引起編碼促炎蛋白、serpin2B或PA1-2 (纖維蛋白溶酶原激活物抑制劑_2)的基因的表達水平降低(Kessler-Becker等人，2004)；
[0032]-其引起編碼真皮組分皮膚橋蛋白(dermatopontin)(DPT)的基因的表達水平增加，皮膚橋蛋白是細胞外基質的組分之一(Okamoto和Fujiwara, 2006)；
[0033]-其引起編碼I型膠原(COLlAl)的基因的表達水平增加，I型膠原是細胞外基質的組分之一；
[0034]-其引起編碼雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)的基因的表達水平增加，雙糖鏈蛋白聚糖是細胞外基質的組分之一；
[0035]-其引起編碼巢蛋白 的基因的表達水平增加，巢蛋白是真皮表皮界的組分之一(Aumailley 等人，1984)；
[0036]-其引起編碼生腱蛋白C(TNC)的基因的表達水平增加，生腱蛋白C是真皮表皮界的組分之一(Marionnet等人，2006),并且還參與膠原纖維收縮(Tamaoki等人，2005)；
[0037]-其引起編碼多效營養因子(PTN)的基因的表達水平增加，多效營養因子是參與成纖維細胞和角質形成細胞之間的相互作用的蛋白質(Florin等人，2005)；
[0038]-其引起編碼熱激蛋白(HSP90A)的基因的表達水平增加，熱激蛋白參與調節蛋白酶體的活性，蛋白酶體是使得降解受損蛋白質成為可能的體系(Morishima等人，2005)；
[0039]-其引起編碼serpinlH(HSP47)的基因的表達水平增加，serpinlH是參與調節膠原纖維形成的蛋白質(Kuroda和Tajima, 2004)；
[0040]-其引起編碼波形蛋白的基因的表達水平增加，波形蛋白是成纖維細胞細胞骨架的組分之一(Rappersberger 等人，1990)。
[0041]在如上文定義的用途中使用的N-酰基氨基酸可以是游離酸形式或者部分或全部地是成鹽形式。當它是成鹽形式時，其特別包括堿金屬鹽(例如鈉、鉀或鋰鹽)、堿土金屬鹽(例如鈣、鎂或鍶鹽)、銨鹽或氨基醇的鹽(例如(2-羥基乙基)銨鹽)。它還可以包括金屬鹽，例如鋅或錳二價鹽或者鐵、鑭、鈰或鋁三價鹽。通常，所述N-酰基氨基酸的成鹽程度還取決于其pKA和其將摻入其中的組合物中的鹽濃度。
[0042]根據本發明的另一種特定變通方式，僅一種上文定義的N-酰基氨基酸被用于含有美容學上可接受的介質的組合物中。
[0043]根據本發明的另一種特定變通方式，使用選自上文定義的那些的N-酰基氨基酸的混合物。
[0044]根據另一個特定方面，本發明的主題是如上文定義的用途，其中N-酰基氨基酸是N-棕櫚酰基丙氨酸。
[0045]根據另一個特定方面，本發明的主題是如上文定義的用途，其中N-酰基氨基酸是N-棕櫚酰基甘氨酸。
[0046]根據另一個特定方面，本發明的主題是如上文定義的用途，其中N-酰基氨基酸是N-棕櫚酰基異亮氨酸。
[0047]根據另一個特定方面，本發明的主題是如上文定義的用途，其中N-酰基氨基酸是N-椰油酰基丙氨酸。
[0048]術語“N-椰油酰基丙氨酸”意欲指通過使丙氨酸與來源于椰子油的脂肪酸的活化衍生物酰化所獲得的N-酰基丙氨酸的混合物。
[0049]如上文定義的N-酰基氨基酸通常通過使相應的氨基酸或其鹽進行N-酰化而獲得。
[0050]當涉及N-酰基氨基酸的混合物時，所述混合物例如通過使由所有來源的蛋白質的總水解所產生的氨基酸混合物進行N-酰化而獲得。
