皮膚護(hù)理組合物的制作方法

專利名稱：皮膚護(hù)理組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適用于人皮膚的局部組合物和它們?cè)诟纳破つw狀態(tài)和外觀中的用途。
背景技術(shù)：
皮膚會(huì)通過皮膚病、環(huán)境危害(風(fēng)、空調(diào)、集中供暖)或正常衰老過程(時(shí)間衰老)而衰退，而皮膚曝曬可以加速衰老過程(光衰老)。近些年來，越來越需要美容方法，用于改善長皺紋的、衰老的和/或光損傷的皮膚的外觀和狀態(tài)，特別是用于逆轉(zhuǎn)、減少或預(yù)防可見體征。
消費(fèi)者逐漸在尋找“抗衰老”的美容產(chǎn)品，以逆轉(zhuǎn)、治療或延緩時(shí)間衰老與光衰老皮膚的可見體征，例如皺紋、條紋、松垂、色素沉著過多和老年斑。
膠原是主要的基質(zhì)皮膚蛋白，已知賦予皮膚以拉伸強(qiáng)度。本領(lǐng)域還已知皮膚中的膠原水平因衰老和/或光損傷皮膚而顯著降低。很多研究已經(jīng)顯示，皮膚中的I型膠原水平隨著衰老和/或隨著光損傷增加而減少，例如Lavker，R.《皮膚病學(xué)研究雜志》(1979)，73，79-66；Griffiths等《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》(1993)329，530-535。皮膚中膠原水平的降低相應(yīng)地與皮膚拉伸強(qiáng)度減少有關(guān)，導(dǎo)致皺紋和松弛。
本領(lǐng)域熟知的是視黃酸具有有效的抗衰老活性，誘導(dǎo)光損傷皮膚的皮膚修復(fù)。已經(jīng)顯示用視黃酸對(duì)皮膚進(jìn)行局部治療后，通過皮膚中新的膠原的沉積和合成，引起皺紋消除和皮膚修復(fù)(例如Griffiths等《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》(1993)329，530-535)。廣泛接受的是通過使用視黃酸提高皮膚中的膠原水平來加強(qiáng)皮膚基質(zhì)，可提供抗衰老/皮膚修復(fù)的效果。
J05271046描述了一種皮膚組合物，它含有具有18至22個(gè)碳和兩條或多條不飽和鍵的不飽和脂肪酸，例如亞油酸和花生四烯酸，和多元酚。該組合物可用于使皮膚有光澤。
EP A 0709084已經(jīng)描述了富含巖芹酸的油在皮膚護(hù)理組合物中作為增濕劑的用途。
脂肪酸、包括巖芹酸在美容制劑中用于處理頭發(fā)的用途是已知的。EP-A-116439描述了養(yǎng)發(fā)劑，它包括脂肪酸，例如巖芹酸、亞油酸、亞麻酸、油酸和花生四烯酸，用于減輕頭皮屑和刺激頭發(fā)生長。
我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，通過將包含兩種脂質(zhì)組分的特定組合的美容組合物涂在皮膚上，可以有效治療和預(yù)防正常的、但不滿足美容要求的皮膚狀態(tài)，這些狀態(tài)是由時(shí)間衰老或光衰老引起的，例如皺紋、條紋、松垂、色素沉著過多和老年斑。
上面所討論的技術(shù)既沒有公開選自巖芹酸或二十二碳六烯酸的第一脂質(zhì)組分以及第二脂質(zhì)組分的特定協(xié)同組合，也沒有公開這樣一種特定組合用于治療衰老皮膚的用途。
發(fā)明概述按照本發(fā)明的第一方面，提供了一種局部組合物，它包含(a)第一脂質(zhì)組分，其選自巖芹酸和/或二十二碳六烯酸和/或其衍生物；(b)第二脂質(zhì)組分，它是α亞型過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體的激活劑和/或其衍生物和/或其混合物；和(c)皮膚病學(xué)上可接受的賦形劑。
