專利名稱：一種制備苦杏仁提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備苦杏仁提取物的方法。
背景技術(shù)：
苦杏仁為常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為薔薇科櫻桃屬植物杏O^unus armeniaca)、山杏(P. armeniacaL Var. ansu)禾口野杏(Armeniaca. Sibirica Lam.)的干燥成熟種子?？嘈尤寿Y源在我國十分豐富，主產(chǎn)于東北、華北、西北、內(nèi)蒙古、新疆、遼寧、吉林及長江流域(程黎暉.苦杏仁炮制的歷史沿革探討[J].海峽藥學(xué)，2009 :21(4) :84-86) 0苦杏仁的主要成分包括苦杏仁苷(3% -4% )、苦杏仁油(35% -50% )和苦杏仁蛋白(對(duì)％-30%)?？嘈尤受站哂墟?zhèn)咳平喘、抗腫瘤、降血糖以及抗凝血等作用，迄今它已成為醫(yī)藥上常用的祛痰止咳劑、輔助性抗癌藥物，另外，臨床上用其治療氣滯、腸燥便秘、水腫脹滿、支氣管哮喘、水腫、腳氣、小便不利等也取得了很好的效果?？嘈尤视椭械牟伙柡椭舅岷窟_(dá)95%以上，這些不飽和脂肪酸在人體內(nèi)不僅不會(huì)產(chǎn)生脂肪積累，并且可以降低低密度脂蛋白和血清膽固醇的水平，有利于血管的軟化，具有防治高血壓、高血脂等心血管疾病的療效(Andrea R. Josse, Cyril W. C. Kendall, Livia S. A. Augustin, et al. Almonds and postprandial glycemia-adose-response study[J]. Metabolism,2007, 56(3) :400-404)。苦杏仁油凝固點(diǎn)很低(_20°C )，在_10°C時(shí)仍能保持清亮的液態(tài)，_20°C時(shí)才凝結(jié)。因此，苦杏仁油不僅是世界著名的優(yōu)質(zhì)食用油，而且還是制作高級(jí)化妝品、高級(jí)潤滑油和高級(jí)塑料溶劑的原料，具有十分重要的利用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值?？嘈尤实鞍子梢紫拇x蛋白組成，主要組分為清蛋白，占總蛋白的77% 84%，其次為球蛋白和谷蛋白，醇溶蛋白含量較低(宋日欽，王建中，趙云霞.苦杏仁蛋白開發(fā)利用的前景[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22(1) 68-70 ；Abd El-Aal M H，Hamza M A,Rahma E H. In vitro digestibility, physico-chemical and functional properties of apricot kernel proteins[J]. Food Chemistry, 1986，19 (3) : 197 211)，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值和開發(fā)利用價(jià)值，可用于制備蛋白粉、濃縮蛋白、分離蛋白以及苦杏仁蛋白的深度加工產(chǎn)品?？嘈尤受盏奶崛】刹捎盟崛》ɑ蛞掖蓟亓鞣??？嘈尤手泻械目嘈尤受彰缚蓪⒖嘈尤受账猓虼丝嘈尤受盏姆蛛x提取需要有“滅酶保苷”的工藝。閭肖波等將苦杏仁經(jīng)滅酶、脫脂、萃取、重結(jié)晶等處理，制得98%純度的苦杏仁苷，并比較了不同溶劑的脫脂效果以及不同濃度和用量乙醇對(duì)重結(jié)晶的影響(閭肖波，蘇寶根，楊亦文等.純苦杏仁苷的制備 [J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2006，37 (3) :165-167)，結(jié)果表明，70 80°C水浴中用石油醚提取 3次所得的脫脂粕用無水乙醇回流提取3次，所得粗品用無水乙醇重結(jié)晶3次，得到苦杏苷的純度為98%。崔國庭等研究了用大孔吸附樹脂分離純化苦杏仁苷的工藝，結(jié)果表明，大孔樹脂LSA-30比較適合吸附和分離苦杏仁苷，其在室溫條件下，pH值在6-9時(shí)吸附能力較強(qiáng)， 被吸附的苦杏仁苷用PH值為6或pH值為8的質(zhì)量百分濃度為60%的乙醇水溶液在40°C條件下，以流速1-anl/min洗脫，得到的產(chǎn)品為白色晶體，純度為93.6% (崔國庭，田呈瑞.大孔吸附樹脂分離純化苦杏仁苷的研究[J].食品工業(yè)科技，2005，:89-92)。崔國庭等研究了苦杏仁苷的乙醇提取條件，即用60%乙醇在80°C條件下提取3次，每次45min (崔國庭，田呈瑞.苦杏仁苷乙醇提取技術(shù)研究[J].食品工業(yè)科技，2005，沈(3) :118-119).吳迪分別采用超聲波提取和乙醇回流提取苦杏仁苷，原料經(jīng)滅酶、脫脂后，回流提取的最佳條件為提取溫度70°C、料液比1 18、時(shí)間40min，超聲提取的最佳操作條件為提取溫度 80°C，功率90W，料液比1 18，時(shí)間30min。超聲提取在保證提取率的前提下，縮短了提取時(shí)間，提高了效率(吳迪.山杏仁中苦杏仁苷的提取工藝研究[D].北京北京林業(yè)大學(xué)， 2006)?？嘈尤视偷墓I(yè)化生產(chǎn)多采用機(jī)械壓榨法和溶劑萃取法。機(jī)械壓榨法油脂得率較低、餅粕殘油率高達(dá)8% 10% ；有機(jī)溶劑萃取油脂回收率雖大有提高，但存在溶劑回收困難和產(chǎn)品有機(jī)溶劑殘留問題。超臨界(X)2萃取技術(shù)克服了溶劑法有機(jī)溶劑殘留以及壓榨法產(chǎn)率低、精制工藝煩瑣、油品色澤不佳的缺陷。0zkal對(duì)苦杏仁油超臨界CO2萃取進(jìn)行了一系列研究，得出CO2流速48/1^11、壓力451^￡1、溫度601和乙醇濃度3(%時(shí)萃取301^11，苦杏仁油萃取率的最大預(yù)測(cè)值為0. 371g/g杏仁，且超臨界(X)2萃取的苦杏仁油與用己烷提取的油脂在脂肪酸組成上沒有顯著差別(Ozkal S. G.，Yener Μ. E.