·[0051]本發明的主題還有意欲延緩皺紋出現和/或減緩細胞老化的非治療性處置人體的方法，其特征在于給其應用含有美容學上可接受的介質和有效量的至少一種N-酰基氨基酸的組合物，其中所述N-酰基氨基酸選自N-棕櫚酰基丙氨酸、N-棕櫚酰基甘氨酸、N-棕櫚酰基異亮氨酸和N-椰油酰基丙氨酸。
[0052]根據另一個特定方面，本發明的主題是如上文定義的方法，其中N-酰基氨基酸是N-棕櫚酰基丙氨酸。
[0053]根據另一個特定方面，本發明的主題是如上文定義的方法，其中N-酰基氨基酸是N-棕櫚酰基甘氨酸。
[0054]根據另一個特定方面，本發明的主題是如上文定義的方法，其中N-酰基氨基酸是N-棕櫚酰基異亮氨酸。
[0055]根據另一個特定方面，本發明的主題是如上文定義的方法，其中N-酰基氨基酸是N-椰油酰基丙氨酸。
[0056]在如上文定義的用途和方法中，N-酰基氨基酸通常用于局部應用于皮膚和粘膜的組合物中。所述的局部應用組合物包含0.01%至10%質量、更特別是0.1%至5%質量、最特別是1%至5%質量的所述N-酰基氨基酸。所述的治療或處置或所述的用途通過將所述的局部應用組合物應用于欲治療的皮膚或粘膜表面來實施。
[0057]根據另一個方面，本發明的主題是“抗老化”美容用組合物，其特征在于其包含
0.01%-10%質量、更特別是0.1%_5%質量、最特別是1%_5%質量的N-酰基氨基酸，所述N-酰基氨基酸選自N-棕櫚酰基甘氨酸、N-棕櫚酰基丙氨酸、N-棕櫚酰基異亮氨酸和N-椰油酰基丙氨酸。
[0058]在所述方法或所述用途中使用的組合物通常是稀的水溶液或水-醇溶液的形式；簡單乳劑或復乳的形式，例如油包水(W/0)、水包油(0/W)或水包油包水(W/0/W)乳劑，其中油是植物或礦物性質的；或粉末的形式。也可以將它們分散在或浸潤于織物材料或無紡材料上，不管這些材料是擦拭布(wipes)、紙巾或覆蓋物(clothing)。[0059]如上文定義的N-酰基氨基酸通常與多種類型的用于美容用配制物的佐劑或活性成分組合，不管它們是脂肪物質、有機溶劑、增稠劑、膠凝劑、軟化劑、抗氧化劑、遮光劑、穩定劑、發泡劑、芳香劑、離子或非離子型乳化劑、填充劑、多價螯合劑、螯合劑、防腐劑、化學屏蔽劑或無機屏蔽劑、精油、染料、色素、親水性或親脂性活性劑、潤濕劑(例如甘油)、防腐劑、著色劑、芳香劑、美容用活性劑、無機或有機防曬劑、無機填充劑(例如氧化鐵、氧化鈦和滑石粉)、合成填充劑(例如尼龍和交聯或非交聯聚(甲基丙烯酸甲酯))、硅酮高彈體、絲云母或植物提取物或者脂囊泡或通常用于美容品工業的任意其它成分。
[0060]作為可與如上文定義的N-酰基氨基酸組合的油的實例，可以提到的有:礦物油，例如液體石臘、液體礦酯、異構燒烴或白礦物油(white mineral oils));動物來源的油,例如角鯊烯或角鯊烷；植物油，例如甜杏仁油、椰子油、蓖麻油、西蒙得木油、橄欖油、菜子油、花生油、葵花油、小麥胚芽油、玉米胚芽油、大豆油、棉子油、苜蓿油、罌粟油、南瓜籽油、月見草油、小米油、大麥油、黑麥油、紅花油、燭果油、西番蓮花油、榛子油、棕櫚油、牛油樹脂、杏仁油、美葉油(beauty-leaf oil)、大蒜芥油(sisymbrium oil)、鱷梨油、金蓋花油；乙氧基化植物油；合成油，例如脂肪酸酯，例如肉豆蘧酸丁酯、肉豆蘧酸丙酯、肉豆蘧酸鯨蠟酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、硬脂酸十六烷基酯、硬脂酸異丙酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸異鯨蠟酯、油酸十二烷基酯、月桂酸己酯或二辛酸丙二醇酯；衍生自羊毛脂酸(lanolic acid)的酯，例如羊毛脂酸異丙酯或羊毛脂酸異鯨蠟酯，脂肪酸甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯，例如三庚酸甘油酯、苯甲酸烷基酯、聚-α -烯烴、聚烯烴如聚異丁烯、合成異烷烴如異十六烷或異十二烷、全氟代油和硅油。