按照本發(fā)明的第二方面，提供了一種美容方法，它提供至少一種皮膚護(hù)理的效果，選自治療/預(yù)防長皺紋、松垂、干燥、衰老和/或光損傷的皮膚；提高皮膚中的膠原沉積，提高皮膚中的核心蛋白聚糖(decovin)產(chǎn)生，增強(qiáng)組織修復(fù)；改善皮膚的肌理、平滑性和/或堅(jiān)固性；該方法包括將上述局部組合物涂于皮膚。
本發(fā)明還涵蓋本發(fā)明組合物用于提供至少一種皮膚護(hù)理效果的用途，這些效果選自治療/預(yù)防長皺紋、松垂、衰老和/或光損傷的皮膚；提高皮膚中的膠原沉積，提高皮膚中的核心蛋白聚糖產(chǎn)生，增強(qiáng)組織修復(fù)；改善皮膚的肌理、平滑性和/或堅(jiān)固性。
按照本發(fā)明的更進(jìn)一步方面，提供了第一脂質(zhì)組分與第二脂質(zhì)組分結(jié)合在美容局部組合物中用于提供至少一種美容皮膚護(hù)理效果的用途，其中第一脂質(zhì)組分選自巖芹酸和/或二十二碳六烯酸和/或其衍生物，第二脂質(zhì)組分是α亞型過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體的激活劑和/或其衍生物和/或其混合物，這些效果選自治療/預(yù)防長皺紋、松垂、衰老和/或光損傷的皮膚；提高皮膚中的膠原沉積，提高皮膚中的核心蛋白聚糖產(chǎn)生，增強(qiáng)組織修復(fù)；改善皮膚的肌理、平滑性和/或堅(jiān)固性。
本發(fā)明的組合物、方法和用途因而提供抗衰老的效果，促進(jìn)皮膚平滑和柔軟，提高彈性，減少或延緩皮膚皺紋和衰老，改善皮膚色澤。實(shí)現(xiàn)了外觀、肌理和狀態(tài)的一般性改善，特別是關(guān)于皮膚的光澤、清晰和一般的年輕外觀。
本文所用的術(shù)語“治療”在其范圍內(nèi)包括減少、延緩和/或預(yù)防由正常衰老過程導(dǎo)致的上述正常的、但不滿足美容要求的皮膚狀態(tài)。延緩或減少了衰老的可見體征，例如皺紋、條紋和/或松垂。一般來說，通過預(yù)防或減少皮膚長皺紋和增加柔韌性、堅(jiān)固性、平滑性、柔軟性和彈性，提高了皮膚的質(zhì)量，改善了它的外觀和肌理。根據(jù)本發(fā)明的組合物、方法和用途可以用于治療已經(jīng)處于長皺紋、衰老和/或光損傷狀態(tài)的皮膚，或者用于治療年輕皮膚，以預(yù)防或減少由正常的衰老/光衰老過程引起的上述不希望的改變。
發(fā)明的詳細(xì)說明巖芹酸和二十二碳六烯酸巖芹酸(以下稱為PA)是單不飽和長鏈(C18)脂肪酸，結(jié)構(gòu)式為CH3(CH2)10CH＝CH(CH2)4COOH。
二十二碳六烯酸(以下稱為DHA)是多不飽和長鏈(C22)脂肪酸，結(jié)構(gòu)式為CH3(CH2CH＝CH)6CH2CH2COOH。
本發(fā)明還包括游離酸的衍生物，其因而包含巖芹酸/二十二碳六烯酸部分。優(yōu)選的衍生物包括從酸的羧基取代衍生的那些，例如酯(例如甘油三酯、甘油單酯、甘油二酯、磷酸酯)、酰胺(例如神經(jīng)酰胺衍生物)、鹽(例如堿金屬與堿土金屬鹽、銨鹽)；和/或從C18/C22碳鏈取代衍生的那些，例如α羥基和/或β羥基衍生物。
在甘油三酯衍生物的情況下，包括甘油主鏈上的PA/DHA取代基的所有位置異構(gòu)體。甘油三酯必須含有至少一個(gè)PA/DHA部分。例如，在甘油主鏈上的三個(gè)可酯化的位置中，1與2位可以被PA/DHA酯化，3位被另一種脂質(zhì)酯化，或者，甘油主鏈可能在1與3位被PA/DHA酯化，2位被另一種脂質(zhì)酯化。
富含巖芹酸甘油三酯的油因而也適用于本發(fā)明。這樣的油是商業(yè)上可得到的，包括歐芹子油、胡蘿卜子油、小茴香子油、蔓荊子油、芫荽子油、細(xì)葉芹子油、 蒿植物油和芹菜油。
富含DHA甘油三酯的油也適用于本發(fā)明。這樣的油是商業(yè)上可得到的，包括魚油和它們的濃縮物。
