專利名稱：：包含α-半乳糖苷酶的清潔組合物的制作方法
技術領域：
：本發明提供包含分離的a-半乳糖苷酶的清潔組合物。在一些特別優選的實施方案中，所述的分離a-半乳糖苷酶包含與來自里氏木霉(7>iV^^/miiflm"〕的a-半乳糖苷酶相關的氨基酸序列。本發明也提供在清潔應用中使用該a-半乳糖苷酶的方法。
背景技術：
：洗滌劑和其他清潔組合物經常包括活性成分的復雜組合。例如，某些清潔產品含有表面活性劑系統、清潔用酶、漂白劑、助洗劑、抑泡劑、懸污劑、脫污劑、熒光增白劑、柔軟劑、分散劑、染料轉移抑制化合物、研磨劑、殺菌劑和香料。盡管當前洗滌劑復雜，不過仍存在難以去除的眾多污漬。發明簡述本發明提供了包含分離的a-半乳糖苷酶的清潔組合物。在一些特別優選的實施方案中，所述的分離a-半乳糖苷酶包含與來自里氏木霉(7>/cAo^rimi"ese/)的a-半乳糖苷酶相關的氨基酸序列。本發明也提供在清潔應用中使用這種a-半乳糖苷酶的方法。在一些實施方案中，所述清潔組合物還包含至少一種表面活性劑。在一些優選的實施方案中，所述清潔組合物具有至少約pH5.0的工作pH。本發明也提供使用本發明的清潔組合物清潔物體的方法。在一些實施方案中，該a-半乳糖苷酶具有與里氏木霉a-半乳糖苷酶至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約98%同一性的氨基酸序列。在其他一些實施方案中，該a-半乳糖苷酶與里氏木霉a-半乳糖苷酶免疫學交叉反應。在一些實施方案中，本發明的清潔組合物是固體(例如，粉劑或片劑)，而在其他實施方案中，它們是液體、凝膠劑、泡沫劑或其他形式。在一些優選的實施方案中，將所述清潔組合物配制為衣物洗滌劑、盤碟洗滌劑或洗衣添加劑。因而在一些優選的實施方案中，所述清潔組合物還包含用于降解非淀粉食物多糖的至少一種額外酶，所述的額外酶包括，但不限于以下酶，如半纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠酶或木聚糖酶。在又一些優選的實施方案中，所述清潔組合物還包含用于降解其他污漬成分的至少一種額外酶，所述的額外酶包括，但不限以下酶，如蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、脂肪酶、角質酶或氧化還原酶。實際上，與本發明的a-半乳糖苷酶組合使用的合適酶包括，但不限于半纖維素酶、過氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質酶、果膠酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂肪加氧酶、木質素酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、黑素酶(malanase)、p-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質酸酶、軟骨素酶、漆酶和淀粉酶或其混合物。在一些實施方案中，使用酶的組合(即"混合物")，所述的組合包括與a-半乳糖苷酶聯合的常規應用的酶，如蛋白酶、脂肪酶、角質酶和/或纖維素酶。本發明也提供用于清潔的方法，包括使所述分離的a-半乳糖苷酶與物體(例如織物或餐具)在適于該a-半乳糖苷酶活性的條件下接觸以清潔此物體的步驟。在一些實施方案中，該a-半乳糖苷酶與此物體在大于約pH5的pH(例如范圍約pH5到約pH6.5、約pH6.5到約pH7.5、約pH7.5到約pH8.5、約pH9.5到約pH10.5或約pH10.5到約pH11.5的pH)下接觸。在一些實施方案中，該物體是含有非淀粉食物多糖(例如半乳甘露聚糖膠，如瓜爾膠或利馬豆膠)的弄臟的物體(例如被食品弄臟的物體)。此類食品包括，但不限于色拉調味料、冰淇淋、高營養奶、奶油凍、色拉調料和巧克力漿。在一些優選的實施方案中，本發明的清潔組合物比不含a-半乳糖苷酶的相同清潔組合物更有效地從物體上去除污漬。附圖簡述與附圖一起閱讀時最佳地理解了以下詳細描述的某些方面。根據常規實踐，應當強調附圖的各種特征不是按比例的。相反，為清晰起見，任意地擴大或縮小各種特征的尺度。附圖中包括以下圖圖1顯示pTrex3g載體的圖譜。圖2顯示了展示AGL1酶分析結果的SDSPAGE凝膠和兩幅曲線圖。圖3顯示了展示AGL2酶分析結果的SDSPAGE凝膠和兩幅曲線圖。圖4顯示了展示AGL3酶分析結果的SDSPAGE凝膠和兩幅曲線圖。圖5是顯示卩-甘露聚糖酶(NSP-20)、AGLl(NSP-6)、AGL2(NSP-8)和AGL3(NSP-9)對巧克力漿污漬的清潔活性的曲線圖。圖6是顯示p-甘露聚糖酶(NSP-20)和AGLl(NSP-6)對色拉調味料污漬的清潔活性的曲線圖。圖7是顯示AGL2(NSP-8)對瓜爾色素污漬的清潔活性的曲線圖。圖8是顯示p-甘露聚糖酶(NSP-20)和AGL2(NSP-8)對巧克力冰淇淋污漬的清潔活性的曲線圖。圖9是顯示在WFK自動洗碗機用洗滌劑(ADW)和AATCC衣物洗滌劑中P-甘露聚糖酶(NSP陽20)、AGL1(NSP畫6)、AGL2(NSP誦8)和AGL3(NSP-9)對瓜爾色素污漬的清潔活性的曲線圖。發明詳述本發明提供包含分離的a-半乳糖苷酶的清潔組合物。在一些特別優選的實施方案中，所述的分離a-半乳糖苷酶包含與來自里氏木霉(rWc/^&a7m""m")的a-半乳糖苷酶相關的氨基酸序列。本發明也提供在清潔應用中使用所述a-半乳糖苷酶的方法。除非另外說明，本發明的實施涉及分子生物學、微生物學和重組DNA中常用的常規技術，它們在本領域技術人員能力范圍內。此類技術是本領域技術人員已知的并且在本領域技術人員熟知的眾多教材和參考書中描述。本文此前和以下提到的全部專利、專利申請、文章和出版物因而通過引用方式明確地并入本文。除非本文另外定義，本文中所用的全部技術術語和科學術語具有如本發明所屬領域的普通技術人員通常所理解的相同意義。