在所述硅油中，可以更具體提到的有聚二甲基硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、胺修飾的硅酮、脂肪酸修飾的硅酮、醇修飾的硅酮、脂肪酸和醇修飾的硅酮、聚醚基團修飾的硅酮、環氧修飾的硅酮、氟基團修飾的硅酮、環狀硅酮和烷基修飾的硅酮。
[0061]作為可以與該活性劑組合的其它脂肪，可以提及的有脂肪醇或脂肪酸。
[0062]在可以合并入包含如上文定義的N-酰基氨基酸的美容用配制物的增稠和/或乳化聚合物中，例如有:丙烯酸或丙烯酸衍生物的均聚物或共聚物、丙烯酰胺均聚物或共聚物、丙烯酰胺衍生物的均 聚物或共聚物、丙烯酰氨基甲基丙磺酸/乙烯基單體/丙烯酸三甲基氨基乙基酯氯化物均聚物或共聚物、植物或生物合成來源的水膠體(例如黃原膠、刺梧桐樹膠、角叉菜膠(carrageenates)、海藻酸鹽)；硅酸鹽；纖維素及其衍生物；淀粉及其親水性衍生物；聚氨基甲酸酯。
[0063]在可用于產生能夠被用于制備含有作為本發明主題的N-酰基氨基酸的W/0乳劑的凝膠化水相的聚電解質型聚合物中，有例如丙烯酸/2-甲基-[(1-氧代-2-丙烯基)氨基]-1-丙磺酸(AMPS)共聚物、丙烯酰胺/2-甲基-[(1-氧代-2-丙烯基)氨基]-1-丙磺酸共聚物、2-甲基-[(1-氧代-2-丙烯基)氨基]-1-丙磺酸/(2-羥基乙基)丙烯酸酯共聚物、2-甲基-[(1-氧代-2-丙烯基)氨基]-1-丙磺酸均聚物、丙烯酸均聚物、丙烯酰基乙基三甲基氯化銨/丙烯酰胺共聚物、AMPS/乙烯吡咯烷酮共聚物、丙烯酸和其基于碳的鏈包括10至30個碳原子的烷基丙烯酸酯的共聚物以及AMPS和其基于碳的鏈包括10至30個碳原子的烷基丙烯酸酯的共聚物。 申請人:分別以如下名稱出售這類聚合物:SimulgelTM EG、Sepigel?305> Simulgel? NS、Simulgel?800 和 Simulgel? A。
[0064]在可用于本發明的蠟中，可以提及的例如有:蜂蠟；巴西棕櫚蠟；小燭樹蠟；小冠巴西棕臘(ourioury wax)；日本臘(Japan wax);木栓纖維臘(cork fiber wax)或甘鹿臘；石蠟；褐煤蠟；微晶蠟；羊毛蠟；地蠟；聚乙烯蠟；氫化油；硅氧烷蠟；植物蠟；在環境溫度下為固體的脂肪醇和脂肪酸；在環境溫度下為固體的甘油酯。
[0065]在可用于本發明的乳化劑中，可以提及的例如有:脂肪酸、乙氧基化脂肪酸、山梨醇脂肪酸酯、乙氧基化脂肪酸酯、聚山梨酯、聚甘油酯、乙氧基化脂肪醇、蔗糖酯、烷基多苷、脂肪醇硫酸酯和磷酸酯或者烷基多苷與法國專利申請2668080、2734496、2756195、2762317、2784680、784904、2791565、2790977、2807435 和 2804432 中記載的脂肪醇的混合物。