無論術(shù)語“巖芹酸”或“PA”或“二十二碳六烯酸”或“DHA”用在本說明書中何處，都不言而喻的是也包括其包含PA/DHA部分的衍生物?！癙A/DHA部分”指的是PA/DHA衍生物的PA/DHA脂肪?；糠?。
按照本發(fā)明所要采用的PA和/或DHA在局部組合物中的含量為有效量。正常情況下，活性成分的總含量占組合物的0.0001至50重量％。更優(yōu)選地，含量為0.01％至10％，最優(yōu)選為0.1％至5％，目的是以最小成本產(chǎn)生最大效果。若第一脂質(zhì)是DHA或DHA衍生物，則優(yōu)選地它的含量水平小于3重量％，以避免任何潛在的氣味問題。
α亞型過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體的脂質(zhì)激活劑本申請(qǐng)中的術(shù)語“α亞型過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體的激活劑”或“PPARα激活劑”表示激活核受體PPARα的脂質(zhì)。
過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體是已知的核激素受體家族，具有三種不同組織分布的亞型α、β、γ。α亞型過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體(以下稱為PPARα)存在于皮膚中。PPARα的脂質(zhì)激活劑是本領(lǐng)域所熟知的，例如亞油酸。已經(jīng)顯示它們體外加速皮膚表皮屏障的發(fā)育(Hanley等(1997)《臨床研究雜志》100，705-712)。不過，本領(lǐng)域沒有公開或提示PPARα激活劑在美容組合物中具有提供美容抗衰老治療的用途。
能夠證明PPAR激活、因而能夠鑒定PPAR的脂質(zhì)激活劑的一種既定的和普遍接受的方法是報(bào)告基因測定。因而在下列實(shí)施例1所述報(bào)告基因測定中，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易把作為PPARα激活劑的脂質(zhì)鑒定為那些導(dǎo)致熒光素酶或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(以下稱為CAT)表達(dá)的化合物——完整的方案由Kliewer等提供于(1992)《自然》358，771-774。
因而，如果脂質(zhì)化合物在這種體外報(bào)告基因測定中獲得通過，也就是說它在下列實(shí)施例1所述報(bào)告基因測定中導(dǎo)致熒光素酶或CAT表達(dá)，那么它被視為脂質(zhì)PPARα激活劑，即使它在本文中沒有具體提到。在優(yōu)選的發(fā)明實(shí)施方式中，脂質(zhì)PPARα激活劑是促進(jìn)報(bào)告基因激活至少2倍于背景水平的化合物，因?yàn)樗鼈兪歉行У目顾ダ蟿?br> 滿足報(bào)告基因測定的脂質(zhì)PPARα激活劑實(shí)例包括C10-C18飽和脂肪酸，它們優(yōu)選地是支鏈的、或者如果是直鏈的話優(yōu)選地是衍生的(例如用羥基衍生)、C10-C20單不飽和脂肪酸和C10-C22多不飽和脂肪酸。
脂肪酸可以是直鏈或支鏈的、飽和或不飽和的，并且可以是取代的，例如羥基化的，例如α羥基或β羥基衍生物。任意這些酸的相應(yīng)的醇、甘油三酯和磷脂也適用于本發(fā)明。優(yōu)選的衍生物包括從酸的羧基取代衍生的那些，例如酯(例如甘油三酯、甘油單酯、甘油二酯、磷酸酯)、酰胺(例如神經(jīng)酰胺衍生物)、鹽(例如堿金屬與堿土金屬鹽、銨鹽)。在甘油三酯衍生物的情況下，包括甘油主鏈上的所有位置異構(gòu)體。
富含脂肪酸甘油三酯的油因而也適用于本發(fā)明。這樣的油是商業(yè)上可得到的，包括芫荽子油(富含巖芹酸)、歐芹子油(富含巖芹酸)、月見草油(富含γ亞麻酸)、琉璃苣子油(富含γ亞麻酸)、牛油樹脂(富含油酸和亞油酸)、魚油及其濃縮物(富含DHA和EPA)、cramb油(富含芥酸)、亞麻子油(富含α亞麻酸)、杏仁油(富含油酸)和棉子油(富含亞油酸)。