盡管與本文所述的那些方法和材料相似或等同的任意方法和材料可用于實施本發明，然而在本文中描述了優選的方法和材料。因此，下文定義的術語通過參考本說明書作為整體進行更完整地描述。另外，如本文中所用，單數"一個(a)"、"一種(an)"和"該(the)"包括復數指代，除非上下文另外清楚地說明。數字范圍包括定義該范圍的數字。除非另外說明，核酸從左至右以5'至3'方向書寫；氨基酸序列從左至右以氨基至羧基方向書寫。應當理解本發明不限于所述的具體方法學、方案和試劑，因為根據本領域技術人員使用它們的背景，它們可以變化。此外，本文中提供的標題不是本發明多個方面或實施方案的限制，其中所述的方面或實施方案可以通過參考作為一個整體的本說明書獲得。因此，下文馬上定義的術語通過參考作為一個整體的本說明書進行更充分地描述。然而，為了促進理解本發明，下文定義了眾多術語。意圖在本說明書通篇范圍內給出的每個最大數字界限包括每個較小的數字界限，如同在本文中明確地寫出此類較小的數字界限。在本說明書通篇范圍中給出的每個最小的數字界限將包括每個較高的數字界限，如同在本文中明確地寫出此類較高的數字界限。在本說明書通篇范圍內給出的每個數字范圍將包括落入這種較寬數字范圍內的每個較窄的數字界限，如同在本文中明確地寫出此類較窄的數字范圍。在相關領域內引用的全部文件通過引用的方式并入本文；任意文件的引用不得解釋為承認該文件是本發明的現有技術。術語"重組"指不天然存在于宿主細胞中的多核苷酸或多肽。重組分子可以含有以非天然存在方式連接的兩個或多個天然存在的序列。重組細胞含有重組多核苷酸或多肽。術語"異源性"指通常不相互連接的元件。例如，若宿主細胞產生一種異源性蛋白質，則該蛋白質是通常不在該宿主細胞中產生的蛋白質。類似地，與異源性編碼序列有效連接的啟動子是與編碼序列有效連接的啟動子，所述編碼序列在野生型宿主細胞中通常不與所述啟動子有效連接。就多核苷酸或蛋白質而言，術語"同源性，，指天然存在于宿主細胞中的多核苷酸或蛋白質。術語"蛋白質，，和"多肽"在本文中可互換地使用。"信號序列"是在蛋白質的氨基端部分存在的氨基酸序列，其促進該蛋白質的成熟形式分泌至細胞外部。信號序列的定義是一種功能性定義。成熟形式的胞外蛋白缺少信號序列，其中所述信號序列在分泌過程期間被切除。"編碼序列"是編碼多肽的DNA區段。術語"核酸"包括單鏈或雙鏈的DNA、RNA及其化學^務飾物。術語"核酸，，和"多核苷酸，，在本文中可互換地使用。"載體"指凈皮設計旨在將核酸導入一個或多個宿主細胞的多核苷酸。載體可以在不同宿主細胞中自主復制并且包括克隆載體、表達載體、穿梭載體、質粒、噬菌體顆粒、表達盒等。如本文中所用的"表達載體"意指包含與合適調控序列有效連接的蛋白質編碼區的DNA構建體，其中所述的合適調控序列能夠實現該蛋白質在合適宿主細胞中表達。此類調控序列可以包括實現轉錄的啟動子、控制轉錄以產生mRNA的任選操縱基因序列、編碼mRNA中合適核糖體結合位點的序列和增強子以及控制轉錄和翻譯終止的序列。"啟動子"是啟動下游核酸轉錄的調節序列。術語"有效連接"指元件的排列，其中所述的排列允許所述元件功能性地關聯。例如，若該啟動子控制編碼序列的轉錄，那么啟動子與該編碼序列有效連接。術語"選擇標記"指能夠在宿主中表達的蛋白質，其中所述的蛋白質使得易于選擇含有所導入核酸或載體的那些宿主。選擇標記的實例包括，但不限于賦予宿主細胞代謝優勢如營養優勢的抗微生物劑(例如潮霉素、博來霉素或氯霉素)和/或基因。術語"衍生"包括術語"源自"、"獲得"、"從......可獲得"和"從......分離"。"非致病"生物是對人不致病的生物。如本文中所用的術語"回收"、"分離"和"分開"指從與其天然結合的至少一種成分中移出的蛋白質、細胞、核酸或氨基酸。如本文中所用，術語"轉化"、"穩定轉化"和"轉基因"用來指細胞時，意指該細胞具有整合至其基因組或作為附加體質粒的非天然性(例如異源性)核酸序列，其中所述的附加體質粒經多個世代仍被保留。如本文中所用，術語"表達"指基于基因的核酸序列產生多肽的過程。該過程包括轉錄和翻譯。在插入核酸序列至細胞的上下文中，術語"導入"意指"轉染"、"轉化，，或"轉導"并且包括將核酸序列摻入真核或原核細胞，其中所述核酸序列可以摻入該細胞的基因組(例如染色體、質粒、質體或線粒體DNA)，轉化成自主性復制子或纟皮瞬時表達(例如，轉染的mRNA)。術語"雜交"指一條核酸鏈通過如本領域已知的威基配對作用與互補性鏈結合的過程。如果一條核酸與參考核酸序列在中等至高嚴格性雜交及洗滌條件下相互特異性雜交，那么認為這兩條序列"選擇性雜交"。中等至高嚴格性雜交是本領域技術人員熟知的。高嚴格性條件的一個實例包括在約42。C于50。/o曱酰胺，5xSSC,5xDenhardt，s溶液，0.5%SDS和100fig/ml變性載體DNA中雜交，隨后在室溫于2xSSC和0.5%SDS中洗滌2次和在42°C于O.lxSSC和0.5%SDS中額外洗滌2次。如本文中所用，"清潔組合物"和"清潔制劑"指在從待清潔的物品(如織物、盤碟、隱形眼鏡、其他固體基質、頭發(香波)、皮膚(月巴皂和霜劑)、牙齒(漱口液、牙膏)等)去除不希望的化合物(如污漬)中使用的組合物。不意圖使本發明限于任何具體制劑，因為該術語包括為具體類型的預期清潔組合物和產品形式(例如，液體劑、凝膠劑、顆粒劑或噴霧劑組合物)所選擇的任意材料/化合物，只要該組合物與此組合物中的主題酶相容即可。清潔組合物材料的具體選擇通過考慮待清潔的表面、物品或織物和針對使用期間清潔條件的所需組合物的形式而輕易地做出。該術語意圖包括，但不限于洗滌劑組合物(例如，液體和/或固體衣物洗滌劑和精細織物洗滌劑；硬質表面清潔制劑，如用于玻璃、木材、陶瓷和金屬柜臺頂部(countertop)和窗戶；地毯清潔劑；烤箱清潔劑、織物清新劑；織物柔軟劑和紡織品與衣物預除斑劑(pre-spotters)以及盤碟洗滌劑)。