[0066]作為可以與如上文定義的N-酰基氨基酸組合的活性成分的實例，可以提及的有:具有使顏色變淡和脫色素作用的化合物，例如熊果苷、曲酸、氫醌、鞣花酸、維生素C、磷酸抗壞血酸酯鎂、多酚提取物、葡萄提取物、松樹提取物、酒提取物、橄欖提取物、pond提取物、N-酰化蛋白質、N-酰化肽、N-酰化氨基酸、N-酰化蛋白質的部分水解物、氨基酸、肽、總蛋白水解物、部分蛋白水解物、多元醇(例如甘油或丁二醇)、尿素、吡咯烷酮羧酸或該酸的衍生物、甘草次酸、α-沒藥醇、糖或糖衍生物、多糖或其衍生物、羥酸(例如乳酸)、維生素、維生素衍生物(例如視黃醇)、維生素E及其衍生物、礦物質、酶、輔酶(例如輔酶Q10)、激素或激素樣物質、大豆提取物(例如Raffermine?)、小麥提取物(例如Tensine?或Gliadine?)、植物提取物(例如富含單寧的提取物、富含異黃酮的提取物或富含萜的提取物)、淡水藻或鹽水藻提取物、精臘(essential waxes)、細菌提取物、礦物質、通常的脂質、諸如神經酰胺或磷脂的脂質、具有減肥作用的活性劑(例如咖啡因或其衍生物)、對油性皮膚而言具有抗微生物活性或凈化作用的活性劑(例如Lipacide? PVB)、具有供能或刺激性質的活性劑(例如Sepitonic? M3或Physiogenyl?)、泛醇及其衍生物(例如Sepicap? MP)、抗老化活性劑(例如S印ilift? DPHP、Lipacide? PVB、S印ivinol?或S印ivital?)、保濕活性劑(例如S印icalm? S,Sepicalm? VG和S印ilift? DPHP)、“抗光老化”抗老化活性劑、保護真皮表皮界完整性的活性劑、增加細胞外基質組分合成的活性劑、具有減肥、緊膚或排水活性的活性劑(例如咖啡因、茶堿、c.AMP、綠茶、鼠尾草、銀杏、常春藤、馬栗、竹、假葉(ruscus)、假葉樹、積雪草、歐石南、繡線菊、墨角藻、迷迭香或柳)、在皮膚上產生“熱”感的活性劑(例如皮膚毛細血管循環的激活劑(實例:煙酸鹽/酯))或者在皮膚上產生“新鮮”感的產物(實例:薄荷醇及衍生物)組成。
[0067]作為可摻入本發明的組合物的防曬劑，可以提及的有在化妝品導則76/768/EEC,(修訂版)，附件VII中出現的所有那些。
[0068]以下實驗研究解釋說明了本發明，但是不限制本發明。本發明提出:如上文定義的N-酰基氨基酸調節來源于成人真皮的復制衰老性成纖維細胞的遺傳特性，因而促進了細胞外基質的產生或保護并同時減少了皮膚炎癥，因此能夠延緩皺紋。該研究還證明:所述N-酰基氨基酸編碼促進成纖維細胞與ECM之間的相互作用以及成纖維細胞與角質形成細胞之間的相互作用的蛋白質。所有這些遺傳改變增強了它們的“抗老化”性質。
【具體實施方式】
_9] 本發明的N-酰基氨基酸就復制衰老性人真皮成纖維細胞而言的“恢復”效力的i正[0070]方案
[0071]將來源自成人真皮的并且進行加速老化(16代培養物)或未進行加速老化(8代培養物)的正常人成纖維細胞在存在或不存在以下四種N-酰基氨基酸中的每一種的情況下培養96小時:N-棕櫚酰基甘氨酸、N-棕櫚酰基丙氨酸、N-棕櫚酰基異亮氨酸和N-椰油酰基丙氨酸。在實驗結束時，洗滌并提取細胞用于基因組分析。該分析通過Q-PCR(定量聚合酶鏈反應)進行。
[0072]結果
[0073]圖1和2顯示，在老化人成纖維細胞中測試的N-酰基氨基酸引起的基因調節至少編碼了促進細胞外基質的產生或限制其降解和/或還有減少皮膚炎癥的蛋白質。
[0074]凰！顯示的圖說明了所測試的N-酰基氨基酸中的每一種減少與正常人成纖維細胞老化有關的基因過表達的能力。
[0075]圖2A和2B的圖說明了所測試的N-酰基氨基酸中的每一種補償與正常人成纖維細胞老化有關的基因表達的降低的能力。
[0076]對于這些圖中的每一幅圖，結果以與年輕細胞(100%)相比基因表達的相對水平的改變百分比表示，直方圖上方的百分比表示恢復百分比，并且所示的縮略語是按照官方Genbank命名法給出的。