按照本發(fā)明優(yōu)選的PPARα激活劑是12-羥基硬脂酸、順式十八碳四烯酸、反式-7-十八碳烯酸、順式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸、順式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸、共軛的亞油酸(c9，t11)、columbinic acid、linolenelaidic acid、反蓖麻油酸、十八碳四烯酸、2-羥基硬脂酸、α-亞麻酸、花生四烯酸、順式-11，14-二十碳二烯酸、共軛的亞油酸(t10，c12)、共軛的亞油酸(t9，t11)、共軛的亞油酸(c9，t11與t10，c12的50∶50混合物)、芫荽酸、反亞油酸、單巖芹酸、巖芹酸、蓖麻油酸、硬脂炔酸、側(cè)柏提取物和反式-11-十八碳烯酸。
進(jìn)一步適合的優(yōu)選的PPARα激活劑包括順式-11，14，17-二十碳三烯酸、順式-5-二十碳烯酸、順式-8，11，14-二十碳三烯酸、十六碳三烯酸、棕櫚油酸、反巖芹酸、反式反式法呢醇、順式-13，16-二十二碳二烯酸、順式-11-十八碳烯酸、順式-11-二十碳烯酸、順式-13，16，19-二十二碳三烯酸、順式-13-十八碳烯酸、順式-15-十八烷酸、順式-7，10，13，16-二十二碳四烯酸、反油酸、γ-亞麻酸、香葉酸、香葉基geranoic acid、亞油酸、油酸、巖芹醇、植烷酸、pinolenicacid、反式-13-十八碳烯酸、十三烷基水楊酸(TDS)。
進(jìn)一步適合的PPARα激活劑種類包括植物提取物，例如生原禪寧A(紅三葉草植物雌激素)、chromolaena odorata提取物、石榴可皂化的水解提取物、buglossoide(十八碳四烯酸植物提取物)和zanthalene(四川胡椒提取物)。
按照本發(fā)明，因在與巖芹酸和/或DHA(或其衍生物)結(jié)合時(shí)產(chǎn)生優(yōu)異的抗衰老作用而特別優(yōu)選的脂質(zhì)選自下組多不飽和脂肪酸，例如亞油酸、共軛的亞油酸、亞麻酸、二十碳四烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)(關(guān)于DHA，僅當(dāng)本發(fā)明組合物的第一種組合物是PA或其衍生物時(shí))；單不飽和脂肪酸，例如巖芹酸(關(guān)于PA，僅當(dāng)本發(fā)明組合物的第一種組合物是DHA或其衍生物時(shí))、反油酸、油酸、芥酸；和二酸，例如十六碳二酸。
也應(yīng)當(dāng)不言而喻的是，根據(jù)本發(fā)明的組合物所含有的PPARα激活劑理想地以“活性”形式存在；也就是說，它不是被酯化的。照此，盡管上文指的是諸如油等天然來源的原料，不過用在根據(jù)本發(fā)明的組合物中的PPARα激活劑優(yōu)選地不是激活劑的未加工的、酯化形式，而是富含未酯化PPARα激活劑的原料來源，或者是其中的酯化形式已經(jīng)水解釋放脂肪酸的原料來源。
第二脂質(zhì)組分在本發(fā)明組合物中的用量占組合物重量的0.0001至50重量％。更優(yōu)選地，用量為0.01％至10％，最優(yōu)選為0.1％至5％，目的是以最小成本產(chǎn)生最大效果。
皮膚病學(xué)上可接受的賦形劑按照本發(fā)明所使用的組合物還包含皮膚病學(xué)/美容上可接受的賦形劑，充當(dāng)活性成分的稀釋劑、分散劑或載體。賦形劑可以包含常用在皮膚護(hù)理產(chǎn)品中的原料，例如水、液體或固體潤膚劑、硅油、乳化劑、溶劑、濕潤劑、增稠劑、粉劑、推進(jìn)劑等。
賦形劑通常將占組合物的5至99.9重量％，優(yōu)選為25至80重量％，并且在沒有其他美容助劑的存在下，可以構(gòu)成組合物的其余部分。