，Bayindirli L. · Mass Transfer modeling of apricot kernel oil extraction with supercritical carbon dioxide[J]. J. of Supercritical Fluids, 2005, 35 :119 127)。但與冷榨法相比，超臨界萃取的油脂容易氧化，并且超臨界萃取設(shè)備一次性投入和能源消耗較大，還未被用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。與超臨界萃取法相比，水酶法提取油脂質(zhì)量高且操作設(shè)備簡(jiǎn)單。國外水酶法提取油脂已得到廣泛應(yīng)用，國內(nèi)也已有對(duì)大豆、玉米胚芽、油菜籽和花生等油料進(jìn)行水酶法提油的報(bào)道 (李淑芳.杏仁油酶法提取工藝的研究[D].太谷山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，200 ，但仍限于研究階段。用于水解的酶包括纖維素酶(CE)、半纖維素酶(HE)、果膠酶(PE)、蛋白酶(PR)、α -淀粉酶(α-AM)、α -聚半乳糖醛酸酶(α-PG)和β -葡聚糖酶(β _GL)等。李淑芳用“1398” 中性蛋白酶提取杏仁油，提油率可達(dá)到81. 38% (馬凱，王繼勛，盧春生.新疆地區(qū)低糖杏脯加工技術(shù)[J].保鮮與加工，2007，7(1) :48 49)。水酶法提油的缺點(diǎn)是易引起乳化問題，而利用蛋白酶將大分子蛋白質(zhì)水解成小分子肽則可以明顯改善乳化現(xiàn)象，增加游離油得率。為進(jìn)一步提高水酶法油脂提取率，研究者用超聲技術(shù)輔助提取杏仁油，可使萃取率提高20%，同時(shí)縮短萃取時(shí)間、降低能耗(Riera E,Golds Y,Blanco A，et al. Mass transfer enhancement in supercritical fluids extraction by means of power ultrasound[J]· Ultrasonics Sonochemistry,2004,11(3-4) :214-244 ；Aparna S, Gupta M N. Ultrasonic pre-irradiation effect upon aqueous enzymatic oil extraction from almond and apricot seeds [J]. Ultrasonics Sonochemistry, 2006,13 (6) :529 534)。但是超聲輔助提取易引起油脂氧化，產(chǎn)生不良風(fēng)味(Chemat F,Grondin I. Deterioration of edible oil during food processing by ultrasound[J]. Ultrasonics Sonochemistry,2004 (11) 13 15)。通常采用堿溶酸沉法或酒精水溶液分離提取苦杏仁蛋白。由于堿溶酸沉法易造成蛋白質(zhì)變性和有害物質(zhì)的生成，不利于蛋白質(zhì)的后續(xù)加工。而水酶法具有提取溫度較低、提取時(shí)間短、提取率高等優(yōu)點(diǎn)，能避免傳統(tǒng)分離方法中蛋白質(zhì)容易變性的弊端，具有很好的應(yīng)用前景。反膠束法也可制備高品質(zhì)的杏仁蛋白，是提取杏仁蛋白和杏仁油比較好的方法，不僅可以改進(jìn)傳統(tǒng)工藝制油得粕再脫溶的復(fù)雜冗長流程，而且反應(yīng)條件溫和。楊潞芳研究了用AOT/異辛烷反膠束體系萃取分離杏仁蛋白質(zhì)和油脂，蛋白質(zhì)得率達(dá)70.3%，油脂萃取率 79.4% (楊潞芳，反膠束法分離杏仁蛋白和油脂的研究[D].太古山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004。)如上所述，人們對(duì)苦杏仁中苦杏仁苷、苦杏仁油和杏苦仁蛋白的分離提取進(jìn)行了一些研究。但以上研究均未實(shí)現(xiàn)苦杏仁苷、苦杏仁油和苦杏仁蛋白三種成分的全利用，僅僅能利用其中的兩種成分要么利用苦杏仁油和苦杏仁蛋白(苦杏仁粉碎前不經(jīng)高溫處理)， 要么利用苦杏仁苷和苦杏仁油(苦杏仁粉碎前需經(jīng)高溫處理)。這是由于苦杏仁中含有苦杏仁苷酶，在苦杏仁形態(tài)完整的情況下，由于細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜等的分工分室功能，苦杏仁苷酶不會(huì)發(fā)生作用。一旦苦杏仁破碎，苦杏仁苷酶即可與底物苦杏仁苷相接觸，將其水解為葡萄糖、苯甲醛和氫氰酸，如圖1所示。為了提取苦杏仁苷，苦杏仁在粉碎前需要進(jìn)行高溫處理，以達(dá)到“滅酶保苷”的目的。但高溫處理又導(dǎo)致苦杏仁蛋白的嚴(yán)重變性，影響了苦杏仁蛋白的深度開發(fā)與利用。因此，如何開發(fā)一條科學(xué)合理、簡(jiǎn)便易行的工藝技術(shù)路線，實(shí)現(xiàn)苦杏仁油、苦杏仁蛋白和苦杏仁苷的全利用，已成為苦杏仁精深加工與綜合利用中亟需解決的難題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種制備苦杏仁提取物的方法。本發(fā)明提供的一種制備苦杏仁提取物的方法，包括如下步驟1)將苦杏仁進(jìn)行干燥，使所述苦杏仁的水分活度為0. 10-0. 70，得到干燥后的苦杏仁；2)在保持所述干燥后的苦杏仁的水分活度為0. 10-0. 70的條件下，將所述干燥后的苦杏仁粉碎至10-120目，得到粉碎后的苦杏仁；3)在保持所述粉碎后的苦杏仁的水分活度為0. 10-0. 70的條件下，提取所述粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到所述苦杏仁油和苦杏仁粕；4)用質(zhì)量百分濃度為50% -95%的乙醇水溶液對(duì)所述苦杏仁粕進(jìn)行分離提取，得到苦杏仁苷和苦杏仁蛋白；所述提取步驟中，溫度為5-60°C ；所述苦杏仁提取物選自a、b和c中的三種、任意兩種或任意一種，其中，所述a為所述步驟幻所得苦杏仁油，所述b為所述步驟4)所得苦杏仁苷，所述c為所述步驟4)所得苦杏仁蛋白。