實際上，除非另外說明，如本文中所用的術語"清潔組合物"包括顆粒、片狀或粉末形式的通用或強效洗滌劑，尤其清潔洗滌劑；液體、凝膠或糊狀形式的通用洗滌劑，尤其強效液體(HDL)型洗滌劑；液體精細織物洗滌劑；盤碟手洗洗滌劑或輕垢盤碟洗滌劑，尤其高泡沫型的那些盤碟洗滌劑；洗碗機洗洗滌劑，包括家用和機構用的多種片狀、顆粒、液體和沖洗輔助型洗碗機洗洗滌劑；液體清潔與消毒劑，包括抗菌性洗手液、清潔棒、漱口液、義齒清潔劑、轎車或毛毯香波、浴室清潔劑；發用香波和護發素；沐浴凝膠與泡沫浴清潔劑和金屬清潔劑；以及清潔助劑如漂白添加劑和"去污棒(stain-stick)"、預處理或衣物洗滌添加劑。如本文中所用，術語"洗滌劑組合物"和"洗滌制劑"用來指為了用在清潔弄臟物體的洗滌介質中所配制的組合物。在具體實施方案中，該術語用來指洗涂織物和/或衣物(例如"衣物洗滌劑")。在備選實施方案中，該術語指其他洗滌劑，如用來清潔盤碟、餐具等的那些洗滌劑(例如"盤碟洗滌劑")。不意圖使本發明限于任何具體洗滌劑制劑或組合物。實際上，在一些實施方案中，除了a-半乳糖苷酶之外，該洗滌劑組合物含有表面活性劑、轉移酶、水解酶、氧化還原酶、助洗劑、漂白劑、漂白激活劑、上藍劑與熒光染料、結塊抑制劑、掩蔽劑、酶激活劑、抗氧化劑和/或增溶劑等。如本文中所用，清潔組合物中的"增強性能，，定義為提高對污漬的清潔作用(例如，去除和/或脫色)。在一些優選的實施方案中，此污漬是半乳甘露聚糖相關的污漬(例如，巧克力漿、色拉調味料、瓜爾膠等)，如通過標準洗滌循環后的常規評價所確定。如本文中所用，術語"硬質表面清潔組合物"指用于清潔硬質表面如地板、墻壁、瓷磚、浴室和廚房固定設施等的洗滌劑組合物。此組合物以任意形式提供，包括，但不限于固體、液體、乳液等。如本文中所用，"餐具洗滌組合物"指用于清潔盤碟的組合物的全部適宜形式，所述的全部適宜形式包括，但不限于粒劑、凝膠劑、乳劑和液體。如本文中所用，"織物清潔組合物"指用于清潔織物的洗滌組合物的全部形式，所述的全部形式包括，但不限于粒劑、液體、凝膠劑、乳劑和才奉劑。如本文中所用，"紡織品"指機織織物，以及適于轉換成或用作紗線、機織織物、針織物和非機織織物的短纖維和長絲。該術語包括由天然纖維及合成(例如人造)纖維制成的紗線。如本文中所用，"紡織品材料"是針對纖維、紗線中間體、紗線、織物和由織物制成的產品(例如衣物和其他物品)的一般術語。如本文中所用，"織物"包括任意的紡織材料。因此，意圖該術語包括衣服，以及織物、紗線、纖維、非織造材料、天然材料、合成材料和任何其他紡織材料。如本文中所用，"a-半乳糖苷酶的有效量"指對于實現具體應用(例如清潔組合物等)中所要求的酶活性為必需的a-半乳糖苷酶的量。這種有效量由本領域技術人員輕易確定并且以眾多因素為基礎，如所用的具體酶變體、清潔應用、該清潔組合物的具體組成和是否需要液態或干態(例如顆粒狀、棒狀)組合物等。術語"a-半乳糖苦酶"和alpha-半乳糖苷酶指水解a-D-半乳糖苷(包括半乳糖寡糖和半乳甘露聚糖)的非還原末端a-D-半乳糖殘基的酶。根據IUBMB酶命名法，本文所述的a-半乳糖苷酶具有如EC3.2.1.22所述的活性。本文所述a-半乳糖苷酶的系統命名是a-D-半乳糖苷半乳糖水解酶。術語"弄臟的物體"指被另一種組合物玷污(例如弄臟)的物體(例如織物或盤碟)。術語"弄臟的物體"包括臟織物，如被含有非淀粉食物多糖的食品弄臟的臟衣物、亞麻布和織物。在某些實施方案中，污漬具有可見的顏色。術語"非淀粉食物多糖，，指在眾多食品(例如沙司、奶油、奶制品、水洪淋、奶油凍、高營養奶和色拉調味料)中作為填料、增稠劑、穩定劑或游離水結合劑使用的非淀粉多糖。瓜爾膠(一種從豆科灌木-瓜爾豆(guarbean)提取的可食用增稠劑)和從角豆樹(carobtree)種子提取的槐豆膠是非淀粉食物多糖的實例。術語"非淀粉食物多糖降解酶"指降解非淀粉食物多糖的酶。示例性酶包括，但不限于半纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠酶、木聚糖酶、p-半乳糖苷酶和a-半乳糖苷酶。術語"半乳甘露聚糖膠"指由含有半乳糖殘基及甘露糖殘基的聚合物組成的植物來源的多糖。瓜爾膠、他拉膠、胡蘆巴膠和槐豆膠是半乳甘露聚糖型膠。術語"工作pH，，指洗滌劑在使用期間的pH。例如，衣物洗滌劑的工作pH是該洗滌劑在洗衣機中洗滌或手工洗滌期間用來洗滌織物時的pH。類似地，盤碟洗滌劑的工作pH是該洗滌劑正在洗碗機或手工洗滌盤碟過程中使用時的pH。在一些實施方案中，將濃縮或固體形式的洗滌劑稀釋或溶解，此后該洗滌劑的pH處在其工作pH。術語"工作濃度"指使用期間洗滌劑中酶的濃度。例如，衣物洗滌劑中酶的工作濃度是該衣物洗滌劑用來在洗衣機中或手工洗滌期間洗滌織物時這種酶的濃度。類似地，盤碟洗滌劑中酶的工作濃度是在洗碗機中或手工洗滌期間使用該盤碟洗滌劑時這種酶的濃度。在一些實施方案中，將濃縮或固體形式的洗滌劑稀釋或溶解，此后洗滌劑中酶的濃度處在其工作濃度。本發明提供包含分離的a-半乳糖苷酶的清潔組合物，其中所述的分離a-半乳糖苷酶包含與里氏木霉a-半乳糖苷酶相關(例如至少約卯％同一性)的氨基酸序列。在一些實施方案中，該清潔組合物包含至少一種表面活性劑。在一些實施方案中，該清潔組合物具有至少約pH5的工作pH。本發明也提供利用本文所提供的清潔組合物清潔物體的方法。在更詳細地描述示例性實施方案之前，應當理解本發明不限于所述的具體實施方案，因為這類實施方案當然可以變化。還應當理解本文所用的術語僅僅旨在描述具體實施方案，而不意圖是限制性的，因為本發明的范圍將僅受所附權利要求的限制。在提供值的范圍的情況下，應當理解除非上下文明確說明，還具體地披露在這個范圍的上限與下限之間的每個中間值至該下限的十分之一單位。本發明中包括在所述范圍內任一所述值或中間值與這個所述范圍內任一其他所述值或中間值之間的每個較小范圍。這些較小范圍的上限和下限可以獨立地被包括在該范圍內或排除在外，并且在兩個界限值之任一者、這二者均不包含或均包含在所述較小范圍內的情況下的每個范圍也包括在本發明中，受所述范圍中任何具體排除。