可選的有益于皮膚的原料和美容助劑除了活性成分以外，還可以包括其他特定的有益于皮膚的活性成分，例如防曬劑、皮膚光亮劑、皮膚鞣劑。賦形劑還可以進(jìn)一步包括助劑，例如抗氧化劑、香料、遮光劑、防腐劑、著色劑和緩沖劑。
產(chǎn)品的制備、劑型、用途和包裝為了制備用在本發(fā)明方法中的局部組合物，可以采用常用的制備皮膚護(hù)理產(chǎn)品的方法。一般按常規(guī)方式將活性組分結(jié)合在皮膚病學(xué)/美容上可接受的載體中。首先可以將活性組分適當(dāng)溶解或分散在一部分水或另一種所要結(jié)合在組合物中的溶劑或液體中。優(yōu)選的組合物是水包油或油包水或水包油包水型乳劑。
組合物可以是常規(guī)的皮膚護(hù)理產(chǎn)品的劑型，例如霜?jiǎng)?、凝膠或洗劑、膠囊劑等。組合物也可以是所謂的“洗去”產(chǎn)品的劑型，例如沐浴或淋浴凝膠，可能含有活性成分的釋放系統(tǒng)，以促進(jìn)在清洗期間附著在皮膚上。最優(yōu)選地，產(chǎn)品是一種“留置”產(chǎn)品；也就是說，在產(chǎn)品涂于皮膚之后，無需立即進(jìn)行有意的清洗步驟。
組合物可以按常規(guī)方式包裝在任意適合的形式中，例如罐、瓶、管、roll-ball等。本發(fā)明組合物能夠包裝成由兩種獨(dú)立的組合物組成的試劑盒也是可以想象的，一種含有第一脂質(zhì)組分巖芹酸和/或DHA，另一種含有本發(fā)明的第二脂質(zhì)組分，它們同時(shí)或連續(xù)涂于皮膚。
根據(jù)本發(fā)明的組合物還可以配制成適合于口服攝食的劑型，例如膠囊劑、片劑或類似物。
本發(fā)明的方法可以在一日之內(nèi)對(duì)需要治療的皮膚實(shí)施一次或多次。通常將在3至6個(gè)月后可以見到皮膚外觀的改善，這取決于皮膚狀態(tài)、用在本發(fā)明方法中的活性組分濃度、組合物的用量及其涂用頻率。一般來說，從適合的容器或涂藥器中將少量組合物涂于皮膚，例如0.1至5ml，用手或手指或適合的裝置攤開和/或搓揉至皮膚內(nèi)。之后可以可選地進(jìn)行清洗步驟，這取決于組合物是否配制成“留置”或“洗去”產(chǎn)品。
為了使本發(fā)明更易理解，給出下列實(shí)施例，僅供例證。
實(shí)施例實(shí)施例1鑒定激活PPARα的脂質(zhì)的測定法能夠證明PPAR激活、因而能夠鑒定PPAR的激活劑的一種既定的和普遍接受的方法是報(bào)告基因測定。方案如Kliewer等(1992)《自然》358，771-774所述。
該測定是對(duì)內(nèi)源性PPAR表達(dá)水平低的細(xì)胞系(例如COS或CV-1)進(jìn)行的。將這些細(xì)胞平板接種在多孔板中，同時(shí)用4種哺乳動(dòng)物表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。這些質(zhì)粒含有編碼下列之一的DNAa)有關(guān)PPAR，在這種情況下是α亞型PPAR；b)類視黃醇核受體(以下稱為RXR)，在皮膚的情況下是α亞型RXR；c)報(bào)告基因，例如熒光素酶或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)，在其啟動(dòng)子內(nèi)插入有PPAR應(yīng)答元件；d)組成型表達(dá)的報(bào)告基因，例如β-半乳糖苷酶，它對(duì)PPAR激活無應(yīng)答。
通過測量PPAR應(yīng)答性報(bào)告基因(熒光素酶或CAT)的表達(dá)，測定外源性試劑對(duì)轉(zhuǎn)染后的RXR/PPAR復(fù)合體的激活作用。這是利用商業(yè)上可得到的試劑盒來實(shí)現(xiàn)的，例如熒光素酶測定系統(tǒng)(Promega)或CAT酶測定系統(tǒng)(Promega)。利用商業(yè)上可得到的試劑盒，例如β-半乳糖苷酶測定系統(tǒng)(Promega)，類似地測量PPAR無應(yīng)答性報(bào)告基因的表達(dá)，作為對(duì)照用于測定轉(zhuǎn)染效率，由此使測定規(guī)格化。
