一種預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。其是通過以下方法制備的：中藥原料：包括旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子；A、藥汁煎煮：將旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子加入到水中煎煮，濾取藥汁，然后再在藥汁中加入馬來酸氯苯那敏，濃縮藥汁，得到A混合溶液；B、包被：將A混合溶液包被后得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。本發明能有效的治療預防與治療因飼料中魚粉不新鮮導致黃顙魚黑體色缺失出現的癥狀，而且對于魚粉不新鮮造成的胃和腸道損傷也有較好的修復作用。因此具有廣泛的應用前景。
【專利說明】
一種預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑
技術領域
[0001]本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
【背景技術】
[0002]黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)是一種優質名貴經濟魚類。正常情況下，黃顙魚體色呈古銅色。在人工養殖條件下，由于飼料原料質量下降，容易出現體色變化，如黑色素消失，形成黃化黃顙魚，俗稱“香蕉黃”，2013年以來連續三年，廣東香蕉黃顙魚占了個體總數的10%-15%，而個別養殖戶，體色異常率更是在30%-50%。香蕉黃相對于正常黃顙魚，抗病力差，生長慢，成活率較低，而且造成消費者心理恐慌，成魚無法售出，給養殖戶帶來經濟損失。
[0003]水產養殖飼料中，魚粉是飼料中最主要的動物蛋白源，黃顙魚飼料中，魚粉用量一般不低于25%，魚粉的新鮮度通常使用組胺、揮發性鹽基氮含量以及酸價等指標來評定，新鮮魚粉組胺、揮發性鹽基氮含量低，酸價正常。我們在前期養殖實驗中，使用高組胺含量飼料誘導體色正常的黃顙魚體色發生變異，黑色素細胞中黑色素合成減少，體色發白，說明飼料中組胺含量較高是黃顙魚體色異常的原因之一。
[0004]組胺是一種重要的化學遞質，通過激活體內組胺受體，起到相應的作用。組胺受體有4種不同亞型的(H1、H2、H3、H4) (Baumer ,2010)。這4種受體均為G蛋白耦聯受體。
[0005]黑色素合成過程中，酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)是其中的限速酶。TYR催化黑色素細胞從血液中攝取的酪氨酸，經高爾基復合體變成多巴，通過合成途徑合成黑色素(Mueller,2014)。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是提供一種預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
[0007]本發明的預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑，其是通過以下方法制備的:
[0008]中藥原料:包括旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子；
[0009]A、藥汁煎煮:將旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子加入到水中煎煮，濾取藥汁，然后再在藥汁中加入馬來酸氯苯那敏，濃縮藥汁，得到A混合溶液；
[0010]B、包被:將A混合溶液包被后得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
[0011]優選，是通過以下方法制備的:
[0012]中藥原料，按質量分數計，包括旱蓮草24%、無花果24%、丹皮24%、潼蒺藜20%和蛇床子8%;
[0013]A、藥汁煎煮:將旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子按各組份的質量分數一起加入中藥原料總質量6-8倍的水中煎煮，然后濾取藥汁，再加入中藥原料總質量33.3%的馬來酸氯苯那敏到藥汁中溶解，然后濃縮藥汁，得到A混合溶液；
[0014]B、包被:將A混合溶液包被后得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
[0015]進一步優選，所述的包被為:將微孔淀粉置于沸騰干燥裝置的流化床上沸騰，將A混合溶液從沸騰干燥裝置的上方以高壓氣霧的方式噴到淀粉載體上，待其干燥后，形成A初始體，然后將氯化鈉溶液間歇式噴到A初始體上，待其干燥后，得到B初始體，然后再將明膠溶液噴到B初始體上，干燥，取出后冷卻得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
[0016]更進一步優選，所述的步驟A和步驟B為:
[0017]A、藥汁煎煮:將旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子按各組份的質量分數一起加入中藥原料總質量6-8倍的水中，加溫至30°C浸泡30分鐘，然后加溫至100°C煮沸，保持I小時，濾取藥汁，再加入中藥原料總質量33.3 %的馬來酸氯苯那敏到藥汁中溶解，100°C濃縮藥汁至中藥原料總質量的3倍，得到A混合溶液；
[0018]B、包被:將微孔淀粉置于沸騰干燥裝置的流化床上沸騰，將A混合溶液從沸騰干燥裝置的上方以高壓氣霧的方式噴到淀粉載體上，待其干燥后，形成A初始體，然后將質量分數10%的氯化鈉溶液間歇式噴到A初始體上，氯化鈉包覆用量為淀粉質量的10%，待其干燥后，得到B初始體，然后再將質量分數10%的明膠溶液噴到B初始體上，明膠用量為淀粉質量的1.5%，80°C干燥，取出后冷卻得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
[0019]本發明通過實驗證實組胺通過結合特異性受體，降低了黑色素細胞內黑色素合成途徑，c AMP中關鍵酶酪氨酸酶(TYR)的酶活，對cAMP途徑起到干擾作用。本發明使用特異性受體拮抗劑作為治療制劑，另外，還要考慮作為飼料添加制劑，需要滿足便于加工、副作用少、殘留少、價格等因素。同時還要提高酪氨酸酶活以促進黑色素缺失的修復，本發明使用旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜、蛇床子等促進酪氨酸酶活，且副作用少的中草藥作為輔料，用于因魚粉新鮮度較差導致黃顙魚黑體色缺失癥狀的預防和治療。本發明能有效的治療預防與治療因飼料中魚粉不新鮮導致黃顙魚黑體色缺失出現的癥狀，而且對于魚粉不新鮮造成的胃和腸道損傷也有較好的修復作用。因此具有廣泛的應用前景。
【附圖說明】
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[0020]圖1是各組皮膚黑色素含量，相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P〈0.05)，以下同；
[0021 ]圖2是各組皮膚酪氨酸酶含量；
[0022]圖3是C組、Z組與H組皮膚外觀；
[0023]圖4是C組、Z組與H組皮膚色素鏡檢結果(10X );
[0024]圖5是C組、Z組與H組腸道切片結果(200 X );
[0025]圖6是C組、Z組與H組胃切片結果(200 X )；
[0026]圖7是各組皮膚黑色素含量；
[0027]圖8是各組皮膚酪氨酸酶含量。
【具體實施方式】
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[0028]以下實施例是本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。
[0029]實施例1:
[0030]丨、飼料制備:
[0031 ] 基礎飼料配方(每kg添加量):魚粉300g，豆柏325g，α-淀粉290g，豆油40g，磷酸二氫鈣20g，復合維生素5g，礦物鹽預混劑20g，將上述組份混合均勻后得到基礎飼料。
[0032]復合維生素配方(每kg添加量):維生素A2.28;維生素03 0.888;維生素1(3 2.2g；維生素E 17.6g;維生素Bi 2.69g;維生素B2 1.38g;維生素B6 1.33g;維生素B12 1.1g;煙酰胺7.78g;葉酸0.45g; D-泛酸鈣2.24g;生物素0.66g;維生素C磷化脂314.29g;肌醇22.45g;米糠622.75g，將上述組份混合均勻后得到復合維生素。
[0033]礦物鹽預混劑配方(每kg添加量):CoSO40.19g；FeS04.H2O 38.13g；ZnSO4.H2O19.07g；MnS04.H2O 7.63g；Na2SeO3 1.91g；MgS04.7H20 160.45g;Ca(103)2 4.39g；CuS04.5H20 1.338;沸石粉766.98。
[0034]C組飼料:C組飼料與上述基礎飼料基本相同，只是魚粉使用的是進口魚粉，其他與基礎飼料相同，制成飼料后，實測組胺含量為34.2mg/kg。
[0035]Z組飼料:Z組飼料與基礎飼料基本相同，只是魚粉使用的是低質魚粉，其他與基礎飼料相同，制成飼料后，實測組胺含量為1008.6mg/kg。
[0036]Z+HRa組飼料:是在Z組飼料的基礎上添加其質量1%。的特異受體拮抗劑I 一馬來酸氯苯那敏。
[0037]Z+HRb組飼料:是在Z組飼料的基礎上添加其質量2%。的特異受體拮抗劑2—馬來酸氯苯那敏。
[0038]2、實驗魚及管理:
[0039]實驗魚的馴化，用基礎飼料定時、定量投喂，待魚不怕人時，即為馴化成功。
[0040]實驗魚分缸，當魚生長至8cm左右時，進行分缸處理。分缸前進行初始體重測定，以10尾為一組，帶水測定體重，分缸盡量挑選大小相近的魚進行分缸，每缸分30尾。其余過大或者過小的魚在備用缸中飼養。
[0041 ]投喂量計算，按照魚飽食的80 %量來計算，飽食量則按照20分鐘內多次投喂，魚不再食額外的食物為基準，每兩周進行一次調整。每天投喂一次，實驗持續2個月。