在所述范圍包括所述界限之一者或兩者的情況下，本發明中也包括排除所包括的這些界限中任一者或兩者的范圍。盡管與本文所述的那些方法和材料相似或等同的任意方法和材料可以用于實施或測試本發明，然而現在描述示例性且優選的方法和材料。本文中提到的全部出版物通過引用的方式并入本文，旨在披露并描述與引用的所述出版物相關的方法和/或材料。a-半乳糖苷酶如上文指出，本發明提供包含(X-半乳糖苷酶的清潔組合物。在一些實施方案中，所述a-半乳糖苷酶具有這樣的氨基酸序列，其與野生型里氏木霉a-半乳糖苷酶的氨基酸序列有至少約70。/。、至少約80%、至少約85%、至少約卯％、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%同一性。此類酶的三個實例的氨基酸序列是本領域已知的(參見Margolles-Clark等，Eur.J.Biochem.，240:104-11[1996)。編碼里氏木霉a-半乳糖香酶1、2和3(AGL1、AGL2和AGL3)的mRNA的核苷酸序列以及這些酶的氨基酸序列已經保存在NCBI的GENBANK⑧數據庫，分別是登錄號Z69253(GID:1580815)、Z69254(GID:1580817)和Z69255(GID:1580811)。這些GENBANK⑧數據庫登錄項通過引用的方式完整并入本文，包括其中的核列和蛋白質序列和對這些序列的注釋。超過500種不同a-半乳糖苷酶的氨基酸序列是已知的并且已經保存在NCBI的GENBANK⑧數據庫，包括來自哺乳動物(參見例如，登錄號CAA29232;GID:757912)、植物(參見例如登錄號NP—974447;GID:42572703)和細菌(參見例如登錄號BAB38524;GID:13364578)的那些a-半乳糖苷酶。此外，已知至少5種a-半乳糖苷酶(包括來自人、稻和里氏木霉的那些a-半乳糖苷酶)的原子坐標(見例如，Golubev等，J.MoI.Biol.，339:413-422004)。在a-半乳糖苷酶(包括來自里氏木霉的那些a-半乳糖苷酶)中保守的氨基酸也是已知的(參見例如前文Margolles-Clark等；和NCBI保守結構域登錄號COG3345.2)。在其他一些實施方案中，所述a-半乳糖苷酶在免疫學上與野生型里氏木霉a-半乳糖苷酶相關，用于鑒定所述ot-半乳糖苷酶的方法是分子生物學領域熟知的。意圖使用任意合適方法產生本發明的a-半乳糖苷酶。例如，在一些實施方案中，該酶(例如由革蘭氏陰性生物如大腸桿菌(Eco/,))分泌至周質或(例如由革蘭氏陽性生物(如芽孢桿菌屬(必fl"7/附)和放線菌屬(J"iVi0i^cWes))或真核宿主(例如木霉、曲霉(Js/^rg///ws)、酵母屬G^cc^"i^wj;cM)和畢赤酵母屬(尸iV^Zfl))分泌至胞外空間。在一些實施方案中，通過在里氏木霉宿主細胞中表達融合蛋白產生該a-半乳糖香酶，其中所述的融合蛋白含有與該a-半乳糖苷酶有效連接的信號序列。在這些實施方案的一些中，該a-半乳糖苷酶被分泌至培養基內，其中從所述培養基收獲該a-半乳糖苷酶。所述融合蛋白的信號序列包括促進蛋白質從木霉宿主細胞分泌的任意信號序列。在一些實施方案中，所用信號序列相對于木霉宿主細胞是內源性的，而在其他實施方案中，它是非內源性的。在其他一些實施方案中，它是已知從木霉(Trichodermasp)宿主細胞被高水平分泌的蛋白質的信號序列。此類信號序列包括，但不限于纖維二糖水解酶I、纖維二糖水解酶II、內切葡聚糖酶I、內切葡聚糖酶II、內切葡聚糖酶III、a-淀粉酶、天冬氨酰蛋白酶、葡糖淀粉酶、甘露聚糖酶、糖苷酶和大麥內肽酶B的信號序列{參見例如，Saarelainen，Appl。Environ.Microbiol.,63:4938-494019971)。在一些實施方案中，并且如實施例中進一步描述，該a-半乳糖苷酶利用其自身信號序歹'(即AGL1、AGL2或AGL3信號序列，如前文Margolles-Clark等中所述)進行分泌。在一些實施方案中，該a-半乳糖苷酶利用一種核酸產生，其中所述核酸包含與編碼a-半乳糖苷酶的核酸有效連接的編碼信號序列的核酸，其中所述核酸的翻譯產生了包含a-半乳糖苷酶部分的融合蛋白，所述的a-半乳糖苷酶部分具有N-末端信號序列用于從木霉宿主細胞分泌該a-半乳糖苷酶部分。在一些實施方案中，除信號序列之外，該融合蛋白還含有"栽體蛋白"，其中所述的載體蛋白是里氏木霉宿主細胞內源且被高水平分泌的蛋白質的一部分。合適的載體蛋白包括，但不限于里氏木霉甘露聚糖酶I(Man5A或MANI)、里氏木霉纖維二糖水解酶11(Cel6A或CBHII)(參見例如Paloheimo等，Appl.Environ.Microbiol.，69:7073-7082[2003)或里氏木霉纖維二糖水解酶I(CBHI)的那些載體蛋白。在一些實施方案中，該載體蛋白是包括CBHI核心區和部分CBHI接頭區的截短里氏木霉CBH1蛋白。在一些實施方案中，本發明包括編碼融合蛋白的核酸，其中所述的融合蛋白從氨基端至羧基端含有有效連接的信號序列、載體蛋白和a-半乳糖苷酵。在一些實施方案中，該a-半乳糖苷酶的編碼序列進行密碼子優化，以便在所用宿主細胞中表達該a-半乳糖苷酶。由于列出眾多宿主細胞(包括里氏木霉)中每個密碼子用法的密碼子選擇表是本領域已知的(參見例如Nakamura等，NuclAcidsRes.，28:292[2000)或可容易衍生，故而容易地i殳計此類核酸以產生待表達的a-半乳糖苷酶的氨基酸序列。除了編碼序列外，在一些實施方案中，該核酸還包含對于在宿主細胞中表達所述a-半乳糖苷酶必需的其他元件。例如，在一些實施方案中，該核酸含有用于轉錄編碼序列的啟動子和轉錄終止子。示例性啟動子包括，但不限于里氏木霉cbhl、cbh2、egll、egl2、eg5、xlnl和xln2啟動子或其雜合體或截短形式。