該方法的步驟1)干燥步驟中，干燥方式選自曬干、風(fēng)干、烘干、凍干和脫水劑干燥中的至少一種。所述烘干可為常壓或真空烘干，所述常壓烘干溫度可為50°C、時(shí)間可為48 小時(shí)，所述真空烘干的真空度可為0. 09MPa，溫度可為40°C，時(shí)間可為2小時(shí)；各種常用的凍干方法均適用。所述脫水劑干燥方法中，脫水劑選自甲醇、乙醇、甘油、葡萄糖和食鹽中的至少一種，優(yōu)選乙醇。該步驟中，苦杏仁的水分活度可為0. 40-0. 60,0. 40-0. 53,0. 40-0. 50、 0. 50-0. 60,0. 50-0. 53 或 0. 53-0. 60。所述步驟幻中，所述干燥后的苦杏仁的水分活度可為0.40-0. 60、0. 40-0. 53、 0. 40-0. 50,0. 50-0. 60,0. 50-0. 53 或 0. 53-0. 60。所述步驟幻提取步驟中，提取方法選自有機(jī)溶劑萃取、超臨界(X)2流體萃取和壓榨提取中的至少一種。所述有機(jī)溶劑萃取方法中，所述有機(jī)溶劑選自正己烷、環(huán)己烷和植物油抽提溶劑中的至少一種，優(yōu)選植物油抽提溶劑，該植物油抽提溶劑是按照國家標(biāo)準(zhǔn)GB16629-2008制備所得溶劑。所述粉碎后的苦杏仁與所述有機(jī)溶劑的用量比為IKg 1-8L， 優(yōu)選IKg 3-4L。所述超臨界CO2流體萃取中，CO2的壓力為25-50MPa，優(yōu)選35MPa，溫度為35-60°C，優(yōu)選42°C，時(shí)間為20-200min，優(yōu)選140min。所述壓榨萃取方法中，壓力為 20-60MPa,優(yōu)選45MPa，溫度為20_65°C，優(yōu)選55°C。該步驟中，粉碎后的苦杏仁的水分活度可為 0. 40-0. 60,0. 40-0. 53,0. 40-0. 50,0. 50-0. 60,0. 50-0. 53 或 0. 53-0. 60。所述步驟4)中，提取溫度優(yōu)選為45°C，時(shí)間為70-110min，具體可為70-80min、 70-90min、80-90min、90-110min或80_110min ；該步驟中，所用乙醇水溶液的質(zhì)量百分濃度可為 50-80%,50-70%,50-65%,50-60%,60-80%,60-70%,60-65%,65-80%,65-70%^； 70-80% ；所述分離提取的步驟為a)將所述苦杏仁粕于質(zhì)量百分濃度為50% -95%的乙醇水溶液中進(jìn) 行回流提取， 收集提取液；b)將所述步驟a)得到的提取液減壓濃縮后，于無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，干燥后得到所述苦杏仁苷和提取完苦杏仁苷的粗品，再將所述提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥后得到所述苦杏仁蛋白。該分離提取的步驟b)減壓濃縮步驟中，壓力為20_100kPa，時(shí)間為20-120min，溫度為20-80°C;所述干燥步驟中，溫度為80-140°C，時(shí)間為l_4h ；所述真空干燥步驟中，真空度為 50-120kPa，優(yōu)選 75-80kPa，時(shí)間為 40_180min，優(yōu)選 90_120min，溫度為 20_80°C，優(yōu)選 50-60 "C。由于苦杏仁苷易被苦杏仁苷酶分解，因此，降低苦杏仁油、苦杏仁苷和苦杏仁蛋白分離提取過程中的苦杏仁苷酶活性是實(shí)現(xiàn)三者全利用的關(guān)鍵。在苦杏仁粉碎和杏仁油萃取時(shí)，通過控制水分活度以降低苦杏仁苷酶的活性，適宜的水分活度為0. 10-0. 70 ；繼而在苦杏仁苷和苦杏仁蛋白分離提取時(shí)，通過控制乙醇濃度和操作溫度來降低苦杏仁苷酶活性并防止苦杏仁蛋白過度變性，乙醇濃度以50%-95%、操作溫度不超過60°C為適宜。本發(fā)明提供的方法，實(shí)現(xiàn)了苦杏仁苷、苦杏仁油和苦杏仁蛋白的全利用，為苦杏仁精深加工與綜合利用奠定了基礎(chǔ)。
圖1為苦杏仁苷酶的水解催化作用。圖2為苦杏仁苷的HPLC譜圖，其中，a為苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)樣品的HPLC譜圖，b為實(shí)施例1制備所得苦杏仁苷的HPLC譜圖。圖3為用HPLC方法測(cè)定苦杏仁苷純度時(shí)所用標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。下述方法如無特別說明，均為常規(guī)方法。所述測(cè)定方法如無特別說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中，苦杏仁油均采用索氏抽提法測(cè)定，苦杏仁苷均采用高效液相色譜法測(cè)定，苦杏仁蛋白均采用凱氏定氮法測(cè)定。其中，測(cè)定苦杏仁苷時(shí)所用高效液相色譜的檢測(cè)條件均如下所示色譜柱SunfireTMC18(250mmX4. 6mm，5ym)；流動(dòng)相甲醇和水以體積比30 70混勻而得的混合液；流速lml/min ；檢測(cè)波長210nm ；柱溫30°C ；進(jìn)樣量10μ 1 ；分離度 1. 2nm，所用標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3所示，回歸方程為y = 8946. 4x_30118，y為峰面積，χ為苦杏仁苷濃度，單位為yg/ml，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.9998。