按照這種方式，導(dǎo)致熒光素酶或CAT表達(dá)、優(yōu)選地導(dǎo)致熒光素酶或CAT表達(dá)增加最少2倍的外源性脂質(zhì)易被鑒定為激活PPARα的脂質(zhì)。
實(shí)施例2本例證明本發(fā)明活性成分的抗衰老效果。
測量人皮膚成纖維細(xì)胞中前膠原-I合成的操作皮膚成纖維細(xì)胞條件性培養(yǎng)基的制備將第2代(P2)原發(fā)性人包皮成纖維細(xì)胞以10000個(gè)細(xì)胞/cm2接種在12孔平板中，在補(bǔ)充有10％胎牛血清的Dulbeccos改性Eagles培養(yǎng)基(DMEM)中，在5％二氧化碳與4％氧的氣氛中供養(yǎng)24小時(shí)。這之后，將細(xì)胞用不含血清的DMEM洗滌，然后進(jìn)一步在新鮮的不含血清的DMEM中培養(yǎng)60小時(shí)。然后將成纖維細(xì)胞單細(xì)胞層再次用不含血清的DMEM洗滌。向細(xì)胞中加入試劑和對(duì)照載體，一式三份，最終體積為0.4ml/孔新鮮的不含血清的DMEM，進(jìn)一步培養(yǎng)24小時(shí)。
將這種成纖維細(xì)胞條件性培養(yǎng)基立即分析，或者迅即冷凍在液氮中，貯存在-70℃下，用于以后的分析。然后計(jì)數(shù)細(xì)胞，隨后使來自斑點(diǎn)印跡分析的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化為細(xì)胞數(shù)。
皮膚成纖維細(xì)胞條件性培養(yǎng)基中前膠原-I蛋白的斑點(diǎn)印跡測定向來自用載體(作為對(duì)照)或試劑處理后的皮膚成纖維細(xì)胞的條件性培養(yǎng)基樣本中補(bǔ)充20mM二硫蘇糖醇(200mM儲(chǔ)備溶液的1∶10稀釋液)和0.1％十二烷基硫酸鈉(10％儲(chǔ)備溶液的1∶100稀釋液)，充分混合，然后在75℃下培養(yǎng)2分鐘。
將成纖維細(xì)胞以10000個(gè)細(xì)胞/cm2接種在175cm2燒瓶中，供養(yǎng)在上述不含血清的DMEM中，通過凈成纖維細(xì)胞條件性培養(yǎng)基的系列稀釋，產(chǎn)生測定標(biāo)準(zhǔn)。隨后如廠商指導(dǎo)所述，利用來自Bio-Rad的96孔Bio-Dot儀器將測定樣本涂在Immobilon-P轉(zhuǎn)移膜的預(yù)濕潤薄片上，一式三份。每孔使用大約200μl培養(yǎng)基。使培養(yǎng)基在重力作用下通過膜過濾(30分鐘)，然后將膜用PBS(200μl)洗滌兩次。使這些PBS洗液在重力作用下通過膜過濾(2×15分鐘)。
然后將Bio-Dot儀器與真空歧管連接，在抽吸作用下進(jìn)行第三次和最后一次PBS洗滌。將儀器拆開，取出膜，根據(jù)需要迅速切割，然后放置在4℃封閉性緩沖液中過夜。為前膠原-I分析而制備的膜用5％(w/v)脫脂干燥乳粉/0.05％Tween 20的PBS溶液封閉。第二天，將膜用原發(fā)性人前膠原-I抗體(MAB1912；大鼠單克??；Chemicon Int.Inc.，Temecula，CA)的1∶10000稀釋液在室溫下探測2小時(shí)。隨后將膜用TBS/0.05％Tween 20洗滌(3×5分鐘)，然后根據(jù)需要用125I-綴合的抗大鼠片段(Amersham)的1∶1000稀釋液在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)。這之后將Immobilon帶再次用TBS/Tween 20洗滌(3×5分鐘)，然后在室溫下風(fēng)干。