例如，在一些實施方案中，該啟動子是里氏木霉cbhl啟動子。合適的終止子包括，但不限于里氏木霉cbhl、cbh2、egll、egl2、eg5、xlnl和xln2終止子和眾多其他終止子，包括例如來自黑曲霉(Aw/ger)或泡盛曲霉(A"HWMor/)葡糖淀粉酶基因(參見前文Nunberg等[1984和前文Boel等1984D、構巢曲霉(/^/7erg,7/附附V/"/"附)鄰氨基苯甲酸合酶基因、米曲霉(Aspergillusoryzae)TAKA淀粉酶基因或構巢曲霉trpC(Punt等，Gene56:117-124[19871)的終止子。在一些實施方案中，啟動子和/或終止子相對于木霉宿主細胞是天然的，而在其他實施方案中，它們是非內源性的。在一些實施方案中，里氏木霉宿主細胞用于表達所述a-半乳糖苷酶。在一些優選的實施方案中，遺傳地修飾里氏木霉細胞以減少該細胞內源的分泌性蛋白質表達。在一些實施方案中，該細胞含有已經被缺失或失活的一個或多個天然基因，尤其編碼分泌性蛋白質的基因。例如，在一些實施方案中，缺失或失活一個或多個蛋白酶編碼基因(例如天冬氨酰蛋白酶編碼基因；參見Berka等，Gene86:153-162[1990和美國專利號6，509，171)或纖維素酶編碼基因。在一些實施方案中，木霉宿主細胞是在cMJ、cM2和"〃與"/2基因中含有失活性缺失的里氏木霉宿主細胞，如WO05/001036中描述。在一些實施方案中，上述核酸存在于木霉宿主細胞的核基因組內，而在其他實施方案中，它存在于該木霉宿主細胞內復制的質粒中。意圖使用眾多合適技術(例如電穿孔、細胞核顯微注射、轉導、轉染例如脂質轉染法介導和DEAE-Dextrin介導的轉染、與磷酸鉀DNA沉淀物孵育、DNA包被的微粒的高速轟擊和原生質體融合)的任一項技術將所述核酸導入木霉宿主細胞。常見轉化技術是本領域已知的(見例如美國專利號6,022,725;美國專利號6，103，4卯；美國專利號6，268，328和美國公開專利申請20060041113、20060040353、20060040353及20050208623,全部文獻通過引用的方式并入本文)。在一些實施方案中，制備用于轉化的木霉包括從真菌菌絲體制備原生質體。(參見Campbell等，Curr.Genet.16:53-56[1989)。在一些實施方案中，菌絲體從萌發的營養性孢子獲得。在一些實施方案中，一旦a-半乳糖苷酶被分泌至培養基，則使用本領域已知的任一便利方法(例如通過沉淀法、離心法、親和法、過濾法和任、可其他方法)回收該a-半乳糖苷酶。例如，使用親和層析法(Tilbeurgh等，FEBSLett.，16:215[1984)；離子交換層析法(Goyal等，Biores.Technol"36:31991];Fliess等，Eur.J.Appl.Microbiol.Biotechnol.,17:314[1983；Bhikhabhai等，J.Appl.Biochem.6:336[1984；和Ellouz等，Chromatography396:307[1987)，包括使用高分辨力材料的離子交換法(Medve等，(J.ChromatographyA808:153[1998；疏水相互作用層析法(Tomaz和Queiroz，J.ChromatographyA865:123[1999；雙相分配法(Brumbauer等，(Bioseparation7:287[1999)；乙醇沉淀法；反相HPLC;在;圭膠或陽離子交換樹脂(例如DEAE)上層析法；層析聚焦法；SDS-PAGE;硫酸銨沉淀法；或凝膠過濾法(使用例如861^36乂0-75)。在一些實施方案中，該a-半乳糖苷酶不從培養基的其他成分中純化出來即使用。在這些實施方案的部分中，所述培養基僅進行濃縮并且隨后不將所述蛋白質從生長培養基的其他成分中進一步純化出來即使用，或不作任何其他修飾即4吏用。清潔組合物本發明提供包含上述a-半乳糖苷酶的清潔組合物。在一些實施方案中，該清潔組合物是織物清潔組合物(即衣物洗滌劑)、表面清潔組合物、盤碟清潔組合物或自動洗碗機用洗滌劑組合物。示例性清潔組合物的配方在通過引用方式并入本文的WO0001826中極詳細地描述。在一些實施方案中，主題清潔組合物(例如衣物或盤碟洗涂劑)含有約1%到約80%(例如約5%到約50%)(按重量計)的至少一種表面活性劑(例如非離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑或兩性離子表面活性劑或其任意混合物)。示例性表面活性劑包括，但不限于烷基^酸鹽(ABS),包括直鏈烷基苯磺酸鹽和直鏈烷基磺酸鈉、烷基苯氧基聚乙氧基乙醇(例如，壬基苯氧基乙氧基化物或壬基酚)、二乙醇胺、三乙醇胺和單乙醇胺。在洗滌劑、尤其在衣物洗滌劑中可以存在的示例性表面活性劑于美國專利號3,664,961、3，919，678、4，222，905和4,239,659中描述。在一些實施方案中，所述清潔組合物為固體(例如處于粉末或片狀形式)或液體形式。在一些額外的實施方案中，所述清潔組合物還包含至少一種緩沖劑(例如碳酸鈉、碳酸氫鈉)、洗滌劑助洗劑、漂白劑、漂白激活劑、酶、酶穩定劑、增泡劑、抑制劑、防黯劑、防蝕劑、懸污劑、脫污劑、殺菌劑、pH調節劑、非助洗劑堿性源、螯合劑，有機或無機填充劑、溶劑、水溶助長劑、熒光增白劑、染料、香料等。在一些實施方案中，該清潔組合物作為衣物洗滌添加劑在使用前與洗滌劑組合。在一些實施方案中，主題清潔組合物含有另外的非淀粉食物多糖降解酶(例如半纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠酶、木聚糖酶或果膠酸裂合酶)和任選的含有一種或多種額外的酶如蛋白酶，如枯草蛋白酶和/或SSI蛋白質、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、角質酶、脂肪酶、氧化還原酶等，用于去除其他污漬。