實(shí)施例1、1)將苦杏仁IOOg用曬干的方法進(jìn)行干燥，使該苦杏仁的水分活度為0.70，得到干燥后的苦杏仁；按照索氏抽提法對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁油進(jìn)行測(cè)定，采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁苷進(jìn)行測(cè)定，按照凱氏定氮法對(duì)作為原料的苦杏仁中的蛋白進(jìn)行測(cè)定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的質(zhì)量百分含量分別為45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步驟1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度為0. 70的條件下，將該干燥后的苦杏仁粉碎至10目，得到粉碎后的苦杏仁96. Sg;3)在保持步驟2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度為0. 70的條件下，在50°C下用有機(jī)溶劑提取該粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油42. 4g和苦杏仁粕51. Sg ； 所用有機(jī)溶劑為正己烷；該步驟2)所得粉碎后的苦杏仁與有機(jī)溶劑正己烷的用量比為 IKg 3L ；按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、氣味、滋味鑒定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及揮發(fā)物含量測(cè)定法、GB/T 5530-2005動(dòng)植物油脂酸值和酸度測(cè)定、GB/T 15688-2008動(dòng)植物油脂中不溶性雜質(zhì)含量的測(cè)定以及GB/T5538-2005動(dòng)植物油脂過氧化值測(cè)定，對(duì)精煉后的苦杏仁油進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁油澄清透明，水分及揮發(fā)物的質(zhì)量百分含量為0. 08%，不溶性雜質(zhì)的質(zhì)量百分含量為0.05%，酸值(KOH)為 0. 32mg/g，過氧化值為 0. 27mmol/kg。4)用質(zhì)量百分濃度為60%的乙醇水溶液對(duì)步驟3)所得苦杏仁粕進(jìn)行分離提取， 得到苦杏仁苷2. 68g和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)47. 58g，完成苦杏仁的提取；該分離提取步驟中，溫度為45°C，時(shí)間為80min。該分離提取的具體步驟為a)將步驟3)所得苦杏仁粕于質(zhì)量百分濃度為60%的乙醇水溶液中進(jìn)行回流提取，收集提取液；該回流提取步驟中，溫度為45°C，時(shí)間為SOmin ；b)將步驟a)得到的提取液減壓濃縮(壓力為20kPa，時(shí)間為120min，溫度為20°C ) 后，添加適量無水乙醇，室溫靜置析晶24h后，再在10°C用無水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶(室溫靜置析晶步驟所得晶體與無水乙醇的用量比為IKg 20L)，并用無水乙醇洗滌后，再于120°C干燥2小時(shí)后得到苦杏仁苷2. 68g和提取完苦杏仁苷的粗品，再將該提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度為80kPa，干燥時(shí)間為120min，溫度為60°C)后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)47. 58g。由上可知，該方法所得苦杏仁提取物為步驟3)所得苦杏仁油、步驟4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)。由上可知，按照該實(shí)施例提供的方法進(jìn)行苦杏仁的提取，苦杏仁油和苦杏仁苷的提取率分別為92. 6%和82. 46%。對(duì)步驟4)所得苦杏仁苷用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如圖2所示，該苦杏仁苷的純度為95.6%。按照凱氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的測(cè)定方法，分別對(duì)步驟4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白 )中蛋白的質(zhì)量百分含量為65.5%，脂肪的質(zhì)量百分含量為0.8%，水分的質(zhì)量百分含量為7.5%。實(shí)施例2、1)將苦杏仁IOOg用20mL脫水劑乙醇進(jìn)行脫水，使苦杏仁的水分活度為0. 53，得到干燥后的苦杏仁；按照索氏抽提法對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁油進(jìn)行測(cè)定，采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁苷進(jìn)行測(cè)定，按照凱氏定氮法對(duì)作為原料的苦杏仁中的蛋白進(jìn)行測(cè)定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的質(zhì)量百分含量分別為45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步驟1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度為0. 53的條件下，將該干燥后的苦杏仁粉碎至120目，得到粉碎后的苦杏仁94. 52g ；3)在保持步驟2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度為0.53的條件下，在42°C下用超臨界CO2流體萃取的方法提取該粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油43. 7g和苦杏仁粕50. 96g ；該超臨界CO2流體萃取步驟中，CO2的壓力為35MPa，溫度為42°C，時(shí)間為 140min。