將干燥后的膜包在玻璃紙中，暴露于Molecular Dynamics貯存磷篩達(dá)16-18小時(shí)。在此結(jié)束時(shí)利用ImageQuantTM軟件，用磷成像儀(Molecular Dynamics Phosphorimager SF)掃描暴露篩。利用ImageQuantTM中的量化工具，用計(jì)算機(jī)輔助圖象分析評(píng)估斑點(diǎn)密度，使其標(biāo)準(zhǔn)化為細(xì)胞數(shù)，測定相對(duì)于載體處理的100任意單位對(duì)照值而言的各種試劑對(duì)前膠原-I合成的作用。
試驗(yàn)下表1說明巖芹酸/DHA與亞油酸的組合對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞中前膠原-I合成的協(xié)同作用，和涂用活性成分的量。為了使結(jié)果規(guī)格化，測定相對(duì)于載體處理的100任意單位對(duì)照值而言的供試物質(zhì)作用。使用本發(fā)明范圍以外的脂質(zhì)組合進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，即油酸與亞油酸的組合。用在試驗(yàn)中的試劑濃度對(duì)細(xì)胞生存能力沒有影響。
表1
表1結(jié)果證明，巖芹酸或DHA與脂質(zhì)PPARα激活劑的特定組合(本發(fā)明范圍內(nèi)的組合)驚人地協(xié)同促進(jìn)人皮膚成纖維細(xì)胞中前膠原-I的合成，這是已知的抗衰老的標(biāo)志。相形之下，油酸(它是結(jié)構(gòu)上與巖芹酸密切相關(guān)的脂質(zhì))與脂質(zhì)PPARα激活劑的組合(本發(fā)明范圍以外的組合)不表現(xiàn)這樣一種協(xié)同作用。
皮膚中前膠原-I水平的提高或維持與很多皮膚抗衰老效果有關(guān)，例如皺紋消除和光損傷皮膚的皮膚修復(fù)。
實(shí)施例3下列制劑描述適合于根據(jù)本發(fā)明的方法和用途的水包油型霜?jiǎng)Ｋ景俜致室越M合物的重量計(jì)。
*Brij 56是鯨蠟醇POE(10)Alfol 16RD是鯨蠟醇實(shí)施例4上述實(shí)施例3組合物中，將巖芹酸(甘油三酯)用DHA(甘油三酯)ex NU Check Prep代替。
實(shí)施例5下列制劑描述根據(jù)本發(fā)明的乳霜?jiǎng)?br> 實(shí)施例6上述實(shí)施例5組合物中，將芫荽子油用魚油ex Ross代替。
上述局部組合物提供有效的美容治療，改善長皺紋、衰老、光損傷皮膚的外觀，涂于因正常的衰老過程而已經(jīng)喪失其平滑性和堅(jiān)固性的正常皮膚，或者涂于年輕皮膚，以幫助預(yù)防或延緩這類不希望的改變。可以按常規(guī)方式加工該組合物。
權(quán)利要求
1.一種局部組合物，其包含(a)第一脂質(zhì)組分，其選自巖芹酸和/或二十二碳六烯酸和/或其衍生物；(b)第二脂質(zhì)組分，它是α亞型過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體的激活劑(PPARα激活劑)和/或其衍生物和/或其混合物；和(c)皮膚病學(xué)上可接受的賦形劑；其條件是第一與第二脂質(zhì)不是相同的脂質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的局部組合物，其中該P(yáng)PARα激活劑是C10-C18飽和脂肪酸、C10-C20單不飽和脂肪酸或C10-C22多不飽和脂肪酸、或它們的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的局部組合物，其中該第二脂質(zhì)選自亞油酸、共軛的亞油酸、亞麻酸、二十碳四烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)(若本發(fā)明組合物的第一脂質(zhì)是PA或其衍生物)、巖芹酸(若本發(fā)明組合物的第一脂質(zhì)是DHA或其衍生物)、反油酸、油酸、芥酸和十六碳二酸、和它們的混合物。