[0042]將實驗魚分成4組，分別為C組、Z組、Z+HRa組和Z+HRb組，相應分別按上述投喂量投喂C組飼料、Z組飼料、Z+HRa組和Z+HRb組飼料。
[0043]3、試驗結果:
[0044]試驗結果如圖1和圖2所示，從圖1和圖2可以看出，Z組與Z+HRa組黑色素含量、酪氨酸酶活顯著低于對照組。Z+HRb組與C組差異不顯著(圖1和圖2)。
[0045]由此可以看出，組胺通過結合特異性受體，降低了黑色素細胞內黑色素合成途徑，cAMP中關鍵酶酪氨酸酶(TYR)的酶活，對cAMP途徑起到干擾作用。
[0046]實施例2:
[0047]1、本實施例的預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑的制備:
[0048]A.藥液蒸煮:按質量百分比:將中藥旱蓮草24%、無花果24%、丹皮24%、潼蒺藜20%、蛇床子8%加入多功能提取罐內，再加入這5味藥材總質量的6倍水，加溫至30°C浸泡30分鐘，然后加溫至100°C煮沸，保持I小時，期間至少每隔20分鐘攪拌一次，濾取藥汁。再加入中藥原料總質量的33.3%的馬來酸氯苯那敏溶解在藥汁中，100°C濃縮藥汁至加入的中藥原料總質量3倍重量，得到A混合溶液。
[0049]B.包被:將微孔淀粉置于沸騰干燥裝置的流化床上，沸騰0.5h，將A混合溶液從沸騰裝置的上方以高壓氣霧的方式噴到等質量的淀粉載體上，待其干燥后，得到A初始體，將質量分數10%的氯化鈉溶液間歇式噴到A初始體上，氯化鈉包覆用量為淀粉質量的10%，待其干燥后，得到B初始體，將質量分數10 %的明膠溶液噴到B初始體上，用量為淀粉質量的1.5%，80°C干燥，取出后自然冷卻，得到本實施例的預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
[0050]包埋率為82.8%，有效成分含量:81.2%
[0051]2、本預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑在飼料中的應用方法
[0052]2.1飼料制備:
[0053]基礎飼料配方(每kg添加量):魚粉300g，豆柏325g，α-淀粉290g，豆油40g，磷酸二氫鈣20g，復合維生素5g，礦物鹽預混劑20g，將上述組份混合均勻后得到基礎飼料。
[0054]復合維生素配方(每kg添加量):維生素A2.2g;維生素D3 0.88g;維生素K3 2.2g；維生素E 17.6g;維生素Bi 2.69g;維生素B2 1.38g;維生素B6 1.33g;維生素B12 1.1g;煙酰胺7.78g;葉酸0.45g; D-泛酸鈣2.24g;生物素0.66g;維生素C磷化脂314.29g;肌醇22.45g;米糠622.75g，將上述組份混合均勻后得到復合維生素。
[0055]礦物鹽預混劑配方(每kg添加量):CoSO40.19g；FeS04.H2O 38.13g；ZnSO4.H2O19.07g；MnS04.H2O 7.63g；Na2SeO3 1.91g；MgS04.7H20 160.45g;Ca(103)2 4.39g；CuS04.5H20 1.338;沸石粉766.98。
[0056]C組飼料:C組飼料與上述基礎飼料基本相同，只是魚粉使用的是進口魚粉，其他與基礎飼料相同，制成飼料后，實測組胺含量為34.2mg/kg。
[0057]Z組飼料:Z組飼料與基礎飼料基本相同，只是魚粉使用的是低質魚粉，其他與基礎飼料相同，制成飼料后，實測組胺含量為1008.6mg/kg。
[0058]H組飼料:劣質魚粉(與Z組飼料相同)300g，豆柏325g，a-淀粉289g，本實施例的預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑lg、豆油40g，磷酸二氫鈣20g，復合維生素5g，礦物鹽預混劑20g，將上述組份混合均勻后得到H組飼料。
[0059]2.2實驗魚及管理:
[0060]實驗魚的馴化，用基礎飼料定時、定量投喂，待魚不怕人時，即為馴化成功。
[0061 ] 實驗魚分缸，當魚生長至8cm左右時，進行分缸處理。分缸前進行初始體重測定，以10尾為一組，帶水測定體重，分缸盡量挑選大小相近的魚進行分缸，每缸分30尾。其余過大或者過小的魚在備用缸中飼養。
[0062]投喂量計算，按照魚飽食的80 %量來計算，飽食量則按照20分鐘內多次投喂，魚不再食額外的食物為基準，每兩周進行一次調整。每天投喂一次，養殖實驗持續2個月。
[0063]將實驗魚分成3組，分別為C組、Z組和H組，相應分別按上述投喂量投喂C組飼料、Z組飼料和H組飼料。
[0064]3本預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑的實際應用效果:
[0065]從外觀上看，相對于Z組，H組黑色素缺失癥狀不明顯，接近于C組。而鏡檢結果顯示，H組黑色素均勻分布于皮膚當中，是體色接近正常(圖3，圖4)。
[0066]從腸道結構上看，相對于Z組，H組腸道皺襞明顯在Z組破損的基礎上有所修復，無論皺襞數量、高度、緊密程度都比Z組有所改善，也接近于C組。胃結構方面，Z組出現明顯水腫，而H組水腫癥狀不明顯，接近于C組(圖5，圖6)。