按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、氣味、滋味鑒定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及揮發(fā)物含量測(cè)定法、GB/T 5530-2005動(dòng)植物油脂酸值和酸度測(cè)定、GB/T 15688-2008動(dòng)植物油脂中不溶性雜質(zhì)含量的測(cè)定以及GB/T5538-2005動(dòng)植物油脂過氧化值測(cè)定，對(duì)精煉后的苦杏仁油進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁油澄清透明，水分及揮發(fā)物的質(zhì)量百分含量為0.06%，不溶性雜質(zhì)的質(zhì)量百分含量為0.04%，酸值(KOH)為 0. 80mg/g，過氧化值為 0. 38mmol/kg。4)用質(zhì)量百分濃度為80%的乙醇水溶液對(duì)步驟3)所得苦杏仁粕進(jìn)行分離提取， 得到苦杏仁苷2. 45g和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)49. 27g，完成苦杏仁的提??；該分離提取的具體步驟為a)將步驟3)所得苦杏仁粕于質(zhì)量百分濃度為80%的乙醇水溶液中進(jìn)行回流提取，收集提取液；該提取步驟中，溫度為45°C，時(shí)間為llOmin。b)將步驟a)得到的提取液減壓濃縮(壓力為IOOkPa,時(shí)間為20min，溫度為50°C ) 后，添加適量無水乙醇，室溫靜置析晶24h后，再在10°C用無水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶(室溫靜置析晶步驟所得晶體與無水乙醇的用量比為IKg 20L)，并用無水乙醇洗滌后，再于120°C干燥2小時(shí)后得到苦杏仁苷2. 45g和提取完苦杏仁苷的粗品，再將該提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度為50kPa，，干燥時(shí)間為180min，溫度為80°C)后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)49. 27g。由上可知，該方法所得苦杏仁提取物為步驟3)所得苦杏仁油、步驟4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)。由上可知，按照該實(shí)施例提供的方法進(jìn)行苦杏仁的提取，其中苦杏仁油和苦杏仁苷的提取率分別為95. 42%和75. 38%。
對(duì)步驟4)所得苦杏仁苷用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，所得譜圖與圖2無實(shí)質(zhì)性差另Ij，可知該苦杏仁苷的純度為96. 1%。按照凱氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的測(cè)定方法，分別對(duì)步驟4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦 杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)中蛋白的質(zhì)量百分含量為65.9%，脂肪的質(zhì)量百分含量為0.71%， 水分的質(zhì)量百分含量為8. 2%。實(shí)施例3、1)將苦杏仁IOOg用凍干的方法進(jìn)行干燥，使苦杏仁的水分活度為0.40，得到干燥后的苦杏仁；該凍干步驟中，先使物料預(yù)凍至-40°C，然后開啟真空泵，使真空度在20-40Pa 進(jìn)行真空凍干操作，當(dāng)物料溫度接近室溫時(shí)凍干完成。按照索氏抽提法對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁油進(jìn)行測(cè)定，采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁苷進(jìn)行測(cè)定，按照凱氏定氮法對(duì)作為原料的苦杏仁中的蛋白進(jìn)行測(cè)定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的質(zhì)量百分含量分別為45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步驟1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度為0. 40的條件下，將干燥后的苦杏仁粉碎至60目，得到粉碎后的苦杏仁93. 78g；3)在保持步驟2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度為0.40的條件下，在55°C下用壓榨的方法提取該粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油40. 85g和苦杏仁粕 58. 96g ；該壓榨萃取步驟中，壓力為45Mpa，時(shí)間為55min。按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、氣味、滋味鑒定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及揮發(fā)物含量測(cè)定法、GB/T 5530-2005動(dòng)植物油脂酸值和酸度測(cè)定、GB/T 15688-2008動(dòng)植物油脂中不溶性雜質(zhì)含量的測(cè)定以及GB/T5538-2005動(dòng)植物油脂過氧化值測(cè)定，對(duì)精煉后的苦杏仁油進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁油澄清透明，水分及揮發(fā)物的質(zhì)量百分含量為0.04%，不溶性雜質(zhì)的質(zhì)量百分含量為0.06%，酸值(KOH)為 0. 