中，所述的其他成分包括其他活性成分、載體、水溶助長劑、加工助劑、染料或色素、用于液體制劑的溶劑等。在需要額外起泡作用的一些實施方案中，將增泡劑如Cnrd6鏈烷醇酰胺摻入所述組合物，一般以約1%-約10%的水平。在一些實施方案中，該洗滌劑組合物包含水和/或其他溶劑作為載體。適于使用低分子量伯醇或仲醇，例如甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇。一元醇優選用于增溶表面活性劑，不過也可使用多元醇，如含有約2個-約6個碳原子和約2個-約6個羥基的那些多元醇(例如1,3-丙二醇、乙二醇、甘油和1，2-丙二醇)。在一些實施方案中，該組合物包含約5%-約卯％(—般約10%-約50%)的此類載體。在一些實施方案中，如此配制本文的洗滌劑組合物，從而在含水清潔操作中^f吏用期間，洗滌水具有約5.0-約11.5的pH。因此，制成品通常在這個范圍內配制。用于控制pH位于推薦使用水平上的技術包括使用緩沖劑、堿、酸等，并且是本領域技術人員熟知的。在一些實施方案中，該清潔組合物是一種自動餐具洗滌洗滌劑，其具有約pH9.0-約pH11.5、約pH9.0隱約pH9.5、約pH9.5-約pH10.0、約pH10.0-約pH10.5、約pH10.5-約pH11.0或約pH11.0-約pH11.5的工作pH。在一些其他實施方案中，該清潔組合物是一種液體衣物洗滌劑，其具有約pH7.5-約pH8.5、約pH7.5-約pH8.0或約pH8.0-約pH8.5的工作pH。在一些其他實施方案中，該清潔組合物是一種固體衣物洗滌劑，其具有約pH9.5-約pH10.5、約pH9.5-約pH10.0或約pH10.0-約pH10.5的工作pH。本文所述的清潔組合物要求有效量的所述(X-半乳糖苷酶。在一些實施方案中，該a-半乳糖苷酶在所述清潔組合物中的工作濃度是約0.01ppm(百萬分之，w/v)-約100ppm、約0.01ppm-約0.05ppm、約0.05ppm國約0.1ppm、*々0.1ppm-纟々0.5ppm、纟々0.5ppm-約1ppm、纟々1ppm-纟々5ppm、約5ppm-約10ppm或約10ppm-約100ppm。多種漂白化合物如過碳酸鹽、過硼酸鹽等也可在本發明的清潔組合物中使用。在一些實施方案中，這些漂白化合物一般以按重量計約1%-約15。/。的水平存在。在一些額外的實施方案，此類組合物也含有本領域已知的漂白激活劑(例如四乙酰基乙二胺、壬酰氧基苯磺酸鹽等)。使用水平一般是按重量計約1%-約10%。多種脫污劑，尤其陰離子寡酯型脫污劑、多種螯合劑，尤其氨基膦酸鹽和乙二胺二琥珀酸鹽、多種粘質污漬去除劑，尤其乙氧基化四亞乙基戊胺、多種分散劑，尤其聚丙烯酸鹽和聚天冬氨酸鹽、多種增白劑，尤其陰離子增白劑、多種抑泡劑，尤其硅氧烷和仲醇、多種織物柔軟劑，尤其蒙脫石等也可在本發明的組合物中以按重量計約1%-約35%的水平使用。標準配方是本領域技術人員熟知的。酶穩定劑也可在本發明的清潔組合物中使用。此類穩定劑包括，但不限于丙二醇(優選約1%-約10%)、甲酸鈉(優選約0.1%-約1%)和曱酸釣(優選約0.1%-約1%)。在一些實施方案中，硬質表面清潔組合物和織物清潔組合物還包含按重量計約5%-約50%水平的多種助洗劑。常見助洗劑包括1-10孩i米沸石、多羧酸鹽如檸檬酸鹽和氧聯二琥珀酸鹽、層疊硅酸鹽、磷酸鹽等。其他常用助洗劑列于標準配方中。其他任選成分包括螯合劑、粘質污漬去除/防再沉積劑、聚合物分散劑、漂白劑、增白劑、抑泡劑、溶劑和美觀劑。本發明的清潔組合物可在合適的清潔方法中使用。在一些實施方案中，該清潔方法包括使分離的a-半乳糖苷酶與物體(例如織物或盤碟)在適于所述a-半乳糖苷酶活性的條件下接觸以清潔該物體，其中所述的a-半乳糖苷酶包含與里氏木霉a-半乳糖苷酶相關的氨基酸序列。根據所用清潔組合物的工作pH，將所述a-半乳糖苷酶與該物體在例如約pH5-約6.5、約pH6.5-約7.5、約pH7.5-約8.5、約pH9.5-約10.5或約pH10.0-約11.5的pH下接觸。在一些實施方案中，該物體是弄臟的物體并且在一些其他實施方案中，該物體被含有非淀粉食物多糖如半乳甘露聚糖膠(例如，瓜爾膠或利馬豆膠等)的食品弄臟。在一些其他實施方案中，該物體被巧克力漿、冰淇淋或色4立調P未料弄臟。本文所述的清潔組合物比不含a-半乳糖苷酶的同等清潔組合物在去除某些污漬(例如因含有半乳甘露聚糖多糖的食品所致的污漬)方面更有效。在一些實施方案中，本發明的清潔組合物與不含a-半乳糖苷酶的其他同等清潔組合物相比，在污漬去除方面更有效。使用基于標準反射計的測定法，例如實施例4中描述的那種測定法，本發明的一些清潔組合物比不含a-半乳糖苷酶的同等清潔組合物多去除至少約20%、至少約40%、至少約60%、至少約80%或至少約90%的污漬和/或4吏其褪色。實驗以下實施例向本領域的普通技術人員提供如何產生并使用本發明的完整公開和描述，并且不意圖限制本發明的范圍，同時它們也不意圖表示下文實驗是所進行的全部或僅有實驗。已經努力確保所用數字(量、溫度等)的準確性，但是應當考慮到一些實驗誤差和偏差。除非另外說明，份數是重量份，分子量是重量平均分子量，溫度以^l氏度計，并且壓力是處于大氣壓或接近大氣壓。實施例1a-半乳糖苷酶基因的克隆通過PCR使用以下引物擴增來自里氏木霉菌抹QM6A的agll、agl2、agl3和manl基因的編碼序列:_<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>并使用GATEWAYTM重組系統(InvitrogenCorporation,Carlsbad,CA)克隆至pTREX3g載體。pTREX3g在WO05/001036的實施例6中詳細描述。實施例2里氏木霉細胞的轉化全部載體通過粒子轟擊法轉移至最初從RL-P37(Sheir-Neiss等，Appl.Microbiol.Biotechnol.