[0067]Z組黑色素含量、酪氨酸酶活顯著低于C組。而H組與C組黑色素含量與皮膚酪氨酸酶活差異不顯著(圖7，圖8)。
[0068]綜上所述，本預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑能有效預防與治療因飼料中魚粉不新鮮導致黃顙魚黑體色缺失出現的癥狀，而且對于魚粉不新鮮造成的胃和腸道損傷也有較好的修復作用。
[0069]實施例3:
[0070]本實施例的預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑與實施例2的預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑的制備方法基本相同，只是在藥液煎煮步驟，其是按質量百分比:將中藥旱蓮草24%、無花果24%、丹皮24%、潼蒺藜20%、蛇床子8%加入多功能提取罐內，再加入這5味藥材總質量的7倍水，其他相同。
[0071]由此得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
[0072]實施例4:
[0073]本實施例的預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑與實施例2的預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑的制備方法基本相同，只是在藥液煎煮步驟，其是按質量百分比:將中藥旱蓮草24%、無花果24%、丹皮24%、潼蒺藜20%、蛇床子8%加入多功能提取罐內，再加入這5味藥材總質量的8倍水，其他相同。
[0074]由此得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
【主權項】
1.一種預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑，其特征在于，其是通過以下方法制備的: 中藥原料:包括旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子； A、藥汁煎煮:將旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子加入到水中煎煮，濾取藥汁，然后再在藥汁中加入馬來酸氯苯那敏，濃縮藥汁，得到A混合溶液； B、包被:將A混合溶液包被后得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。2.根據權利要求1所述的制劑，其特征在于，其是通過以下方法制備的: 中藥原料，按質量分數計，包括旱蓮草24%、無花果24%、丹皮24%、潼蒺藜20 %和蛇床子8% ； A、藥汁煎煮:將旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子按各組份的質量分數一起加入中藥原料總質量6-8倍的水中煎煮，然后濾取藥汁，再加入中藥原料總質量33.3%的馬來酸氯苯那敏到藥汁中溶解，然后濃縮藥汁，得到A混合溶液； B、包被:將A混合溶液包被后得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。3.根據權利要求1或2所述的制劑，其特征在于，所述的包被為:將微孔淀粉置于沸騰干燥裝置的流化床上沸騰，將A混合溶液從沸騰干燥裝置的上方以高壓氣霧的方式噴到淀粉載體上，待其干燥后，形成A初始體，然后將氯化鈉溶液間歇式噴到A初始體上，待其干燥后，得到B初始體，然后再將明膠溶液噴到B初始體上，干燥，取出后冷卻得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。4.根據權利要求2所述的制劑，其特征在于，所述的步驟A和步驟B為: A、藥汁煎煮:將旱蓮草、無花果、丹皮、潼蒺藜和蛇床子按各組份的質量分數一起加入中藥原料總質量6-8倍的水中，加溫至30°C浸泡30分鐘，然后加溫至100°C煮沸，保持I小時，濾取藥汁，再加入中藥原料總質量33.3 %的馬來酸氯苯那敏到藥汁中溶解，100 °(:濃縮藥汁至中藥原料總質量的3倍，得到A混合溶液； B、包被:將微孔淀粉置于沸騰干燥裝置的流化床上沸騰，將A混合溶液從沸騰干燥裝置的上方以高壓氣霧的方式噴到淀粉載體上，待其干燥后，形成A初始體，然后將質量分數10%的氯化鈉溶液間歇式噴到A初始體上，氯化鈉包覆用量為淀粉質量的10%，待其干燥后，得到B初始體，然后再將質量分數10%的明膠溶液噴到B初始體上，明膠用量為淀粉質量的1.5%，80°C干燥，取出后冷卻得到預防和治療黃顙魚因飼料新鮮度差致黑體色缺失癥狀的制劑。
【文檔編號】A23K20/174GK106074745SQ201610567150
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月15日
【發明人】許國煥, 程煒軒, 張麗, 韓木蘭, 陳金濤, 魏逸峰, 郭瑩姿, 譚文俊
【申請人】廣東省微生物研究所, 廣東碧德生物科技有限公司