55mg/g，過氧化值為 0. 32mmol/kg。4)用質(zhì)量百分濃度為70%的乙醇水溶液對(duì)步驟3)所得苦杏仁粕進(jìn)行分離提取， 得到苦杏仁苷2. 06g和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)48. 64g，完成苦杏仁的提?。辉摲蛛x提取的具體步驟為a)將步驟3)所得苦杏仁粕于質(zhì)量百分濃度為70%的乙醇水溶液中進(jìn)行回流提取，收集提取液；該提取步驟中，溫度為45°C，時(shí)間為80min。b)將步驟a)得到的提取液減壓濃縮(壓力為60kPa，時(shí)間為70min，溫度為70°C ) 后，添加適量無水乙醇，室溫靜置析晶24h后，再在10°C用無水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶(室溫靜置析晶步驟所得晶體與無水乙醇的用量比為IKg 20L)，并用無水乙醇洗滌后，再于120°C干燥2小時(shí)后得到苦杏仁苷2. 06g和提取完苦杏仁苷的粗品，再將該提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度為120kPa，干燥時(shí)間為40min，溫度為20°C )后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)48. 64g。由上可知，該方法所得苦杏仁提取物為步驟3)所得苦杏仁油、步驟4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)。由上可知，按照該實(shí)施例提供的方法進(jìn)行苦杏仁的提取，其中苦杏仁油和苦杏仁苷提取率分別為89. 19%和62. 38%。 對(duì)步驟4)所得苦杏仁苷用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，所得譜圖與圖2無實(shí)質(zhì)性差另U，可知該苦杏仁苷的純度為95. 7%。按照凱氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的測(cè)定方法，分別對(duì)步驟4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)中蛋白的質(zhì)量百分含量為66.2%，脂肪的質(zhì)量百分含量為0.85%， 水分的質(zhì)量百分含量為7.9%。實(shí)施例4、1)將苦杏仁IOOg用烘干的方法進(jìn)行干燥，使該苦杏仁的水分活度為0.60，得到干燥后的苦杏仁；該烘干步驟中，溫度為50°C，時(shí)間為48h ；按照索氏抽提法對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁油進(jìn)行測(cè)定，采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁苷進(jìn)行測(cè)定，按照凱氏定氮法對(duì)作為原料的苦杏仁中的蛋白進(jìn)行測(cè)定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的質(zhì)量百分含量分別為45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步驟1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度為0. 60的條件下，將該干燥后的苦杏仁粉碎至80目，得到粉碎后的苦杏仁95. 42g ；3)在保持步驟2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度為0.60的條件下，在42°C下用超臨界CO2流體萃取的方法提取該粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油43. Sg和苦杏仁粕55. 12g ；該超臨界CO2流體萃取步驟中，CO2的壓力為35MPa，溫度為42°C，時(shí)間為 140min。按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、氣味、滋味鑒定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及揮發(fā)物含量測(cè)定法、GB/T 5530-2005動(dòng)植物油脂酸值和酸度測(cè)定、GB/T 15688-2008動(dòng)植物油脂中不溶性雜質(zhì)含量的測(cè)定以及GB/T5538-2005動(dòng)植物油脂過氧化值測(cè)定，對(duì)精煉后的苦杏仁油進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁油澄清透明，水分及揮發(fā)物的質(zhì)量百分含量為0.05%，不溶性雜質(zhì)的質(zhì)量百分含量為0.04%，酸值(KOH)為 0. 76mg/g，過氧化值為 0. 35mmol/kg。4)用質(zhì)量百分濃度為50%的乙醇水溶液對(duì)步驟3)所得苦杏仁粕進(jìn)行分離提取， 得到苦杏仁苷2. 26g和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)50. 08g，完成苦杏仁的提取；該分離提取的具體步驟為a)將步驟3)所得苦杏仁粕于質(zhì)量百分濃度為50%的乙醇水溶液中進(jìn)行回流提取，收集提取液；該提取步驟中，溫度為45°C，時(shí)間為70min。b)將步驟a)得到的提取液減壓濃縮(壓力為IOOkPa,時(shí)間為20min，溫度為20°C ) 后，添加適量無水乙醇，室溫靜置析晶24h后，再在10°C用無水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶(室溫靜置析晶步驟所得晶體與無水乙醇的用量比為IKg 20L)，并用無水乙醇洗滌后，再于120°C干燥2小時(shí)后得到苦杏仁苷2. 26g和提取完苦杏仁苷的粗品，再將該提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度為SOkPa ；干燥時(shí)間為120min，溫度為60°C )后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)50. 08g。由上可知，該方法所得苦杏仁提取物為步驟3)所得苦杏仁油、步驟4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)。