，20:46-53[1984；美國專利號4，797，361)衍生的四重缺失(AcAM、AcM2、和Aeg/2)里氏木霉菌林(WO05/001036)或1A52/^r4-菌林中。制備來自待轉化的木霉菌林的孢子混懸液(約5xl08個孢子/ml)。將100nl200fil孢子懸浮液涂布在MM乙酰胺培養基的平板中心上(MM乙酰胺培養基具有以下組成0.6g/L乙酰胺；1.68g/LCsCl;20g/L葡萄糖；20g/LKH2PO4;0.6g/LCaCl2.2H20;1ml/L1000x微量元素溶液；20g/LNoble瓊脂；pH5.5。lOOOx孩吏量元素溶液含有5.0g/LFeS04'7H20、1.6g/LMnS04H20、1.4g/LZnS04'7H20和1.0g/LCoCl26H20)。隨后4吏該孢子混懸液在MM乙酰胺培養基的表面上干燥。木霉細胞的生物射彈轉化使用來自Bio-Rad(Hercules，CA)的BiolisticPDS-1000/氦粒子送遞系統，按照制造商說明書完成(參見例如，WO05/001036和美國專利z^開號2006/0003408)。實施例3酶活性分析在培養瓶中培育含有agll、agl2、agl3和manl的載體的細胞培養物并且使用SDSPAGE分析來自每種培養物的上清液。對于每種培養上清液，使用4-硝苯基-a-D-吡喃半乳糖苷作為底物在Mcllvaine緩沖液中測量a-半乳糖苷酶活性。酶活性測定法使用Sigma方案進行(a-半乳糖苷酶的酶測定法，Sigma產品信息；還參見McCleary，Meth.Enzymol.，160:627-632[1988；和來自Megazyme公司黑曲霉和瓜爾豆的a-半乳糖苷酶技術數據頁)，如下簡述。首先，0.10ml底物添加至16x125mm玻璃管，所述玻璃管隨后在7jC浴中通過溫育至少5分鐘加熱至想要的溫度。隨后，將O.IOml稀釋的酶以15秒間隔添加至每只管內并渦旋混合酶與底物。該混合物在試驗的預定溫度(30。C、37。C、40。C、45。C、60。C和75。C)下溫育5分鐘。為終止反應，以相同的15秒間隔添加3.0ml的2%碳酸鈉溶液。使溶液混合并從水浴取出所述管以在410nm下讀數。在這些實驗中，將所述酶稀釋液在每個pH下(pH2.1、2.5、3、4、5、6、7和8的Mcllvaine;pH4.5的0.1M乙酸鈉)的適宜緩沖液中制備為10mM。初步試驗的酶底物是4-硝苯基-a-D-吡喃半乳糖苷(Sigma，目錄號877，MW:301.25)。在每個試驗中包括空白，所述空白包含底物、終止試劑和酶空白(使用對硝基苯酚作為底物參照)。圖2-4中所示的SDS-PAGE凝膠表明對于每種上清液，產生了尺寸大致正確的蛋白質。在所用的分析條件下，AGL1(其具有預測分子量45.7kDa)具有pH5的最適pH和約60°C的最適溫度(圖2)，AGL2(其具有預測分子量79.5kDa)具有pH4-5的最適pH和約60°C的最適溫度(圖3)并且AGL3(其具有預測分子量66.3kDa)具有pH2-4的最適pH、在pH4.5下約60°C的最適溫度和在pH2.5下約45°C的最適溫度(圖4)。實施例4木霉a-半乳糖苷酶蛋白清潔活性的圓盤測定分析法使用以下方法測試AGL1、AGL2和AGL3清潔被巧克力漿、色拉調味料和瓜爾膠色素弄臟的小塊布樣的能力。用帶有色素的色拉調味料(STCCFTCS-6)、巧克力漿(STCEMPA160)和瓜爾膠色素(STCCFTCS-43)弄臟棉質小塊布樣(TestFabrics,Inc.WestPittston,PA，USA)。巧克力冰淇淋圓形物(IOcm棉質小塊布樣上的4cm污漬)從Warwick-EquestLimited,Consett，CountyDurham,England獲得。用于微量平板測定法的小塊布樣用配備5/8英寸沖壓裁剪機的B型紡織品沖床(textilePunchPressModelB)切成15cm圓形物(圓盤)。將單個圓盤置于24孔微量平板(Costar3526)的各個孔內。將每升含有1.5mlAATCCHDL(標準液體洗滌劑)洗滌劑、50mMHepes緩沖液(pH7.4)的1ml洗滌溶液添力口至各孑L。用正壓式禾多液器(positivedisplacementpipe"e)添加120jig稀釋的酶。所述AATCC2003標準液體洗滌劑含有12%直鏈烷基磺酸鹽、8%脂肪醇乙氧基化物、8%丙二醇、1.2%檸檬酸、4%脂防酸和4%氫氧化鈉，余量是水。對照孔不含酶。該微量平板用其塑料蓋蓋好并在37。C溫育，伴以100轉/分鐘柔和轉動。416小時后，上清液通過抽吸去除并且每孔用1.5mlDulbecco'sPBS(pH7.3)洗滌3次并用1.5ml蒸餾水洗滌3次。每個圓盤從各孔取出并在空氣中干燥過夜。圓盤以目視方式檢查并且用在標準白色色板(standardwhitetile)上校正過的Minolta反射計CR-200分析。用數據的標準差百分數計算平均L值，每個對照和試驗樣品通常進行一式四份。使用強效洗滌劑(HDD)或自動餐具洗滌機(ADW)洗滌劑的實驗利用無磷酸鹽的pH10的0.015%~0.1%AATCCHDD和無礴酸鹽的0.015%~0.1%WFKADW洗滌劑B型進行。無增白劑的AATCC1993標準參考強效洗滌劑含有18%直鏈烷基磺酸鹽、2%直鏈脂肪醇乙氧基化物和碳酸鈉至100%、25%ZeoliteA、18%碳酸鈉、0.5%硅酸鈉、22.13%硫酸鈉、10。/。水分(moisture)和共聚物、酶或羧甲基纖維素的空間(6.28%)。無增白劑且無磷酸鹽的WFK自動餐具洗滌機洗滌劑B型含有30。/n無水檸檬酸鈉、12%馬來酸鈉鹽、一水合過硼酸鈉、2%四乙酰乙二胺、25%二硅酸鈉、2。/o直鏈脂肪醇乙氧基化物和無7JC碳酸鈉至100%。在以下實施例和附圖中，含有AGL1的蛋白質提取物稱作NSP-6，含有AGL2的蛋白質提取物稱作NSP-8并且含有AGL3的蛋白質提取物稱作NSP-9。