[0077]這些圖證明·了以下結果:
[0078]-棕櫚酰基丙氨酸引起了編碼促炎細胞因子IL-6和金屬蛋白酶MMP-1的基因的表達水平降低，并且還引起了編碼皮膚橋蛋白(DPT)和I型膠原(COLlAl)的基因的表達水平增加。
[0079]-棕櫚酰基甘氨酸引起了編碼IL-6和MMP-1的基因的表達水平降低，并且還引起了編碼DPT、巢蛋白(NID)、生腱蛋白C(TNC)、多效營養因子(PTN)和熱激蛋白(HSP90A)的基因的表達水平增加。
[0080]-棕櫚酰基異亮氨酸引起了編碼IL-6和serpin2B的兩種基因的表達水平降低，并且還引起了編碼DPT、C0L1A1、雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)、NID、TNC、PTN、HSP90A、serpinlH(HSP47)和波形蛋白的基因的表達水平增加。
[0081]-椰油酰基丙氨酸引起了編碼IL-6的基因的表達水平降低，并且還引起了編碼DPT、NID、TNC、PTN和HSP90A的基因的表達水平增加。
[0082]除了它們的抗老化性質、特別是它們保護細胞外基質或促進其產生的能力以外，所測試的所有N-酰基氨基酸都表現出抗炎作用。一方面與其它刺激的活性成分相比，或者另一方面與能夠引起基質產生減少的抗炎分子相比，這種雙重效力賦予了它們明確的優點。最后，這些LAA能夠引起其它基因調節，從而增強它們的抗老化效力。
[0083]本發明的N-酰基氨基酸的“抗皺”效力的體內i正明
[0084]方皇
[0085]為了對具有皮膚老化皺紋的45-76歲的高加索人個體(約20名志愿者/組)的臉部進行每日兩次局部應用，將所測試的N-酰基氨基酸配制成在乳化劑對MontanoVTM202和 Montanov?82、增稠劑 Sepiplus?400 和 Montanox?60D 中的 1% 乳膏凝膠。
[0086]參比的市售脂肽產品也按照相同的實驗方案進行測試。
[0087]為本研究所選的解剖區域是眼周圍區域(魚尾紋)。[0088]治療周期為42天。
[0089]以前已經通過將測試制劑的貼劑應用48小時證明了沒有皮膚刺激性。
[0090]結果
[0091]結果以與參比市售脂肽產品相比總皺紋表面積和皺紋數表示。
[0092]N-棕櫚酰基丙氨酸使總皺紋表面積減少15%。
[0093]N-棕櫚酰基甘氨酸、N-棕櫚酰基異亮氨酸和N-椰油酰基丙氨酸分別使皺紋數減少 35%、40% 和 33%。
[0094]圖3歸納了在測試開始時和在用(A)參比脂肽或(B)N-棕櫚酰基甘氨酸每日兩次處置達42天后治療區域(魚尾紋)的各種照片。
[0095]美容用配制物實施例
[0096]
【權利要求】
1.意欲延緩皺紋出現和/或減緩細胞老化的非治療性處置人體的方法，其特征在于給其應用含有美容學上可接受的介質和有效量的至少一種N-酰基氨基酸的組合物，其中所述N-酰基氨基酸選自N-棕櫚酰基甘氨酸和N-棕櫚酰基異亮氨酸。
2.如權利要求1所定義的方法，其中N-酰基氨基酸是N-棕櫚酰基丙氨酸。
3.如權利要求1所定義的方 法，其中N-酰基氨基酸是N-棕櫚酰基異亮氨酸。
【文檔編號】A61Q19/08GK103432011SQ201310346813
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2009年7月24日 優先權日:2008年8月29日
【發明者】C·斯托爾茨, S·杜蒙特, C·塔耶布瓦 申請人:化工產品開發公司Seppic