由上可知，按照該實(shí)施例提供的方法進(jìn)行苦杏仁的提取，其中苦杏仁油和苦杏仁苷的提取率分別為95. 6%和69. 53%。對(duì)步驟4)所得苦杏仁苷用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，所得譜圖與圖2無實(shí)質(zhì)性差另U，可知該苦杏仁苷的純度為96. 2%。按照凱氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的測(cè)定方法，分別對(duì)步驟4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)中蛋白的質(zhì)量百分含量為67.2%，脂肪的質(zhì)量百分含量為0.71%， 水分的質(zhì)量百分含量為8.9%。實(shí)施例5、
1)將苦杏仁IOOg用真空烘干的方法進(jìn)行干燥，使該苦杏仁的水分活度為0.50，得到干燥后的苦杏仁；該真空烘干步驟中，真空度為0. 09Mpa，溫度為40°C，時(shí)間為2h ；按照索氏抽提法對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁油進(jìn)行測(cè)定，采用高效液相色譜法測(cè)定對(duì)作為原料的苦杏仁中的苦杏仁苷進(jìn)行測(cè)定，按照凱氏定氮法對(duì)作為原料的苦杏仁中的蛋白進(jìn)行測(cè)定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的質(zhì)量百分含量分別為45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步驟1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度為0. 50的條件下，將該干燥后的苦杏仁粉碎至50目，得到粉碎后的苦杏仁94. 09g ；3)在保持步驟2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度為0. 50的條件下，在50°C下用有機(jī)溶劑提取該粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油44. 4g和苦杏仁粕52. 19g ； 所用有機(jī)溶劑為植物油抽提溶劑；該步驟2)所得粉碎后的苦杏仁與有機(jī)溶劑植物油抽提溶劑的用量比為IKg 4L；按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、氣味、滋味鑒定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及揮發(fā)物含量測(cè)定法、GB/T 5530-2005動(dòng)植物油脂酸值和酸度測(cè)定、GB/T 15688-2008動(dòng)植物油脂中不溶性雜質(zhì)含量的測(cè)定以及GB/T5538-2005動(dòng)植物油脂過氧化值測(cè)定，對(duì)精煉后的苦杏仁油進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁油澄清透明，水分及揮發(fā)物的質(zhì)量百分含量為0.07%，不溶性雜質(zhì)的質(zhì)量百分含量為0.05%，酸值(KOH)為 0. 65mg/g，過氧化值為 0. 29mmol/kg。4)用質(zhì)量百分濃度為65%的乙醇水溶液對(duì)步驟3)所得苦杏仁粕進(jìn)行分離提取， 得到苦杏仁苷2. 44g和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)47. 75g，完成苦杏仁的提??；該分離提取的具體步驟為a)將步驟3)所得苦杏仁粕于質(zhì)量百分濃度為65%的乙醇水溶液中進(jìn)行回流提取，收集提取液；該提取步驟中，溫度為45°C，時(shí)間為80min。b)將步驟a)得到的提取液減壓濃縮(壓力為60kPa，時(shí)間為70min，溫度為50°C ) 后，添加適量無水乙醇，室溫靜置析晶24h后，再在10°C用無水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶(室溫靜置析晶步驟所得晶體與無水乙醇的用量比為IKg 20L)，并用無水乙醇洗滌后，再于120°C干燥2小時(shí)后得到苦杏仁苷2. 44g和提取完苦杏仁苷的粗品，再將該提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度為80kPa，干燥時(shí)間為120min，溫度為60°C )后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)47. 75g。由上可知，該方法所得苦杏仁提取物為步驟3)所得苦杏仁油、步驟4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)。
由上可知，按照該實(shí)施例提供的方法進(jìn)行苦杏仁的提取，其中苦杏仁油和苦杏仁苷的提取率分別為96. 9%和75. 0%。對(duì)步驟4)所得苦杏仁苷用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，所得譜圖與圖2無實(shí)質(zhì)性差另IJ，可知該苦杏仁苷的純度為95.9%。按照凱氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的測(cè)定方法，分別對(duì)步驟4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如下所示該苦杏仁蛋白(苦杏仁濃縮蛋白)中蛋白的質(zhì)量百分含量為65.2%，脂肪的質(zhì)量百分含量為0.61%， 水分的質(zhì)量百分含量為7. 5%。