如圖5中所示，使用微量平板圓盤法，NSP-6(a-半乳糖苷酶1)、NSP-8(a-半乳糖苷酶2)和NSP-9(a-半乳糖苷酶3)在0.15%AATCC強效液體洗滌劑中對巧克力漿污漬顯示優異的清潔作用。NSP-20是一種p-CWDE，是細胞壁降解酶的縮寫。圖6顯示在0.022%的AATCC強效液體洗滌劑(pH7.4)中a-半乳糖苷酶1對色拉調味料污漬的清潔作用。圖7顯示低濃度(0.5~1.0ppm)的NSP-8(a-半乳糖苷酶2)在0.15%AATCC強效液體洗滌劑中對瓜爾膠色素技術性污漬產生明顯的清潔作用。實施例5木霉a-半乳糖苷酶蛋白質清潔活性的滌垢儀分析涂垢儀研究使用了維持在37°C的7243S型6缽(pot)滌垢儀(U.S.Testing，Co.Inc.Hoboken，N.J.)。攪拌速度設為100轉/分鐘。將在棉質小塊布樣上的6個巧克力冰淇淋圓形物添加至1升含有6gpg硬度(稀釋自含有1.735M氯化鈞和0.67M氯化鎂的15000gpg硬度l&存溶液)和50mMHepes緩沖液(pH7.4)的AATCCHDL洗滌劑。圖8顯示a-半乳糖苷酶2(NSP-8)在滌垢儀條件下以1ppm酶在30分鐘內清潔了冰淇淋小塊布樣。圖9顯示全部三種a-半乳糖苷酶并且尤其a-半乳糖苷酶2(NSP-8)在微量平板圓盤法中表現了明顯的清潔作用(如實施例中所描述，在0.015%自動餐具洗滌機洗滌劑(WFK)(pH10.5)或在0.015%AATCC固體衣物洗滌劑(pH10.2)中以20ppm配制時)。以上實施例證實里氏木霉a-半乳糖苷酶從被色拉調味料、巧克力漿、水淇淋和瓜爾膠色素污漬弄臟的棉質小塊布樣上有效去除污漬。對瓜爾膠技術性污漬的活性可以作為清潔作用的基礎，因為色拉調味料和冰洪淋經常含有瓜爾膠作為一種成分。測試的a-半乳糖苷酶在遠超預期的pH范圍內表現良好。本發明的所述方法與系統的多種修改和變化對于本領域技術人員將是顯而易見而不背離本發明的范圍和精神。雖然本發明已經結合具體的優選實施方案加以描述，然而應當理解本發明不應過分地受限于這類具體實施方案。實際上，本領域和/或相關領域的技術人員顯而易見的用于實施本發明的所述方式的多種^"改在本發明的范圍以內。已經描述了本發明的示例性實施方案，對于本領域技術人員而言顯而易見的是可以對所披露的實施方案進行多種修改，并且此類修改應當屬于本發明的范圍。本領域技術人員容易認識到本發明充分適于實施所述目標并且獲得所提及的目的和優勢，以及其中固有的那些目的和優勢。本文所述的組合物和方法是代表性的并且不意圖作為本發明范圍的限制。本領域技術人員容易知道可以對本文披露的本發明進行各種替換和修改而不脫離本發明的范圍和精神。本文中示例性描述的本發明可以在缺少本文中未具體披露的任意要素、限制的情況下實施。已經使用的術語和表述作為描述性而非限制性術語使用，并且在使用此類術語和表述時不意圖排除所示或所述特性或其部分的任何等同方案，不過應當意識到在要求保護的本發明范圍內可能存在多種修改。因此，應當理解盡管本發明已經通過示例性實施方案和任選特性具體披露，然而本領域技術人員可以對本文所披露概念進行修改和變型，并且認為此類修改和變型在如所附權利要求書所定義的本發明范圍內。本發明已經在本文中廣義且一般性地加以描述。在該一般性公開的每個更窄的種類和亞類組也形成本發明的部分。這包括對本發明的一般描述使用限制條件或否定性限制條件，從所述類屬中排除任一主題，不管所排除的材料是否在本文中具體提及。權利要求1.包含分離的α-半乳糖苷酶的清潔組合物，所述α-半乳糖苷酶包含與里氏木霉(Trichodermareesei)的α-半乳糖苷酶有至少約90％同一性的氨基酸序列。2.權利要求l的清潔組合物，且還包含至少一種表面活性劑。3.權利要求1的清潔組合物，其中所述的清潔組合物具有大于約pH5的工作pH。4.權利要求l的清潔組合物，其中所述的清潔組合物是固體。5.權利要求l的清潔組合物，其中所述的清潔組合物是液體。6.權利要求l的清潔組合物，其中所述的清潔組合物包含衣物洗滌劑。7.權利要求1的清潔組合物，其中所述的清潔組合物包含盤碟洗滌劑。8.權利要求l的清潔組合物，且還包含一種或多種額外的酶。9.權利要求8的清潔組合物，其中所述額外的酶選自半纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠酶、淀粉酶、木聚糖酶、膠質裂合酶、蛋白酶、纖維素酶、角質酶、脂肪酶和氧化還原酶。10.權利要求1的清潔組合物，其中所述的分離a-半乳糖苷酶與里氏木霉的a-半乳糖苷酶免疫學交叉反應。11.一種清潔方法，包括將分離的a-半乳糖苷酶與物體在適于所述a-半乳糖苷酶活性的條件下接觸以清潔所述物體，其中所述的a-半乳糖苷酶包含與里氏木霉oi-半乳糖苷酶有至少約90%同一性的氨基酸序列。12.權利要求11的方法，其中所述的a-半乳糖苷酶與所述物體在大于約pH5的pH下接觸。13.權利要求ll的方法，其中所述物體是被弄臟的物體。14.權利要求13的方法，其中所述被弄臟的物體包含非淀粉食物多糖。15.權利要求14的方法，其中所述的非淀粉食物多糖是半乳甘露聚糖膠。16.權利要求14的方法，其中所述的非淀粉食物多糖;IJ^爾膠或利馬豆膠。17.權利要求13的方法，其中所述被弄臟的物體被巧克力漿、冰淇淋或色拉調味料弄臟。18.權利要求ll的方法，其中所述的物體是織物。19.權利要求ll的方法，其中所述的物體是餐具。全文摘要本發明提供了包含分離的α-半乳糖苷酶的清潔組合物。在一些特別優選的實施方案中，所述分離α-半乳糖苷酶包含與來自里氏木霉(Trichodermareesei)的α-半乳糖苷酶相關的氨基酸序列。本發明也提供在清潔應用中使用所述α-半乳糖苷酶的方法。文檔編號C11D3/386GK101663384SQ200880006095公開日2010年3月3日申請日期2008年2月26日優先權日2007年2月28日發明者A·J·保羅斯,H·C·麥克唐納申請人:丹尼斯科美國公司