4.根據(jù)任意在先權(quán)利要求的局部組合物，其中該第二脂質(zhì)是12-羥基硬脂酸、順式十八碳四烯酸、反式-7-十八碳烯酸、順式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸、順式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸、共軛的亞油酸(c9，t11)、columbinic acid、linolenelaidicacid、反蓖麻油酸、十八碳四烯酸、2-羥基硬脂酸、α-亞麻酸、花生四烯酸、順式-11，14-二十碳二烯酸、共軛的亞油酸(t10，c12)、共軛的亞油酸(t9，t11)、共軛的亞油酸(c9，t11與t10，c12的5050混合物)、芫荽酸、反亞油酸、單巖芹酸、巖芹酸、蓖麻油酸、硬脂炔酸、側(cè)柏提取物和反式-11-十八碳烯酸。
5.根據(jù)任意在先權(quán)利要求的局部組合物，其中該第二脂質(zhì)是游離和未共軛的形式。
6.根據(jù)任意在先權(quán)利要求的局部組合物，其中該組合物是試劑盒的形式，其中包含兩種獨(dú)立的組合物，第一種包含第一脂質(zhì)組分，第二種包含第二脂質(zhì)組分。
7.提供至少一種美容皮膚護(hù)理效果的美容方法，這些效果選自治療/預(yù)防長皺紋、松垂、干燥、衰老和/或光損傷的皮膚；提高/維持皮膚中的膠原水平；提高/維持皮膚中的核心蛋白聚糖水平；增強(qiáng)組織修復(fù)；改善皮膚的肌理、平滑性和/或堅(jiān)固性；該方法包括將如任意在先權(quán)利要求所要求保護(hù)的局部組合物涂于皮膚。
8.如任意權(quán)利要求1至6所要求保護(hù)的局部組合物用于提供至少一種皮膚護(hù)理效果的用途，這些效果選自治療/預(yù)防長皺紋、松垂、干燥、衰老和/或光損傷的皮膚；提高/維持皮膚中的膠原水平；提高/維持皮膚中的核心蛋白聚糖水平；增強(qiáng)組織修復(fù)；改善皮膚的肌理、平滑性和/或堅(jiān)固性。
9.第一脂質(zhì)組分與第二脂質(zhì)組分結(jié)合在局部組合物中用于提供至少一種皮膚護(hù)理效果的用途，其中第一脂質(zhì)組分選自巖芹酸和/或二十二碳六烯酸和/或其衍生物，第二脂質(zhì)組分是過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體的激活劑和/或其混合物和/或其衍生物，這些效果選自治療/預(yù)防長皺紋、松垂、衰老和/或光損傷的皮膚；提高/保持皮膚中的膠原沉積，提高/保持皮膚中的核心蛋白聚糖產(chǎn)生，增強(qiáng)組織修復(fù)；改善皮膚的肌理以及平滑性和/或堅(jiān)固性。
全文摘要
一種局部組合物,其包含:(a)第一脂質(zhì)組分,其選自巖芹酸和/或二十二碳六烯酸和/或其衍生物;(b)第二脂質(zhì)組分,它是α亞型過氧化物酶體增殖蛋白激活性受體的激活劑和/或其衍生物和/或其混合物;和(c)皮膚病學(xué)上可接受的賦形劑;其條件是第一種與第二脂質(zhì)不是相同的脂質(zhì)。該組合物可用作美容抗衰老皮膚護(hù)理霜?jiǎng)┖拖磩?br> 文檔編號(hào)A61Q19/00GK1376048SQ00811039
公開日2002年10月23日 申請(qǐng)日期2000年7月11日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月30日
發(fā)明者S·阿拉盧夫, A·V·勞林斯 申請(qǐng)人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司