權(quán)利要求
1.一種制備苦杏仁提取物的方法，包括如下步驟1)將苦杏仁進(jìn)行干燥，使所述苦杏仁的水分活度為0.10-0. 70，得到干燥后的苦杏仁；2)在保持所述干燥脫水后的苦杏仁的水分活度為0.10-0. 70的條件下，將所述干燥后的苦杏仁粉碎至10-120目，得到粉碎后的苦杏仁；3)在保持所述粉碎后的苦杏仁的水分活度為0.10-0. 70的條件下，提取所述粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到所述苦杏仁油和苦杏仁粕；4)用質(zhì)量百分濃度為50%-95%的乙醇水溶液對(duì)所述苦杏仁粕進(jìn)行分離提取，得到苦杏仁苷和苦杏仁蛋白；所述提取步驟中，溫度為5-60°C ；所述苦杏仁提取物選自a、b和c中的三種、任意兩種或任意一種，其中，所述a為所述步驟幻所得苦杏仁油，所述b為所述步驟4)所得苦杏仁苷，所述c為所述步驟4)所得苦杏仁蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)干燥步驟中，干燥方式選自曬干、風(fēng)干、烘干、真空烘干、凍干和脫水劑干燥中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述脫水劑干燥中，脫水劑選自甲醇、乙醇、甘油、葡萄糖和食鹽中的至少一種；所述脫水劑與所述苦杏仁的用量比為 0.05-0. 5L IKg0
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述脫水劑為乙醇；所述脫水劑與所述苦杏仁的用量比為0.2L IKgo
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述步驟幻中，提取選自有機(jī)溶劑萃取、超臨界(X)2流體萃取和壓榨萃取中的至少一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述步驟幻有機(jī)溶劑萃取中，所述有機(jī)溶劑選自正己烷、環(huán)己烷和植物油抽提溶劑中的至少一種，所述粉碎后的苦杏仁與所述有機(jī)溶劑的用量比為IKg 1-8L；所述步驟3)超臨界(X)2流體萃取中，(X)2的壓力為25-50MPa，溫度為35_60°C，時(shí)間為 20-200min ；所述步驟3)壓榨萃取中，壓力為20-60MPa，溫度為20-65°C ；所述步驟4)中，所述乙醇水溶液的質(zhì)量百分濃度為60%，所述回流提取步驟中，溫度為 45°C，時(shí)間為 70-1 IOmin。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述步驟幻有機(jī)溶劑萃取中，所述有機(jī)溶劑為植物油抽提溶劑，所述粉碎后的苦杏仁與所述有機(jī)溶劑的用量比為IKg 3-4L；所述步驟3)超臨界(X)2流體萃取中，(X)2的壓力為35MPa，溫度為42°C，時(shí)間為140min ；所述步驟3)壓榨萃取中，壓力為45MPa，溫度為55°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述的方法，其特征在于所述步驟4)中，所述分離提取的步驟為a)將所述苦杏仁粕于質(zhì)量百分濃度為50%-95%的乙醇水溶液中進(jìn)行回流提取，收集提取液；b)將所述步驟a)得到的提取液減壓濃縮后，于無水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，干燥后得到所述苦杏仁苷和提取完苦杏仁苷的粗品，再將所述提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥后得到所述苦杏仁蛋白。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述步驟b)減壓濃縮步驟中，壓力為 20-100kPa,時(shí)間為20-120min，溫度為20_80°C ；所述干燥步驟中，溫度為80_140°C，時(shí)間為 1-4小時(shí)；所述真空干燥步驟中，真空度為50-120kPa，時(shí)間為40-180min，溫度為20_80°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述步驟b)真空干燥步驟中，真空度為 75-80kPa，時(shí)間為 90_120min，溫度為 50_60°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備苦杏仁提取物的方法。該方法，包括如下步驟1)將苦杏仁進(jìn)行干燥，使所述苦杏仁的水分活度為0.10-0.70；2)粉碎至10目-120目；3)在保持水分活度不變的條件下，提取苦杏仁油；4)用質(zhì)量百分濃度為50％-95％的乙醇水溶液對(duì)苦杏仁粕進(jìn)行分離提取，得到苦杏仁苷和苦杏仁蛋白。該方法在苦杏仁粉碎和苦杏仁油萃取時(shí)，通過控制水分活度以降低苦杏仁苷酶的活性；繼而在苦杏仁苷和苦杏仁蛋白分離提取時(shí)，通過控制乙醇濃度和操作溫度來降低苦杏仁苷酶活性并防止苦杏仁蛋白過度變性，實(shí)現(xiàn)了苦杏仁油、苦杏仁蛋白和苦杏仁苷的全利用，為苦杏仁精深加工與綜合利用奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C11B1/00GK102399622SQ201010278859
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2010年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月9日
發(fā)明者蘭彥平, 周家華, 周連第, 常虹, 王波, 田金強(qiáng) 申請(qǐng)人:北京市農(nóng)林科學(xué)院